CN112457357B - 一种葵花盘中异槲皮苷的提取方法、异槲皮苷在制备黄嘌呤氧化酶抑制剂中的应用 - Google Patents

一种葵花盘中异槲皮苷的提取方法、异槲皮苷在制备黄嘌呤氧化酶抑制剂中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112457357B
CN112457357B CN202011543850.8A CN202011543850A CN112457357B CN 112457357 B CN112457357 B CN 112457357B CN 202011543850 A CN202011543850 A CN 202011543850A CN 112457357 B CN112457357 B CN 112457357B
Authority
CN
China
Prior art keywords
isoquercitrin
extract
ethanol
ethyl acetate
extraction
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN202011543850.8A
Other languages
English (en)
Other versions
CN112457357A (zh
Inventor
高波
乔子安
韩璐
韩葳葳
李婉南
刘新胜
闫敏
刘长旻
周智琪
张雅鑫
葛振龙
康明
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jilin Special Medical Food Biotechnology Co ltd
Jilin University
Original Assignee
Jilin Special Medical Food Biotechnology Co ltd
Jilin University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jilin Special Medical Food Biotechnology Co ltd, Jilin University filed Critical Jilin Special Medical Food Biotechnology Co ltd
Priority to CN202011543850.8A priority Critical patent/CN112457357B/zh
Publication of CN112457357A publication Critical patent/CN112457357A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN112457357B publication Critical patent/CN112457357B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
    • C07H1/06—Separation; Purification
    • C07H1/08—Separation; Purification from natural products
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/06—Antigout agents, e.g. antihyperuricemic or uricosuric agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H17/00—Compounds containing heterocyclic radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
    • C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
    • C07H17/06—Benzopyran radicals
    • C07H17/065—Benzo[b]pyrans
    • C07H17/07—Benzo[b]pyran-4-ones

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

本发明提供了一种葵花盘中异槲皮苷提取方法、异槲皮苷作为黄嘌呤氧化酶抑制剂的应用。本发明先使用乙醇对葵花盘粉碎物进行乙醇提取，能够将葵花盘中的总黄酮类化合物提取出来；之后使用石油醚、乙酸乙酯对乙醇提取物分级萃取1～3次，利用相似相容的原理，使总黄酮类化合物中的异槲皮苷溶于乙酸乙酯中，其余成分大多分布于其他萃取剂中；最后对乙酸乙酯层提取物进行聚酰胺柱层析，使用体积浓度为30％的乙醇溶液作为洗脱液，能够最大程度对异槲皮苷进行分离，经去除溶剂后得到异槲皮苷提取物。本发明提供了异槲皮苷作为黄嘌呤氧化酶抑制剂的应用。本发明首次验证了异槲皮苷对黄嘌呤氧化酶具有很好的抑制作用。

