CN112485358A - 一种枸杞子药材中多种有效成分同时快速定性与定量检测方法 - Google Patents

一种枸杞子药材中多种有效成分同时快速定性与定量检测方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种枸杞子药材中多种有效成分同时快速定性与定量检测方法，具体包括采用药材中不含的一种成分对照品作为参照物，利用其他待测成分与参照物成分间的相对保留时间和相对校正因子，即可同时对其他多种待测成分进行定性和定量计算。通过本发明公开的方法可以快速地检测枸杞子中的玉米黄质等多种有效成分及其含量，并且使用的对照品少，能够简化检测过程、提高检测效率、降低检测成本。

Description

一种枸杞子药材中多种有效成分同时快速定性与定量检测 方法
技术领域
本发明涉及药材中有效成分检测技术领域，更具体的说是涉及一种枸杞子药材中多种有效成分快速定性与定量检测方法。
背景技术
枸杞子，史载于《神农本草经》，列为上品。《中华人民共和国药典》记载枸杞子来源于茄科落叶灌木植物宁夏枸杞Lycium barbarum L.的干燥成熟果实。枸杞子中的主要色素是类胡萝卜素，也是枸杞中的重要活性成分之一，具有抗氧化、抗肿瘤、提高人体免疫功能、预防和抑制肿瘤及预防动脉粥样硬化等作用。此外，枸杞果实中还含有叶黄素、β-胡萝卜素、玉米黄质等游离类胡萝卜素和玉米黄素双棕榈酸酯等类胡萝卜素酯的成分，其中玉米黄素双棕榈酸酯含量最高。
目前，类胡萝卜素常用的测定方法有紫外可见分光光度法、皂化除去枸杞果肉中的大部分脂肪酸甘油酯和游离脂肪酸从而测定游离类胡萝卜素以及直接测定游离类胡萝卜素及类胡萝卜素酯的方法。紫外可见分光光度法是以β-胡萝卜素为对照品测定类胡萝卜素总量，无法准确反映枸杞中类胡萝卜素的组成及各组分的含量；虽然皂化的方法可以将类胡萝卜素酯转化成类胡萝卜素，但受皂化条件与操作等诸多方面的影响，造成游离类胡萝卜素在一定程度上发生降解损，使其总含量降低。并且现有的采用液相色谱法或液质联用法含量测定多采用外标法测定枸杞子药材或提取物中多种类胡萝卜素类成分含量，需要多种对照品，而枸杞子类胡萝卜素类对照品昂贵难以供应并且不稳定，造成实验成本较高。
因此，为解决上述问题而提供一种枸杞子药材中类胡萝卜素类成分快速定性定量检测方法是本领域技术人员亟需解决的问题。
发明内容
有鉴于此，本发明提供了一种枸杞子药材中多种有效成分快速定性定量检测方法，利用成分内在的函数关系和比例关系，只测定一种成分，即可实现多种成分的同步检测。与已有技术不同的是，本发明采用的是枸杞子药材中本身不含有的1种成分对照品作为参照物，通过参照物与枸杞子药材中待测成分的相对保留时间和相对校正因子，即可以快速地同时对枸杞子中多种成分进行定性定量分析，使用的对照品成本低且稳定，用量少，能够大大简化检测过程、提高检测效率、降低检测成本。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种枸杞子药材中多种有效成分同时快速定性与定量检测方法，具体包括如下步骤：
S1配制对照品溶液
称取对照品，并分别向对照品中加入溶剂制成对照品溶液；其中，所述对照品至少为β-阿林胡萝卜醛、叶黄素、玉米黄质、β-胡萝卜素、玉米黄质双棕榈酸酯中的一种；
S2配制样品溶液
取待测样品加入适宜溶剂，同时加入β-阿林胡萝卜醛对照品溶液，制备得到样品溶液；
S3液相色谱检测
