CN112430607A

CN112430607A - OsIAA8基因及其编码蛋白与应用

Info

Publication number: CN112430607A
Application number: CN202011513577.4A
Authority: CN
Inventors: 楼巧君; 徐凯; 陈亮; 李铁梅; 罗利军
Original assignee: SHANGHAI AGROBIOLOGICAL GENE CENTER
Current assignee: SHANGHAI AGROBIOLOGICAL GENE CENTER
Priority date: 2020-12-18
Filing date: 2020-12-18
Publication date: 2021-03-02
Anticipated expiration: 2040-12-18
Also published as: CN112430607B

Abstract

本发明提供了一种从水稻DNA片断中分离克隆的与水稻根的发育和抗逆性相关的OsIAA8基因。该基因编码的蛋白含有Aux/IAA家族保守的结构域。OsIAA8基因受渗透胁迫、脱落酸以及生长素的诱导表达，超表达OsIAA8可提高水稻深根比进而可增强水稻的抗旱能力，与水稻抗逆性相关。本发明的水稻基因对逆境产生明显响应，可应用于植物抗旱育种，改进根的构型，提高植物的抗逆性。

Description

OsIAA8基因及其编码蛋白与应用

技术领域

本发明属于基因工程领域，涉及一种与作物根系生长及抗逆性相关的基因，具体涉及一种新的作物深根生长相关的基因OsIAA8及其应用。

背景技术

干旱缺水是造成全球粮食减产的重要因素之一。干旱胁迫严重影响植物生长和发育，甚至造成植物死亡。水稻是重要的粮食作物之一，水稻需水占农业灌溉用水的65％，利用现代生物学技术研究植物抗旱的生理生化反应，克隆重要的抗旱基因，进而转入植物中培育抗逆性增强的作物新品种，特别是培育节水抗旱的水稻新品种是缓解全球干旱缺水、人口增长带来的粮食生产压力的有效途径。

植物在长期的进化过程中形成了一系列的适应机制来应对干旱等逆境胁迫。干旱胁迫下，植物一方面通过调节气孔关闭来减少水分蒸腾，同时通过促进根系生长来增加水分吸收，从而有效避免干旱胁迫对植物的伤害。其中根系生长调控对于水稻抗旱性具有至关重要的作用。当地表缺水的时候，植物可通过促进根系向下生长来吸收深层土壤中的水分进而增强自身应对干旱胁迫的能力。在禾本科作物的研究中，将向下生长的根的数量(与水平夹角50-90°)与向侧面生长的根的数量(与水平夹角0-50°)的比值称为深根比，一般深根比越大的植物，吸收深层水的能力更强，因而抗旱能力更强。

目前已有研究对水稻的深根比进行了遗传定位和基因挖掘，但仅克隆了极少数的决定深根比的基因，其中最典型的代表是DRO1，研究表明DRO1受到生长素负向调控，并且影响了根尖部位的细胞伸长，从而导致根系的不对称生长和对重力相应的向下弯曲。DRO1高表达可以增加根生长角度，使其生长方向更为竖直。DRO1基因能够改变根系形态，从而提高水稻避旱能力。

植物根的生长和发育受多种植物激素的协同调控，其中生长素是最重要的激素之一，在主根、侧根、不定根、根毛的发育和根的向重性中发挥重要的调控作用。生长素能够诱导一系列生长素早期响应基因的表达，包括Aux/IAA、GH3和SAUR。其中Aux/IAA基因家族是生长素响应基因的典型代表，其主要通过与ARF蛋白相互作用作为转录抑制因子，调节生长素信号通路下游基因从而发挥调节植物生长发育的作用。水稻Aux/IAA基因家族共有31个成员，其功能研究较少，仅有少数成员已报道其功能，如OsIAA1\OsIAA3\OsIAA6\OsIAA11等，研究表明这些基因与水稻的株高、分蘖、对生长素的敏感性等性状相关，其他多数成员的功能仍然未知。

