CN112516136A - 硫酸舒欣啶在制备抗心衰产品中的应用 - Google Patents

硫酸舒欣啶在制备抗心衰产品中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112516136A
CN112516136A CN201910874674.7A CN201910874674A CN112516136A CN 112516136 A CN112516136 A CN 112516136A CN 201910874674 A CN201910874674 A CN 201910874674A CN 112516136 A CN112516136 A CN 112516136A
Authority
CN
China
Prior art keywords
heart failure
heart
myocardial
sulcardine sulfate
control group
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201910874674.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112516136B (zh
Inventor
陈民利
马全鑫
白东鲁
胡有洪
张冠亚
金昌明
吕建东
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Yangzhou Zhongbao Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Yangzhou Zhongbao Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shanghai Institute of Materia Medica of CAS, Yangzhou Zhongbao Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Shanghai Institute of Materia Medica of CAS
Priority to CN201910874674.7A priority Critical patent/CN112516136B/zh
Publication of CN112516136A publication Critical patent/CN112516136A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112516136B publication Critical patent/CN112516136B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/4025—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. cromakalim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/7056—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing five-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/04—Inotropic agents, i.e. stimulants of cardiac contraction; Drugs for heart failure
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

本发明公开了硫酸舒欣啶在制备抗心衰产品中的应用，属于药物技术领域。本发明能降低左室室间隔厚度，抑制心脏负荷增大所致的心肌肥大和心室重构；通过改善心电生理，纠正ST段压低和QT间期延长，调节心律，抗心肌梗死；具有降低由心衰所引发的心脏质量增加，降低血浆中NT‑proBNP水平的作用；具有改善心室重构和心肌肥大所致的病理学变化如细胞核增大，排列紊乱，血管结构变化，外膜结缔组织增生和降低胶原沉积的药理作用，并显著降低左室重构引发心衰的死亡率。该化合物式可用已知方法合成，制备工艺成熟，能够提供可靠的化合物来源，是一种理想的抗心衰化合物，可应用于制备预防、缓解和治疗心衰的产品。

Description

硫酸舒欣啶在制备抗心衰产品中的应用
技术领域
本发明属于药物技术领域，涉及硫酸舒欣啶在制备抗心衰产品中的应用。
背景技术
心力衰竭(HF)简称为心衰，其不是单一的疾病，而是各种心脏疾病致心功能不全的临床综合征，也是大多数心血管疾病的最终归宿。HF和心律失常在临床上往往伴随出现。大多数抗心律失常药物具有抑制心脏传导、抑制心肌收缩等特性，使临床上心力衰竭合并心律失常的药物治疗比较困难[1]。因此，寻找一种对心律失常有效，且心衰患者能安全使用甚至获得收益的药物至关重要。