分别将对照品溶液和样品溶液进行液相色谱检测，并将β-阿林胡萝卜醛作为参照物，分别得到包括参照物对照品在内的各对照品的保留时间和峰面积，同时读取样品溶液检测结果中各待测成分色谱峰的保留时间和峰面积以及参照物色谱峰的保留时间和峰面积；
S4测定各对照品相对保留时间和相对校正因子
将β-阿林胡萝卜醛作为参照物，分别计算各对照品色谱峰保留时间与参照物色谱峰保留时间的比值得到对照品的相对保留时间，以及分别计算各对照品的浓度和峰面积比值得到各对照品的校正因子，再计算各对照品的校正因子与参照物的校正因子的比值得到各对照品的相对校正因子；
S5成分色谱峰的归属和含量的计算
由相对保留时间确定样品溶液检测色谱峰中各待测成分的归属；由相对校正因子、各待测成分色谱峰峰面积、参照物的浓度和参照物色谱峰的峰面积分别计算样品中叶黄素、玉米黄质、β-胡萝卜素和玉米黄质双棕榈酸酯的含量。
S6计算本法与外标法测定结果的相对偏差
由本法通过相对校正因子计算出的各待测成分的含量与外标法测定的各待测成分的含量进行比较，计算本法与外标法测定结果的相对偏差，以确定本法结果的准确性。
优选的，所述步骤S1和所述步骤S2中的溶剂相同，且所述溶剂至少为甲醇、乙醇、水中的一种。
进一步优选的，所述步骤S1中，加入溶剂分别制成浓度约为0.1-1mg/mL的对照品溶液。
进一步优选的，所述步骤S2具体为：取待测样品精密称量，加入10-50倍量的溶剂经过回流、超声或冷浸处理，过滤却得样品溶液。
优选的，所述步骤S3中，液相色谱检测的色谱条件是：填料为C30的色谱柱，色谱柱内径为4.6mm，且长度为250mm，填料粒径为5μm，洗脱条件为洗脱液A-洗脱液B，梯度洗脱：0～20min洗脱液A为70％～50％，洗脱液B为30％～50％；20～48min洗脱液A为50％，洗脱液B为50％；48～50min洗脱液A为50％～70％，洗脱液B为50％～30％；50～55min洗脱液A为70％，洗脱液B为30％；流速为1mL/min；进样量：20μl；柱温：20℃；检测波长450nm；所述洗脱液A为浓度为甲醇：乙腈：水(81:14:5)溶液，所述洗脱液B为二氯甲烷。
优选的，所述步骤S4中，相对保留时间R的计算公式为
R＝Rx/Rs；
式中Rx和Rs分别为待测成分的保留时间和参照物的保留时间；
以及，相对校正因子fx/s的计算公式为：
Figure BDA0002835170840000031
所述fx/s是各成分相对校正因子，所述fx是待测成分校正因子，所述fs是参照物校正因子，所述Cx为待测成分对照品溶液的浓度，所述Cs为参照物对照品溶液的浓度，所述As为参照物对照品溶液的色谱峰峰面积，所述Ax为待测成分对照品溶液的色谱峰峰面积。
优选的，所述步骤S5中，待测成分含量的计算公式为：
Figure BDA0002835170840000041
所述Wx为待测成分的含量，所述Cx为样品溶液中待测成分的浓度，所述V为样品溶液的体积，所述m为样品的称样量，所述Ax为各待测成分的色谱峰峰面积，所述Cs为参照物对照品溶液的浓度，所述fx/s是相对校正因子，所述As为样品溶液中参照物色谱峰的峰面积。
优选的，所述步骤S6中，相对偏差(standard method difference)SMD的计算公式为：
Figure BDA0002835170840000042
所述SMD为相对偏差；所述W外标法为采用外标法测定的待测成分的含量，所述W本法为采用本发明的方法测定的待测成分的含量。
且，一般认为SMD<5％时，两者无显著性差异。
