CN112390814A - Ep4受体拮抗剂和pd-1抑制剂联合用于癌症的治疗 - Google Patents

Ep4受体拮抗剂和pd-1抑制剂联合用于癌症的治疗 Download PDF

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Abstract

本发明提供了EP4受体拮抗剂和PD‑1抑制剂联合用于癌症的治疗，具体地，本发明提供了一种产品组合，包括：(i)第一药物组合物，所述第一药物组合物含有(a)第一活性成分，所述第一活性成分为EP4受体拮抗剂，以及药学上可接受的载体；和(ii)第二药物组合物，所述第二药物组合物含有(b)第二活性成分，所述第二活性成分为PD‑1抑制剂，以及药学上可接受的载体；其中，所述的第一药物组合物和第二药物组合物为不同的药物组合物，或同一药物组合物。本发明的产品组合可协同治疗恶性肿瘤。

Description

EP4受体拮抗剂和PD-1抑制剂联合用于癌症的治疗
技术领域
本发明涉及生物医药领域，具体地，涉及EP4受体拮抗剂和PD-1抑制剂联合用于癌症的治疗。
背景技术
癌症已成为威胁人类生命健康最可怕的杀手之一，国际癌症研究机构(IARC)发布的2018年《全球癌症报告》数据显示，2018年全球新增1810万癌症病例，约960万人将死于癌症，且发病率和死亡率还在逐年攀升。报告称，我国的癌症发病率和死亡率全球第一，其中，我国新增病例数占380.4万例，死亡病例数占229.6万例。
继手术治疗、放射治疗和化疗药物治疗之后，以免疫检查点抑制剂为代表的肿瘤免疫治疗的发展，推动了癌症治疗革命性的变化。
然而目前的免疫检查点抑制剂在治疗癌症，尤其是恶性肿瘤方面有很多的缺点，比如对晚期实体瘤的客观响应率低(一般，客观缓解率<30％)；诱发多种致死性的副作用，包括结肠炎、神经毒性、肺炎、肝炎、下垂体炎、肾炎、肾上腺炎和心脏疾病,这些因素导致的死亡人数最多，为最主要的致死性副作用。
因此，本领域迫切需要开发可有效治疗癌症，尤其是恶性肿瘤的药物。
发明内容
本发明的目的在于开发可有效治疗癌症，尤其是恶性肿瘤的药物。
本发明第一方面提供了一种产品组合，包括：
(i)第一药物组合物，所述第一药物组合物含有(a)第一活性成分，所述第一活性成分为EP4受体拮抗剂，以及药学上可接受的载体；和
(ii)第二药物组合物，所述第二药物组合物含有(b)第二活性成分，所述第二活性成分为PD-1抑制剂，以及药学上可接受的载体；
其中，所述的第一药物组合物和第二药物组合物为不同的药物组合物，或同一药物组合物。
在另一优选例中，所述EP4受体拮抗剂是式I所示的化合物或其药学上可接受的盐或水合物：
Figure BDA0002606586210000021
其中，
Figure BDA0002606586210000022
和
Figure BDA0002606586210000023
各自独立地选自下组：C3-C6碳环、C6-C12芳基、含一个或多个O、N、S原子的五元或六元杂芳环，其中
Figure BDA0002606586210000024
和
Figure BDA0002606586210000025
可任选地被1-3个R5基团取代；
Figure BDA0002606586210000026
为取代或未取代的选自下组的环：C4-C7碳环、4-7元饱和杂环、苯环、4-7元不饱和杂环(包括杂芳环)，其中，所述的杂环上具有一个或多个选自下组的杂原子：O、S或NR6；所述的环可以是单环、二环、螺环或桥环；
X为选自下组的基团：-O-、-S-、-N(R7)-；
Y为无，或者为选自下组的基团：-CH2-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-N(R8)-；
B1和B2各自独立地为选自下组的基团：无、C1-C6的亚烷基、C2-C6的亚烯基、C2-C6的亚炔基；优选地，所述的B1和B2独立地选自下组：-(CH2)n-；其中n＝0、1、2、3或4、-CH＝CH-、-CH＝CH-CH2-、-CH2-CH＝CH-、-CH＝CH-CH2-CH2-、-CH2-CH＝CH-CH2-、-CH2-CH2-CH＝CH-；-C≡C-、-C≡C-CH2-、-CH2-C≡C-、-C≡C-CH2-CH2-、-CH2-C≡C-CH2-、-CH2-CH2-C≡C-；且B1、B2和Y不同时为无；
R1为选自下组的一个或多个基团：H、C1-C6的烷基(优选C1-C4烷基)、卤素、硝基、-N(R9)(R10)、-OH、-CN、C1-C6的卤代烷基(优选为C1-C4卤代烷基，更优选为二氟甲基、三氟甲基)、C1-C6的烷氧基(优选为C1-C4烷氧基，更优选为甲氧基、乙氧基)、C1-C6的卤代烷氧基(优选为C1-C4卤代烷氧基，更优选为二氟甲氧基、三氟甲氧基)、＝O；
R2和R3各自独立地选自：H、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基，或者，R2、R3和与其相连的碳原子共同构成3至6元环，所述的环为碳环，或具有1-3个选自下组的杂原子的3至6元杂环：O、S或N(R11)；
R4选自下列基团中的任意一个：-COOR12(优选为-COOH、-COOCH3、-COOCH2CH3、-COOCH2CH2CH3、-COOCH(CH3)2)、C(O)-N(Ra)(Rb)、氰基、四氮唑基、磷酸基、磺酸基；其中，Ra选自下组：H、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C1-C6卤代烷基、取代或未取代的C3-C6环烷基和取代或未取代的C1-C6的烷氧基；Rb选自下组：H、-OH、-NH2、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C1-C6卤代烷基、取代或未取代的C3-C6环烷基和取代或未取代的C1-C6的烷氧基；
各个R5和R12各自独立地选自：H、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、C1-C6的烷氧基(优选为甲氧基、乙氧基)；
R6、R7、R8、R9、R10和R11各自独立地选自：H、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、C3-C6卤代环烷基、C6-C10的芳基、五元或六元杂环芳香基、
Figure BDA0002606586210000031
除非特别说明，所述的取代基团上的一个或多个氢原子被选自下组的取代基取代：F、Cl、Br、I、羟基、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、硝基、-CN、氧代(＝O)；
R13和R14各自独立地选自：H、C1-C6的烷基(优选为甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、叔丁基、戊基、己基)、C1-C6的烷氧基、C6-C10的芳基、C1-C6的亚烷基、-C6-C10的芳基。
在另一优选例中，式(I)中的
Figure BDA0002606586210000032
具有如下式所示的结构：
Figure BDA0002606586210000033
其中，J、K、L各自独立地选自下组：-CH2-、-CH(CH3)-、-CH(CH2CH3)-、-C(CH3)2-、
Figure BDA0002606586210000034
-O-、
Figure BDA0002606586210000035
-NR16-；
其中，R15和R16各自独立地选自下组：H、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、
Figure BDA0002606586210000041
或
Figure BDA0002606586210000042
具有如下式所示的结构：
Figure BDA0002606586210000043
其中，M、N、P、Q每个独立选自于-CH2-、-CH(CH3)-、-CH(CH2CH3)-、-C(CH3)2-、
Figure BDA0002606586210000044
-O-、
Figure BDA0002606586210000045
-NR16-；
或
Figure BDA0002606586210000046
具有如下式所示的结构：
Figure BDA0002606586210000047
其中，R、S、T、U、V各自独立地选自下组：-CH2-、-CH(CH3)-、-CH(CH2CH3)-、-C(CH3)2-、
Figure BDA0002606586210000048
-O-、
Figure BDA0002606586210000049
-NR16-。
在另一优选例中，M、N、P和Q形成环状结构，或M与Q之间，M与P之间或N与Q之间形成由0-4个碳原子构成桥环结构。
在另一优选例中，R、S、T、U和V形成环状结构，或R、S、T、U和V中任意两个之间形成由0-4个碳原子构成的桥环结构。
在另一优选例中，X为-S-。
在另一优选例中，R4选自下列基团中的任意一个：-COOR12(优选为-COOH、-COOCH3、-COOCH2CH3、-COOCH2CH2CH3、-COOCH(CH3)2)、C(O)-N(Ra)(Rb)、氰基、四氮唑基、磷酸基、磺酸基；其中，Ra选自下组：H、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C1-C4卤代烷基、取代或未取代的C3-C5环烷基和取代或未取代的C1-C4的烷氧基；Rb选自下组：H、-OH、-NH2、取代或未取代的C1-C4烷基、取代或未取代的C1-C4卤代烷基、取代或未取代的C3-C5环烷基和取代或未取代的C1-C4的烷氧基；
在另一优选例中，
Figure BDA0002606586210000051
和
Figure BDA0002606586210000052
各自独立地选自下组：C3-C6碳环、C6-C10芳环、含一个或多个O、N、S原子的五元或六元杂芳环，其中
Figure BDA0002606586210000053
和
Figure BDA0002606586210000054
可任选地被1-3个R5基团取代。
在另一优选例中，所述的卤素包括F、Cl、Br或I。在另一优选例中，
Figure BDA0002606586210000055
和
Figure BDA0002606586210000056
各自独立地选自下组：苯环、十元芳环、含一个或多个O、N、S原子的五元或六元杂芳环，其中
Figure BDA0002606586210000057
和
Figure BDA0002606586210000058
可任选地被1-3个R5基团取代。
在另一优选例中，
Figure BDA0002606586210000059
为取代或未取代的C5-C7碳环，或者取代或未取代的6元氧杂环。
在另一优选例中，所述的EP4受体拮抗剂选自下组：
(S)-4-(1-(2-((4-氟苯基)乙炔基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-((4-氟苯基)乙炔基)-5,6-二氢-4H-环戊二烯并[b]噻吩-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
4-((1S)-1-(6-乙基-2-((4-氟苯基)乙炔基)-4,5,6,7-四氢化苯并[b]噻吩-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-((4-氟苯基)乙炔基)-5,6,7,8-四氢-4H-环庚烷并[b]噻吩-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-((4-氟苯基)乙炔基)-5,5-二甲基-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-氟苯乙基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-氟苯乙基)-5,6,7,8-四氢-4H-环庚烷并[b]噻吩-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-氟苯乙基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-氟苯乙基)-5,6-二氢-4H-环戊二烯并[b]噻吩-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-氟苯乙基)-5,5-二甲基-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-(三氟甲基)苯乙基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(3-(三氟甲基)苯乙基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(3-氟苯乙基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-氟苄基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-(三氟甲基)苄基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(3-(三氟甲基)苄基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(R)-4-(1-(2-(4-氟苄基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(R)-4-(1-(2-(4-(三氟甲基)苄基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(R)-4-(1-(2-(3-(三氟甲基)苄基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
4–((2-(4-氟苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰氨基)甲基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-((4-(三氟甲基)苄基)氨基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-甲氧基苯乙基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(3-氟苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰氨基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-氯苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰氨基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(3-氟-4-甲氧基苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰氨基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(3-氯苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰氨基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(3,4-二氟苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰氨基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-甲氧基苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰氨基)乙基)苯甲酸；
((2-(3-(三氟甲基)苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰氨基)甲基)苯甲酸；
4-((2-(4-氟苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)甲基)环己烷-1-羧酸(消旋体)；
(1-(2-(4-氟苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰氨基)环丙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(3,5-二氟苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(3-甲氧基苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸；
3-((2-(3-(三氟甲基)苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；
4-((2-(3-(三氟甲基)苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)甲基)环己烷-1-羧酸；
4-(1-(2-(3-(三氟甲基)苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)环丙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-((6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)乙炔基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-((6-甲氧基萘-2-基)乙炔基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰氨基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-((4-氟苯基)乙炔基)-6,7-二氢-4H-噻吩并[3,2-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-氟苯乙基)-6,7-二氢-4H-噻吩并[3,2-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-((3,5-二甲氧基苯基)乙炔基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-((3-甲氧基苯基)乙炔基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(3,5-二甲氧基苯乙基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(3-甲氧基苯乙基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(2-(6-甲氧基萘-2-基)乙基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰氨基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-氟苄基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯；
(S)-2-(4-氟苄基)-N-(1-(4-(甲氧基氨基)苯基)乙基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺；
(S)-4-(1-(2-(4-甲基苄基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-乙基基苄基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-2-(4-氟苄基)-N-(1-(4-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)苯基)乙基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-C]吡喃-3-甲酰胺；
(S)-2-(4-氟苄基)-N-(1-(4-(羟基氨基甲酰基)苯基)乙基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺；
(S)-N-(1-(4-氰基苯基)乙基)-2-(4-氟苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺；
(S)-2-(4-氟苄基)-N-(1-(4-(肼羰基)苯基)乙基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺；
(S)-4-(1-(6-(叔丁氧基羰基)-2-(4-氟苯乙基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶-3-甲酰氨基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(6-乙酰基-2-(4-氟苯乙基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸。
在另一优选例中，所述EP4受体拮抗剂选自下组：
Figure BDA0002606586210000091
Figure BDA0002606586210000101
Figure BDA0002606586210000111
Figure BDA0002606586210000121
Figure BDA0002606586210000131
Figure BDA0002606586210000141
Figure BDA0002606586210000151
在另一优选例中，所述EP4受体拮抗剂选自下组：
Figure BDA0002606586210000152
在另一优选例中，所述抑制剂选自下组：抗体、小分子化合物、microRNA、siRNA、shRNA、或其组合。
在另一优选例中，所述组分(i)与组分(ii)的重量比为1－200：1－100，较佳地，1－100：1－50，更佳地，10－50：1－10。
在另一优选例中，所述产品组合中，所述EP4受体拮抗剂的含量为1％－99％，较佳地，10％－90％，更佳地，50％－90％。
在另一优选例中，所述产品组合中，所述PD-1抑制剂的含量为1％－99％，较佳地，1％－60％，更佳地，1％－30％。
在另一优选例中，所述产品组合中，所述组分(i)和组分(ii)占所述产品组合总重的0.01-99.99wt％，较佳地0.1-90wt％，更佳地1-80wt％。
在另一优选例中，所述的药物组合物的剂型包括注射剂型、和口服剂型。
在另一优选例中，所述口服剂型包括片剂、胶囊剂、膜剂、和颗粒剂。
在另一优选例中，所述的药物组合物的剂型包括缓释型剂型、和非缓释型剂型。
本发明第二方面提供了一种组合物，所述组合物包括：
(i)EP4受体拮抗剂；
(ii)PD-1抑制剂；和
(iii)药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述组合物中，所述组分(i)、组分(ii)占所述药盒总重的0.01-99.99wt％，较佳地0.1-90wt％，更佳地1-80wt％。
在另一优选例中，所述组合物还包括其他治疗恶性肿瘤的药物。
在另一优选例中，所述恶性肿瘤选自下组：肝癌、肺癌、前列腺癌、皮肤癌、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、白血病、淋巴癌、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、肾癌、口腔癌、黑色素瘤、食道癌、淋巴癌、宫颈癌、或其组合。
在另一优选例中，所述恶性肿瘤高表达PD-1。
在另一优选例中，所述恶性肿瘤低表达PD-1。
在另一优选例中，所述恶性肿瘤高表达PD-L1。
在另一优选例中，所述恶性肿瘤低表达PD-L1。
在另一优选例中，所述其他治疗恶性肿瘤的药物选自下组：CTLA4抗体、PD-L1抗体、尼莫司汀、卡莫司汀、环磷酸铵、甘霖线芥、去氧氟尿苷、5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、吉西他滨、卡莫氟、羟基脲、甲氨蝶呤、优福定、安西他滨、放线菌素D、多柔比星、柔红霉素、表柔比星、丝裂霉素、伊立替康、三尖杉酯碱、羟基喜树碱、长春瑞宾、泰索帝、拓扑替康、长春新碱、替尼泊苷、依托泊苷、阿他美坦、阿那曲唑、氨鲁米特、来曲唑、福美坦、甲他孕酮、卡铂、顺铂、达卡巴嗪、奥沙利铂、乐沙定、可铂奥沙、米托蒽醌、丙卡巴肼、吉非替尼、艾洛替尼、西妥昔单抗、赫赛汀、伊马替尼、利妥昔单抗、伏立诺他、色瑞替尼、克唑替尼、埃克替尼、索拉非尼、达克替尼、阿帕替尼、舒尼替尼、阿柏西昔、贝伐珠单抗、西妥昔单抗、帕尼单抗、瑞戈替尼、或其组合。
本发明第三方面提供了一种药盒，包括：
(a1)第一容器，以及位于所述第一容器中的EP4受体拮抗剂，或含有EP4受体拮抗剂的药物；
(b1)第二容器，以及位于所述第二容器中的PD-1抑制剂，或含有PD-1抑制剂的药物。
在另一优选例中，所述的第一容器和第二容器是相同或不同的容器。
在另一优选例中，所述的第一容器的药物是含EP4受体拮抗剂的单方制剂。
在另一优选例中，所述的第二容器的药物是含PD-1抑制剂的单方制剂。
在另一优选例中，所述药物的剂型为口服剂型或注射剂型。
在另一优选例中，所述的试剂盒还含有说明书。
在另一优选例中，所述说明书记载了选自下组的一个或多个说明：
(a)将EP4受体拮抗剂和PD-1抑制剂联用协同治疗恶性肿瘤的方法；
(b)EP4受体拮抗剂具有缓解PGE2-EP4信号通路介导的慢性炎症和疼痛的功能。
本发明第四方面提供了一种组合的用途，所述组合包括EP4受体拮抗剂和PD-1抑制剂，用于制备一药物组合物或药盒，所述药物组合物或药盒用于治疗恶性肿瘤。
在另一优选例中，所述恶性肿瘤选自下组：肝癌、肺癌、前列腺癌、皮肤癌、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、白血病、淋巴癌、卵巢癌、胃癌、膀胱癌、肾癌、口腔癌、黑色素瘤、食道癌、淋巴癌、宫颈癌、或其组合。
在另一优选例中，所述恶性肿瘤高表达PD-1。
在另一优选例中，所述恶性肿瘤低表达PD-1。
在另一优选例中，所述恶性肿瘤高表达PD-L1。
在另一优选例中，所述恶性肿瘤低表达PD-L1。
在另一优选例中，所述EP4受体拮抗剂的作用浓度为1％－99％，较佳地，10％－90％，更佳地，30％－70％。
在另一优选例中，所述PD-1抑制剂的作用浓度为1％－99％，较佳地，10％－90％，更佳地，30％－70％。
在另一优选例中，所述药物组合物或药盒包括(a)EP4受体拮抗剂和PD-1抑制剂；和(b)药学上可接受的载体。
在另一优选例中，所述药物组合物或药盒中，所述EP4受体拮抗剂和PD-1抑制剂占所述所述药物组合物或药盒总重的0.01-99.99wt％,较佳地0.1-90wt％，更佳地1-80wt％。
在另一优选例中，所述药物组合物或药盒还包括其他治疗恶性肿瘤的药物。
在另一优选例中，所述其他治疗恶性肿瘤的药物选自下组：尼莫司汀、卡莫司汀、环磷酸铵、甘霖线芥、去氧氟尿苷、5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、吉西他滨、卡莫氟、羟基脲、甲氨蝶呤、优福定、安西他滨、放线菌素D、多柔比星、柔红霉素、表柔比星、丝裂霉素、伊立替康、三尖杉酯碱、羟基喜树碱、长春瑞宾、泰索帝、拓扑替康、长春新碱、替尼泊苷、依托泊苷、阿他美坦、阿那曲唑、氨鲁米特、来曲唑、福美坦、甲他孕酮、卡铂、顺铂、达卡巴嗪、奥沙利铂、乐沙定、可铂奥沙、米托蒽醌、丙卡巴肼、吉非替尼、艾洛替尼、西妥昔单抗、赫赛汀、伊马替尼、利妥昔单抗、伏立诺他、色瑞替尼、克唑替尼、埃克替尼、索拉非尼、达克替尼、阿帕替尼、舒尼替尼、阿柏西昔、贝伐珠单抗、西妥昔单抗、帕尼单抗、瑞戈替尼、或其组合。
本发明第五方面提供了一种治疗恶性肿瘤的方法，包括：
给需要的对象施用EP4受体拮抗剂和PD-1抑制剂，或本发明第一方面所述的产品组合或本发明第二方面所述的组合物或本发明第三方面所述的药盒。
在另一优选例中，所述对象包括患有恶性肿瘤的人或非人哺乳动物。
在另一优选例中，所述非人哺乳动物包括啮齿动物和灵长目动物，优选小鼠、大鼠、兔、猴。
在另一优选例中，所述EP4受体拮抗剂的施用剂量1-250mg/kg体重，较佳地为1-200mg/kg体重，最佳地为1-100mg/kg体重。
在另一优选例中，所述PD-1抑制剂的施用剂量0.1－100mg/kg体重，较佳地为1－50mg/kg体重，最佳地为1－10mg/kg体重。
在另一优选例中，所述EP4受体拮抗剂施用频率为1－5次/天，较佳地为1－2次/天。
在另一优选例中，所述EP4受体拮抗剂的施用时间为1－2000天，较佳地为1－700天，最佳地为1－365天。
在另一优选例中，所述PD-1抑制剂的施用频率为0.1-4周一/次，较佳地为每两周一次。
在另一优选例中，所述PD-1抑制剂的施用时间为1－2000天，较佳地为1－700天，最佳地为1－365天。
在另一优选例中，所述EP4受体拮抗剂与PD－1抑制剂同时或先后施用。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
图1为化合物YJ114与PD-1联用对小鼠CT26结肠癌肿瘤模型的抑制结果：
A表示小鼠皮下荷瘤体积变化；B表示小鼠体重变化；C表示第20天肿瘤重量分布；D表示给药两周后小鼠生存周期。
图2为化合物YJ114与PD-1联用对小鼠MC38结肠癌肿瘤模型的抑制结果：
A表示小鼠皮下荷瘤体积变化；B表示小鼠体重变化；C表示第20天肿瘤重量分布。
图3为化合物YJ114与PD-1联用对AOM/DSS模型诱导的小鼠原位结肠癌肿瘤模型的抑制结果：
A表示构建小鼠原位肿瘤模型及给药方案；B表示结肠部位肿瘤分布及大小；C表示每只老鼠的肿瘤数量分布图；D表示结直肠长度。
图4为化合物YJ114与PD-1联用对小鼠RM-1前列腺癌模型的抑制结果：
A表示小鼠皮下荷瘤体积变化；B表示肿瘤大小分布；C表示第17天肿瘤重量分布；D表示小鼠体重变化。
图5为化合物YJ114与PD-1联用对小鼠MFC胃癌模型的抑制效果：
A表示小鼠皮下荷瘤体积变化；B表示肿瘤消除率；C表示以肿瘤体积超过2000mm3为小鼠死亡判定标准得到的小鼠存活曲线；D表示小鼠体重变化。
具体实施方式
本发明人通过广泛而深入的研究，通过筛选大量的化合物，首次意外发现，将本发明的EP4受体拮抗剂和PD-1抑制剂联用，可有效治疗恶性肿瘤，并具有协同作用。在此基础上，本发明人完成了本发明。
基团定义
在本发明中，术语“C3-C6碳环”或术语“C4-C7碳环”是指由3至6个碳原子或4至7个碳原子组成的饱和或不饱和的环，包括单环、二环、螺环或桥环，例如6元脂肪环。
如本文所用，术语“C6-C12芳环”指6至12个碳原子的单价芳香族碳环基团，它具有单环(如苯基)或稠环(如萘基或蒽基)，如果连接点在芳香碳原上，稠环可能是非芳香性的(如2-苯并噁唑酮，2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-酮-7-基等)。所述取代或未取代的C6－C12芳环选自下组：邻位取代苯基、间位取代苯基、对位取代苯基。优选的芳基包括苯基和萘基。该术语包括取代或未取代的形式，其中取代基的定义如上。所述取代苯基的取代基选自下组：卤素、羟基、甲基、乙基、异丙基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、叔丁氧基、三氟甲基、或其组合。如本文所用，术语“C6-C10芳环”指6至10个碳原子的单价芳香族碳环基团，它具有单环(如苯基)或稠环(如萘基或蒽基)，如果连接点在芳香碳原上，稠环可能是非芳香性的(如2-苯并噁唑酮，2H-1,4-苯并噁嗪-3(4H)-酮-7-基等)。所述取代或未取代的C6－C10芳环选自下组：邻位取代苯基、间位取代苯基、对位取代苯基。优选的芳基包括苯基和萘基。该术语包括取代或未取代的形式，其中取代基的定义如上。所述取代苯基的取代基选自下组：卤素、羟基、甲基、乙基、异丙基、叔丁基、甲氧基、乙氧基、叔丁氧基、三氟甲基、或其组合。
术语“五元或六元杂芳环”是指具有一个或多个选自氮、氧或硫的杂原子的5元至6元的芳香环，例如，吡啶、嘧啶、噻唑、异噻唑、呋喃、噻吩、吡咯。
术语“C1-C6烷基”是指具有1至6个碳原子的直链或支链烷基，非限制性地包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基、戊基和已基等；优选乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基和叔丁基。
术语“C1-C4烷基”是指具有1至4个碳原子的直链或支链烷基，非限制性地包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、仲丁基、叔丁基等。
术语“C1-C6亚烷基”是指具有1至6个碳原子的直链或支链亚烷基，非限制性地包括亚甲基、亚乙基、亚丙基、亚异丙基、亚丁基、亚异丁基、亚仲丁基、亚叔丁基、亚戊基和亚已基等；优选亚乙基、亚丙基、亚异丙基、亚丁基、亚异丁基、亚仲丁基和亚叔丁基。
术语“C2-C6的亚烯基”是指具有2至6个碳原子的含有一个双键的直链或支链亚烯基，非限制性地包括亚乙烯基、亚丙烯基、亚丁烯基、亚异丁烯基、亚戊烯基和亚己烯基等。
术语“C2-C6的亚炔基”是指具有2至6个碳原子的含有一个三键的直链或支链亚炔基，非限制性地包括亚乙炔基、亚丙炔基、亚丁炔基、亚异丁炔基、亚戊炔基和亚己炔基等。
术语“C3-C6环烷基”是指在环上具有3至6个碳原子的环状烷基，非限制性地包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基。
术语“C3-C5环烷基”是指在环上具有3至5个碳原子的环状烷基，非限制性地包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基。
术语“C6-C10芳基”是指在环上不含杂原子的具有6至10个碳原子的芳香族环基，如苯基等。
术语“C1-C6卤代烷基”、“C1-6卤代环烷基”是指烷基或环烷基上的氢被一个或多个卤素原子取代的基团，非限制性地包括-CHF2、氯代环丙基等。
术语“C1-C4卤代烷基”、“C1-4卤代环烷基”是指烷基或环烷基上的氢被一个或多个卤素原子取代的基团，非限制性地包括-CHF2、氯代环丙基等。
术语“C1-C6的烷氧基”是指具有1至6个碳原子的直链或支链烷氧基，非限制性地包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基和丁氧基等。
术语“C1-C4的烷氧基”是指具有1至4个碳原子的直链或支链烷氧基，非限制性地包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基和丁氧基等。
术语“卤代C1-C6的烷氧基”指烷氧基”上的氢被一个或多个卤素原子取代的基团。
术语“卤代C1-C4的烷氧基”指烷氧基”上的氢被一个或多个卤素原子取代的基团。
如本文所用，术语“卤素”是指氟、氯、溴、或碘，优选氟和氯。
本发明的化合物可以含有一个或多个不对称中心，并因此以消旋体、外消旋混合物、单一对映体、非对映异构体化合物和单一非对映体的形式出现。可以存在的不对称中心，取决于分子上各种取代基的性质。每个这种不对称中心将独立地产生两个旋光异构体，并且所有可能的旋光异构体和非对映体混合物和纯或部分纯的化合物包括在本发明的范围之内。本发明包括化合物的所有异构形式。
PD-1/PD-L1信号通路
PD-1/PD-L1信号通路是负调控T细胞活化的关键信号通路，当肿瘤杀伤性T细胞浸润在肿瘤组织中时，激活的T细胞能分泌干扰素-γ(TNF-γ)等细胞因子，这些细胞因子通过一系列信号转导过程会诱导巨噬细胞、T、B细胞和肿瘤细胞上表达PD-L1，进而与T细胞上的PD-1受体发生相互作用，引起T细胞的失活和凋亡，促进肿瘤细胞的发生发展。PD-1/PD-L1通路抑制剂可以阻断PD-1和PD-L1结合，阻断负向调控信号，从而使肿瘤杀伤性T细胞恢复杀伤能力，从而增强对肿瘤细胞的免疫应答。
前列腺素E2(Prostaglandin E2，PGE2)
前列腺素E2(Prostaglandin E2，PGE2)是在人体中的含量和分布最丰富广泛的前列腺素亚型。它参与调控了包括炎症、疼痛、肾功能、心血管系统、肺功能以及癌症在内的诸多生理和病理过程。PGE2通过自分泌或旁分泌的方式结合到细胞表面的G蛋白偶联受体EP1，EP2，EP3，EP4(也称为PTGER1，PTGER2，PTGER2和PTGER4)四个不同亚型上，而这些G蛋白偶联受体亚型通过偶联不同的G蛋白激活不同的下游信号通路发挥其生物学效应。尽管EP2和EP4受体亚型均通过偶联Gs蛋白介导下游信号，但由于它们氨基酸序列仅有31％的同源性，存在一定的结构差异，因此它们发挥的主要生理功能虽具有相似之处，但也存在着诸多不同。
活性成分
如本文所用，所述“EP4受体拮抗剂”、“本发明的活性成分”、“式I化合物”可互换使用，均指能够与PD-1抑制剂联用，可协同治疗恶性肿瘤的有效化合物；
Figure BDA0002606586210000221
其中，
Figure BDA0002606586210000222
和
Figure BDA0002606586210000223
各自独立地选自下组：C3-C6碳环、C6-C12芳基、、含一个或多个O、N、S原子的五元或六元杂芳环，其中
Figure BDA0002606586210000224
和
Figure BDA0002606586210000225
可任选地被1-3个R5基团取代；
Figure BDA0002606586210000226
为取代或未取代的选自下组的环：C4-C7碳环、4-7元饱和杂环、苯环、4-7元不饱和杂环(包括杂芳环)，其中，所述的杂环上具有一个或多个选自下组的杂原子：O、S或NR6；所述的环可以是单环、二环、螺环或桥环；
X为选自下组的基团：-O-、-S-、-N(R7)-；
Y为无，或者为选自下组的基团：-CH2-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-N(R8)-；
B1和B2各自独立地为选自下组的基团：无、C1-C6的亚烷基、C2-C6的亚烯基、C2-C6的亚炔基；优选地，所述的B1和B2独立地选自下组：-(CH2)n-；其中n＝0、1、2、3或4、-CH＝CH-、-CH＝CH-CH2-、-CH2-CH＝CH-、-CH＝CH-CH2-CH2-、-CH2-CH＝CH-CH2-、-CH2-CH2-CH＝CH-；-C≡C-、-C≡C-CH2-、-CH2-C≡C-、-C≡C-CH2-CH2-、-CH2-C≡C-CH2-、-CH2-CH2-C≡C-；且B1、B2和Y不同时为无；
R1为选自下组的一个或多个基团：H、C1-C6的烷基(优选C1-C4烷基)、卤素、硝基、-N(R9)(R10)、-OH、-CN、C1-C6的卤代烷基(优选为C1-C4卤代烷基，更优选为二氟甲基、三氟甲基)、C1-C6的烷氧基(C1-C4烷氧基，更优选为甲氧基、乙氧基)、C1-C6的卤代烷氧基(优选为C1-C4卤代烷氧基，更优选为二氟甲氧基、三氟甲氧基)、＝O；
R2和R3各自独立地选自：H、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基，或者，R2、R3和与其相连的碳原子共同构成3至6元环，所述的环为碳环，或具有1-3个选自下组的杂原子的3至6元杂环：O、S或N(R11)；
R4选自下列基团中的任意一个：-COOR12(优选为-COOH、-COOCH3、-COOCH2CH3、-COOCH2CH2CH3、-COOCH(CH3)2)、C(O)-N(Ra)(Rb)、氰基、四氮唑基、磷酸基、磺酸基；其中，Ra选自下组：H、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C1-C6卤代烷基、取代或未取代的C3-C6环烷基和取代或未取代的C1-C6的烷氧基；Rb选自下组：H、-OH、-NH2、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C1-C6卤代烷基、取代或未取代的C3-C6环烷基和取代或未取代的C1-C6的烷氧基；
各个R5和R12各自独立地选自：H、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、C1-C6的烷氧基(优选为甲氧基、乙氧基)；
R6、R7、R8、R9、R10和R11各自独立地选自：H、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、C3-C6卤代环烷基、C6-C10的芳基、五元或六元杂环芳香基、
Figure BDA0002606586210000231
除非特别说明，所述的取代基团上的一个或多个氢原子被选自下组的取代基取代：F、Cl、Br、I、羟基、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、硝基、-CN、氧代(＝O)；
R13和R14各自独立地选自：H、C1-C6的烷基(优选为甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、叔丁基、戊基、己基)、C1-C6的烷氧基、C6-C10的芳基、C1-C6的亚烷基、-C6-C10的芳基。
在一优选实施方式中，本发明的化合物选自下组：
Figure BDA0002606586210000232
Figure BDA0002606586210000241
Figure BDA0002606586210000251
Figure BDA0002606586210000261
Figure BDA0002606586210000271
Figure BDA0002606586210000281
Figure BDA0002606586210000291
一类特别优选的式I化合物选自下组：
YJ114,YJ115,YJ116,YJ120,YJ122,YJ123,YJ124,YJ125,YJ126,YJ127,YJ128,YJ129,YJ130,YJ131。
在本发明中，还包括式I化合物的药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的盐”指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、甲磺酸、苯甲磺酸，苯磺酸等有机酸；以及天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸。
组合物和施用方法
如本文所用，术语“组合物”包括(a1)第一活性成分，所述第一活性成分为EP4受体拮抗剂；和(a2)第二活性成分，所述第二活性成分为PD-1抑制剂；和(b)药学上可接受的载体。此外，所述的组合物包括药物组合物、食品组合物或保健品组合物。
通常，可将本发明的活性成分配制于无毒的、惰性的和药学上可接受的载体介质。配制好的药物组合物可以通过常规途径进行给药，其中包括(但并不限于)：口服、肌内、腹膜内、静脉内、皮下、皮内、或局部给药。
本发明还提供了一种药物组合物，它含有安全有效量的本发明的活性成分以及药学上可接受的载体或赋形剂。这类载体包括(但并不限于)：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇、及其组合。药物制剂应与给药方式相匹配。本发明的药物组合物可以被制成针剂形式，例如用生理盐水或含有葡萄糖和其他辅剂的水溶液通过常规方法进行制备。诸如片剂和胶囊之类的药物组合物，可通过常规方法进行制备。药物组合物如针剂、溶液、片剂和胶囊宜在无菌条件下制造。活性成分的给药量是治疗有效量，例如每天约1微克-10毫克/千克体重，优选地，EP4受体拮抗剂的用量可以为：成年人每日0.1～2000mg，优选1～300mg/天。PD-1抑制剂的用量可以为：成年人每两周0.1～2000mg，优选1～300mg/两周。作为恶性肿瘤协同治疗的药物，可以制成口服和非口服制剂。口服给药可制成片剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂等常用剂型，所用的赋型剂可以为淀粉、乳糖、蔗糖、甘露糖、羟甲基纤维素等中的一种或几种。崩解剂可以为马铃薯淀粉、羟甲基纤维素等中的一种或几种。粘合剂可以为阿拉伯胶、玉米淀粉、明胶、糊精等中的一种或几种。口服制剂除上述剂型外，还可以制成乳剂、糖浆剂等。
非口服制剂可以制成注射剂，可以与注射用水、生理盐水、葡萄糖水制成注射剂，也可以在其中加入一定比例的乙醇、丙醇、乙二醇等。此外也可制成滴鼻剂、喷雾剂、直肠栓剂、直肠保留灌肠液等常用剂型。
此外，本发明的活性成分还特别适合与其他治疗恶性肿瘤的药物(如尼莫司汀、卡莫司汀、环磷酸铵、甘霖线芥、去氧氟尿苷、5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、吉西他滨、卡莫氟、羟基脲、甲氨蝶呤、优福定、安西他滨、放线菌素D、多柔比星、柔红霉素、表柔比星、丝裂霉素、伊立替康、三尖杉酯碱、羟基喜树碱、长春瑞宾、泰索帝、拓扑替康、长春新碱、替尼泊苷、依托泊苷、阿他美坦、阿那曲唑、氨鲁米特、来曲唑、福美坦、甲他孕酮、卡铂、顺铂、达卡巴嗪、奥沙利铂、乐沙定、可铂奥沙、米托蒽醌、丙卡巴肼、吉非替尼、艾洛替尼、西妥昔单抗、赫赛汀、伊马替尼、利妥昔单抗、伏立诺他、色瑞替尼、克唑替尼、埃克替尼、索拉非尼、达克替尼、阿帕替尼、舒尼替尼、阿柏西昔、贝伐珠单抗、西妥昔单抗、帕尼单抗、瑞戈替尼等)联合使用，从而更有效的抑制恶性肿瘤。
药盒
本发明还提供了一种药盒，所述的药盒含有：
(a1)第一容器，以及位于所述第一容器中的EP4受体拮抗剂，或含有EP4受体拮抗剂的药物；
(b1)第二容器，以及位于所述第二容器中的PD-1抑制剂，或含有PD-1抑制剂的药物。
在一优选实施方式中，所述的第一容器和第二容器是相同或不同的容器。
所述含有EP4受体拮抗剂的制剂可以是含有EP4受体拮抗剂的单元剂型，所述含有PD-1抑制剂的制剂可以是含有PD-1抑制剂的单元剂型。
如本文所用，术语“单元剂型”是指为了服用方便，将组合物制备成单次服用所需的剂型，包括但不限于各种固体剂(如片剂)、液体剂、胶囊剂、缓释剂。
在另一优选例中，所述说明书记载了如下使用方法：
(I)给需要的对象同时施用含有EP4受体拮抗剂的制剂和含有PD-1抑制剂的制剂；和任选的(II)重复步骤(I)-(II)。
本发明制剂可以每一天服用三次到每二十天服用一次，或者以缓释方式每十天服用一次。优选的方式是每天服用一次，因为这样便于病人坚持，从而显著提高病人服药的顺应性。
服用时，极大多数病例一般每天应用的总剂量应低于(或少数病例等于或略大于)各个单药的每天常用剂量，当然，所用的活性成分的有效剂量可随给药的模式和待治疗的疾病的严重程度等而有所变化。
本发明的主要优点包括：
本发明首次发现，将本发明的EP4受体拮抗剂和PD-1抗体联用，对恶性肿瘤模型的抑制效果显著优于单药组PD-1的效果，多种小鼠的肿瘤模型中检测到PD-1单药组能一定程度地抑制肿瘤生长，但随着治疗时间的延长，肿瘤体积继续增大，而联药组肿瘤体积逐渐缩小，甚至消退，得到完全缓解，大幅度延长了小鼠的生存期，且对小鼠体重均没有任何影响，说明本发明的EP4受体拮抗剂和PD-1抑制剂联用取得了显著的协同抗肿瘤效果，对小鼠没有明显的毒副作用。
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。
如无特别说明，则本发明说明书中的材料和试剂均为市售产品。
本发明的EP4受体拮抗剂YJ101-YJ131的制备过程见中国专利申请CN201711206672.8。EP4受体拮抗剂YJ132-YJ155的制备过程结合实施例进一步阐述。
示例性的式I化合物YJ132-YJ155的制备过程如下表1所示：
表1
Figure BDA0002606586210000321
Figure BDA0002606586210000331
Figure BDA0002606586210000341
Figure BDA0002606586210000351
Figure BDA0002606586210000361
实施例1-1、(S)-4-(1-(2-(3,5-二氟苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(YJ132)的制备
Figure BDA0002606586210000362
将四氢-4H-吡喃-4-酮(2.00g，20.0mmol)，氰乙酸乙酯(2.50g，22.0mmol)和硫(704mg，22.0mmol)溶解在30.0mL乙醇中，然后向该溶液中加入吗啉(1.74g，20.0mmol)，在50℃条件下搅拌过夜。使用TLC检测反应，在反应结束后用乙酸乙酯和水对反应液进行萃取，将上层有机相蒸干，柱层析纯化得到淡黄色固体，即2-氨基-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-羧酸乙酯(4.29g，产率94％)。将2-氨基-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-羧酸乙酯(900mg，4.0mmol)溶解于1.5M HCl(20.0mL)内，室温下搅拌20min，然后在冰浴条件下将温度降至0℃，向溶液中加入NaNO2(414mg，6.0mmol)，将反应液在冰浴条件下搅拌反应30min。随后向反应液中逐份加入KI(1.66g，10.0mmol)，继续在0℃下反应45min。反应完成后用乙酸乙酯和水萃取反应液，将有机相蒸干，柱层析纯化获得淡黄色固体，即2-碘代-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-羧酸乙酯(324mg，产率24％)。将正丁基锂的1.6M己烷溶液在-78℃的温度条件下加入到10.0mL乙醚中，然后将2-碘代-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-羧酸乙酯(200mg，0.62mmol)在-78℃的条件下逐份加入到溶液中，保持温度不变，搅拌反应1.5h，再将3,5-二氟苯甲醛(97mg，0.68mmol)逐滴加入到溶液中，然后在-78℃的温度下搅拌1h，再升温至0℃，在0℃下继续搅拌1h。反应完成后向反应液中加入10.0mL饱和氯化铵水溶液，然后用乙酸乙酯萃取，并将上层有机相蒸干，柱层析纯化获得淡黄色油状液体，然后将得到的产物在0℃条件下加入到10.0mL二氯甲烷中溶解，保持温度不变，再将三乙基硅烷(0.41mL，2.48mmol)快速加入到溶液中，随后将三氟乙酸(0.47mL，6.20mmol)逐滴加入到溶液中。将反应液在0℃条件下搅拌反应30min后，将溶剂蒸干，然后用三氯甲烷溶解，并用5％NaHCO3水溶液洗涤。最后取有机相，用饱和NaCl溶液洗涤后蒸干，柱层析纯化得到白色固体，即2-(3,5-二氟苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-羧酸乙酯(188mg，两步反应的产率为91％)。将2-(3,5-二氟苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-羧酸乙酯(85mg，0.25mmol)，3.0mL THF，3.0mL甲醇，1.0mL水和一水合氢氧化锂(21mg，0.5mmol)混合在一起，在68℃的温度下搅拌反应3h，反应完成后用2M HCl将反应液调至酸性，然后用乙酸乙酯和水萃取，蒸干有机相，柱层析纯化得到白色固体，即2-(3,5-二氟苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-羧酸(72mg，产率96％)。将2-(3,5-二氟苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-羧酸(68mg，0.22mmol)，(S)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸甲酯(48mg，0.26mmol)，HATU(137mg，0.36mmol)和DIEA(65mg，0.50mmol)溶解在2.0mL DMF中，室温下搅拌6h，反应完成后用用乙酸乙酯和水萃取反应液，取上层有机相蒸干，通过柱层析纯化获取白色固体，即(S)-4-(1-(2-(3,5-二氟苄基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(65mg，产率62％)。将(S)-4-(1-(2-(3,5-二氟苄基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯(65mg，0.13mmol)溶解在3.0mL THF，3.0mL甲醇，1.0mL水组成的溶液中，然后加入一水合氢氧化锂(10mg，0.24mmol)，将反应液在68℃的条件下搅拌反应3h，反应结束后用2M HCl将反应液调至酸性，用水和乙酸乙酯萃取，将有机相蒸干，柱层析纯化获得白色固体，即最终产物YJ132(38mg，产率61％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.86(s,1H),8.66(d,J＝7.4Hz,1H),7.90(d,J＝7.3Hz,2H),7.80–7.53(m,1H),7.47(d,J＝7.5Hz,2H),7.31–7.09(m,1H),7.03–6.86(m,1H),5.24–5.10(m,1H),4.66(d,J＝15.6Hz,2H),4.16–3.91(m,2H),3.80(d,J＝31.1Hz,2H),2.63(s,2H),1.41(d,3H).
实施例1-2、(S)-4-(1-(2-(3-甲氧基苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(YJ133)的制备
Figure BDA0002606586210000381
使用与制备化合物YJ132相同的反应路线，将3,5-二氟苯甲醛替换为3-甲氧基苯甲醛，最终得到化合物YJ133(最后一步反应的产率为90％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.84(s,1H),8.75(d,J＝8.0Hz,1H),7.94–7.85(m,2H),7.51–7.43(m,2H),7.20–7.11(m,1H),6.80–6.67(m,3H),5.17(p,J＝7.1Hz,1H),4.63(s,2H),3.86–3.78(m,2H),3.69(s,3H),2.62(s,2H),1.43(d,J＝7.1Hz,3H).
实施例1-3、3-((2-(3-(三氟甲基)苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸(YJ134)的制备
Figure BDA0002606586210000382
使用与制备化合物YJ132相同的反应路线，将3,5-二氟苯甲醛替换为3-三氟甲基苯甲醛，将(S)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸甲酯替换成3-(氨甲基)苯甲酸甲酯，最终得到化合物YJ134(最后一步反应的产率为92％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.94(s,1H),8.85(d,J＝8.0Hz,1H),7.90(s,1H),7.61(s,1H),7.69–7.32(m,6H),4.73(s,2H),4.51–4.41(m,2H),4.31(s,2H),3.81–3.70(m,2H),2.62(s,2H).
实施例1-4、4-((2-(3-(三氟甲基)苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)甲基)环己烷-1-羧酸(YJ135)的制备
Figure BDA0002606586210000391
使用与制备化合物YJ134相同的反应路线，将3-(氨甲基)苯甲酸甲酯替换成4-氨基甲基-环己烷甲酸甲酯，最终得到化合物YJ135(最后一步反应的产率为89％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.20(s,1H),8.20–8.13(m,1H),7.61(s,1H),7.58(d,J＝6.6Hz,1H),7.56–7.51(m,2H),4.64(s,2H),4.27(s,2H),3.83(t,J＝5.5Hz,2H),3.05(t,J＝6.2Hz,2H),2.63(d,J＝6.0Hz,2H),1.90–1.83(m,2H),1.77–1.68(m,2H),1.29–1.17(m,4H),0.97–0.89(m,2H).
实施例1-5、4-(1-(2-(3-(三氟甲基)苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)环丙基)苯甲酸(YJ136)的制备
Figure BDA0002606586210000392
使用与制备化合物YJ134相同的反应路线，将3-(氨甲基)苯甲酸甲酯替换成4-(1-氨基环丙基)苯甲酸甲酯，最终得到化合物YJ136(最后一步反应的产率为95％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.77(s,1H),8.97(s,1H),7.82(d,J＝8.2Hz,2H),7.60(s,2H),7.58–7.50(m,2H),7.23(d,J＝8.1Hz,2H),4.66(s,2H),4.31(s,2H),3.88–3.82(m,2H),2.69(s,2H),1.33–1.26(m,4H).
实施例1-6、(S)-4-(1-(2-((6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)乙炔基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(YJ137)的制备
Figure BDA0002606586210000393
取2-碘代-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-羧酸乙酯(160mg，0.48mmol)，10％Pd/C(5mg，0.048mmol)，PPh3(5mg，0.02mmol)，CuI(9mg，0.048mmol)和三乙胺(0.13mL，0.93mmol)加入到10.0mL乙醇中，将该混合物在氮气保护下搅拌15min，然后向反应液中加入5-乙炔-2(1H)-吡啶酮(85mg，0.71mmol)，继续在60℃条件下搅拌反应12h，反应完成后将反应液用水和乙酸乙酯萃取，蒸干有机相并使用柱层析方法纯化，获得白色固体，即2-((6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)乙炔基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-羧酸乙酯(80mg，产率51％)。将2-((6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)乙炔基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-羧酸乙酯(80mg，0.25mmol)，3.0mL THF，3.0mL甲醇，1.0mL水和一水合氢氧化锂(21mg，0.5mmol)混合在一起，在68℃条件下搅拌反应3h，反应结束后用2M HCl将反应液调至酸性，然后用乙酸乙酯和水萃取，蒸干有机相，柱层析纯化得到白色固体，即2-((6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)乙炔基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-羧酸(70mg，产率93％)。将2-((6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)乙炔基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-羧酸(70mg，0.23mmol)，(S)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸甲酯(48mg，0.26mmol)，HATU(137mg，0.36mmol)和DIEA(65mg，0.50mmol)溶解在2.0mL DMF中，室温下搅拌6h，反应完成后用乙酸乙酯和水萃取反应液，取上层有机相蒸干，通过柱层析纯化获取白色固体，即(S)-4-(1-(2-((6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)乙炔基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸甲酯(59mg，产率55％)。取(S)-4-(1-(2-((6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)乙炔基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸甲酯(59mg，0.13mmol)溶解在3.0mL THF，3.0mL甲醇，1.0mL水组成的溶液中，然后加入一水合氢氧化锂(10mg，0.24mmol)，将反应液在68℃的条件下搅拌反应3h，反应完成后用2M HCl将反应液调至酸性，用水和乙酸乙酯萃取并且蒸干有机相，柱层析纯化获得白色固体，即最终产物YJ137(39mg，产率66％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.83(s,1H),12.03(s,1H),8.79(d,J＝6.9Hz,1H),8.01–7.45(m,5H),7.39–7.22(m,1H),6.41–6.26(m,1H),5.17(d,J＝15.9Hz,1H),4.85–4.63(m,2H),3.98–3.76(m,2H),2.63(s,2H),1.50-1.40(m,3H).
实施例1-7、(S)-4-(1-(2-((6-甲氧基萘-2-基)乙炔基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰氨基)乙基)苯甲酸(YJ138)的制备
Figure BDA0002606586210000411
使用与制备化合物YJ137相同的反应路线，将5-乙炔-2(1H)-吡啶酮替换成2-乙炔基-6-甲氧基萘，最终得到化合物YJ138(最后一步反应的产率为90％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.81(s,1H),8.91(d,J＝7.8Hz,1H),7.95(s,1H),7.86–7.78(m,4H),7.56(d,J＝8.3Hz,2H),7.41–7.34(m,2H),7.24–7.19(m,1H),5.25–5.17(m,1H),4.75(s,2H),3.95–3.82(m,5H),2.66(d,J＝5.2Hz,2H),1.48(d,J＝7.0Hz,3H).
实施例1-8、(S)-4-(1-(2-((4-氟苯基)乙炔基)-6,7-二氢-4H-噻吩并[3,2-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(YJ139)的制备
Figure BDA0002606586210000412
使用与制备化合物YJ137相同的反应路线，将5-乙炔-2(1H)-吡啶酮替换成1-乙炔基-6-氟苯，将四氢吡喃酮替换成四氢-2H-吡喃-3-酮，最终得到化合物YJ138(最后一步反应的产率为94％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.88(s,1H),8.80(d,J＝7.9Hz,1H),7.79(d,J＝8.1Hz,2H),7.51(d,J＝8.1Hz,2H),7.46–7.42(m,2H),7.26–7.22(m,2H),5.17–5.13(m,1H),4.58(s,2H),3.91–3.86(m,2H),2.83(s,2H),1.45(d,J＝7.0Hz,3H).
实施例1-9、(S)-4-(1-(2-(4-氟苯乙基)-6,7-二氢-4H-噻吩并[3,2-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(YJ140)的制备
Figure BDA0002606586210000413
将YJ139溶于无水乙醇中，加入10％Pd/C，在氢气的气氛下搅拌12小时，完全反应后用硅藻土抽滤得到滤液，去除溶剂后得到化合物YJ140(最后一步反应的产率为100％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.93(s,1H),8.66(d,J＝7.9Hz,1H),7.89(d,J＝7.9Hz,2H),7.47(d,J＝8.0Hz,2H),7.11–7.02(m,4H),5.17–5.11(m,1H),4.52(s,2H),3.85(t,J＝5.2Hz,2H),3.07–3.00(m,2H),2.78–2.72(m,4H),1.43(d,J＝7.0Hz,3H).
实施例1-10、(S)-4-(1-(2-((3,5-二甲氧基苯基)乙炔基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(YJ141)的制备
Figure BDA0002606586210000421
使用与制备化合物YJ137相同的反应路线，将5-乙炔-2(1H)-吡啶酮替换成3,5-二甲氧基苯乙炔，最终得到化合物YJ138(最后一步反应的产率为95％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.73(s,1H),8.88(d,J＝7.8Hz,1H),7.81(d,J＝8.3Hz,2H),7.52(d,J＝8.3Hz,2H),6.61–6.57(m,3H),5.18(p,J＝7.1Hz,1H),4.73(s,2H),3.74(s,6H),2.64(t,J＝5.0Hz,2H),2.52–2.50(m,3H),1.46(d,J＝7.0Hz,3H).
实施例1-11、(S)-4-(1-(2-((3-甲氧基苯基)乙炔基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(YJ142)的制备
Figure BDA0002606586210000422
使用与制备化合物YJ137相同的反应路线，将5-乙炔-2(1H)-吡啶酮替换成3-甲氧基苯乙炔，最终得到化合物YJ138(最后一步反应的产率为94％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.79(s,1H),8.89(d,J＝7.9Hz,1H),7.83–7.79(m,2H),7.52(t,J＝5.9Hz,2H),7.31(t,J＝7.9Hz,1H),7.03–6.95(m,3H),5.21–5.16(m,1H),4.74(s,2H),3.86(t,J＝5.9Hz,2H),3.76(s,3H),2.65(t,J＝5.1Hz,2H),1.46(d,J＝7.0Hz,3H).
实施例1-12、(S)-4-(1-(2-(3,5-二甲氧基苯乙基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(YJ143)的制备
Figure BDA0002606586210000431
将YJ141溶于无水乙醇中，加入10％Pd/C，在氢气的气氛下搅拌12小时，完全反应后用硅藻土抽滤得到滤液，去除溶剂后得到化合物YJ143(最后一步反应的产率为100％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.77(s,1H),8.68(d,J＝7.7Hz,1H),7.91(d,J＝7.8Hz,2H),7.49(d,J＝7.7Hz,2H),6.32(s,3H),5.22–5.15(m,1H),4.66(s,2H),3.70(s,6H),3.15–3.02(m,2H),2.82–2.48(m,6H),1.44(d,J＝6.7Hz,3H).
实施例1-13、(S)-4-(1-(2-(3,5-二甲氧基苯乙基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(YJ144)的制备
Figure BDA0002606586210000432
将YJ142溶于无水乙醇中，加入10％Pd/C，在氢气的气氛下搅拌12小时，完全反应后用硅藻土抽滤得到滤液，去除溶剂后得到化合物YJ144(最后一步反应的产率为100％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.77(s,1H),8.68(d,J＝7.7Hz,1H),7.91(d,J＝7.8Hz,2H),7.49(d,J＝7.7Hz,2H),7.22–7.16(m,1H),6.32(s,3H),5.22–5.15(m,1H),4.66(s,2H),3.70(s,3H),3.15–3.02(m,2H),2.82–2.48(m,6H),1.44(d,J＝6.7Hz,3H).
实施例1-14、(S)-4-(1-(2-(2-(6-甲氧基萘-2-基)乙基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰氨基)乙基)苯甲酸(YJ145)的制备
Figure BDA0002606586210000441
将YJ138溶于无水乙醇中，加入10％Pd/C，在氢气的气氛下搅拌12小时，完全反应后用硅藻土抽滤得到滤液，去除溶剂后得到化合物YJ145(最后一步反应的产率为100％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.73(s,1H),8.70(d,J＝8.0Hz,1H),7.92(d,J＝8.2Hz,2H),7.70(d,J＝9.1Hz,2H),7.52(d,J＝7.8Hz,3H),7.27–7.20(m,2H),7.14–7.10(m,1H),5.19(p,J＝7.1Hz,1H),4.65(s,2H),3.85(d,J＝9.4Hz,4H),3.84–3.81(m,2H),3.20–3.07(m,4H),2.96–2.88(m,2H),2.62(d,J＝5.5Hz,2H),1.44(d,J＝7.1Hz,3H).
实施例1-15、(S)-4-(1-(2-(4-氟苄基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯的(YJ146)制备
Figure BDA0002606586210000442
将3,5-二氟苯甲醛替换为4-氟苯甲醛，按制备化合物YJ132的方法制备，无需进行最后一步水解，得到化合物YJ146(最后一步反应的产率为76％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.74(d,J＝8.0Hz,1H),7.95–7.91(m,2H),7.50(d,J＝8.3Hz,2H),7.21–7.16(m,2H),7.09–7.04(m,2H),5.16(p,J＝7.1Hz,1H),4.63(s,2H),4.17–4.04(m,3H),3.85(s,3H),3.83–3.80(m,2H),2.62(d,J＝3.1Hz,2H),1.43(d,J＝7.1Hz,3H).
实施例1-16、(S)-2-(4-氟苄基)-N-(1-(4-(甲氧基氨基)苯基)乙基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺(YJ147)的制备
Figure BDA0002606586210000451
将化合物YJ114、甲氧基胺盐酸盐、HTAU、DIPEA按1:1.1:1.2:3的比例加入DMF中，室温下搅拌6h，反应完成后用用乙酸乙酯和水萃取反应液，取上层有机相蒸干，通过柱层析纯化获取化合物YJ147(最后一步反应的产率为70％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.70(s,1H),8.72(d,J＝8.0Hz,1H),7.77–7.68(m,2H),7.45(t,J＝8.1Hz,2H),7.19(ddd,J＝8.7,8.0,4.9Hz,2H),7.10–7.03(m,2H),5.14(p,J＝7.1Hz,1H),4.63(s,2H),4.20–4.04(m,2H),3.88–3.78(m,2H),3.70(s,3H),2.61(dt,J＝16.4,8.2Hz,2H),1.42(d,J＝7.1Hz,3H).
实施例1-17、(S)-4-(1-(2-(4-甲基苄基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸的(YJ148)制备
Figure BDA0002606586210000452
将3,5-二氟苯甲醛替换为4-甲基苯甲醛，按制备化合物YJ132的方法制备，得到化合物YJ146(最后一步反应的产率为96％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.84(s,1H),8.71(d,J＝8.0Hz,1H),7.92–7.89(m,2H),7.48(d,J＝8.3Hz,2H),7.03(s,4H),5.16(p,J＝7.1Hz,1H),4.62(s,2H),4.14–4.00(m,2H),3.86–3.77(m,2H),2.65–2.58(m,2H),2.25(d,J＝6.8Hz,3H),1.43(d,J＝7.1Hz,3H).
实施例1-18、(S)-4-(1-(2-(4-乙基苄基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸的(YJ149)制备
Figure BDA0002606586210000461
将3,5-二氟苯甲醛替换为4-乙基苯甲醛，按制备化合物YJ132的方法制备，得到化合物YJ146(最后一步反应的产率为96％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.87(s,1H),8.72(d,J＝8.0Hz,1H),7.92(d,J＝8.2Hz,2H),7.49(d,J＝8.2Hz,2H),7.05(s,4H),5.18(p,J＝7.0Hz,1H),4.63(s,2H),4.17–4.01(m,2H),3.86–3.77(m,2H),3.40(s,5H),2.57–2.52(m,2H),1.44(d,J＝7.0Hz,3H).
实施例1-19、(S)-2-(4-氟苄基)-N-(1-(4-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)苯基)乙基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-C]吡喃-3-甲酰胺(YJ150)的制备
Figure BDA0002606586210000462
使用与制备化合物YJ147相同的反应路线，将甲氧基胺盐酸盐替换为N，O-二甲基羟胺盐酸盐，最终得到化合物YJ150(最后一步反应的产率为93％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.73–8.69(m,1H),7.59–7.54(m,2H),7.45–7.40(m,2H),7.20–7.15(m,2H),7.09–7.04(m,2H),5.19–5.12(m,1H),4.63(s,2H),4.18–4.04(m,2H),3.87–3.78(m,2H),3.53(s,2H),3.25(d,J＝4.9Hz,2H),2.66–2.59(m,2H),2.53–2.48(m,2H),1.44(d,J＝7.1Hz,3H).
实施例1-20、(S)-2-(4-氟苄基)-N-(1-(4-(羟基氨基甲酰基)苯基)乙基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺(YJ151)的制备
Figure BDA0002606586210000471
将YJ146加入到新制的羟胺的甲醇滤液中，然后加入KOH，反应在室温下搅拌30分钟，用饱和氯化铵和乙酸乙酯萃取，经柱层析得到化合物YJ151(最后一步反应的产率为55％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ11.18(s,1H),9.02(s,1H),8.75–8.69(m,1H),7.72(d,J＝8.3Hz,2H),7.50–7.42(m,2H),7.21–7.16(m,2H),7.09–7.03(m,2H),5.18–5.10(m,1H),4.63(s,2H),4.18–4.05(m,2H),3.86–3.78(m,2H),2.53–2.48(m,2H),1.42(t,J＝6.1Hz,3H).
实施例1-21、(S)-N-(1-(4-氰基苯基)乙基)-2-(4-氟苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺(YJ152)的制备
Figure BDA0002606586210000472
使用与制备化合物YJ146相同的反应路线，将(S)-4-(1-氨基乙基)苯甲酸甲酯替换为对氰基苄胺，最终得到化合物YJ152(最后一步反应的产率为79％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ8.74(d,J＝8.0Hz,1H),7.95–7.91(m,2H),7.50(d,J＝8.3Hz,2H),7.21–7.16(m,2H),7.09–7.04(m,2H),5.16(p,J＝7.1Hz,1H),4.63(s,2H),4.17–4.04(m,3H),3.83–3.80(m,2H),2.62(d,J＝3.1Hz,2H),1.43(d,J＝7.1Hz,3H).
实施例1-22、(S)-2-(4-氟苄基)-N-(1-(4-(肼羰基)苯基)乙基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺(YJ153)的制备
Figure BDA0002606586210000481
使用与制备化合物YJ147相同的反应路线，将甲氧基胺盐酸盐替换为水合肼，最终得到化合物YJ153(最后一步反应的产率为69％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ9.72(s,1H),8.70(d,J＝8.1Hz,1H),7.79(d,J＝8.3Hz,2H),7.43(d,J＝8.2Hz,2H),7.20–7.16(m,2H),7.06(t,J＝8.9Hz,2H),5.18–5.10(m,1H),4.63(s,2H),4.17–4.05(m,2H),3.86–3.79(m,2H),2.61(s,2H),1.42(d,J＝7.0Hz,3H).
实施例1-23、(S)-4-(1-(6-(叔丁氧基羰基)-2-(4-氟苯乙基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶-3-甲酰氨基)乙基)苯甲酸(YJ154)的制备
Figure BDA0002606586210000482
使用与制备化合物YJ140相同的反应路线，将四氢-2H-吡喃-3-酮替换成N-叔丁氧羰基-4-哌啶酮，最终得到化合物YJ154(最后一步反应的产率为94％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.80(s,1H),8.67(d,J＝7.5Hz,1H),7.90(d,J＝7.7Hz,2H),7.49(d,J＝7.8Hz,2H),7.12–6.99(m,4H),5.20–5.12(m,1H),4.66–4.52(m,2H),3.67(s,2H),3.00(d,J＝7.6Hz,2H),2.71(d,J＝45.0Hz,4H),1.49(s,9H),1.43(d,J＝6.9Hz,3H).
实施例1-24、(S)-4-(1-(6-乙酰基-2-(4-氟苯乙基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸(YJ155)的制备
Figure BDA0002606586210000483
使用与制备化合物YJ140相同的反应路线，将四氢-2H-吡喃-3-酮替换成N-乙酰基-4-哌啶酮，最终得到化合物YJ157(最后一步反应的产率为94％)。1H NMR(500MHz,DMSO-d6)δ12.80(s,1H),8.67(d,J＝7.5Hz,1H),7.90(d,J＝7.7Hz,2H),7.49(d,J＝7.8Hz,2H),7.12–6.99(m,4H),5.20–5.12(m,1H),4.66–4.52(m,2H),3.67(s,2H),3.00(d,J＝7.6Hz,2H),2.71(d,J＝45.0Hz,4H),2.52(s,3H),1.43(d,J＝6.9Hz,3H).
实施例2本发明化合物YJ114与PD-1抗体联用对小鼠CT26结肠癌肿瘤模型的抑制作用
1.小鼠CT26细胞结肠癌皮下移植模型及给药方案
体外培养扩增小鼠结肠癌细胞CT26，并以1×106细胞/100μL在6-8周雌性Balb/c小鼠背部右侧皮下注射荷瘤。之后采用游标卡尺测量小鼠背部皮下肿瘤的长和宽，并计算肿瘤体积(mm3)＝长(mm)×宽(mm)×宽(mm)×0.5。待小鼠背部肿瘤体积大小达到100mm3-200mm3后，将小鼠随机分为四组：对照组，YJ114单药组，PD-1抗体单组和联药组。YJ114的给药剂量为75mg/kg/d，给药方式为口服；PD-1抗体的给药剂量为50μg/只，一周两次，给药方式为腹腔。给药周期为20天。每两天测量记录小鼠的肿瘤大小和体重变化。
2.实验结果分析：
结果如图1A-C所示，与阴性对照组相比，YJ114及PD-1抗体单药组均能在一定程度抑制肿瘤的生长，且PD-1抗体组的治疗效果要优于75mg/kg/d的YJ114单药组，肿瘤生长得到了很大程度的缓解。与此同时，联药组的抗肿瘤生长效果比PD-1抗体单独使用的抑制效果更好，12只小鼠中8只小鼠的肿瘤体积减小消失，得到完全缓解(对照组：0/12；YJ114单药组：2/12；PD-1抗体单药组：4/12；YJ114+PD-1抗体联药组：8/12)，而对小鼠的体重没有任何不良影响，说明YJ114与PD-1抗体联合使用对小鼠没有明显的毒副作用。
为了进一步探究YJ114与PD-1抗体联合用药的长期治疗效果，将CT26荷瘤小鼠按上述分组及给药方式给药2周后，继续测量记录小鼠的肿瘤大小，规定小鼠肿瘤体积超过2000mm3为死亡，统计并从给药开始为期四个月的各组小鼠存活曲线。结果如图1D所示，YJ114及PD-1抗体单药组都在一定程度上延长了小鼠的生存周期，而联药组的小鼠存活期更久，与其他各组存在显著性差异。到统计时间终点120天时，联药组仍有7只小鼠存活(对照组：0/12；YJ114单药组：1/10；PD-1抗体单药组：2/10；联药组：7/10)。
实施例3本发明化合物YJ114与PD-1抗体联用对小鼠MC38结肠癌肿瘤模型的抑制作用
1.小鼠MC38细胞结肠癌皮下移植模型及给药方案
体外培养扩增小鼠结肠癌细胞MC38，并以1×106细胞/100μL在6-8周雌性C57BL/6小鼠背部右侧皮下注射荷瘤。之后采用游标卡尺测量小鼠背部皮下肿瘤的长和宽，并计算肿瘤体积(mm3)＝长(mm)×宽(mm)×宽(mm)×0.5。待小鼠背部肿瘤体积大小达到100mm3-200mm3后，将小鼠随机分为四组：对照组，YJ114单药组，PD-1抗体单药组和联药组。YJ114的给药剂量为75mg/kg/d，给药方式为口服；PD-1抗体的给药剂量为50μg/只，一周两次，给药方式为腹腔。给药周期为18天。每两天测量记录小鼠的肿瘤大小和体重变化。
2.实验结果分析：
结果如图2A-C所示，与阴性对照组相比，YJ114及PD-1抗体单药组均能在一定程度抑制肿瘤的生长，且PD-1抗体单药组的治疗效果与YJ114给药组的药效相当。与此同时，YJ114与PD-1抗体联合使用的抗肿瘤生长效果比两组单药的抑制效果更好，8只小鼠中3只小鼠的肿瘤体积减小消失，得到完全缓解而对小鼠的体重没有任何不良影响，而其他组并无肿瘤完全消失的现象。实验结束后称取各组小鼠肿瘤组织重量，统计结果与肿瘤体积类似，联合用药组的肿瘤生长抑制效果最为明显，且对小鼠没有明显的毒副作用。
实施例4本发明化合物YJ114与PD-1抗体联用对AOM/DSS模型诱导的小鼠原位结肠癌肿瘤模型的抑制作用
慢性炎症一直被认为是结直肠癌发生大的诱因之一并伴随着结直肠癌的发生发展。IL-6、TNF、IL-1β、IL-17等这些炎性细胞因子和多种免疫细胞在形成慢性炎症的环境中充当了肥沃的土壤，不断积累而促进结直肠癌的发展。而AOM/DSS模型是通过化学刺激造成小鼠肠道细胞损伤进而形成局部溃疡性结肠炎，在长期诱导剂的作用下进一步发展成结肠癌的模型。因此通过构建AOM/DSS模型将进一步验证通过YJ114阻断PGE2/EP4信号通路可以协同免疫检查点阻断剂抑制PD-1/PD-L1信号通路对原位肿瘤形成和生长产生更加有效而持久的抑制作用。
1.小鼠原位结肠癌模型及给药方案
如图3A所示，选取8-10周C57BL/6雌性小鼠，进行10mg/kg AOM一次性腹腔注射，第六天起连续2.5％的DSS给水5天后更换成正常饮用水两周，通过三轮含2.5％的DSS给水周期构建自发性小鼠的结肠癌模型。在第三轮含2.5％DSS给水结束后，我们按此时的小鼠体重随机分为四组：对照组，YJ114单药组，PD-1抗体单药组和联药组。YJ114的给药剂量为75mg/kg/d，给药方式为口服；PD-1抗体的给药剂量为50μg/只，一周两次，给药方式为腹腔。给药周期为35天。在给药周期结束后，我们取各组小鼠结肠部位并展开观察小鼠结肠内部肿瘤形成和生长情况。
2.实验结果分析：
结果如图3B-D所示，YJ114及PD-1抗体单药处理均能够在一定程度上缓解小鼠结肠部位肿瘤的形成，降低小鼠结肠部位肿瘤总数。与对照组相比，单独使用PD-1抗体对于直径大于4mm的肿瘤几乎没有抑制效果，而YJ114单药处理能显著抑制直径大于4mm的肿瘤的形成。相比之下，联药组小鼠的结肠部位的肿瘤数量的体积均有明显的减小，再次显示了YJ114与PD-1抗体能够产生很好地抗肿瘤协同效果。与此同时，我们测量统计了小鼠的结肠长度，发现各组之间并不存在显著性差异。
实施例5本发明化合物YJ114与PD-抗体联用对小鼠RM-1前列腺癌模型的抑制作用
1.小鼠RM-1细胞前列腺癌皮下移植模型及给药方案
将1×106个前列腺癌细胞RM-1，皮下注射到6～8周龄雄性C57BL/6小鼠右侧背部。按照公式：体积＝长×宽2×0.52计算肿瘤体积。待肿瘤长到100mm3左右时，随机分为四组：对照组，YJ114单药组，PD-1抗体单药组和联药组，YJ114的给药剂量为150mg/kg/d，每天一次，给药方式为口服；PD-1抗体的给药剂量为100μg/只，一周两次，给药方式为腹腔，给药周期为17天。每周2次测量并记录肿瘤长与宽的变化，同时记录小鼠体重。待实验结束后，麻醉处死小鼠，剥离皮下肿瘤，称重并拍照记录肿瘤大小。
2.实验结果分析：
如图4A所示，在RM-1皮下荷瘤动物模型中，分别采取单用和联用的方式，测试YJ114与PD1抗体的治疗效果，PD1抗体和YJ114单药的肿瘤生长抑制率较为接近，仅为40％左右。但当YJ114和PD1抗体联用时，对肿瘤的抑制效果明显增加，达到了几乎完全抑制的效果，联合效果极为显著(图4A)。剥离肿瘤图片(图4B)及剥离肿瘤质量测量结果(图4C)也同样证明联合效果极为显著。此外，各组小鼠在治疗期间生理指标均正常，体重增长平稳(图4D)。此实验结果证明YJ114和PD-1单抗联合治疗显著抑制前列腺肿瘤生长。
用实施例2-5的方法，对本发明的其他化合物进行实验，结果表明，本发明的其他化合物具有与YJ114类似的活性和效果。
实施例6本发明化合物YJ114与PD-1抗体联用对小鼠MFC胃癌模型的抑制作用
1.小鼠胃癌MFC细胞皮下移植模型及给药方案
将2×106个小鼠胃癌MFC细胞，皮下注射到6～8周龄615小鼠右侧背部。按照公式：体积＝长×宽2×0.52计算肿瘤体积。待肿瘤长到100mm3左右时，随机分为四组：对照组，YJ114单药组，PD1抗体单药组和联药组，YJ114的给药剂量为150mg/kg/d，每天一次，给药方式为口服；PD1抗体的给药剂量为10μg/只，一周两次，给药方式为腹腔，给药周期为27天。每周2次测量并记录肿瘤长与宽的变化，同时记录小鼠体重。待实验结束后，麻醉处死小鼠，剥离皮下肿瘤，称重并拍照记录肿瘤大小。
2.实验结果分析：
如图5A所示，在MFC胃癌皮下荷瘤动物模型中，分别采取单用和联用的方式，测试YJ114与PD1抗体的治疗效果，PD1抗体和YJ114单药的肿瘤生长抑制率较为接近，达到80％左右。且当YJ114和PD1抗体联用时，对肿瘤的抑制效果更加显著，几乎完全抑制肿瘤的生长(图5A)。在实验结束当日，对各组肿瘤消除率进行了统计。如图5B的结果所示，YJ114单药组的肿瘤消除率约50％，PD1单药组的肿瘤消除率约为70％，当两者联合时，肿瘤100％消除。以肿瘤体积超过2000mm3为小鼠死亡判定标准得到图5C所示的小鼠存活曲线，可见联合治疗显著延长实验小鼠生存期，实验结束时小鼠存活率为100％。整个实验过程中各组小鼠体重变化无明显差异(图5D)。
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种产品组合，其特征在于，包括：
(i)第一药物组合物，所述第一药物组合物含有(a)第一活性成分，所述第一活性成分为EP4受体拮抗剂，以及药学上可接受的载体；和
(ii)第二药物组合物，所述第二药物组合物含有(b)第二活性成分，所述第二活性成分为PD-1抑制剂，以及药学上可接受的载体；
其中，所述的第一药物组合物和第二药物组合物为不同的药物组合物，或同一药物组合物。
2.如权利要求1所述的产品组合，其特征在于，所述EP4受体拮抗剂是式I所示的化合物或其药学上可接受的盐或水合物：
Figure FDA0002606586200000011
其中，
Figure FDA0002606586200000012
和
Figure FDA0002606586200000013
各自独立地选自下组：C3-C6碳环、C6-C12芳基、含一个或多个O、N、S原子的五元或六元杂芳环，其中
Figure FDA0002606586200000014
和
Figure FDA0002606586200000015
可任选地被1-3个R5基团取代；
Figure FDA0002606586200000016
为取代或未取代的选自下组的环：C4-C7碳环、4-7元饱和杂环、苯环、4-7元不饱和杂环(包括杂芳环)，其中，所述的杂环上具有一个或多个选自下组的杂原子：O、S或NR6；所述的环可以是单环、二环、螺环或桥环；
X为选自下组的基团：-O-、-S-、-N(R7)-；
Y为无，或者为选自下组的基团：-CH2-、-O-、-S-、-SO-、-SO2-、-N(R8)-；
B1和B2各自独立地为选自下组的基团：无、C1-C6的亚烷基、C2-C6的亚烯基、C2-C6的亚炔基；优选地，所述的B1和B2独立地选自下组：-(CH2)n-；其中n＝0、1、2、3或4、-CH＝CH-、-CH＝CH-CH2-、-CH2-CH＝CH-、-CH＝CH-CH2-CH2-、-CH2-CH＝CH-CH2-、-CH2-CH2-CH＝CH-；-C≡C-、-C≡C-CH2-、-CH2-C≡C-、-C≡C-CH2-CH2-、-CH2-C≡C-CH2-、-CH2-CH2-C≡C-；且B1、B2和Y不同时为无；
R1为选自下组的一个或多个基团：H、C1-C6的烷基(优选C1-C4烷基)、卤素、硝基、-N(R9)(R10)、-OH、-CN、C1-C6的卤代烷基(优选为C1-C4卤代烷基，更优选为二氟甲基、三氟甲基)、C1-C6的烷氧基(优选为C1-C4烷氧基，更优选为甲氧基、乙氧基)、C1-C6的卤代烷氧基(优选为C1-C4卤代烷氧基，更优选为二氟甲氧基、三氟甲氧基)、＝O；
R2和R3各自独立地选自：H、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基，或者，R2、R3和与其相连的碳原子共同构成3至6元环，所述的环为碳环，或具有1-3个选自下组的杂原子的3至6元杂环：O、S或N(R11)；
R4选自下列基团中的任意一个：-COOR12(优选为-COOH、-COOCH3、-COOCH2CH3、-COOCH2CH2CH3、-COOCH(CH3)2)、C(O)-N(Ra)(Rb)、氰基、四氮唑基、磷酸基、磺酸基；其中，Ra选自下组：H、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C1-C6卤代烷基、取代或未取代的C3-C6环烷基和取代或未取代的C1-C6的烷氧基；Rb选自下组：H、-OH、-NH2、取代或未取代的C1-C6烷基、取代或未取代的C1-C6卤代烷基、取代或未取代的C3-C6环烷基和取代或未取代的C1-C6的烷氧基；
各个R5和R12各自独立地选自：H、卤素、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、C1-C6的烷氧基(优选为甲氧基、乙氧基)；
R6、R7、R8、R9、R10和R11各自独立地选自：H、C1-C6烷基、C1-C6卤代烷基、C3-C6环烷基、C3-C6卤代环烷基、C6-C10的芳基、五元或六元杂环芳香基、
Figure FDA0002606586200000021
除非特别说明，所述的取代基团上的一个或多个氢原子被选自下组的取代基取代：F、Cl、Br、I、羟基、甲基、乙基、异丙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、硝基、-CN、氧代(＝O)；
R13和R14各自独立地选自：H、C1-C6的烷基(优选为甲基、乙基、丙基、丁基、异丙基、叔丁基、戊基、己基)、C1-C6的烷氧基、C6-C10的芳基、C1-C6的亚烷基、-C6-C10的芳基。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的EP4受体拮抗剂选自下组：
(S)-4-(1-(2-((4-氟苯基)乙炔基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-((4-氟苯基)乙炔基)-5,6-二氢-4H-环戊二烯并[b]噻吩-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
4-((1S)-1-(6-乙基-2-((4-氟苯基)乙炔基)-4,5,6,7-四氢化苯并[b]噻吩-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-((4-氟苯基)乙炔基)-5,6,7,8-四氢-4H-环庚烷并[b]噻吩-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-((4-氟苯基)乙炔基)-5,5-二甲基-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-氟苯乙基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-氟苯乙基)-5,6,7,8-四氢-4H-环庚烷并[b]噻吩-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-氟苯乙基)-4,5,6,7-四氢苯并[b]噻吩-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-氟苯乙基)-5,6-二氢-4H-环戊二烯并[b]噻吩-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-氟苯乙基)-5,5-二甲基-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-(三氟甲基)苯乙基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(3-(三氟甲基)苯乙基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(3-氟苯乙基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-氟苄基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-(三氟甲基)苄基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(3-(三氟甲基)苄基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(R)-4-(1-(2-(4-氟苄基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(R)-4-(1-(2-(4-(三氟甲基)苄基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(R)-4-(1-(2-(3-(三氟甲基)苄基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
4–((2-(4-氟苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰氨基)甲基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-((4-(三氟甲基)苄基)氨基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-甲氧基苯乙基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(3-氟苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰氨基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-氯苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰氨基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(3-氟-4-甲氧基苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰氨基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(3-氯苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰氨基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(3,4-二氟苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰氨基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-甲氧基苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰氨基)乙基)苯甲酸；
((2-(3-(三氟甲基)苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰氨基)甲基)苯甲酸；
4-((2-(4-氟苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)甲基)环己烷-1-羧酸(消旋体)；
(1-(2-(4-氟苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰氨基)环丙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(3,5-二氟苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(3-甲氧基苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸；
3-((2-(3-(三氟甲基)苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)甲基)苯甲酸；
4-((2-(3-(三氟甲基)苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)甲基)环己烷-1-羧酸；
4-(1-(2-(3-(三氟甲基)苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)环丙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-((6-氧代-1,6-二氢吡啶-3-基)乙炔基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-((6-甲氧基萘-2-基)乙炔基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰氨基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-((4-氟苯基)乙炔基)-6,7-二氢-4H-噻吩并[3,2-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-氟苯乙基)-6,7-二氢-4H-噻吩并[3,2-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-((3,5-二甲氧基苯基)乙炔基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-((3-甲氧基苯基)乙炔基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(3,5-二甲氧基苯乙基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(3-甲氧基苯乙基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(2-(6-甲氧基萘-2-基)乙基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰氨基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-氟苄基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸甲酯；
(S)-2-(4-氟苄基)-N-(1-(4-(甲氧基氨基)苯基)乙基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺；
(S)-4-(1-(2-(4-甲基苄基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(2-(4-乙基基苄基)-5,7-二氢-4H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺)乙基)苯甲酸；
(S)-2-(4-氟苄基)-N-(1-(4-(甲氧基(甲基)氨基甲酰基)苯基)乙基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-C]吡喃-3-甲酰胺；
(S)-2-(4-氟苄基)-N-(1-(4-(羟基氨基甲酰基)苯基)乙基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺；
(S)-N-(1-(4-氰基苯基)乙基)-2-(4-氟苄基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺；
(S)-2-(4-氟苄基)-N-(1-(4-(肼羰基)苯基)乙基)-4,7-二氢-5H-噻吩并[2,3-c]吡喃-3-甲酰胺；
(S)-4-(1-(6-(叔丁氧基羰基)-2-(4-氟苯乙基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶-3-甲酰氨基)乙基)苯甲酸；
(S)-4-(1-(6-乙酰基-2-(4-氟苯乙基)-4,5,6,7-四氢噻吩并[2,3-c]吡啶-3-甲酰胺基)乙基)苯甲酸。
4.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述EP4受体拮抗剂选自下组：
Figure FDA0002606586200000061
Figure FDA0002606586200000071
Figure FDA0002606586200000081
Figure FDA0002606586200000091
Figure FDA0002606586200000101
Figure FDA0002606586200000111
Figure FDA0002606586200000121
5.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述EP4受体拮抗剂选自下组：
Figure FDA0002606586200000122
Figure FDA0002606586200000131
6.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括：
(i)EP4受体拮抗剂；
(ii)PD-1抑制剂；和
(iii)药学上可接受的载体。
7.如权利要求6所述的组合物，其特征在于，所述组合物还包括其他治疗恶性肿瘤的药物。
8.如权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述其他治疗恶性肿瘤的药物选自下组：尼莫司汀、卡莫司汀、环磷酸铵、甘霖线芥、去氧氟尿苷、5-氟尿嘧啶、6-巯基嘌呤、硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、吉西他滨、卡莫氟、羟基脲、甲氨蝶呤、优福定、安西他滨、放线菌素D、多柔比星、柔红霉素、表柔比星、丝裂霉素、伊立替康、三尖杉酯碱、羟基喜树碱、长春瑞宾、泰索帝、拓扑替康、长春新碱、替尼泊苷、依托泊苷、阿他美坦、阿那曲唑、氨鲁米特、来曲唑、福美坦、甲他孕酮、卡铂、顺铂、达卡巴嗪、奥沙利铂、乐沙定、可铂奥沙、米托蒽醌、丙卡巴肼、吉非替尼、艾洛替尼、西妥昔单抗、赫赛汀、伊马替尼、利妥昔单抗、伏立诺他、色瑞替尼、克唑替尼、埃克替尼、索拉非尼、达克替尼、阿帕替尼、舒尼替尼、阿柏西昔、贝伐珠单抗、西妥昔单抗、帕尼单抗、瑞戈替尼、或其组合。
9.一种药盒，其特征在于，包括：
(a1)第一容器，以及位于所述第一容器中的EP4受体拮抗剂，或含有EP4受体拮抗剂的药物；
(b1)第二容器，以及位于所述第二容器中的PD-1抑制剂，或含有PD-1抑制剂的药物。
10.一种组合的用途，其特征在于，所述组合包括EP4受体拮抗剂和PD-1抑制剂，用于制备一药物组合物或药盒，所述药物组合物或药盒用于治疗恶性肿瘤。
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