HF由多种因素引起的慢性心功能障碍疾病，呼吸困难、疲劳、运动耐量减退以及液体潴留是HF常见病症，高血压、冠心病、心肌病、心律失常、心包疾病等疾病是心力衰竭的常见病因，其中高血压与冠心病是目前HF的主要病因。高血压引起的充血性心衰，一般的发生发展过程为从结构性心脏病，到出现心衰症状，直至难治性终末期心衰。目前HF的治疗策略主要为β受体阻滞剂、血管紧张素2转化酶抑制剂等降压药物，而治疗心律失常的药物主要为离子通道抑制剂，目前尚未见同时对HF和心律失常均有防治作用的药物。
硫酸舒欣啶是钠、钙、钾多离子通道的抑制剂，一种具有抗心律失常活性的新结构类型药物，目前针对硫酸舒欣啶的研究主要集中在治疗心律失常方面，通过查阅，发现至今未有报道这一化合物在对心力衰竭的影响。基于硫酸舒欣啶对钙离子通道的拮抗作用，发明人认为硫酸舒欣啶还可能对HF有一定的防治作用。
发明内容
发明目的：本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供硫酸舒欣啶在制备抗心衰产品中的应用。
为了解决上述技术问题，本发明公开了硫酸舒欣啶在制备抗心衰产品中的应用。
其中，硫酸舒欣啶的化学结构如式Ⅰ所示，
Figure BDA0002203951060000021
上述硫酸舒欣啶可通过已知的方法制备所得，参考专利CN 1299813 N-取代苄基或苯基芳香磺酰胺化合物及其用途。
以硫酸舒欣啶为基本母核与糖类物质以及具有糖类结构的结合产生的苷类化合物在抗心衰产品中的应用。
其中，所述的心衰为心肌病变或心脏负荷过重引起的充血性心衰，其病变特征为心肌肥大和左室重构。
其中，所述的抗心衰为有效预防、缓解、治疗心力衰竭。
本发明利用增大左心室压力后负荷使心肌出现代偿性增厚和纤维化，进而导致心力衰竭的原理，采用主动脉弓缩窄术致大鼠左心室压力过负荷建立的充血性心力衰竭动物模型，证实了硫酸舒欣啶对HF的防治作用，并发现硫酸舒欣啶对早期心力衰竭大鼠模型的心肌胶原沉积和心室重构方面具有一定的改善作用。
其中，硫酸舒欣啶能降低左室室间隔厚度和左室后壁厚度，抑制心脏负荷增大所致的心肌肥大和心室重构；通过改善心电生理，纠正ST段压低和QT间期延长，调节心律，抗心肌梗死；具有降低由心脏负荷增大引起的心脏质量增加，降低血浆中NT-proBNP 水平的作用；具有改善心肌肥大和心室重构的病理学变化如细胞核增大，排列紊乱，血管的基本结构丧失，外膜结缔组织增生和降低胶原沉积的药理作用，并显著降低死亡率。因此，可应用于制备预防、缓解和治疗心衰的产品。
其中，所述的产品为药品、食品和保健品中的任意一种。
其中，所述的心衰为心肌病变或心脏负荷过重引起的充血性心衰。
一种抗心衰的药物组合物，其含有有效量的硫酸舒欣啶或其药学上可接受的盐、水合物以及药学上可接受的载体、辅剂或它们的组合物。
其中，所述的药物组合物为硫酸舒欣啶或其药学上可接受的盐、水合物与其他物质以任何比例合用制成的药物组合物。
其中，所述药物组合物的剂型为散剂、颗粒剂、片剂和胶囊剂中的任意一种。
其中，所述散剂的制备方法为将药物组合物中众成分粉碎，过筛，混合，分剂量，包装，即得。
其中，所述颗粒剂的制备方法为将药物组合物中众成分粉碎、过筛，配料，制粒，干燥，整粒，分剂量，内包装，即得，公知的可向其中添加药物辅料。
其中，所述的片剂的制备方法为将药物组合物中众成分粉碎，过筛，配料，制粒，干燥，整粒，总混，压片，包衣，分装，即得，公知的可向其中添加药物辅料。
其中，所述的胶囊剂的制备方法为将药物组合物中众成分称量，粉碎，过筛，制粒，干燥，整粒，总混，充填，分装，即得，公知的可向其中添加药物辅料。
有益效果：与现有技术相比，本发明的优势如下：
(1)本发明研究的硫酸舒欣啶能够通过已知的方法合成，制备工艺成熟，能够提供可靠的化合物来源，具有物质来源可靠性、生产成本低、作用机制新颖、市场前景良好等优势。
(2)本发明具有降低左室室间隔厚度，抑制高血压所致的心肌肥大和心室重构；通过改善心电生理，纠正ST段压低和QT间期延长，调节心律，抗心肌梗死；具有降低由心衰所引发的心脏质量增加，降低血浆中NT-proBNP水平的作用；具有改善心衰所致的病理学变化如细胞核增大，排列紊乱，血管的基本结构丧失，外膜结缔组织增生和降低胶原沉积的药理作用，并显著降低心衰死亡率的作用。可应用于制备预防、缓解和治疗心衰的产品。
附图说明
图1为对心衰模型大鼠左室室间隔厚度(IVS)的影响，图中注释为与假手术组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05,**P<0.01。
图2为给药2周后对心衰模型大鼠左室后壁厚度(LVPW)的影响，图中注释为与假手术组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05,**P<0.01。
图3为给药2周后对心衰模型大鼠心电图的影响，图中注释为与假手术组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05,**P<0.01。
图4为给药2周后对心衰模型大鼠心脏系数的影响，图中注释为与假手术组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05,**P<0.01。
