CN112458008A - 一株生防枯草芽孢杆菌zhx-1及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物技术领域，涉及菌株及其应用领域，具体涉及一株生防枯草芽孢杆菌ZHX‑1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15608。本发明所提供的枯草芽孢杆菌ZHX‑1对花生病原菌有明显的抑制作用，可以作为潜力生防菌株应用于花生病害防治，提高花生对冠腐病、白绢病、网斑病菌、轮斑病菌的抗性，同时能够显著促进花生的生长和产量；经试验验证，菌株ZHX‑1还能够抑制花生黄曲霉菌及其毒素含量。采用本发明菌株ZHX‑1的应用方法属于生物防治的范畴，安全、快速、有效，有利于花生的绿色健康生产，为花生病害的综合防治提供技术支撑。

Description

一株生防枯草芽孢杆菌ZHX-1及其应用

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其涉及菌株及其应用领域，具体涉及一种对多种植物病原菌具有广谱抗性的枯草芽孢杆菌的分离鉴定及其在促进花生生长和防治花生致病真菌上的应用。

背景技术

花生在全球100多个国家都有种植，播种面积达2600万公顷，全球约90％的花生产量来源于中国、印度、尼日利亚三大花生生产国。花生在我国属于重要的经济作物和油料作物，在农业生产和社会生产中占据重要的地位，但是花生病害的逐年加重成为我国花生进一步发展的主要障碍。近年来随着花生种植产业结构的调整和耕作制度的改变，花生病害的发生逐年增加，严重影响花生的产量和品质，特别是近年来发生严重的花生冠腐病和白绢病，在我国多数花生产区均有发生。近十年来，由于耕作制度改变、高产新品种大面积推广和气候条件的改变，花生病害逐年加重，已成为制约花生产量和质量的重要因素。

目前对花生病害的防治主要依赖化学防治，然而由于化学防治用药量大，容易导致病原菌产生抗药性，还会造成相当一部分花生及其产品农药残留严重超标，因此迫切的需要一种安全、无公害、高效的生物防治方法。随着可持续农业的实施和环境保护意识的加强，采用环境友好型、对农用化学药品依赖性较低的可持续农业正在得到全世界的认可，生物防治这种替代技术的出现，能够避免对人类和有益的土壤微生物造成化学危害。在可用于生物防治的菌株中，目前已获得的拮抗菌株以细菌居多，包括假单胞菌、放线菌和芽孢杆菌等细菌，其中，芽孢杆菌栖息在不同环境中，可以产生一系列具有不同结构的拮抗物质，主要通过抑制植物病原菌的生长、诱导植物的系统抗性，以及与植物病原菌竞争生态位来施展生物防治的功能。

发明内容

为了解决现有技术中存在的化学农药在防治花生病害方面的种种弊端，本发明提出了一种生防枯草芽孢杆菌ZHX-1及其应用，在花生上应用枯草芽孢杆菌，借助生防菌株，促进花生的生长，提高花生对冠腐病和白绢病等花生病原菌的抗性，抑制花生黄曲霉菌及其毒素含量。该方法属于生物防治的范畴，安全、快速、有效，有利于花生的绿色健康生产，为花生病害的综合防治提供技术支撑。

本发明的技术方案是：

一株生防枯草芽孢杆菌ZHX-1，所述菌株ZHX-1保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15608。

进一步的，所述菌株ZHX-1的16S rDNA序列如SEQ ID NO：1所示。

所述的生防枯草芽孢杆菌ZHX-1在防治花生冠腐病菌、花生网斑病菌、花生轮斑病菌和花生白绢病菌上的应用。进一步的，所述应用形式为菌株ZHX-1的菌悬液、无菌发酵液、挥发性气体以及有菌发酵液中的任一种。

所述的生防枯草芽孢杆菌ZHX-1促进花生生长的应用。

所述的生防枯草芽孢杆菌ZHX-1抑制花生黄曲霉菌及其毒素含量的应用。进一步的，所述应用形式为菌株ZHX-1的菌悬液、无菌发酵液、挥发性气体中的任一种。

生物材料样品保藏信息：

菌株ZHX-1为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)，保藏地址：中国，北京朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期：2018年04月12日，保藏编号CGMCC No.15608。