目前在水稻中仅克隆了DRO1等极少数控制深根比的基因，还需要鉴定更多的基因方便应用于育种。

发明内容

基于此，本发明的目的在于提供一种OsIAA8基因，并寻求其在抗逆性中的应用。

为实现上述目的，本发明具体技术方案如下：

OsIAA8基因在调控作物抗逆性中的应用，其特征在于，所OsIAA8基因的序列选自：

SEQ ID NO:1所示的DNA序列；或

与SEQ ID NO:1至少90％同源的DNA序列；或

功能相当于SEQ ID NO:1所示序列的亚片段。

在其中一些实施例中，所述调控作物抗逆性为：改进作物根发育、提高作物深根比。

在其中一些实施例中，OsIAA8基因为在作物中超表达的OsIAA8基因。

本发明还提供了一种OsIAA8基因编码的蛋白，其具体技术方案如下：

OsIAA8基因编码的蛋白在调控作物抗逆性中的应用，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，或者为所述SEQ ID NO:2序列的同源序列、或保守性变异体、或等位变异体、或天然突变体、或诱导突变体中的一种，或者所述蛋白为由如上任一项所述的OsIAA8基因编码得到。

在其中一些实施例中，所述的OsIAA8基因编码的蛋白为在作物中超表达的OsIAA8蛋白。

在其中一些实施例中，所述作物为水稻。

本发明还提供了一种OsIAA8基因的超表达重组载体的构建方法，其具体技术方案如下：

一种OsIAA8基因的超表达重组载体的构建方法，包括如下步骤：

1)从水稻cDNA中克隆获得OsIAA8基因序列，链接至pEASY-Blunt载体上；

2)用前引物SEQ ID NO:7，后引物SEQ ID NO:8进行PCR扩增；

3)将扩增产物片断克隆到植物超量表达载体pUb-06。

本发明还提供了一种OsIAA8基因的超表达重组载体，其具体技术方案如下：

一种OsIAA8基因的超表达重组载体，由如上所述的OsIAA8基因的超表达重组载体的构建方法制备得到。

本发明还提供了一种工程菌，其具体技术方案如下：

一种工程菌，所述工程菌为含有如上所述的OsIAA8基因的超表达重组载体。

在其中一些实施例中，所述工程菌为农杆菌EHA105。

本发明还提供了一种具有抗逆性的水稻，其具体技术方案如下：

一种具有抗逆性的水稻，其特征在于，包含如上所述的OsIAA8基因，或如上所述的OsIAA8基因编码的蛋白。

基于上述技术方案，本发明具有以下有益效果：

本发明通过对水稻基因分离克隆及其对逆境胁迫的响应，提供了一种水稻DNA片断包含一个618bp的编码基因OsIAA8。该基因编码的蛋白含有Aux/IAA家族典型的结构域。OsIAA8基因受渗透胁迫、脱落酸以及生长素的诱导表达，超表达OsIAA8可提高水稻深根比进而可能增强水稻的抗旱能力，与水稻生长发育和抗逆性相关。本发明的水稻基因对逆境产生明显响应，可应用于植物抗旱育种，改进根的构型，提高植物的抗逆性。

本发明可以用于研究利用此基因遗传转化获得转基因植物的分子方法。

本发明的水稻基因对逆境产生明显响应，可应用于在植物抗逆育种。

附图说明

图1为本发明利用ClustalW2软件将OsIAA8基因预测的蛋白序列与其同源蛋白序列进行比对的结果；

图2为本发明的OsIAA8基因在苗期水稻根受到PEG、外源ABA和IAA处理时的表达水平；

图3为本发明的OsIAA8基因超表达载体转化水稻植株中OsIAA8基因表达水平检测；NIP:野生型水稻(日本晴)，OE1,OE2,OE5:OsIAA8基因超表达转基因水稻；

图4为本发明的OsIAA8基因超表达转基因水稻与野生型水稻深根比比较，NIP:野生型水稻(日本晴)，OE1,OE2,OE5:OsIAA8基因超表达转基因水稻。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将参照实施例对本发明进行更全面的描述，以下给出了本发明的较佳实施例。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。应理解，下述实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，例如Sambrook等分子克隆：实验室手册(New York:Cold Spring Harbor Laboratory Press,1989)中所述的条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用试剂，均为市售产品。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

下面通过实施例对本发明进行详细介绍：

实施例1水稻OsIAA8基因的克隆

1.幼苗培育

将水稻置于30℃萌发48小时，然后播种于温室中，待水稻叶片为3-5片时，准备抽取DNA或RNA。

2.RNA的分离：

RNA的提取：所取样品在研钵中用液氮冷冻后研磨成粉状，加入盛有1mL TRNzol-A+试剂的2mL EP管，充分振荡后，室温放置5min，之后加0.2mL氯仿，剧烈震荡15s后，室温放置3min；后于4℃，12000rpm离心10min后，上清液移至新的2mL EP管中，加等体积异丙醇沉淀RNA，加100μL RNase-free ddH₂O溶解。电泳鉴定总RNA质量，然后在分光光度计上测定RNA含量。

