CN112400760B - 一种缓解淡水鱼类运输应激的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明属于水产品贮运技术领域。一种缓解淡水鱼类运输应激的方法，其特征在于包括如下步骤：1)配置发酵底物：选黄芪、人参、当归、枸杞子、麦冬混合配置，得到发酵底物；2)培养液的配置；3)接种液的制备：按嗜酸乳杆菌：植物乳杆菌：双歧杆菌：嗜热链球菌的体积比＝1～4：1～3：1～6：1～8，选取微生物；4)将步骤1)得到的发酵底物进行处理；5)发酵；6)发酵结束后采用纯碱调整浸提的发酵液pH至7.0，过滤，所得滤液为最终的发酵液；7)将步骤6)得到的发酵液加入到淡水鱼的运输水体中。该方法天然无害，不仅提高了淡水鱼在运输过程的存活率、减少了鱼体肌肉营养组分流失、缓解了鱼体的氧化损伤，而且很大程度上保证了肌肉品质。

Description

一种缓解淡水鱼类运输应激的方法
技术领域
本发明属于水产品贮运技术领域，具体涉及一种缓解淡水鱼类运输应激的方法。
背景技术
淡水鱼资源是中国水资源的重要组成部分，年产量和养殖面积均位世界之首。随着社会发展和人类生活水平的不断进步，人们对食物的需求不再局限于吃饱，更重要的是营养和健康，对食品的品质、安全有了更高的追求。相比其他动物食品，淡水鱼类是国民食物中主要的蛋白质来源之一，肉质细嫩、口感独特且营养丰富，胆固醇含量几乎为零，极富高不饱和脂肪酸和维生素D等有利人类健康的营养物质，适合各年龄段的人食用。与所有其他动物一样，鱼类在养殖或运输过程中会被各种不利的物理或化学因素破坏机体内环境稳态，引起氧化应激反应，进而破坏鱼体内各理化反应的平衡，最终对鱼类的健康和肌肉品质造成影响，这给养殖或活鱼贮运及其他物流环节带来了许多困难和经济损失。当下已有多种缓解鱼类应激、提高运输存活率的措施，但是成本太高，或降低了鱼类的食用品质并对人的健康造成威胁(如孔雀石绿的添加能提升夏季鱼类运输存活率但会诱发人类癌症)。针对以上亟待解决的问题，我们需要一种在保障健康、天然无公害且成本低的前提下，可有效缓解鱼类运输应激、减少氧化损伤、提升存活率且减少营养物质的流失并保证肌肉品质的方法。
目前缓解鱼类运输过程中应激反应的措施一般为添加抗氧化剂或能量物质，例如维生素C、谷胱甘肽等，但往往由于物质的单一性和局限性而得效果不佳。
发明内容
本发明的目的在于提供一种缓解淡水鱼类运输应激的方法，该方法天然无害，不仅提高了淡水鱼在运输过程的存活率、减少了鱼体肌肉营养组分流失、缓解了鱼体的氧化损伤，而且很大程度上保证了肌肉品质。
为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案是：一种缓解淡水鱼类运输应激的方法，其特征在于包括如下步骤：
1)配置发酵底物：将预处理后的黄芪、人参、当归、枸杞子、麦冬，按：黄芪、人参、当归、枸杞子、麦冬分别为8-15g:6-10g:15-20g:10-15g:12-18g的质量比混合配置，得到发酵底物；
2)培养液(营养液)的配置：
嗜酸乳杆菌琼脂培养液：胰酪5-15g，酵母浸粉3-8g，磷酸二氢钾4-8g，柠檬酸铵1-3g，乙酸钠20-30g，硫酸镁0.5-0.6g，硫酸锰0.1-0.2g，亚硫酸铁0.03-0.04g，葡萄糖10-30g，琼脂10-20g，pH值5.5±0.2，温度20-30℃，蒸馏水1000ml；
植物乳杆菌培养液：酵母膏6-8g，蛋白胨6-8g，葡萄糖8-12g，磷酸二氢钾1-3g，西红柿汁80-120ml，蒸馏水900ml，pH7.0；
双歧杆菌培养液：蛋白胨10-20g，酵母粉1-3g，葡萄糖10-30g，可溶性淀粉0.5-0.8g，氯化钠3-6g，质量浓度5％半胱氨酸5-15ml，西红柿浸出液300-500ml，肝提取液60-90ml，琼脂10-30g，蒸馏水520ml，pH7.0；
嗜热链球菌培养液：蛋白胨10-20g，酵母粉1-3g，葡萄糖10-30g，可溶性淀粉0.5-0.8g，氯化钠3-6g，质量浓度5％半胱氨酸5-15ml，西红柿浸出液300-500ml，肝提取液60-90ml，琼脂10-30g，蒸馏水520ml，pH7.0；
3)接种液的制备：用于发酵的微生物包括嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌，按嗜酸乳杆菌：植物乳杆菌：双歧杆菌：嗜热链球菌的体积比＝1～4：1～3：1～6：1～8，选取微生物；嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌分别用对应的嗜酸乳杆菌琼脂培养液、植物乳杆菌培养液、双歧杆菌培养液、嗜热链球菌培养液，分别在15～25℃、12-18℃、10～15℃、20～25℃的无菌环境下进行培养接种，接种后的嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌的菌悬液等比混合，得到接种液(接种的菌悬液的浓度为107cfu/ml)；
4)将步骤1)得到的发酵底物进行处理：发酵底物中加入水，使发酵底物中水的重量百分数含量为45～65％，得到处理后的发酵底物；
5)发酵：按接种液、处理后的发酵底物所占体积百分数为40-90％、10-60％，将接种液与处理后的发酵底物混合，置于发酵箱中进行发酵；
发酵条件：氯化钠的体积浓度3-6％，亚硝酸钠的体积浓度0.005-0.015％，pH值5.5～7.5，温度为25～35℃，发酵时间为10-18h，搅拌速率80-150r/min；
6)发酵结束后采用纯碱调整浸提的发酵液pH至7.0，过滤，所得滤液为最终的发酵液，将其作成分分析后进行抗氧化能力评估以及对具抗氧化活性组分的筛选并分别测定各组分含量或活力值，结果参见下表1；
7)将步骤6)得到的发酵液加入到淡水鱼的运输水体中，在每升淡水鱼的运输水体中添加发酵液25-65ml。
优选的，步骤1)所述黄芪、人参、当归、枸杞子、麦冬需先经过预处理，预处理方法为：选取质量检验合格的黄芪、人参、当归、枸杞子、麦冬，分别进行挑选、洗药、润药、切药、干燥、粉碎等处理，得到预处理后的黄芪、人参、当归、枸杞子、麦冬。
优选的，所述的步骤1)中配置发酵底物，按：黄芪、人参、当归、枸杞子、麦冬分别10g:8g:18g:12g:15g的质量比混合配发酵底物。
优选的，所述的步骤2)中嗜酸乳杆菌琼脂培养液：胰酪10g，酵母浸粉5g，磷酸二氢钾6g，柠檬酸铵2g，乙酸钠25g，硫酸镁0.575g，硫酸锰0.15g，亚硫酸铁0.0355g，葡萄糖20g，琼脂15g，pH值5.5±0.2，温度25℃，蒸馏水1000ml；
植物乳杆菌培养液：酵母膏7g，蛋白胨7g，葡萄糖10g，磷酸二氢钾2g，西红柿汁100ml，蒸馏水900ml，pH7.0；
双歧杆菌培养液：蛋白胨15g，酵母粉2g，葡萄糖20g，可溶性淀粉0.6g，氯化钠5g，质量浓度5％半胱氨酸10ml，西红柿浸出液400ml，肝提取液75ml，琼脂20g，蒸馏水520ml，pH7.0；
嗜热链球菌培养液：蛋白胨15g，酵母粉2g，葡萄糖20g，可溶性淀粉0.6g，氯化钠5g，质量浓度5％半胱氨酸10ml，西红柿浸出液400ml，肝提取液75ml，琼脂20g，蒸馏水520ml，pH7.0。
优选的，所述的步骤3)中，按嗜酸乳杆菌：植物乳杆菌：双歧杆菌：嗜热链球菌的体积比＝1：3：6：7，选取嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌；分别在：20℃、15℃、12℃、22℃的无菌环境下进行培养接种。
优选的，所述的步骤4)中，发酵底物中水的重量百分数含量为55％。
优选的，所述的步骤5)中的发酵条件：氯化钠的体积浓度5％，亚硝酸钠的体积浓度0.01％，pH值6.0，温度为30℃，发酵时间为15h，搅拌速率120r/min；接种液、处理后的发酵底物所占体积百分数为80％、20％。
优选的，所述的步骤7)中，在每升淡水鱼的运输水体中添加发酵液50ml。
优选的，所述的淡水鱼为虹鳟鱼、草鱼、鲈鱼、斑点叉尾鮰等中的一种。
上述的方法可有效缓解淡水鱼运输过程中的应激反应。
表1
Figure BDA0002781817400000031
注：本发明中发酵液具备但不仅限于以上抗氧化特性或对应水平的各抗氧化活性物。显然，以上所述只列举了本发明发酵液中一部分较典型、有代表性的指标。
本发明利用乳酸菌复合菌系对中药材复合物进行发酵，并将发酵液加入运输虹鳟鱼运输水体中以缓解应激反应，所述的主要原料来自湖北武汉大宗淡水鱼养殖基地，发酵所选的乳酸菌包括嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌等，选用的中药发酵底物为黄芪、人参、当归、枸杞子、麦冬等。
乳酸菌作为食品类发酵剂，除开本身表面具有的糖分子和蛋白质以及各种发酵产物所具有的维持肠道内菌群平衡、抑制有害菌生长等生物功能外，其强大的抗氧化功效(清除自由基、螯合金属离子、具有还原能力、抑制脂质氧化和提高抗氧化酶活性等)更是为当下保健品、药物等各类产品研发提供了新的方向。
中药因其安全且副作用少、对胃肠道无损伤、对肝肾刺激小等诸多特点，广为研究人员和用药人所接受。微生物发酵为中药炮制的重要方法之一，中药微生物发酵过程中常常会引起生物转化反应，导致中药有效成分的改变和药效的变化；相反中药材成分也会刺激微生物次生代谢产物的改变。发酵中药可显著缓解动物的应激反应，并且中药经益生菌发酵后其有效活性成分得到充分利用的同时还可促进动物生长、提高免疫力等。同样地，在鱼类生产尤其是运输过程中添加中药发酵液可以明显提高鱼的存活率、减少鱼肉营养物质的消耗与流失并保证了最佳肉品质。
本发明采用乳酸菌发酵中药材复合物，并将发酵液加入淡水鱼类运输水体中。该方法天然无害，不仅提高了淡水鱼在运输过程的存活率、减少了鱼体肌肉营养组分流失、缓解了鱼体的氧化损伤，而且很大程度上保证了肌肉品质。
本发明的有益效果是：可显著减少机体的氧化损伤，提高淡水鱼的运输存活率，减少营养物质的流失，有效保障了肌肉品质。
附图说明
图1为本发明的工艺流程图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，并通过将本发明所涉及实验过程和结果的详细展示作为辅助，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在不做出创新性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
如图1所示，一种缓解淡水鱼类运输应激的方法，包括如下步骤：
1)配置发酵底物：将预处理后的黄芪、人参、当归、枸杞子、麦冬，按：黄芪、人参、当归、枸杞子、麦冬分别10g:8g:18g:12g:15g的质量比混合配置，得到发酵底物；
2)培养液(营养液)的配置：
所述的步骤2)中嗜酸乳杆菌琼脂培养液：胰酪10g，酵母浸粉5g，磷酸二氢钾6g，柠檬酸铵2g，乙酸钠25g，硫酸镁0.575g，硫酸锰0.15g，亚硫酸铁0.0355g，葡萄糖20g，琼脂15g，pH值5.5±0.2，温度25℃，蒸馏水1000ml；
植物乳杆菌培养液：酵母膏7g，蛋白胨7g，葡萄糖10g，磷酸二氢钾2g，西红柿汁100ml，蒸馏水900ml，pH7.0；
双歧杆菌培养液：蛋白胨15g，酵母粉2g，葡萄糖20g，可溶性淀粉0.6g，氯化钠5g，质量浓度5％半胱氨酸10ml，西红柿浸出液400ml，肝提取液75ml，琼脂20g，蒸馏水520ml，pH7.0；
嗜热链球菌培养液：蛋白胨15g，酵母粉2g，葡萄糖20g，可溶性淀粉0.6g，氯化钠5g，质量浓度5％半胱氨酸10ml，西红柿浸出液400ml，肝提取液75ml，琼脂20g，蒸馏水520ml，pH7.0。
3)接种液的制备：用于发酵的微生物包括嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌，按嗜酸乳杆菌：植物乳杆菌：双歧杆菌：嗜热链球菌的体积比＝1：3：6：7，选取微生物；嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌分别用对应的嗜酸乳杆菌琼脂培养液、植物乳杆菌培养液、双歧杆菌培养液、嗜热链球菌培养液，分别在20℃、15℃、12℃、22℃的无菌环境下进行培养接种，接种后的嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌的菌悬液等比混合，得到接种液(接种的菌悬液的浓度为107cfu/ml)；
4)将步骤1)得到的发酵底物进行处理：发酵底物中加入水，使发酵底物中水的重量百分数含量为55％，得到处理后的发酵底物；
5)发酵：按接种液、处理后的发酵底物所占体积百分数为80％、20％，将接种液与处理后的发酵底物混合，置于发酵箱中进行发酵；
发酵条件：氯化钠的体积浓度5％，亚硝酸钠的体积浓度0.01％，pH值6，温度为30℃，发酵时间为15h，搅拌速率120r/min；
6)发酵结束后采用纯碱调整浸提的发酵液pH至7.0，过滤，所得滤液为最终的发酵液，将其作成分分析后进行抗氧化能力评估以及对具抗氧化活性组分的筛选并分别测定各组分含量或活力值，结果参见下表2；
7)将步骤6)得到的发酵液加入到淡水鱼的运输水体中，在每升淡水鱼的运输水体中添加发酵液50ml。
按照具体实施方式中所述流程进行发酵液的制备并低温保存备用。
从购自湖北省武汉市虹鳟鱼养殖基地的100条体重1.5±0.25kg成年虹鳟鱼中挑选20条健康状态较好的个体作为添加50ml发酵液的运输组，运输组进行6小时运输后加入适量MS-222以麻醉并及时解剖取其背部肌肉，测定包括肌肉中可用于衡量体内氧化应激的指标包括丙二醛(MDA)、蛋白质羰基、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)，谷胱甘肽(GSH)等，评价肉质的指标嫩度、pH、加压失水率、肌糖元、乳酸和基本组分含量，以及存活率等。
对比例1
按照具体实施方式中所述流程进行发酵液的制备并低温保存备用。
从购自湖北省武汉市虹鳟鱼养殖基地的100条体重1.5±0.25kg成年虹鳟鱼中挑选20条健康状态较好的个体作为不添加发酵液的运输组，运输组进行6小时运输后加入适量MS-222以麻醉并及时解剖取其背部肌肉，测定包括肌肉中可用于衡量体内氧化应激的指标包括丙二醛(MDA)、蛋白质羰基、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)，谷胱甘肽(GSH)等，评价肉质的指标嫩度、pH、加压失水率、肌糖元、乳酸和基本组分含量，以及存活率等。
对比例2
按照具体实施方式中所述流程进行发酵液的制备并低温保存备用。
从购自湖北省武汉市虹鳟鱼养殖基地的100条体重1.5±0.25kg成年虹鳟鱼中挑选20条健康状态较好的个体作为空白对照运输组，即不运输，直接加入适量MS-222以麻醉并及时解剖取其背部肌肉，测定包括肌肉中可用于衡量体内氧化应激的指标包括丙二醛(MDA)、蛋白质羰基、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)，谷胱甘肽(GSH)等，评价肉质的指标嫩度、pH、加压失水率、肌糖元、乳酸和基本组分含量，以及存活率等。
对本发明实施例1、对比例1～2中各项指标的测定结果整合，数据参见表2：
表2
Figure BDA0002781817400000061
Figure BDA0002781817400000071
如表2所示，与不运输的对照组相比，在经历6小时运输后的两个运输组虹鳟鱼肌肉中丙二醛积累量升高、蛋白质羰基化加剧、抗氧化酶活降低等，这说明运输过程引起了虹鳟鱼的氧化应激反应，并导致了肌肉品质的降低与营养物质的流失；与不添加发酵液运输组相比，添加发酵液运输组虹鳟鱼的氧化应激程度更低、肌肉品质更高、营养物质的流失更少，并且有较高的运输存活率。
综上所述，运输会引发虹鳟鱼的氧化应激，造成肌肉品质的劣化和营养物质的流失，运输死亡率也随之升高；运输水体中发酵液的添加对缓解虹鳟鱼氧化应激、维持肌肉品质、减少营养物质的流失、提高运输存活率有明显效果。
实施例2
按照具体实施方式中所述流程进行发酵液的制备并低温保存备用。
从购自湖北省武汉市草鱼养殖基地的100条体重1.5±0.25kg成年草鱼中挑选20条健康状态较好的个体作为添加50ml发酵液的运输组，运输组进行6小时运输后加入适量MS-222以麻醉并及时解剖取其背部肌肉，测定包括肌肉中可用于衡量体内氧化应激的指标包括丙二醛(MDA)、蛋白质羰基、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)，谷胱甘肽(GSH)等，评价肉质的指标嫩度、pH、加压失水率、肌糖元、乳酸和基本组分含量，以及存活率等。
对比例1
按照具体实施方式中所述流程进行发酵液的制备并低温保存备用。
从购自湖北省武汉市草鱼养殖基地的100条体重1.5±0.25kg成年草鱼中挑选20条健康状态较好的个体作为不添加发酵液的运输组，运输组进行6小时运输后加入适量MS-222以麻醉并及时解剖取其背部肌肉，测定包括肌肉中可用于衡量体内氧化应激的指标包括丙二醛(MDA)、蛋白质羰基、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)，谷胱甘肽(GSH)等，评价肉质的指标嫩度、pH、加压失水率、肌糖元、乳酸和基本组分含量，以及存活率等。
对比例2
按照具体实施方式中所述流程进行发酵液的制备并低温保存备用。
从购自湖北省武汉市草鱼养殖基地的100条体重1.5±0.25kg成年草鱼中挑选20条健康状态较好的个体作为空白对照运输组，即不运输，直接加入适量MS-222以麻醉并及时解剖取其背部肌肉，测定包括肌肉中可用于衡量体内氧化应激的指标包括丙二醛(MDA)、蛋白质羰基、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、过氧化物酶(POD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPX)，谷胱甘肽(GSH)等，评价肉质的指标嫩度、pH、加压失水率、肌糖元、乳酸和基本组分含量，以及存活率等。
对本发明实施例2、对比例1～2中各项指标的测定结果整合，数据参见表3：
表3
Figure BDA0002781817400000081
Figure BDA0002781817400000091
实验结果表明，本发明实施例1和实施例2提供的一种中药复合物发酵液可有效缓解淡水鱼运输过程的运输应激反应，具体表现为显著减少机体的氧化损伤，提高草鱼的运输存活率，减少营养物质的流失，有效保障了肌肉品质。
实施例3
一种缓解淡水鱼类运输应激的方法，包括如下步骤：
1)配置发酵底物：将预处理后的黄芪、人参、当归、枸杞子、麦冬，按：黄芪、人参、当归、枸杞子、麦冬分别为8g:6g:15g:10g:12g的质量比混合配置，得到发酵底物；
2)培养液(营养液)的配置：
嗜酸乳杆菌琼脂培养液：胰酪5g，酵母浸粉3g，磷酸二氢钾4g，柠檬酸铵1g，乙酸钠20g，硫酸镁0.5g，硫酸锰0.1g，亚硫酸铁0.03g，葡萄糖10g，琼脂10g，pH值5.5±0.2，温度20℃，蒸馏水1000ml；
植物乳杆菌培养液：酵母膏6g，蛋白胨6g，葡萄糖8g，磷酸二氢钾1g，西红柿汁80ml，蒸馏水900ml，pH7.0；
双歧杆菌培养液：蛋白胨10g，酵母粉1g，葡萄糖10g，可溶性淀粉0.5g，氯化钠3g，质量浓度5％半胱氨酸5ml，西红柿浸出液300ml，肝提取液60ml，琼脂10g，蒸馏水520ml，pH7.0；
嗜热链球菌培养液：蛋白胨10g，酵母粉1g，葡萄糖10g，可溶性淀粉0.5g，氯化钠3g，质量浓度5％半胱氨酸5ml，西红柿浸出液300ml，肝提取液60ml，琼脂10g，蒸馏水520ml，pH7.0；
3)接种液的制备：用于发酵的微生物包括嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌，按嗜酸乳杆菌：植物乳杆菌：双歧杆菌：嗜热链球菌的体积比＝1：1：1：1，选取微生物；嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌分别用对应的嗜酸乳杆菌琼脂培养液、植物乳杆菌培养液、双歧杆菌培养液、嗜热链球菌培养液，分别在15℃、12℃、10℃、20℃的无菌环境下进行培养接种，接种后的嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌的菌悬液等比混合，得到接种液；
4)将步骤1)得到的发酵底物进行处理：发酵底物中加入水，使发酵底物中水的重量百分数含量为45％，得到处理后的发酵底物；
5)发酵：按接种液、处理后的发酵底物所占体积百分数为40％、60％，将接种液与处理后的发酵底物混合，置于发酵箱中进行发酵；
发酵条件：氯化钠的体积浓度3％，亚硝酸钠的体积浓度0.005％，pH值5.5，温度为25℃，发酵时间为10h，搅拌速率80r/min；
6)发酵结束后采用纯碱调整浸提的发酵液pH至7.0，过滤，所得滤液为最终的发酵液；
7)将步骤6)得到的发酵液加入到淡水鱼(例如虹鳟鱼、草鱼、鲈鱼、斑点叉尾鮰等)的运输水体中，在每升淡水鱼的运输水体中添加发酵液25ml。
实验方法同实施例1，实验结果表明，本发明提供的一种中药复合物发酵液可有效缓解淡水鱼运输过程的运输应激反应，具体表现为显著减少机体的氧化损伤，提高淡水鱼的运输存活率，减少营养物质的流失，有效保障了肌肉品质。
实施例4
一种缓解淡水鱼类运输应激的方法，包括如下步骤：
1)配置发酵底物：将预处理后的黄芪、人参、当归、枸杞子、麦冬，按：黄芪、人参、当归、枸杞子、麦冬分别为15g:10g:20g:15g:18g的质量比混合配置，得到发酵底物；
2)培养液(营养液)的配置：
嗜酸乳杆菌琼脂培养液：胰酪15g，酵母浸粉8g，磷酸二氢钾8g，柠檬酸铵3g，乙酸钠30g，硫酸镁0.6g，硫酸锰0.2g，亚硫酸铁0.04g，葡萄糖30g，琼脂20g，pH值5.5±0.2，温度30℃，蒸馏水1000ml；
植物乳杆菌培养液：酵母膏8g，蛋白胨8g，葡萄糖12g，磷酸二氢钾3g，西红柿汁120ml，蒸馏水900ml，pH7.0；
双歧杆菌培养液：蛋白胨20g，酵母粉3g，葡萄糖30g，可溶性淀粉0.8g，氯化钠6g，质量浓度5％半胱氨酸15ml，西红柿浸出液500ml，肝提取液90ml，琼脂30g，蒸馏水520ml，pH7.0；
嗜热链球菌培养液：蛋白胨20g，酵母粉3g，葡萄糖30g，可溶性淀粉0.8g，氯化钠6g，质量浓度5％半胱氨酸15ml，西红柿浸出液500ml，肝提取液90ml，琼脂30g，蒸馏水520ml，pH7.0；
3)接种液的制备：用于发酵的微生物包括嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌，按嗜酸乳杆菌：植物乳杆菌：双歧杆菌：嗜热链球菌的体积比＝4：3：6：8，选取微生物；嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌分别用对应的嗜酸乳杆菌琼脂培养液、植物乳杆菌培养液、双歧杆菌培养液、嗜热链球菌培养液，分别在25℃、18℃、15℃、25℃的无菌环境下进行培养接种，接种后的嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌的菌悬液等比混合，得到接种液；
4)将步骤1)得到的发酵底物进行处理：发酵底物中加入水，使发酵底物中水的重量百分数含量为45～65％，得到处理后的发酵底物；
5)发酵：按接种液、处理后的发酵底物所占体积百分数为90％、10％，将接种液与处理后的发酵底物混合，置于发酵箱中进行发酵；
发酵条件：氯化钠的体积浓度6％，亚硝酸钠的体积浓度0.015％，pH值7.5，温度为35℃，发酵时间为18h，搅拌速率150r/min；
6)发酵结束后采用纯碱调整浸提的发酵液pH至7.0，过滤，所得滤液为最终的发酵液；
7)将步骤6)得到的发酵液加入到虹鳟鱼的运输水体中，在每升运输水体中添加发酵液25-65ml。
实验方法同实施例1，实验结果表明，本发明提供的一种中药复合物发酵液可有效缓解淡水鱼运输过程的运输应激反应，具体表现为显著减少机体的氧化损伤，提高淡水鱼的运输存活率，减少营养物质的流失，有效保障了肌肉品质。
所公开的实施例和对比例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的实行以及多种修改对本领域的专业技术人员来说是显而易见的。本文中所阐述的原理或其他结论性言语为均为一般性，即可以在脱离本发明所述范围外的情况下，适用并可在其他实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所述的这些实施例，即可适用于所有符合本文所公示的原理和其他条件或创新点相类似的最宽应用范围。

Claims (7)

1.一种缓解淡水鱼类运输应激的方法，其特征在于包括如下步骤：
1)配置发酵底物：将预处理后的黄芪、人参、当归、枸杞子、麦冬，按：黄芪、人参、当归、枸杞子、麦冬分别为8-15g∶6-10g∶15-20g∶10-15g∶12-18g的质量比混合配置，得到发酵底物；
所述黄芪、人参、当归、枸杞子、麦冬需先经过预处理，预处理方法为：选取质量检验合格的黄芪、人参、当归、枸杞子、麦冬，分别进行挑选、洗药、润药、切药、干燥、粉碎处理，得到预处理后的黄芪、人参、当归、枸杞子、麦冬；
2)培养液的配置：
嗜酸乳杆菌琼脂培养液：胰酪5-15g，酵母浸粉3-8g，磷酸二氢钾4-8g，柠檬酸铵1-3g，乙酸钠20-30g，硫酸镁0.5-0.6g，硫酸锰0.1-0.2g，亚硫酸铁0.03-0.04g，葡萄糖10-30g，琼脂10-20g，pH值5.5±0.2，温度20-30℃，蒸馏水1000ml；
植物乳杆菌培养液：酵母膏6-8g，蛋白胨6-8g，葡萄糖8-12g，磷酸二氢钾1-3g，西红柿汁80-120ml，蒸馏水900ml，pH7.0；
双歧杆菌培养液：蛋白胨10-20g，酵母粉1-3g，葡萄糖10-30g，可溶性淀粉0.5-0.8g，氯化钠3-6g，质量浓度5％半胱氨酸5-15ml，西红柿浸出液300-500ml，肝提取液60-90ml，琼脂10-30g，蒸馏水520ml，pH7.0；
嗜热链球菌培养液：蛋白胨10-20g，酵母粉1-3g，葡萄糖10-30g，可溶性淀粉0.5-0.8g，氯化钠3-6g，质量浓度5％半胱氨酸5-15ml，西红柿浸出液300-500ml，肝提取液60-90ml，琼脂10-30g，蒸馏水520ml，pH7.0；
3)接种液的制备：用于发酵的微生物包括嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌，按嗜酸乳杆菌∶植物乳杆菌∶双歧杆菌∶嗜热链球菌的体积比＝1～4∶1～3∶1～6∶1～8，选取微生物；嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌分别用对应的嗜酸乳杆菌琼脂培养液、植物乳杆菌培养液、双歧杆菌培养液、嗜热链球菌培养液，分别在15～25℃、12-18℃、10～15℃、20～25℃的无菌环境下进行培养接种，接种后的嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌的菌悬液等比混合，得到接种液；
4)将步骤1)得到的发酵底物进行处理：发酵底物中加入水，使发酵底物中水的重量百分数含量为45～65％，得到处理后的发酵底物；
5)发酵：按接种液、处理后的发酵底物所占体积百分数为40-90％、10-60％，将接种液与处理后的发酵底物混合，置于发酵箱中进行发酵；
发酵条件：氯化钠的体积浓度3-6％，亚硝酸钠的体积浓度0.005-0.015％，pH值5.5～7.5，温度为25～35℃，发酵时间为10-18h，搅拌速率80-150r/min；
6)发酵结束后采用纯碱调整浸提的发酵液pH至7.0，过滤，所得滤液为最终的发酵液；
7)将步骤6)得到的发酵液加入到淡水鱼的运输水体中，所述的淡水鱼为虹鳟鱼、草鱼、鲈鱼、斑点叉尾鮰中的一种，在每升淡水鱼的运输水体中添加发酵液25-65ml。
2.根据权利要求1所述的一种缓解淡水鱼类运输应激的方法，其特征在于：所述的步骤1)中配置发酵底物，按：黄芪、人参、当归、枸杞子、麦冬分别10g∶8g∶18g∶12g∶15g的质量比混合配发酵底物。
3.根据权利要求1所述的一种缓解淡水鱼类运输应激的方法，其特征在于：所述的步骤2)中嗜酸乳杆菌琼脂培养液：胰酪10g，酵母浸粉5g，磷酸二氢钾6g，柠檬酸铵2g，乙酸钠25g，硫酸镁0.575g，硫酸锰0.15g，亚硫酸铁0.0355g，葡萄糖20g，琼脂15g，pH值5.5±0.2，温度25℃，蒸馏水1000ml；
植物乳杆菌培养液：酵母膏7g，蛋白胨7g，葡萄糖10g，磷酸二氢钾2g，西红柿汁100ml，蒸馏水900ml，pH7.0；
双歧杆菌培养液：蛋白胨15g，酵母粉2g，葡萄糖20g，可溶性淀粉0.6g，氯化钠5g，质量浓度5％半胱氨酸10ml，西红柿浸出液400ml，肝提取液75ml，琼脂20g，蒸馏水520ml，pH7.0；
嗜热链球菌培养液：蛋白胨15g，酵母粉2g，葡萄糖20g，可溶性淀粉0.6g，氯化钠5g，质量浓度5％半胱氨酸10ml，西红柿浸出液400ml，肝提取液75ml，琼脂20g，蒸馏水520ml，pH7.0。
4.根据权利要求1所述的一种缓解淡水鱼类运输应激的方法，其特征在于：所述的步骤3)中，按嗜酸乳杆菌∶植物乳杆菌∶双歧杆菌∶嗜热链球菌的体积比＝1∶3∶6∶7，选取嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌、嗜热链球菌；分别在：20℃、15℃、12℃、22℃的无菌环境下进行培养接种。
5.根据权利要求1所述的一种缓解淡水鱼类运输应激的方法，其特征在于：所述的步骤4)中，发酵底物中水的重量百分数含量为55％。
6.根据权利要求1所述的一种缓解淡水鱼类运输应激的方法，其特征在于：所述的步骤5)中的发酵条件：氯化钠的体积浓度5％，亚硝酸钠的体积浓度0.01％，pH值6.0，温度为30℃，发酵时间为15h，搅拌速率120r/min；接种液、处理后的发酵底物所占体积百分数为80％、20％。
7.根据权利要求1所述的一种缓解淡水鱼类运输应激的方法，其特征在于：所述的步骤7)中，在每升淡水鱼的运输水体中添加发酵液50ml。
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