本发明的有益效果：

本发明所提供的枯草芽孢杆菌ZHX-1对花生病原菌有明显的抑制作用，可以作为潜力生防菌株应用于花生病害防治，提高花生对冠腐病、白绢病、网斑病菌、轮斑病菌的抗性，同时能够显著促进花生的生长和产量；经试验验证，菌株ZHX-1还能够抑制花生黄曲霉菌及其毒素含量。采用本发明菌株ZHX-1的应用方法属于生物防治的范畴，安全、快速、有效，有利于花生的绿色健康生产，为花生病害的综合防治提供技术支撑。

附图说明

图1为菌株ZHX-1在LB培养基上的菌落形态图；

图2为菌株ZHX-1基于16S rDNA构建的系统发育树；

图3为菌株ZHX-1菌悬液对靶标病原菌的拮抗作用；

图4为菌株ZHX-1发酵液对4种病原菌抑菌能力的测定；

图5为菌株ZHX-1挥发性气体对4种病原菌抑菌能力的测定；

图6为菌株ZHX-1有菌发酵液对花生生长的影响；

图7为菌株ZHX-1有菌发酵液对花生冠腐病的防治效果；

图8为菌株ZHX-1有菌发酵液对花生白绢病的防治效果；

图9为菌株ZHX-1有菌发酵液对花生网斑病的防治效果；

图10为菌株ZHX-1对花生黄曲霉菌生长的影响；

图11为菌株ZHX-1悬浮液对花生黄曲霉毒素含量的影响。

具体实施方式

下面将结合具体实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动的前提下，所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明进行详细说明。

若未特别指明，本发明实施例中所用的实验材料、试剂和仪器等均可市售获得，若未具体指明，实施例中所用的技术手段均为本领域技术人员所熟知的常规手段。

实施例1

枯草芽孢杆菌ZHX-1的分离鉴定

1、菌株ZHX-1的筛选分离：

所用样品为取自花生连作田的病、健株根际周围距离地表6cm深处的土壤，4℃保存。

(1)称取上述土壤样品10g加到90mL无菌水中，28℃，140rpm振荡15min，静置5min，取上清液，采用10倍系列稀释法，依次稀释到10^-2、10^-3、10^-4和10^-5，每个浓度吸取100μL分别涂于LB固体培养基上，每个浓度重复3次，28℃暗培养。

(2)待培养基上出现细菌菌落时，喷施花生冠腐病菌(Aspergillus niger)孢子悬浮液；培养2d后，选取周围出现明显抑菌圈的菌落，用移菌环挑取单菌落，在LA固体培养基上进行纯化培养。

(3)最终挑选得到一株抑菌圈超过2cm的菌株，菌体呈米白色，菌落粗糙，不透明，命名为ZHX-1。

(4)菌株ZHX-1单菌落用LB液体培养基摇菌后，加入甘油，于-80℃保存。

2、菌株ZHX-1的生理生化特性：

菌株ZHX-1的菌体呈米白色，菌落粗糙，不透明，如图1所示；菌株ZHX-1的革兰氏染色、厌氧、硫化氢、明胶液化等13项主要生理生化特征的试验结果如表1所示。

表1菌株ZHX-1的主要生理生化特征

注：“+”阳性；“－”阴性。

3、枯草芽孢杆菌ZHX-1的菌种鉴定：

(1)根据提取细菌基因组的试剂盒“TRANSGEN

Bacteria Genomic DNAKit”提取ZHX-1的基因组DNA。

(2)利用16S rDNA通用引物27F(5’AGAGTTTGATCMTGGCTCAG 3’)(SEQ ID NO：2)和1492R(5’GGYTACCTTGTTACGACTT 3’)(SEQ ID NO：3)对菌株ZHX-1的基因组进行PCR扩增，PCR产物送生工生物(上海)有限公司测序。16S rDNA序列全长为1383bp，序列如SEQ ID NO：1所示。

(3)所获得的序列提交到GenBank数据库进行BLAST分析比对，并用MEGA6.06软件构建系统发育树，见图2。结果表明菌株ZHX-1与枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis(AJ276351)的相似性达到97％。结合菌株ZHX-1的生理生化特征、系统发育树分析，说明菌株ZHX-1为枯草芽孢杆菌。

实施例2

1、菌株ZHX-1菌悬液对4种花生病原菌菌丝生长的抑制作用

(1)花生冠腐病菌：用牙签挑取菌株ZHX-1的单菌落放入盛有20mL LB培养基的三角瓶中，28℃振荡培养14h，制备浓度为OD₄₂₀＝0.3的菌悬液。吸取10μL菌悬液，接种于直径为9cm的PDA固体培养基中央，待菌液充分吸收后，28℃恒温培养24h。向PDA培养基中均匀喷施OD₄₂₀＝0.3的花生冠腐病菌的孢子悬浮液，以不喷孢子悬浮液作为对照。25℃恒温培养，8d左右，对抑菌圈大小进行统计、拍照(见图3A、B)。图3中，A为花生冠腐病菌的对照组，B为菌株ZHX-1对花生冠腐病菌的对峙效果；结果发现菌株ZHX-1对花生冠腐病菌有显著的拮抗活性，抑菌圈大小为22.17±0.09mm。

(2)花生白绢病和花生网斑病菌：制备菌株ZHX-1浓度为OD₄₂₀＝0.3的菌悬液，备用。在平板中央接入直径为5mm的病原菌的菌饼，菌饼两侧约22mm处各接种10μL菌株ZHX-1的菌悬液，以不接种菌悬液作为对照。25℃恒温黑暗培养，5d左右，对抑菌情况进行统计，并计算抑菌率(％)＝(对照菌落增长直径-处理菌落增长直径)/对照菌落增长直径×100。见图3，图中C为花生网斑病菌的对照组，D为菌株ZHX-1对花生网斑病菌的对峙效果；E为花生白绢病菌的对照组，F为菌株ZHX-1对花生白绢病菌的对峙效果；结果发现菌株ZHX-1对花生白绢病菌和花生网斑病菌具有显著的抑菌效果，菌丝生长抑制率分别为63.87％和63.73％。

(3)花生轮斑病菌：制备菌株ZHX-1浓度为OD₄₂₀＝0.3的菌悬液，同时准备花生轮斑病菌浓度为OD₄₂₀＝0.3的孢子悬浮液，备用。吸取10μL孢子悬浮液，接种于直径为9cm的PDA固体培养基中央，距离平板中心两侧约22mm处各接种10μL菌株ZHX-1的菌悬液，以不接种菌悬液作为对照。25℃恒温黑暗培养，4d左右，对抑菌情况进行统计，并计算抑菌率(％)＝(对照菌落直径-处理菌落直径)/对照菌落直径×100。如图3所示，图中G为花生轮斑病菌的对照组，H为菌株ZHX-1对花生轮斑病菌的对峙效果；结果发现菌株ZHX-1对花生轮斑病菌具有显著的抑菌效果，菌丝生长抑制率为61.08％。

2、菌株ZHX-1无菌发酵液对4种花生病原菌菌丝生长的抑制作用

用牙签挑取菌株ZHX-1的单菌落放入盛有100mL LB培养基的三角瓶中，28℃振荡培养36h，高速离心后收集上清液，用0.22um滤膜过滤得到无菌发酵液。将无菌发酵液以1:10的比例与加热冷却至约50℃的PDA培养基混合倒平板，在平板中央接入直径为5mm病原菌的菌饼(花生白绢病菌和花生网斑病菌)，或10μL孢子悬浮液(花生冠腐病菌或花生轮斑病菌，OD₄₂₀＝0.3)，以添加等量LB培养基的平板作为对照，每个处理设6个重复，25℃培养，分别于3d、5d、5d、7d后对花生冠腐病菌、花生白绢病菌、花生网斑病菌、花生轮斑病菌菌落直径进行测量。

结果发现，同相应对照相比，菌株ZHX-1的无菌发酵液极显著的降低了花生冠腐病菌、花生白绢病菌、花生网斑病菌、花生轮斑病菌菌丝的生长(见图4)，菌丝生长抑制率分别为14.58％、61.28％、25.60％和31.46％。图4中，A表示菌株ZHX-1发酵液对花生冠腐病菌的抑菌能力，B表示对花生白绢病菌的抑制，C表示对花生网斑病菌的抑制，D表示对花生轮斑病菌的抑制；**表示在p<0.01水平下，差异极显著。

3、菌株ZHX-1挥发性气体对4种花生病原菌菌丝生长的抑制作用

用牙签挑取菌株ZHX-1的单菌落放入盛有20mL LB培养基的三角瓶中，28℃振荡培养14h，制备浓度为OD₄₂₀＝0.3的菌悬液。于二分格培养皿的一侧倒入LB培养基，另一侧倒入等体积的PDA培养基。LB培养基一侧均匀涂布50ul菌悬液，PDA培养基侧中间位置接种直径为5mm的菌饼(花生白绢病菌或花生网斑病菌)或10μL孢子悬浮液(花生冠腐病菌或花生轮斑病菌，OD₄₂₀＝0.3)，涂布50ul无菌水作为对照组，每个处理设6个重复，分别于2d、3d、3d、5d后对花生冠腐病菌、花生白绢病菌、花生网斑病菌、花生轮斑病菌菌落直径进行测量。

结果发现，如图5所示，菌株ZHX-1的挥发性气体极显著的降低了花生冠腐病菌、花生白绢病菌、花生网斑病菌、花生轮斑病菌菌丝的生长，菌丝生长抑制率分别为12.30％、30.15％、11.04％和12.11％。图5中，A为菌株ZHX-1挥发性气体对花生冠腐病菌的抑菌能力，B为对花生白绢病菌的抑制，C为对花生网斑病菌的抑制，D为对花生轮斑病菌的抑制；**表示在p<0.01水平下，差异极显著。

实施例3

菌株ZHX-1有菌发酵液对花生生长的影响

花生品种花育917种子用菌株ZHX-1的有菌发酵液浸泡4h后，单粒播种于320mL的一次性塑料杯中，同时接种2mL发酵液。以浸泡LB培养基，接种等量LB培养基为对照。对照和处理各10盆，重复3次，30d后处理花生，称量植株总鲜重，烘干后称量植株总干重。统计发现，同对照相比，菌株ZHX-1的有菌发酵液能够极显著增加花育917植株的鲜重和干重，比对照分别增加26.69％和21.01％(见图6，注：**表示在p<0.01水平下，差异极显著)。

实施例4

1、菌株ZHX-1有菌发酵液防治花生冠腐病盆栽试验

花生品种花育917种子用菌株ZHX-1的菌液(OD₄₂₀＝0.3)浸泡4h后，单粒播种于320mL的一次性塑料杯中，同时接种2mL发酵液。以浸泡LB培养基，接种等量LB培养基作空白对照，以50％多菌灵800倍水液作处理对照。同时于PDA平板上培养花生冠腐病菌，6d后，用灭菌水制备花生冠腐病菌的孢子悬浮液，取5mL加入150mL的PDB中，25℃振荡培养24h，用于接种花生。每株花生接种花生冠腐病菌孢子悬浮液2mL，以接种等量PDB作为对照。对照和处理各30盆，重复3次，30d后统计各组死亡率，计算防治效果。防治效果(％)＝(对照组死亡率-处理组死亡率)/对照组死亡率×100％。统计发现，同对照相比，多菌灵和菌株ZHX-1对花生冠腐病的防效各为67.24％、79.31％，菌株ZHX-1处理的花生的死亡率最低，防效最好(见图7，注：图中不同大写字母表示在p<0.01水平下，差异极显著；不同小写字母表示在p<0.05水平下，差异显著)。

2、菌株ZHX-1有菌发酵液防治花生白绢病盆栽试验

花生品种花育917种子用菌株ZHX-1的菌液(OD₄₂₀＝0.3)浸泡4h后，单粒播种于320mL的一次性塑料杯中，同时接种2mL发酵液。以浸泡LB培养基，接种等量LB培养基作空白对照，以50％多菌灵800倍水液作处理对照。7d后，每株花生于花生茎基部接种2粒带菌燕麦粒。对照和处理各30盆，重复3次，30d后统计各组死亡率，计算防治效果。防治效果(％)＝(对照组死亡率-处理组死亡率)/对照组死亡率×100％。统计发现，同对照相比，多菌灵和菌株ZHX-1对花生白绢病的防效各为66.06％、81.25％，菌株ZHX-1处理的花生的死亡率最低，防效最好(见图8，注：不同大写字母表示在p<0.01水平下，差异极显著；不同小写字母表示在p<0.05水平下，差异显著)。

3、菌株ZHX-1有菌发酵液防治花生网斑病试验

花生品种花育917培养一个月后，取30片花生复叶，每片复叶放到铺有两层滤纸片的培养皿中，皿中加水保湿，每片复叶用菌株ZHX-1的菌液均匀喷洒，48h后喷洒花生网斑病菌的孢子悬浮液，以喷水作为对照。对照和处理重复3次，10d后调查发病情况，计算防治效果。采用6级分级标准调查病情指数：0级，免疫，不发病；1级，高抗，植株仅有零星病斑，病斑数在两三个以下，病斑面积占叶面积的5％以下；2级，抗病，病害发生较轻，病斑数约在十个以下，病斑较小，病斑仅在中下部叶片扩展，病斑面积占叶片面积的6％～15％；3级，中感，病害症状典型，病斑均匀分布至全叶，病斑较小，不相连，呈微状分布，病斑面积占叶片面积的16％～30％；4级，感病，病害症状典型，病斑较大，部分病斑连成片，叶片表面有明显褪绿症状，病斑面积占叶片面积的3l％～60％；5级，高感，病斑几乎布满整个叶片，大部分病斑相连成片，病斑面积占叶片面积60％以上。防治效果(％)＝(对照组病情指数-处理组病情指数)/对照组病情指数×100％。统计发现，同对照相比，菌株ZHX-1对花生网斑病的防效为80.09％(见图9，注：**表示在p<0.01水平下，差异极显著)。

实施例5

菌株ZHX-1对花生黄曲霉菌及其毒素含量的影响

1、菌株ZHX-1对花生黄曲霉菌生长的影响：

菌株ZHX-1对花生黄曲霉菌参照花生冠腐病菌的方法，开展菌株ZHX-1的菌悬液、无菌发酵液和挥发性气体对花生黄曲霉菌生长的影响，结果发现菌悬液的抑菌圈直径为1.38±0.12cm，无菌发酵液和挥发性气体的菌丝生长抑制率分别为3.34％、1.29％，其中挥发性气体使黄曲霉菌颜色变淡(见图10，图中A、C、E为对照组，B、D、F分别为菌株ZHX-1的菌悬液、无菌发酵液和挥发性气体对花生黄曲霉菌生长的影响)。

2、菌株ZHX-1对花生黄曲霉毒素含量的影响：

(1)将大米用灭菌水浸泡18h后，沥水，称取20g分装到灭菌的锥形瓶中，再向锥形瓶中加入6mL的灭菌水，高温灭菌(121℃，15min)。待灭菌后的大米冷却到室温，处理一：将1mL黄曲霉菌孢子悬浮液加50μLZHX-1菌悬液接种到灭菌的大米上；处理二：将1mL黄曲霉菌孢子悬浮液加10μL ZHX-1菌悬液接种到灭菌的大米上；阴性对照组大米不加菌悬液，用灭菌水代替孢子悬浮液；阳性对照组大米仅添加孢子悬浮液。25℃黑暗培养7d后，将样品冷冻干燥，用粉碎机粉碎后过20目筛，用黄曲霉毒素总量ELISA试剂盒(北京华安麦科生物有限公司)检测样品中黄曲霉毒素含量。

(2)将花生品种中花6号种子用粉碎机粉碎后，称取20g分装到灭菌的锥形瓶中，再往锥形瓶中加入6mL的灭菌水，高温灭菌(121℃，15min)。待灭菌后的花生碎冷却到室温，处理一：将1mL黄曲霉菌孢子悬浮液加50μL ZHX-1菌悬液接种到灭菌的花生碎上；处理二：将1mL黄曲霉菌孢子悬浮液加10μL ZHX-1菌悬液接种到灭菌的花生碎上；阴性对照组花生碎不加菌悬液，用灭菌水代替孢子悬浮液；阳性对照组花生碎仅添加孢子悬浮液。25℃黑暗培养7d后，将样品冷冻干燥，过20目筛，用黄曲霉毒素总量ELISA试剂盒(北京华安麦科生物有限公司)检测样品中黄曲霉毒素含量。

(3)用酶标仪(iMark^TM，BIO-RAD，USA)测量波长450nm参考波长630nm双波长测定微孔板每孔的OD值。用RidasoftWin.NET软件分析数据，根据标准品曲线计算每个样品中黄曲霉毒素的浓度。样品中黄曲霉毒素含量增加量＝样品中黄曲霉毒素含量–阴性对照组黄曲霉毒素含量，黄曲霉毒素降解率(％)＝(阳性对照组黄曲霉毒素增加量-处理组黄曲霉毒素增加量)/阳性对照组黄曲霉毒素增加量×100。

结果发现，10μL和50μL ZHX-1菌悬液对大米中黄曲霉毒素降解率分别为42.93％和93.18％，而对花生中黄曲霉毒素降解率分别为33.94％和77.96，可见ZHX-1菌悬液能够极显著的降低黄曲霉毒素含量，同时菌体多的比菌体少的效果更好(见图11，注：图中不同大写字母表示在p<0.01水平下，差异极显著)。

上述说明仅为本发明的优选实施例，并非是对本发明的限制，凡在本发明的内容范围内所做出的任何修改、等同替换、改型等，均应包含在本发明的专利保护范围之内。

序列表

<110> 山东省花生研究所

<120> 一株生防枯草芽孢杆菌ZHX-1及其应用

<141> 2020-11-17

<160> 3

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 1383

<212> DNA

<213> 枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)

<400> 1

gggagcttgc tccctgatgt tagcggcgga cgggtgagta acacgtgggt aacctgcctg 60

taagactggg ataactccgg gaaaccgggg ctaataccgg atggttgttt gaaccgcatg 120

gttcaaacat aaaaggtggc ttcggctacc acttacagat ggacccgcgg cgcattagct 180

agttggtgag gtaacggctc accaaggcaa cgatgcgtag ccgacctgag agggtgatcg 240

gccacactgg gactgagaca cggcccagac tcctacggga ggcagcagta gggaatcttc 300

cgcaatggac gaaagtctga cggagcaacg ccgcgtgagt gatgaaggtt ttcggatcgt 360

aaagctctgt tgttagggaa gaacaagtac cgttcgaata gggcggtacc ttgacggtac 420

ctaaccagaa agccacggct aactacgtgc cagcagccgc ggtaatacgt aggtggcaag 480

cgttgtccgg aattattggg cgtaaagggc tcgcaggcgg tttcttaagt ctgatgtgaa 540

agcccccggc tcaaccgggg agggtcattg aaactgggga acttgagtgc agaagaggag 600

agtggaattc cacgtgtagc ggtgaaatgc gtagagatgt ggaggaacac cagtggcgaa 660

ggcgactctc tggtctgtaa ctgacgctga ggagcgaaag cgtggggagc gaacaggatt 720

agataccctg gtagtccacg ccgtaaacga tgagtgctaa gtgttagggg gtttccgccc 780

cttagtgctg cagctaacgc attaagcact ccgcctgggg agtacggtcg caagactgaa 840

actcaaagga attgacgggg gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgaagca 900

acgcgaagaa ccttaccagg tcttgacatc ctctgacaat cctagagata ggacgtcccc 960

ttcgggggca gagtgacagg tggtgcatgg ttgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg 1020

gttaagtccc gcaacgagcg caacccttga tcttagttgc cagcattcag ttgggcactc 1080

taaggtgact gccggtgaca aaccggagga aggtggggat gacgtcaaat catcatgccc 1140

cttatgacct gggctacaca cgtgctacaa tggacagaac aaagggcagc gaaaccgcga 1200

ggttaagcca atcccacaaa tctgttctca gttcggatcg cagtctgcaa ctcgactgcg 1260

tgaagctgga atcgctagta atcgcggatc agcatgccgc ggtgaatacg ttcccgggcc 1320

ttgtacacac cgcccgtcac accacgagag tttgtaacac ccgaagtcgg tgaggtaacc 1380

ttt 1383

<210> 2

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

agagtttgat cmtggctcag 20

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

ggytaccttg ttacgactt 19

Claims (7)

1.一株生防枯草芽孢杆菌ZHX-1，其特征在于，所述菌株ZHX-1保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.15608。

2.根据权利要求1所述的生防枯草芽孢杆菌ZHX-1，其特征在于，所述菌株ZHX-1的16SrDNA序列如SEQ ID NO：1所示。

3.权利要求1或2所述的生防枯草芽孢杆菌ZHX-1在防治花生冠腐病菌、花生网斑病菌、花生轮斑病菌和花生白绢病菌上的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述应用形式为菌株ZHX-1的菌悬液、无菌发酵液、挥发性气体以及有菌发酵液中的任一种。

5.权利要求1或2所述的生防枯草芽孢杆菌ZHX-1促进花生生长的应用。

6.权利要求1或2所述的生防枯草芽孢杆菌ZHX-1抑制花生黄曲霉菌及其毒素含量的应用。

7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述应用形式为菌株ZHX-1的菌悬液、无菌发酵液、挥发性气体中的任一种。

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