CN110747252A - 谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品及制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品，包括以下组分的冻干品：磷酸盐缓冲液50～80份，草酸钾2～5份，牛血清5～10份，纯品谷胱甘肽还原酶0.1～0.5份，蔗糖2～5份，防腐剂1～2份。磷酸盐缓冲液能便于校准品的制备成型，防腐剂配合草酸钾、牛血清能延长校准品的质量，蔗糖能防止纯品谷胱甘肽还原酶在制备过程中失活。本发明还公开了一种谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品的制备方法，包括以下步骤：取纯品谷胱甘肽还原酶，加入所述磷酸盐缓冲液稀释，得稀释液；向稀释液中加入草酸钾溶液和所述牛血清，保温；加入蔗糖溶液，混合均匀，静置，得冻干材料；将冻干材料进行预冷冻，得初始冻干品；将初始冻干品进行真空冷冻干燥，得谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品。

Description

谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品及制备方法
技术领域
本发明涉及生化检测技术领域，特别是涉及一种谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品及制备方法。
背景技术
血液中含有谷胱甘肽还原酶(GR)，需通过谷胱甘肽还原酶测定试剂来测定其含量。
在生产谷胱甘肽还原酶测定试剂的过程中，需采用校准品对其进行校准，校准品的值在一个校准函数中用于独立变量的参考物质，应具有定值和已知的测量不确定度，其目的应是校准某一测量系统，从而建立该系统测量结果的计量学溯源性。目前，校准品多采用液态的纯品谷胱甘肽还原酶、缓冲液和稳定剂，利用校准品作为标准谷胱甘肽还原酶来检测谷胱甘肽还原酶测定试剂是否合格，并标定谷胱甘肽还原酶测定试剂的计算公式。
现有的谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品由于其为液态，产品开封后难以保存，若未使用完则需丢弃，造成资源浪费。
发明内容
本发明的一个目的在于提出一种开封后保存时间长的谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品。
一种谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品，包括以下组分的冻干品：
磷酸盐缓冲液50～80份，
草酸钾2～5份，
牛血清5～10份，
纯品谷胱甘肽还原酶0.1～0.5份，
蔗糖2～5份，
防腐剂1～2份。
本发明的有益效果是：磷酸盐缓冲液能便于校准品的制备成型，防腐剂配合草酸钾、牛血清能延长校准品的质量，蔗糖能防止纯品谷胱甘肽还原酶在制备过程中失活。
另外，根据本发明提供的谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品，还可以具有如下附加的技术特征：
进一步地，所述磷酸盐缓冲液包括磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，质量比为 2:3～6。
进一步地，所述防腐剂包括叠氮钠和谷氨酸钠，质量比为3:1～2。
本发明的另一个目的在于提出一种上述谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品的制备方法，包括以下步骤：
取所述纯品谷胱甘肽还原酶，加入所述磷酸盐缓冲液稀释，得稀释液；
向所述稀释液中加入草酸钾溶液和所述牛血清，保温2小时；
加入蔗糖溶液，混合均匀，静置，得冻干材料；
将所述冻干材料进行预冷冻，得初始冻干品；
将所述初始冻干品进行真空冷冻干燥，得所述谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品。
进一步地，所述磷酸缓冲液的浓度为50～400mmol/L，所述草酸钾溶液的浓度为100～200mmol/L，所述牛血清的浓度为30～95％。
进一步地，所述稀释液中谷胱甘肽还原酶的浓度为10～100U/L。
进一步地，所述向所述稀释液中加入草酸钾溶液，保温12小时的步骤中，所述保温的温度为15～25℃。
进一步地，所述加入蔗糖溶液，混合均匀，静置的步骤中，所述静置的步骤为：
置于2～8℃环境下24小时。
进一步地，所述将所述冻干材料进行预冷冻，得初始冻干品的步骤中，所述预冷冻的步骤为：
将所述冻干材料置于-30～-40℃的冷冻环境下保持4～8小时；
对所述冷冻环境逐渐降温，降温幅度为2～3℃/s，直至所述冷冻环境的温度为-60～-70℃，保持10～15小时。
进一步地，所述将所述初始冻干品进行真空冷冻干燥的步骤包括：
将所述初始冻干品置于大气压为5Pa的环境中，环境温度为-40～-60℃，保持24～36小时；
将所述初始冻干品置于大气压为15Pa的环境中，环境温度为-20～-30℃，保持8～12小时。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
具体实施方式
为使本发明的目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。实施例中给出了本发明的若干实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容更加透彻全面。
实施例1
一种谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品，包括以下组分的冻干品：
磷酸盐缓冲液50份，
草酸钾2份，
牛血清5份，
纯品谷胱甘肽还原酶0.1份，
蔗糖2份，
防腐剂1.5份。
具体的，所述磷酸盐缓冲液包括磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，质量比为2:3，所述防腐剂包括叠氮钠和谷氨酸钠，质量比为3:1。
本发明的优势在于，磷酸盐缓冲液能便于校准品的制备成型，防腐剂配合草酸钾、牛血清能延长校准品的质量，蔗糖能防止纯品谷胱甘肽还原酶在制备过程中失活。
另外，上述谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品的制备方法，包括以下步骤：
(1)取所述纯品谷胱甘肽还原酶，加入所述磷酸盐缓冲液稀释，得稀释液，所述稀释液中谷胱甘肽还原酶的浓度为80U/L；
(2)向所述稀释液中加入草酸钾溶液和所述牛血清，保温2小时，所述保温的温度为15℃；
(3)加入蔗糖溶液，混合均匀，置于2℃环境下24小时，得冻干材料；
(4)将所述冻干材料进行预冷冻，得初始冻干品；
(5)将所述初始冻干品进行真空冷冻干燥，得所述谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品。
具体的，所述磷酸缓冲液的浓度为50mmol/L，所述草酸钾溶液的浓度为 100mmol/L，所述牛血清的浓度为30％。
另外，步骤(4)中的预冷冻的步骤为：
i.将所述冻干材料置于-30℃的冷冻环境下保持4小时；
ii.对所述冷冻环境逐渐降温，降温幅度为2℃/s，直至所述冷冻环境的温度为-60℃，保持10小时。
更进一步地，步骤(5)中进行真空冷冻干燥的步骤包括：
i.将所述初始冻干品置于大气压为5Pa的环境中，环境温度为-40℃，保持 24小时；
ii.将所述初始冻干品置于大气压为15Pa的环境中，环境温度为-20℃，保持8小时。
在本实施例中，真空冷冻干燥采用FD-10型号的冷冻干燥机。
谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品的使用方法为用水复溶后使用，复溶后为淡黄色澄清液体，无沉淀和悬浮物。
实施例2
一种谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品，包括以下组分的冻干品：
磷酸盐缓冲液80份，
草酸钾5份，
牛血清10份，
纯品谷胱甘肽还原酶0.5份，
蔗糖5份，
防腐剂1.5份。
具体的，所述磷酸盐缓冲液包括磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，质量比为2:3，所述防腐剂包括叠氮钠和谷氨酸钠，质量比为3:1。
另外，上述谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品的制备方法，包括以下步骤：
(1)取所述纯品谷胱甘肽还原酶，加入所述磷酸盐缓冲液稀释，得稀释液，所述稀释液中谷胱甘肽还原酶的浓度为80U/L；
(2)向所述稀释液中加入草酸钾溶液和所述牛血清，保温2小时，所述保温的温度为25℃；
(3)加入蔗糖溶液，混合均匀，置于8℃环境下24小时，得冻干材料；
(4)将所述冻干材料进行预冷冻，得初始冻干品；
(5)将所述初始冻干品进行真空冷冻干燥，得所述谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品。
具体的，所述磷酸缓冲液的浓度为400mmol/L，所述草酸钾溶液的浓度为200mmol/L，所述牛血清的浓度为95％。
另外，步骤(4)中的预冷冻的步骤为：
i.将所述冻干材料置于-40℃的冷冻环境下保持4小时；
ii.对所述冷冻环境逐渐降温，降温幅度为2℃/s，直至所述冷冻环境的温度为-70℃，保持10小时。
更进一步地，步骤(5)中进行真空冷冻干燥的步骤包括：
i.将所述初始冻干品置于大气压为5Pa的环境中，环境温度为-60℃，保持 36小时；
ii.将所述初始冻干品置于大气压为15Pa的环境中，环境温度为-30℃，保持12小时。
实施例3
一种谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品，包括以下组分的冻干品：
磷酸盐缓冲液70份，
草酸钾2份，
牛血清8份，
纯品谷胱甘肽还原酶0.2份，
蔗糖5份，
防腐剂1.5份。
具体的，所述磷酸盐缓冲液包括磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，质量比为2:4，所述防腐剂包括叠氮钠和谷氨酸钠，质量比为3:1.3。
另外，上述谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品的制备方法，包括以下步骤：
(1)取所述纯品谷胱甘肽还原酶，加入所述磷酸盐缓冲液稀释，得稀释液，所述稀释液中谷胱甘肽还原酶的浓度为80U/L；
(2)向所述稀释液中加入草酸钾溶液和所述牛血清，保温2小时，所述保温的温度为15℃；
(3)加入蔗糖溶液，混合均匀，置于5℃环境下24小时，得冻干材料；
(4)将所述冻干材料进行预冷冻，得初始冻干品；
(5)将所述初始冻干品进行真空冷冻干燥，得所述谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品。
具体的，所述磷酸缓冲液的浓度为380mmol/L，所述草酸钾溶液的浓度为120mmol/L，所述牛血清的浓度为45％。
另外，步骤(4)中的预冷冻的步骤为：
i.将所述冻干材料置于-35℃的冷冻环境下保持4小时；
ii.对所述冷冻环境逐渐降温，降温幅度为2.8℃/s，直至所述冷冻环境的温度为-70℃，保持15小时。
更进一步地，步骤(5)中进行真空冷冻干燥的步骤包括：
i.将所述初始冻干品置于大气压为5Pa的环境中，环境温度为-40℃，保持 30小时；
ii.将所述初始冻干品置于大气压为15Pa的环境中，环境温度为-25℃，保持8小时。
对照例1
本对照例与实施例3基本一致，不同之处在于：
所述谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品为液态，制备方法为将原料直接混合。
对照例2
本对照例与实施例3基本一致，不同之处在于：
所述谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品包括以下组分：
磷酸盐缓冲液70份，
牛血清8份，
纯品谷胱甘肽还原酶0.2份，
蔗糖5份，
防腐剂1.5份。
对照例3
本对照例与实施例3基本一致，不同之处在于：
所述谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品的制备方法中，未采用预冷冻步骤。
对照例4
本对照例与实施例3基本一致，不同之处在于：
所述谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品的制备方法中，步骤(4)中的预冷冻的步骤为将所述冻干材料置于-50℃的冷冻环境下保持19小时。
对照例5
本对照例与实施例3基本一致，不同之处在于：
所述谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品的制备方法中，步骤(5)中进行真空冷冻干燥的步骤为将所述初始冻干品置于大气压为5Pa的环境中，环境温度为 -40℃，保持38小时。
取上述实施例和对照例所得的谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品，开封，每天各取3g分成三组检测其GR活性，取平均值，连续检测7天，对冻干品按要求量加1ml去离子水复溶，结果见表1。活性值浮动越小，证明产品越稳定。
请参阅表1，对比实施例1、实施例2和实施例3，可以看出，实施例2和实施例3所得结果均浮动较小，分级计算其变异系数CV为0.39％、0.51％和0.55％，在实际生产中，当CV<3％时即判断该产品为合格产品。
表1
Figure RE-GDA0002300739400000081
从对照例1可以看出，当谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品为液态时，其稳定性较差，CV高达13.02％，即不易保存；
从对照例2可以看出，草酸钾对谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品的稳定性具有一定程度的促进作用；
从对照例3可以看出，由于未采用预冷冻步骤，所得产品的稳定性会有较大程度地变差，变异系数从0.55％变化至了8.09％；
对比实施例3、对照例4和对照例5，可以看出，对预冷冻和真空冷冻的步骤采用分段冷冻能一定程度地提升产品的稳定性，其中对预冷冻采用分段冷冻产生的促进作用略大，而真空冷冻即使不采用分段冷冻，也能获得符合要求的产品，即CV<3％。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

Claims (10)

1.一种谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品，其特征在于，包括以下组分的冻干品：
磷酸盐缓冲液50～80份，
草酸钾2～5份，
牛血清5～10份，
纯品谷胱甘肽还原酶0.1～0.5份，
蔗糖2～5份，
防腐剂1～2份。
2.根据权利要求1所述的谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品，其特征在于，所述磷酸盐缓冲液包括磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，质量比为2:3～6。
3.根据权利要求1所述的谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品，其特征在于，所述防腐剂包括叠氮钠和谷氨酸钠，质量比为3:1～2。
4.根据权利要求1～3任意一项所述的谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
取所述纯品谷胱甘肽还原酶，加入磷酸盐缓冲液稀释，得稀释液；
向所述稀释液中加入草酸钾溶液和所述牛血清，保温2小时；
加入蔗糖溶液，混合均匀，静置，得冻干材料；
将所述冻干材料进行预冷冻，得初始冻干品；
将所述初始冻干品进行真空冷冻干燥，得所述谷胱甘肽还原酶测定试剂校准品。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述磷酸缓冲液的浓度为50～400mmol/L，所述草酸钾溶液的浓度为100～200mmol/L，所述牛血清的浓度为30～95％。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述稀释液中谷胱甘肽还原酶的浓度为10～100U/L。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述向所述稀释液中加入草酸钾溶液，保温12小时的步骤中，所述保温的温度为15～25℃。
8.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述加入蔗糖溶液，混合均匀，静置的步骤中，所述静置的步骤为：
置于2～8℃环境下24小时。
9.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述将所述冻干材料进行预冷冻，得初始冻干品的步骤中，所述预冷冻的步骤为：
将所述冻干材料置于-30～-40℃的冷冻环境下保持4～8小时；
对所述冷冻环境逐渐降温，降温幅度为2～3℃/s，直至所述冷冻环境的温度为-60～-70℃，保持10～15小时。
10.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述将所述初始冻干品进行真空冷冻干燥的步骤包括：
将所述初始冻干品置于大气压为5Pa的环境中，环境温度为-40～-60℃，保持24～36小时；
将所述初始冻干品置于大气压为15Pa的环境中，环境温度为-20～-30℃，保持8～12小时。
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