CN112458147A - 谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品及制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品，包括以下组分的冻干品：磷酸盐缓冲液50～200份，谷氨酸钠5～10份，黄原胶1～3份，牛血清10～70份，谷胱甘肽转移酶0.1～0.5份，海藻糖10～20份，防腐剂1～2份。质控品为冻干品，能大大提升质控品在使用前的稳定性，易于保存。本发明还公开了上述质控品的制备方法，包括以下步骤：取所述谷胱甘肽转移酶，加入磷酸盐缓冲液，得稀释液；向所述稀释液中加入谷氨酸钠，保温搅拌，将所得混合溶液等分为第一混合液和第二混合液；向所述第一混合液中加入牛血清和海藻糖，得第一冻干液；向所述第二混合液中加入牛血清、黄原胶和海藻糖，得第二冻干液；将所述第一冻干液和所述第二冻干液混合，冷冻干燥，得质控品。

Description

谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品及制备方法
技术领域
本发明涉及生化检测技术领域，特别是涉及一种谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品及制备方法。
背景技术
血液中含有谷胱甘肽转移酶(GST)，需通过谷胱甘肽转移酶测定试剂来测定其含量。
在生产谷胱甘肽转移酶测定试剂的过程中，需采用质控品对样品进行校准，利用质控品能生成校准系统，然后再采用质控品检测校准系统是否合格，因此质控品要求具有较高的精度和稳定性。目前，质控品多与校准品为相同组分，组分为液态的谷胱甘肽转移酶、缓冲液和稳定剂。
目前市场上未有标准化的谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品。
发明内容
本发明的一个目的在于提出一种稳定易保存的谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品。
一种谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品，包括以下组分的冻干品：
磷酸盐缓冲液50～200份；
谷氨酸钠5～10份；
黄原胶1～3份；
牛血清10～70份；
谷胱甘肽转移酶0.1～0.5份；
海藻糖10～20份；
防腐剂1～2份。
本发明的有益效果是：质控品为冻干品，能大大提升质控品在使用前的稳定性，易于保存；磷酸盐缓冲液能便于质控品的制备成型，防腐剂延长质控品的质量，海藻糖能防止谷胱甘肽转移酶在制备过程中失活，谷氨酸钠和黄原胶能保持质控品的整体活性。
另外，根据本发明提供的谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品，还可以具有如下附加的技术特征：
进一步地，所述磷酸盐缓冲液包括磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾和磷酸二氢钾质的组合物，pH为6.8～7.8。
进一步地，所述防腐剂包括叠氮盐和生物防腐剂，其中叠氮盐类防腐剂主要为NaN3，生物防腐剂主要为Proclin300。
本发明的另一个目的在于提出一种上述谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品的制备方法，包括以下步骤：
(1)取所述谷胱甘肽转移酶，加入磷酸盐缓冲液稀释，得稀释液；
(2)向所述稀释液中加入谷氨酸钠，保温搅拌，将所得混合溶液等分为第一混合液和第二混合液；
(3)向所述第一混合液中加入牛血清和海藻糖，混合均匀，低温静置1小时，得第一冻干液；
(4)向所述第二混合液中加入牛血清、黄原胶和海藻糖，混合均匀，保温静置1小时，得第二冻干液；
(5)将所述第一冻干液和所述第二冻干液混合，得冻干材料，对所述冻干材料执行冷冻干燥，得所述谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品。
进一步地，所述磷酸缓冲液的浓度为50～200mmol/L，所述谷氨酸钠的浓度为5～10mmol/L，所述黄原胶的浓度为10～30mmol/L，所述牛血清的浓度为10～70％。
进一步地，所述稀释液中谷胱甘肽转移酶的浓度为10～100U/L。
进一步地，所述向所述稀释液中加入谷氨酸钠，保温搅拌的步骤中，所述保温搅拌为保持溶液为25～37℃，恒温搅拌30分钟。
进一步地，所述低温静置的温度为2～8℃，所述保温静置的温度为25～37℃。
进一步地，所述冷冻干燥步骤包括：
预冷冻，将所述冻干材料置于-30℃～-70℃的环境下保持12～24小时；
真空冷冻干燥，将经所述预冷冻后的所述冻干材料置于-20℃～-60℃的负压环境下保持24～48小时。
进一步地，所述真空冷冻干燥的步骤为：
将所述冻干材料置于大气压为5Pa的环境中，环境温度为-40～-60℃，保持24～36小时；
将所述冻干材料置于大气压为15Pa的环境中，环境温度为-20～-30℃，保持8～12小时。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
具体实施方式
为使本发明的目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容更加透彻全面。
实施例1
一种谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品，包括以下组分的冻干品：磷酸盐缓冲液50份，谷氨酸钠5份，黄原胶1份，牛血清10份，谷胱甘肽转移酶0.1份，海藻糖10份，防腐剂1份。
本发明的优势在于，磷酸盐缓冲液能便于质控品的制备成型，防腐剂延长质控品的质量，海藻糖能防止谷胱甘肽转移酶在制备过程中失活，谷氨酸钠和黄原胶能保持质控品的整体活性。
具体的，所述磷酸盐缓冲液包括磷酸氢二钠和磷酸二氢钾的两种组合，pH为6.8。
具体的，所述的防腐剂主要为NaN3。
上述谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品的制备方法，包括以下步骤：
(1)取所述谷胱甘肽转移酶，加入磷酸盐缓冲液稀释，得稀释液；
(2)向所述稀释液中加入谷氨酸钠，保持溶液为25℃，恒温搅拌30分钟，将所得混合溶液等分为第一混合液和第二混合液；
(3)向所述第一混合液中加入牛血清和海藻糖，混合均匀，在4℃环境下静置1小时，得第一冻干液；
(4)向所述第二混合液中加入牛血清、黄原胶和海藻糖，混合均匀，在25℃环境下静置1小时，得第二冻干液；
(5)将所述第一冻干液和所述第二冻干液混合，得冻干材料，对所述冻干材料执行冷冻干燥，得所述谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品。
需要说明的是，将混合溶液分成两组分别进行处理，再混合进行冷冻干燥，能进一步提升质控品的稳定性。
具体的，所述磷酸缓冲液的浓度为50mmol/L，所述谷氨酸钠的浓度为5mmol/L，所述黄原胶的浓度为10mmol/L，所述牛血清的浓度为10％，所述稀释液中谷胱甘肽转移酶的浓度为5U/L、30U/L和60U/L。
另外，所述冷冻干燥步骤包括：
i.预冷冻，将所述冻干材料置于-30℃℃的环境下保持12小时；
ii.真空冷冻干燥，将所述冻干材料置于大气压为5Pa的环境中，环境温度为-40℃，保持24小时,再将所述冻干材料置于大气压为15Pa的环境中，环境温度为-20℃，保持8小时。
取所得质控品，分为低值组、中值组和高值组加水复溶，其初始GST浓度分别为5U/L、30U/L和60U/L，连续检测7天GST浓度，计算其变异系数CV。
实施例2
一种谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品，包括以下组分的冻干品：磷酸盐缓冲液200份，谷氨酸钠10份，黄原胶3份，牛血清70份，谷胱甘肽转移酶0.5份，海藻糖20份，防腐剂2份。
具体的，所述磷酸盐缓冲液包括磷酸氢二钠和磷酸二氢钾的两种组合，pH为7.8。
具体的，所述的防腐剂主要为NaN3。
上述谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品的制备方法，包括以下步骤：
(1)取所述谷胱甘肽转移酶，加入磷酸盐缓冲液稀释，得稀释液；
(2)向所述稀释液中加入谷氨酸钠，保持溶液为37℃，恒温搅拌30分钟，将所得混合溶液等分为第一混合液和第二混合液；
(3)向所述第一混合液中加入牛血清和海藻糖，混合均匀，在4℃环境下静置1小时，得第一冻干液；
(4)向所述第二混合液中加入牛血清、黄原胶和海藻糖，混合均匀，在37℃环境下静置1小时，得第二冻干液；
(5)将所述第一冻干液和所述第二冻干液混合，得冻干材料，对所述冻干材料执行冷冻干燥，得所述谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品。
具体的，所述磷酸缓冲液的浓度为200mmol/L，所述谷氨酸钠的浓度为10mmol/L，所述黄原胶的浓度为30mmol/L，所述牛血清的浓度为70％，所述稀释液中谷胱甘肽转移酶的浓度为5U/L、30U/L和60U/L。
另外，所述冷冻干燥步骤包括：
i.预冷冻，将所述冻干材料置于-70℃的环境下保持24小时；
ii.真空冷冻干燥，将所述冻干材料置于大气压为5Pa的环境中，环境温度为-60℃，保持36小时，再将所述冻干材料置于大气压为15Pa的环境中，环境温度为-30℃，保持12小时。
取所得质控品，分为低值组、中值组和高值组加水复溶，其初始GST浓度分别为5U/L、30U/L和60U/L，连续检测7天GST浓度，计算其变异系数CV。
实施例3
一种谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品，包括以下组分的冻干品：磷酸盐缓冲液100份，谷氨酸钠8份，黄原胶2份，牛血清50份，谷胱甘肽转移酶0.3份，海藻糖15份，防腐剂1份。
具体的，所述磷酸盐缓冲液包括磷酸氢二钾和磷酸二氢钠的两种组合，pH为7.2。
上述谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品的制备方法，包括以下步骤：
(1)取所述谷胱甘肽转移酶，加入磷酸盐缓冲液稀释，得稀释液；
(2)向所述稀释液中加入谷氨酸钠，保持溶液为30℃，恒温搅拌30分钟，将所得混合溶液等分为第一混合液和第二混合液；
(3)向所述第一混合液中加入牛血清和海藻糖，混合均匀，在4℃环境下静置1小时，得第一冻干液；
(4)向所述第二混合液中加入牛血清、黄原胶和海藻糖，混合均匀，在30℃环境下静置1小时，得第二冻干液；
(5)将所述第一冻干液和所述第二冻干液混合，得冻干材料，对所述冻干材料执行冷冻干燥，得所述谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品。
具体的，所述磷酸缓冲液的浓度为100mmol/L，所述谷氨酸钠的浓度为8mmol/L，所述黄原胶的浓度为20mmol/L，所述牛血清的浓度为60％，所述稀释液中谷胱甘肽转移酶的浓度为5U/L、30U/L和60U/L。
另外，所述冷冻干燥步骤包括：
预冷冻，将所述冻干材料置于-60℃的环境下保持21小时；
真空冷冻干燥，将所述冻干材料置于大气压为5Pa的环境中，环境温度为-60℃，保持28小时，再将所述冻干材料置于大气压为15Pa的环境中，环境温度为-25℃，保持8小时。
取所得质控品，分为低值组、中值组和高值组加水复溶，其初始GST浓度分别为5U/L、30U/L和60U/L，连续检测7天GST浓度，计算其变异系数CV。
对照例1
本对照例与实施例3基本一致，不同之处在于：
所述质控品未采用冷冻干燥，所述质控品为液态。
对照例2
本对照例与实施例3基本一致，不同之处在于：
本对照例组分不包括牛血清和黄原胶。
对照例3
本对照例与实施例3基本一致，不同之处在于：
本对照例组分不包括谷氨酸钠和海藻糖。
对照例4
对照例与实施例3基本一致，不同之处在于：
步骤(2)中未将混合溶液分组，保持混合溶液温度为30℃直接加入牛血清、黄原胶和海藻糖。
取上述对照例所得质控品，分为低值组、中值组和高值组加水复溶，其初始GST浓度分别为5U/L、30U/L和60U/L，连续检测7天GST浓度，计算其变异系数CV，结果见表1。
表1
分组 低值组CV(％) 中值组CV(％) 高值组CV(％)
实施例1 8.3 6.5 5.3
实施例2 7.5 6.1 5.7
实施例3 6.9 7.2 6.5
对照例1 20.2 18.7 16.2
对照例2 10.5 12.3 9.8
对照例3 13.4 11.5 10.8
对照例4 11.3 10.5 8.5
由于对质控品的精度要求较高，因此，针对质控品需对不同GST浓度的进行测定，当所测得结果均满足要求时，才证明该谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品为合格产品。本发明分别采用低值组、中组组和高值组进行检测，并以7天内GST浓度变化的变异系数作为参考，评价质控品的稳定性。CV值越小说明质控品越稳定，越易于保存，当低值数值偏差三组均满足CV<10％时，判断其为合格产品。
从表1可以看出，实施例1～3较对照例1～4均达到了更好的效果，即实施例的CV值普遍低于对照例的，说明本发明的技术方案能达到更优的效果；
其中，对照例1的CV值明显高于实施例1～3和其余对照例，说明液体质控品开封后会快速变质，不利于检测；
对照例2和对照例3虽然效果较对照例1好，但其CV值均大于10％，仍为不合格产品，说明谷牛血清、黄原胶、谷氨酸钠和海藻糖能促进质控品的质量稳定；
对照例4高值组能达到CV<10％，而低值组和中值组的CV值还是大于10％，仍不能作为合格产品，说明将混合溶液分组和分别真空冷冻干燥均会对质控品的稳定性产生一定程度的促进作用。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品，其特征在于，包括以下组分的冻干品：
磷酸盐缓冲液50～200份；
谷氨酸钠5～10份；
黄原胶1～3份；
牛血清10～70份；
谷胱甘肽转移酶0.1～0.5份；
海藻糖10～20份；
防腐剂1～2份。
2.根据权利要求1所述的谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液包括磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、磷酸氢二钾和磷酸二氢钾的组合物，所述磷酸盐缓冲液的pH为6.8～7.8。
3.根据权利要求1所述的谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品，其特征在于，所述防腐剂包括叠氮盐和生物防腐剂，其中，所述叠氮盐的主要组分为NaN3，所述生物防腐剂的主要组分为Proclin300。
4.权利要求1～3任意一项所述的谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
取所述谷胱甘肽转移酶，加入磷酸盐缓冲液稀释，得稀释液；
向所述稀释液中加入谷氨酸钠，保温搅拌，将所得混合溶液等分为第一混合液和第二混合液；
向所述第一混合液中加入牛血清和海藻糖，混合均匀，低温静置1小时，得第一冻干液；
向所述第二混合液中加入牛血清、黄原胶和海藻糖，混合均匀，保温静置1小时，得第二冻干液；
将所述第一冻干液和所述第二冻干液混合，得冻干材料，对所述冻干材料执行冷冻干燥，得谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品。
5.根据权利要求4所述的谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品的制备方法，其特征在于，所述磷酸缓冲液的浓度为50～200mmol/L，所述谷氨酸钠的浓度为5～10mol/L，所述黄原胶的浓度为10～30mmol/L，所述牛血清的浓度为10～70％。
6.根据权利要求4所述的谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品的制备方法，其特征在于，所述稀释液中谷胱甘肽转移酶的浓度为10～100U/L。
7.根据权利要求4所述的谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品的制备方法，其特征在于，向所述稀释液中加入谷氨酸钠，保温搅拌的步骤中，所述保温搅拌为保持溶液为25～37℃，恒温搅拌30分钟。
8.根据权利要求4所述的谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品的制备方法，其特征在于，所述低温静置的温度为2～8℃，所述保温静置的温度为25～37℃。
9.根据权利要求4所述的谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品的制备方法，其特征在于，所述冷冻干燥步骤包括：
预冷冻，将所述冻干材料置于-30℃～-70℃的环境下保持12～24小时；
真空冷冻干燥，将经所述预冷冻后的冻干材料置于-20℃～-60℃的负压环境下保持24～48小时。
10.根据权利要求9所述的谷胱甘肽转移酶测定试剂质控品的制备方法，其特征在于，所述真空冷冻干燥的步骤为：
将所述冻干材料置于大气压为5Pa的环境中，环境温度为-40～-60℃，保持24～36小时；
将所述冻干材料置于大气压为15Pa的环境中，环境温度为-20～-30℃，保持8～12小时。
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