WO2014183670A1 - 苯并咪唑酰胺类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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WO2014183670A1
WO2014183670A1 PCT/CN2014/077683 CN2014077683W WO2014183670A1 WO 2014183670 A1 WO2014183670 A1 WO 2014183670A1 CN 2014077683 W CN2014077683 W CN 2014077683W WO 2014183670 A1 WO2014183670 A1 WO 2014183670A1
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acceptable salt
benzimidazole
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郎恒元
余科
赵荟
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    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings

Definitions

  • the present invention relates to the field of medical technology, and more particularly to a benzimidazole amide compound, a preparation method and use thereof.
  • the Hedgehog gene was first discovered in the fruit flies by Wieschaus and Nusslein-Vol lhard in the early 1980s.
  • the Hedgeh 0 g (Hh) signaling pathway is mainly composed of a secreted glycoprotein ligand Hedgeh 0 g, a transmembrane protein receptor Ptched (Ptch), a transmembrane protein SmootheecK Smo), a nuclear transcription factor G1 i protein, and a downstream target gene.
  • tissue Hh ligand expression is closed, and Ptch binds to Smo to inhibit Smo activity, and the pathway is in a closed state.
  • Ptch inhibits Smo inhibition
  • Smo transmits signals to the cytoplasm, activating downstream Gil transcription factors to activate the entire signaling pathway.
  • Hh signaling pathway regulates the growth and differentiation of tissue cells during embryonic phase. After the embryo matures, the pathway enters a closed state.
  • a number of studies have shown that abnormal activation of the Hh signaling pathway is closely related to a variety of tumors, such as basal cell carcinoma of the skin, medulloblastoma, lung cancer, digestive tract tumors, breast cancer, pancreatic cancer, and the like. Therefore, blocking the Hh signaling pathway in tumor cells will be a new and effective means for humans to treat tumors. As the research progresses, the role of the Hh signaling pathway in tumorigenesis and development is becoming clearer.
  • Hh signaling pathway Inhibitors of the Hh signaling pathway are mainly classified into three categories: Shh inhibitors, Smo inhibitors, and Gl i transcriptional inhibitors. Among them, Smo inhibitor Cyclopamine can inhibit the activity of Smo and prevent the activation of Hh signaling pathway, thereby exerting anti-tumor effect. In recent years, studies on Cyclopamine and its derivatives as antitumor drugs have developed rapidly abroad.
  • GDC-0449 was approved by the FDA for treatment of base cell carcinoma (BCC) in early 2012, and GDC-0449 has also entered clinical phase II/I for the treatment of various other solid tumors.
  • BCC base cell carcinoma
  • Hh signaling pathway provides a promising target for the development of anti-tumor drugs.
  • GDC-0449 the only Hh signaling pathway inhibitor currently on the market, has some problems in application. For example, no matter how much GDC-0449 is used, it is impossible to achieve higher blood in patients. The drug concentration, and for some mutations in the Smo site, GDC-0449 is less effective or even ineffective.
  • the tumors associated with the sustained activation of the Hh signaling pathway include basal cell carcinoma of the skin, brain tumors, medulloblastoma, lung cancer, digestive tract tumors, breast or pancreatic cancer, and diseases associated with the Hh signaling pathway.
  • Another object of the present invention is to provide a process for the preparation of the above compounds and pharmaceutically acceptable salts thereof.
  • a further object of the present invention is to provide the use of the above compounds for the preparation of antitumor drugs.
  • a still further object of the present invention is to provide a pharmaceutical composition comprising the above compound and a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient.
  • R 1 is H, halogen, d- 6 straight-chain, branched fluorenyl, cyclodecyl or halogen-substituted d- 6 straight or branched fluorenyl;
  • Ar is a substituted or unsubstituted aryl group, Substituents include halogen, d- 6 straight chain, branched fluorenyl, cyclodecyl, halogen substituted ( -6 straight or branched fluorenyl substituted benzene or heterocyclic ring;
  • R 2 is: hetero atom is nitrogen or oxygen The number of heteroatoms is one or two, 4-8 membered heterocyclic rings which are unsubstituted or substituted with a fluorenyl group, a hydroxy group or an amino group.
  • the R 2 is a six-membered heterocyclic ring.
  • the R 2 is
  • the compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof which is selected from the following compounds
  • the preparation method of the compound of the invention comprises the following steps: a. the nitro group of compound 1 is reduced to obtain compound 2;
  • the g step is Preparation Method I or Preparation Method II,
  • preparation method I comprises the following steps:
  • the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof for use in the preparation of an antitumor drug.
  • the tumor is a tumor associated with sustained activation of the Hh signaling pathway including cutaneous basal cell carcinoma, brain tumor, medulloblastoma, lung cancer, digestive tract tumor, breast cancer or pancreatic cancer, and a disease associated with the Hh signaling pathway.
  • the present invention provides a pharmaceutical composition
  • a pharmaceutical composition comprising the compound of the present invention or a pharmaceutically acceptable salt thereof as an active ingredient, and one or more pharmaceutically acceptable excipients.
  • the pharmaceutical composition provided by the present invention contains the above-mentioned compound or a pharmaceutically acceptable salt thereof, a pharmaceutically acceptable carrier or a combination of such a compound as an active ingredient, or a combination of an excipient or a diluent.
  • the pharmaceutically acceptable carrier in the pharmaceutical composition for treating a tumor of the present invention refers to a conventional pharmaceutical carrier in the pharmaceutical field, for example, a diluent such as water, etc.; an excipient such as starch, sucrose, etc., a binder such as a cellulose derivative, an alginate, a gelatin or the like; a wetting agent such as glycerin; a disintegrating agent such as agar, calcium carbonate, calcium hydrogencarbonate or the like; an absorbent such as a quaternary ammonium compound; a surfactant such as hexadecanol; an adsorption carrier such as Kaolin, etc.; lubricants such as talc, calcium stearate, magnesium, etc. Further, other adjuvants such as flavoring agents, sweeteners and the like may be added to the composition.
  • a diluent such as water, etc.
  • an excipient such as starch, sucrose, etc., a binder such as
  • the form of the possible composition of the compound of the present invention is administered to a patient in need of such treatment by oral, nasal inhalation, rectal or parenteral administration.
  • it can be formulated into conventional solid preparations such as tablets, powders, granules, capsules, etc., into liquid preparations such as water or oil suspensions or other liquid preparations such as syrups, elixirs, etc.; for parenteral administration
  • a drug it may be prepared as a solution for injection, an aqueous or oily suspension, or the like, and a preferred form is a tablet, a capsule, and an injection.
  • the various dosage forms of the pharmaceutical combinations of the invention can be prepared according to conventional methods of manufacture in the pharmaceutical arts. For example, the active ingredient is mixed with one or more carriers which are then brought into the preparations required.
  • the compounds of the present invention and their pharmaceutically acceptable salts inhibit the growth of cancer cells associated with the continuous activation of Hh signaling pathways with GDC-0449, which is even better than GDC-0449, thereby providing a new option for the treatment of related tumors.
  • the compound was confirmed by nuclear magnetic resonance spectroscopy and mass spectrometry.
  • the compounds of the formula (I), which are prepared in the above examples, are the compounds I-1, I-4, I-5. ;
  • GDC-0449 was purchased from Shanghai Hanxiang Spice Co., Ltd.
  • DMS0 was used as a solvent for this experiment and was purchased from Sigma, Inc., item number: D8418.
  • the human bladder cancer cell line T24 was derived from the cell bank of the Chinese Academy of Sciences.
  • Human chronic myeloid leukemia cell line K562 is derived from the cell bank of the Chinese Academy of Sciences.
  • MTS assay cell proliferation reagent powder purchased from Promega, article number: Gl l l l. PMS was purchased from sigma, article number: P9625.
  • Cell culture medium RPMI-1640 and DMEM were purchased from Gibco.
  • Fetal bovine serum was purchased from HyClone, Inc. Item No.: SV30087 02
  • Test sample (I) series of compounds and positive control GDC-0449 preparation method Weigh the appropriate amount of sample, add appropriate amount of DMS0 to make the drug storage concentration of 20 mmol / L, vortex and mix evenly. According to the solubility of the drug in DMS0 and the safe concentration of DMS0 in cell culture (DMS0 below 1%), set the following drug treatment concentration mol/L: 60, 20, 6. 67, 2. 22, 0. 74, 0 25, 0. 082, 0. 027.
  • T24 human bladder cancer cell line was cultured in DMEM complete medium (containing 10% fetal bovine serum, 100 U/ml penicillin, 100 yg / ml streptomycin).
  • Human chronic myeloid leukemia cell line K562 (suspended cells) was cultured in RPMI-1640 complete medium (containing 10% fetal bovine serum, 100 U/ml penicillin, 100 ⁇ g/ml streptomycin).
  • K562 suspension cells were directly counted, and 1 ⁇ 107 wells were added to 96-well cell culture plates, and the other treatments were identical to those of T24.
  • Human bladder cancer cell line T24 and human chronic myeloid leukemia cell line K562 were cultured for 3 days after administration. After the completion of the culture, the cell proliferation was measured by MTS method and the cell viability of the cells relative to the cell control group was calculated.
  • Relative cell viability % (absorbance of cells in the dosing group - mean absorbance of the blank control group) I (average absorbance of the cell control group - mean absorbance of the blank control group) X 100%

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Abstract

本发明公开了一种苯并咪唑酰胺类化合物或其药学上可以接受的盐及其制备方法，其用于与Hh信号通路持续激活相关的肿瘤包括皮肤基底细胞癌、脑瘤，髓母细胞瘤、肺癌、消化道肿瘤、乳腺癌或胰腺癌以及跟Hh信号通路有关的疾病。

Description

苯并咪唑酰胺类化合物及其制备方法和应用 技术领域
本发明涉及医药技术领域， 具体地说是一种苯并咪唑酰胺类化合物、制备方 法及其应用。
背景技术
Hedgehog基因是在 1980s早期由 Wieschaus和 Nusslein-Vol lhard在果蝇 中首次发现。 Hedgeh0g (Hh) 信号通路主要由分泌型糖蛋白配体 Hedgeh0g、 跨膜 蛋白受体 Ptched ( Ptch) 、 跨膜蛋白 SmoothenecK Smo) 、 核转录因子 Gl i蛋 白及下游靶基因组成。 正常体内， 组织 Hh配体表达关闭， Ptch与 Smo结合抑制 Smo的活性， 该通路处于关闭状态。 当 Hh与 Ptch结合， 解除了 Ptch对 Smo的 抑制作用， Smo将信号传导至细胞质内， 激活下游 Gl i转录因子进而活化整个信 号通路。
近年来， Hh 信号通路与肿瘤的关系日益受到人们的重视。 有文献表明， 在 正常条件下， Hedgehog (Hh) 信号通路在胚胎时期调控组织细胞的生长和分化。 胚胎发育成熟后， 该通路进入关闭状态。 另有多项研究表明， Hh 信号通路的异 常激活与多种肿瘤密切相关， 如皮肤基底细胞癌、 髓母细胞瘤、 肺癌、 消化道肿 瘤、 乳腺癌、 胰腺癌等。 因此， 阻断肿瘤细胞中的 Hh信号通路将是人类治疗肿 瘤的一个新的有效手段。 随着研究的进行， Hh 信号通路在肿瘤发生、 发展过程 中的作用也越来越清晰。 在大量的人类肿瘤细胞中， Hh 信号通路持续激活并调 控下游的基因转录，从而参与肿瘤的增殖分化、细胞凋亡、血管新生和侵袭转移。 因此针对 Hh信号通路的靶向抑制也成为抗癌治疗的热点。有文献记载 Hh信号通 路的抑制剂主要分为 3类： Shh抑制剂、 Smo抑制剂和 Gl i转录抑制剂。其中 Smo 抑制剂 Cyclopamine能抑制 Smo的活性， 阻止 Hh信号通路的激活， 从而发挥抗 肿瘤作用。 近年来， Cyclopamine及其衍生物作为抗肿瘤药物的研究在国外发展 迅速。有些已进入临床阶段，其中 GDC-0449在 2012年初已被 FDA批准上市用于 治疗基地细胞癌（BCC)， 而 GDC-0449治疗其他多种实体瘤的研究也进入临床 II / I期。 综上所述， Hh信号通路为抗肿瘤药物的研发提供了一个很有前途的靶点。
然而，目前唯一一个上市的 Hh信号通路抑制剂 GDC-0449在应用中也存在一 些问题， 比如无论 GDC-0449的用量加到多大， 在患者体内都无法达到更高的血 药浓度， 而且对于某些 Smo位点的突变， GDC-0449药效降低甚至无效。
发明内容
本发 其用于与 Hh信号通 路持续激活相关的肿瘤包括皮肤基底细胞癌、 脑瘤， 髓母细胞瘤、 肺癌、 消化道 肿瘤、 乳腺癌或胰腺癌以及跟 Hh信号通路有关的疾病。
本发明的另一目的是提供上述化合物及其药用盐的制备方法。
本发明的进一步的目的是提供上述化合物在制备抗肿瘤药物上的应用。 本发明的更进一步的目的是提供一种以上述化合物及其药用盐为有效成份 的药物组合物。
为实现上述目的， 本发明的技术方案为：
Figure imgf000003_0001
其中， R1为 H， 卤素， d—6直链、 支链垸基， 环垸基或者卤素取代的 d—6直链或 支链垸基； Ar 为取代或者未取代的芳基， 所述取代基包括卤素， d—6直链、 支 链垸基， 环垸基， 卤素取代的 ( _6 直链或支链垸基取代的苯或杂环； R2为：杂原 子为氮或氧、 杂原子数量为一个或两个、 未取代或以垸基、 羟基或氨基取代的 4-8元杂环。
所述 R2为六元杂环。 所述 R2为
Figure imgf000003_0002
所述的化合物或其药学上可接受的盐， 选自以下化合物之
Figure imgf000003_0003
Figure imgf000004_0001
本发明的化合物的制备方法， 包括下述步骤： a.化合物 1的硝基被还原得化合物 2 ;
b.化合物 2用对甲苯磺酰氯保护制得化合物 3 ;
c将化合物 3用硝硫混酸硝化得到化合物 4；
d.将化合物 4脱保护得到化合物 5 ;
e.使化合物 5与 6-氯 -3-吡啶羧酸反应制得化合物 6 ; f. 化合物 6在溶剂中加热合环得到苯并咪唑化合物 7 ; g.由苯并咪唑化合物 7制得目标化合物。
所述 g步为制备方法 I或制备方法 II，
其中， 制备方法 I包括如下步骤：
①还原苯并咪唑化合物 7得到化合物 14;
②使化合物 14酰化得到酰胺化合物 16；
③将酰胺化合物 16取代吡啶上的氯得到目标化合物。 制备方法 II包括如下步骤：
①取代苯并咪唑化合物 7中的吡啶上的氯得到化合物 17 ;
②再还原化合物 17中的硝基得到化合物 18 ;
③将化合物 18的氨基酰化得到最终目标化合物； 反应式如下：
Figure imgf000005_0001
本发明所述的化合物或其可药物接受的盐， 用于制备抗肿瘤药物。
所述肿瘤为与 Hh信号通路持续激活相关的肿瘤包括皮肤基底细胞癌、脑瘤， 髓母细胞瘤、 肺癌、 消化道肿瘤、 乳腺癌或胰腺癌以及跟 Hh信号通路有关的疾 病。
再一方面，本发明提供药物组合物，其包含本发明所述的化合物或其可药物 接受的盐作为有效成份， 以及一种或多种药学上可接受的辅料。
本发明提供的药物组合，含有上述化合物或其在制药学上许可的盐、制药学 上许可的载体或以该类化合物作为活性成分的混以要用赋形剂或稀释剂的组合。
所述的本发明的用于治疗肿瘤的药物组合中药学上可以接受的载体是指药 学领域常规的药物载体， 例如： 稀释剂如水等； 赋形剂剂如淀粉、 蔗糖等， 粘合 剂如纤维素衍生物、 藻酸盐、 明胶等； 湿润剂如甘油； 崩解剂如琼脂、 碳酸钙、 碳酸氢钙等； 吸收剂如季铵化合物； 表面活性剂如十六垸醇； 吸附载体如高岭土 等； 润滑剂如滑石粉、 硬脂酸钙、 镁等。 另外还可以在组合物中加入其它辅剂如 香味剂、 甜味剂等。
本发明化合物可能组合物的形式通过口服、鼻吸入、直肠或肠胃外给药的方 式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂如片剂、 粉剂、 粒剂、 胶囊等， 制成液体制剂如水或油悬浮剂或其他液体制剂如糖浆、 酊 剂等； 用于肠胃外给药时， 可将其制成注射用的溶液、 水或油性悬浮剂等， 优选 的形式是片剂、 胶囊和注射剂。 本发明药物组合的各种剂型可以按照药学领域的常规生产方法制备。例如使 活性成分与一种或多种载体混合， 然后将其制成所需的剂型。
本发明的化合物及其可药用盐对与 Hh信号通路持续激活相关肿瘤的癌细胞 生长的抑制作用与 GDC-0449相当甚至优于 GDC-0449, 从而为相关肿瘤的治疗提 供新的选择。
具体实施方式
下面结合具体的实施例进一步详细描述本发明。应理解，这些实施例只是为 了举例说明本发明， 而非以任何方式限制发明的范围。
在以下的实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方 法。 所用试剂未标明来源、 规格的均为市售分析纯或化学纯。
所述的化合物经核磁共振谱、 质谱确证其结构。
实施例 1
合成 N- {5-氯 -2- [6- (4-羟基哌啶基）（3-吡啶基] 苯并咪唑 _6-基} -3-氯苯酰 胺 （1-1)
Figure imgf000006_0001
1-1 实验步骤
化合物 1 (20. 0 g) 溶于 600 ml混合溶液 （ Et0H: H20=5 : l ) ， 加入氯化铵 (20 g) , 醋酸 （20 ml)， 体系加热至 60°C， 铁粉（32.4 g)分批加入。 保持 60°C反 应 1小时。 降温， 乙酸乙酯萃取， 旋干得到化合物 2 (14 g， 收率 85%)。
化合物 2 (14.0 g) 溶于吡啶 （315 ml), 分批加入对甲苯黄酰氯 (39.3g)， 升温至 75°C反应 1.5小时。 反应液旋干， 乙酸乙酯溶解， 以 0. IN HC1 水溶液洗三次， 干燥，旋干得化合物 3 (29g， 收率 65.6%)。
化合物 3 (21 g) 溶于醋酸 （170ml)， 反应加热至 70°C， 滴加混合溶液 （7 ml 硫酸 /4.9 ml 发烟硝酸）， 完毕后 70°C反应 2小时。 反应液冷却至室温， 过 滤， 滤饼水洗三次， 干燥得化合物 4 (14.6g， 收率 63%)
化合物 4 (12 g) 溶于 121 ml 硫酸 (H2S04： 0=10： 1) ，体系加热至 85°C， 反应 0.5小时。 反应液倒入冰水中， 用氨水调 PH至 9， 过滤得化合物 5 (3.0g， 收率 67%)。
化合物 5 (3.0 g)， N，N-二异丙基乙基胺（6.2 g)， 溶于四氢呋喃 （75 ml)， 反应体系降至 0°C， 滴加混合液 （3.4 g 6-氯烟酰氯 /10 ml 四氢呋喃）， 室温反 应 0.5小时。 旋干， EA溶解水洗， 干燥， 旋干得化合物 6 (3.3g， 收率 63.6%)。
化合物 6 (3.0 g) 溶于醋酸 （120ml)， 反应体系升至 100°C反应 0.5小时。 反应体系倒入冰水中， 过滤得化合物 7 (2.4g, 收率 85%)。
化合物 7 (1.2 g) ， 4-羟基哌啶 （0.79 g) ， N, N-二异丙基乙基胺 （3.0 g) 溶于 N-甲基吡咯垸酮 （50 ml )， 加入到封管中氮气保护下 130°C过夜。 将反应 液倒入冰水中， 乙酸乙酯萃取， 水洗五次， 干燥，旋干得化合物 8 (0.8 g, 收率 55%) 。
化合物 8 (0.5 g) ， 咪唑 （0.2 g) 溶于 N，N-二甲基甲酰胺 （60 ml)， 0°C 下加入叔丁基二甲基氯硅垸 (0.4 g)， 体系升至室温反应过夜。 将反应液倒入水 中， 乙酸乙酯萃取， 干燥， 旋干得化合物 9 (0.45 g，收率 69%) 。
化合物 9 (450 mg )溶于 EtOH： H20=5： 1 (96 ml)， 加入氯化铵 (450 mg)， 醋酸 （0.45 ml), 体系加热至 60°C， 铁粉分批加入 （258 mg)。 保持 60°C反应 1 小时。 降温， 乙酸乙酯萃取， 旋干得到化合物 10 (350 mg，收率 83%)。 LC/MS=458 (M+1)
化合物 10 (100 mg) ， N，N-二异丙基乙基胺 （84 mg) ， 溶于 （15 ml) 四 氢呋喃中， 反应体系降至 0°C， 滴加混合溶液 （46mg， 间氯苯甲酰氯 /5 ml ， 四 氢呋喃） ， 室温反应 2小时。 旋干， 乙酸乙酯溶解， 水洗， 旋干得化合物 11 (92 mg, 收率 71%) 。
化合物 11 (90 mg) ， 四丁基氟化铵 （197 mg) 溶于四氢呋喃 （50 ml) ， 加热至 50°C反应 3小时。 加水淬灭， 乙酸乙酯萃取， 水洗， 旋干， 制备分离得化 合物 1-1 (10 mg,收率 13· 8%)。
¾-NMR (400 MHz, CD30D) δ： 1.46-1.51 (m, 2 H) , 1.88-1.92 (m, 2 H)， 3.19-3.23 (m, 2 H) , 3.83-3.85 (m, 1 H)， 4.12-4.18 (m, 2 H) , 6.88-6.91 (d, 1 H), 7.46-7.50 (m, 1 H)， 7.56-7.61 (m， 2 H) , 7.82 (s， 1 H)， 7.87-7.89 (d， 1 H)， 7.96 (s， 1 H)， 8.06-8· 09 (m， 1 H) , 8.72-8· 73 (d， 1 H)
LC/MS= 482 (M+l) 实施例 2
合成
N-{5-氯 -2-[6-(4-甲基哌嗪基）（3-吡啶基] 苯并咪唑 _6-基}-3-氯苯酰胺 -2)
Figure imgf000008_0001
实验步骤
化合物 7 (500 mg) ， N-甲基哌嗪 （488 mg) ， N，N_二异丙基乙基胺 （1.26 g)溶于 N-甲基吡咯垸酮 （20 ml )， 加入到封管中氮气保护下 130°C反应过夜。 将反应液倒入冰水中， 乙酸乙酯萃取，水洗五次，干燥旋干得化合物 12 (450 mg， 收率 75%) 。
化合物 12 (450 mg ) 溶于 Et0H/H20=5/l (96 ml)， 加入氯化铵 （450 mg)， 体系加热至 60°C， 铁粉分批加入 （408mg)。 保持 60°C反应 1小时。 降温， 乙酸 乙酯萃取， 旋干得到化合物 13 (200 mg, 收率 48%)。
化合物 13 (100 mg) ， N，N-二异丙基乙基胺 （113 mg) ， 溶于 （15 ml) 四 氢呋喃中，反应体系降至 0°C，滴加混合溶液（61mg对氯苯甲酰氯 /5 ml四氢呋喃）， 室温反应 2小时。 旋干， 乙酸乙酯溶解， 水洗， 旋干， 然后柱色谱分离得化合物 1-2 (90 mg) 。 LCMS=48L4 (M+l)
实施例 3
合成
N- {5-氯 -2- [6- (4-甲基哌嗪基）（3-吡啶基] 苯并咪唑 -6-基}-3-三氟甲基苯 酰胺 （1-3)
Figure imgf000009_0001
实验步骤
化合物 13 (100 mg), N，N-二异丙基乙基胺 （113 mg), 溶于 （15 ml) 四氢 呋喃中， 反应体系降至 0°C， 滴加混合溶液 （72.6 mg间三氟甲基苯甲酰氯 /5 ml 四氢呋喃）， 室温反应 2小时。 旋干， 乙酸乙酯溶解， 水洗， 旋干并柱色谱分离 得化合物 1—3 (65mg)。 LCM S= 515.9 (M+l)
实施例 4
合成
N-{5-氯 -2-[6-(2，6-二甲基吗啉 -4-基）（3-吡啶基] 苯并咪唑 -6_基} -3-氯 苯酰胺 （1-4)
Figure imgf000009_0002
实验步骤
化合物 7 (1.0 g ) 溶于 Et0H/ 0=5/l (96 ml)， 加入氯化铵 （1.0 g)， 体系加热至 60°C， 铁粉 (0.9 g)分批加入。 保持 60°C反应 1小时。 降温， 旋干， 加水、 乙酸乙酯萃取， 旋干得到化合物 14 (0.5 g， 56%)。 化合物 14 (500 mg) ， N，N-二异丙基乙基胺 （696 mg) ， 溶于四氢呋喃 （90 ml) 中， 反应体系降至 0°C， 滴加混合溶液 （378 mg间氯苯甲酰氯 /10 ml四氢呋 喃） ， 室温反应 2小时。 旋干， 过柱子 （PE/EA=3:1) 得化合物 15 (200 mg, 收 率 27%) 。 LCMS=417(M+1)
化合物 15 (50 mg) ， 2， 6-二甲基吗啉 （69mg) ， N，N_二异丙基乙基胺 （93 mg)溶于 N-甲基吡咯垸酮 （1 ml )， 加入到封管中氮气保护下 130°C过夜。 将反 应液倒入冰水中， 过滤并水洗得化合物 1-4 (14 mg, 收率 24%) 。
¾— NMR (400 MHz, DMS0_d6) δ :1· 18—1.20 (d, 6 H)， 3.61—3.64 (m, 2 H)，
4.29-4.33 (d, 2 H) , 7.03-7.05 (d, 1 H)， 7.58-7.62 (m， 1 H)， 7.69-7.71 (m，
3 H)， 7.98-8.00 (d， 1 H)， 8.07 (s， 1 H)， 8.24-8.26 (d， 1 H) , 8.90 (s， 1
H)， 7.96 (s, 1 H), 10.23 (s, 1 H) , 12.88-12.96 (m, 1 H)； LC/MS= 497.3 (M+l) 实施例 5 合成
N-{5-氯 -2-[6-(3，5-二甲基哌嗪基）（3-吡啶基] 苯并咪唑 _6_基} -3-氯苯酰胺 (1-5)
Figure imgf000010_0001
实验步骤
化合物 15 (50 mg) ， 2， 6-二甲基哌嗪 （68mg) ， N，N_二异丙基乙基胺 （93 mg)溶于 N-甲基吡咯垸酮 （1 ml )， 加入到封管中氮气保护下 130°C过夜。 将反 应液倒入冰水中， 过滤，水洗得化合物 1-5 (13 mg, 收率 22%) 。
¾— NMR (400 MHz, DMS0_d6) δ： 1.04-1.05 (d, 6 H)， 2.32-2.38 (m, 2
H), 2.75 (s, 1 H)， 4.28-4.31 (d， 2 H) , 6.99-7.01 (d， 1 H), 7.57—7.99 (m, 4
H)， 7.98-7.99 (d， 1 H)， 8.07 (s， 1 Η)，8· 19-8.21 (d， 1 H) , 8.86 (s， 1 H)，
10.22 (s, 1 H), 12.89-12.92 (s, 1 H)； LC/MS= 496.3 (M+l) 试验实施例 6
本发明的具有式（I )结构的化合物及其药学上可接受的盐， 在抗肿瘤方面 有显的效用， 现通过以下药理实验说明：
MTS细胞增殖实验
1. 试验材料
1. 1 化合物及溶媒
受试样品
前述实施例所制备的式 （ I ) 系列化合物 I -1， I -4， I -5。；
阳性对照品： GDC-0449从上海翰香香料有限公司购买。
DMS0作为本实验的溶媒， 购自 Sigma公司， 货号： D8418。
1. 2 细胞株
本实验使用二种类型细胞株， 1 )人膀胱癌细胞株 T24来源于中科院细胞库。 2) 人慢性髓系白血病细胞株 K562来源于中科院细胞库。
1. 3 试剂
MTS 检测细胞增殖试剂粉末， 购自 Promega公司， 货号： Gl l l l。 PMS购自 sigma公司， 货号： P9625。 细胞培养基 RPMI-1640和 DMEM购自 Gibco公司。 胎 牛血清购自 HyClone公司， 货号： SV30087 02
2. 试验方法
2. 1 药物处理剂量及配制方法
空白溶媒组成： DMS0
受试品式 （ I ) 系列化合物及阳性对照品 GDC-0449配制方法： 称取适量样 品， 加入适量 DMS0使药物储存浓度为 20 mmol/L, 涡旋混合均匀。 根据药物在 DMS0中的溶解度及 DMS0在细胞培养中的安全浓度（DMS0在 1%以下）， 设置以下 药物处理浓度 mol/L: 60、 20、 6. 67、 2. 22、 0. 74、 0. 25、 0. 082、 0. 027 。
2. 2 细胞培养
T24人膀胱癌细胞株培养于 DMEM完全培养基 (含有 10%的胎牛血清， 100U/ ml 青霉素，100 y g/ ml 链霉素）。 人慢性髓系白血病细胞株 K562 (悬浮细胞） 培养 于 RPMI-1640完全培养基（含有 10%的胎牛血清， 100U/ ml 青霉素， 100 μ g/ ml 链 霉素）。
2. 3 MTS法检测 HB系列化合物对体外培养癌细胞生长的抑制作用 将处于对数生长期的 T24细胞， 用 0. 25%的胰蛋白酶消化， 制成细胞悬液， 5 X 107孔加入 96孔细胞培养板内 ( 150 μ !7孔）， 三复孔， 置于 37°C 5%C02孵 箱内培养， 次日贴壁后， 按照实验设计， 每孔加入 50ul系列浓度的受试化合物 或对照的培液， 并设置细胞对照组 （仅含细胞和培养基而不含药物的孔）、 空白 对照组 （仅含培养基而不含细胞的）。 K562悬浮细胞直接计数， 1X107孔加入 96 孔细胞培养板内，其他处理与 T24相同。人膀胱癌细胞 T24和人慢性髓系白血病 细胞株 K562给药后均培养 3天， 培养完成后， 采用 MTS方法检测细胞增殖情况 并计算细胞相对于细胞对照组的细胞活力。
细胞相对活力％= (加药组细胞吸光值 -空白对照组平均吸光值） I (细胞对照 组平均吸光值-空白对照组平均吸光值） X 100%
3.试验结果
HB系列化合物对体外培养癌细胞生长的抑制作用
加药 3天后， MTS法检测本发明系列化合物对 T24和 K562细胞生长的抑制 作用。结果显示其中几个化合物的抑制作用与 GDC-0449相当甚至优于 GDC-0449 IC50结果见表 1
表 1 : 本发明化合物对癌细胞生长的抑制作
IC50 (μΜ) Κ562 Τ24 4T1 MDA-MB-231 786-0 U87MG
GDC449 12.393 >60 50.247 >60 >60 >60
1-1 0.628 0.222 0.682±0.205 0.199 0.047 2.491 0.539 0.267 0.025 0.154 0.011
1-4 0.638 0.076 0.476±0.034 0.134 0.008 3.247±0.068 0.173 0.002 0.151±0.001
1-5 0.925 0.055 0.642 0.005 0.250 0.023 2.225 0.065 0.717±0.020 0.535 0.016

Claims

权 利 要 求 书
种式 （ I ) 所示的化合物或其药学上可以接受的盐，
Figure imgf000013_0001
其中， R1为 H， 卤素， d—6直链、 支链垸基， 环垸基或者卤素取代的 d—6直链或 支链垸基； Ar 为取代或者未取代的芳基， 所述取代基包括卤素， d—6直链、 支 链垸基， 环垸基， 卤素取代的 ( _6 直链或支链垸基取代的苯或杂环； R2为：杂原 子为氮或氧、 杂原子数量为一个或两个、 未取代或以垸基、 羟基或氨基取代的 4-8元杂环。
2、 权利要求 1所述的化合物或其药学上可以接受的盐， 其特征在于， 所述 R2为六元杂环。
3、 权利要求 2所述的化合物或其药学上可以接受的盐， 其特征在于， 所述
Figure imgf000013_0002
4、 权利要求 3所述的化合物或其药学上可接受的盐， 其特征在于， 选自以 下化 一：
Figure imgf000013_0003
5、 本发明的化合物的制备方法， 其特征在于包括下述步骤:
a.化合物 1的硝基被还原得化合物 2; b.化合物 2用对甲苯磺酰氯保护制得化合物 3 ;
c将化合物 3用硝硫混酸硝化得到化合物 4；
d.将化合物 4脱保护得到化合物 5 ;
e.使化合物 5与 6-氯 -3-吡啶羧酸反应制得化合物 6 ;
f. 化合物 6在溶剂中加热合环得到苯并咪唑化合物 7 ;
g.由苯并咪唑化合物 7制得目标化合物。
所述 g步为制备方法 I或制备方法 II，
其中， 制备方法 I包括如下步骤：
①还原苯并咪唑化合物 7得到化合物 14;
②使化合物 14酰化得到酰胺化合物 16；
③将酰胺化合物 16取代吡啶上的氯得到目标化合物。
制备方法 II包括如下步骤：
①取代苯并咪唑化合物 7中的吡啶上的氯得到化合物 17 ;
②再还原化合物 17中的硝基得到化合物 18 ;
③将化合物 18的氨基酰化得到最终目标化合物；
反应式如下：
Figure imgf000014_0001
6、 权利要求 1、 2、 3或 4所述的化合物或其可药物接受的盐， 其特征在于， 在制备抗肿瘤药物方面的应用。
7、 根据权利要求 7所述的化合物或其可药物接受的盐， 其特征在于， 所述 肿瘤为与 Hh信号通路持续激活相关的肿瘤包括皮肤基底细胞癌、 脑瘤， 髓母细 胞瘤、 肺癌、 消化道肿瘤、 乳腺癌或胰腺癌以及跟 Hh信号通路有关的疾病。
8、 药物组合物， 其特征在于， 其中含权利要求 1、 2、 3 或 4所述的化合物 或其可药物接受的盐作为有效成份， 以及一种或多种药学上可接受的辅料。
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