CN112461966A - 一种免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法 - Google Patents

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Abstract

本申请公开了一种免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法，包括如下步骤：称取预设重量的待检测样品置入离心管，加入内标物和有机溶剂后在第一预设条件下进行第一预设时长的静置提取，在静置提取后，在第一预设转速下进行第二预设时长的离心处理；从经过离心的离心管中提取第一预设体积的上层液，然后使上层液经过固相萃取化柱净化，收集第二预设体积的洗脱液；将收集的洗脱液置入水浴氮吹仪中吹干后，加入定容试剂定容为第三预设体积的待测液；将待测液进行涡旋混匀，然后通过滤膜，进行高效液相色谱‑串联四极杆质谱测定。本申请的有益之处在于：提供一种基于检测工艺改进和人工智能技术结合的免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法。

Description

一种免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法
技术领域
本申请涉及一种免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法，具体而言，涉及一种免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法。
背景技术
左旋咪唑(levamisole)为抗蠕虫药，最常用的兽药制剂形式为左旋咪唑盐酸盐。盐酸左旋咪唑主要用于治疗畜禽胃肠道线虫、肺线虫病和猪肾虫病，在畜牧业中广泛应用。不合理地使用左旋咪唑会造成动物产品中残留，残留的左旋咪唑对人体的主要潜在危害是致畸作用和致突，变作用。
通过预试验，筛查了多批免疫调节类儿童保健食品，显示可能存在左旋咪唑，长期服用左旋咪唑会出现急性中毒或其他不良反应。其检测对于严格控制儿童保健品产品质量，确保儿童保健品使用安全，对政府实施卫生监督和保障人民身体健康意义重大，但目前尚缺少检验方法对监督执法的支持。目前，监督工作迫切需要简便可靠的检测技术对相关违禁添加成分进行分析，以提高监督执法的力度，有力打击违法行为。
免疫调节类儿童保健食品中可能存在左旋咪唑，有2个主要来源：1是加工增强儿童免疫力类保健食品的原料带入。左旋咪唑是动物生产和兽医临床上常用的广谱、高效、低毒、安全的驱虫药和免疫增强剂，增强儿童免疫力类保健食品的原料很多都来源于动物器官或者乳制品，可能带进动物体内残留的左旋咪唑；2是无良商家非法添加。
区别试验需求，出于市场监管和卫生监督的需要进行大量的定性和定量检测，而现有检测技术在检测效率上存在瓶颈。
发明内容
为了解决现有技术的不足之处，本申请提供了一种免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法，包括如下步骤：称取预设重量的待检测样品置入离心管，加入内标物和有机溶剂后在第一预设条件下进行第一预设时长的静置提取，在静置提取后，在第一预设转速下进行第二预设时长的离心处理；从经过离心的离心管中提取第一预设体积的上层液，然后使上层液经过固相萃取化柱净化，收集第二预设体积的洗脱液；将收集的洗脱液置入水浴氮吹仪中吹干后，加入定容试剂定容为第三预设体积的待测液；将待测液进行涡旋混匀，然后通过滤膜，进行高效液相色谱-串联四极杆质谱测定。
进一步地，所述免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法还包括如下步骤：将所述高效液相色谱-串联四极杆质谱测定的质谱图以及各步骤中的实验参数输入至一个经过训练的卷积神经网络；其中，所述卷积神经网络的输出项为左旋咪唑的含量数据以及对应的置信度。
进一步地，所述免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法还包括如下步骤：根据所述高效液相色谱-串联四极杆质谱测定的质谱图计算左旋咪唑的含量，将计算出的含量和对应各步骤中的实验参数分别作为输出训练数据和输入训练数据对所述卷积神经网络进行训练。
进一步地，所述免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法还包括如下步骤：制备不同浓度的左旋咪唑的标准液；对所述标准液进行高效液相色谱-串联四极杆质谱测定，获得左旋咪唑的标准曲线图。