3.逆转录合成第一链cDNA

(1)反转录之前需用DNaseI消化所提取RNA样品，反应体系如下：

37℃反应15min后，加入0.25μL 0.1M EDTA(保证终浓度>2mM)，70℃温育10min终止反应，短暂离心后置于冰上备用。

(2)第一链cDNA的合成参照Promega反转录系统A3500操作手册，具体步骤如下：

DNaseI消化过的样品中依次加入下列各试剂配制20μL的反应体系：

将上反应体系于42℃温育15min；然后95℃加热5min，使AMV反转录酶失活并阻止其与DNA结合；4℃或冰上放置5min。制备好的cDNA可以立即使用或存放于-20℃备用。

4.水稻OsIAA8基因的扩增

通过对水稻基因组及全长基因数据库进行搜索，获得水稻深根比QTL区间候选基因LOC_Os02g42990的预测的编码区cDNA序列。根据预测信息设计上下游引物：

IAA8f(5’ATGGAGTGCATGGCGAGTACTGAAGAG 3’，SEQ ID NO:3)和

IAA8r(5’TCAACAGCTATAGCAGTACTTGTCATCCG 3’，SEQ ID NO:4)，

从cDNA中直接克隆获得了OsIAA8基因，凝胶回收，连接到pEASY-Blunt载体上，鉴定后进行序列测定，测序结果经BLAST比对确认。结果显示本发明中的水稻OsIAA8编码区cDNA的长度为618bp，详细序列见SEQ ID NO:1。

实施例2水稻OsIAA8的蛋白序列信息与同源性分析

根据本发明新的水稻OsIAA8的ORF推导出水稻OsIAA8的氨基酸序列，共205个氨基酸，分子量为22190道尔顿，详细序列见SEQ ID NO:2。通过NCBI网站的BLASTP程序比对得出(https://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi)，OsIAA8编码蛋白具有Aux/IAA蛋白特有的结构域，属于Aux/IAA家族。

通过对OsIAA8与水稻中的部分Aux/IAA编码蛋白进行多序列比对(图1)，我们发现，该蛋白与其同源蛋白具有较高的同源性，都含有保守的Aux/IAA结构域。

实施例3水稻基因OsIAA8在逆境胁迫下的表达分析

1.逆境胁迫处理

选取饱满的日本晴种子，蒸馏水清洗，3％NaClO消毒10min后清洗干净，30℃催芽，种子露白后转放到发芽盒内水培生长，三叶期后施加营养液(国际水稻所标准营养液)。在28℃，16h/8h的光照培养室中培养，至四叶期时进行各种逆境和激素处理：20％PEG6000、100μM脱落酸(ABA)和10μM生长素(IAA)。分别在胁迫前、胁迫后0.5h、2h、4h、8h、12h、24h对逆境和激素处理水稻的根进行取样。所有处理和取样过程都是在持续光照的条件下进行。

2.RNA提取与第一链cDNA合成

同实施例1。

3.定量PCR分析

基因表达的定量分析使用Takara公司的

Premix Ex TaqTM(Perfect RealTime)试剂盒，和美国

CFX960定量PCR仪进行。根据OsIAA8全长cDNA序列设计定量引物IAA8F(5'ACGGCAACAACCCTTCTACC 3'，SEQ ID NO:5)和IAA8R(5'CGTGCGACGAGACCTTTGT3'，SEQ ID NO:6)。以水稻持家基因actin(GenBank accession No.AY212324)为参照基因，根据其cDNA序列设计引物。20μL反应体系的配制：

反应条件为：95℃30s，然后在95℃5s，60℃31s，循环40次，并增设DissociationStage。设定在每个循环中60℃31s时收集数据，其它具体操作按仪器使用说明书进行。计算目的基因与参照基因的平均CT值以及△CT值，利用2^-ΔΔCT法进行结果分析，最后将数据导入GraphPad Prism5.0做出目的基因的相对表达量柱状图。

结果如图2所示：水稻根中OsIAA8对ABA处理比较敏感，处理后0.5h内可被诱导表达，表达量达到最高值，之后维持较高的表达水平；IAA处理和PEG模拟干旱胁迫能轻微诱导OsIAA8的表达，处理2h后，OsIAA8的表达增加到2.5～3倍。这些结果表明，该基因能够受到干旱逆境处理以及激素IAA的诱导表达，因而该基因在逆境应答反应中可能起着一定作用。

实施例4水稻基因OsIAA8超量表达转化水稻

1.利用基因重组克隆技术构建含OsIAA8基因的超量表达载体：

以实施例1中已获得含有旱稻IRAT109的OsIAA8基因的pEASY-Blunt载体为模板，用前引物IAA8f:5’-CAGGTCGACTCTAGAGGATCCATGGAGTGCATGGCGAGTACTG-3’(SEQ ID NO:7)，后引物IAA8r:5’-GGGGAAATTCGAGCTGGTCACCTCAACAGCTATAGCA GTACTTG-3’(SEQ ID NO:8)进行PCR扩增。扩增产物经回收纯化后，通过重组反应，将扩增产物片断克隆到植物超量表达载体pUb-06，筛选阳性克隆。具体过程如下：

(1)PCR扩增

50μL反应体系如下：

扩增程序：98℃预变性2min，98℃15s，60℃30s,68℃2min，30个循环。

采用普通琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(北京全式金生物技术有限公司)进行纯化回收。

(2)重组反应

重组反应的目的在于将含有与载体酶切位点两端序列相同的接头的PCR产物重组到pUb-06载体上，以产生超表达载体。重组反应可在室温配制混匀，0.5mL的离心管中进行。反应体系如下：

37℃温浴30min左右，然后将反应液转化大肠杆菌感受态细胞。转化完成的大肠杆菌液涂布在含有卡那霉素的平板上生长。接着挑取单菌落，进行PCR验证，然后送测序，测序结果与该基因cDNA序列比对以确认序列正确与否，最后提取质粒，即可转化农杆菌EHA105。

2.农杆菌转化

(1)根癌农杆菌(EHA105)感受态细胞的制备：

根癌农杆菌菌液于28℃培养至OD600＝0.5时，4℃离心收集菌体，用500μL、0.1mol/L冰浴CaCl₂重悬，冰浴30min后离心，去上清，用100μL，0.1mol/L冰CaC1₂重悬后，于4℃保存。

(2)农杆菌转化，采取冻融法：

向农杆菌感受态细胞(100μL)中加入5μL植物表达载体质粒DNA，轻轻混匀，冰水浴30min后，于液氮中速冻冷激2min；加入400-800μL YEP培养液(含卡那霉素，Kan)；28℃，200r/min振荡培养3-5h；室温离心(5000r/min，5min)，保留100μL上清重悬菌体，涂布于LB固体培养基(含Kan)上，28℃倒置培养2天直至长出合适大小的菌落，挑取单克隆进行PCR检测，得到阳性菌株。

3.愈伤诱导：种子用无菌水漂洗15-20min，再用75％的乙醇消毒1min，然后用1.5％有效浓度次氯酸钠溶液振荡消毒20min。最后再用无菌水冲洗5遍。将洗好的种子用吸水纸吸干接种在诱导愈伤培养基中，25℃暗培养2周。

愈伤诱导培养基：采用表1的诱导培养基，加入0.3g脯氨酸、0.6g水解酪蛋白酶、30g蔗糖和2.5mL 2,4-D(浓度1mg/mL)，配成1L溶液，调pH至5.9，加入7g琼脂粉，高温高压灭菌。

4.继代培养：把胚性愈伤组织切下，接入继代培养基中，25℃暗培养2周。

继代培养基：采用表1的继代培养基，加入0.5g脯氨酸、0.6g水解酪蛋白酶、30g蔗糖和2mL 2,4-D(浓度1mg/mL)，配成1L溶液，调pH至5.9，加入7g琼脂粉，高温高压灭菌。

5.农杆菌浸染和愈伤组织共培养：培养农杆菌，挑取阳性单菌落，在1mL农杆菌培养液(含抗生素)中，28℃培养过夜；取以上培养物，加入50mL农杆菌培养液(含抗生素)中，28℃培养至OD600＝0.6-1.0。将获得的农杆菌菌液离心，将收集到的菌体加入悬浮培养液中，震荡培养30min至OD600＝0.6-1.0。然后将愈伤组织放入含有农杆菌菌液的悬浮培养液中，振荡培养20min左右。将愈伤组织在灭菌滤纸上晾干，转入共培养培养基中，25℃暗培养5d。

悬浮培养液：采用表1的悬浮培养液，加入0.08g水解酪蛋白酶、2g蔗糖和0.2mL 2,4-D(浓度1mg/mL)，配成100mL溶液，调pH至5.4，分成两瓶(每瓶50mL)，高温高压灭菌。使用之前加入1mL 50％的葡萄糖和100μL AS(100mM)。

共培养培养基：采用表1的共培养培养基，加入0.8g水解酪蛋白酶、20g蔗糖和3.0mL2,4-D(浓度1mg/mL)，配成1L溶液，调pH至5.6，加入7g琼脂粉，高温高压灭菌。使用之前加入20mL 50％的葡萄糖和1mL AS(100mM)。

6.筛选培养：共培养3d后，选取好的愈伤组织，转入筛选培养基中，25℃暗培养2周，筛选两次。

筛选培养基：采用表2的筛选培养基，加入0.6g水解酪蛋白酶、30g蔗糖和2.5mL 2,4-D(浓度1mg/mL)，配成1L溶液，调pH至6.0，加入7g琼脂粉，高温高压灭菌。使用之前加入1mL Hn和1mL Cn(100ppm)。

7.分化培养：挑取胚性愈伤组织接入分化培养基，24℃，16h/8h光暗培养诱导分化芽(4-6周)。

分化培养基：采用表2的分化培养基，加入2.0mg/L 6-BA、2.0mg/L KT、0.2mg/LNAA、0.2mg/L IAA、1.0g水解酪蛋白酶和30g蔗糖，配成1L溶液，调pH至6.0，加入7g琼脂粉，高温高压灭菌。

8.生根培养：待芽长至2cm左右时，将幼芽切下，插入生根培养基中，25℃左右，16h/8h光暗培养，诱导生根。

生根培养基：采用表2的生根培养基，加入30g蔗糖，配成1L溶液，调pH至5.8，加入7g琼脂粉，高温高压灭菌。

9.转化植株培养：待根系发达后，打开试管口，加入无菌水炼苗2-3d后，将植株取出，用无菌水洗净附着的固体培养基，移入土壤中，刚开始遮荫避风，待植株健壮后进行常规田间或温室管理培养。

表1基本培养基成分1

表2基本培养基成分2

10.超量表达阳性植株中目的基因的表达水平检测

RNA提取及定量PCR方法见实施例1。

提取转基因T2代植物叶片RNA，采用定量PCR法检测了OsIAA8超量表达植株中目的基因的表达水平，如图3所示，在检测的3个转基因株系中，OsIAA8的表达量都明显高于野生型植株，达到100～180倍。

实施例5转基因水稻的深根比测定

将超量表达转基因家系种子去壳消毒(75％酒精处理1min，1.5％NaClO处理20min，无菌水清洗5次)，在含有50mg/L潮霉素的1/2MS培养基上发芽，野生型对照晚一天播于不含潮霉素的1/2MS培养基上。待发芽2～3天后挑选发芽好且长势一致的种子，分别转移到含有土壤的篮子中放入大田中进行种植。生长1个月左右，将篮子从大田中取出，数篮子不同角度的根的数量，计算深根比。

实验结果可以看出，OsIAA8转基因植株的深根比极显著高于野生型植株(图4)；该结果表明超表达OsIAA8提高了水稻的深根比。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对以上实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

序列表

<110> 上海市农业生物基因中心

<120> OsIAA8基因及其编码蛋白与应用

<160> 8

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 618

<212> DNA

<213> Oryza sativa

<400> 1

atggagtgca tggcgagtac tgaagagtct ctcccagctt cttcctccat ggatagttgc 60

agcggcgaac tgccgacgac gacgacgacg gcgccggcgc aatccacggc gtcttccggc 120

tgccgaccgc cggcgacggc ggcgaagcgg cggagtctga tcagcacaga tcttcgcctc 180

gggctcaccc tctcctccgt cgtccacatc gacggcaaca acccttctac cccaaggagt 240

tccctcacga cggcgacagt gacagctgat cgaggcggcg gcggcggcgg ccatggacgg 300

cgacggtcac tgttcgtgaa ggtgtacatg gagggcgtcc ccatcggcag gaagctggac 360

ctgctgccgc tggacggcta caaaggtctc gtcgcacggc tcgcctccat gttcagagca 420

tccatcacct atcatcattg ccatcgacag ttcgccgtcg tcgggatgaa gacgaacaag 480

gttcatcatg ttctgacata cgaagaccag gagggagact ggatgatggc tggagacgtg 540

ccatgggagc tgttcctgac aagcgtgaag agattgagga ttgcaagagc ggatgacaag 600

tactgctata gctgttga 618

<210> 2

<211> 205

<212> PRT

<213> Oryza sativa

<400> 2

Met Glu Cys Met Ala Ser Thr Glu Glu Ser Leu Pro Ala Ser Ser Ser

1 5 10 15

Met Asp Ser Cys Ser Gly Glu Leu Pro Thr Thr Thr Thr Thr Ala Pro

20 25 30

Ala Gln Ser Thr Ala Ser Ser Gly Cys Arg Pro Pro Ala Thr Ala Ala

35 40 45

Lys Arg Arg Ser Leu Ile Ser Thr Asp Leu Arg Leu Gly Leu Thr Leu

50 55 60

Ser Ser Val Val His Ile Asp Gly Asn Asn Pro Ser Thr Pro Arg Ser

65 70 75 80

Ser Leu Thr Thr Ala Thr Val Thr Ala Asp Arg Gly Gly Gly Gly Gly

85 90 95

Gly His Gly Arg Arg Arg Ser Leu Phe Val Lys Val Tyr Met Glu Gly

100 105 110

Val Pro Ile Gly Arg Lys Leu Asp Leu Leu Pro Leu Asp Gly Tyr Lys

115 120 125

Gly Leu Val Ala Arg Leu Ala Ser Met Phe Arg Ala Ser Ile Thr Tyr

130 135 140

His His Cys His Arg Gln Phe Ala Val Val Gly Met Lys Thr Asn Lys

145 150 155 160

Val His His Val Leu Thr Tyr Glu Asp Gln Glu Gly Asp Trp Met Met

165 170 175

Ala Gly Asp Val Pro Trp Glu Leu Phe Leu Thr Ser Val Lys Arg Leu

180 185 190

Arg Ile Ala Arg Ala Asp Asp Lys Tyr Cys Tyr Ser Cys

195 200 205

<210> 3

<211> 27

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

atggagtgca tggcgagtac tgaagag 27

<210> 4

<211> 29

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

tcaacagcta tagcagtact tgtcatccg 29

<210> 5

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

acggcaacaa cccttctacc 20

<210> 6

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

cgtgcgacga gacctttgt 19

<210> 7

<211> 43

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

caggtcgact ctagaggatc catggagtgc atggcgagta ctg 43

<210> 8

<211> 44

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

ggggaaattc gagctggtca cctcaacagc tatagcagta cttg 44

Claims

1.OsIAA8基因在调控作物抗逆性中的应用，其特征在于，所述OsIAA8基因的序列选自：

SEQ ID NO:1所示的DNA序列；或

与SEQ ID NO:1至少90％同源的DNA序列；或

功能相当于SEQ ID NO:1所示序列的亚片段。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述调控作物抗逆性为：改进作物根发育、提高作物深根比。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，OsIAA8基因为在作物中超表达的OsIAA8基因。

4.OsIAA8基因编码的蛋白在调控作物抗逆性中的应用，其特征在于，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示，或者为所述SEQ ID NO:2序列的同源序列、或保守性变异体、或等位变异体、或天然突变体、或诱导突变体中的一种，或者所述蛋白为由权利要求1-3任一项所述的OsIAA8基因编码得到。

5.根据权利要求4所述的应用，所述OsIAA8基因编码的蛋白为在作物中超表达的OsIAA8蛋白。

6.根据权利要求1-5任一项所述的应用，其特征在于，所述作物为水稻。

7.一种OsIAA8基因的超表达重组载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

2)用前引物SEQ ID NO:7，后引物SEQ ID NO:8进行PCR扩增；

3)将扩增产物片断克隆到植物超量表达载体pUb-06。

8.一种OsIAA8基因的超表达重组载体，其特征在于，由如权利要求7所述的OsIAA8基因的超表达重组载体的构建方法制备得到。

9.一种工程菌，其特征在于，所述工程菌为含有如权利要求8所述的OsIAA8基因的超表达重组载体。

10.一种具有抗逆性的水稻，其特征在于，包含权利要求1-3任一项所述的OsIAA8基因，或权利要求4或5所述的OsIAA8基因编码的蛋白。