经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种枸杞子药材中多种有效成分同时快速定性与定量检测方法，具有如下有益效果：
(1)本发明通过选取参照物，通过保留时间计算得到待测成分与参照物的相对保留时间，并通过峰面积与浓度计算得到待测成分与参照物的相对校正因子；
(2)本发明通过建立相对保留时间，可以在测定参照物成分的过程中，根据相对保留时间值即可确定待测成分的色谱峰；
(3)本发明通过建立相对校正因子，可以在测定参照物成分的过程中，根据相对校正因子值，即可同时计算出叶黄素、玉米黄质、β-胡萝卜素和玉米黄质双棕榈酸酯这4种成分的含量；
(4)本发明不仅能够使含量测定结果与药物分析常用的外标法无显著性差异，方法简便，准确度高，还能大大节省实验成本，适于推广与应用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
附图1为β-阿林胡萝卜醛对照品溶液HPLC色谱图；
附图2为叶黄素对照品溶液HPLC色谱图；
附图3为玉米黄质对照品溶液HPLC色谱图；
附图4为β-胡萝卜素对照品溶液HPLC色谱图；
附图5为玉米黄质双棕榈酸酯对照品溶液HPLC色谱图；
附图6为混合对照品溶液HPLC色谱图；
附图7为枸杞子药材样品溶液HPLC色谱图。
在图中：1-叶黄素；2-玉米黄质；3-β-胡萝卜素；4-阿林胡萝卜醛；5-玉米黄质双棕榈酸酯。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
一种枸杞子药材中多种有效成分快速定性定量检测方法，具体包括如下步骤：
S1配制对照品溶液
分别称取对照品，对照品包括β-阿林胡萝卜醛、叶黄素、玉米黄质、β-胡萝卜素和玉米黄质双棕榈酸酯；分别向对照品加入溶剂制成对照品溶液；
S2配制样品溶液
取待测样品加入适宜溶剂，同时加入β-阿林胡萝卜醛对照品溶液，制备得到样品溶液；
S3液相色谱检测
分别将对照品溶液和样品溶液进行液相色谱检测，将β-阿林胡萝卜醛作为参照物，分别得到包括参照物对照品在内的各对照品的保留时间和峰面积，同时读取样品溶液检测结果中各待测成分色谱峰的保留时间和峰面积以及参照物色谱峰的保留时间和峰面积；
液相色谱检测的色谱条件是：填料为C30的色谱柱，色谱柱内径为4.6mm，且长度为250mm，填料粒径为5μm，洗脱条件为洗脱液A-洗脱液B，梯度洗脱：0～20min洗脱液A为70％～50％，洗脱液B为30％～50％；20～48min洗脱液A为50％，洗脱液B为50％；48～50min洗脱液A为50％～70％，洗脱液B为50％～30％；50～55min洗脱液A为70％，洗脱液B为30％；流速为1mL/min；进样量：20μl；柱温：20℃；检测波长450nm；所述洗脱液A为浓度为甲醇：乙腈：水(81:14:5)溶液，所述洗脱液B为二氯甲烷。
S4测定各对照品相对保留时间和相对校正因子
将β-阿林胡萝卜醛作为参照物，分别计算各对照品色谱峰保留时间与参照物色谱峰保留时间的比值得到对照品的相对保留时间；分别计算各对照品的浓度和峰面积比值得到各对照品的校正因子，再计算各对照品的校正因子与参照物的校正因子的比值得各对照品的相对校正因子。
相对保留时间R的计算公式为：
R＝Rx/Rs；
所述Rx和Rs分别为待测成分的保留时间和参照物的保留时间。
相对校正因子fx/s的计算公式是：
Figure BDA0002835170840000061
所述fx/s是各成分相对校正因子，所述fx是待测成分校正因子，所述fs是参照物校正因子，所述Cx为待测成分对照品溶液的浓度，所述Cs为参照物对照品溶液的浓度，所述As为参照物对照品溶液的色谱峰峰面积，所述Ax为待测成分对照品溶液的色谱峰峰面积。
S5成分色谱峰的归属和含量的计算
由相对保留时间确定样品溶液检测色谱峰中各待测成分的归属；由相对校正因子、各待测成分色谱峰峰面积、参照物的浓度和参照物色谱峰的峰面积分别计算样品中叶黄素、玉米黄质、β-胡萝卜素和玉米黄质双棕榈酸酯的含量。
其中，待测成分含量Wx的计算公式为：
Figure BDA0002835170840000071
所述Wx为待测成分的含量，所述Cx为样品溶液中待测成分的浓度，所述V为样品溶液的体积，所述m为样品的称样量，所述Ax为各待测成分的色谱峰峰面积，所述Cs为参照物贮备液的浓度，所述fx/s是相对校正因子，所述As为样品溶液中参照物色谱峰的峰面积。
S6本法与外标法测定结果的相对偏差的计算
由本法通过相对校正因子计算出的各待测成分的含量与外标法测定的各待测成分的含量进行比较，计算本法与外标法测定结果的相对偏差，以确定本法结果的准确性。
其中，相对偏差(standardmethod difference)SMD的计算公式为：
Figure BDA0002835170840000072
所述SMD为相对偏差；所述W外标法为采用外标法测定的待测成分的含量，所述W本法为采用本法测定的待测成分的含量。一般认为SMD<5％时两者无显著性差异。
下面将结合具体实施例对本发明请求保护的技术方案作进一步的说明。
实施例1
本发明实施例公开了一种枸杞子药材中多种有效成分同时快速定性定量检测方法，具体包括如下步骤：
S1配制对照品溶液
分别取叶黄素、玉米黄质、β-胡萝卜素、β-阿林胡萝卜醛和玉米黄质双棕榈酸酯对照品，精密称定，加入甲醇，分别制成叶黄素对照品溶液、玉米黄质对照品溶液、β-胡萝卜素对照品溶液、β-阿林胡萝卜醛对照品溶液、玉米黄质双棕榈酸酯对照品溶液，即得到5种浓度均为1mg/mL的对照品溶液。
S2配制样品溶液
取枸杞子药材或含有枸杞子提取物中的至少一种为样品，精密称定0.01g样品后，向样品中加入10mL甲醇，超声提取30min，冷却后加甲醇补足减失的重量，滤过，向过滤后样品溶液中加入浓度为1mg/mL的β-阿林胡萝卜醛对照品溶液即得样品溶液；
S3液相色谱检测
将得到对照品溶液和样品溶液分别进行液相色谱检测，色谱条件为：填料为C30的色谱柱，色谱柱内径为4.6mm，且长度为250mm，填料粒径为5μm，洗脱条件为洗脱液A-洗脱液B，梯度洗脱：0～20min洗脱液A为70％～50％，洗脱液B为30％～50％；20～48min洗脱液A为50％，洗脱液B为50％；48～50min洗脱液A为50％～70％，洗脱液B为50％～30％；50～55min洗脱液A为70％，洗脱液B为30％；流速为1mL/min；进样量：20μl；柱温：20℃；检测波长450nm；所述洗脱液A为浓度为甲醇：乙腈：水(81:14:5)溶液，所述洗脱液B为二氯甲烷。各对照品溶液和样品溶液结果如附图1-7所示。
S4测定各对照品相对保留时间和相对校正因子
以参照物β-阿林胡萝卜醛色谱峰的保留时间为参照保留时间，根据相对保留时间R的计算公式为：
R＝Rx/Rs；
式中Rx和Rs分别为待测成分的保留时间和参照物的保留时间。
计算对照品色谱峰的保留时间与参照物β-阿林胡萝卜醛色谱峰的保留时间的比值，得到对照品的相对保留时间，从而确定样品溶液色谱峰中叶黄素、玉米黄质、β-胡萝卜素和玉米黄质双棕榈酸酯这4种待测成分的色谱峰的归属，进而得到待测成分的色谱峰的峰面积，其中各待测成分与玉米黄质参照峰的相对保留时间如下表1所示。
表1以β-阿林胡萝卜醛为参照物的各成分相对校保留时间(n＝6)
Figure BDA0002835170840000081
由上述表1所示，叶黄素色谱峰与β-阿林胡萝卜醛色谱峰保留时间的比值是0.62，玉米黄质色谱峰与β-阿林胡萝卜醛色谱峰保留时间的比值是0.69，β-胡萝卜素色谱峰与β-阿林胡萝卜醛色谱峰保留时间的比值是1.70，玉米黄质双棕榈酸酯色谱峰与β-阿林胡萝卜醛色谱峰保留时间的比值是4.67。在后续的枸杞子药材中以上4种成分含量测定时，根据色谱峰保留时间的比值，即可确定各色谱峰是何种成分。
以β-阿林胡萝卜醛为参照物，采用下式进行计算得其他4种待测成分与参照物的相对校正因子。
相对校正因子fx/s的计算公式是：
Figure BDA0002835170840000091
fx/s是各成分相对校正因子，fx是待测成分校正因子，fs是参照物校正因子，Cx为待测成分对照品溶液的浓度，Cs为参照物对照品溶液的浓度，As为参照物对照品溶液的色谱峰峰面积，Ax为待测成分对照品溶液的色谱峰峰面积。
最终计算得到的叶黄素、玉米黄质、β-胡萝卜素和玉米黄质双棕榈酸酯与β-阿林胡萝卜醛的相对校正因子如下表2所示。
表2以β-阿林胡萝卜醛为参照物的各成分相对校正因子(n＝6)
Figure BDA0002835170840000092
由上述表2中的结果可以得知，叶黄素的相对校正因子f叶黄素/β-阿林胡萝卜醛是40.35，玉米黄质的相对校正因子f玉米黄质/β-阿林胡萝卜醛是1.18，β-胡萝卜素的相对校正因子fβ-胡萝卜素/β-阿林胡萝卜醛是4.35，玉米黄质双棕榈酸酯的相对校正因子f玉米黄质双棕榈酸酯/β-阿林胡萝卜醛是2.60。
S5成分色谱峰的归属和含量的计算
由相对保留时间确定样品溶液检测色谱峰中各待测成分的归属；由相对校正因子、各待测成分色谱峰峰面积、参照物贮备液的浓度和参照物色谱峰的峰面积分别计算样品中叶黄素、玉米黄质、β-胡萝卜素和玉米黄质双棕榈酸酯的含量Wx；
其中采用的计算公式为：
Figure BDA0002835170840000101
Wx为待测成分的含量，Cx为样品溶液中待测成分的浓度V为样品溶液的体积，m为样品的称样量，Ax为各待测成分的色谱峰峰面积，Cs为参照物贮备液的浓度，fx/s是相对校正因子，As为样品溶液中参照物色谱峰的峰面积。
采用本发明实施例1所示方法对枸杞子药材中4种成分的含量如下表3所示。
表3外标法和本法同时测定枸杞中3种类胡萝卜素类成分含量
Figure BDA0002835170840000102
注：叶黄素在所收集到的枸杞子样品中均未测到；S1-10指不同批次枸杞子药材。
由上述表3的检测结果可知，用本方法测定各枸杞子药材中4种成分的含量与药物分析常用的外标法所得结果相比较结果接近，说明本方法所得结果可靠。
S6本法与外标法测定结果的相对偏差的计算
由本法通过相对校正因子计算出的各待测成分的含量与外标法测定的各待测成分的含量进行比较，计算本法与外标法测定结果的相对偏差(standard methoddifference)SMD，以确定本法结果的准确性。
其中采用的计算公式为：
Figure BDA0002835170840000111
所述SMD为相对偏差；所述W外标法为采用外标法测定的待测成分的含量，所述W本法为采用本法测定的待测成分的含量。
表4外标法和本法同时测定枸杞中3种类胡萝卜素类成分含量的相对偏差
Figure BDA0002835170840000112
由上述表4的检测结果可知，用本方法测定各枸杞子药材中3种成分的含量与药物分析常用的外标法所得结果相比较，相对偏差均小于3％，说明本法结果与外标法所测结果无显著差异，即本方法所得结果可靠。
本发明提供的枸杞子药材中4种类胡萝卜素类成分快速定性与定量检测方法，选用一种性质稳定且廉价易得，枸杞子药材本身不含的成分，β-阿林胡萝卜醛作为参照物，根据各成分的峰面积和浓度与参照物β-阿林胡萝卜醛的峰面积和浓度相比计算得到相对校正因子；相对校正因子一经建立，在后续的枸杞子药材中类萝卜素类成分的含量测定时，只需1种β-阿林胡萝卜醛对照品，即可同时测定叶黄素、玉米黄质、β-胡萝卜素和玉米黄质双棕榈酸酯等4种成分的含量，含量测定结果与药物分析常用的外标法无显著性差异。本法操作简单，成本较低，而且方法快速、准确。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (10)

1.一种枸杞子药材中多种有效成分同时快速定性与定量检测方法，其特征在于，以枸杞子药材中不存在的成分β-阿林胡萝卜醛1种对照品，采用液相色谱法可同时对枸杞子中叶黄素、玉米黄质、β-胡萝卜素、玉米黄质双棕榈酸酯4种有效成分进行定性和定量计算；其中，叶黄素与β-阿林胡萝卜醛的相对保留时间和相对校正因子分别为0.59-0.65，38.33-42.37；玉米黄质与β-阿林胡萝卜醛的相对保留时间和相对校正因子分别为0.66-0.72，1.12-1.24；β-胡萝卜素与β-阿林胡萝卜醛的相对保留时间和相对校正因子分别为1.62-1.79，4.13-4.57；玉米黄质双棕榈酸酯与β-阿林胡萝卜醛的相对保留时间和相对校正因子分别为4.44-4.90，2.47-2.73。
2.根据权利要求1所述的一种枸杞子药材中多种有效成分同时快速定性与定量检测方法，其特征在于，叶黄素与β-阿林胡萝卜醛的相对保留时间和相对校正因子分别为0.62，40.35；玉米黄质与β-阿林胡萝卜醛的相对保留时间和相对校正因子分别为0.69，1.18；β-胡萝卜素与β-阿林胡萝卜醛的相对保留时间和相对校正因子分别为1.70，4.35；玉米黄质双棕榈酸酯与β-阿林胡萝卜醛的相对保留时间和相对校正因子分别为4.67，2.60。
3.根据权利要求1或2所述的一种枸杞子药材中多种有效成分同时快速定性与定量检测方法，具体包括如下步骤：
S1配制对照品溶液
称取对照品，并分别向对照品中加入溶剂制成对照品溶液；其中，所述对照品至少为β-阿林胡萝卜醛、叶黄素、玉米黄质、β-胡萝卜素、玉米黄质双棕榈酸酯中的一种；
S2配制样品溶液
取待测样品加入适宜溶剂，同时加入β-阿林胡萝卜醛对照品溶液，制备得到样品溶液；
S3液相色谱检测
分别将对照品溶液和样品溶液进行液相色谱检测，并将β-阿林胡萝卜醛作为参照物，分别得到包括参照物对照品在内的各对照品的保留时间和峰面积，同时读取样品溶液检测结果中各待测成分色谱峰的保留时间和峰面积以及参照物色谱峰的保留时间和峰面积；
S4测定各对照品相对保留时间和相对校正因子
将β-阿林胡萝卜醛作为参照物，分别计算各对照品色谱峰保留时间与参照物色谱峰保留时间的比值得到对照品的相对保留时间，以及分别计算各对照品的浓度和峰面积比值得到各对照品的校正因子，再计算各对照品的校正因子与参照物的校正因子的比值得到各对照品的相对校正因子；
S5成分色谱峰的归属和含量的计算
由相对保留时间确定样品溶液检测色谱峰中各待测成分的归属；由相对校正因子、各待测成分色谱峰峰面积、参照物的浓度和参照物色谱峰的峰面积分别计算样品中叶黄素、玉米黄质、β-胡萝卜素和玉米黄质双棕榈酸酯的含量。
S6计算本法与外标法测定结果的相对偏差
由本法通过相对校正因子计算出的各待测成分的含量与外标法测定的各待测成分的含量进行比较，计算本法与外标法测定结果的相对偏差，以确定本法结果的准确性。
4.根据权利要求3所述的一种枸杞子药材中多种有效成分同时快速定性与定量检测方法，其特征在于，所述步骤S1和所述步骤S2中的溶剂相同，且所述溶剂至少为甲醇、乙醇、水中的一种。
5.根据权利要求3或4所述的一种枸杞子药材中多种有效成分同时快速定性与定量检测方法，其特征在于，所述步骤S1中，加入溶剂分别制成浓度约为0.1-1mg/mL的对照品溶液。
6.根据权利要求3或4所述的一种枸杞子药材中多种有效成分同时快速定性与定量检测方法，其特征在于，所述步骤S2具体为：取待测样品精密称量，加入10-50倍量的溶剂经过回流、超声或冷浸处理，过滤后得到样品溶液。
7.根据权利要求3所述的一种枸杞子药材中多种有效成分同时快速定性与定量检测方法，其特征在于，所述步骤S3中，液相色谱检测的色谱条件是：填料为C30的色谱柱，色谱柱内径为4.6mm，且长度为250mm，填料粒径为5μm，洗脱条件为洗脱液A-洗脱液B，梯度洗脱：0～20min洗脱液A为70％～50％，洗脱液B为30％～50％；20～48min洗脱液A为50％，洗脱液B为50％；48～50min洗脱液A为50％～70％，洗脱液B为50％～30％；50～55min洗脱液A为70％，洗脱液B为30％；流速为1mL/min；进样量：20μl；柱温：20℃；检测波长450nm；所述洗脱液A为浓度为甲醇：乙腈：水(81:14:5)溶液，所述洗脱液B为二氯甲烷。
8.根据权利要求3所述的一种枸杞子药材中多种有效成分同时快速定性与定量检测方法，其特征在于，所述步骤S4中，相对保留时间R的计算公式为：
R＝Rx/Rs；
所述Rx和Rs分别为待测成分的保留时间和参照物的保留时间；
以及，相对校正因子fx/s的计算公式为：
Figure FDA0002835170830000031
所述fx/s是各成分相对校正因子，所述fx是待测成分校正因子，所述fs是参照物校正因子，所述Cx为待测成分对照品溶液的浓度，所述Cs为参照物对照品溶液的浓度，所述As为参照物对照品溶液的色谱峰峰面积，所述Ax为待测成分对照品溶液的色谱峰峰面积。
9.根据权利要求3所述的一种枸杞子药材中多种有效成分同时快速定性与定量检测方法，其特征在于，所述步骤S5中，待测成分含量Wx的计算公式为：
Figure FDA0002835170830000032
所述Wx为待测成分的含量，所述Cx为样品溶液中待测成分的浓度，所述V为样品溶液的体积，所述m为样品的称样量，所述Ax为各待测成分的色谱峰峰面积，所述Cs为参照物贮备液的浓度，所述fx/s是相对校正因子，所述As为样品溶液中参照物色谱峰的峰面积。
10.根据权利要求3所述的一种枸杞子药材中多种有效成分同时快速定性与定量检测方法，其特征在于，所述步骤S6中，相对偏差SMD的计算公式为：
Figure FDA0002835170830000033
所述SMD为相对偏差；所述W外标法为采用外标法测定的待测成分的含量，所述W本法为采用本法测定的待测成分的含量；且当SMD<5％时，即可认为两者无显著性差异。
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