图5为给药2周后对心衰模型大鼠血浆NT-proBNP含量的影响，图中注释为与假手术组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05,**P<0.01。
图6-1为假手术组的心肌组织HE染色结果，10×HE染色。
图6-2为假手术组的心肌组织HE染色结果，200×HE染色。
图6-3为模型对照组的心肌组织HE染色结果，10×HE染色。
图6-4为模型对照组的心肌组织HE染色结果，200×HE染色。
图6-5为低剂量组的心肌组织HE染色结果，10×HE染色。
图6-6为低剂量组的心肌组织HE染色结果，200×HE染色。
图6-7为中剂量组的心肌组织HE染色结果，10×HE染色。
图6-8为中剂量组的心肌组织HE染色结果，200×HE染色。
图6-9为高剂量组的心肌组织HE染色结果，10×HE染色。
图6-10为高剂量组的心肌组织HE染色结果，200×HE染色。
图6-11为阳性对照组的心肌组织HE染色结果，10×HE染色。
图6-12为阳性对照组的心肌组织HE染色结果，200×HE染色。
图7为对心衰模型大鼠心肌纤维化评分的影响。
图8-1为假手术组的心肌组织Masson染色，10×Masson染色。
图8-2为假手术组的心肌组织Masson染色，100×Masson染色。
图8-3为模型对照组的心肌组织Masson染色，10×Masson染色。
图8-4为模型对照组的心肌组织Masson染色，100×Masson染色。
图8-5为低剂量组的心肌组织Masson染色，10×Masson染色。
图8-6为低剂量组的心肌组织Masson染色，100×Masson染色。
图8-7为中剂量组的心肌组织Masson染色，10×Masson染色。
图8-8为中剂量组的心肌组织Masson染色，100×Masson染色。
图8-9为高剂量组的心肌组织Masson染色，10×Masson染色。
图8-10为高剂量组的心肌组织Masson染色，100×Masson染色。
图8-11为阳性对照组的心肌组织Masson染色，10×Masson染色。
图8-12为阳性对照组的心肌组织Masson染色，100×Masson染色。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1：硫酸舒欣啶对大鼠早期心力衰竭模型的影响
1、试验目的
本实施例采用主动脉弓狭窄术(TAC)建立大鼠早期心力衰竭(HF)模型，每日一次给予低(50mg/kg)、中(150mg/kg)、高(200mg/kg)剂量硫酸舒欣啶，连续给药2 周，进行超声心动图检测和心电图分析，测定血浆NT-proBNP含量，进行心脏组织病理学检查，观察心肌组织中胶原纤维的沉积情况，并以卡托普利片作为阳性对照，观察硫酸舒欣啶对大鼠心力衰竭模型心脏功能的影响，为硫酸舒欣啶的临床应用提供参考。
2、受试药物
2.1试验药物
硫酸舒欣啶(SUL)，性状：白色粉末，批号：D17120401；提供单位：扬州中宝药业股份有限公司，贮存方式：室温避光。
2.2阳性对照
卡托普利片(Captopril)，性状：白色片剂，批号：T16L068；购自杭州民生药业有限公司，规格：25mg×100片，贮存方式：室温避光。
2.3阴性对照
蒸馏水
3、试验动物
SPF级SD大鼠92只，性别：雄性，体重170-200g。来源：上海斯莱克实验动物有限公司，生产许可证号码：SCXK(沪)2017-0005动物质量合格证号为：2015000549137。
4、试验条件
大鼠饲养室：SPF屏障环境，温度：20～22℃，湿度：50～70％，光照：150～200Lx，12小时明暗交替(早6:00-晚18:00)；噪音：<50dB；设有环境自动控制系统。浙江中医药大学动物实验研究中心屏障环境设施使用许可证【SYXK(浙)2013-0184】。
饮水：自来水过滤灭菌，置于高压灭菌的饮水瓶中，自由饮用。
饲料：全价营养鼠颗粒饲料，Co60辐照灭菌。
饲养方式：自由饮食，饲养于IVC中，给予充足的水和饲料，大鼠每笼饲养3-4只。
整个试验期间，大鼠的实验饲养和实验操作均按照实验动物使用3R原则给予人道的关怀。
5、试剂与仪器
5.1主要试剂
N端前脑钠素(NT-proBNP)ELISA试剂盒，批号07/2018，购自南京建成生物技术公司。
5.2主要仪器
SQP电子天平，赛多利斯科学仪器(北京)有限公司；7020全自动生化仪，日立公司；Varioskan Flash多功能酶标仪，Thermo公司；小动物麻醉呼吸机，summit公司； vevo1100小动物超声影像系统，Fujifilm公司；EMKA无创生理信号遥测系统，EMKA 公司；AP280-2包埋机，MICROM公司半自动切片机，Leica公司；数字切片扫描系统， NanoZoomer数字切片扫描仪；滨松光子公司。
6、分组与给药
6.1组别与剂量
Figure BDA0002203951060000061
6.2剂量设置依据
根据前期研究者提供硫酸舒欣啶在大鼠心律失常模型上的有效剂量为100mg/kg、150mg/kg、200mg/kg(经口灌胃)。
6.3给药途径
经口灌胃，10mL/kg，与临床给药途径基本一致。
7、试验方法
7.1造模与筛选
取雄性SD大鼠92只，适应性饲养1周后，其中86只行主动脉弓狭窄手术：使用异氟烷将大鼠诱导麻醉后，剃掉胸部被毛，并固定于45°斜式固定台，进行气管插管，然后将动物固定于保温台，外接小动物麻醉呼吸机辅助呼吸，呼吸比2∶1，潮气量 30mL/kg，呼吸频率60～65次/min。碘伏消毒胸部术区，剪断大鼠左侧第二根肋骨逐层开胸，并用撑开器撑开切口，充分暴露胸腺，依次分离胸腺、主动脉弓，用3-0号缝线包绕过主动脉弓后壁，从头臂干和左颈总动脉之间探出。将外径为0.9mm的自制“L”型针平行置于主动脉弓上方，结扎后将“L”型针缓慢取出，逐层关闭胸腔，消毒切口。手术结束将动物放入保温箱保暖护理待其苏醒；另6只大鼠行假手术，其它步骤相同但不缩窄主动脉弓，作为假手术组。术后3d肌肉注射100000U青霉素，3d后常规饲养至 4周。
术后4周取存活动物进行心动超声检查，记录心室壁厚度，并取血检测血清 NT-proBNP水平。并依据心超检查结果和血清NT-proBNP检测结果，筛选指标相对接近的40只心衰大鼠模型用于给药试验。
7.2分组和给药
将40只经筛选的TAC术后心衰大鼠模型，按超声系统测算的左心室质量(LV Mass)为主要指标，按照体重将模型大鼠分为5组，即模型对照组，低、中、高剂量组和阳性对照组，每组8只。另行假手术的6只大鼠为假手术组，各组每日一次给予相应的药物，连续给药2周(14天)。
7.3一般体征观察
试验期间，观察大鼠的精神状态、粪便情况以及皮毛色泽和状态，记录动物术后的存活情况，计算存活率。
7.4心动超声检查和心电图监测
给药1周和2周时，采用异氟烷气体麻醉，进行超声心动检测，给药2周时末次给药2-3小时检测心电图。具体方法：将大鼠进行异氟烷吸入麻醉，仰卧固定稳定5min 后，接上心电电极，监测大鼠心电图的变化8-10分钟，随后使用高分辨率小动物超声影像系统，测量左室舒张末期室间隔厚度(IVS,d)、左室收缩末期室间隔厚度(IVS,s)、左室后壁舒张末期厚度(LVPW,d)、左室后壁收缩末期厚度(LVPW,s)，在2-3个心动周期上测量各指标并取其平均值。
7.5生化指标测定
实验结束后用ELISA法检测血浆N末端脑钠肽(NT-proBNP)含量。
7.6心脏组织病理学观察
(1)大鼠心脏重量及心脏指数计算
大鼠采血后，打开胸腔摘取心脏，去除心耳、升主动脉等其他组织，用电子天平称取湿重，并计算心脏指数。
(2)大鼠心脏组织Masson染色观察
将取下的心脏置于10％中性甲醛溶液中固定2d后，脱水，透明，浸蜡，包埋。制成蜡块后，用切片机切成4μm薄片，用于Masson染色，具体按试剂盒说明书进行。然后用NanoZoomer 2.0RS数字切片扫描仪对组织切片进行扫描摄片，观察胶原纤维沉积区域个数与面积大小，将心肌胶原沉积程度分为0-4五个等级，先进行整体评分，随后每只动物取3个有胶原沉积的部位，观察胶原分布的特点，进行评分，评分标准为：
0分：基本无蓝色的胶原纤维，偶见蓝色的胶原纤维点状散在；
1分：心肌纤维排列整齐，少量蓝色的胶原纤维点状散在分布于心肌间质中；
2分：较多蓝色的胶原纤维点状散在，且有部分连成带状；
3分：心肌细胞较疏松，被明显增生变粗的胶原纤维分割呈现“网筛状”改变
4分：大量蓝色的胶原纤维呈片状分布，心肌间质胶原纤维过度沉积。
将3张照片得分相加，统计每只动物的总分。
8、观察指标
8.1一般指标
生存率，体重，行为活动及饮食情况；
8.2心功能指标
IVS,d、IVS,s、LVPW,d、LVPW,s等；
8.3心电图分析
心率(HR)、ST段抬高值(STE)、QT间期和T波幅度、5min心律失常发生率；
8.4生化指标
NT-proBNP；
8.5组织病理学观察
HE染色和Masson染色(观察心肌组织中胶原纤维沉积情况)。
9、数据处理
用SPSS 22.0软件进行统计分析，所有数据以均数±标准误
Figure BDA0002203951060000092
表示，计量资料应用ANOVA方差分析评价试验结果，两两比较采用LSD检验，统计结果的数值均保留小数后2位。数据分析处理，每组允许剔除1个异常数据(超过
Figure BDA0002203951060000093
范围和实验情况异常)。
10、试验结果
10.1对心衰模型大鼠一般体征的影响
给药期间，除模型对照组给药后第2天死亡1只和阳性对照组给药后第9天死亡1只外，其余各组均无出现死亡，各组试验大鼠的饮食、体重增长以及行为活动均未见明显异常。
给药2周后，连续5min心电检测发现，模型对照组存活的7只大鼠中有2只心电图节律异常，其中1只心律不齐，部分室性期前收缩，1只P波倒置；阳性对照组存活的7只有1只心电图节律异常(P波倒置)；高、中、低剂量组大鼠的心律未见异常，假手术组亦未见心律异常。
表1对心衰模型大鼠的存活率和心电图节律的影响
Figure BDA0002203951060000091
Figure BDA0002203951060000101
10.2对心衰模型大鼠心脏结构的影响
10.2.1对心衰模型大鼠左室室间隔厚度(IVS)的影响
由表2(图1)可见，与假手术组比较，模型对照组在给药前与给药后1、2周时，大鼠心脏收缩期IVS(s)和舒张期IVS(d)厚度均显著升高(P<0.01，P<0.05)；与模型对照组比较，给药1周时，各给药组收缩期和舒张期IVS均无显著变化(P>0.05)；给药2周时，低、中、高剂量组收缩期和舒张期IVS均有不同程度的降低，其中，高、中剂量组收缩期IVS降低显著(P<0.05)；阳性对照组收缩期和舒张期IVS亦有不同程度的降低，其中，舒张期IVS降低显著(P<0.01)。
表2对心衰模型大鼠左室室间隔厚度(IVS)的影响
Figure BDA0002203951060000102
Figure BDA0002203951060000103
注：与假手术组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05,**P<0.01。
10.2.2对心衰模型大鼠左室后壁厚度(LVPW)的影响
由表3和图2可见，与假手术组比较，模型对照组给药前与给药2周后收缩期(s) 与舒张期(d)LVPW均显著增加(P<0.05，P<0.01)；与模型对照组比较，中、高剂量组收缩期LVPW在给药2周时显著降低(P<0.05，P<0.01)。
表3对心衰模型大鼠左室后壁厚度(LVPW)的影响
Figure BDA0002203951060000111
Figure BDA0002203951060000112
注：模型对照组与假手术组比较，#P<0.05，##P<0.01；各给药组与模型对照组比较，*P<0.05,**P<0.01。
10.3对心衰模型大鼠心电图的影响
由表4和图3可见，与假手术组比较，模型对照组QT间期时间显著延长(P<0.05， P<0.01)，ST段抬高值(STE)显著下压(P<0.01)；与模型对照组比较，低、中、高剂量组对STE下压程度均有显著改善(P<0.05，P<0.01)，中、高剂量组QT间期时间延长有显著改善(P<0.05，P<0.01)。
表4对心衰模型大鼠心电图的影响
Figure BDA0002203951060000113
Figure BDA0002203951060000121
注：与假手术组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05,**P<0.01。
10.4对心衰模型大鼠心脏质量与系数的影响
10.4.1对心衰模型大鼠心脏质量的影响
由表5可见，与假手术组比较，模型对照组超声测算的心脏质量与解剖称取心脏质量均显著增加(P<0.01)；与模型对照组比较，给药2周后，超声测算心脏质量，低、中、高剂量组超声测算的心脏质量有不同程度的下降趋势，高剂量组有统计学差异 (P<0.05)；解剖称取心脏质量的结果显示，低剂量、中剂量组和阳性对照组均有不同程度的下降，其中，高剂量组下降最为明显(P>0.05)。
表5对心衰模型大鼠心脏质量的影响
Figure BDA0002203951060000122
Figure BDA0002203951060000123
Figure BDA0002203951060000131
注：与假手术组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05,**P<0.01。
10.4.2对心衰模型大鼠心脏系数的影响
由表6和图4可见，与假手术组比较，模型对照组，超声测算的心脏系数与解剖称取心脏系数均显著增加(P<0.01)；与模型对照组比较，给药2周后，超声测算方法解剖称取的方法均表明中、高剂量组心脏系数显著下降(P<0.05，P<0.01)，阳性对照组心脏系数有下降趋势，但差异不显著(P>0.05)。
表6对心衰模型大鼠心脏系数的影响
Figure BDA0002203951060000132
Figure BDA0002203951060000133
注：与假手术组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05,**P<0.01。
10.5对心衰模型大鼠生化指标的影响
由表7和图5可见，与假手术组比较，模型对照组给药2周时血浆中NT-proBNP含量显著升高(P<0.01)，与模型对照组比较，中、高剂量组和阳性对照组血浆NT-proBNP 含量显著下降(P<0.05，P<0.01)，低剂量组血浆NT-proBNP含量亦有下降趋势，但差异亦不显著(P>0.05)。
表7对心衰模型大鼠血生化指标的影响
Figure BDA0002203951060000134
Figure BDA0002203951060000135
Figure BDA0002203951060000141
注：与假手术组比较，#P<0.05，##P<0.01；与模型对照组比较，*P<0.05,**P<0.01。
10.6对心衰模型大鼠心肌组织的病理学观察结果
10.6.1对心衰模型大鼠心肌组织的HE染色结果
由HE染色结果(图6-1至图6-12)可见，假手术组心肌细胞排列整齐，细胞核呈卵圆形，着色较浅无深染，未见心肌细胞肥大，间质无炎症细胞浸润(见图6-1、6-2)；模型对照组细胞排列疏松，可见细胞断裂，心肌纤维增粗，细胞间质水肿，有炎症细胞浸润，有出血(见图6-3、6-4)；与模型对照组比较，高、中、低剂量组心肌细胞形态有不同程度改善，结构相对完整，排列相对较整齐(见图6-5至图6-10)，其中低剂量组可见心肌细胞排列稍疏松，细胞间质水肿，有炎症细胞浸润(见图6-5、6-6)，中剂量组少见细胞断裂，心肌纤维稍增粗，有少量炎症细胞浸润，出血较少(见图6-7、6-8)，高剂量组心肌细胞排列整齐，少见细胞断裂，心肌纤维稍增粗，有少量炎症细胞浸润，可见出血(见图6-9、6-10)；阳性对照组心肌细胞形态亦有改善(见图6-11、6-12，从图中可看出心肌细胞排列相对整齐，少见细胞断裂，心肌纤维稍有增粗，并有炎症细胞浸润，可见少量出血)。
10.6.2对心衰模型大鼠心肌纤维化的影响
根据Masson染色的胶原纤维沉积评分结果(见图7)，假手术组大鼠心肌组织中仅在冠脉及微血管周边可见蓝色着色，而非胶原纤维着色，总体评分为1或0，而模型对照组7只大鼠中总体评分在3分及以上的有5只，低、中、高剂量组8只大鼠中总体评分在3分及以上的分别是4只、2只、3只，阳性对照组7只大鼠中总体评分在3分及以上的有2只。
由心肌组织Masson染色结果(图8-1至图8-12)可见，假手术组未见明显的蓝色的胶原纤维带，偶见蓝色的胶原纤维点状散在，其心肌组织中仅在冠脉及微血管周边可见蓝色着色，而非胶原纤维着色(见图8-1、8-2)；与假手术组比较，模型对照组心肌间质胶原纤维沉积明显增多，可见大鼠心肌组织中心肌细胞较疏松，被明显增生变粗的胶原纤维分割呈现“网筛状”，严重的有大量蓝色的胶原纤维呈片状分布，心肌间质胶原纤维大量沉积(见图8-3、8-4)；与模型对照组比较，低、中、高剂量组和阳性对照组心肌间质胶原纤维沉积均有不同程度的减少(见图8-5至图8-10)，且中、高剂量组的改善比较明显，其中从图8-5中可看出有较大范围蓝色的胶原沉积区域，图8-6中心肌细胞较疏松，被明显增生变粗的胶原纤维分割呈现“网筛状”，图8-7中可见蓝色的胶原沉积区域，图8-8中可见蓝色的胶原纤维“网筛状”和点状散在，且有部分连成带状，图8-9中可见小范围的蓝色胶原沉积区域，图8-10中可见蓝色的胶原纤维“网筛状”和网点状散在，且有部分连成带状；阳性对照组可见蓝色的胶原纤维点状散在，且有部分连成带状，其心肌间质胶原纤维沉积亦有减少(见图8-11、8-12)。
11、实验结果
(1)一般状况：模型对照组给药后第2天死亡1只，给药2周时连续5min心电检测发现2只心律异常，阳性对照组给药后第9天死亡1只，1只出现心律异常；而给予硫酸舒欣啶的低、中、高剂量组未出现死亡，亦未发现心律异常。
(2)心脏结构：与假手术组比较，模型对照组给药后1周、2周时收缩期和舒张期IVS厚度、LVPW厚度均显著增加(P<0.01，P<0.05)；与模型对照组比较，低、中、高剂量组和阳性对照组在给药后1周时收缩期和舒张期IVS无明显影响，而在给药后2 周时均有不同程度的降低，其中，高、中剂量组收缩期IVS降低显著(P<0.05)，阳性对照组舒张期IVS降低显著(P<0.01)。高、中剂量组收缩期LVPW在给药2周时显著降低(P<0.05，P<0.01)。
(3)心电图指标：与假手术组比较，模型对照组QT间期时间显著延长(P<0.05， P<0.01)，ST段抬高值(STE)显著下压(P<0.01)；与模型对照组比较，低、中、高剂量组对STE下压程度均有显著改善(P<0.05，P<0.01)，中、高剂量组QT间期时间延长有显著改善(P<0.05，P<0.01)。
(4)心脏质量与系数：与假手术组比较，模型对照组，超声测算的心脏系数与解剖称取心脏系数均显著增加(P<0.01)；与模型对照组比较，给药2周后，超声测算方法解剖称取的方法均表明中、高剂量组心脏系数显著下降(P<0.05，P<0.01)，阳性对照组心脏系数有下降趋势，但差异不显著(P>0.05)。
(5)生化指标：与假手术组比较，模型对照组给药2周时血浆中NT-proBNP含量显著升高(P<0.01)，与模型对照组比较，中、高剂量组和阳性对照组血浆NT-proBNP 含量显著下降(P<0.05，P<0.01)，低剂量组血浆NT-proBNP含量亦有下降趋势，但差异亦不显著(P>0.05)。
(6)心肌组织病理学观察：HE染色结果，模型对照组细胞排列疏松，可见细胞断裂，心肌纤维增粗，细胞间质水肿，有炎症细胞浸润，有出血；与模型对照组比较，高、中、低剂量组心肌细胞形态有不同程度改善，结构相对完整，排列相对较整齐；阳性对照组心肌细胞形态亦有改善。Masson染色结果，模型对照组心肌间质胶原纤维沉积明显增多，可见大鼠心肌组织中心肌细胞较疏松，被明显增生变粗的胶原纤维分割呈现“网筛状”，严重的有大量蓝色的胶原纤维呈片状分布，心肌间质胶原纤维大量沉积；与模型对照组比较，低、中、高剂量组和阳性对照组心肌间质胶原纤维沉积均有不同程度的减少，且中、高剂量组的改善比较明显；阳性对照组心肌间质胶原纤维沉积亦有减少。胶原纤维沉积评分结果，模型对照组7只大鼠中总体评分在3分及以上的有5只，低、中、高剂量组8只大鼠中总体评分在3分及以上的分别是4只、2只、3只，阳性对照组7只大鼠中总体评分在3分及以上的有2只。
12、讨论
HF是各种心脏疾病致心功能不全的临床综合征，也是大多数心血管疾病的最终归宿。HF和心律失常在临床上往往伴随出现。大多数抗心律失常药物具有抑制心脏传导、抑制心肌收缩等特性，使临床上心力衰竭合并心律失常的药物治疗比较困难[1]。因此，本试验观察抗心律失常药硫酸舒欣啶对HF大鼠的影响，为临床应用提供参考。
根据心衰的发生发展过程，从心衰的危险因素进展成结构性心脏病，出现心衰症状，直至难治性终末期心衰，可分为前心衰(A)、前临床心衰(B)、临床心衰(C)和难治性终末期心衰(D)4个阶段。阶段A心衰的定义是患者为心衰的高发危险人群，尚无心脏结构或功能异常，也无心衰的症状和(或)体征；阶段B心衰的定义为患者从无心衰的症状和(或)体征，但已发展成结构性心脏病[2]。本试验采用的主动脉弓缩窄致大鼠心肌肥厚模型，是还原压力超负荷导致心肌代偿性肥大到失代偿性心力衰竭病理生理发展过程的理想模型，病变程度可控，模型稳定、重复性好，且诱导的模型呈现渐行性心衰过程。本实验室前期研究发现，大鼠TAC术后4周时出现心肌肥厚，表现为左室壁增厚，心室腔减小，心脏收缩舒张功能受损，心肌形成代偿性肥厚。8周时，心肌可能出现失代偿得初期反应，各心室壁无进一步增厚，心功能进一步受损。12周时心肌严重纤维化，室壁变薄，形成难治性心力衰竭终末期[3]。因此，本试验给药起点为TAC术后4周，处于射血分数保留，但出现心室重构的病理时期，对应临床的阶段B心衰，属早期心力衰竭动物模型。
超声心动图是临床上常用的无创伤的检测方法，利用M型超声检测可动态观察心肌增厚及心脏功能的改变，IVS、LVPW反应了心室重构的情况。本试验发现，TAC术后4 周，模型对照组大鼠IVS、LVPW显著增厚，提示大鼠出现了左心室重构，给予高剂量硫酸舒欣啶2周后，IVS和LVPW厚度减小，提示硫酸舒欣啶具有一定的改善心室重构作用。
心电图也是临床上常用的无创检测方法，可诊断心律不齐和心肌缺血等多种病理状态。临床研究显示，急性左心衰竭的首发表现为ST段压低，是由于心肌长期处于缺血状态，导致受损面积广，因而可见心电图普遍S-T段压低，进一步表现为心肌梗死、坏死心肌间质充血、水肿和顺应性降低，引发舒张性心衰[4]。另外，心衰时心肌电生理重构是心律失常发生的基础，最突出的表现为心肌复极化过程变慢，动作电位延长，并在体表心电图表现为QT间期延长，被视为获得性长QT间期综合征(LQTS)[5]。本实验中，模型对照组大鼠心电间期延长，ST段压低，QT间期延长，提示TAC术后大鼠有一定程度的心肌梗死和发生了心肌电生理重构。而给予不用剂量的硫酸舒欣啶后，对 ST段压低和QT间期延长的异常有显著的改善作用，提示硫酸舒欣啶可调节心律，抗心肌梗死。
NT-proBNP检测通常与超声心动图通常联合应用，以推测患有HF的可能性。
NT-proBNP来源于心肌细胞，以pro-BNP的形式存在于心肌细胞的分泌颗粒中，当心室壁的压力发生变化时，pro-BNP裂解为NT-proBNP和BNP。因此，NT-proBNP与心脏的收缩舒张功能密切相关[6,7]。本试验研究发现，模型对照组大鼠血浆NT-proBNP水平显著上升，给予不同剂量的硫酸舒欣啶后，均有不同程度的下降趋势，提示硫酸舒欣啶对TAC术后大鼠的心衰状态有一定的改善作用。
心肌细胞间质胶原沉积和心肌纤维化是导致心肌顺应性降低的主要因素，当心脏长期压力负荷过重时，随着心肌细胞肥大的发生和发展，心脏胶原含量和胶原网络密度也会过度增加，心肌胶原的交联程度与心肌僵硬度、舒张功能成比例，以具有较强抗张能力的I型胶原为主[6]。Mason染色能使胶原呈蓝色，用于检测组织中胶原沉积的情况。经大体解剖和病理诊断发现，模型对照组大鼠大鼠出现心肌肥大，心重量增加，心肌细胞水肿，细胞核增大，排列紊乱，血管的基本结构丧失，外膜结缔组织增生，炎症细胞浸润并向心扩散，并有明显的胶原沉积，而给予不同剂量的硫酸舒欣啶后，大鼠心脏重量和心脏系数有不同程度的下降，胶原沉积状态有少许改善。
综上所述，硫酸舒欣啶对早期心力衰竭大鼠模型心肌胶原沉积和心室重构方面具有一定的改善作用。
13、结论
以上实验结果表明，硫酸舒欣啶对早期心力衰竭大鼠模型心脏功能无明显影响，而对早期心力衰竭大鼠模型的心肌胶原沉积和心室重构方面具有一定的改善作用。
14、参考文献
[1]陈飞,刘凡.心力衰竭合并心律失常的药物治疗[J].临床荟萃,2017,32(03)：201-204.
[2]王喆.《中国心力衰竭诊断和治疗指南2014》解读[J].中国临床医生杂志,2016,44(05)：14-16.
[3]奚晓青,陈小真,马全鑫,张利棕,方明笋,陈诚,蔡月琴,陈民利.主动脉弓狭窄致大鼠慢性心力衰竭模型的建立及病理过程观察[J].中国比较医学杂志,2016,26(04)：35-40+85.
[4]李成.以急性左心衰竭为首发表现的普遍ST段压低型心肌梗死20例临床分析[J].实用心脑肺血管病杂志,2009,17(9)：794-795.
[5]Choy A M,Lang C C,Chomsky D M,et al.Normalization of acquired QTprolongation in humans by intravenous potassium[J].Circulation,1997,96(7)：2149-2154.)
[6]马力,刘杰,初楠,等.心力衰竭模型大鼠心脏肥厚指标与心功能的关系研究[J].首都医科大学学报,2010(5)：596-599.
本发明提供了一种硫酸舒欣啶在制备抗心衰产品中的应用的思路及方法，具体实现该技术方案的方法和途径很多，以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。本实施例中未明确的各组成部分均可用现有技术加以实现。

Claims (10)

1.硫酸舒欣啶在制备抗心衰产品中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，以硫酸舒欣啶为基本母核与糖类物质以及具有糖类结构的结合产生的苷类化合物在抗心衰产品中的应用。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的心衰为心肌病变或心脏负荷过重引起的充血性心衰。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抗心衰是通过硫酸舒欣啶降低左室室间隔厚度和左室后壁厚度，改善心肌肥大和心室重构。
5.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抗心衰是通过硫酸舒欣啶改善ST段压低和QT间期延长，调节心律，抗心肌梗死。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抗心衰是通过硫酸舒欣啶降低心衰所致的心脏质量增加，降低血浆中NT-proBNP水平。
7.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的抗心衰是通过硫酸舒欣啶改善心衰所致的细胞核增大，心肌细胞排列紊乱，降低胶原沉积，降低心衰死亡率。
8.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述的产品为药品、食品和保健品中的任意一种。
9.一种抗心衰的药物组合物，其特征在于，其含有有效量的硫酸舒欣啶或其药学上可接受的盐、水合物以及药学上可接受的载体、辅剂或它们的组合物。
10.根据权利要求9所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的剂型为散剂、颗粒剂、片剂和胶囊剂中的任意一种。
CN201910874674.7A 2019-09-17 2019-09-17 硫酸舒欣啶在制备抗心衰产品中的应用 Active CN112516136B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910874674.7A CN112516136B (zh) 2019-09-17 2019-09-17 硫酸舒欣啶在制备抗心衰产品中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201910874674.7A CN112516136B (zh) 2019-09-17 2019-09-17 硫酸舒欣啶在制备抗心衰产品中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112516136A true CN112516136A (zh) 2021-03-19
CN112516136B CN112516136B (zh) 2024-03-01

Family

ID=74974733

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201910874674.7A Active CN112516136B (zh) 2019-09-17 2019-09-17 硫酸舒欣啶在制备抗心衰产品中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112516136B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114984005A (zh) * 2022-05-25 2022-09-02 扬州中宝药业股份有限公司 硫酸舒欣啶在制备抗肾功能衰竭药物中的应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102665714A (zh) * 2009-11-17 2012-09-12 沪亚生物国际有限责任公司 心房纤颤的治疗
CN102869357A (zh) * 2009-11-17 2013-01-09 沪亚生物国际有限责任公司 舒欣啶及其盐的缓慢滴注

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102665714A (zh) * 2009-11-17 2012-09-12 沪亚生物国际有限责任公司 心房纤颤的治疗
CN102869357A (zh) * 2009-11-17 2013-01-09 沪亚生物国际有限责任公司 舒欣啶及其盐的缓慢滴注

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
ALBERTAS UNDROVINAS等: "Late sodium current is a new therapeutic target to improve contractility and rhythm in failing heart", vol. 6, no. 4, pages 348 - 359 *
JULLIA Y. LEE等: "HBI-3000 Prevents Secondary Sudden Cardiac Death", vol. 18, no. 5, pages 453 - 459, XP055674015, DOI: 10.1177/1074248413485433 *
LIGUO CHI等: "Inhibition of late Na+ current, a novel target to improve diastolic function and electrical abnormalities in Dahl salt-sensitive rats", AMERICAN JOURNAL OF PHYSIOLOGY-HEART AND CIRCULATORY PHYSIOLOGY, vol. 310, no. 10, pages 1313 - 1320 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN114984005A (zh) * 2022-05-25 2022-09-02 扬州中宝药业股份有限公司 硫酸舒欣啶在制备抗肾功能衰竭药物中的应用
CN114984005B (zh) * 2022-05-25 2023-06-13 扬州中宝药业股份有限公司 硫酸舒欣啶在制备抗肾功能衰竭药物中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN112516136B (zh) 2024-03-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Tanajak et al. Cardioprotection of dapagliflozin and vildagliptin in rats with cardiac ischemia-reperfusion injury
Zinnamosca et al. Neurofibromatosis type 1 (NF1) and pheochromocytoma: prevalence, clinical and cardiovascular aspects
Shanks et al. Reverse re-modelling chronic heart failure by reinstating heart rate variability
CN107693784B (zh) Pedf基因在治疗糖尿病性心肌损伤中的应用
Ma et al. Isoproterenol increases left atrial fibrosis and susceptibility to atrial fibrillation by inducing atrial ischemic infarction in rats
CN112516136A (zh) 硫酸舒欣啶在制备抗心衰产品中的应用
US20230141929A1 (en) Method for treating cardiovascular disease
DE69721747T2 (de) Methode zur behandlung oder verhütung von interstitieller blasenentzundung
CN109925310A (zh) 含有治疗有效量银杏内酯的降血压药物
CN107007605A (zh) 血根碱在制备抑制心肌梗死后心室重构药物中的应用
CN111012766A (zh) 一种用于防治肺动脉高压的药物组合物及其制备方法和应用
CN107157980B (zh) 冬凌草甲素在制备抗心肌重构药物中的用途
CN108704136A (zh) 蛋白酶体抑制剂在制备预防、治疗心血管疾病的药物中的用途
CN107875144B (zh) 一种治疗抑郁症的口服药物组合物
JP4039482B2 (ja) 心臓疾患の治療のためのコルチゾール拮抗剤の使用
US20210000792A1 (en) Methods for reducing or preventing cardiovascular events in patients with type ii diabetes mellitus
CN110898069A (zh) 1,25-二羟基维生素d3在预防和治疗ams中的药物用途
CN107737108A (zh) 一种治疗心肌梗死后心室重塑的口服药物组合物
CN114288301B (zh) Dtq在制备急性心肌梗死治疗药物中的用途及相关产品
CN114984087B (zh) 一种中药组合物、汤药和药物组合物及其制备方法和用途
CN1224396C (zh) 一种用于治疗心脑血管疾病的药物
CN106265673B (zh) 一种化合物的应用
CN108159246A (zh) 一种防治心肾综合征的中药组合物
CN117599151B (zh) 益心舒片联合活性肽预防和/或治疗慢性心力衰竭的用途
CN110051671B (zh) 马齿苋酰胺e用于制备治疗缺血性心脏病的药物的用途

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant