CN112505217A - 一种快速检测蟹肉新鲜度的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种快速检测蟹肉新鲜度的方法，属于水产检测技术领域，本发明包括检测指标1和检测指标2，检测指标1为通过检测ATP及其关联产物的提取量计算得到的Kv值，检测指标2为蟹死亡前后蟹肉中游离氨基酸下降率；其中，ATP及其关联产物提取中采用了含有硼酸和2‑[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸的高氯酸溶液，降低了高氯酸的提取浓度，并达到了较好的提取效果及准确度；游离氨基酸提取中采用了含有硫代硫酸铵和尿唑的三氯乙酸溶液，降低了三氯乙酸的提取浓度，并达到了较好的提取效果及准确度。

Description

一种快速检测蟹肉新鲜度的方法
技术领域
本发明属于水产检测技术领域，具体涉及一种快速检测蟹肉新鲜度的方法。
背景技术
水产品的鲜度是其销售及深加工非常重要的依据，水产品的鲜度直接决定其最终价值。因此较为客观准确的对其进行鲜度评价是我们的目标。现有的水产品评价方法主要有感官评定法，pH值，挥发性盐基氮，K值，微生物法等。
K值由Saito提取，用HxR与Hx之和占ATP关联化合物总量的百分率作为指标并称之为K值，K值越小表明鱼越新鲜。鱼体死后肌肉组织中的三磷酸腺苷(ATP)进行不可逆降解，即三磷酸腺苷(ATP)→二磷酸腺苷(ADP)→单磷酸腺苷(AMP)→肌苷酸(IMP)→次黄嘌呤核苷(HxR)→次黄嘌呤(Hx)，根据其降解产物的种类及含量变化与鱼体死后鲜度变化之间的相关性。
ATP的关联产物主要是指ATP、ADP、AMP、IMP、HxR、Hx、Xt、AdR、Ad等一系列由ATP降解产生的关联化合物。
蟹肉体肉中ATP及其关联产物的变化可以表征蟹肉的新鲜度。
水产品体内的游离氨基酸在死后迅速下降，因为微生物大量繁殖，游离氨基酸被分解生成一些氨类物质，这与死后螯肉和体肉pH值上升相对应，可以通过游离氨基酸下降率的值表征蟹肉新鲜度。
在蟹肉的鲜度指标检测中会使用到高浓度的酸，会产生高酸度废液等问题，降低酸度仍达到同样的检测效果具有重大的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种酸度低的、检测效果好的快速检测蟹肉新鲜度的方法。
本发明为实现上述目的所采取的技术方案为：
一种快速检测蟹肉新鲜度的方法，包括：
检测表征蟹肉的ATP及其关联产物的检测指标1；
检测表征蟹肉的游离氨基酸的检测指标2；
优选地，ATP及其关联产物通过含有硼酸和2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸的高氯酸提取液提取检测。硼酸和2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸在提取液中，与高氯酸均匀分散，提高了高氯酸的利用效果，并且共同促进ATP及其关联产物溶解到提取液中，从而在降低提取液酸度的条件下，达到较优的提取效果。
优选地，蟹肉的ATP及其关联产物的检测：将第一提取液加入蟹肉中，破碎匀浆，离心，取上清液得到第一蟹肉提取液；离心残渣中加入第二提取液进行二次提取，离心，取上清液得到第二蟹肉提取液；将第一蟹肉提取液与第二蟹肉提取液合并得到ATP及其关联产物提取液，调pH5-6，经水相滤膜过滤得到ATP及其关联产物滤液，经HPLC检测得到ATP及其关联产物，计算得到检测指标1。
ATP及其关联产物包括：ATP、ADP、AMP、IMP、HxR、Hx、AdR，和Xt。
检测指标1为Kv值，Kv值按下式计算：
Figure BDA0002752653700000021
更优选地，ATP及其关联产物检测：将第一提取液加入蟹肉中，破碎匀浆静置10-30min，0-10℃的温度下离心5-15min，取上清液得到第一蟹肉提取液；离心残渣中加入第二提取液进行二次提取，静置10-30min，0-10℃的温度下离心5-15min，取上清液得到第二蟹肉提取液；将第一蟹肉提取液与第二蟹肉提取液合并得到ATP及其关联产物提取液，调pH5-6，于0-10℃的温度下静置0.5-3h，经水相滤膜过滤得到ATP及其关联产物滤液，经HPLC检测得到检测指标1。
优选地，蟹肉的添加量为第一提取液的20-40wt％。
优选地，第二提取液的添加量为第一提取液的60-100wt％，例如，65、70、80、90、95wt％。
优选地，第一提取液和第二提取液均经过冰浴预冷处理。
优选地，ATP及其关联产物检测过程中样品的温度在10℃以下。
优选地，第一提取液为高氯酸的质量分数为2-4wt％的高氯酸溶液，例如，2.5、3、3.5、3.8wt％；第二提取液为高氯酸的质量分数为1-2wt％的高氯酸溶液，例如，1.1、1.35、1.55、1.85、1.95wt％。
优选地，第一提取液中硼酸的质量分数为第一提取液的0.5-2wt％，例如，0.6、0.8、1.2、1.5、1.7、1.9wt％；2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸的质量分数为第一提取液的1-3wt％，例如，1.1、1.3、1.7、1.95、2.3、2.5、2.85wt％。
优选地，第二提取液中硼酸的质量分数为第二提取液的0.2-1wt％，例如，0.25、0.3、0.4、0.6、0.8、0.85、0.9wt％；2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸的质量分数为第二提取液的0.5-1.5wt％，例如，0.7、0.9、1.1、1.3、1.45wt％。
优选地，游离氨基酸检测：将三氯乙酸溶液加入蟹肉中，破碎匀浆后于0-10℃的温度下静置0.5-3h，0-10℃的温度下离心5-15min，取上清液调pH至1.0-3.0，经水相滤膜过滤得到游离氨基酸滤液，经氨基酸自动分析仪检测得到游离氨基酸含量，计算检测指标2。
检测指标2为游离氨基酸下降率，游离氨基酸下降率按下式计算：
游离氨基酸下降率＝(死亡前游离氨基酸总量-死亡后游离氨基酸总量)/死亡前游离氨基酸总量×100％。
优选地，游离氨基酸通过三氯乙酸溶液提取，三氯乙酸溶液中含有硫代硫酸铵和尿唑。硫代硫酸铵和尿唑溶于三氯乙酸溶液中，通过分子中极性基团对游离氨基酸的相互作用，提高了游离氨基酸提取量，并且由于硫代硫酸铵、尿唑和三氯乙酸的共同的作用，从而达到降低三氯乙酸含量而得到较好的提取效果。
优选地，蟹肉的游离氨基酸的检测：将三氯乙酸溶液加入蟹肉中，破碎匀浆，离心，取上清液调pH至1.0-3.0，经水相滤膜过滤得到游离氨基酸滤液，经氨基酸自动分析仪检测得到检测指标2。
优选地，三氯乙酸溶液中三氯乙酸的质量分数为2-7wt％，例如，2.5、3、4、5.5、6.5wt％。
优选地，三氯乙酸溶液中硫代硫酸铵的添加量为三氯乙酸溶液的0.2-1.6wt％，例如，0.35、0.5、0.8、0.95、1.15、1.35、1.5、1.55wt％；尿唑的添加量为三氯乙酸溶液的0.5-2wt％例如，0.55、0.65、0.75、0.9、1.2、1.5、1.7、1.9wt％。
优选地，三氯乙酸经过冰浴预冷处理。
优选地，蟹肉的添加量为三氯乙酸溶液的3-12wt％。
优选地，水相滤膜的孔径为0.2μm以上。
本发明的方法可用于活蟹和/或死蟹的检测，更适合濒临死亡以及死后蟹肉鲜度的检测。
本发明由于采用了含有硼酸和2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸的高氯酸溶液提取蟹肉中的ATP及其关联产物并计算Kv值，因而具有如下有益效果：降低了高氯酸的使用浓度，提高了在低浓度高氯酸的条件下对蟹肉中的ATP及其关联产物提取量，达到较好的提取效果及准确度。本发明由于采用了含有硫代硫酸铵和尿唑的三氯乙酸溶液提取蟹肉中的游离氨基酸并计算游离氨基酸下降率，因而具有如下有益效果：降低了三氯乙酸的使用浓度，提高了在低浓度三氯乙酸的条件下对蟹肉中的游离氨基酸的提取量，达到较好的提取效果及准确度。因此，本发明是一种酸度低的、检测效果好的快速检测蟹肉新鲜度的方法。
附图说明
图1为ATP及其关联产物提取结果图；
图2为检测指标1结果图；
图3为游离氨基酸提取结果图；
图4为检测指标2结果图。
具体实施方式
以下结合具体实施方式和附图对本发明的技术方案作进一步详细描述：
以下各实施例或对比例的蟹肉均为测试前由中华绒螯蟹中取出，蟹肉为体肉。
实施例1：
一种ATP及其关联产物检测的检测方法，
ATP及其关联产物检测：将第一提取液加入蟹肉中，破碎匀浆静置20min，5℃的温度下离心10min，取上清液得到第一提取液；离心残渣中加入第二提取液进行二次提取，静置20min，5℃的温度下离心10min，取上清液得到第二提取液；将第一提取液与第二提取液合并得到ATP及其关联产物提取液，调pH5.5，于5℃的温度下静置0.5h，经水相滤膜过滤得到ATP及其关联产物滤液，通过HPLC检测。第一提取液为高氯酸的质量分数为3wt％的高氯酸溶液，高氯酸溶液中含有硼酸和2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸，硼酸的质量分数为第一提取液的1.2wt％，2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸的质量分数为第一提取液的2wt％。蟹肉的添加量为第一提取液的30wt％。第二提取液为高氯酸的质量分数为1.5wt％的高氯酸溶液，高氯酸溶液中含有硼酸和2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸，硼酸的质量分数为第二提取液的1.2wt％，2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸的质量分数为第二提取液的2wt％。第二提取液的添加量为第一提取液的70wt％。第一提取液和第二提取液均经过冰浴预冷处理。水相滤膜的孔径为0.25μm。
ATP及其关联产物色谱检测条件：
色谱柱：岛津ODS-3C18(4.6mm×250mm，5μm)；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量：10μL；检测波长：254nm；流动相A：0.015mol/L磷酸氢二钾和磷酸二氢钾混合溶液(1:1，n/n)，用磷酸和氢氧化钾溶液调pH＝5.70；流动相B：纯甲醇。
梯度洗脱程序：
0min：流动相A，100％；流动相B，0％；
8min：流动相A，97％；流动相B，3％；
10min：流动相A，94％；流动相B，6％；
15min：流动相A，85％；流动相B，15％；
22min：流动相A，70％；流动相B，30％；
27min：流动相A，100％；流动相B，0％；
30min：流动相A，100％；流动相B，0％。
实施例2：
一种ATP及其关联产物检测的检测方法，
ATP及其关联产物检测：将第一提取液加入蟹肉中，破碎匀浆静置20min，5℃的温度下离心10min，取上清液得到第一提取液；离心残渣中加入第二提取液进行二次提取，静置20min，5℃的温度下离心10min，取上清液得到第二提取液；将第一提取液与第二提取液合并得到ATP及其关联产物提取液，调pH5.5，于5℃的温度下静置0.5h，经水相滤膜过滤得到ATP及其关联产物滤液，通过HPLC检测。第一提取液为高氯酸的质量分数为2.6wt％的高氯酸溶液，高氯酸溶液中含有硼酸和2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸，硼酸的质量分数为第一提取液的1.5wt％，2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸的质量分数为第一提取液的2.1wt％。蟹肉的添加量为第一提取液的30wt％。第二提取液为高氯酸的质量分数为1.5wt％的高氯酸溶液，高氯酸溶液中含有硼酸和2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸，硼酸的质量分数为第二提取液的1.2wt％，2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸的质量分数为第二提取液的2wt％。第二提取液的添加量为第一提取液的70wt％。第一提取液和第二提取液均经过冰浴预冷处理。水相滤膜的孔径为0.25μm。
ATP及其关联产物色谱检测条件：
色谱柱：岛津ODS-3C18(4.6mm×250mm，5μm)；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量：10μL；检测波长：254nm；流动相A：0.015mol/L磷酸氢二钾和磷酸二氢钾混合溶液(1:1，n/n)，用磷酸和氢氧化钾溶液调pH＝5.70；流动相B：纯甲醇。
梯度洗脱程序：
0min：流动相A，100％；流动相B，0％；
8min：流动相A，97％；流动相B，3％；
10min：流动相A，94％；流动相B，6％；
15min：流动相A，85％；流动相B，15％；
22min：流动相A，70％；流动相B，30％；
27min：流动相A，100％；流动相B，0％；
30min：流动相A，100％；流动相B，0％。
实施例3：
一种ATP及其关联产物检测的检测方法，
ATP及其关联产物检测：将第一提取液加入蟹肉中，破碎匀浆静置20min，5℃的温度下离心10min，取上清液得到第一提取液；离心残渣中加入第二提取液进行二次提取，静置20min，5℃的温度下离心10min，取上清液得到第二提取液；将第一提取液与第二提取液合并得到ATP及其关联产物提取液，调pH5.5，于5℃的温度下静置0.5h，经水相滤膜过滤得到ATP及其关联产物滤液，通过HPLC检测。第一提取液为高氯酸的质量分数为3wt％的高氯酸溶液，高氯酸溶液中含有硼酸和2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸，硼酸的质量分数为第一提取液的1.2wt％，2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸的质量分数为第一提取液的2wt％。蟹肉的添加量为第一提取液的30wt％。第二提取液为高氯酸的质量分数为2wt％的高氯酸溶液，高氯酸溶液中含有硼酸和2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸，硼酸的质量分数为第二提取液的0.9wt％，2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸的质量分数为第二提取液的1.6wt％。第二提取液的添加量为第一提取液的70wt％。第一提取液和第二提取液均经过冰浴预冷处理。水相滤膜的孔径为0.25μm。
ATP及其关联产物色谱检测条件：
色谱柱：岛津ODS-3C18(4.6mm×250mm，5μm)；流速：1.0mL/min；柱温：30℃；进样量：10μL；检测波长：254nm；流动相A：0.015mol/L磷酸氢二钾和磷酸二氢钾混合溶液(1:1，n/n)，用磷酸和氢氧化钾溶液调pH＝5.70；流动相B：纯甲醇。
梯度洗脱程序：
0min：流动相A，100％；流动相B，0％；
8min：流动相A，97％；流动相B，3％；
10min：流动相A，94％；流动相B，6％；
15min：流动相A，85％；流动相B，15％；
22min：流动相A，70％；流动相B，30％；
27min：流动相A，100％；流动相B，0％；
30min：流动相A，100％；流动相B，0％。
实施例4：
一种游离氨基酸的检测方法，
游离氨基酸检测：将三氯乙酸溶液加入蟹肉中，破碎匀浆后于5℃的温度下静置0.5h，5℃的温度下离心10min，取上清液调pH至2，经水相滤膜过滤得到游离氨基酸滤液，通过氨基酸自动分析仪检测。三氯乙酸溶液中含有硫代硫酸铵和尿唑，三氯乙酸溶液中三氯乙酸的质量分数为6wt％，硫代硫酸铵的添加量为三氯乙酸溶液的0.9wt％，尿唑的添加量为三氯乙酸溶液的1.2wt％。三氯乙酸经过冰浴预冷处理。蟹肉的添加量为三氯乙酸溶液的8wt％。水相滤膜的孔径为0.25μm。
氨基酸自动分析仪条件：
分离柱：4.6mm×60mm，分离柱树脂为阳离子交换树脂；分离柱温度：57℃；检测波长：570nm(脯氨酸为440nm)；缓冲溶液流速：0.40mL/min；反应液：茚三酮试剂；反应液流量：0.35mL/min；反应单元温度：135℃；进样量20μL。
实施例5：
一种游离氨基酸的检测方法，
游离氨基酸检测：将三氯乙酸溶液加入蟹肉中，破碎匀浆后于5℃的温度下静置0.5h，5℃的温度下离心10min，取上清液调pH至2，经水相滤膜过滤得到游离氨基酸滤液，通过氨基酸自动分析仪检测。三氯乙酸溶液中含有硫代硫酸铵和尿唑，三氯乙酸溶液中三氯乙酸的质量分数为5wt％，硫代硫酸铵的添加量为三氯乙酸溶液的1wt％，尿唑的添加量为三氯乙酸溶液的1.5wt％。三氯乙酸经过冰浴预冷处理。蟹肉的添加量为三氯乙酸溶液的8wt％。水相滤膜的孔径为0.25μm。
氨基酸自动分析仪条件：
分离柱：4.6mm×60mm，分离柱树脂为阳离子交换树脂；分离柱温度：57℃；检测波长：570nm(脯氨酸为440nm)；缓冲溶液流速：0.40mL/min；反应液：茚三酮试剂；反应液流量：0.35mL/min；反应单元温度：135℃；进样量20μL。
实施例6：
一种游离氨基酸的检测方法，
游离氨基酸检测：将三氯乙酸溶液加入蟹肉中，破碎匀浆后于5℃的温度下静置0.5h，5℃的温度下离心10min，取上清液调pH至2，经水相滤膜过滤得到游离氨基酸滤液，通过氨基酸自动分析仪检测。三氯乙酸溶液中含有硫代硫酸铵和尿唑，三氯乙酸溶液中三氯乙酸的质量分数为4.3wt％，硫代硫酸铵的添加量为三氯乙酸溶液的1.3wt％，尿唑的添加量为三氯乙酸溶液的1.7wt％。三氯乙酸经过冰浴预冷处理。蟹肉的添加量为三氯乙酸溶液的8wt％。水相滤膜的孔径为0.25μm。
氨基酸自动分析仪条件：
分离柱：4.6mm×60mm，分离柱树脂为阳离子交换树脂；分离柱温度：57℃；检测波长：570nm(脯氨酸为440nm)；缓冲溶液流速：0.40mL/min；反应液：茚三酮试剂；反应液流量：0.35mL/min；反应单元温度：135℃；进样量20μL。
对比例1：
本对比例与实施例1相比，不同之处仅在于以下方面：
ATP及其关联产物检测中，第一提取液和第二提取液中不含有2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸。
对比例2：
本对比例与实施例1相比，不同之处仅在于以下方面：
ATP及其关联产物检测中，第一提取液和第二提取液中不含有硼酸。
对比例3：
本对比例与实施例1相比，不同之处仅在于以下方面：
ATP及其关联产物检测中，第一提取液和第二提取液中不含有硼酸和2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸。
对比例4：
本对比例与实施例1相比，不同之处仅在于以下方面：
ATP及其关联产物检测中，第一提取液和第二提取液中不含有硼酸和2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸，第一提取液中，第一提取液为高氯酸的质量分数为10wt％的高氯酸溶液；第二提取液中，第二提取液为高氯酸的质量分数为5wt％的高氯酸溶液。
对比例5：
本对比例与实施例4相比，不同之处仅在于以下方面：
游离氨基酸检测中，三氯乙酸溶液中不含有尿唑。
对比例6：
本对比例与实施例4相比，不同之处仅在于以下方面：
游离氨基酸检测中，三氯乙酸溶液中不含有硫代硫酸铵。
对比例7：
本对比例与实施例4相比，不同之处仅在于以下方面：
游离氨基酸检测中，三氯乙酸溶液中不含有硫代硫酸铵和尿唑。
对比例8：
本对比例与实施例4相比，不同之处仅在于以下方面：
游离氨基酸检测中，三氯乙酸溶液中不含有硫代硫酸铵和尿唑，三氯乙酸溶液中三氯乙酸的质量分数为15wt％。
试验例1：
中华绒螯蟹活力评价：
死亡标准(E)：刺激中华绒螯蟹无反应，拿住背部左右晃动，大螯及步足随之晃动，触碰眼睛无反应，瞳孔放大；
濒死标准(D)：刺激中华绒螯蟹20s后仍无法翻身，拿住背部左右晃动，大螯及步足随之摆动，大螯可稍稍抬起举不过眼部，触碰眼睛微微收回；
弱活力标准(C)：12s后翻身，拿住背部左右晃动，大螯轻微晃动，步足左右摆动，大螯刚刚可举过眼部，触碰眼睛较慢收回；
中活力标准(B)：3～12s翻身，拿住背部左右晃动，大螯不动，步足有轻微晃动，大螯可举高过眼部，触碰眼睛迅速收回；
高活力标准(A)：2s内翻身，拿住背部左右晃动，大螯及步足不随之晃动，大螯可举高过眼部，触碰眼睛迅速收回。
以下试验测试样品为中华绒螯蟹，蟹肉为体肉。
1.ATP及其关联产物检测
ATP及其关联产物检测方法采用实施例1-3及对比例1-4。
本次测试中采用D标准的中华绒螯蟹进行ATP及其关联产物检测；ATP关联产物均由ATP直接或间接产生，因此对ATP及其关联产物采用一次检测标准即可计算。
ATP及其关联产物包括：ATP、ADP、AMP、IMP、HxR、Hx、AdR，和Xt。
ATP及其关联产物提取总量如图1所示，其中实施例1的提取量最高，达到了4.18μM/g；实施例1-3与对比例4相比，实施例1-3中高氯酸的浓度更低，但对于ATP及其关联产物的提取总量基本一致，表明添加有硼酸和2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸的低浓度的高氯酸溶液与高浓度的高氯酸溶液具有同等效果；实施例1与对比例3相比，表明硼酸和2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸的共同使用具有提高ATP及其关联产物提取量的效果；对比例1-2与对比例3相比，表明硼酸或2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸的单独使用不能提高对蟹肉中ATP及其关联产物的提取量；实施例1与对比例1-2相比，表明只有硼酸和2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸共同使用时，才具有降低高氯酸浓度且对蟹肉中ATP及其关联产物具有好的提取效果。
Kv值结果如图2所示，实施例1-3与对比例4的Kv值均具有一致性，并且对比例1-3的Kv值也具有一致性。
2.游离氨基酸检测
游离氨基酸检测方法采用实施例4-6及对比例5-8。
本次测试中采用D、E标准的中华绒螯蟹进行游离氨基酸检测检测；中华绒螯蟹死亡后游离氨基酸基本不再产生，通过微生物的分解会造成游离氨基酸含量的降低，并引起pH值升高等影响，通过中华绒螯蟹死亡前后体肉中游离氨基酸含量变化作为检测指标。
由于个体差异的原因，在实际中可以大量检测得到D标准的中华绒螯蟹的蟹肉中游离氨基酸的量，取其平均值作为同一批次的中华绒螯蟹检测指标2中的死亡前游离氨基酸总量，此数值可每隔一段时间更新一次，例如，按月，在测试样本足够大时，即使不更新也可作为参考使用。
D、E级蟹肉检测结果如图3所示，D级蟹肉中游离氨基酸的含量结果中，实施例5中游离氨基酸的含量最高，达到了29.58mg/g；对比例7中游离氨基酸的含量最低，达到了25.29mg/g；实施例4-6与对比例8相比，实施例4-6中三氯乙酸的浓度更低，但对于游离氨基酸的提取总量基本一致，表明添加有硫代硫酸铵和尿唑的低浓度的三氯乙酸溶液与高浓度的三氯乙酸溶液具有同等效果；实施例4与对比例7相比，表明硫代硫酸铵和尿唑的共同使用具有提高游离氨基酸提取量的效果；对比例5-6与对比例7相比，表明硫代硫酸铵或尿唑的单独使用不能提高对蟹肉中游离氨基酸的提取量；实施例4与对比例5-6相比，表明只有硫代硫酸铵和尿唑共同使用时，才具有降低三氯乙酸浓度且对蟹肉中游离氨基酸具有好的提取效果。E级蟹肉中游离氨基酸的含量结果的变化趋势与D级蟹肉中游离氨基酸的含量结果一致，进一步表明了硫代硫酸铵和尿唑在蟹肉中游离氨基酸提取中的效果。
游离氨基酸下降率结果如图4所示，实施例4-6与对比例8的游离氨基酸下降率具有一致性，对比例5-7的游离氨基酸下降率同样具有一致性。
以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此，所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。

Claims (10)

1.一种快速检测蟹肉新鲜度的方法，包括：
检测表征蟹肉的ATP及其关联产物的检测指标1；所述检测指标1为Kv值，Kv值由下式计算：
Figure FDA0002752653690000011
检测表征蟹肉的游离氨基酸的检测指标2；所述检测指标2为游离氨基酸下降率；
所述ATP及其关联产物通过含有硼酸和2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸的提取液提取检测。
2.根据权利要求1所述的一种快速检测蟹肉新鲜度的方法，其特征是：所述蟹肉的ATP及其关联产物的检测：将第一提取液加入蟹肉中，破碎匀浆，离心，取上清液得到第一蟹肉提取液；离心残渣中加入第二提取液进行二次提取，离心，取上清液得到第二蟹肉提取液；将第一蟹肉提取液与第二蟹肉提取液合并得到ATP及其关联产物提取液，调pH5-6，经水相滤膜过滤得到ATP及其关联产物滤液，经HPLC检测得到检测指标1。
3.根据权利要求2所述的一种快速检测蟹肉新鲜度的方法，其特征是：所述第一提取液为高氯酸的质量分数为2-4wt％的高氯酸溶液，第二提取液为高氯酸的质量分数为1-2wt％的高氯酸溶液。
4.根据权利要求3所述的一种快速检测蟹肉新鲜度的方法，其特征是：所述第一提取液中硼酸的质量分数为第一提取液的0.5-2wt％，2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸的质量分数为第一提取液的1-3wt％。
5.根据权利要求3所述的一种快速检测蟹肉新鲜度的方法，其特征是：所述第二提取液中硼酸的质量分数为第二提取液的0.2-1wt％，2-[(氨基亚氨基甲基)硫]乙磺酸的质量分数为第二提取液的0.5-1.5wt％。
6.根据权利要求1所述的一种快速检测蟹肉新鲜度的方法，其特征是：所述游离氨基酸通过三氯乙酸溶液提取，所述三氯乙酸溶液中含有硫代硫酸铵和尿唑。
7.根据权利要求1所述的一种快速检测蟹肉新鲜度的方法，其特征是：所述蟹肉的游离氨基酸的检测：将三氯乙酸溶液加入蟹肉中，破碎匀浆，离心，取上清液调pH至1.0-3.0，经水相滤膜过滤得到游离氨基酸滤液，经氨基酸自动分析仪检测得到检测指标2。
8.根据权利要求7所述的一种快速检测蟹肉新鲜度的方法，其特征是：所述三氯乙酸溶液中三氯乙酸的质量分数为2-7wt％。
9.根据权利要求1所述的一种快速检测蟹肉新鲜度的方法，其特征是：所述三氯乙酸溶液中硫代硫酸铵的添加量为三氯乙酸溶液的0.2-1.6wt％，尿唑的添加量为三氯乙酸溶液的0.5-2wt％。
10.权利要求1-9任一所述方法可用于活蟹和/或死蟹的检测。
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