Description

一种葵花盘中异槲皮苷的提取方法、异槲皮苷在制备黄嘌呤 氧化酶抑制剂中的应用
技术领域
本发明涉及药物提纯技术领域，特别涉及一种葵花盘中异槲皮苷提取方法、异槲皮苷在制备黄嘌呤氧化酶抑制剂中的应用。
背景技术
向日葵是全球商业化种植的菊科的一个物种，是油类生产中应用最广泛的作物之一，葵花籽油在世界上排名第四，仅次于棕榈油、大豆和菜籽油。在每年的收获季节，很多人会在脱掉葵花籽后将葵花盘丢弃，却忽略了葵花盘的药用价值。
黄酮类化合物(flavonoids)是植物中普遍存在的低分子量次级代谢产物。黄酮类化合物是一类存在于自然界的、具有2-苯基色原酮结构的化合物，目前泛指三碳连接两个带有酚羟基苯环的一系列化合物。黄酮类化合物具有多样性代谢功能，包括生长和发育的调节，平衡植物对生物和非生物的抗逆性等。
异槲皮苷又名罗布麻甲素、槲皮素3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，是黄酮类化合物中的一种。异槲皮苷是罗布麻、新疆圆柏等植物中的有效成分，最近几年又在金银花、金花葵花(CN110590882A)被陆续发现。异槲皮苷具有抗炎、抗氧化、抗病毒、抗肿瘤、抗动脉粥样硬化、降血压、降血糖等多种生物学活性，现代药理学已成为近年来天然活性成分的研究热点之一。但是未见有关向日葵花盘中含有异槲皮苷成分的报道。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种葵花盘中异槲皮苷提取方法及异槲皮苷作为黄嘌呤氧化酶抑制剂的应用。本发明方法能够将异槲皮苷从葵花盘中提取出来。
为了实现上述发明的目的，本发明提供以下技术方案：
本发明提供了一种葵花盘中异槲皮苷的提取方法，包括以下步骤：
(1)将葵花盘粉碎物与乙醇混合，进行乙醇提取，得到乙醇提取物；
(2)对所述乙醇提取物进行分级萃取，所述分级萃取使用的萃取剂依次为石油醚、乙酸乙酯，每种萃取剂的萃取次数独立为1～3次；
合并乙酸乙酯萃取液，对乙酸乙酯萃取液进行浓缩和干燥，得到乙酸乙酯层提取物；
(3)对所述乙酸乙酯层提取物进行柱层析，所述柱层析的固定相为聚酰胺，流动相为体积浓度为20～50％的乙醇溶液，收集柱层析洗脱液；
(4)去除所述柱层析洗脱液的溶剂，得到异槲皮苷提取物。
优选的，所述葵花盘粉碎物的粒径为10～20目；
所述步骤(1)中乙醇的体积浓度为50～60％；所述葵花盘粉碎物的质量与乙醇的体积比为1g：20～30mL。
优选的，所述步骤(1)中乙醇提取的温度为60～70℃，时间为2～3h。
优选的，所述步骤(2)中乙醇提取物与石油醚、乙酸乙酯的体积比均为1:2～3，分级萃取时石油醚、乙酸乙酯的萃取时间独立为15～30min。
优选的，所述步骤(2)中浓缩的方式为减压浓缩，所述减压浓缩的压力为0.06～0.09MPa，温度为50～70℃；所述干燥的温度为50～70℃。
优选的，所述步骤(3)中柱层析的洗脱体积为2～3柱体积，洗脱速率为0.5～1.5mL/min。
本发明提供了异槲皮苷或上述提取方法得到的异槲皮苷提取物在制备黄嘌呤氧化酶抑制剂中的应用。
本发明提供了异槲皮苷或上述提取方法得到的异槲皮苷提取物在制备抗高尿酸血症药物或抗痛风药物中的应用。
本发明提供了一种异槲皮苷药物，包括活性成分和药学上可接受的载体，所述活性成分为异槲皮苷或上述提取方法得到的异槲皮苷提取物。
优选的，所述载体为乳糖、淀粉、聚维酮K30、羧甲基淀粉钠、硬脂酸、硬脂酸镁和二氧化硅中的一种或几种。
本发明提供了一种葵花盘中异槲皮苷的提取方法，本发明先使用乙醇对葵花盘粉末进行乙醇提取，能够将葵花盘中的总黄酮类化合物提取出来；之后使用石油醚、乙酸乙酯对乙醇提取物萃取1～3次，利用相似相容的原理，使总黄酮类化合物中的异槲皮苷溶于乙酸乙酯中，其余成分大多分布于其他萃取剂中；最后对乙酸乙酯层提取物进行聚酰胺柱层析，使用体积浓度为30％的乙醇溶液作为洗脱液，能够最大程度对异槲皮苷进行分离，经去除溶剂后得到异槲皮苷提取物。本发明以葵花盘为原料，成本低廉，为葵花盘的资源化利用扩展了途径。同时，本发明提供的提取方法操作简单，能够有效地将异槲皮苷从葵花盘中提取出来。实施例结果表明，本发明所得提取物经高效液相色谱-质谱分析后，证实提取物中确实含有异槲皮苷，且异槲皮苷的含量为0.1～0.12mg/g。
本发明提供了异槲皮苷作为黄嘌呤氧化酶抑制剂的应用。实施例结果表明，异槲皮苷对黄嘌呤氧化酶的抑制作用的IC50值为0.628±021mg/mL，可以作为抗高尿酸血症药物及抗痛风药物的活性成分。
附图说明
图1为实施例1所得异槲皮苷提取物的一级二集质谱图及裂解途径；