进一步地，所述免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法还包括如下步骤：将所述标准曲线图作为输入数据输入至所述卷积神经网络。
进一步地，输入所述卷积神经网络的输入项还包括：待检测疫调节类儿童保健食品的ID信息。
进一步地，输入所述卷积神经网络的输入项还包括：所述内标物的种类。
进一步地，输入所述卷积神经网络的输入项还包括：进行净化的参数。
进一步地，输入所述卷积神经网络的输入项还包括：所述有机溶剂的种类。
进一步地，输入所述卷积神经网络的输入项还包括：进行高效液相色谱-串联四极杆质谱测定的各项参数。
本申请的有益之处在于：提供一种基于检测工艺改进和人工智能技术结合的免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法。
附图说明
构成本申请的一部分的附图用来提供对本申请的进一步理解，使得本申请的其它特征、目的和优点变得更明显。本申请的示意性实施例附图及其说明用于解释本申请，并不构成对本申请的不当限定。在附图中：
图1是根据本申请一种实施例的免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法的步骤示意框图。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本申请方案，下面将结合本申请实施例中的附图，对本申请实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本申请一部分的实施例，而不是全部的实施例。基于本申请中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都应当属于本申请保护的范围。
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将参考附图并结合实施例来详细说明本申请。
参照图1所示，本申请的免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法包括如下步骤：
S1：称取预设重量的待检测样品置入离心管。
作为具体方案，可以对待测样品进行预处理，作为其中一个具体方案，将待测样品置入高速粉碎机中，进行高速粉碎从而使其均质化。
作为具体方案，取1克至1.5克待测样品置入25毫升至30毫升的离心管中。作为优选方案，将1 克待测样品置入30毫升的离心管中。
S2：加入内标物和有机溶剂后在第一预设条件下进行第一预设时长的静置提取。
S3：在静置提取后，在第一预设转速下进行第二预设时长的离心处理。从经过离心的离心管中提取第一预设体积的上层液，然后使上层液经过固相萃取化柱净化，收集第二预设体积的洗脱液。
作为具体方案，内标物可以选择多潘立酮或者盐酸苯海拉明等。有机溶剂可以选择乙腈或者甲酸或者它们的混合液。然后在40摄氏度和45摄氏度水浴条件下静置提取20分钟至25分钟。提取结束后，将离心管置入离心机，以5000转每分至5500转每分的转速离心10分钟至15分钟。作为优选方案，水浴温度为40摄氏度，静置提取的时间为20分钟，离心机的转速为5000转每分，离心时间为10分钟。
离心之后，提取离心管中的上层液5毫升，然后通过活化后的固相萃取柱进行净化，固相萃取柱采用超纯水或有机溶剂进行活化。然后收集净化后的洗脱液5毫升。
S4：将收集的洗脱液置入水浴氮吹仪中吹干后，加入定容试剂定容为第三预设体积的待测液。
具体而言，在60摄氏度的温度下，氮吹至干，然后在加入乙腈和甲酸混合溶液溶解定容1.5毫升。乙腈和甲酸混合溶液的质量百分比浓度为乙腈8％、甲酸为2％。
S5：将待测液进行涡旋混匀，然后通过滤膜，进行高效液相色谱-串联四极杆质谱测定。
将定容后的待测液进行涡旋混匀，通过孔径为0.2微米的滤膜后，进行高效液相色谱-串联四极杆质谱测定。
作为具体方案，可以采用美国Waters公司的BEH C18柱(也可以采用美国Acclaim的C18柱)；柱温：30摄氏度，样品温度25摄氏度；流速为0.5毫升每分钟；流动相为质量百分比为0.3％甲酸和乙腈，进样体积为1.5微升。进行线性梯度洗脱；洗脱程序为0至3分钟，70％A至100％A。
另外质谱参数选择为：
电喷雾电离负离子模式(ESI-)；毛细管电压：2500伏特，锥孔电压40伏特，射频透镜电压0.5 伏特；气流温度200摄氏度；气流流速：700升每小时；雾化气压力：40帕斯卡；鞘气温度：450摄氏度；鞘气流速：0.3升每秒；扫描模式：多反应监测(MRM)。
具体而言，所述免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法还包括如下步骤：将所述高效液相色谱-串联四极杆质谱测定的质谱图以及各步骤中的实验参数输入至一个经过训练的卷积神经网络；其中，所述卷积神经网络的输出项为左旋咪唑的含量数据以及对应的置信度。
作为具体方案，将检测数据和质谱图输入至卷积神经网络，卷积神经网络可以根据质谱图以及其他参数进行智能判断，从而获得左旋咪唑的含量数据以及对应的置信度，当置信度超过阈值时则可以认为含量数据是准确的，这样可以避免进行复杂运算获得含量数据。
并且该卷积神经网络可以判断出明显因为实验环节出现问题而得到质谱图的问题，提示用户从新进行检测。
具体而言，免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法还包括如下步骤：根据高效液相色谱- 串联四极杆质谱测定的质谱图计算左旋咪唑的含量，将计算出的含量和对应各步骤中的实验参数分别作为输出训练数据和输入训练数据对卷积神经网络进行训练。
为了训练卷积神经网络，可以将多个检测站的数据统一上传至服务器，然后卷积神经网络根据这些数据进行学习。
由于免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法存在很多可变的实验参数以及工艺，通过卷积神经网络的学习，可以整合和分析针对某一款保健品适合的检测方法和数据。
具体而言，免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法还包括如下步骤：制备不同浓度的左旋咪唑的标准液；对标准液进行高效液相色谱-串联四极杆质谱测定，获得左旋咪唑的标准曲线图。将标准曲线图作为输入数据输入至卷积神经网络。采用这样的方案，可以是卷积神经网络获取学习的标准。
具体而言，输入卷积神经网络的输入项还包括：待检测疫调节类儿童保健食品的ID信息。这样有助的大数据分析。对于同一产品的历史检测数据可以帮助判断现有检测的准确度。
具体而言，输入卷积神经网络的输入项还包括：内标物的种类、有机溶剂的种类以及进行净化的参数和进行高效液相色谱-串联四极杆质谱测定的各项参数。
通过这些参数的输入，卷积神经网络可以关联检测结果与参数工艺的影响，提高检测准确性和效率。
以上方案在设计一个便于进行免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的工艺的同时，采用卷积神经网络对质谱图进行学习分析，从而能够智能输出含量数据，并有助于提高含量数据的准确度。在实际应用中，多个步骤环节中仪器分别属于不同的厂家，并且可能不具备相同数据接口和数据协议将设置参数和结果自动的输入到人工神经网络的服务器或服务器下位机中，因此，在本申请的一般方案中，需要用户在自有的电脑设备上安装相应的软件，然后通过手动输入方式和上传图片方式进行数据输入，这样数据输入方式降低了工作效率，并且可能会出现输入错误的风险。
作为一种优选方案，为了解决人工神经网络数据输入的问题，可以设置一个图像采集装置，在进行每一步操作时，使该图像采集装置对仪器的铭牌进行图像采集，从而获取仪器的详细信息，然后在进行仪器参数设置时，对设置界面的图像进行采集，从而获取仪器的参数设置；而对于具体的配方配制和采用，也可以通过图像采集的方式进行采集。
作为进一步地优选方案，可以直接采用图像采集装置拍摄的方式，采集标准曲线图和质谱图，但是直接拍摄采集的图像，往往会受到采集视角以及光线的影响，在采集仪器铭牌或者参数时，由于文字采集相对要求较低，但是对于质谱图等图片而言，直接拍摄采集图像会影响定量分析的结果，为了解决这个问题，可以采用两种方案，一种是采用调整好后一个专用摄像头作为专门用于采集质谱图的设备，从而获得固定视角，并通过补光灯等补充光线。另一种是，在显示质谱图的屏幕附近设置标准对照物，图像采集装置采集质谱图后，根据标准对照物的尺寸和颜色进行比对，然后获得修正后的图像结果。
作为优选方案，对于质谱仪的图像，采用直接数据采集的方式传输给人工神经网络，具体而言，即采用计算机设备(包括台式电脑、笔记本、智能手机、平板电脑等)直接连接至质谱仪从而获得相应的质谱图像数据。而其他仪器的铭牌和参数图像则采用图像采集装置拍摄，比如带有摄像头的智能手机，为了便于实现操作同时进行图像采集，可以采用可穿戴设备，比如运动摄像头，作为一种改进方案，可以采用带有摄像头的眼镜装置实现图像采集功能，该眼镜装置在操作者进行操作时采集视频图像并把视频图像上传至服务器，由本申请的人工神经网络进行分析，将其中关于铭牌以及参数设置的图像筛选出来进行分析。
作为进一步的优选方案，该眼镜装置还设有扬声器和麦克风以及无线通讯模块，用户可以按照语音提示进行操作，并通过对话方式进行数据的录入，并且同步语音记录视频记录的时间轴降低人工神经网络对视频分析难度。
以上所述仅为本申请的优选实施例而已，并不用于限制本申请，对于本领域的技术人员来说，本申请可以有各种更改和变化。凡在本申请的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本申请的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法，其特征在于：
所述免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法包括如下步骤：
称取预设重量的待检测样品置入离心管，加入内标物和有机溶剂后在第一预设条件下进行第一预设时长的静置提取，在静置提取后，在第一预设转速下进行第二预设时长的离心处理；
从经过离心的离心管中提取第一预设体积的上层液，然后使上层液经过固相萃取化柱净化，收集第二预设体积的洗脱液；
将收集的洗脱液置入水浴氮吹仪中吹干后，加入定容试剂定容为第三预设体积的待测液；
将待测液进行涡旋混匀，然后通过滤膜，进行高效液相色谱-串联四极杆质谱测定。
2.根据权利要求1所述的免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法，其特征在于：
所述免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法还包括如下步骤：
将所述高效液相色谱-串联四极杆质谱测定的质谱图以及各步骤中的实验参数输入至一个经过训练的卷积神经网络；
其中，所述卷积神经网络的输出项为左旋咪唑的含量数据以及对应的置信度。
3.根据权利要求2所述的免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法，其特征在于：
所述免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法还包括如下步骤：
根据所述高效液相色谱-串联四极杆质谱测定的质谱图计算左旋咪唑的含量，将计算出的含量和对应各步骤中的实验参数分别作为输出训练数据和输入训练数据对所述卷积神经网络进行训练。
4.根据权利要求3所述的免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法，其特征在于：
所述免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法还包括如下步骤：
制备不同浓度的左旋咪唑的标准液；
对所述标准液进行高效液相色谱-串联四极杆质谱测定，获得左旋咪唑的标准曲线图。
5.根据权利要求4所述的免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法，其特征在于：
所述免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法还包括如下步骤：
将所述标准曲线图作为输入数据输入至所述卷积神经网络。
6.根据权利要求5所述的免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法，其特征在于：
输入所述卷积神经网络的输入项还包括：待检测疫调节类儿童保健食品的ID信息。
7.根据权利要求6所述的免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法，其特征在于：
输入所述卷积神经网络的输入项还包括：所述内标物的种类。
8.根据权利要求7所述的免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法，其特征在于：
输入所述卷积神经网络的输入项还包括：所述有机溶剂的种类。
9.根据权利要求8所述的免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法，其特征在于：
输入所述卷积神经网络的输入项还包括：进行净化的参数。
10.根据权利要求9所述的免疫调节类儿童保健食品中左旋咪唑的检测方法，其特征在于：
输入所述卷积神经网络的输入项还包括：进行高效液相色谱-串联四极杆质谱测定的各项参数。
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