CN112535681A - 一种芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂及其制法和应用 - Google Patents
一种芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂及其制法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明属于医学领域,公开了一种芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂及其制备方法和应用。所述芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂的制备方法包括如下:将过氧乙酸加入到溶剂中,得到溶液,即制备得到所述芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂。与常规的医学治疗抑制剂STX64和D‑Sacchuric acid,1,4‑lactone等抑制剂相比,本发明的优点是有效抑制浓度效果好,可根据需要进行不同程度的抑制,具有操作简单、成本低、快速等优点,在医学领域具有一定的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于医学领域,具体涉及一种芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂及其制备方法和应用。
背景技术
芳基硫酸酯酶(arylsulfatase)和葡萄糖苷醛酸酶(β-glucuronidase)广泛存在于人类和动物的各个器官,它们的重要作用是将天然激素,例如天然雌激素硫酸酯结合体或者葡萄糖苷醛酸结合体转化为对应的天然雌激素,在动物体内,芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶与人体的正常生理功能密切相关。譬如,在乳腺癌,直肠癌,以及胰腺癌等患者的尿液和血液中,含有比正常人更高活性的芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶。因此已开发了不少抑制芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸的抑制剂。目前STX64和D-Sacchuric acid,1,4-lactone是两种常用的抑制剂,分别用来抑制芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶,但抑制剂价格昂贵。
发明内容
针对以上不足之处,本发明的目的在于提供了一种芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂。
本发明的另一目的在于提供上述芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂的制备方法。
本发明的再一目的在于提供上述芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂的应用。
本发明的目的通过以下技术方案实现:
一种芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂的制备方法,包括如下步骤:
将过氧乙酸加入到溶剂中,得到溶液,即制备得到所述芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂。
优选的,所述溶液中过氧乙酸的浓度为10μmol/L~5mmol/L,更优选的为50μmol/L~1mmol/L。
优选的,所述溶剂为生理盐水和Tris-HCl缓冲液中的一种或两种。
优选的,所述Tris-HCl缓冲液的pH为5~6,更优选的为5.8。
上述一种芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂的制备方法制备得到的芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂。
上述一种芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂在制备乳腺癌药物中的应用。
与现有技术相比,本发明具有以下优点和有益效果:
与常规的抑制剂如STX64和D-Sacchuric acid,1,4-lactone几毫克就需要上千元相比,本发明的最大优点是经济。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述,但本发明的实施方式不限于此。
实施例所述芳基硫酸酯酶购买于Sigma Aldrich(型号EC 3.1.6.1,来自蜗牛提取液);所述葡萄糖苷醛酸酶购买于Sigma Aldrich(型号EC 3.2.1.31,来自蜗牛提取液);对硝基苯酚硫酸结合体(纯度>98%)购买于Sigma Aldrich公司;所述对硝基苯酚葡萄糖苷醛酸结合体(纯度>98%)购买于Sigma Aldrich公司。
实施例1
取两份3mL的Tris-HCl缓冲液(pH=5.8)于两个玻璃试管中,记作试管1和试管2。对试管1和试管2进行如下操作:
试管1:
试管1中加入0.336U的芳基硫酸酯酶,然后加入过氧乙酸溶液(溶度为2mol/L),使得Tris-HCl缓冲液中过氧乙酸的浓度为10μmol/L,再按800μmol/L的标准加入对硝基苯酚硫酸结合体,将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时,然后用加入2mL 0.5mol/L的氢氧化钠终止反应,用标准方法(参考Tabatabai and Bremner,Soil Science Society ofAmerica Journal,1970,34:225-229)测定芳基硫酸酯酶的活性。
试管2:
试管2中加入0.180U的葡萄糖苷醛酸酶,然后加入过氧乙酸溶液(溶度为2mol/L),使得Tris-HCl缓冲液中过氧乙酸的浓度为10μmol/L,再按800μmol/L的标准加入对硝基苯酚葡萄糖苷醛酸结合体,将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时,然后用2mL 0.5mol/L的氢氧化钠终止反应,用标准方法(参考Tabatabai and Bremner,Soil Science Societyof America Journal,1970,34:225-229)测定葡萄糖苷醛酸酶的活性。
实施例2
取两份3mL的Tris-HCl缓冲液(pH=5.8)于两个玻璃试管中,记作试管1和试管2。对试管1和试管2进行如下操作:
试管1:
试管1中加入0.336U的芳基硫酸酯酶,然后加入过氧乙酸溶液(溶度为2mol/L),使得Tris-HCl缓冲液中过氧乙酸的浓度为50μmol/L,再按800μmol/L的标准加入对硝基苯酚硫酸结合体,将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时,然后用加入2mL 0.5mol/L的氢氧化钠终止反应,用标准方法(参考Tabatabai and Bremner,Soil Science Society ofAmerica Journal,1970,34:225-229)测定芳基硫酸酯酶的活性。
试管2:
试管2中加入0.180U的葡萄糖苷醛酸酶,然后加入过氧乙酸溶液(溶度为2mol/L),使得Tris-HCl缓冲液中过氧乙酸的浓度为50μmol/L,再按800μmol/L的标准加入对硝基苯酚葡萄糖苷醛酸结合体,将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时,然后用2mL 0.5mol/L的氢氧化钠终止反应,用标准方法(参考Tabatabai and Bremner,Soil Science Societyof America Journal,1970,34:225-229)测定葡萄糖苷醛酸酶的活性。
实施例3
取两份3mL的Tris-HCl缓冲液(pH=5.8)于两个玻璃试管中,记作试管1和试管2。对试管1和试管2进行如下操作:
试管1:
试管1中加入0.336U的芳基硫酸酯酶,然后加入过氧乙酸溶液(溶度为2mol/L),使得Tris-HCl缓冲液中过氧乙酸的浓度为100μmol/L,再按800μmol/L的标准加入对硝基苯酚硫酸结合体,将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时,然后用加入2mL 0.5mol/L的氢氧化钠终止反应,用标准方法(参考Tabatabai and Bremner,Soil Science Society ofAmerica Journal,1970,34:225-229)测定芳基硫酸酯酶的活性。
试管2:
试管2中加入0.180U的葡萄糖苷醛酸酶,然后加入过氧乙酸溶液(溶度为2mol/L),使得Tris-HCl缓冲液中过氧乙酸的浓度为100μmol/L,再按800μmol/L的标准加入对硝基苯酚葡萄糖苷醛酸结合体,将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时,然后用2mL 0.5mol/L的氢氧化钠终止反应,用标准方法(参考Tabatabai and Bremner,Soil Science Societyof America Journal,1970,34:225-229)测定葡萄糖苷醛酸酶的活性。
实施例4
取两份3mL的Tris-HCl缓冲液(pH=5.8)于两个玻璃试管中,记作试管1和试管2。对试管1和试管2进行如下操作:
试管1:
试管1中加入0.336U的芳基硫酸酯酶,然后加入过氧乙酸溶液(溶度为2mol/L),使得Tris-HCl缓冲液中过氧乙酸的浓度为500μmol/L,再按800μmol/L的标准加入对硝基苯酚硫酸结合体,将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时,然后用加入2mL 0.5mol/L的氢氧化钠终止反应,用标准方法(参考Tabatabai and Bremner,Soil Science Society ofAmerica Journal,1970,34:225-229)测定芳基硫酸酯酶的活性。
试管2:
试管2中加入0.180U的葡萄糖苷醛酸酶,然后加入过氧乙酸溶液(溶度为2mol/L),使得Tris-HCl缓冲液中过氧乙酸的浓度为500μmol/L,再按800μmol/L的标准加入对硝基苯酚葡萄糖苷醛酸结合体,将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时,然后用2mL 0.5mol/L的氢氧化钠终止反应,用标准方法(参考Tabatabai and Bremner,Soil Science Societyof America Journal,1970,34:225-229)测定葡萄糖苷醛酸酶的活性。
实施例5
取两份3mL的Tris-HCl缓冲液(pH=5.8)于两个玻璃试管中,记作试管1和试管2。对试管1和试管2进行如下操作:
试管1:
试管1中加入0.336U的芳基硫酸酯酶,然后加入过氧乙酸溶液(溶度为2mol/L),使得Tris-HCl缓冲液中过氧乙酸的浓度为1000μmol/L,再按800μmol/L的标准加入对硝基苯酚硫酸结合体,将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时,然后用加入2mL 0.5mol/L的氢氧化钠终止反应,用标准方法(参考Tabatabai and Bremner,Soil Science Society ofAmerica Journal,1970,34:225-229)测定芳基硫酸酯酶的活性。
试管2:
试管2中加入0.180U的葡萄糖苷醛酸酶,然后加入过氧乙酸溶液(溶度为2mol/L),使得Tris-HCl缓冲液中过氧乙酸的浓度为1000μmol/L,再按800μmol/L的标准加入对硝基苯酚葡萄糖苷醛酸结合体,将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时,然后用2mL0.5mol/L的氢氧化钠终止反应,用标准方法(参考Tabatabai and Bremner,Soil ScienceSociety of America Journal,1970,34:225-229)测定葡萄糖苷醛酸酶的活性。
对比例
取两份3mL的Tris-HCl缓冲液(pH=5.8)于两个玻璃试管中,记作试管1和试管2。对试管1和试管2进行如下操作:
试管1:
试管1中加入0.336U的芳基硫酸酯酶,再按800μmol/L的标准加入对硝基苯酚硫酸结合体,将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时,然后用2mL 0.5mol/L的氢氧化钠终止反应,用标准方法(参考Tabatabai and Bremner,Soil Science Society of AmericaJournal,1970,34:225-229)测定芳基硫酸酯酶的活性。
试管2:
试管2中加入0.180U的葡萄糖苷醛酸酶,再按800μmol/L的标准加入对硝基苯酚葡萄糖苷醛酸结合体,将玻璃试管放置于37℃水浴锅中反应1小时,然后用2mL 0.5mol/L的氢氧化钠终止反应,用标准方法(参考Tabatabai and Bremner,Soil Science Society ofAmerica Journal,1970,34:225-229)测定葡萄糖苷醛酸酶的活性。
实施例1~5和对比例的测试结果如表1所示。
表1测试结果一览表
*1U定义为每小时产生1μmol的对硝基苯酚
由表1可知,当过氧乙酸浓度为0μmol/L时,即当为对比例时,其对芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶没有抑制作用。与此同时,随着过氧乙酸浓度的增加,其对芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶的抑制作用也越来越强。
将本发明实施例中的Tris-HCl缓冲液(pH=5.8)换为生理盐水(pH=5.8),其同样对芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶具有良好的抑制作用。
不受上述实施例的限制,其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化,均应为等效的置换方式,都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:将过氧乙酸加入到溶剂中,得到溶液,即制备得到所述芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂。
2.根据权利要求1所述一种芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂的制备方法,其特征在于,所述溶液中过氧乙酸的浓度为10μmol/L~5mmol/L。
3.根据权利要求2所述一种芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂的制备方法,其特征在于,所述溶液中过氧乙酸的浓度为50μmol/L~1mmol/L。
4.根据权利要求1所述一种芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂的制备方法,其特征在于,所述溶剂为生理盐水和Tris-HCl缓冲液中的一种或两种的混合。
5.根据权利要求4所述一种芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂的制备方法,其特征在于,所述Tris-HCl缓冲液的pH为5~6。
6.根据权利要求4或5所述一种芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂的制备方法,其特征在于,所述Tris-HCl缓冲液的pH为5.8。
7.权利要求1~6任一项所述一种芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂的制备方法制备得到的芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂。
8.权利要求7所述一种芳基硫酸酯酶和葡萄糖苷醛酸酶抑制剂在制备乳腺癌药物中的应用。
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