图2为实施例1所得提取物的液相色谱图；
图3为异槲皮苷标准品的液相色谱图；
图4为别嘌呤醇、异槲皮苷纯品、异槲皮苷提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制效果；
图5为异槲皮苷片剂对黄嘌呤氧化酶的抑制效果。
具体实施方式
本发明一种葵花盘中异槲皮苷的提取方法，包括以下步骤：
(1)将葵花盘粉碎物与乙醇混合，进行乙醇提取，得到乙醇提取物；
(2)对所述乙醇提取物进行分级萃取，所述分级萃取使用的萃取剂依次为石油醚、乙酸乙酯，每种萃取剂的萃取次数独立为1～3次；
合并乙酸乙酯萃取液，对乙酸乙酯萃取液进行浓缩和干燥，得到乙酸乙酯层提取物；
(3)对所述乙酸乙酯层提取物进行柱层析，所述柱层析的固定相为聚酰胺，流动相为体积浓度为30％的乙醇溶液，收集柱层析洗脱液；
(4)去除所述柱层析洗脱液的溶剂，得到异槲皮苷提取物。
本发明将葵花盘粉碎物与乙醇混合，进行乙醇提取，得到乙醇提取物。本发明对所述葵花盘的种类、来源没有特殊的要求，任何品种的向日葵葵花盘均能作为本发明的提取原料。在本发明中，所述葵花盘粉碎物的粒径优选为10～20目，更优选为15目，所述乙醇的体积浓度优选为50～60％，更优选为57.6％；所述葵花盘粉碎物与乙醇的用量比优选为1g：20～30mL，更优选为20.3mL。
本发明对所述混合的方式没有特殊的要求，使用本领域技术人员熟知的混合方式即可，具体的如搅拌混合。在本发明中，所述乙醇提取的温度优选为60～70℃，更优选为63.7℃，时间优选为2～3h，更优选为2.5h。本发明通过乙醇提取，能够将葵花盘中的总黄酮类化合物提取出来。
得到乙醇提取物后，本发明优选对所述乙醇提取物进行浓缩。在本发明中，所述浓缩的方式优选为减压浓缩，所述减压浓缩的压力优选为0.06～0.09MPa，更优选为0.07～0.08MPa；温度优选为50～70℃，更优选为60℃；时间优选为2～3h，更优选为2.5h。本发明优选将乙醇提取物浓缩至原体积的10％。
得到所述乙醇提取物后，本发明对所述乙醇提取物进行分级萃取，所述分级萃取使用的萃取剂依次为石油醚和乙酸乙酯，每种萃取剂的萃取次数独立为1～3次。在本发明中，在进行石油醚萃取后，得到石油醚层和水层，取水层进行乙酸乙酯萃取。在本发明中，所述乙醇提取物与石油醚、乙酸乙酯的体积比独立优选为1:2～3；分级萃取时石油醚、乙酸乙酯的萃取时间独立优选为15～30min。
所述分级萃取后，本发明对乙酸乙酯萃取液进行浓缩和干燥，得到乙酸乙酯层萃取物。在本发明中，所述浓缩的方式优选为减压浓缩，所述减压浓缩的压力优选为0.06～0.09Mpa，更优选为0.07～0.08MPa；温度优选为50～70℃，更优选为55～65℃；本发明对所述减压浓缩的时间没有特殊的要求，能够保证无溶剂蒸出即可。在本发明中，所述干燥的温度为优选为50～70℃，更优选为55～65℃；本发明对所述干燥的时间没有特殊的要求，保证干燥后的物质恒重即可。
本发明通过分级萃取，利用相似相容的原理，使总黄酮类化合物中的异槲皮苷溶于乙酸乙酯中，其余成分大多分布于其他萃取剂中。
得到乙酸乙酯萃取物后，本发明对所述乙酸乙酯层提取物进行柱层析，柱层析的固定相为聚酰胺，流动相为体积浓度为30％的乙醇溶液，收集柱层析洗脱液。在本发明中，所述柱层析的上样方式优选包括以下步骤：
将乙酸乙酯层提取物与乙醇混合，得到乙酸乙酯层提取物的乙醇溶液；
将乙酸乙酯层提取物的乙醇溶液与聚酰胺树脂混合，进行干燥，将干燥后的混合固体平铺在聚酰胺柱子上层。
在本发明中，所述乙酸乙酯层提取物与乙醇的用量比优选为2g：5～15mL；所述乙酸乙酯层提取物与聚酰胺树脂的质量比优选为1:5～10。在本发明中，所述聚酰胺的粒径优选为30～60目。在本发明中，所述干燥的温度优选为50～70℃，更优选为60℃；本发明对所述干燥的时间没有特殊的要求，使干燥后的物质恒重即可。
在本发明中，所述柱层析的固定相为聚酰胺，流动相为体积浓度为30％的乙醇溶液。在本发明中，所述柱层析的洗脱体积优选为3VB，洗脱速率优选为0.5～1.5mL/min，更优选为0.8～1.2mL/min。
得到柱层析洗脱液后，本发明去除柱层析洗脱液的溶剂，得到异槲皮苷提取物。本发明对所述去除溶剂的方式没有特殊的要求，使用本领域技术人员熟知的去除溶剂的方式即可，具体的如蒸发去除。
得到所述异槲皮苷提取物后，本发明优选对异槲皮苷提取物中的成分进行分析，所述成分分析的方法优选为高效液相色谱-质谱法。在本发明中，所述高效液相色谱分析的参数优选包括：
色谱柱：RP-C18色谱柱(150×210mm，1.8μm，Welch)；
流动相：流动相A为0.1wt％甲酸水溶液，流动相B为0.1wt％甲酸乙腈溶液；
梯度洗脱程序：0～5min，98％A；5～10min，98％A→50％A；10～15min，50％A→20％A；15～20min，20％A→5％A；20～25min，5％A→5％A；25～30min，5％A→98％A)；
流速：0.2～0.4mL·min-1；
自动进样器温度：10.0℃；
柱温：35℃；
进样针高度：2.00mm；
进样体积：10μL。
所述质谱分析的参数优选包括：
离子源：电喷雾电离源(ESI)；
扫描模式：采用正、负离子切换扫描模式；
扫描范围：m/z 150～2000；
检测方式：Full mass/dd-MS2；
分辨率：70000(full mass)，17500(dd-MS2)；
电喷雾电压(SparyVoltage)：3.8kV(Positive)；
毛细管温度(CapillaryTemperature)：300℃；
碰撞气：高纯氩气(纯度≥99.999％)；
鞘气：氮气(纯度≥99.999％)，40Arb；
辅助气(Aux gus heatertemp)：氮气(纯度≥99.999％)，350℃；
数据采集时间：25～35min。
本发明提供了异槲皮苷在制备黄嘌呤氧化酶抑制剂中的应用。在本发明中，所述异槲皮苷制备黄嘌呤氧化酶抑制剂时，所述异槲皮苷的剂量优选为2.5～10mg/mL。
本发明提供了异槲皮苷或上述技术方案所述提取方法得到的异槲皮苷提取物在制备抗高尿酸血症药物或抗痛风药物中的应用。本发明对所述应用的方法没有特殊的要求，使用本领域技术人员熟知的方法，将所述异槲皮苷或上述技术方案所述提取方法得到的异槲皮苷提取物制备成不同剂型的药物即可。
本发明提供了一种异槲皮苷药物，包括活性成分和药学上可接受的载体，所述活性成分为异槲皮苷或上述提取方法得到的异槲皮苷提取物。在本发明中，所述药学上可接受的载体优选包括乳糖、淀粉、聚维酮K30、羧甲基淀粉钠、硬脂酸、硬脂酸镁和二氧化硅中的一种或几种；所述异槲皮苷药物中活性成分的含量优选为0.05～0.15g/片。
在本发明中，所述载体优选为乳糖、淀粉、聚维酮K30、羧甲基淀粉钠、硬脂酸、硬脂酸镁和二氧化硅，所述异槲皮苷与乳糖、淀粉、聚维酮K30、羧甲基淀粉钠、硬脂酸、硬脂酸镁和二氧化硅的质量比优选为10～30：40～70:5～20:6～12:5～10:1～3:0.5～1.5:0.1～0.5，更优选为15～25：55～55：15～25：8～10：6～8：2：1：0.2～0.4。
在本发明中，当所述异槲皮苷药物的剂型为片剂时，单片异槲皮苷片剂的片重优选为0.5g，单片异槲皮苷片剂的中异槲皮苷的剂量优选为0.05～0.25g，更优选为0.05～0.15g；所述异槲皮苷片剂的服药方式为口服，一次三片，一日三次。
下面结合实施例对本发明提供的葵花盘中异槲皮苷提取方法、异槲皮苷在制备黄嘌呤氧化酶抑制剂中的应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
(1)将粒径为10目的葵花盘粉碎物与体积浓度为57.6％的乙醇-水混合，液料比为20.3(mL/g)，进行乙醇提取，提取时间为2.5h，提取温度为67.3℃，在60℃，0.9MPa下对提取液进行减压浓缩，得到提取物浸膏，所述提取物浸膏中总黄酮的得率为1.077％；
(2)依次使用石油醚、乙酸乙酯对提取物浸膏进行分级萃取，提取物浸膏与每种萃取剂的体积比均为1:2，分级萃取的次数为2次；合并乙酸乙酯萃取液，将乙酸乙酯萃取液在60℃下浓缩至无任何溶剂，之后放置在烘箱中60℃烘干，得到乙酸乙酯层提取物；
(3)对乙酸乙酯层提取物进行柱层析，柱层析的固定相为聚酰胺，流动相为体积浓度为30％的乙醇溶液，洗脱体积为3BV，洗脱速度为1m L/min，收集柱层析洗脱液；
(4)去除柱层析洗脱液的溶剂，得到异槲皮苷提取物。
对所得异槲皮苷提取物进行UPLC-MS分析，其中高效液相色谱分析的参数为：
色谱柱：RP-C18色谱柱(150×210mm，1.8μm，Welch)；
流动相：0.1％甲酸水溶液(A)～0.1％甲酸乙腈(B)；
梯度洗脱程序：0～5min，98％A；5～10min，98％A→50％A；10～15min，50％A→20％A；15～20min，20％A→5％A；20～25min，5％A→5％A；25～30min，5％A→98％A)；
流速：0.2～0.4mL·min-1；
自动进样器温度：10.0℃；
柱温：35℃；
进样针高度：2.00mm；
进样体积：10μL。
所述质谱分析的参数为：
离子源：电喷雾电离源(ESI)；
扫描模式：采用正、负离子切换扫描模式；
扫描范围：m/z 150～2000；
检测方式：Full mass/dd-MS2；
分辨率：70000(full mass)，17500(dd-MS2)；
电喷雾电压(SparyVoltage)：3.8kV(Positive)；
毛细管温度(CapillaryTemperature)：300℃；
碰撞气：高纯氩气(纯度≥99.999％)；
鞘气：氮气(纯度≥99.999％)，40Arb；
辅助气(Aux gus heatertemp)：氮气(纯度≥99.999％)，350℃；
数据采集时间：25～35min。
所得异槲皮苷提取物的一级二集质谱图及裂解途径如图1所示。从图1中可以看出，母核离子m/z为465[M+H]+1，MS2碎片137.02316(C7H5O3[M-e]+1)97.0258(C5H5O2[M-e]+1)，其形成过程可推测为：m/z为137为母离子在A处断裂掉落C14H15O8形成的，m/z为97.0258为母离子在B处断裂脱落-CHO、-CH2O和2个水分子形成。因此证明提取物中含有异槲皮苷。
所得提取物的液相色谱图如图2所示，异槲皮苷标准品的液相色谱图如图3所示。由图2、图3比较可以看出，在正离子扫描条件下，从样品和标准品的一级质谱中采集m/z＝303的碎片离子进入二级质谱，在二级质谱中检测m/z＝229的碎片离子的丰度。由图中数据可知，葵花盘总黄酮提取物中异槲皮苷的m/z＝229的碎片色谱图出峰时间Rt＝6.10，标准品m/z＝229碎片的色谱图出峰时间Rt＝6.09，二级碎片出峰时间相同佐证了混合物中含有异槲皮苷。
本提取方法所得提取物中异槲皮苷含量为0.11mg/g。
实施例2
(1)将粒径为10目的葵花盘粉碎物与体积浓度为50％的乙醇-水混合，液料比为20(mL/g)，进行乙醇提取，提取时间为2h，提取温度为60℃，在70℃，0.8MPa下对乙醇提取液进行减压浓缩，得到提取物浸膏，所述提取物浸膏中总黄酮的得率为0.9％；
(2)依次使用石油醚、乙酸乙酯对提取物浸膏进行分级萃取，提取物浸膏与每种萃取剂的体积比均为1:2，分级萃取的次数为3次；合并乙酸乙酯萃取液，将乙酸乙酯萃取液在50℃下浓缩至无任何溶剂，之后放置在烘箱中50℃烘干，得到乙酸乙酯层提取物；
(3)对乙酸乙酯层提取物进行柱层析，柱层析的固定相为聚酰胺，流动相为体积浓度为30％的乙醇溶液，洗脱体积为3BV，洗脱速度为0.5mL/min，收集柱层析洗脱液；
(4)去除柱层析洗脱液的溶剂，得到异槲皮苷提取物，提取物中异槲皮苷的含量为0.1mg/g。
对所得异槲皮苷提取物进行UPLC-MS分析，其中高效液相色谱分析与质谱分析的操作参数与实施例1相同，所得分析结果与实施例1相似，证明提取物中含有异槲皮苷。
实施例3
(1)将粒径为10目的葵花盘粉碎物与体积浓度为60％的乙醇混合，液料比为30(mL/g)，进行乙醇提取，提取时间为3h，提取温度为70℃，在65℃，0.7MPa下对乙醇提取液进行减压浓缩，得到提取物浸膏，所述提取物浸膏中总黄酮的得率为1.04％；
(2)依次使用石油醚、乙酸乙酯对提取物浸膏进行分级萃取，提取物浸膏与每种萃取剂的体积比均为1:2，分级萃取的次数为3次；合并乙酸乙酯萃取液，将乙酸乙酯萃取液在70℃下浓缩至无任何溶剂，之后放置在烘箱中70℃烘干，得到乙酸乙酯层提取物；
(3)对乙酸乙酯层提取物进行柱层析，柱层析的固定相为聚酰胺，流动相为体积浓度为30％的乙醇溶液，洗脱3个柱体积，洗脱速度为1.5mL/min，收集柱层析洗脱液；
(4)去除柱层析洗脱液的溶剂，得到异槲皮苷提取物，提取物中异槲皮苷的含量为0.12mg/g。
对所得异槲皮苷提取物进行UPLC-MS分析，其中高效液相色谱分析与质谱分析的操作参数与实施例1相同，所得分析结果与实施例1相似，证明提取物中含有异槲皮苷。
测试例1
黄嘌呤氧化酶可以分解黄嘌呤生成尿酸，因此可以根据尿酸的生成判断黄嘌呤氧化酶的活性。目前，对于黄嘌呤氧化酶的抑制试验的研究方法主要是分光光度法，测试依据是尿酸在295nm处有特征吸收峰。
测定试剂的配置
(1)凝血因子XA的配制：
用1mL的1mol/LNaOH溶液溶解0.57g XA，再用PBS(0.1mmol/L；pH：7.2～7.4)溶液稀释至250mL。
(2)黄嘌呤氧化酶(XOD)溶液配制：
准确称取3mg XOD溶于30mL PBS，用时再稀释100倍，此时酶浓度约8U/mL。
(3)样品测试溶液的配置
分别准确称取异槲皮苷纯品、别嘌呤醇10mg，用DMSO溶解，分别配制成10mg/mL、5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625μg/mL、0.312μg/mL、0.156μg/mL、0.078μg/mL的样品溶液，DMSO终浓度小于1％。
测试操作步骤
其中A为0.5mL XOD，3.5mL PBS，1mLXA，B为4mL PBS，1mLXA，C为0.5mLXOD，3mLPBS，1mLXA，0.5mL样品溶液，D为3.5mL PBS，1mLXA，0.5mL样品溶液的混合物。将各混合物在37℃下孵育30分钟。然后通过添加200μL的0.5M盐酸来终止反应，在295nm处获得吸光度值。使用式1计算的抑制百分比：
Figure BDA0002855362210000111
不同浓度下别嘌呤醇和异槲皮苷对黄嘌呤氧化酶的抑制能力如表1所示。
表1不同浓度下别嘌呤醇和异槲皮苷对黄嘌呤氧化酶的抑制能力
Figure BDA0002855362210000112
由图4可以看出，异槲皮苷具有较强的黄嘌呤氧化酶抑制作用，其对黄嘌呤氧化酶的抑制作用的IC50值为0.63±0.21mg/mL。
按照上述方法配制实施例1所得异槲皮苷提取物的样品测试溶液，并测试不同浓度下异槲皮苷提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制能力。不同浓度下别嘌呤醇和异槲皮苷提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制能力如表2所示。
表2不同浓度下异槲皮苷提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制能力
Figure BDA0002855362210000113
Figure BDA0002855362210000121
以浓度为横坐标，为纵坐标绘制曲线，分析别嘌呤醇和异槲皮苷提取物对黄嘌呤氧化酶的抑制能力，所得结果如图4所示。
由图4可以看出，异槲皮苷提取物具有较强的黄嘌呤氧化酶抑制作用，其对黄嘌呤氧化酶的抑制作用的IC50值为0.67±0.11mg/mL。
实施例4
一种异槲皮苷片剂，其成分为：异槲皮苷10g；乳糖55g；淀粉15g；聚维酮K3010g；羧甲基淀粉钠8g；硬脂酸2g；硬脂酸镁1g；二氧化硅0.3g。采用湿法制粒压片，片重为0.5g，片剂规格为0.05g。
实施例5
一种异槲皮苷片剂，其成分为：实施例1所得异槲皮苷提取物15g；乳糖50g；淀粉15g；聚维酮K3010g；羧甲基淀粉钠8g；硬脂酸2g；硬脂酸镁1g；二氧化硅0.3g。采用湿法制粒压片，片重为0.5g，片剂规格为0.075g。
实施例6
一种异槲皮苷片剂，其成分为：异槲皮苷20g；乳糖50g；淀粉10g；聚维酮K305g；羧甲基淀粉钠8g；硬脂酸2g；硬脂酸镁1g；二氧化硅0.3g。采用湿法制粒压片，片重为0.5g，片剂规格为0.1g。
实施例7
一种异槲皮苷片剂，其成分为：异槲皮苷30g；乳糖40g；淀粉15g；聚维酮K3010g；羧甲基淀粉钠8g；硬脂酸2g；硬脂酸镁1g；二氧化硅0.3g。采用湿法制粒压片，片重为0.5g，片剂规格为0.15g。
测试例2
分别取实施案例4～7中制备的片剂一片溶于50ml乙醇中，静置0.5～1h后，离心取上清液0.5ml，对黄嘌呤氧化酶活性进行测试，测试方法参照测试例1。测试结果如表3。
表3异槲皮苷片剂对黄嘌呤氧化酶的抑制能力
Figure BDA0002855362210000131
以浓度为横坐标，为纵坐标绘制曲线，分析异槲皮苷片剂对黄嘌呤氧化酶的抑制能力，所得结果如图5所示。
由表3结合图5可知，异槲皮苷片剂仍然会黄嘌呤氧化酶有很好的抑制效果，并且随着每片中异槲皮苷规格的升高抑制作用增强。因此证明了异槲皮苷片剂在体外对高尿酸血症的治疗起作用。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种葵花盘中异槲皮苷的提取方法，包括以下步骤：
(1)将葵花盘粉碎物与乙醇混合，进行乙醇提取，得到乙醇提取物；
(2)对所述乙醇提取物进行分级萃取，所述分级萃取使用的萃取剂依次为石油醚、乙酸乙酯，每种萃取剂的萃取次数独立为1～3次；
合并乙酸乙酯萃取液，对乙酸乙酯萃取液进行浓缩和干燥，得到乙酸乙酯层提取物；
(3)对所述乙酸乙酯层提取物进行柱层析，所述柱层析的固定相为聚酰胺，流动相为体积浓度为20～50％的乙醇溶液，收集柱层析洗脱液；
(4)去除所述柱层析洗脱液的溶剂，得到异槲皮苷提取物。
2.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述葵花盘粉碎物的粒径为10～20目；
所述步骤(1)中乙醇的体积浓度为50～60％；所述葵花盘粉碎物的质量与乙醇的体积比为1g：20～30mL。
3.根据权利要求1或2所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(1)中乙醇提取的温度为60～70℃，时间为2～3h。
4.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中乙醇提取物与石油醚、乙酸乙酯的体积比均为1:2～3，分级萃取时石油醚、乙酸乙酯的萃取时间独立为15～30min。
5.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(2)中浓缩的方式为减压浓缩，所述减压浓缩的压力为0.06～0.09MPa，温度为50～70℃；所述干燥的温度为50～70℃。
6.根据权利要求1所述的提取方法，其特征在于，所述步骤(3)中柱层析的洗脱体积为2～3柱体积，洗脱速率为0.5～1.5mL/min。
CN202011543850.8A 2020-12-23 2020-12-23 一种葵花盘中异槲皮苷的提取方法、异槲皮苷在制备黄嘌呤氧化酶抑制剂中的应用 Active CN112457357B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011543850.8A CN112457357B (zh) 2020-12-23 2020-12-23 一种葵花盘中异槲皮苷的提取方法、异槲皮苷在制备黄嘌呤氧化酶抑制剂中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011543850.8A CN112457357B (zh) 2020-12-23 2020-12-23 一种葵花盘中异槲皮苷的提取方法、异槲皮苷在制备黄嘌呤氧化酶抑制剂中的应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN112457357A CN112457357A (zh) 2021-03-09
CN112457357B true CN112457357B (zh) 2021-07-09

Family

ID=74803417

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011543850.8A Active CN112457357B (zh) 2020-12-23 2020-12-23 一种葵花盘中异槲皮苷的提取方法、异槲皮苷在制备黄嘌呤氧化酶抑制剂中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112457357B (zh)

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN115671122A (zh) * 2021-07-21 2023-02-03 苏州凯祥生物科技有限公司 棉皮素-8-o-葡萄糖醛酸苷在制备降嘌呤药物中的应用

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104788518A (zh) * 2015-05-04 2015-07-22 中国药科大学 槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷的制备方法及其脂质调节方面的用途
CN108434189A (zh) * 2018-05-21 2018-08-24 长春市万象鹰豪商贸有限公司 一种向日葵花盘总黄酮及其提取工艺和应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104788518A (zh) * 2015-05-04 2015-07-22 中国药科大学 槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷的制备方法及其脂质调节方面的用途
CN108434189A (zh) * 2018-05-21 2018-08-24 长春市万象鹰豪商贸有限公司 一种向日葵花盘总黄酮及其提取工艺和应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Potential anti-gout constituents as xanthine oxidase inhibitor from the fruits of Stauntonia brachyanthera;Dan Liu et al.;《Bioorganic & Medicinal Chemistry》;20170506;第25卷;第3562-3566页 *
葵花盘不同产地、不同部位总黄酮含量的变化分析;刘吉爽 等;《吉林中医药》;20200831;第40卷(第8期);第1080-1083页 *
葵花盘提取物抗痛风及抗高尿酸血症活性研究;滕美玉;《中国优秀硕士学位论文全文数据库（电子期刊）》;20171015(第10期);第E057-46页 *

Also Published As

Publication number Publication date
CN112457357A (zh) 2021-03-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US7897791B2 (en) Purifications of pomegranate ellagitannins and their uses thereof
CN107337586A (zh) 一种从汉麻中提取纯化大麻二酚的方法
Basniwal et al. In-vitro antioxidant activity of hot aqueous extract of Helicteres isora Linn. fruits
CN1699397A (zh) 三七三醇皂苷的制备方法及其应用
CN112457357B (zh) 一种葵花盘中异槲皮苷的提取方法、异槲皮苷在制备黄嘌呤氧化酶抑制剂中的应用
Ding et al. Phenolic content and radical scavenging capacity of 31 species of ferns
Peng et al. Changes in levels of phenylethanoid glycosides, antioxidant activity, and other quality traits in Cistanche deserticola slices by steam processing
Qi et al. New features on the fragmentation patterns of homoisoflavonoids in Ophiopogon japonicus by high‐performance liquid chromatography/diode‐array detection/electrospray ionization with multi‐stage tandem mass spectrometry
EP2639232B1 (en) Method for producing dihydroquercetin
Shi et al. Chemical profiling of jinqi jiangtang tablets by HPLC-ESI-Q-TOF/MS
CN109438213B (zh) 一种异戊烯基查尔酮类化合物及其制备方法
CN110724121B (zh) 铁皮石斛叶中的一种联苄类衍生物及其制备方法和用途
CN103130851A (zh) 一种从萝卜皮中分离制备四种天竺葵素衍生物的方法
CN109453234B (zh) 桑白皮制品及其制备方法
CN110237064B (zh) 双咖啡酰奎宁酸在制备治疗痛风药物中的用途
Rong-Rong et al. Rapid screening and identification of sesquiterpene lactones in Kudiezi injection based on high-performance liquid chromatography coupled with linear ion trap-orbitrap mass spectrometry
Zhong et al. Determination of contents of eight alkaloids in fruits of Macleaya cordata (Willd) R. Br. from different habitats and antioxidant activities of extracts
CN108299368B (zh) 黄酮类化合物及其制备方法与应用
CN103739653B (zh) 一种23-降齐墩果烷酸化合物及其制备方法和在制备糖苷酶抑制剂药物中的用途
KR100856486B1 (ko) 고온-고압 용매추출을 이용하여 범부채 근경으로부터텍토리딘 및 텍토리게닌을 추출하는 방법
NOKKAEW et al. Multistage solvent extraction for high yield oil and phorbol esters removal from Thai toxic Jatropha curcas meal
US20210368830A1 (en) Method for increasing yield of amadori rearrangement products based on inhibition mechanism of tea polyphenols and deoxyosones to degradation of amadori rearrangement products
Chandler et al. Improved extraction and complete mass spectral characterization of steroidal alkaloids from Veratrum californicum
CN109824643B (zh) 一种提取余甘子中漆黄素的方法
Zhao et al. Identification and purification of novel chlorogenic acids in Artemisia annua L

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant