CN112424221A - 抗体文库和使用抗体文库的抗体筛选方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种新型抗体文库和一种使用所述新型抗体文库的抗体筛选方法。具有源自人类序列的特异性VH或VL支架的根据本发明的抗体文库展现出高热力学稳定性，并且具有允许高可溶性表达以及可逆折叠的优点。另外，根据本发明的抗体包含多种经合理控制的CDR，以对所有抗原展现出高特异性和高亲和力，并且因此可以有利地用于选择针对靶抗原的适当的候选抗体。
Description
技术领域
本发明涉及一种新型抗体文库和使用所述抗体文库的抗体筛选方法，其中根据本发明的抗体文库具有某些源自人类序列的VH或VL支架，并因此具有展现出高热力学稳定性和实现高可溶性表达和可逆折叠的优势。
另外，根据本发明的抗体文库含有多种CDR，所述多种CDR被合理控制为对所有抗原具有高特异性和高亲和力并因此可用于选择候选抗体。
背景技术
抗体是通过刺激免疫系统中白细胞的B细胞(B淋巴细胞)中的抗原而产生的蛋白质。当抗体遇到抗原时，它通过细胞中存在的受体识别抗原，并使用所述受体与抗原结合。这种抗体被视为用于治疗疾病的新蛋白质药物的候选物，并且产生了多种抗体文库，并且从所述抗体文库筛选出抗体以找到目的功能性抗体。
这种抗体文库使用基因重组技术。从人体中存在的B细胞提取编码抗体蛋白质的基因，以产生抗体基因文库，并从这些文库选择具有所需抗原结合特异性的抗体。抗体文库技术已经彻底改变了抗体(如人类抗体)的产生。抗体免疫应答的最突出特征是，无论侵入身体的外部抗原的种类或形状如何，如果所述抗原是与身体中的成分不同的外来物质，则会在一周内产生与所述抗原特异性结合的抗体。
抗体由B淋巴细胞产生，并且一个B淋巴细胞仅产生一种类型的抗体。实际上，人体中存在多种类型的B淋巴细胞，每种类型的B淋巴细胞在细胞膜上表达具有其自身独特的抗原结合特异性的抗体，并且已知人体中存在大约108种抗原结合多样性。当抗原侵入时，只有表达与所述抗原特异性结合的抗体的B淋巴细胞迅速增殖并产生大量抗体。作为结果，这种特异性抗体在血清中的浓度迅速增加，并执行快速去除所述侵入抗原的功能。因此，人体中存在数以亿计的抗体多样性，并且这种抗体多样性被称为“抗体库”。
因此，通过采血从人体获得足够数量的B淋巴细胞，从这些细胞分离出mRNA，并且然后通过RT-PCR(逆转录聚合酶链反应)获得编码抗体重链和轻链可变区的cDNA。作为结果，可以以相对简单的方式以基因的形式在体外获取人体中的抗体库。抗体文库技术的核心是将这种人类抗体基因库表达(或展示)为蛋白质，编码所述抗体蛋白质的基因通过任何方式连接，即所谓的基因型-表型连接，并以此为基础，从所述抗体文库选择与特异性抗原结合的抗体，并且同时获得编码所述特异性抗体的基因。
在此，不需要完全的免疫，并且表达了具有抗原结合功能的抗体的Fab形式，或者表达了被称为“scFv(单链可变片段)”的抗体片段，其中重链和轻链可变结构域(VH和VL)通过约15个氨基酸的短肽接头连接。在这种情况下，将抗体文库技术根据具有表面的介质分为噬菌体展示、核糖体展示、酵母展示等，在用于基因型-表型连接的介质的表面上表达抗体，并且可以在无需诱导免疫应答(如抗原施用)的情况下获得具有所需抗原结合特性的抗体。
然而，缺点在于抗体文库产生和抗体筛选需要大量的专业技术，并且由于难以获得高亲和力抗体，常常在抗体筛选后进行抗体优化过程(如亲和力成熟化)，并且不利的是，由于诸如初步筛选期间的毒性的问题，无法在哺乳动物细胞中直接进行功能分析。在治疗性抗体的情况下，应选择并非简单地与抗原结合而是具有实际治疗功能的抗体，并且因此这种缺点已变成开发治疗性抗体的障碍。
噬菌体展示抗体文库是使用最广泛的抗体文库。实际上，当前可商购的Humira(抗TNF-α人类单克隆抗体)是使用噬菌体展示技术产生的治疗性抗体。理想的抗体文库展现出广泛的抗体多样性，并且使得能够随时获得具有所需抗原结合特异性的高亲和力抗体克隆。为此目的，应当产生具有约1010至约1011的抗体多样性的文库。然而，通过抗体基因克隆很难产生这种大小的文库，并且这是产生噬菌体展示抗体文库中最困难的挑战。另外，存在噬菌体本身充当毒素的缺点，因此无法立即进行功能分析。
核糖体展示的最大优点在于，它是一个无细胞系统并且因此能够轻松地产生文库，所述文库大到足以在理论上产生大小为1013的文库，这对于获得高亲和力抗体是有利的(通常，随着抗体文库大小的增加，文库中含有高亲和力抗体的可能性也会增加)，并且因为存在PCR扩增过程，所以可以使用容易出错的聚合酶，从而引入突变来人工诱导分子进化是非常简单的。然而，由于毒性问题和各种实验问题，事实上，噬菌体展示技术主要用于产生天然抗体文库。
由于将重组载体插入到酿酒酵母(S.cerevisiae)菌株中的过程以及酵母细胞的大尺寸，因此酵母展示技术在构建具有109或更高多样性的抗体文库方面存在许多技术局限性。因此，它主要用于构建已经利用选择过程中的优点确保的抗原特异性抗体的突变体文库，并且用于从所述文库选择高亲和力抗体。
其中噬菌体展示是一种通过在细菌噬菌体表面上表达抗体片段来筛选抗体的技术，并且与常规开发的抗体技术(使用杂交瘤开发嵌合/人源化抗体或使用转基因小鼠开发抗体)相比，具有在短时间内鉴定抗原特异性抗体的优点。噬菌体展示的缺点在于，只有在确保高度多样化的文库时才能鉴定出有效抗体。然而，基因扩增和克隆技术的最新发展已经解决了确保大型文库的问题。
与基于人类基因的天然文库相比，合成抗体文库是指通过将随机的合成序列引入到抗体的互补决定区(CDR)中而被赋予多样性的抗体文库。然而，与天然人类文库相比，由于突变或移码的影响，合成抗体文库具有较低比例的可正常运行的抗体片段。近年来，使用抗体文库鉴定新型靶抗原的策略已变得多样化，并且其中具有代表性的是，已经使用源自肿瘤的原代细胞通过细胞淘选来鉴定新型抗原特异性抗体(Zhu X.等人,Mol.CancerRes.2010)。
如上所述，由于各种方法策略的可能性可以确保连续的抗体候选物，并且可以通过克隆产生抗体，因此噬菌体展示是一种高效的方法策略。使用这种噬菌体展示技术鉴定出的靶向各种类型的癌症的候选抗体药物正在临床试验中。为了鉴定所需的抗体以利用噬菌体展示技术，必须从抗体可变区基因产生文库，并且构建各种文库是必不可少的。
尽管目前正在开发各种抗体文库，但对于能够选择对各种抗原具有高特异性和高亲和力的抗体的抗体文库的需求仍在增加，因为所述抗体文库具有高热力学稳定性，能够实现高可溶性表达并且具有高多样性。
在这一技术背景下，作为巨大努力的结果是，诸位发明人发现，当从亚洲人种和高加索人种的cDNA提取出共同序列并基于所述共同序列使用基于特异性VH和/或VL支架的组合的抗体文库时，所选择的抗体具有高热力学稳定性，并且能够实现高可溶性表达和可逆折叠。基于此发现，已完成了本发明。
此外，根据本发明的抗体文库含有多种CDR，所述多种CDR被合理地控制和设计为对所有抗原都具有高特异性和高亲和力，因此与天然抗体文库相比展现出优异的多样性和更低的重复序列比率，并且可以有效地用于选择针对靶抗原的合适的候选抗体。
此背景技术章节中公开的信息仅为更好地理解本发明的背景而提供，并且因此其可不包含形成对本领域技术人员而言已经清楚的现有技术的信息。
发明内容
因此，鉴于以上问题已完成了本发明，并且本发明的一个目的是提供一种用于筛选可以有效用于治疗或诊断疾病的人类抗体的抗体文库，以及一种使用所述抗体文库筛选抗体的方法。
根据本发明的一方面，以上和其他目的可以通过提供抗体或其片段集合来实现，其中每个抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区对，其中所述重链可变区包含框架区，所述框架区含于选自VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)和VH1-69(SEQ IDNO:11)的重链可变区中；以及对于每个重链可变区都不同的重链互补决定区1(CDRH1)、重链互补决定区2(CDRH2)和重链互补决定区3(CDRH3)的组合；并且所述轻链可变区包含框架区，所述框架区含于选自Vκ1-39(SEQ ID NO:16)、Vκ3-20(SEQ ID NO:21)、Vκ3-20-2(SEQID NO:26)和Vλ1-51(SEQ ID NO:31)的轻链可变区中；以及对于每个轻链可变区都不同的轻链互补决定区1(CDRL1)、轻链互补决定区2(CDRL2)和轻链互补决定区3(CDRL3)的组合。
编码包含在所述抗体或其片段集合中的各个抗体或其片段的核酸单独地包含在分开的噬菌体或宿主细胞中，并且所述抗体或其片段优选地各自在噬菌体或宿主细胞的表面表达，但本发明并不限于此。
根据本发明的另一方面，提供了编码所述抗体或其片段集合的核酸。编码所述抗体或其片段集合的核酸优选地单独地包含在分开的噬菌体或宿主细胞中，但本发明并不限于此。
根据本发明的另一方面，提供了一种鉴定对抗原具有特异性的抗体或其片段的方法，所述方法包括：(a)使抗原与所述抗体集合接触，以及(b)选择与所述抗原结合的一种或多种抗体或抗体片段。
附图说明
图1是显示了构建根据本发明的文库载体的过程的示意图。
图2是显示了在本发明的实施方案中构建的文库的重链互补决定区(CDRH3)的不同位置处的氨基酸分布的图。
图3是显示了在本发明的实施方案中构建的文库序列的重复序列的比率的分析结果的图。
图4显示了在本发明的实施方案中构建的文库的重链互补决定区(CDRH3)的长度的分布的分析结果。
具体实施方式
除非另有定义，否则本文使用的所有技术术语和科学术语的含义均具有与本发明所属领域的技术人员所理解的相同的含义。一般而言，本文使用的术语是本领域所熟知且通常使用的术语。
在本发明中，发现当使用三聚体密码子构建抗体文库，以确保VH和VL克隆具有高稳定性的框架区、使翻译后修饰(PTM)降至最低并且仅精确地合成使免疫原性降至最低的氨基酸时，可以构建出具有高多样性和高稳定性的抗体文库。
也就是说，在本发明的一个实施方案中，从亚洲人和高加索人cDNA的人类可变区中，获得重链可变区的VH1和VH3基因以及轻链可变区的Vκ1、Vκ3和Vλ1基因，并且对包含在人类抗体可变区中的互补决定区(CDR)的氨基酸的组合进行分析，并且特别是对每个具有9-14个长度的重链互补决定区3(CDRH3)进行分析。分析后获得的亚洲人和高加索人可变区氨基酸组合显示出相似性，没有显著差异，并且计算了固定的亚洲人和高加索人组合的平均值，并且然后将其反映在文库引物设计中。在重链互补决定区2(CDRH2)的情况下，发现由于所分析的组合中的N-X-S/T氨基酸，出现N-糖基化位点的可能性为5％，并且将出现N-糖基化位点的概率调整为1％或更低，以便防止PTM将来抑制抗体结合能力和稳定性。通过以上方法，设计了用于构建具有高多样性的文库的引物。作为基于所述引物构建Fab文库的结果，获得了具有1.54X1011的多样性的文库(图1)。
在一方面，本发明涉及抗体或其片段集合，其中每个抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区对，其中所述重链可变区包含框架区，所述框架区含于选自VH3-15(SEQ IDNO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)和VH1-69(SEQ ID NO:11)的重链可变区中；以及对于每个重链可变区都不同的重链互补决定区1(CDRH1)、重链互补决定区2(CDRH2)和重链互补决定区3(CDRH3)的组合；并且所述轻链可变区包含框架区，所述框架区含于选自Vκ1-39(SEQ IDNO:16)、Vκ3-20(SEQ ID NO:21)、Vκ3-20-2(SEQ ID NO:26)和Vλ1-51(SEQ ID NO:31)的轻链可变区中；以及对于每个轻链可变区都不同的轻链互补决定区1(CDRL1)、轻链互补决定区2(CDRL2)和轻链互补决定区3(CDRL3)的组合。
优选地，根据本发明的抗体或其片段集合包含：
框架区，所述框架区含于选自VH3-15(SEQ ID NO:1)/Vκ1-39(SEQ ID NO:16)、VH3-15(SEQ ID NO:1)/Vκ3-20(SEQ ID NO:21)、VH3-15(SEQ ID NO:1)/Vκ3-20-2(SEQ IDNO:26)、VH3-15(SEQ ID NO:1)/Vλ1-51(SEQ ID NO:31)、VH3-23(SEQ ID NO:6)/Vκ1-39(SEQ ID NO:16)、VH3-23(SEQ ID NO:6)/Vκ3-20(SEQ ID NO:21)、VH3-23(SEQ ID NO:6)/Vκ3-20-2(SEQ ID NO:26)、VH3-23(SEQ ID NO:6)/Vλ1-51(SEQ ID NO:31)、VH1-69(SEQ IDNO:11)/Vκ1-39(SEQ ID NO:16)、VH1-69(SEQ ID NO:11)/Vκ3-20(SEQ ID NO:21)、VH1-69(SEQ ID NO:11)/Vκ3-20-2(SEQ ID NO:26)和VH1-69(SEQ ID NO:11)/Vλ1-51(SEQ ID NO:31)的重链和轻链可变区对中，以及
对于每个重链可变区都不同的CDRH1、CDRH2和CDRH3的组合和对于每个轻链可变区都不同的CDRL1、CDRL2和CDRL3的组合。
另外，在根据本发明的抗体或其片段集合中，
在具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)的所述重链可变区中的所述框架区包含FR1(SEQ ID NO:2)、FR2(SEQ ID NO:3)、FR3(SEQ ID NO:4)和FR4(SEQ ID NO:5)，
在具有序列VH3-23(SEQ ID NO:6)的所述重链可变区中的所述框架区包含FR1(SEQ ID NO:7)、FR2(SEQ ID NO:8)、FR3(SEQ ID NO:9)和FR4(SEQ ID NO:10)，
在具有序列VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述框架区包含FR1(SEQ ID NO:12)、FR2(SEQ ID NO:13)、FR3(SEQ ID NO:14)和FR4(SEQ ID NO:15)，
在具有序列Vκ1-39(SEQ ID NO:16)的所述轻链可变区中的所述框架区包含FR1(SEQ ID NO:17)、FR2(SEQ ID NO:18)、FR3(SEQ ID NO:19)和FR4(SEQ ID NO:20)，
在具有序列Vκ3-20(SEQ ID NO:21)的所述轻链可变区中的所述框架区包含FR1(SEQ ID NO:22)、FR2(SEQ ID NO:23)、FR3(SEQ ID NO:24)和FR4(SEQ ID NO:25)，
在具有序列Vκ3-20-2(SEQ ID NO:26)的所述轻链可变区中的所述框架区包含FR1(SEQ ID NO:27)、FR2(SEQ ID NO:28)、FR3(SEQ ID NO:29)和FR4(SEQ ID NO:30)，并且
在具有序列Vλ1-51(SEQ ID NO:31)的所述轻链可变区中的所述框架区包含FR1(SEQ ID NO:32)、FR2(SEQ ID NO:33)、FR3(SEQ ID NO:34)和FR4(SEQ ID NO:35)。
所述抗体或其片段的特征可以在于，包含在所述重链可变区和所述轻链可变区的所述对的每个可变区中的互补决定区(CDR)被设计为通过改变有潜力进行翻译后修饰(PTM)的氨基酸来防止发生翻译后修饰。
特别地，关于包含在根据本发明的抗体或其片段集合中的CDR序列，
在具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区1(CDRH1)中的每个位置的氨基酸比率包括表3的范围，
在具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区2(CDRH2)中的每个位置的氨基酸比率包括表4的范围，
在具有序列VH3-23(SEQ ID NO:6)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区1(CDRH1)中的每个位置的氨基酸比率包括表3的范围，
在具有序列VH3-23(SEQ ID NO:6)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区2(CDRH2)中的每个位置的氨基酸比率包括表4的范围，
在具有序列VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区1(CDRH1)中的每个位置的氨基酸比率包括表5的范围，
在具有序列VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区2(CDRH2)中的每个位置的氨基酸比率包括表6的范围，
当具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)或VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区3(CDRH3)具有9个氨基酸时，所述CDRH3中每个位置的氨基酸比率包括表7的范围，
当具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)或VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区3(CDRH3)具有10个氨基酸时，所述CDRH3中每个位置的氨基酸比率包括表8的范围，
当具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)或VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区3(CDRH3)具有11个氨基酸时，所述CDRH3中每个位置的氨基酸比率包括表9的范围，
当具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)或VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区3(CDRH3)具有12个氨基酸时，所述CDRH3中每个位置的氨基酸比率包括表10的范围，
当具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)或VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区3(CDRH3)具有13个氨基酸时，所述CDRH3中每个位置的氨基酸比率包括表11的范围，
当具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)或VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区3(CDRH3)具有14个氨基酸时，所述CDRH3中每个位置的氨基酸比率包括表12的范围，
在具有序列Vκ1-39(SEQ ID NO:16)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区1(CDRL1)中的每个位置的氨基酸比率包括表13的范围，
在具有序列Vκ1-39(SEQ ID NO:16)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区2(CDRL2)中的每个位置的氨基酸比率包括表14的范围，
在具有序列Vκ1-39(SEQ ID NO:16)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区3(CDRL3)中的每个位置的氨基酸比率包括表15的范围，
在具有序列Vκ3-20(SEQ ID NO:21)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区1(CDRL1)中的每个位置的氨基酸比率包括表16的范围，
在具有序列Vκ3-20(SEQ ID NO:21)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区2(CDRL2)中的每个位置的氨基酸比率包括表17的范围，
在具有序列Vκ3-20(SEQ ID NO:21)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区3(CDRL3)中的每个位置的氨基酸比率包括表18的范围，
在具有序列Vκ3-20-2(SEQ ID NO:26)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区1(CDRL1)中的每个位置的氨基酸比率包括表19的范围，
在具有序列Vκ3-20-2(SEQ ID NO:26)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区2(CDRL2)中的每个位置的氨基酸比率包括表17的范围，
在具有序列Vκ3-20-2(SEQ ID NO:26)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区3(CDRL3)中的每个位置的氨基酸比率包括表18的范围，
在具有序列Vλ1-51(SEQ ID NO:31)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区1(CDRL1)中的每个位置的氨基酸比率包括表20的范围，
在具有序列Vλ1-51(SEQ ID NO:31)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区2(CDRL2)中的每个位置的氨基酸比率包括表21的范围，并且
在具有序列Vλ1-51(SEQ ID NO:31)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区3(CDRL3)中的每个位置的氨基酸比率包括表22的范围。
特别地，根据本发明的抗体或其片段集合具有选自以下i)至iv)的一种或多种特征：
i)10％或更低的冗余度(重复序列的百分比)；
ii)CDR组成的p值>0.05；
iii)70℃或更高的热稳定性；和
iv)107或更高的多样性(文库大小)。
如本文所用，术语“抗体”意指选自IgA、IgE、IgM、IgD、IgY和IgG并且能够与靶抗原特异性结合的免疫球蛋白。它由两条轻链和两条重链组成，并且每条链都包含具有可变氨基酸序列的可变结构域和具有恒定氨基酸序列的恒定结构域。抗原结合位点位于所述可变结构域的三维结构的末端，并且这一位点是通过组合存在于每条轻链和重链中的三个互补决定区而形成的。所述互补决定区是所述可变结构域之间的氨基酸序列中具有特别高的可变性的部分，并且由于这种高可变性，可以发现对各种抗原具有特异性的抗体。本发明的范围不仅包括完整的抗体形式，还包括抗体分子的抗原结合片段。
术语“完整抗体”是指具有两个全长轻链和两个全长重链的结构，其中每一轻链通过二硫键与相应重链连接。所述重链恒定结构域具有伽马(γ)、缪(μ)、阿尔法(α)、德耳塔(δ)和伊普西隆(ε)型，并且分为以下亚类：伽马1(γ1)、伽马2(γ2)、伽马3(γ3)、伽马4(γ4)、阿尔法1(α1)和阿尔法2(α2)。所述轻链的恒定结构域具有卡帕(κ)和兰布达(λ)型。
根据本发明的术语“抗原结合片段”是指具有结合抗原的能力的抗体片段，并且包括Fab、Fab′、F(ab′)2、scFv(scFv)2、scFv-Fc、Fv等。在本说明书中，术语“抗原结合片段”可与“抗体片段”互换使用，并且具有相同的含义。
在这些抗体片段中，Fab是指包含重链和轻链各自的可变结构域、轻链的恒定结构域和重链的第一恒定结构域(CH1)的结构，每个Fab具有一个抗原结合位点。Fab′与Fab的不同之处在于，其还包含铰链区，铰链区包含重链CH1结构域C末端的至少一个半胱氨酸残基。F(ab′)2是由Fab′铰链区中的半胱氨酸残基之间的二硫键产生。Fv是仅具有重链可变结构域和轻链可变结构域的最小抗体片段，并且用于产生Fv的重组技术披露于PCT国际公开案中，例如WO 88/10649、WO 88/106630、WO 88/07085、WO 88/07086和WO 88/09344。双链Fv是一片段，其中重链可变结构域和轻链可变结构域通过非共价键连接，并且单链Fv(scFv)是一片段，其中重链可变结构域和轻链可变结构域通常通过共价键经由其间的肽接头连接，或在C末端直接连接，形成像双链Fv一样的二聚体状结构。抗体片段可使用蛋白酶获得(例如，Fab可通过用木瓜蛋白酶限制性裂解完整抗体来获得，并且F(ab′)2片段可通过用胃蛋白酶限制性裂解完整抗体来获得)，并且可使用遗传重组技术来产生。
如本文所用，术语“ScFv”(单链Fv、单链片段抗体或抗体片段)是指其中轻链和重链的可变结构域已连接的抗体。在一些情况下，ScFv可以包含由具有约15个连接的氨基酸的肽链组成的接头(连接位点)，并且在这种情况下，ScFv可以具有包含轻链可变结构域、连接位点和重链可变结构域的结构，或包含重链可变结构域、连接位点和重链可变结构域的结构，并且具有与原始抗体相同或相似的抗原特异性。
如本文所用，术语“抗体文库”是指具有不同序列的多种抗体的组合，并且在本发明中意指特异性重链可变区和轻链可变区对的组合的集合。
编码包含在所述抗体文库中的各个抗体或其片段的核酸单独地包含在分开的噬菌体或宿主细胞中，并且所述抗体或其片段优选地各自在所述噬菌体或宿主细胞的表面上表达(展示)，但本发明并不限于此。
用于根据本发明的抗体或其片段的表面表达(展示)的宿主细胞的例子包括酵母，如大肠杆菌(Escherichia coli)、酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、巴斯德毕赤酵母(Pichia pastoris)以及人类和小鼠的B细胞，但不限于此。
取决于在所述噬菌体或宿主细胞的表面上表达的抗体或其片段的类型，根据本发明的文库可以被称为“Fab文库”或“scFv文库”。
另外，如本文所用，术语“抗体文库”不仅意指在蛋白质水平上的特异性重链可变区和轻链可变区对的组合，还意指在编码每个特异性重链可变区和轻链可变区对的基因水平上的组合。
为了从抗体文库分离对抗原具有特异性的抗体，需要非常高的多样性，并且构建和使用由不同抗体克隆组成的文库。可以将构成这种抗体文库的抗体基因克隆到例如噬菌粒载体中，并转化到转化子(宿主细胞，如大肠杆菌)中。
如本文所用，术语“核酸”可以与“基因”或“核苷酸”互换使用，并且可以例如选自天然/合成DNA、基因组DNA、天然/合成RNA、cDNA和cRNA，但并不限于此。
如本文所用，术语“噬菌粒”载体是指用于噬菌体展示并且具有噬菌体复制起点的质粒DNA，并且通常具有抗生素抗性基因作为选择标记。用于噬菌体展示的噬菌粒载体包含M13噬菌体的gIII基因或其一部分，并且ScFv基因连接至gIII基因的5′端并通过转化子表达。
如本文所用，术语“辅助噬菌体”是指提供必要的遗传信息以便将噬菌粒包装成噬菌体颗粒的噬菌体。由于噬菌粒中仅存在噬菌体基因的gIII或其一部分，因此用噬菌粒转化的宿主细胞(转化子)被辅助噬菌体感染，从而提供其余的噬菌体基因。存在类型(如M13K07或VCSM13)，并且其大多数都包含抗生素抗性基因(如卡那霉素)，从而可以选择感染了辅助噬菌体的转化子。另外，因为包装信号有缺陷，所以将噬菌粒基因而不是辅助噬菌体基因选择性地包装到噬菌体颗粒中。
如本文所用，术语“信号序列”是指碱基序列或与其对应的氨基酸序列，其位于基因的5′端，并且当从所述基因编码的蛋白质被分泌到外部时起到必要信号的作用。
如本文所用，“噬菌体展示”是用于展示突变体多肽的技术，突变体多肽作为与例如噬菌体(例如纤维状噬菌体)颗粒表面上的外壳蛋白的至少一部分的融合蛋白。噬菌体展示的有用性在于，在大型随机化蛋白质突变体文库中快速且有效地对以高亲和力与靶抗原结合的序列进行分类。已使用在噬菌体上展示肽和蛋白质文库来筛选数百万个多肽，以鉴定具有特异性结合性质的多肽。
噬菌体展示技术已提供用于产生和筛选与特异性配体(例如，抗原)结合的新型蛋白质的有效工具。使用噬菌体展示技术，可产生大型蛋白质突变体文库，并且可对以高亲和力与靶抗原结合的序列进行快速分类。将编码突变体多肽的核酸与编码病毒外壳蛋白(例如，基因III或基因VIII蛋白)的核酸序列融合。已研发出单相噬菌体展示系统，其中编码蛋白质或多肽的核酸序列与编码基因III蛋白的一部分的核酸序列融合。在单相展示系统中，融合基因以低水平表达，并且还表达野生型基因III蛋白，并由此维持颗粒感染性。
对于抗体噬菌体展示文库的开发，重要的是证明肽在纤维状噬菌体表面上的表达以及功能性抗体片段在大肠杆菌(E.coli)的外周细胞质中的表达。通过多种方法(例如通过插入随机DNA序列或克隆相关基因序列来修饰单一基因的方法)制备抗体结合多肽或抗原结合多肽的文库。可针对具有所需特征的抗体结合蛋白或抗原结合蛋白的表达对文库加以筛选。
对于产生具有所需特征的抗体，噬菌体展示技术相对于常规杂交瘤和重组方法具有若干优点。这种技术可在不使用动物的情况下，在短时间内产生具有多个序列的大型抗体文库。杂交瘤的产生和人源化抗体的产生可能需要数月的产生时间。另外，由于不需要免疫力，噬菌体抗体文库能够产生针对具有未致敏的毒性或具有低抗原性的抗原的抗体。噬菌体抗体文库还可用于产生和鉴定新型治疗性抗体。
可以使用利用噬菌体展示文库从被免疫的人、未被免疫的人、种系序列或未致敏的B细胞Ig库产生人类抗体的技术。可以使用各种淋巴组织产生未致敏的或非免疫原性的抗原结合文库。
用于从噬菌体展示文库鉴定和分离高亲和力抗体的技术对于分离新的治疗性抗体是重要的。从文库分离高亲和力抗体取决于文库大小、细菌细胞中的生产效率和文库的多样性。文库的大小会因抗体结合蛋白或抗原结合蛋白的不当折叠和由于存在终止密码子所致的无效产生而降低。在抗体结合结构域或抗原结合结构域没有正确折叠时，可抑制在细菌细胞中的表达。可以通过使可变/恒定界面表面上的残基或所选CDR残基交替突变来改善表达。在细菌细胞中产生抗体噬菌体文库时，框架区序列是提供适当折叠的元件。
在高亲和力抗体的分离中，重要的是生成抗体结合蛋白或抗原结合蛋白的多个文库。发现CDR3区经常参与抗原结合。由于重链上的CDR3区在大小、序列和结构/维度形态方面显著变化，可使用其来制备多个文库。
还可通过在每一位置使用所有20种氨基酸随机化可变重链和轻链的CDR区来产生多样性。使用所有20种氨基酸得到具有极大多样性的抗体序列，并增加鉴定出新抗体的机会。
如本文所用，术语“抗体可变结构域”是指抗体分子的轻链区和重链区，轻链区和重链区包含互补决定区(CDR；即，CDR1、CDR2和CDR3)和框架区(FR)的氨基酸序列。VH是指重链的可变结构域。VL是指轻链的可变结构域。
术语“互补决定区”(CDR；即CDR1、CDR2和CDR3)是指抗体可变结构域的氨基酸残基，其对于抗原结合是必需的。每个可变结构域通常具有三个CDR区，鉴定为CDR1、CDR2和CDR3。
术语“框架区”(FR)是指除了CDR残基以外的可变结构域残基。每个可变结构域通常具有四个FR，鉴定为FR1、FR2、FR3和FR4。
优选地，根据本发明的抗体或其片段集合包含：
框架区，所述框架区含于选自VH3-15(SEQ ID NO:1)/Vκ1-39(SEQ ID NO:16)、VH3-15(SEQ ID NO:1)/Vκ3-20(SEQ ID NO:21)、VH3-15(SEQ ID NO:1)/Vκ3-20-2(SEQ IDNO:26)、VH3-15(SEQ ID NO:1)/Vλ1-51(SEQ ID NO:31)、VH3-23(SEQ ID NO:6)/Vκ1-39(SEQ ID NO:16)、VH3-23(SEQ ID NO:6)/Vκ3-20(SEQ ID NO:21)、VH3-23(SEQ ID NO:6)/Vκ3-20-2(SEQ ID NO:26)、VH3-23(SEQ ID NO:6)/Vλ1-51(SEQ ID NO:31)、VH1-69(SEQ IDNO:11)/Vκ1-39(SEQ ID NO:16)、VH1-69(SEQ ID NO:11)/Vκ3-20(SEQ ID NO:21)、VH1-69(SEQ ID NO:11)/Vκ3-20-2(SEQ ID NO:26)和VH1-69(SEQ ID NO:11)/Vλ1-51(SEQ ID NO:31)的重链和轻链可变区对中，以及对于每个重链可变区都不同的CDRH1、CDRH2和CDRH3的组合和对于每个轻链可变区都不同的CDRL1、CDRL2和CDRL3的组合。
在本发明中，在具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)的所述重链可变区中的所述框架区包含FR1(SEQ ID NO:2)、FR2(SEQ ID NO:3)、FR3(SEQ ID NO:4)和FR4(SEQ ID NO:5)，
在具有序列VH3-23(SEQ ID NO:6)的所述重链可变区中的所述框架区包含FR1(SEQ ID NO:7)、FR2(SEQ ID NO:8)、FR3(SEQ ID NO:9)和FR4(SEQ ID NO:10)，
在具有序列VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述框架区包含FR1(SEQ ID NO:12)、FR2(SEQ ID NO:13)、FR3(SEQ ID NO:14)和FR4(SEQ ID NO:15)，
在具有序列Vκ1-39(SEQ ID NO:16)的所述轻链可变区中的所述框架区包含FR1(SEQ ID NO:17)、FR2(SEQ ID NO:18)、FR3(SEQ ID NO:19)和FR4(SEQ ID NO:20)，
在具有序列Vκ3-20(SEQ ID NO:21)的所述轻链可变区中的所述框架区包含FR1(SEQ ID NO:22)、FR2(SEQ ID NO:23)、FR3(SEQ ID NO:24)和FR4(SEQ ID NO:25)，
在具有序列Vκ3-20-2(SEQ ID NO:26)的所述轻链可变区中的所述框架区包含FR1(SEQ ID NO:27)、FR2(SEQ ID NO:28)、FR3(SEQ ID NO:29)和FR4(SEQ ID NO:30)，并且
在具有序列Vλ1-51(SEQ ID NO:31)的所述轻链可变区中的所述框架区包含FR1(SEQ ID NO:32)、FR2(SEQ ID NO:33)、FR3(SEQ ID NO:34)和FR4(SEQ ID NO:35)。
本发明的重链可变区、轻链可变区和每个可变区内的框架区的序列总结如下：
[表1]
可变区和框架区的氨基酸序列
[表2]
编码可变区和框架区的核酸序列
在本发明中，所述抗体或其片段的特征可以在于，包含在所述重链可变区和所述轻链可变区的所述对的每个可变区中的互补决定区(CDR)被设计为通过改变有潜力进行翻译后修饰(PTM)的氨基酸来防止发生翻译后修饰。
在本发明中，在具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区1(CDRH1)中的每个位置的氨基酸比率包括表3的范围，
在具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区2(CDRH2)中的每个位置的氨基酸比率包括表4的范围，
在具有序列VH3-23(SEQ ID NO:6)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区1(CDRH1)中的每个位置的氨基酸比率包括表3的范围，
在具有序列VH3-23(SEQ ID NO:6)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区2(CDRH2)中的每个位置的氨基酸比率包括表4的范围，
在具有序列VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区1(CDRH1)中的每个位置的氨基酸比率包括表5的范围，
在具有序列VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区2(CDRH2)中的每个位置的氨基酸比率包括表6的范围，
当具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)或VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区3(CDRH3)具有9个氨基酸时，所述CDRH3中每个位置的氨基酸比率包括表7的范围，
当具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)或VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区3(CDRH3)具有10个氨基酸时，所述CDRH3中每个位置的氨基酸比率包括表8的范围，
当具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)或VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区3(CDRH3)具有11个氨基酸时，所述CDRH3中每个位置的氨基酸比率包括表9的范围，
当具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)或VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区3(CDRH3)具有12个氨基酸时，所述CDRH3中每个位置的氨基酸比率包括表10的范围，
当具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)或VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区3(CDRH3)具有13个氨基酸时，所述CDRH3中每个位置的氨基酸比率包括表11的范围，
当具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)或VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区3(CDRH3)具有14个氨基酸时，所述CDRH3中每个位置的氨基酸比率包括表12的范围，
在具有序列Vκ1-39(SEQ ID NO:16)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区1(CDRL1)中的每个位置的氨基酸比率包括表13的范围，
在具有序列Vκ1-39(SEQ ID NO:16)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区2(CDRL2)中的每个位置的氨基酸比率包括表14的范围，
在具有序列Vκ1-39(SEQ ID NO:16)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区3(CDRL3)中的每个位置的氨基酸比率包括表15的范围，
在具有序列Vκ3-20(SEQ ID NO:21)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区1(CDRL1)中的每个位置的氨基酸比率包括表16的范围，
在具有序列Vκ3-20(SEQ ID NO:21)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区2(CDRL2)中的每个位置的氨基酸比率包括表17的范围，
在具有序列Vκ3-20(SEQ ID NO:21)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区3(CDRL3)中的每个位置的氨基酸比率包括表18的范围，
在具有序列Vκ3-20-2(SEQ ID NO:26)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区1(CDRL1)中的每个位置的氨基酸比率包括表19的范围，
在具有序列Vκ3-20-2(SEQ ID NO:26)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区2(CDRL2)中的每个位置的氨基酸比率包括表17的范围，
在具有序列Vκ3-20-2(SEQ ID NO:26)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区3(CDRL3)中的每个位置的氨基酸比率包括表18的范围，
在具有序列Vλ1-51(SEQ ID NO:31)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区1(CDRL1)中的每个位置的氨基酸比率包括表20的范围，
在具有序列Vλ1-51(SEQ ID NO:31)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区2(CDRL2)中的每个位置的氨基酸比率包括表21的范围，并且
在具有序列Vλ1-51(SEQ ID NO:31)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区3(CDRL3)中的每个位置的氨基酸比率包括表22的范围，但并不限于此。
[表3]
[表4]
[表5]
[表6]
[表7]
[表8]
[表9]
[表10]
[表11]
[表12]
[表13]
[表14]
[表15]
[表16]
[表17]
[表18]
[表19]
[表20]
[表21]
[表22]
在本发明中，在具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区1(CDRH1)中的每个位置的氨基酸比率包括表23的范围，
在具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区2(CDRH2)中的每个位置的氨基酸比率包括表24的范围，
在具有序列VH3-23(SEQ ID NO:6)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区1(CDRH1)中的每个位置的氨基酸比率包括表23的范围，
在具有序列VH3-23(SEQ ID NO:6)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区2(CDRH2)中的每个位置的氨基酸比率包括表24的范围，
在具有序列VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区1(CDRH1)中的每个位置的氨基酸比率包括表25的范围，
在具有序列VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区2(CDRH2)中的每个位置的氨基酸比率包括表26的范围，
当具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)或VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区3(CDRH3)具有9个氨基酸时，所述CDRH3中每个位置的氨基酸比率包括表27的范围，
当具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)或VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区3(CDRH3)具有10个氨基酸时，所述CDRH3中每个位置的氨基酸比率包括表28的范围，
当具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)或VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区3(CDRH3)具有11个氨基酸时，所述CDRH3中每个位置的氨基酸比率包括表29的范围，
当具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)或VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区3(CDRH3)具有12个氨基酸时，所述CDRH3中每个位置的氨基酸比率包括表30的范围，
当具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)或VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区3(CDRH3)具有13个氨基酸时，所述CDRH3中每个位置的氨基酸比率包括表31的范围，
当具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)或VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区3(CDRH3)具有14个氨基酸时，所述CDRH3中每个位置的氨基酸比率包括表32的范围，
在具有序列Vκ1-39(SEQ ID NO:16)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区1(CDRL1)中的每个位置的氨基酸比率包括表33的范围，
在具有序列Vκ1-39(SEQ ID NO:16)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区2(CDRL2)中的每个位置的氨基酸比率包括表34的范围，
在具有序列Vκ1-39(SEQ ID NO:16)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区3(CDRL3)中的每个位置的氨基酸比率包括表35的范围，
在具有序列Vκ3-20(SEQ ID NO:21)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区1(CDRL1)中的每个位置的氨基酸比率包括表36的范围，
在具有序列Vκ3-20(SEQ ID NO:21)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区2(CDRL2)中的每个位置的氨基酸比率包括表37的范围，
在具有序列Vκ3-20(SEQ ID NO:21)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区3(CDRL3)中的每个位置的氨基酸比率包括表38的范围，
在具有序列Vκ3-20-2(SEQ ID NO:26)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区1(CDRL1)中的每个位置的氨基酸比率包括表39的范围，
在具有序列Vκ3-20-2(SEQ ID NO:26)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区2(CDRL2)中的每个位置的氨基酸比率包括表37的范围，
在具有序列Vκ3-20-2(SEQ ID NO:26)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区3(CDRL3)中的每个位置的氨基酸比率包括表38的范围，
在具有序列Vλ1-51(SEQ ID NO:31)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区1(CDRL1)中的每个位置的氨基酸比率包括表40的范围，
在具有序列Vλ1-51(SEQ ID NO:31)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区2(CDRL2)中的每个位置的氨基酸比率包括表41的范围，并且
在具有序列Vλ1-51(SEQ ID NO:31)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区3(CDRL3)中的每个位置的氨基酸比率包括表42的范围，但并不限于此。
[表23]
[表24]
[表25]
[表26]
[表27]
[表28]
[表29]
[表30]
[表31]
[表32]
[表33]
[表34]
[表35]
[表36]
[表37]
[表38]
[表39]
[表40]
[表41]
[表42]
在本发明中，抗体的片段可以具有选自Fab、F(ab′)2、Fab′、Fv和scFv的一种或多种形式，但并不限于此。
根据本发明的抗体或其片段可以具有选自以下的一种或多种特征：i)10％或更低的冗余度(重复序列的百分比)；ii)CDR组成的p值>0.05；iii)70℃或更高的热稳定性；和iv)107或更高的多样性(文库大小)。
在另一方面，本发明涉及编码抗体或其片段集合的核酸。
在另一方面，本发明涉及一种鉴定对抗原具有特异性的抗体或其片段的方法，所述方法包括：(a)使抗原与所述抗体集合接触，以及(b)选择与所述抗原结合的一种或多种抗体或抗体片段。
在本发明中，所述抗体集合可以在所述噬菌体的表面上表达，所述噬菌体被包含在引入了编码所述抗体集合的核酸的转化子中，但并不限于此。
在本发明中，所述鉴定方法可以包括：培养所述文库的转化子和噬菌体，将在所述噬菌体表面上表达的抗体与抗原结合，以及筛选和选择表达所需抗体的转化子。所述筛选和选择可以使用本领域中的各种技术进行。
例如，可以通过使用淘选法从所述文库分离来产生与特异性抗原结合的抗体。所述淘选包括：将噬菌体与靶抗原结合，去除未结合的噬菌体，回收结合的噬菌体，用所述噬菌体感染宿主细胞以扩增噬菌体数量，以及重复这一过程2-4次。
实施例
在下文中，将参考实施例更详细地描述本发明。然而，对本领域技术人员明显的是，提供这些实施例仅用于说明本发明，而不应解释为限制本发明的范围。
实施例1)亚洲人和高加索人的人类可变区cDNA的获取。
为了分析亚洲人和高加索人的人类抗体可变区CDR的氨基酸组合，通过实验室中的研究人员的献血(在实施IRB之前)从PBMC分化出B细胞首先获得了亚洲人的人类信使RNA。本文使用的高加索人信使RNA是由Clontech Laboratories Inc.生产的人类脾总RNA(目录号636525，批号1107171A)。使用ImProm-II反转录系统(Promega，目录号A3802)，将获得的亚洲人和高加索人信使RNA转换为cDNA。为了从获得的cDNA得到人类可变区基因，使用亚洲人和高加索人cDNA作为模板，将正向引物(表43：SEQ ID NO:71)和反向引物(表43：SEQID NO:72)添加到VH1类型，将正向引物(表43：SEQ ID NO:73)和反向引物(表43：SEQ IDNO:72)添加到VH3类型，将正向引物(表43：SEQ ID NO:74)和反向引物(表43：SEQ ID NO:75)添加到Vκ1类型，将正向引物(表43：SEQ ID NO:76)和反向引物(表43：SEQ ID NO:75)添加到Vκ3类型，并且将正向引物(表43：SEQ ID NO:77)和反向引物(表43：SEQ ID NO:78)添加到Vλ1类型，并且然后使用铂混合聚合酶(Invitrogen，目录号11306)，针对cDNA和引物的每种混合物进行PCR。PCR条件如下：在94℃下暴露3分钟，随后重复25次循环，每次循环包括：在94℃下暴露1分钟，在55℃下暴露1分钟并且在72℃下暴露2分钟，并且然后在72℃下反应10分钟。将扩增的基因鉴定为在1％琼脂糖凝胶中具有预期大小的DNA条带，并分别使用凝胶提取试剂盒(QIAquick凝胶提取试剂盒，QIAGEN，目录号28706)进行分离。
[表43]
| 名称 | 序列 | SEQ ID NO |
| VH1 Fo | CARGTGCAGCTKGTGCAGTCTGG | 71 |
| JH Re_cDNA | TGAGGAGACGGTGACCAGGGTGCC | 72 |
| VH3 Fo | GARGTGCAGCTGGTGGAGTCTGG | 73 |
| Vκ1Fo | GACATCCAGATGACCCAGTCTCC | 74 |
| Jk Re_cDNA | ACGTTTGATTTCCACCTTGGTCCC | 75 |
| Vκ3Fo | GAAATWGTGWTGACRCAGTCTCC | 76 |
| VλFo | CAGTCTGTGYTGACKCAGCCGCC | 77 |
| JλRe_cDNA | ACCTAGGACGGTCAGCTTGGTCCC | 78 |
实施例2)构建亚洲人和高加索人的人类抗体可变区文库用于高通量测序。
为了对在实施例1中获得的亚洲人和高加索人cDNA进行高通量测序，进行PCR以连接用于鉴定各个类型的条形码。首先，关于亚洲人cDNA，将正向引物(表44：SEQ ID NO:79)和反向引物(表44：SEQ ID NO:89)作为模板添加到亚洲人VH1 cDNA，将正向引物(表44：SEQID NO:80)和反向引物(表44：SEQ ID NO:89)添加到VH3类型，将正向引物(表44：SEQ IDNO:81)和反向引物(表44：SEQ ID NO:90)添加到Vκ1类型，将正向引物(表44：SEQ ID NO:81)和反向引物(表44：SEQ ID NO:90)添加到Vκ3类型，将正向引物(表44：SEQ ID NO:83)和反向引物(表44：SEQ ID NO:91)添加到Vλ1类型，并且然后使用prime star混合物(Takara，目录号R040B)对cDNA和引物的每种混合物进行PCR。PCR条件如下：在94℃下暴露2分钟，随后重复10次循环，每次循环包括：在94℃下暴露15分钟，在55℃下暴露15分钟并且在72℃下暴露30分钟，并且在72℃下反应5分钟。将扩增的基因鉴定为在1％琼脂糖凝胶中具有预期大小的DNA条带，并单独使用凝胶提取试剂盒(QIAquick凝胶提取试剂盒，QIAGEN，目录号28706)进行分离。关于高加索人cDNA，将正向引物(表44：SEQ ID NO:84)和反向引物(表44：SEQ ID NO:89)作为模板添加到高加索人VH1 cDNA，将正向引物(表44：SEQ ID NO:85)和反向引物(表44：SEQ ID NO:89)添加到VH3类型，将正向引物(表44：SEQ ID NO:86)和反向引物(表44：SEQ ID NO:90)添加到Vκ1类型，将正向引物(表44：SEQ ID NO:87)和反向引物(表44：SEQ ID NO:90)添加到Vκ3类型，并且将正向引物(表44：SEQ ID NO:88)和反向引物(表44：SEQ ID NO:91)添加到Vλ1类型，并且然后使用prime star混合物(Takara，目录号R040B)对cDNA和引物的每种混合物进行PCR。PCR条件如下：在94℃下暴露2分钟，随后重复10次循环，每次循环包括：在94℃下暴露15分钟，在55℃下暴露15分钟并且在72℃下暴露30分钟，并且然后在72℃下反应5分钟。将扩增的基因鉴定为在1％琼脂糖凝胶中具有预期大小的DNA条带，并各自使用凝胶提取试剂盒(QIAquick凝胶提取试剂盒，QIAGEN，目录号28706)进行分离。
由Macrogen(韩国首尔九老区)使用454测序(GS FLX Titanium，Roche)方法以表45中所示的数量对所获得的亚洲人和高加索人基因进行测序。基于表46中所示的氨基酸，针对CDR1、CDR2和CDR3分析序列的CDR氨基酸的组成比率。
[表44]
实施例3)高通量测序数据分析和基于其的引物设计
通过高通量测序，针对每个人种和类型获得了多于10000个人类可变区序列(表45)。为了检测所获得的人类可变区序列之间的CDR区的氨基酸组合，针对VH1类型的CDR1，分析丝氨酸-半胱氨酸(Kabat编号22、23)与色氨酸-缬氨酸(Kabat编号36、37)之间的区域；针对VH1类型的CDR2，分析谷氨酸-色氨酸(Kabat编号47、48)与精氨酸-随机-苏氨酸(Kabat编号67、68、69)之间的区域；并且针对VH1类型的CDR3，分析酪氨酸-酪氨酸-半胱氨酸(Kabat编号90、91、92)与甘氨酸-苏氨酸-亮氨酸(Kabat编号103、104、105)之间的区域。针对VH3类型的CDR1，分析丝氨酸-半胱氨酸(Kabat编号22、23)与色氨酸-缬氨酸(Kabat编号36、37)之间的区域；针对VH3类型的CDR2，分析谷氨酸-色氨酸(Kabat编号47、48)与赖氨酸-甘氨酸-精氨酸(Kabat编号67、68、69)之间的区域；并且针对VH3类型的CDR3，分析酪氨酸-酪氨酸-半胱氨酸(Kabat编号90、91、92)与甘氨酸-苏氨酸-亮氨酸(Kabat编号103、104、105)之间的区域。针对Vκ1类型的CDR1，分析异亮氨酸-随机-半胱氨酸(Kabat编号21、22、23)与色氨酸-酪氨酸(Kabat编号35、36)之间的区域；针对Vκ1类型的CDR2，分析异亮氨酸-酪氨酸(Kabat编号48、49)与甘氨酸-缬氨酸(Kabat编号57、58)之间的区域；并且针对Vκ1类型的CDR3，分析酪氨酸-酪氨酸-半胱氨酸(Kabat编号86、87、88)与甘氨酸-苏氨酸-赖氨酸(Kabat编号101、102、103)之间的区域。针对Vκ3的CDR1，分析丝氨酸-半胱氨酸(Kabat编号22、23)与色氨酸-酪氨酸(Kabat编号35、36)之间的区域；针对Vκ3的CDR2，分析亮氨酸-异亮氨酸(Kabat编号47、48)与异亮氨酸-脯氨酸(Kabat编号58、59)之间的区域；并且针对Vκ3的CDR3，分析酪氨酸-酪氨酸-半胱氨酸(Kabat编号86、87、88)与甘氨酸-苏氨酸-赖氨酸(Kabat编号101、102、103)之间的区域。针对Vλ1的CDR1，分析丝氨酸-半胱氨酸(Kabat编号22、23)与色氨酸-酪氨酸(Kabat编号35、36)之间的区域；针对Vλ1的CDR2，分析亮氨酸-异亮氨酸(Kabat编号47、48)与丝氨酸-甘氨酸(Kabat编号56、57)之间的区域；并且针对Vλ1的CDR3，分析酪氨酸-酪氨酸-半胱氨酸(Kabat编号86、87、88)与甘氨酸-苏氨酸-赖氨酸(Kabat编号101、102、103)之间的区域(表46)。VH1类型和VH3类型具有多种长度的CDR3，因此在分析9至14个氨基酸中的每一个后鉴定出氨基酸组合，所述9至14个氨基酸是在基于常规文献产生合成文库时能够实现最高效的抗体选择的长度。
分析结果显示，亚洲人和高加索人CDR氨基酸组合之间没有发现显著差异，即它们非常相似。VH的CDR1和CDR2具有多种氨基酸组合，但以比CDR3更高的保守率含有氨基酸。这是因为这些是没有V-D-J接合的V基因区，因此引入突变的可能性比CDR3的情况更低，并且由于存在影响结构稳定性的残基编号而具有应保留的氨基酸。在VH1的CDR3与VH3的CDR3之间没有发现显著差异，并且发现它们具有相似的氨基酸组合。这是因为VH1和VH3的V基因末端通常保留为酪氨酸-酪氨酸-半胱氨酸-丙氨酸-精氨酸/赖氨酸，并且在V-D-J接合期间将相同的基因应用于D基因和J基因。
根据分析结果，计算亚洲人和高加索人CDR氨基酸的组合的平均值，并将其反映在引物密码子设计中。另外，由于VH1和VH3的CDR3相似，因此共享构成CDR3的引物。另外，由于N-糖基化，存在抗体滴度降低的风险，因为具有Kabat编号52-52a-53的VH1的CDR2与具有Kabat编号52a-53-54的VH3的CDR2的氨基酸NXS/T比率为约5％。为此，通过将VH1的52和VH3的52a处的天冬酰胺的比率降低至0％，消除了N-糖基化的可能性。
[表45]
[表46]
| 1 | 2 | 3 | |
| 亚洲人VH1 | SC-WV | EW-RXT | YYC-GTL |
| 亚洲人VH3 | SC-WV | EW-KGR | YYC-GTL |
| 亚洲人Vκ1 | IXC-WY | IY-GV | YYC-GTK |
| 亚洲人Vκ3 | SC-WY | LI-IP | YYC-GTK |
| 亚洲人Vλ1 | SC-WY | LI-SG | YYC-GTK |
| 高加索人VH1 | SC-WV | EW-RXT | YYC-GTL |
| 高加索人VH3 | SC-WV | EW-KGR | YYC-GTL |
| 高加索人Vκ1 | IXC-WY | IY-GV | YYC-GTK |
| 高加索人Vκ3 | SC-WY | LI-IP | YYC-GTK |
| 高加索人Vλ1 | SC-WY | LI-SG | YYC-GTK |
实施例4)Fab文库的构建
4-1)轻链可变区文库的构建
1)VL框架序列合成：人类VLκ1-39、VLκ3-20和VLλ1-51的框架1至框架3的序列(表47)是根据要求通过Bioneer(http://www.bioneer.co.kr)合成的，并由此获取。
[表47]
2)初次PCR扩增(片段PCR)：使用每个框架序列为模板(5ng/反应)，通过PCR扩增VLCDR1至CDR3片段(片段1至3)。在PCR中使用的引物序列如表48所示。在以上序列中，数字X意指3个碱基，并且在序列表文件中，这被指示为“NNN”。使用AccuPower Pfu PCR PreMix(Bioneer，K-2025)进行反应，持续30个循环(在95℃下30秒，在50℃至58℃下30秒，在72℃下1分钟)。将每种PCR产物进行电泳，并且然后使用QIAquick凝胶提取试剂盒(QIAGEN，目录号28706)进行纯化。
[表48]
将SEQ ID NO:93(Vκ1-39-F1)、SEQ ID NO:98(Vκ3-20-F1)和SEQ ID NO:103(Vκ3-20-2-F1)的N1至N8设计为具有下表49所示的碱基比率，并进行PCR。
[表49]
将SEQ ID NO:93(Vκ1-39-F1)、SEQ ID NO:98(Vκ3-20-F1)和SEQ ID NO:103(Vκ3-20-2-F1)的X1至X16设计为具有下表50所示的密码子比率，并进行PCR。
[表50]
将SEQ ID NO:95(Vκ1-39-F2)的N设计为具有下表51所示的碱基比率，并进行PCR。
[表51]
将SEQ ID NO:95(Vκ1-39-F2)的X设计为具有下表52所示的密码子比率，并进行PCR。
[表52]
将SEQ ID NO:100(Vκ3-20-F2)的N设计为具有下表53所示的碱基比率，并进行PCR。
[表53]
将SEQ ID NO:100(Vκ3-20-F2)的X设计为具有下表54所示的密码子比率，并进行PCR。
[表54]
将SEQ ID NO:97(VLκ1-39_F3)和SEQ ID NO:102(VLκ3-20_F3)的N设计为具有下表55所示的碱基比率，并进行PCR。
[表55]
将SEQ ID NO:97(VLκ1-39_F3)和SEQ ID NO:102(VLκ3-20_F3)的X设计为具有下表56所示的密码子比率，并进行PCR。
[表56]
将SEQ ID NO:104(VLλ1-51_F1)的N设计为具有下表57所示的碱基比率，并进行PCR。
[表57]
将SEQ ID NO:104(VLλ1-51_F1)的X设计为具有下表58所示的密码子比率，并进行PCR。
[表58]
将SEQ ID NO:106(VLλ1-51_F2)的X设计为具有下表59所示的密码子比率，并进行PCR。
[表59]
将SEQ ID NO:108(VLλ1-51_F3)的X设计为具有下表60所示的密码子比率，并进行PCR。
[表60]
3)第二次PCR扩增(第1次重叠PCR)：将初次PCR产物(片段1至3)作为模板添加(每个片段20ng/反应)，并且进行反应，持续16个循环(在95℃下30秒，在55℃下30秒，在72℃下1分钟)。用于PCR的引物序列如表61所示。将各个PCR产物(可变轻链)进行电泳，并且然后使用QIAquick凝胶提取试剂盒(QIAGEN，目录号28706)进行纯化。
[表61]
4)第三次PCR扩增(第2次重叠PCR)：称取纯化的第1次重叠PCR产物，并将其作为模板(每种产物10mg/反应)与VLκ1-39、VLκ3-20和VLκ3-20-2的CLκ(片段PCR产物)一起以及与VLλ1-51的CLλ(片段PCR产物)一起使用，并且进行反应，持续15个循环(95℃下1分钟，55℃下1分钟，72℃下1分钟)。在PCR中使用的引物序列如表62所示。将各个PCR产物进行电泳，并且然后使用QIAquick凝胶提取试剂盒(QIAGEN，目录号28706)进行纯化。
[表62]
5)VL文库转化
5-a)连接：将EcoRI(NEB，目录号R0101L)添加到可变轻链(VL)和恒定轻链(CL)区的重叠PCR产物中，在37℃下反应过夜(O/N)，并且然后使用QIAquick PCR纯化试剂盒(QIAGEN，目录号28106)纯化所得物。向其中添加XbaI(NEB，目录号R0145L)，随后在37℃下反应过夜(O/N)并使用QIAquick PCR纯化试剂盒(QIAGEN，目录号28106)进行纯化。将T4DNA连接酶(NEB，目录号M0203S)添加到20μg用EcoRI和XbaI切割的插入DNA片段和40μg线性化的pComb3XTT载体(EcoRI、XbaI切割的)中，随后在25℃下反应过夜(O/N)。
5-b)转化：使用QIAquick PCR纯化试剂盒(QIAGEN，目录号28106)纯化所连接的反应产物。对于每种轻链亚型，将1mL MC1061F′(SS320)感受态细胞(Lucigen，目录号60512-1)分成10个比色皿(100μl/比色皿)并进行电穿孔。添加SB液体培养基以将总体积调整至500mL，将所得物在37℃和200rpm的振荡下孵育1小时，并通过连续稀释将100μL培养物上清液涂布在LB琼脂折叠板(agar lop plate)+羧苄青霉素(NaraeBiotech，目录号LN004CA)上，并且然后在37℃下孵育过夜，以确定pComb3XTT-合成VL文库的大小。将500μL羧苄青霉素(100mg/mL)添加到500mL培养物中，然后在37℃(200rpm)下孵育过夜。
4-2)重链可变区文库的构建
1)VH框架序列合成：人类VH1-69、VH3-15和VH3-23的框1至框3的序列(表63)是根据要求通过Bioneer(http://www.bioneer.co.kr)合成的，并由此获取。
[表63]
2)初次PCR扩增(片段PCR)：使用每个框架序列为模板(5ng/反应)，通过PCR扩增VLCDR1至CDR3片段(片段1至3)。用于PCR的引物序列如表64所示。使用AccuPower Pfu PCRPreMix(Bioneer，K-2025)进行反应，持续30个循环(在95℃下30秒，在50℃至55℃下30秒，在72℃下1分钟)。将每种PCR产物进行电泳，并且然后使用QIAquick凝胶提取试剂盒(QIAGEN，目录号28706)进行纯化。
[表64]
将SEQ ID NO:116(VH1-69_F1)和SEQ ID NO:126(VH3-15_F)的N设计为具有下表65所示的碱基比率，并进行PCR。
[表65]
将SEQ ID NO:116(VH1-69_F1)和SEQ ID NO:126(VH3-15_F)的X设计为具有下表66所示的密码子比率，并进行PCR。
[表66]
将SEQ ID NO:118(VH1-69_F2)的X设计为具有下表67所示的密码子比率，并进行PCR。
[表67]
将SEQ ID NO:128(VH3-15_F2)的N设计为具有下表68所示的碱基比率，并进行PCR。
[表68]
将SEQ ID NO:128(VH3-15_F2)的X设计为具有下表69所示的密码子比率，并进行PCR。
[表69]
将SEQ ID NO:130(VH3-23_F2)的N设计为具有下表70所示的碱基比率，并进行PCR。
[表70]
将SEQ ID NO:130(VH3-23_F2)的X设计为具有下表71所示的密码子比率，并进行PCR。
[表71]
将SEQ ID NO:120(VH1-69_F3_CDR9、VH3-15_F3_CDR9、VH3-23_F3_CDR9)的X设计为具有下表72所示的密码子比率，并进行PCR。
[表72]
将SEQ ID NO:121(VH1-69_F3_CDR10、VH3-15_F3_CDR10、VH3-23_F3_CDR10)、SEQID NO:122(VH1-69_F3_CDR11、VH3-15_F3_CDR11、VH3-23_F3_CDR11)、SEQ ID NO:123(VH1-69_F3_CDR12、VH3-15_F3_CDR12、VH3-23_F3_CDR12)、SEQ ID NO:124(VH1-69_F3_CDR13、VH3-15_F3_CDR13、VH3-23_F3_CDR13)和SEQ ID NO:125(VH1-69_F3_CDR14、VH3-15_F3_CDR14、VH3-23_F3_CDR14)的X设计为具有以下表73中所示的密码子比率，并进行PCR。
[表73]
3)第二次PCR扩增(第1次重叠PCR)：将初次PCR产物(片段1至3)作为模板添加(每个片段40ng/反应)，并且进行反应，持续16个循环(在95℃下30秒，在50℃至55℃下30秒，在72℃下1分钟)。在PCR中使用的引物序列如表74所示。将各个PCR产物(可变重链)进行电泳，并且然后使用QIAquick凝胶提取试剂盒(QIAGEN，目录号28706)进行纯化。
[表74]
4)Fab文库转化
4-a)连接：将XbaI(NEB，目录号R0145L)添加到可变重链(VH)的PCR产物中，在37℃下进行反应6小时，并且然后使用QIAquick PCR纯化试剂盒(QIAGEN，目录号28106)纯化所得物。向其中添加ApaI(NEB，目录号R0114L)，随后在25℃下反应6小时并使用QIAquick PCR纯化试剂盒(QIAGEN，目录号28106)进行纯化。将T4 DNA连接酶(NEB，目录号M0203S)添加到10μg用XbaI和apaI切割的插入DNA片段和40μg线性化的pComb3XTT载体(EcoRI、XbaI切割的)中，并且在25℃下反应过夜(O/N)。此时，作为CDR3的长度相对于DNA总量的比例，将CDR3_9AA(氨基酸)长度的百分比调整至12％，将CDR3_10AA长度的百分比调整至14％，将CDR3_11AA长度的百分比调整至17％，将CDR3_12AA长度的百分比调整至22％，将CDR3_13AA长度的百分比调整至19％，并且将CDR3_14AA长度的百分比调整至16％。
4-b)转化：使用QIAquick PCR纯化试剂盒(QIAGEN，目录号28106)纯化所连接的反应产物。对于每种重链亚型，将1mL XL1-Blue电穿孔感受态细胞(Stratagene，目录号200228)分至10个比色皿(100μl/比色皿)中并进行电穿孔。添加SB液体培养基以将总体积调整至500mL，并且将所得物在37℃和200rpm的振荡下孵育1小时。通过连续稀释将100μL培养物上清液涂布在LB琼脂折叠板+羧苄青霉素(NaraeBiotech，目录号LN004CA)上，并且然后在37℃下孵育过夜，以确定pComb3XTT-合成VL文库的大小。将500μL羧苄青霉素(100mg/mL)添加到500mL培养物中，然后在37℃(200rpm)下孵育过夜。
实施例5)Fab文库性能的检测
5-1)文库大小的确定
对于Fab文库，使用3种VH类型和4种VL类型构建总共12个、每个大小为1010或更大的文库，以获得总大小为1.52×1011的Fab文库。对于scFv文库，使用2种VH类型和4种VL类型构建总共8个、每个大小为1011或更大的文库，以获得总大小为1.27x1012的scFv文库。
[表75]
单位：CFU(菌落形成单位)
5-2)文库CDR氨基酸分布的检测
通过比较使用HT测序获得的人类种系CDR序列与实际构建的文库的CDR序列，分析再现性。
结果显示获得了所设计的氨基酸多样性，如图2所示。
为了对其进行定量分析，使用配对T检验进行分析。
结果显示，所有文库引入位点的显著性水平为5％或更低，这表明实际文库的突变序列与基于人类种系CDR设计的序列相同。
[表76]
＊显著性水平(α)：5％
5-3)冗余(重复)序列分布的检测
通过使用HT测序分析每个文库序列的约10000个重复序列，获得重复序列的比率。
结果显示，VH3-15和VH3-23类型的重复序列比率为10％或更低，VH1-69的重复序列比率为13％至21％，并且总体平均重复序列比率为10.5％(表77)。从图3中可以看出，由于大多数重复序列重复两次，所以降低文库质量的作用不显著。
[表77]
| 类型 | ％ |
| VH3-15/Vk1-39 | 8.6 |
| VH3-15/Vk3-20 | 9.1 |
| VH3-15/Vk3-20-2 | 6.4 |
| VH3-15/Vλ1-51 | 6.6 |
| VH3-23/Vk1-39 | 8.3 |
| VH3-23/Vk3-20 | 6.8 |
| VH3-23/Vk3-20-2 | 7.7 |
| VH3-23/Vλ1-51 | 7.5 |
| VH1-69/Vk1-39 | 18 |
| VH1-69/Vk3-20 | 13 |
| VH1-69/Vk3-20-2 | 13.7 |
| VH1-69/Vλ1-51 | 21 |
| 共计 | 10.5 |
5-4)CDR长度分析
通过HT测序检测对于每种长度的人类种系VH CDR3序列的分布，所述分布在所述文库中被复制，并通过HT测序进行比较和分析。
从图4中可以看出，对于每种长度的人类种系序列的分布和所述文库的CDR长度相似。
尽管已经详细描述了本发明的具体配置，但本领域技术人员应理解，出于说明目的提供本说明书以阐述优选实施方案，并且不应理解为限制本发明的范围。因此，本发明的实质范围由所附权利要求和其等同物限定。
工业实用性
有利的是，根据本发明的抗体文库具有高热力学稳定性，并且能够实现高可溶性表达以及可逆折叠。
此外，根据本发明的抗体文库包含多种CDR，所述多种CDR被合理控制为对所有抗原具有高特异性和高亲和力，并因此具有高水平的多样性，并因此可有效用于选择针对所需抗原的合适的候选抗体。
另外，根据本发明的抗体文库基于人类抗体序列，且因此当施用至人体时可用于筛选具有最小免疫原性的抗体，并且可用于开发可有效用于治疗或诊断疾病的抗体。
序列表自由文本
附有电子文件。
序列表
<110> 财团法人牧岩生命科学研究所
<120> 抗体文库和使用抗体文库的抗体筛选方法
<130> P17-B211
<150> KR 10-2018-0063306
<151> 2018-06-01
<160> 134
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 92
<212> PRT
<213> VH3-15
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (27)
<223> Xaa 可为任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (41)
<223> Xaa 可为任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (81)
<223> Xaa 可为任何天然存在的氨基酸
<400> 1
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Trp Val Arg Gln Ala
20 25 30
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Xaa Tyr Ala Ala Pro Val Lys Gly
35 40 45
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
50 55 60
Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
65 70 75 80
Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
85 90
<210> 2
<211> 26
<212> PRT
<213> VH3-15_FR1
<400> 2
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
20 25
<210> 3
<211> 13
<212> PRT
<213> VH3-15_FR2
<400> 3
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
1 5 10
<210> 4
<211> 39
<212> PRT
<213> VH3-15_FR3
<400> 4
Tyr Ala Ala Pro Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asp Ser
1 5 10 15
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Lys Thr Glu Asp Thr
20 25 30
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
35
<210> 5
<211> 11
<212> PRT
<213> VH3-15_FR4
<400> 5
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 6
<211> 92
<212> PRT
<213> VH3-23
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (27)
<223> Xaa 可为任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (41)
<223> Xaa 可为任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (81)
<223> Xaa 可为任何天然存在的氨基酸
<400> 6
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Xaa Trp Val Arg Gln Ala
20 25 30
Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Xaa Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly
35 40 45
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln
50 55 60
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
65 70 75 80
Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
85 90
<210> 7
<211> 26
<212> PRT
<213> VH3-23_FR1
<400> 7
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly
20 25
<210> 8
<211> 13
<212> PRT
<213> VH3-23_FR2
<400> 8
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
1 5 10
<210> 9
<211> 39
<212> PRT
<213> VH3-23_FR3
<400> 9
Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser
1 5 10 15
Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr
20 25 30
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
35
<210> 10
<211> 11
<212> PRT
<213> VH3-23_FR4
<400> 10
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 11
<211> 92
<212> PRT
<213> VH1-69
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (27)
<223> Xaa 可为任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (41)
<223> Xaa 可为任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (81)
<223> Xaa 可为任何天然存在的氨基酸
<400> 11
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Xaa Trp Val Arg Gln Ala
20 25 30
Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Xaa Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly
35 40 45
Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
50 55 60
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
65 70 75 80
Xaa Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
85 90
<210> 12
<211> 26
<212> PRT
<213> VH1-69_FR1
<400> 12
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly
20 25
<210> 13
<211> 13
<212> PRT
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<400> 13
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
1 5 10
<210> 14
<211> 39
<212> PRT
<213> VH1-69_FR3
<400> 14
Tyr Ala Gln Lys Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser
1 5 10 15
Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr
20 25 30
Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
35
<210> 15
<211> 11
<212> PRT
<213> VH1-69_FR4
<400> 15
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
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<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (28)
<223> Xaa 可为任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (44)
<223> Xaa 可为任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (79)
<223> Xaa 可为任何天然存在的氨基酸
<400> 16
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Xaa Trp Tyr Gln Gln
20 25 30
Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Xaa Gly Val Pro Ser
35 40 45
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser
50 55 60
Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Xaa Thr
65 70 75 80
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<212> PRT
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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln
20 25
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<211> 15
<212> PRT
<213> Vk1-39_FR2
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Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
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<212> PRT
<213> Vk1-39_FR3
<400> 19
Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys
20 25 30
Gln Gln
<210> 20
<211> 11
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<213> Vk1-39_FR4
<400> 20
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<212> PRT
<213> Vk3-20
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (28)
<223> Xaa 可为任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (43)
<223> Xaa 可为任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (77)
<223> Xaa 可为任何天然存在的氨基酸
<400> 21
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Xaa Trp Tyr Gln Gln
20 25 30
Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Xaa Ile Pro Asp Arg Phe
35 40 45
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu
50 55 60
Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Xaa Thr Phe Gly
65 70 75 80
Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
85
<210> 22
<211> 27
<212> PRT
<213> Vk3-20_FR1
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Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln
20 25
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<211> 14
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<213> Vk3-20_FR2
<400> 23
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
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<211> 33
<212> PRT
<213> Vk3-20_FR3
<400> 24
Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
1 5 10 15
Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln
20 25 30
Gln
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<211> 11
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<211> 88
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<223> Xaa 可为任何天然存在的氨基酸
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (77)
<223> Xaa 可为任何天然存在的氨基酸
<400> 26
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Xaa Trp Tyr Gln Gln
20 25 30
Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Xaa Ile Pro Asp Arg Phe
35 40 45
Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu
50 55 60
Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Xaa Thr Phe Gly
65 70 75 80
Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
85
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<211> 27
<212> PRT
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<400> 27
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln
20 25
<210> 28
<211> 14
<212> PRT
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<400> 28
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<400> 29
Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu
1 5 10 15
Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln
20 25 30
Gln
<210> 30
<211> 11
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Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
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<212> PRT
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<220>
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<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (76)
<223> Xaa 可为任何天然存在的氨基酸
<400> 31
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly Xaa Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly
20 25 30
Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile Xaa Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg
35 40 45
Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly
50 55 60
Leu Gln Thr Gly Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Xaa Phe Gly Gly Gly
65 70 75 80
Thr Lys Leu Thr Val Leu
85
<210> 32
<211> 24
<212> PRT
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<400> 32
Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Pro Ser Val Ser Ala Ala Pro Gly Gln
1 5 10 15
Lys Val Thr Ile Ser Cys Ser Gly
20
<210> 33
<211> 14
<212> PRT
<213> Vlambda1-51_FR2
<400> 33
Trp Tyr Gln Gln Leu Pro Gly Thr Ala Pro Lys Leu Leu Ile
1 5 10
<210> 34
<211> 35
<212> PRT
<213> Vlambda1-51_FR3
<400> 34
Arg Pro Ser Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Lys Ser Gly Thr
1 5 10 15
Ser Ala Thr Leu Gly Ile Thr Gly Leu Gln Thr Gly Asp Glu Ala Asp
20 25 30
Tyr Tyr Cys
35
<210> 35
<211> 10
<212> PRT
<213> Vlambda1-51_FR4
<400> 35
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu
1 5 10
<210> 36
<211> 270
<212> DNA
<213> VH3-15_D
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (79)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (119)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (237)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 36
gaagtgcaac ttgtcgaatc tggcggcggc ttagtgaaac caggcggcag ccttcgttta 60
agctgtgcag catctggtnt gggttcgtca ggcaccaggt aaaggtcttg aatgggtgnt 120
acgcagcacc ggtcaaaggt cgttttacga ttagtcgcga tgattcgaaa aacactcttt 180
acctgcagat gaattctctg aaaacagaag ataccgcagt gtattactgt gcacgtntgg 240
ggtcaaggta cactggttac cgttagctcg 270
<210> 37
<211> 78
<212> DNA
<213> VH3-15_FR1_D
<400> 37
gaagtgcaac ttgtcgaatc tggcggcggc ttagtgaaac caggcggcag ccttcgttta 60
agctgtgcag catctggt 78
<210> 38
<211> 39
<212> DNA
<213> VH3-15_FR2_D
<400> 38
tgggttcgtc aggcaccagg taaaggtctt gaatgggtg 39
<210> 39
<211> 117
<212> DNA
<213> VH3-15_FR3_D
<400> 39
tacgcagcac cggtcaaagg tcgttttacg attagtcgcg atgattcgaa aaacactctt 60
tacctgcaga tgaattctct gaaaacagaa gataccgcag tgtattactg tgcacgt 117
<210> 40
<211> 33
<212> DNA
<213> VH3-15_FR4_D
<400> 40
tggggtcaag gtacactggt taccgttagc tcg 33
<210> 41
<211> 270
<212> DNA
<213> VH3-23_D
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (79)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (119)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (237)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 41
gaagtgcaac ttgtcgaatc tggcggcggc ttagtgcagc caggcggcag ccttcgttta 60
agctgtgcag catctggtnt gggttcgtca ggcaccaggt aaaggtcttg aatgggtgnt 120
atgcggatag cgttaagggt cgttttacca tcagtcgcga caactccaaa aataccctgt 180
acttacaaat gaatagctta cgtgcggaag ataccgcagt gtattactgt gcacgtntgg 240
ggtcaaggta cactggttac cgttagctcg 270
<210> 42
<211> 78
<212> DNA
<213> VH3-23_FR1_D
<400> 42
gaagtgcaac ttgtcgaatc tggcggcggc ttagtgcagc caggcggcag ccttcgttta 60
agctgtgcag catctggt 78
<210> 43
<211> 39
<212> DNA
<213> VH3-23_FR2_D
<400> 43
tgggttcgtc aggcaccagg taaaggtctt gaatgggtg 39
<210> 44
<211> 117
<212> DNA
<213> VH3-23_FR3_D
<400> 44
tatgcggata gcgttaaggg tcgttttacc atcagtcgcg acaactccaa aaataccctg 60
tacttacaaa tgaatagctt acgtgcggaa gataccgcag tgtattactg tgcacgt 117
<210> 45
<211> 33
<212> DNA
<213> VH3-23_FR4_D
<400> 45
tggggtcaag gtacactggt taccgttagc tcg 33
<210> 46
<211> 270
<212> DNA
<213> VH1-69_D
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (79)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (119)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (237)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 46
caggtccaac tggttcagtc tggtgcggaa gttaaaaagc caggaagttc agttaaagtc 60
agttgtaaag cgtctggtnt gggttcgtca agcaccagga cagggcttag aatggatgnt 120
atgcacagaa attccaaggt cgtgttacga ttacggccga tgagtccact agtaccgcct 180
atatggaact ctccagcctt cgctctgaag ataccgcagt gtattactgt gcacgtntgg 240
ggtcaaggta cactggttac cgttagctcg 270
<210> 47
<211> 78
<212> DNA
<213> VH1-69_FR1_D
<400> 47
caggtccaac tggttcagtc tggtgcggaa gttaaaaagc caggaagttc agttaaagtc 60
agttgtaaag cgtctggt 78
<210> 48
<211> 39
<212> DNA
<213> VH1-69_FR2_D
<400> 48
tgggttcgtc aagcaccagg acagggctta gaatggatg 39
<210> 49
<211> 117
<212> DNA
<213> VH1-69_FR3_D
<400> 49
tatgcacaga aattccaagg tcgtgttacg attacggccg atgagtccac tagtaccgcc 60
tatatggaac tctccagcct tcgctctgaa gataccgcag tgtattactg tgcacgt 117
<210> 50
<211> 33
<212> DNA
<213> VH1-69_FR4_D
<400> 50
tggggtcaag gtacactggt taccgttagc tcg 33
<210> 51
<211> 264
<212> DNA
<213> Vk1-39_D
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (82)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (128)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (231)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 51
gacatccaaa tgacacagag cccttcttcc ttatccgcgt cggtaggaga tcgcgttaca 60
atcacctgcc gtgcgagtca gntggtatca gcagaaacca gggaaagcac cgaagctcct 120
gatttatngg cgttccgagc cgttttagtg gctcggggtc cggcaccgac ttcaccctga 180
ctatctcttc gctgcagcct gaggattttg ctacctatta ctgtcaacag nacattcggg 240
cagggtacca aagtggaaat taaa 264
<210> 52
<211> 81
<212> DNA
<213> Vk1-39_FR1_D
<400> 52
gacatccaaa tgacacagag cccttcttcc ttatccgcgt cggtaggaga tcgcgttaca 60
atcacctgcc gtgcgagtca g 81
<210> 53
<211> 45
<212> DNA
<213> Vk1-39_FR2_D
<400> 53
tggtatcagc agaaaccagg gaaagcaccg aagctcctga tttat 45
<210> 54
<211> 102
<212> DNA
<213> Vk1-39_FR3_D
<400> 54
ggcgttccga gccgttttag tggctcgggg tccggcaccg acttcaccct gactatctct 60
tcgctgcagc ctgaggattt tgctacctat tactgtcaac ag 102
<210> 55
<211> 33
<212> DNA
<213> Vk1-39_FR4_D
<400> 55
acattcgggc agggtaccaa agtggaaatt aaa 33
<210> 56
<211> 258
<212> DNA
<213> Vk3-20_D
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (82)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (125)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (225)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 56
gaaattgtac tgacccaaag tcctgggaca ctgagtctga gtccaggtga acgtgctacc 60
cttagctgcc gtgcgagtca antggtacca acaaaagcct ggtcaggcac cacgtctgct 120
gatcnattcc ggaccgtttc tctggctccg gctcgggtac tgattttacc ctgactatct 180
ctcgtttaga acctgaggat tttgctgttt attactgtca acagnacatt cgggcagggt 240
accaaagtgg aaattaaa 258
<210> 57
<211> 81
<212> DNA
<213> Vk3-20_FR1_D
<400> 57
gaaattgtac tgacccaaag tcctgggaca ctgagtctga gtccaggtga acgtgctacc 60
cttagctgcc gtgcgagtca a 81
<210> 58
<211> 42
<212> DNA
<213> Vk3-20_FR2_D
<400> 58
tggtaccaac aaaagcctgg tcaggcacca cgtctgctga tc 42
<210> 59
<211> 99
<212> DNA
<213> Vk3-20_FR3_D
<400> 59
attccggacc gtttctctgg ctccggctcg ggtactgatt ttaccctgac tatctctcgt 60
ttagaacctg aggattttgc tgtttattac tgtcaacag 99
<210> 60
<211> 33
<212> DNA
<213> Vk3-20_FR4_D
<400> 60
acattcgggc agggtaccaa agtggaaatt aaa 33
<210> 61
<211> 258
<212> DNA
<213> Vk3-20-2_D
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (82)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (125)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (225)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 61
gaaattgtac tgacccaaag tcctgggaca ctgagtctga gtccaggtga acgtgctacc 60
cttagctgcc gtgcgagtca antggtacca acaaaagcct ggtcaggcac cacgtctgct 120
gatcnattcc ggaccgtttc tctggctccg gctcgggtac tgattttacc ctgactatct 180
ctcgtttaga acctgaggat tttgctgttt attactgtca acagnacatt cgggcagggt 240
accaaagtgg aaattaaa 258
<210> 62
<211> 81
<212> DNA
<213> Vk3-20-2_FR1_D
<400> 62
gaaattgtac tgacccaaag tcctgggaca ctgagtctga gtccaggtga acgtgctacc 60
cttagctgcc gtgcgagtca a 81
<210> 63
<211> 42
<212> DNA
<213> Vk3-20-2_FR2_D
<400> 63
tggtaccaac aaaagcctgg tcaggcacca cgtctgctga tc 42
<210> 64
<211> 99
<212> DNA
<213> Vk3-20-2_FR3_D
<400> 64
attccggacc gtttctctgg ctccggctcg ggtactgatt ttaccctgac tatctctcgt 60
ttagaacctg aggattttgc tgtttattac tgtcaacag 99
<210> 65
<211> 33
<212> DNA
<213> Vk3-20-2_FR4_D
<400> 65
acattcgggc agggtaccaa agtggaaatt aaa 33
<210> 66
<211> 252
<212> DNA
<213> Vlambda1-51_D
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (73)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (116)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (222)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 66
caatcagttc tgacccaacc cccctctgta tccgcggcac ccggtcaaaa ggtgaccatc 60
tcgtgctctg gcntggtatc aacagcttcc aggtacagca ccgaagttat tgattncgtc 120
cttccggtat tccggatcgt ttttcgggga gtaaaagtgg cacctcagca acacttggta 180
ttaccggact gcagaccggc gacgaagccg attactactg cnttcggtgg tggcaccaaa 240
cttacggtcc tg 252
<210> 67
<211> 72
<212> DNA
<213> Vlambda1-51_FR1_D
<400> 67
caatcagttc tgacccaacc cccctctgta tccgcggcac ccggtcaaaa ggtgaccatc 60
tcgtgctctg gc 72
<210> 68
<211> 42
<212> DNA
<213> Vlambda1-51_FR2_D
<400> 68
tggtatcaac agcttccagg tacagcaccg aagttattga tt 42
<210> 69
<211> 105
<212> DNA
<213> Vlambda1-51_FR3_D
<400> 69
cgtccttccg gtattccgga tcgtttttcg gggagtaaaa gtggcacctc agcaacactt 60
ggtattaccg gactgcagac cggcgacgaa gccgattact actgc 105
<210> 70
<211> 30
<212> DNA
<213> Vlambda1-51_FR4_D
<400> 70
ttcggtggtg gcaccaaact tacggtcctg 30
<210> 71
<211> 23
<212> DNA
<213> VH1 Fo
<400> 71
cargtgcagc tkgtgcagtc tgg 23
<210> 72
<211> 24
<212> DNA
<213> JH Re
<400> 72
tgaggagacg gtgaccaggg tgcc 24
<210> 73
<211> 23
<212> DNA
<213> VH3 Fo
<400> 73
gargtgcagc tggtggagtc tgg 23
<210> 74
<211> 23
<212> DNA
<213> Vk1 Fo
<400> 74
gacatccaga tgacccagtc tcc 23
<210> 75
<211> 24
<212> DNA
<213> Jk Re
<400> 75
acgtttgatt tccaccttgg tccc 24
<210> 76
<211> 23
<212> DNA
<213> Vk3 Fo
<400> 76
gaaatwgtgw tgacrcagtc tcc 23
<210> 77
<211> 23
<212> DNA
<213> Vlambda Fo
<400> 77
cagtctgtgy tgackcagcc gcc 23
<210> 78
<211> 24
<212> DNA
<213> Jlambda Re
<400> 78
acctaggacg gtcagcttgg tccc 24
<210> 79
<211> 63
<212> DNA
<213> VH1 Fo亚洲人
<400> 79
ccatctcatc cctgcgtgtc tccgactcag acgagtgcgt cargtgcagc tkgtgcagtc 60
tgg 63
<210> 80
<211> 63
<212> DNA
<213> VH3 Fo亚洲人
<400> 80
ccatctcatc cctgcgtgtc tccgactcag acgagtgcgt cargtgcagc tkgtgcagtc 60
tgg 63
<210> 81
<211> 63
<212> DNA
<213> Vk1 Fo亚洲人
<400> 81
ccatctcatc cctgcgtgtc tccgactcag acgctcgaca gargtgcagc tggtggagtc 60
tgg 63
<210> 82
<211> 63
<212> DNA
<213> Vk3 Fo亚洲人
<400> 82
ccatctcatc cctgcgtgtc tccgactcag agacgcactc gacatccaga tgacccagtc 60
tcc 63
<210> 83
<211> 63
<212> DNA
<213> Vlambda1 Fo亚洲人
<400> 83
ccatctcatc cctgcgtgtc tccgactcag agcactgtag gaaatwgtgw tgacrcagtc 60
tcc 63
<210> 84
<211> 63
<212> DNA
<213> VH1 Fo 高加索人
<400> 84
ccatctcatc cctgcgtgtc tccgactcag atcagacacg cagtctgtgy tgackcagcc 60
gcc 63
<210> 85
<211> 63
<212> DNA
<213> VH3 Fo 高加索人
<400> 85
ccatctcatc cctgcgtgtc tccgactcag atatcgcgag cargtgcagc tkgtgcagtc 60
tgg 63
<210> 86
<211> 63
<212> DNA
<213> Vk1 Fo 高加索人
<400> 86
ccatctcatc cctgcgtgtc tccgactcag cgtgtctcta gargtgcagc tggtggagtc 60
tgg 63
<210> 87
<211> 63
<212> DNA
<213> Vk3 Fo 高加索人
<400> 87
ccatctcatc cctgcgtgtc tccgactcag ctcgcgtgtc gacatccaga tgacccagtc 60
tcc 63
<210> 88
<211> 63
<212> DNA
<213> Vlambda1 Fo 高加索人
<400> 88
ccatctcatc cctgcgtgtc tccgactcag tagtatcagc gaaatwgtgw tgacrcagtc 60
tcc 63
<210> 89
<211> 54
<212> DNA
<213> JH Ro
<400> 89
cctatcccct gtgtgccttg gcagtctcag tgaggagacg gtgaccaggg tgcc 54
<210> 90
<211> 54
<212> DNA
<213> Jk Ro
<400> 90
cctatcccct gtgtgccttg gcagtctcag acgtttgatt tccaccttgg tccc 54
<210> 91
<211> 54
<212> DNA
<213> Jlambda Ro
<400> 91
cctatcccct gtgtgccttg gcagtctcag acctaggacg gtgaccttgg tccc 54
<210> 92
<211> 39
<212> DNA
<213> VLk1-39_F1_F
<400> 92
gaattcagga ggaatttaaa atgaaaaaga cagctatcg 39
<210> 93
<211> 87
<212> DNA
<213> VLk1-39_F1_R
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (28)..(30)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (33)..(42)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (45)..(50)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (60)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 93
ggctttccct ggtttctgct gataccannn tannnnnnnn nntannnnnn gactcgcacn 60
gcaggtgatt gtaacgcgat ctcctac 87
<210> 94
<211> 27
<212> DNA
<213> VLk1-39_F2_F
<400> 94
tggtatcagc agaaaccagg gaaagcc 27
<210> 95
<211> 72
<212> DNA
<213> VLk1-39_F2_R
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (25)..(30)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (32)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (34)..(36)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (38)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (40)..(45)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 95
gccactaaaa cggctcggaa cgccnnnnnn angnnnantn nnnnnataaa tcaggagctt 60
cggtgctttc cc 72
<210> 96
<211> 24
<212> DNA
<213> VLk1-39_F3_F
<400> 96
ggcgttccga gccgttttag tggc 24
<210> 97
<211> 90
<212> DNA
<213> VLk1-39_F3_R
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (34)..(36)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (40)..(52)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (54)..(56)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 97
tttaatttcc actttggtac cctgcccgaa tgtnnncggn nnnnnnnnnn nntnnngaca 60
gtaataggta gcaaaatcct caggctgcag 90
<210> 98
<211> 93
<212> DNA
<213> VLk3-20_F1_R
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (32)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (34)..(55)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (57)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (66)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 98
tgcctgacca ggcttttgtt ggtaccatgc ancnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnntnact 60
cgcacngcag ctaagggtag cacgttcacc tgg 93
<210> 99
<211> 30
<212> DNA
<213> VLk3-20_F2_F
<400> 99
gcatggtacc aacaaaagcc tggtcaggca 30
<210> 100
<211> 75
<212> DNA
<213> VLk3-20_F2_R
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (26)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (30)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (32)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (37)..(51)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 100
ggagccagag aaacggtccg gaatancagn ancacgnnnn nnnnnnnnnn ngatcagcag 60
acgtggtgcc tgacc 75
<210> 101
<211> 24
<212> DNA
<213> VLk3-20_F3_F
<400> 101
attccggacc gtttctctgg ctcc 24
<210> 102
<211> 93
<212> DNA
<213> VLk3-20_F3_R
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (34)..(36)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (40)..(52)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (55)..(56)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 102
tttaatttcc actttggtac cctgcccgaa tgtnnncggn nnnnnnnnnn nntgnngaca 60
gtaataaaca gcaaaatcct caggttctaa acg 93
<210> 103
<211> 87
<212> DNA
<213> VLk3-20-2_F1_R
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (32)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (34)..(50)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (60)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 103
tgcctgacca ggcttttgtt ggtaccatgc ancnnnnnnn nnnnnnnnnn gactcgcacn 60
gcagctaagg gtagcacgtt cacctgg 87
<210> 104
<211> 87
<212> DNA
<213> VLlambda1-51_F1_R
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (28)..(30)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (34)..(42)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (44)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (48)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (55)..(60)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 104
tgctgtacct ggaagctgtt gataccannn cacnnnnnnn nntncaanat tagannnnnn 60
gccagagcac gagatggtca ccttttg 87
<210> 105
<211> 27
<212> DNA
<213> VLlambda1-51_F2_F
<400> 105
tggtatcaac agcttccagg tacagca 27
<210> 106
<211> 66
<212> DNA
<213> VLlambda1-51_F2_R
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (25)..(39)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 106
acgatccgga ataccggaag gacgnnnnnn nnnnnnnnna atcaataact tcggtgctgt 60
acctgg 66
<210> 107
<211> 24
<212> DNA
<213> VLlambda1-51_F3_F
<400> 107
cgtccttccg gtattccgga tcgt 24
<210> 108
<211> 81
<212> DNA
<213> VLlambda1-51_F3_R
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (25)..(45)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (49)..(57)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 108
cgtaagtttg gtgccaccac cgaannnnnn nnnnnnnnnn nnnnnatcnn nnnnnnngca 60
gtagtaatcg gcttcgtcgc c 81
<210> 109
<211> 54
<212> DNA
<213> CLk_F
<400> 109
gggcagggta ccaaagtgga aattaaacgc acggtggctg ccccttctgt gttc 54
<210> 110
<211> 33
<212> DNA
<213> CLk_R
<400> 110
aattatctag aactagcact cacccctgtt gaa 33
<210> 111
<211> 54
<212> DNA
<213> CLlambda_F
<400> 111
ggtggtggca ccaaacttac ggtcctaggc cagcccaagg ccaaccccac tgtc 54
<210> 112
<211> 40
<212> DNA
<213> CLlambda_R
<400> 112
ttatctagaa ctaacattct gtaggggcca ctgtcttctc 40
<210> 113
<211> 36
<212> DNA
<213> VLk1-39_R
<400> 113
actagtgcgt ttaatttcca ctttggtacc ctgccc 36
<210> 114
<211> 30
<212> DNA
<213> VLlambda1-51_F
<400> 114
actagtaccc aggaccgtaa gtttggtgcc 30
<210> 115
<211> 48
<212> DNA
<213> VH1-69_F1_F
<400> 115
ttctagataa ttaattagga ggaatttaaa atgaaatacc tattgcct 48
<210> 116
<211> 84
<212> DNA
<213> VH1-69_F1_R
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (25)..(28)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (30)..(42)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (46)..(51)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 116
ctgtcctggt gcttgacgaa cccannnnan nnnnnnnnnn nngaannnnn naccagacgc 60
tttacaactg actttaactg aact 84
<210> 117
<211> 24
<212> DNA
<213> VH1-69_F2_F
<400> 117
tgggttcgtc aagcaccagg acag 24
<210> 118
<211> 87
<212> DNA
<213> VH1-69_F2_R
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (31)..(54)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (58)..(63)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 118
cgtaacacga ccttggaatt tctgtgcata nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnngatnnn 60
nnncatccat tctaagcctt gtccagg 87
<210> 119
<211> 33
<212> DNA
<213> VH1-69_F3_CDR9_F
<400> 119
tatgcacaga aattccaagg tcgtgttacg att 33
<210> 120
<211> 78
<212> DNA
<213> VH1-69_F3_CDR9_R
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (22)..(48)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 120
caccagggtc ccctggcccc annnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnngc gggcgcagta 60
atacactgcg gtatcttc 78
<210> 121
<211> 87
<212> DNA
<213> VH1-69_F3_CDR10_R
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (28)..(57)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 121
aacggtaacc agtgtacctt gaccccannn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnacg 60
tgcacagtaa tacactgcgg tatcttc 87
<210> 122
<211> 90
<212> DNA
<213> VH1-69_F3_CDR11_R
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (28)..(60)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 122
aacggtaacc agtgtacctt gaccccannn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 60
acgtgcacag taatacactg cggtatcttc 90
<210> 123
<211> 93
<212> DNA
<213> VH1-69_F3_CDR12_R
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (28)..(63)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 123
aacggtaacc agtgtacctt gaccccannn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 60
nnnacgtgca cagtaataca ctgcggtatc ttc 93
<210> 124
<211> 96
<212> DNA
<213> VH1-69_F3_CDR13_R
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (28)..(66)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 124
aacggtaacc agtgtacctt gaccccannn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 60
nnnnnnacgt gcacagtaat acactgcggt atcttc 96
<210> 125
<211> 99
<212> DNA
<213> VH1-69_F3_CDR14_R
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (28)..(69)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 125
aacggtaacc agtgtacctt gaccccannn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnnnn 60
nnnnnnnnna cgtgcacagt aatacactgc ggtatcttc 99
<210> 126
<211> 78
<212> DNA
<213> VH3-15_F1_R
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (25)..(28)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (30)..(42)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (46)..(48)
<223> n is a, c, g，或t
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (50)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 126
tttacctggt gcctgacgaa cccannnnan nnnnnnnnnn nngaannnan aaccagatgc 60
tgcacagctt aaacgaag 78
<210> 127
<211> 24
<212> DNA
<213> VH3-15_F2_F
<400> 127
tgggttcgtc aggcaccagg taaa 24
<210> 128
<211> 78
<212> DNA
<213> VH3-15_F2_R
<220>
<221> 杂项特征(MISC_FEATURE)
<222> (22)..(48)
<223> n is a, c, g，或t
<400> 128
caccagggtc ccctggcccc annnnnnnnn nnnnnnnnnn nnnnnnnngc gggcgcagta 60
atacactgcg gtatcttc 78
<210> 129
<211> 24
<212> DNA
<213> VH3-15_F3_CDR9_F
<400> 129
tacgcagcac cggtcaaagg tcgt 24
<210> 130
<211> 87
<212> DNA
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<223> n is a, c, g，或t
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ggtaaaacga cccttaacgc tatccgcata nnnnnnnnnn nnacnnnnnn nnnngatnnn 60
tcncacccat tcaagacctt tacctgg 87
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gggcccttgg tggaggccga gctaacggta accagtgtac cttgacccca 50
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Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
1 5 10 15
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
20 25 30
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
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Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
50 55 60
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
65 70 75 80
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
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Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
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His Arg Ser Tyr Ser Cys Gln Val Thr His Glu Gly Ser Thr Val Glu
85 90 95
Lys Thr Val Ala Pro Thr Glu Cys
100
Claims (12)
1.一种抗体或其片段集合，
其中每个抗体或其片段包含重链可变区和轻链可变区对，
其中所述重链可变区包含：
框架区，所述框架区含于选自VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)和VH1-69(SEQ ID NO:11)的重链可变区中；以及
对于每个重链可变区都不同的重链互补决定区1(CDRH1)、重链互补决定区2(CDRH2)和重链互补决定区3(CDRH3)的组合，并且所述轻链可变区包含：
框架区，所述框架区含于选自Vκ1-39(SEQ ID NO:16)、Vκ3-20(SEQ ID NO:21)、Vκ3-20-2(SEQ ID NO:26)和Vλ1-51(SEQ ID NO:31)的轻链可变区中；以及
对于每个轻链可变区都不同的轻链互补决定区1(CDRL1)、轻链互补决定区2(CDRL2)和轻链互补决定区3(CDRL3)的组合。
2.根据权利要求1所述的抗体或其片段集合，其中所述抗体或其片段集合包含：
框架区，所述框架区含于选自VH3-15(SEQ ID NO:1)/Vκ1-39(SEQ ID NO:16)、VH3-15(SEQ ID NO:1)/Vκ3-20(SEQ ID NO:21)、VH3-15(SEQ ID NO:1)/Vκ3-20-2(SEQ ID NO:26)、VH3-15(SEQ ID NO:1)/Vλ1-51(SEQ ID NO:31)、VH3-23(SEQ ID NO:6)/Vκ1-39(SEQID NO:16)、VH3-23(SEQ ID NO:6)/Vκ3-20(SEQ ID NO:21)、VH3-23(SEQ ID NO:6)/Vκ3-20-2(SEQ ID NO:26)、VH3-23(SEQ ID NO:6)/Vλ1-51(SEQ ID NO:31)、VH1-69(SEQ ID NO:11)/Vκ1-39(SEQ ID NO:16)、VH1-69(SEQ ID NO:11)/Vκ3-20(SEQ ID NO:21)、VH1-69(SEQID NO:11)/Vκ3-20-2(SEQ ID NO:26)和VH1-69(SEQ ID NO:11)/Vλ1-51(SEQ ID NO:31)的重链和轻链可变区对中；以及
对于每个重链可变区都不同的CDRH1、CDRH2和CDRH3的组合和对于每个轻链可变区都不同的CDRL1、CDRL2和CDRL3的组合。
3.根据权利要求1或2所述的抗体或其片段集合，其中在具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)的所述重链可变区中的所述框架区包含FR1(SEQ ID NO:2)、FR2(SEQ ID NO:3)、FR3(SEQID NO:4)和FR4(SEQ ID NO:5)，
在具有序列VH3-23(SEQ ID NO:6)的所述重链可变区中的所述框架区包含FR1(SEQ IDNO:7)、FR2(SEQ ID NO:8)、FR3(SEQ ID NO:9)和FR4(SEQ ID NO:10)，
在具有序列VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述框架区包含FR1(SEQID NO:12)、FR2(SEQ ID NO:13)、FR3(SEQ ID NO:14)和FR4(SEQ ID NO:15)，
在具有序列Vκ1-39(SEQ ID NO:16)的所述轻链可变区中的所述框架区包含FR1(SEQID NO:17)、FR2(SEQ ID NO:18)、FR3(SEQ ID NO:19)和FR4(SEQ ID NO:20)，
在具有序列Vκ3-20(SEQ ID NO:21)的所述轻链可变区中的所述框架区包含FR1(SEQID NO:22)、FR2(SEQ ID NO:23)、FR3(SEQ ID NO:24)和FR4(SEQ ID NO:25)，
在具有序列Vκ3-20-2(SEQ ID NO:26)的所述轻链可变区中的所述框架区包含FR1(SEQID NO:27)、FR2(SEQ ID NO:28)、FR3(SEQ ID NO:29)和FR4(SEQ ID NO:30)，并且
在具有序列Vλ1-51(SEQ ID NO:31)的所述轻链可变区中的所述框架区包含FR1(SEQID NO:32)、FR2(SEQ ID NO:33)、FR3(SEQ ID NO:34)和FR4(SEQ ID NO:35)。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的抗体或其片段集合，其中，在所述抗体或其片段中，包含在所述重链可变区和所述轻链可变区的所述对的每个可变区中的互补决定区(CDR)被设计为通过改变有潜力进行翻译后修饰(PTM)的氨基酸来防止在翻译后发生修饰。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的抗体或其片段集合，其中在具有序列VH3-15(SEQID NO:1)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区1(CDRH1)中的每个位置的氨基酸比率包括表3的范围，
在具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区2(CDRH2)中的每个位置的氨基酸比率包括表4的范围，
在具有序列VH3-23(SEQ ID NO:6)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区1(CDRH1)中的每个位置的氨基酸比率包括表3的范围，
在具有序列VH3-23(SEQ ID NO:6)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区2(CDRH2)中的每个位置的氨基酸比率包括表4的范围，
在具有序列VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区1(CDRH1)中的每个位置的氨基酸比率包括表5的范围，
在具有序列VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区2(CDRH2)中的每个位置的氨基酸比率包括表6的范围，
当具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)或VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区3(CDRH3)具有9个氨基酸时，所述CDRH3中每个位置的氨基酸比率包括表7的范围，
当具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)或VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区3(CDRH3)具有10个氨基酸时，所述CDRH3中每个位置的氨基酸比率包括表8的范围，
当具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)或VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区3(CDRH3)具有11个氨基酸时，所述CDRH3中每个位置的氨基酸比率包括表9的范围，
当具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)或VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区3(CDRH3)具有12个氨基酸时，所述CDRH3中每个位置的氨基酸比率包括表10的范围，
当具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)或VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区3(CDRH3)具有13个氨基酸时，所述CDRH3中每个位置的氨基酸比率包括表11的范围，
当具有序列VH3-15(SEQ ID NO:1)、VH3-23(SEQ ID NO:6)或VH1-69(SEQ ID NO:11)的所述重链可变区中的所述重链互补决定区3(CDRH3)具有14个氨基酸时，所述CDRH3中每个位置的氨基酸比率包括表12的范围，
在具有序列Vκ1-39(SEQ ID NO:16)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区1(CDRL1)中的每个位置的氨基酸比率包括表13的范围，在具有序列Vκ1-39(SEQ ID NO:16)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区2(CDRL2)中的每个位置的氨基酸比率包括表14的范围，在具有序列Vκ1-39(SEQ ID NO:16)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区3(CDRL3)中的每个位置的氨基酸比率包括表15的范围，在具有序列Vκ3-20(SEQ ID NO:21)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区1(CDRL1)中的每个位置的氨基酸比率包括表16的范围，在具有序列Vκ3-20(SEQ ID NO:21)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区2(CDRL2)中的每个位置的氨基酸比率包括表17的范围，在具有序列Vκ3-20(SEQ ID NO:21)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区3(CDRL3)中的每个位置的氨基酸比率包括表18的范围，在具有序列Vκ3-20-2(SEQ ID NO:26)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区1(CDRL1)中的每个位置的氨基酸比率包括表19的范围，在具有序列Vκ3-20-2(SEQ IDNO:26)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区2(CDRL2)中的每个位置的氨基酸比率包括表17的范围，在具有序列Vκ3-20-2(SEQ ID NO:26)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区3(CDRL3)中的每个位置的氨基酸比率包括表18的范围，在具有序列Vλ1-51(SEQID NO:31)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区1(CDRL1)中的每个位置的氨基酸比率包括表20的范围，在具有序列Vλ1-51(SEQ ID NO:31)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区2(CDRL2)中的每个位置的氨基酸比率包括表21的范围，并且
在具有序列Vλ1-51(SEQ ID NO:31)的所述轻链可变区中的所述轻链互补决定区3(CDRL3)中的每个位置的氨基酸比率包括表22的范围。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的抗体或其片段集合，其中所述抗体的片段具有选自Fab、Fab'、F(ab')2、scFv(scFv)2、scFv-Fc、和Fv中的一种或多种形式。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的抗体或其片段集合，其中所述抗体或其片段集合具有选自以下i)至iv)的一种或多种特征：
i)10％或更低的冗余度(重复序列的百分比)；
ii)CDR组成的p值>0.05；
iii)70℃或更高的热稳定性；和
iv)107或更高的多样性(文库大小)。
8.根据权利要求1至6中任一项所述的抗体或其片段集合，其中所述抗体或其片段集合在引入了编码所述抗体或其片段集合的核酸的噬菌体或宿主细胞的表面上表达。
9.根据权利要求8所述的抗体或其片段集合，其中所述宿主细胞是大肠杆菌或酵母。
10.一种编码根据权利要求1至6中任一项所述的抗体或其片段集合的核酸。
11.一种鉴定对抗原具有特异性的抗体或其片段的方法，所述方法包括：
(a)使抗原与根据权利要求1至6中任一项所述的抗体或其片段集合接触；以及
(b)选择与所述抗原结合的一种或多种抗体或抗体片段。
12.根据权利要求11所述的方法，其中所述抗体或其片段集合在引入了编码所述抗体或其片段集合的核酸的噬菌体或宿主细胞的表面上表达。
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