CN112516142B - 一种具有hdac抑制活性的药物组合物、制备方法及其用途 - Google Patents

一种具有hdac抑制活性的药物组合物、制备方法及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN112516142B
CN112516142B CN202011456188.2A CN202011456188A CN112516142B CN 112516142 B CN112516142 B CN 112516142B CN 202011456188 A CN202011456188 A CN 202011456188A CN 112516142 B CN112516142 B CN 112516142B
Authority
CN
China
Prior art keywords
pharmaceutical composition
reaction
inhibitory activity
hdac
compound
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202011456188.2A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112516142A (zh
Inventor
霍志强
黄巧萍
吕永磊
唐睿
柏小娟
戴信敏
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Beijing Huashi Jingheng Pharmaceutical Technology Co.,Ltd.
Original Assignee
Beijing Huashi Jingheng Pharmaceutical Technology Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Beijing Huashi Jingheng Pharmaceutical Technology Co ltd filed Critical Beijing Huashi Jingheng Pharmaceutical Technology Co ltd
Priority to CN202011456188.2A priority Critical patent/CN112516142B/zh
Publication of CN112516142A publication Critical patent/CN112516142A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112516142B publication Critical patent/CN112516142B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/4709—Non-condensed quinolines and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/498—Pyrazines or piperazines ortho- and peri-condensed with carbocyclic ring systems, e.g. quinoxaline, phenazine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明属于药物领域，尤其涉及一种具有HDAC抑制活性的药物组合物、制备方法及其用途，以所述药物组合物的总质量为100％计，所述药物组合物包括如下质量百分含量的成分：活性成分1％～10％；药学上可接受的辅料90％～99％；所述活性成分为具有式I结构的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure DDA0002829236860000011
式中，R1代表取代的苯基、不取代的苯基、取代的芳杂环基或不取代的芳杂环基；X代表CH或N。本发明提供的药物组合物是一类新型的HDAC抑制剂，特异性高，副作用低，具有良好的HDAC抑制活性，通过抑制HDAC的活性达到治疗肿瘤的目的，可应用于肿瘤药物的开发，对于肿瘤的预防和治疗具有重要意义。

Description

一种具有HDAC抑制活性的药物组合物、制备方法及其用途
技术领域
本发明属于药物领域，具体涉及一种具有HDAC抑制活性的药物组合物、制备方法及其用途。
背景技术
癌症是威胁人类健康的重大疾病之一，目前主要治疗方式有药物治疗、手术治疗和放射治疗，其中药物治疗是最常用的治疗方式之一。传统的抗肿瘤药物无法区分肿瘤细胞和正常细胞，故常导致严重的副作用，而靶向药物以肿瘤细胞做为特异性靶点，能准确的作用于肿瘤，极大的提高了治疗水平并降低了不良反应率。
组蛋白去乙酰化酶(HDAC)是重要研究的表观遗传学靶点之一，分为Zn2+依耐性和NAD+依耐性，人体内组蛋白去乙酰化酶和组蛋白乙酰基转移酶(HAT)协作以维持正常的组蛋白乙酰化水平。其中，组蛋白去乙酰化酶通过参与移除组蛋白N-乙酰化赖氨酸的乙酰基，使染色质变得紧密，抑制转录发生。在肿瘤细胞中，组蛋白去乙酰化酶过度表达，使得组蛋白过度去乙酰化，抑制细胞周期抑制因子p21的表达，降低了肿瘤抑制因子p53的稳定性，促进了血管生成的HIF-1(缺氧诱导因子)和VEGF(血管内皮生长因子)表达水平的升高。
因此，迫切需要确定一种能够抑制组蛋白去乙酰化酶(HDAC)活性的药物制剂，制备该药物制剂对研究肿瘤药物的开发具有重要的意义。
发明内容
针对现有技术中存在的上述不足，本发明的目的在于提供一种具有HDAC抑制活性的药物组合物、制备方法及其用途，该药物组合物特异性高、副作用低，通过抑制HDAC活性达到治疗肿瘤的目的，可应用于肿瘤药物的开发，对于肿瘤的预防和治疗具有重要意义。
为实现上述发明目的，本发明采用的技术方案如下：
第一方面，本发明提供一种具有HDAC抑制活性的药物组合物，以所述药物组合物的总质量为100％计，所述药物组合物包括如下质量百分含量的成分：
活性成分 1％～10％；
药学上可接受的辅料 90％～99％；
所述活性成分为具有式I结构的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0002829236850000021
式中，R1代表取代的苯基、不取代的苯基、取代的芳杂环基或不取代的芳杂环基；
X代表CH或N；
当所述R1代表取代的苯基时，取代基为-F、-Br、-Cl、-OCH3、-CONH2、-CN、-N(CH3)2、-NH2中的至少一种；
当所述R1代表取代的芳杂环基时，取代基为-F、-Br、-Cl、-OCH3、-CONH2、-CN、-N(CH3)2、-NH2中的至少一种。
需要说明的是：(1)苯基是指以苯环为官能团的基团。(2)芳基是指具有完全共轭的π电子系统的全碳单环或稠环多环(亦即，共享相邻碳原子对的环)基团。如果构成环的原子除碳原子外，还至少含有一个杂原子就是芳杂环基。(3)“药学上可接受的盐”是指那些保留母体化合物的生物有效性及特性的盐。该盐包括：酸加成盐，其是通过母体化合物的游离碱与无机酸或与有机酸的反应而获得的；所述无机酸诸如盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硝酸、磷酸、硫酸及高氯酸等；所述有机酸诸如乙酸、草酸、(D)或(L)苹果酸、马来酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、酒石酸、苯磺酸(苯磺酸盐)、苯甲酸、樟脑磺酸、柠檬酸、富马酸、葡萄糖酸、谷氨酸、羟乙磺酸、乳酸、扁桃酸、黏液酸、双羟萘酸、泛酸、琥珀酸或丙二酸等；优选为盐酸或(L)-苹果酸；或者当母体化合物中存在的酸质子被置换为金属离子或与有机碱配位时，形成盐，所述金属离子例如碱金属离子、碱土金属离子或铝离子；所述有机碱诸如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、缓血酸胺、N-甲基葡糖胺及类似物。
本发明提供的药物组合物是一类新型的HDAC抑制剂，特异性高，副作用低，具有良好的HDAC抑制活性，通过抑制HDAC的活性达到治疗肿瘤的目的，可应用于肿瘤药物的开发，对于肿瘤的预防和治疗具有重要意义。
第二方面，本发明提供了一种根据第一方面所述的具有HDAC抑制活性的药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
将活性成分和药学上可接受的辅料分别过筛备用；
按照配方量称取活性成分和药学上可接受的辅料，混合均匀，得到第一混合物；
将所述第一混合物压制成片或制粒，得到具有HDAC抑制活性的药物组合物。
第三方面，本发明提供了一种根据第一方面所述的具有HDAC抑制活性的药物组合物在制备用于预防和/或治疗肿瘤疾病药物中的用途。
具体实施方式
为了使本发明要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；以下实施例中所用的原材料、仪器和设备等，均可通过市场购买获得或者可通过现有方法获得；所述试剂用量，如无特殊说明，均为常规实验操作中试剂用量；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
第一方面，本发明实施例提供了一种具有HDAC抑制活性的药物组合物，以所述药物组合物的总质量为100％计，所述药物组合物包括如下质量百分含量的成分：
活性成分 1％～10％；
药学上可接受的辅料 90％～99％；
所述活性成分为具有式I结构的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure BDA0002829236850000031
式中，R1代表取代的苯基、不取代的苯基、取代的芳杂环基或不取代的芳杂环基；
X代表CH或N；
当所述R1代表取代的苯基时，取代基为-F、-Br、-Cl、-OCH3、-CONH2、-CN、-N(CH3)2、-NH2中的至少一种；
当所述R1代表取代的芳杂环基时，取代基为-F、-Br、-Cl、-OCH3、-CONH2、-CN、-N(CH3)2、-NH2中的至少一种。
本发明提供的药物组合物是一类新型的HDAC抑制剂，特异性高，副作用低，具有良好的HDAC抑制活性，通过抑制HDAC的活性达到治疗肿瘤的目的，可应用于肿瘤药物的开发，对于肿瘤的预防和治疗具有重要意义。
进一步地，所述活性成分为下述化合物中的至少一种：
Figure BDA0002829236850000041
Figure BDA0002829236850000051
进一步地，以所述药物组合物的总质量为100％计，所述药物组合物包括如下质量百分含量的成分：
Figure BDA0002829236850000052
进一步地，以所述药物组合物的总质量为100％计，所述药物组合物包括如下质量百分含量的成分：
Figure BDA0002829236850000053
进一步地，所述填充剂包括预胶化淀粉、微晶纤维素、淀粉、乳糖、甘露醇中的至少一种。
进一步地，所述崩解剂包括羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、低取代羟丙基纤维素中的至少一种。
进一步地，所述粘合剂包括羟丙基纤维素、羟丙甲纤维素、聚维酮、明胶中的至少一种。
进一步地，所述润滑剂包括硬脂富马酸钠、硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉中的至少一种。
进一步地，所述药物组合物为普通片剂、分散片、咀嚼片、干混悬剂、颗粒或胶囊。本发明实施例提供的药物组合物可以根据临床需要制成不同的剂型，如普通片剂、分散片、咀嚼片、干混悬剂、颗粒或胶囊等，所述式(I)表示的活性成分可以根据本发明的药物组合物的使用目的、对象以及性状等以适当的量含有，但通常含有为1mg～5000mg，优选为10mg～3000mg。
给予本发明实施例的药物组合物的典型途径包括但不限于口服、直肠、透黏膜、经肠给药，或者局部、经皮、吸入、肠胃外、舌下、阴道内、鼻内、眼内、腹膜内、肌内、皮下、静脉内给药。
本发明实施例的药物组合物在药学上的有效量以及给药方法或给药手段可以由本领域技术人员根据症状的轻重程度、治疗方案、患者的年龄、体重、性别、整体的健康状态、以及患者的(遗传性)人种的背景来进行适当选择。在一般的情况下，本发明的药物组合物的给药量(给药量指活性物质的量)为0.001～10mg/天/kg体重，优选为0.01～5mg/天/kg体重。
药物组合物的制备，可以采用本领域的常规方法。例如制备普通片时，可采取直接压片法，即将各成分混合后进行压片；可以选择将全部成分制粒后进行压片；也可以选择将其中一部分成分制粒后与剩余成分混合压片。另外，还可以采用本领域常用的方法对片剂进行包衣。
进一步地，所述活性成分的制备方法包括如下步骤：
Figure BDA0002829236850000061
(1)中间体IV的合成：
化合物II与化合物III在缩合剂作用下于碱存在的第一反应溶剂中进行反应，得到中间体IV；
(2)中间体V的合成：
中间体IV在酸作用下于第二反应溶剂中进行反应，得到中间体V；
(3)中间体VII的合成：
中间体V与化合物VI在催化剂作用和配体作用下于碱存在的第三反应溶剂中加热进行反应，得到中间体VII；
(4)化合物I的合成：
中间体VII和氢气在催化剂作用下于第四反应溶剂中进行反应，得到化合物I。
需要说明的是，合成路线中Bn代表苯甲基，Boc代表叔丁氧羰基。
本发明实施例提供的活性成分的制备方法，操作简单方便，条件温和，设备条件要求不高，极易实现，且后处理简单，收率高，适用于工业化大规模生产。
进一步地，在步骤(1)中，所述缩合剂包括N,N'-羰基二咪唑(CDI)、碳酰氯、双(三氯甲基)碳酸酯中的至少一种。
进一步地，在步骤(1)中，所述碱包括三乙胺、二异丙基乙胺、N-甲基吗啉、碳酸钠、碳酸钾、碳酸铯、氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾中的至少一种。
进一步地，在步骤(1)中，所述第一反应溶剂包括二氯甲烷、甲苯、四氢呋喃、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺中的至少一种。
进一步地，在步骤(1)中，反应温度为20℃～100℃，例如反应温度可以为20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃或100℃等。
进一步地，在步骤(2)中，所述酸包括三氟乙酸、甲酸、浓盐酸、氯化氢乙醇溶液、氯化氢乙酸乙酯溶液中的至少一种。
进一步地，在步骤(2)中，所述第二反应溶剂包括甲苯、二氯甲烷、乙腈、丙酮、四氢呋喃、乙酸乙酯中的至少一种。
进一步地，在步骤(2)中，反应温度为20℃～80℃，例如反应温度可以为20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃或80℃等。
进一步地，在步骤(3)中，所述催化剂包括双(三苯基膦)二氯化钯(II)(分子式简写为PdCl2(PPh3)2)、四(三苯基膦)钯(分子式简写为Pd(PPh3)4)、双(二亚芐基丙酮)钯(分子式简写为Pd(dba)2)、醋酸钯(分子式简写为Pd(OAc)2)、1,1'-[双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(分子式简写为Pd(dppf)2Cl2)、三(二亚苄基丙酮)二钯(分子式简写为Pd2(dba)3)中的至少一种，在上述催化剂作用下，均能快速地合成中间体VII。
进一步地，在步骤(3)中，所述配体包括三苯基膦、三丁基膦、2-双环己基膦-2',4',6'-三异丙基联苯(XPhos)、2-双环己基膦-2',6'-二甲氧基联苯(SPhos)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos)中的至少一种，在上述配体作用下，均能快速地合成中间体VII。
进一步地，在步骤(3)中，所述碱包括碳酸钾、碳酸铯、叔丁醇钠、叔丁醇钾、磷酸钾、醋酸钠中的至少一种。
进一步地，在步骤(3)中，所述第三反应溶剂包括甲苯、二甲基亚砜、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺中的至少一种。
进一步地，在步骤(3)中，反应温度为40℃～120℃，例如反应温度可以为40℃、50℃、60℃、70℃、80℃、90℃、100℃、110℃或120℃等。
进一步地，在步骤(4)中，所述催化剂为钯碳，将钯碳作为催化剂可以使得反应快速地进行，优选的，使用有效物质含量为10％，含水为50％～65％的钯碳为催化剂。
进一步地，在步骤(4)中，反应温度为20℃～80℃，例如反应温度可以为20℃、30℃、40℃、50℃、60℃、70℃或80℃等。
进一步地，在步骤(4)中，所述第四反应溶剂包括甲醇、乙醇、四氢呋喃、二氧六环中的至少一种。
第二方面，本发明实施例提供了一种根据第一方面所述的具有HDAC抑制活性的药物组合物的制备方法，包括如下步骤：
(1)将活性成分和药学上可接受的辅料分别过筛备用；
(2)按照配方量称取活性成分和药学上可接受的辅料，混合均匀，得到第一混合物；
(3)将所述第一混合物压制成片或制粒，得到具有HDAC抑制活性的药物组合物。
进一步地，在步骤(3)中，所述制粒为干法制粒或湿法制粒，所述第一混合物经制粒后，得到破碎的干颗粒，所述干颗粒经筛网整粒后获得第一颗粒。
进一步地，将所述第一颗粒与润滑剂混合得到第二颗粒，将所述第二颗粒分装或填充胶囊得到药物组合物颗粒制剂或胶囊制剂。
第三方面，本发明实施例提供了根据第一方面所述的具有HDAC抑制活性的药物组合物作为HDAC抑制剂在制备用于预防和/或治疗肿瘤疾病药物中的用途。
进一步地，所述肿瘤选自皮肤癌、膀胱癌、卵巢癌、乳腺癌、胃癌、前列腺癌、结肠癌、肺癌、骨癌、脑癌、直肠癌、食管癌、舌癌、肾癌、肾实质癌、宫颈癌、子宫体癌、子宫内膜癌、睾丸癌、泌尿癌、黑素癌、星型细胞癌、脑膜瘤、霍奇金淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、急性淋巴性白血病、慢性淋巴性白血病、急性骨髓性白血病，慢性粒细胞白血病、成人T细胞白血病淋巴瘤、肝细胞癌、支气管癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、多发性骨髓瘤、基底细胞瘤、精原细胞瘤、软骨肉瘤、肌肉瘤、纤维肉瘤。
本发明先后进行过多次试验，现举一部分试验结果作为参考对发明进行进一步详细描述，下面结合具体实施例进行详细说明。
实施例1～实施例6提供的具有HDAC抑制活性的药物组合物为片剂，所述药物组合物包括如表1所示质量的成分，实施例7～实施例12提供的具有HDAC抑制活性的药物组合物为颗粒，所述药物组合物包括如表2所示质量的成分，实施例13～实施例18提供的具有HDAC抑制活性的药物组合物为胶囊，所述药物组合物包括如表3所示质量的成分。
表1实施例1～6药物组合物成分含量
Figure BDA0002829236850000091
表2实施例7～12药物组合物成分含量
Figure BDA0002829236850000092
表3实施例13～18药物组合物成分含量
Figure BDA0002829236850000093
Figure BDA0002829236850000101
实施例1
本实施例提供的具有HDAC抑制活性的药物组合物成分含量如表1所示，所述药物组合物的活性成分为5-(6-氟喹啉-2-基)-N-(4-(羟基氨基羰基)苯基)八氢-2H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2-甲酰胺。
本实施例提供的药物组合物的制备方法为：
步骤(1)活性成分的制备：
Figure BDA0002829236850000102
中间体1c的合成：
将化合物1a(48.4g，200.0mmol)、化合物1b(45.2g，200.0mmol)、三乙胺(Et3N，30.3g，300.0mmol)、N,N'-羰基二咪唑(CDI，32.4g，200.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF，200mL)中，于25℃搅拌反应10小时，薄层色谱(Thin Layer Chromatography，简写为TLC)监测反应，反应完毕后加水(200mL)淬灭反应，用乙酸乙酯对反应完毕后的反应液萃取两次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为200mL，合并有机层，有机层干燥、浓缩、柱层析分离得到53.2g的中间体1c，收率为53.8％，中间体1c为类白色固体。
中间体1d的合成：
将上述得到的中间体1c(53.0g，107.3mmol)溶于乙酸乙酯(EtOAc，300mL)，于25℃加入浓盐酸30mL，搅拌反应3小时，TLC监测反应，反应完毕后用饱和碳酸钠溶液调pH至8-9，分层，得到有机层1和水相，水相用乙酸乙酯(300mL)提取，得到有机层2，合并有机层1和有机层2，有机层浓缩，柱层析分离得到35.4g的中间体1d，收率为82.9％，中间体1d为类白色固体。
中间体1f的合成：
将中间体1d(3.9g，10.0mmol)、化合物1e(1.8g，10.0mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3，458mg，0.5mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos，578mg，1.0mmol)、Cs2CO3(4.9g，15.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF，50mL)中，升温至100℃搅拌反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后用稀盐酸调pH至5-6，之后用乙酸乙酯对反应完毕后的反应液萃取两次，每次所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机层，有机层干燥，过滤，滤液浓缩得到淡黄色油状液体即为中间体1f，未经纯化直接用于下一步反应。
化合物1即活性成分的合成：
将上述得到的淡黄色油状液体加入到甲醇(MeOH，50mL)中，加入10％钯碳(含水为50％～65％)0.5g，氢气置换3次后，在充入氢气的情况下于25℃搅拌反应8小时，TLC监测反应，反应完毕后将反应液过滤，得到滤液，将滤液浓缩，柱层析分离得到2.4g的化合物1，收率为53.5％，ESI(+)m/z＝450.2，化合物1为类白色固体。
步骤(2)：分别将活性成分、预胶化淀粉、羧甲基淀粉钠和聚维酮K30过60目的筛网，得到符合粒径要求的活性成分、预胶化淀粉、羧甲基淀粉钠和聚维酮K30。
步骤(3)：按表1所示的配方量称取符合粒径要求的活性成分、预胶化淀粉、羧甲基淀粉钠、聚维酮K30和硬脂酸镁。
步骤(4)：将所述活性成分、预胶化淀粉、聚维酮K30和羧甲基淀粉钠于三维混合机中以10转/min进行混合，混合时间为30min，得到第一混合物。
步骤(5)：向所述第一混合物中加入所述硬脂酸镁，于三维混合机中以10转/min进行混合，混合时间为5min得到第二混合物。
步骤(6)：采用旋转压片机将所述第二混合物压制成片，控制片硬度为5-8KG，得到具有HDAC抑制活性的片剂，将压好的片剂采用高效包衣机进行包衣，包衣材料为欧巴代系列薄膜包衣粉，控制包衣层增重2％。
步骤(7)：包装，安装模具、PVC硬片以及铝箔，按照10片/板进行包装。
实施例2
本实施例提供的具有HDAC抑制活性的药物组合物成分含量如表1所示，所述药物组合物的活性成分为5-(6-溴喹啉-2-基)-N-(4-(羟基氨基羰基)苯基)八氢-2H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2-甲酰胺。
本实施例提供的药物组合物的制备方法为：
步骤(1)活性成分的制备：
Figure BDA0002829236850000121
按照实施例1所示合成方法进行中间体1c及中间体1d的合成。
中间体2b的合成：
将中间体1d(3.9g，10.0mmol)、化合物2a(2.4g，10.0mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3，458mg，0.5mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos，578mg，1.0mmol)、Cs2CO3(4.9g，15.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF，50mL)中，升温至100℃搅拌反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后用稀盐酸调pH至5-6，之后用乙酸乙酯对反应完毕后的反应液萃取两次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机层，对有机层干燥，过滤，滤液浓缩得到淡黄色油状液体即为中间体2b，未经纯化直接用于下一步反应。
化合物2即活性成分的合成：
将上述得到的淡黄色油状液体加入到甲醇(MeOH，50mL)中，加入10％钯碳(含水为50％～65％)0.5g，氢气置换3次后，在充入氢气下于25℃搅拌反应8小时，TLC监测反应，反应完毕后将反应液过滤，得到滤液，对滤液进行浓缩，柱层析分离得到2.4g的化合物2，收率为47.2％，ESI(+)m/z＝510.1，化合物2为类白色固体。
步骤(2)～步骤(7)与实施例1相同。
对实施例2得到的具有HDAC抑制活性的药物组合物制剂进行溶出度测试(测试条件同效果例2)，测得该药物组合物制剂在60min时的溶出度为97.3％。
实施例3
本实施例提供的具有HDAC抑制活性的药物组合物成分含量如表1所示，所述药物组合物的活性成分为5-(6-甲氧基喹啉-2-基)-N-(4-(羟基氨基羰基)苯基)八氢-2H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2-甲酰胺。
本实施例提供的药物组合物的制备方法为：
步骤(1)活性成分的制备：
Figure BDA0002829236850000131
按照实施例1所示合成方法进行中间体1c及中间体1d的合成。
中间体3b的合成：
将中间体1d(3.9g，10.0mmol)、化合物3a(1.9g，10.0mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3，458mg，0.5mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos，578mg，1.0mmol)、Cs2CO3(4.9g，15.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF，50mL)中，升温至100℃搅拌反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后用稀盐酸调pH至5-6，之后用乙酸乙酯对反应完毕后的反应液萃取两次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机层，有机层干燥，过滤，滤液浓缩得到淡黄色油状液体即为中间体3b，未经纯化直接用于下一步反应。
化合物3即活性成分的合成：
将上述得到的淡黄色油状液体加入到甲醇(MeOH，50mL)中，加入10％钯碳(含水为50％～65％)0.5g，氢气置换3次后，在充入氢气下于25℃搅拌反应10小时，TLC监测反应，反应完毕后将反应液过滤，得到滤液，对滤液浓缩，柱层析分离得到2.8g的化合物3，收率为60.7％，ESI(+)m/z＝462.2，化合物3为类白色固体。
步骤(2)～步骤(7)与实施例1相同。
对实施例3得到的具有HDAC抑制活性的药物组合物制剂进行溶出度测试(测试条件同效果例2)，测得该药物组合物制剂在60min时的溶出度为97.4％。
实施例4
本实施例提供的具有HDAC抑制活性的药物组合物成分含量如表1所示，所述药物组合物的活性成分为5-(6-氨基羰基喹啉-2-基)-N-(4-(羟基氨基羰基)苯基)八氢-2H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2-甲酰胺。
本实施例提供的药物组合物的制备方法为：
步骤(1)活性成分的制备：
Figure BDA0002829236850000141
按照实施例1所示合成方法进行中间体1c及中间体1d的合成。
中间体4b的合成：
将中间体1d(3.9g，10.0mmol)、化合物4a(2.1g，10.0mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3，458mg，0.5mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos，578mg，1.0mmol)、Cs2CO3(4.9g，15.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF，50mL)中，升温至100℃搅拌反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后用稀盐酸调pH至5-6，之后用乙酸乙酯对反应完毕后的反应液萃取两次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机层，对有机层干燥，过滤，滤液浓缩得到淡黄色油状液体即为中间体4b，未经纯化直接用于下一步反应。
化合物4即活性成分的合成：
将上述得到的淡黄色油状液体加入到甲醇(MeOH，50mL)中，加入10％钯碳(含水为50％～65％)0.5g，氢气置换3次后，在充入氢气下于25℃搅拌反应10小时，TLC监测反应，反应完毕后将反应液过滤，得到滤液，对滤液浓缩，柱层析分离得到2.4g的化合物4，收率为50.6％，ESI(+)m/z＝475.2，化合物4为类白色固体。
步骤(2)～步骤(7)与实施例1相同。
对实施例4得到的具有HDAC抑制活性的药物组合物制剂进行溶出度测试(测试条件同效果例2)，测得该药物组合物制剂在60min时的溶出度为96.9％。
实施例5
本实施例提供的具有HDAC抑制活性的药物组合物成分含量如表1所示，所述药物组合物的活性成分为5-(6-氰基喹啉-2-基)-N-(4-(羟基氨基羰基)苯基)八氢-2H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2-甲酰胺。
本实施例提供的药物组合物的制备方法为：
步骤(1)活性成分的制备：
Figure BDA0002829236850000151
按照实施例1所示合成方法进行中间体1c及中间体1d的合成。
中间体5b的合成：
将中间体1d(3.9g，10.0mmol)、化合物5a(1.9g，10.0mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3，458mg，0.5mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos，578mg，1.0mmol)、Cs2CO3(4.9g，15.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF，50mL)中，升温至100℃搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后用稀盐酸调pH至5-6，之后用乙酸乙酯对反应完毕后的反应液萃取两次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机层，对有机层干燥，过滤，滤液浓缩得到淡黄色油状液体即为中间体5b，未经纯化直接用于下一步反应。
化合物5即活性成分的合成：
将上述得到的淡黄色油状液体加入到甲醇(MeOH，50mL)中，加入10％钯碳(含水为50％～65％)0.5g，氢气置换3次后，在充入氢气下于25℃搅拌反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后将反应液过滤，得到滤液，对滤液浓缩，柱层析分离得到1.9g的化合物5，收率为41.7％，ESI(+)m/z＝457.2，化合物5为类白色固体。
步骤(2)～步骤(7)与实施例1相同。
对实施例5得到的具有HDAC抑制活性的药物组合物制剂进行溶出度测试(测试条件同效果例2)，测得该药物组合物制剂在60min时的溶出度为97.9％。
实施例6
本实施例提供的具有HDAC抑制活性的药物组合物成分含量如表1所示，所述药物组合物的活性成分为5-(6-二甲基氨基喹啉-2-基)-N-(4-(羟基氨基羰基)苯基)八氢-2H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2-甲酰胺。
本实施例提供的药物组合物的制备方法为：
步骤(1)活性成分的制备：
Figure BDA0002829236850000161
按照实施例1所示合成方法进行中间体1c及中间体1d的合成。
中间体6b的合成：
将中间体1d(3.9g，10.0mmol)、化合物6a(2.1g，10.0mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3，458mg，0.5mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos，578mg，1.0mmol)、Cs2CO3(4.9g，15.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF，50mL)中，升温至100℃搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后用稀盐酸调pH至5-6，之后用乙酸乙酯对反应完毕后的反应液萃取两次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机层，对有机层干燥，过滤，得到滤液，滤液浓缩得到淡黄色油状液体即为中间体6b，未经纯化直接用于下一步反应。
化合物6即活性成分的合成：
将上述得到的淡黄色油状液体加入到甲醇(MeOH，50mL)中，加入10％钯碳(含水为50％～65％)0.5g，氢气置换3次后，在充入氢气下于25℃搅拌反应8小时，TLC监测反应，反应完毕后将反应液过滤，得到滤液，对滤液浓缩，柱层析分离得到2.3g的化合物6，收率为48.5％，ESI(+)m/z＝475.2，化合物6为类白色固体。
步骤(2)～步骤(7)与实施例1相同。
对实施例6得到的具有HDAC抑制活性的药物组合物制剂进行溶出度测试(测试条件同效果例2)，测得该药物组合物制剂在60min时的溶出度为97.2％。
实施例7
本实施例提供的具有HDAC抑制活性的药物组合物成分含量如表2所示，所述药物组合物的活性成分为5-(6-氟喹喔啉-2-基)-N-(4-(羟基氨基羰基)苯基)八氢-2H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2-甲酰胺。
本实施例提供的药物组合物的制备方法为：
步骤(1)活性成分的制备：
Figure BDA0002829236850000171
按照实施例1所示合成方法进行中间体1c及中间体1d的合成。
中间体7b的合成：
将中间体1d(3.9g，10.0mmol)、化合物7a(1.8g，10.0mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3，458mg，0.5mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos，578mg，1.0mmol)、Cs2CO3(4.9g，15.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF，50mL)中，升温至100℃搅拌反应10小时，TLC监测反应，反应完毕后用稀盐酸调pH至5-6，之后用乙酸乙酯对反应完毕后的反应液萃取两次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机层，对有机层干燥，过滤，对滤液浓缩得到淡黄色油状液体即为中间体7b，未经纯化直接用于下一步反应。
化合物7即活性成分的合成：
将上述得到的淡黄色油状液体加入到甲醇(MeOH，50mL)中，加入10％钯碳(含水为50％～65％)0.5g，氢气置换3次后，在充入氢气下于25℃搅拌反应10小时，TLC监测反应，反应完毕后将反应液过滤，对滤液浓缩，柱层析分离得到2.8g的化合物7，收率为62.2％，ESI(+)m/z＝451.2，化合物7为类白色固体。
步骤(2)：分别将活性成分、预胶化淀粉、羧甲基淀粉钠和羟丙基纤维素过60目的筛网，得到符合粒径要求的活性成分、预胶化淀粉、羧甲基淀粉钠和羟丙基纤维素。
步骤(3)：按表2所示的配方量称取符合粒径要求的活性成分、预胶化淀粉、羧甲基淀粉钠和羟丙基纤维素，于三维混合机中以10转/min进行混合，混合时间为30min，得到混合物料。
步骤(4)：将步骤(3)得到的混合物料加入干法制粒机中，设定送料频率为5～10Hz，压片速度为5～10Hz，压片压力为30～50PSI，整粒频率为10～20Hz，得到破碎的干颗粒，将得到的破碎的干颗粒过20目筛整粒，得到干颗粒。
步骤(5)：按表2所示的配方量称取硬脂酸镁，然后将步骤(4)中得到的干颗粒和硬脂酸镁于三维混合机中以10转/min进行混合，混合时间为15min，制得颗粒。
步骤(6)：将步骤(5)中得到的颗粒进行分装，得到具有HDAC抑制活性的药物组合物颗粒制剂。
实施例8
本实施例提供的具有HDAC抑制活性的药物组合物成分含量如表2所示，所述药物组合物的活性成分为5-(6-氨基羰基喹喔啉-2-基)-N-(4-(羟基氨基羰基)苯基)八氢-2H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2-甲酰胺。
本实施例提供的药物组合物的制备方法为：
步骤(1)活性成分的制备：
Figure BDA0002829236850000181
按照实施例1所示合成方法进行中间体1c及中间体1d的合成。
中间体8b的合成：
将中间体1d(3.9g，10.0mmol)、化合物8a(2.1g，10.0mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3，458mg，0.5mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos，578mg，1.0mmol)、Cs2CO3(4.9g，15.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF，50mL)中，升温至100℃搅拌反应8小时，TLC监测反应，反应完毕后用稀盐酸调pH至5-6，之后用乙酸乙酯对反应完毕后的反应液萃取两次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机层，对有机层干燥，过滤，对滤液浓缩得到淡黄色油状液体即为中间体8b，未经纯化直接用于下一步反应。
化合物8即活性成分的合成：
将上述得到的淡黄色油状液体加入到甲醇(MeOH，50mL)中，加入10％钯碳(含水为50％～65％)0.5g，氢气置换3次后，在充入氢气下于25℃搅拌反应10小时，TLC监测反应，反应完毕后将反应液过滤，对滤液浓缩，柱层析分离得到2.5g的化合物8，收率为52.6％，ESI(+)m/z＝476.2，化合物8为类白色固体。
步骤(2)～步骤(6)与实施例7相同。
对实施例8得到的具有HDAC抑制活性的药物组合物制剂进行溶出度测试(测试条件同效果例2)，测得该药物组合物制剂在60min时的溶出度为98.1％。
实施例9
本实施例提供的具有HDAC抑制活性的药物组合物成分含量如表2所示，所述药物组合物的活性成分为5-(6-二甲基氨基喹喔啉-2-基)-N-(4-(羟基氨基羰基)苯基)八氢-2H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2-甲酰胺。
本实施例提供的药物组合物的制备方法为：
步骤(1)活性成分的制备：
Figure BDA0002829236850000191
按照实施例1所示合成方法进行中间体1c及中间体1d的合成。
中间体9b的合成：
将中间体1d(3.9g，10.0mmol)、化合物9a(2.1g，10.0mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3，458mg，0.5mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos，578mg，1.0mmol)、Cs2CO3(4.9g，15.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF，50mL)中，升温至100℃搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后用稀盐酸调pH至5-6，之后用乙酸乙酯对反应完毕后的反应液萃取两次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机层，有机层干燥，过滤，滤液浓缩得到淡黄色油状液体即为中间体9b，未经纯化直接用于下一步反应。
化合物9即活性成分的合成：
将上述得到的淡黄色油状液体加入到甲醇(MeOH，50mL)中，加入10％钯碳(含水为50％～65％)0.5g，氢气置换3次后，在充入氢气下于25℃搅拌反应8小时，TLC监测反应，反应完毕后将反应液过滤，对滤液浓缩，柱层析分离得到2.0g的化合物9，收率为42.1％，ESI(+)m/z＝476.2，化合物9为类白色固体。
步骤(2)～步骤(6)与实施例7相同。
对实施例9得到的具有HDAC抑制活性的药物组合物制剂进行溶出度测试(测试条件同效果例2)，测得该药物组合物制剂在60min时的溶出度为97.5％。
实施例10
本实施例提供的具有HDAC抑制活性的药物组合物成分含量如表2所示，所述药物组合物的活性成分为5-(6-溴喹喔啉-2-基)-N-(4-(羟基氨基羰基)苯基)八氢-2H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2-甲酰胺。
本实施例提供的药物组合物的制备方法为：
步骤(1)活性成分的制备：
Figure BDA0002829236850000201
按照实施例1所示合成方法进行中间体1c及中间体1d的合成。
中间体10b的合成：
将中间体1d(3.9g，10.0mmol)、化合物10a(2.4g，10.0mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3，458mg，0.5mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos，578mg，1.0mmol)、Cs2CO3(4.9g，15.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF，50mL)中，升温至100℃搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后用稀盐酸调pH至5-6，之后用乙酸乙酯对反应完毕后的反应液萃取两次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机层，有机层干燥，过滤，滤液浓缩得到淡黄色油状液体即为中间体10b，未经纯化直接用于下一步反应。
化合物10即活性成分的合成：
将上述得到的淡黄色油状液体加入到甲醇(MeOH，50mL)中，加入10％钯碳(含水为50％～65％)0.5g，氢气置换3次后，在充入氢气下于25℃搅拌反应8小时，TLC监测反应，反应完毕后将反应液过滤，得到滤液，对滤液浓缩，柱层析分离得到2.2g的化合物10，收率为43.1％，ESI(+)m/z＝511.2化合物10为类白色固体2.2g。
步骤(2)～步骤(6)与实施例7相同。
对实施例10得到的具有HDAC抑制活性的药物组合物制剂进行溶出度测试(测试条件同效果例2)，测得该药物组合物制剂在60min时的溶出度为97.2％。
实施例11
本实施例提供的具有HDAC抑制活性的药物组合物成分含量如表2所示，所述药物组合物的活性成分为5-(6-甲氧基喹喔啉-2-基)-N-(4-(羟基氨基羰基)苯基)八氢-2H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2-甲酰胺。
本实施例提供的药物组合物的制备方法为：
步骤(1)活性成分的制备：
Figure BDA0002829236850000211
按照实施例1所示合成方法进行中间体1c及中间体1d的合成。
中间体11b的合成：
将中间体1d(3.9g，10.0mmol)、化合物11a(1.9g，10.0mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3，458mg，0.5mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos，578mg，1.0mmol)、Cs2CO3(4.9g，15.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF，50mL)中，升温至100℃搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后用稀盐酸调pH至5-6，之后用乙酸乙酯对反应完毕后的反应液萃取两次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机层，有机层干燥，过滤，滤液浓缩得到淡黄色油状液体即为中间体11b，未经纯化直接用于下一步反应。
化合物11即活性成分的合成：
将上述得到的淡黄色油状液体加入到甲醇(MeOH，50mL)中，加入10％钯碳(含水为50％～65％)0.5g，氢气置换3次后，在充入氢气下于25℃搅拌反应8小时，TLC监测反应，反应完毕后将反应液过滤，得到滤液，对滤液浓缩，柱层析分离得到2.7g的化合物11，收率为58.4％，ESI(+)m/z＝463.2，化合物11为类白色固体。
步骤(2)～步骤(6)与实施例7相同。
对实施例11得到的具有HDAC抑制活性的药物组合物制剂进行溶出度测试(测试条件同效果例2)，测得该药物组合物制剂在60min时的溶出度为97.6％。
实施例12
本实施例提供的具有HDAC抑制活性的药物组合物成分含量如表2所示，所述药物组合物的活性成分为5-(6-氰基喹喔啉-2-基)-N-(4-(羟基氨基羰基)苯基)八氢-2H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2-甲酰胺。
本实施例提供的药物组合物的制备方法为：
步骤(1)活性成分的制备：
Figure BDA0002829236850000221
按照实施例1所示合成方法进行中间体1c及中间体1d的合成。
中间体12b的合成：
将中间体1d(3.9g，10.0mmol)、化合物12a(1.9g，10.0mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3，458mg，0.5mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos，578mg，1.0mmol)、Cs2CO3(4.9g，15.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF，50mL)中，升温至100℃搅拌反应12小时，TLC监测反应，反应完毕后用稀盐酸调pH至5-6，之后用乙酸乙酯对反应完毕后的反应液萃取两次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机层，有机层干燥，过滤，滤液浓缩得到淡黄色油状液体即为中间体12b，未经纯化直接用于下一步反应。
化合物12即活性成分的合成：
将上述得到的淡黄色油状液体加入到甲醇(MeOH，50mL)中，加入10％钯碳(含水为50％～65％)0.5g，氢气置换3次后，在充入氢气下于25℃搅拌反应8小时，TLC监测反应，反应完毕后将反应液过滤，得到滤液，对滤液浓缩，柱层析分离得到2.4g的化合物12，收率为52.5％，ESI(+)m/z＝458.2化合物12为类白色固体。
步骤(2)～步骤(6)与实施例7相同。
对实施例12得到的具有HDAC抑制活性的药物组合物制剂进行溶出度测试(测试条件同效果例2)，测得该药物组合物制剂在60min时的溶出度为97.1％。
实施例13
本实施例提供的具有HDAC抑制活性的药物组合物成分含量如表3所示，所述药物组合物的活性成分为5-(6-氟喹啉-2-基)-N-(5-(羟基氨基羰基)吡啶-2-基)八氢-2H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2-甲酰胺。
本实施例提供的药物组合物的制备方法为：
步骤(1)活性成分的制备：
Figure BDA0002829236850000231
中间体13b的合成：
将化合物13a(48.6g，200.0mmol)、化合物1b(45.2g，200.0mmol)、三乙胺(Et3N，30.3g，300.0mmol)、N,N'-羰基二咪唑(CDI，32.4g，200.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF，200mL)中，于25℃搅拌反应10小时，TLC监测反应，反应完毕后加水(200mL)淬灭反应，用乙酸乙酯对反应完毕后的反应液萃取两次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为200mL，合并有机层，对有机层干燥、浓缩、柱层析分离得到60.4g的中间体13b，收率为61.0％，中间体13b为类白色固体。
中间体13c的合成：
将上述得到的化合物13b(60.0g，121.2mmol)溶于乙酸乙酯(EtOAc，300mL)，于25℃加入浓盐酸30mL，搅拌反应3小时，TLC监测反应，反应完毕后用饱和碳酸钠溶液调pH至8-9，分层，得到有机层1和水相，水相用乙酸乙酯(300mL)提取，得到有机层2，合并有机层1和有机层2，有机层浓缩，柱层析分离得到36.3g的中间体13c，收率为75.8％，中间体13c为类白色固体。
中间体13d的合成：
将中间体13c(3.9g，10.0mmol)、化合物1e(1.8g，10.0mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3，458mg，0.5mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos，578mg，1.0mmol)、Cs2CO3(4.9g，15.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF，50mL)中，升温至100℃搅拌反应6小时，反应完毕后用稀盐酸调pH至5-6，之后用乙酸乙酯对反应完毕后的反应液萃取两次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机层，有机层干燥，过滤，滤液浓缩得到淡黄色油状液体即为中间体13d，未经纯化直接用于下一步反应。
化合物13即活性成分的合成：
将上述得到的淡黄色油状液体加入到甲醇(MeOH，50mL)中，加入10％钯碳(含水为50％～65％)0.5g，氢气置换3次后，在充入氢气下于25℃搅拌反应8小时，TLC监测反应，反应完毕后将反应液过滤，得到滤液，滤液浓缩，柱层析分离得到2.3g的化合物13，收率为51.1％，ESI(+)m/z＝451.2，化合物13为类白色固体。
步骤(2)：分别将活性成分、预胶化淀粉、交联羧甲基纤维素钠和聚维酮K30过60目的筛网，得到符合粒径要求的活性成分、预胶化淀粉、交联羧甲基纤维素钠和聚维酮K30。
步骤(3)：按表3所示的配方量称取符合粒径要求的活性成分、预胶化淀粉、交联羧甲基纤维素钠和聚维酮K30，于三维混合机中以10转/min进行混合，混合时间为30min，得到混合物料。
步骤(4)：与实施例7步骤(4)相同。
步骤(5)：按表3所示的配方量称取硬脂酸镁，然后将步骤(4)中得到的干颗粒和硬脂酸镁于三维混合机中以10转/min进行混合，混合时间为15min，制得颗粒。
步骤(6)：将步骤(5)中得到的颗粒投入胶囊填充机中进行填充胶囊，包装，得到具有HDAC抑制活性的药物组合物胶囊制剂。
实施例14
本实施例提供的具有HDAC抑制活性的药物组合物成分含量如表3所示，所述药物组合物的活性成分为5-(6-溴喹啉-2-基)-N-(5-(羟基氨基羰基)吡啶-2-基)八氢-2H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2-甲酰胺。
本实施例提供的药物组合物的制备方法为：
步骤(1)活性成分的制备：
Figure BDA0002829236850000241
按照实施例13所示合成方法进行中间体13b及中间体13c的合成。
中间体14a的合成：
将中间体13c(3.9g，10.0mmol)、化合物2a(2.4g，10.0mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3，458mg，0.5mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos，578mg，1.0mmol)、Cs2CO3(4.9g，15.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF，50mL)中，升温至100℃搅拌反应6小时，反应完毕后用稀盐酸调pH至5-6，之后用乙酸乙酯对反应完毕后的反应液萃取两次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机层，有机层干燥，过滤，滤液浓缩得到淡黄色油状液体即为中间体14a，未经纯化直接用于下一步反应。
化合物14即活性成分的合成：
将上述得到的淡黄色油状液体加入到甲醇(MeOH，50mL)中，加入10％钯碳(含水为50％～65％)0.5g，氢气置换3次后，在充入氢气下于25℃搅拌反应8小时，TLC监测反应，反应完毕后将反应液过滤，得到滤液，滤液浓缩，柱层析分离得到2.7g的化合物14，收率为52.9％，ESI(+)m/z＝511.1，化合物14为类白色固体。
步骤(2)～步骤(6)与实施例13相同。
对实施例14得到的具有HDAC抑制活性的药物组合物制剂进行溶出度测试(测试条件同效果例2)，测得该药物组合物制剂在60min时的溶出度为96.2％。
实施例15
本实施例提供的具有HDAC抑制活性的药物组合物成分含量如表3所示，所述药物组合物的活性成分为5-(6-甲氧基喹啉-2-基)-N-(5-(羟基氨基羰基)吡啶-2-基)八氢-2H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2-甲酰胺。
本实施例提供的药物组合物的制备方法为：
步骤(1)活性成分的制备：
Figure BDA0002829236850000251
按照实施例13所示合成方法进行中间体13b及中间体13c的合成。
中间体15a的合成：
将中间体13c(3.9g，10.0mmol)、化合物3a(1.9g，10.0mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3，458mg，0.5mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos，578mg，1.0mmol)、Cs2CO3(4.9g，15.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF，50mL)中，升温至100℃搅拌反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后用稀盐酸调pH至5-6，之后用乙酸乙酯对反应完毕后的反应液萃取两次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机层，有机层干燥，过滤，滤液浓缩得到淡黄色油状液体即为中间体15a，未经纯化直接用于下一步反应。
化合物15即活性成分的合成：
将上述得到的淡黄色油状液体加入甲醇(MeOH，50mL)中，加入10％钯碳(含水为50％～65％)0.5g，氢气置换3次后，在充入氢气下于25℃搅拌反应8小时，TLC监测反应，反应完毕后过滤，滤液浓缩，柱层析分离得到3.0g的化合物15，收率为64.8％，ESI(+)m/z＝463.2，化合物15为类白色固体。
步骤(2)～步骤(6)与实施例13相同。
对实施例15得到的具有HDAC抑制活性的药物组合物制剂进行溶出度测试(测试条件同效果例2)，测得该药物组合物制剂在60min时的溶出度为95.9％。
实施例16
本实施例提供的具有HDAC抑制活性的药物组合物成分含量如表3所示，所述药物组合物的活性成分为5-(6-氨基羰基喹啉-2-基)-N-(5-(羟基氨基羰基)吡啶-2-基)八氢-2H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2-甲酰胺。
本实施例提供的药物组合物的制备方法为：
步骤(1)活性成分的制备：
Figure BDA0002829236850000261
按照实施例13所示合成方法进行中间体13b及中间体13c的合成。
中间体16a的合成：
将中间体13c(3.9g，10.0mmol)、化合物4a(2.1g，10.0mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3，458mg，0.5mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos，578mg，1.0mmol)、Cs2CO3(4.9g，15.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF，50mL)中，升温至100℃搅拌反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后用稀盐酸调pH至5-6，之后用乙酸乙酯对反应完毕后的反应液萃取两次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机层，有机层干燥，过滤，滤液浓缩得到淡黄色油状液体即为中间体16a，未经纯化直接用于下一步反应。
化合物16即活性成分的合成：
将上述得到的淡黄色油状液体加入甲醇(MeOH，50mL)中，加入10％钯碳(含水为50％～65％)0.5g，氢气置换3次后，在充入氢气下于25℃搅拌反应8小时，TLC监测反应，反应完毕后过滤，滤液浓缩，柱层析分离得到1.9g的化合物16，收率为40.0％，ESI(+)m/z＝476.2，化合物16为类白色固体。
步骤(2)～步骤(6)与实施例13相同。
对实施例16得到的具有HDAC抑制活性的药物组合物制剂进行溶出度测试(测试条件同效果例2)，测得该药物组合物制剂在60min时的溶出度为96.3％。
实施例17
本实施例提供的具有HDAC抑制活性的药物组合物成分含量如表3所示，所述药物组合物的活性成分为5-(6-氰基喹啉-2-基)-N-(5-(羟基氨基羰基)吡啶-2-基)八氢-2H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2-甲酰胺。
本实施例提供的药物组合物的制备方法为：
步骤(1)活性成分的制备：
Figure BDA0002829236850000271
按照实施例13所示合成方法进行中间体13b及中间体13c的合成。
中间体17a的合成：
将中间体13c(3.9g，10.0mmol)、化合物5a(1.9g，10.0mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3，458mg，0.5mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos，578mg，1.0mmol)、Cs2CO3(4.9g，15.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF，50mL)中，升温至100℃搅拌反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后用稀盐酸调pH至5-6，之后用乙酸乙酯对反应完毕后的反应液萃取两次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机层，有机层干燥，过滤，滤液浓缩得到淡黄色油状液体即为中间体17a，未经纯化直接用于下一步反应。
化合物17即活性成分的合成：
将上述得到的淡黄色油状液体加入甲醇(MeOH，50mL)中，加入10％钯碳(含水为50％～65％)0.5g，氢气置换3次后，在充入氢气下于25℃搅拌反应8小时，TLC监测反应，反应完毕后过滤，滤液浓缩，柱层析分离得到2.4g的化合物17，收率为52.5％，ESI(+)m/z＝458.2，化合物17为类白色固体。
步骤(2)～步骤(6)与实施例13相同。
对实施例17得到的具有HDAC抑制活性的药物组合物制剂进行溶出度测试(测试条件同效果例2)，测得该药物组合物制剂在60min时的溶出度为95.8％。
实施例18
本实施例提供的具有HDAC抑制活性的药物组合物成分含量如表3所示，所述药物组合物的活性成分为5-(6-二甲基氨基喹啉-2-基)-N-(5-(羟基氨基羰基)吡啶-2-基)八氢-2H-吡咯并[3,4-c]吡啶-2-甲酰胺。
本实施例提供的药物组合物的制备方法为：
步骤(1)活性成分的制备：
Figure BDA0002829236850000281
按照实施例13所示合成方法进行中间体13b及中间体13c的合成。
中间体18a的合成：
将中间体13c(3.9g，10.0mmol)、化合物6a(2.1g，10.0mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd2(dba)3，458mg，0.5mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(Xantphos，578mg，1.0mmol)、Cs2CO3(4.9g，15.0mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(DMF，50mL)中，升温至100℃搅拌反应6小时，TLC监测反应，反应完毕后用稀盐酸调pH至5-6，之后用乙酸乙酯对反应完毕后的反应液萃取两次，每次萃取所用乙酸乙酯的体积为50mL，合并有机层，有机层干燥，过滤，滤液浓缩得到淡黄色油状液体即为中间体18a，未经纯化直接用于下一步反应。
化合物18即活性成分的合成：
将上述得到的淡黄色油状液体加入甲醇(MeOH，50mL)中，加入10％钯碳(含水为50％～65％)0.5g，氢气置换3次后，在充入氢气下于25℃搅拌反应8小时，TLC监测反应，反应完毕后过滤，滤液浓缩，柱层析分离得到2.8g的化合物18，收率为58.9％，ESI(+)m/z＝476.2，化合物18为类白色固体。
步骤(2)～步骤(6)与实施例13相同。
对实施例18得到的具有HDAC抑制活性的药物组合物制剂进行溶出度测试(测试条件同效果例2)，测得该药物组合物制剂在60min时的溶出度为95.4％。
效果例1实施例1～实施例18活性成分的HDAC体外活性测试
将含有乙酰化赖氨酸侧链的底物在HDAC的作用下发生去乙酰化作用，在乙酰化检测试剂诱导下，测定其在405nm的吸光度值，以空白为对照组(不加HDAC及待测活性成分)，通过测定对照组与待测活性成分组的405nm吸光度，计算得活性成分IC50，具体操作如下：
1.将Hela细胞提取物(含有HDAC1和HDAC2)与缓冲液(Buffer)按照
1:2进行稀释；
2.用Buffer将待测活性成分稀释成5X，即用Buffer将待测化合物5倍5倍的稀释；
3.用Buffer将含有乙酰化赖氨酸侧链的底物稀释成50倍；
4.用预冷的Buffer将去乙酰化检测试剂稀释20倍，然后用此溶液将TSA溶液稀释100倍备用。
于96孔板中，每孔分别加入15μL稀释后的酶和待测活性成分，37℃孵育5min后加入25μL的底物(空白孔不加酶及待测活性成分)，将96孔板置于37℃中孵育30min，然后每孔加入50μL稀释后的底物，继续孵育，30min后，用酶标仪测定其在405nm的吸光度值，通过测定空白组和待测活性成分组的405nm的吸光度值，计算得到化合物IC50，具体结果数据见下表。
A＜50nM，50nM≤B≤500nM，500nM＜C
Figure BDA0002829236850000291
Figure BDA0002829236850000301
从上表可以看出，化合物2、化合物6、化合物7、化合物8、化合物12、化合物13和化合物14对HDAC的抑制能力最强。
效果例2实施例1、实施例7和实施例13提供的药物组合物的溶出度的测定
分别取实施例1、实施例7和实施例13提供的具有HDAC抑制活性的药物组合物制剂进行溶出度测试。
测试方法：参照溶出度与释放度测定法(2015年版《中国药典》四部通则0931第二法)；
仪器：紫外分光光度计和溶出度测定仪；
溶出介质：pH6.8磷酸盐缓冲溶液；溶出介质体积：900mL；转速：50转/min；
取样时间：10min、20min、30min、45min、60min。
得到下表所述检测结果：
时间(min) 10 20 30 45 60
实施例1 累计溶出度(％) 31.2 57.6 74.1 92.1 97.6
实施例7 累计溶出度(％) 38.4 62.2 76.6 93.3 97.9
实施例13 累计溶出度(％) 22.8 47.6 65.6 91.8 95
由上表可知，根据实施例1、实施例7和实施例13分别制备出的药物组合物制剂在45min时的溶出度均大于90％，具有较好的溶出度和较快的溶出速度。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (9)

1.一种具有HDAC抑制活性的药物组合物，其特征在于，以所述药物组合物的总质量为100％计，所述药物组合物包括如下质量百分含量的成分：
活性成分 1％～10％；
药学上可接受的辅料 90％～99％；
所述活性成分为具有式I结构的化合物或其药学上可接受的盐：
Figure FDA0003197799530000011
式中，R1代表取代的苯基、不取代的苯基、取代的芳杂环基或不取代的芳杂环基；
X代表CH或N；
当所述R1代表取代的苯基时，取代基为-F、-Br、-Cl、-OCH3、-CONH2、-CN、-N(CH3)2、-NH2中的至少一种；
当所述R1代表取代的芳杂环基时，取代基为-F、-Br、-Cl、-OCH3、-CONH2、-CN、-N(CH3)2、-NH2中的至少一种；
所述活性成分为下述化合物中的至少一种：
Figure FDA0003197799530000012
Figure FDA0003197799530000021
2.根据权利要求1所述的具有HDAC抑制活性的药物组合物，其特征在于，以所述药物组合物的总质量为100％计，所述药物组合物包括如下质量百分含量的成分：
Figure FDA0003197799530000022
3.根据权利要求2所述的具有HDAC抑制活性的药物组合物，其特征在于，所述填充剂包括预胶化淀粉、微晶纤维素、淀粉、乳糖、甘露醇中的至少一种。
4.根据权利要求2所述的具有HDAC抑制活性的药物组合物，其特征在于，所述崩解剂包括羧甲基淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠、交联聚维酮、低取代羟丙基纤维素中的至少一种。
5.根据权利要求2所述的具有HDAC抑制活性的药物组合物，其特征在于，所述粘合剂包括羟丙基纤维素、羟丙甲纤维素、聚维酮、明胶中的至少一种。
6.根据权利要求2所述的具有HDAC抑制活性的药物组合物，其特征在于，所述润滑剂包括硬脂富马酸钠、硬脂酸镁、微粉硅胶、滑石粉中的至少一种。
7.根据权利要求1-2中任一项所述的具有HDAC抑制活性的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物为普通片剂、分散片、咀嚼片、干混悬剂、颗粒或胶囊。
8.一种根据权利要求1-2中任一项所述的具有HDAC抑制活性的药物组合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
将活性成分和药学上可接受的辅料分别过筛备用；
按照配方量称取活性成分和药学上可接受的辅料，混合均匀，得到第一混合物；
将所述第一混合物压制成片或制粒，得到具有HDAC抑制活性的药物组合物。
9.根据权利要求1-2中任一项所述的具有HDAC抑制活性的药物组合物作为HDAC抑制剂在制备用于预防和/或治疗肿瘤疾病药物中的用途。
CN202011456188.2A 2020-12-11 2020-12-11 一种具有hdac抑制活性的药物组合物、制备方法及其用途 Active CN112516142B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011456188.2A CN112516142B (zh) 2020-12-11 2020-12-11 一种具有hdac抑制活性的药物组合物、制备方法及其用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011456188.2A CN112516142B (zh) 2020-12-11 2020-12-11 一种具有hdac抑制活性的药物组合物、制备方法及其用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112516142A CN112516142A (zh) 2021-03-19
CN112516142B true CN112516142B (zh) 2021-10-15

Family

ID=74999003

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011456188.2A Active CN112516142B (zh) 2020-12-11 2020-12-11 一种具有hdac抑制活性的药物组合物、制备方法及其用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112516142B (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005055928A2 (en) * 2003-12-02 2005-06-23 The Ohio State University Research Foundation Zn2+ -chelating motif-tethered short -chain fatty acids as a novel class of histone deacetylase inhibitors
CN101155780A (zh) * 2005-03-15 2008-04-02 马纳里尼国际运转卢森堡股份公司 作为组蛋白去乙酰基酶抑制剂的异羟肟酸盐以及含有其的药物配方
WO2011039353A1 (en) * 2009-10-02 2011-04-07 Ikerchem, S.L. New histone deacetylase inhibitors based simultaneously on trisubstituted 1h-pyrroles and aromatic and heteroaromatic spacers
CN108602812A (zh) * 2015-12-22 2018-09-28 坎塞拉有限公司 可用作哺乳动物组蛋白去乙酰化酶活性的抑制剂的双环异羟肟酸类化合物

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005055928A2 (en) * 2003-12-02 2005-06-23 The Ohio State University Research Foundation Zn2+ -chelating motif-tethered short -chain fatty acids as a novel class of histone deacetylase inhibitors
CN101155780A (zh) * 2005-03-15 2008-04-02 马纳里尼国际运转卢森堡股份公司 作为组蛋白去乙酰基酶抑制剂的异羟肟酸盐以及含有其的药物配方
WO2011039353A1 (en) * 2009-10-02 2011-04-07 Ikerchem, S.L. New histone deacetylase inhibitors based simultaneously on trisubstituted 1h-pyrroles and aromatic and heteroaromatic spacers
CN108602812A (zh) * 2015-12-22 2018-09-28 坎塞拉有限公司 可用作哺乳动物组蛋白去乙酰化酶活性的抑制剂的双环异羟肟酸类化合物

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
HDAC多靶点抑制剂在癌症治疗中的研究进展;朱玉垚 等;《聊城大学学报(自然科学版)》;20190816;第32卷(第5期);第71-79页 *
新型吡啶苯磺酰胺联喹啉基异羟肟酸类PI3K/HDAC双靶点抑制剂的设计、合成和生物活性研究（英文）;顾依钰 等;《有机化学》;20190919;第95-153页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN112516142A (zh) 2021-03-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN109963844B (zh) 一类抑制并降解酪氨酸蛋白激酶alk的化合物
EP1764361A1 (en) Crystal of 1,2-dihydropyridine compound and method for producing same
CN112402385B (zh) 4-羟甲基-1h-吲哚类化合物药物制剂及其制备方法
RU2603138C1 (ru) Кристаллическая форма хидамида, способ ее получения и применение
AU2016288209A1 (en) Crystalline fumarate salt of (S)-(3,4-difluoro-2-(2-fluoro-4-iodophenylamino)phenyl) (3-hydroxy-3-(piperidin-2-yl) azetidin-1-yl)-methanone
AU2020202784A1 (en) Solid drug form of N-(2,6-bis(1-methylethyl)phenyl)-N'-((1-(4-(dimethylamino)phenyl)cyclopentyl) methyl)urea hydrochloride and compositions, methods and kits related thereto
CN112516142B (zh) 一种具有hdac抑制活性的药物组合物、制备方法及其用途
CN114504574B (zh) 一种2-((2-甲氧基苯基)磺酰基)异吲哚啉类化合物药物制剂及其制备方法
JP4548884B2 (ja) ４，５，６，７−テトラヒドロチエノ〔２，３−ｃ〕ピリジン誘導体
CN114306255B (zh) 一种甲基酮类衍生物药物制剂及其制备方法
CN110590778B (zh) 3，10二对甲氧基苯基6，12二氮杂四高立方烷类化合物及合成方法和药物组合物
CN106963766B (zh) 一种氮杂螺酮类药物组合物及其制备方法
CN112225737B (zh) 具有hdac抑制活性的化合物、制备方法、组合物及用途
CN114533733A (zh) 一种异喹啉-1,3-二胺类似物药物制剂及其制备方法
CN112552287B (zh) 一种吲哚类衍生物药物制剂及其制备方法
CN112641782B (zh) 一种fgfr4抑制剂的制剂组合物、制备方法及其用途
CN103864756B (zh) 丁二磺酸达比加群酯及其制备方法和用途
CN102786458B (zh) 吡咯甲酰胺衍生物、其制备方法和用途
CN112569239B (zh) 作为tlr8激动剂的药物组合物、其制备方法及其用途
CN112656796B (zh) 一种n-(5-甲基-1h-吡唑-3-基)吡啶-2-胺类药物的制剂组合物
CN114920728B (zh) 一种甲异靛衍生物及其制备方法与应用
WO2014183670A1 (zh) 苯并咪唑酰胺类化合物及其制备方法和应用
CN113980003B (zh) 一种2-((2-甲氧基苯基)磺酰基)异吲哚啉类化合物及其制备方法
CN116478141B (zh) 氘代kras抑制剂药物及用途
CN112245396B (zh) 四氢异喹啉类衍生物药物制剂及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TA01 Transfer of patent application right
TA01 Transfer of patent application right

Effective date of registration: 20210928

Address after: A27, floor 24, No. 18, chaoyangmenwai street, Chaoyang District, Beijing 100020

Applicant after: Beijing Huashi Jingheng Pharmaceutical Technology Co.,Ltd.

Address before: 101102 B, 2nd floor, building 20, No. 15, Jingsheng South Fourth Street, Jinqiao Science and technology industrial base, Zhongguancun Science and Technology Park, Tongzhou District, Beijing

Applicant before: BEIJING XINKAIYUAN PHARMACEUTICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd.