CN112386682A - 纤连蛋白在制备治疗新型冠状病毒肺炎药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明属于生物医药技术领域，涉及一种纤连蛋白（FN）在制备治疗新型冠状病毒肺炎（COVID‑19）药物中的应用。所述纤连蛋白可直接制成液体制剂或与其他成分共同制成组合液体制剂，通过喷雾、雾化方式输送到人体呼吸道以及肺部组织。本发明利用了纤连蛋白能够调动单核吞噬细胞与巨噬细胞，增强单核吞噬细胞与巨噬细胞的活性，促进单核吞噬细胞与巨噬细胞对新冠病毒以及被新冠病毒感染的细胞进行吞噬杀灭的原理，将纤连蛋白作为主要有效成分制备成液体制剂，通过喷雾、雾化等肺部给药方式输送到人体呼吸道以及肺部组织，达到治愈新冠肺炎的效果。

Description

纤连蛋白在制备治疗新型冠状病毒肺炎药物中的应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及纤连蛋白（FN）在制备治疗新型冠状病毒肺炎（COVID-19）药物中的应用。

背景技术

纤连蛋白（Fibronectin，FN）是一种黏附性的高分子糖蛋白，广泛存在于动物组织和组织液中，具有多种生物学功能。纤连蛋白可与多种物质和细胞结合，执行多种功能。纤连蛋白广泛参与细胞迁移、黏附、增殖、止血及组织修复等过程，调动单核吞噬细胞和巨噬细胞，增强单核吞噬细胞和巨噬细胞的活性，具有生长因子作用。它作为细胞培养的基质，可提高多种细胞的贴壁率、汇合率，缩短细胞汇合时间，使细胞形态结构良好，代谢率增强，DNA、RNA及蛋白质合成速度显著提高；细胞的集落率升高，原代培养成活率提高。

2020年，全球新冠疫情肆虐，新型冠状病毒属于β属的新型冠状病毒，研究显示与蝙蝠SARS样冠状病毒（bat-SL-CoVZC45）同源性达85%以上。该病毒归属于Sarbe病毒亚属，正冠状病毒亚科，虽然与SARS和MERS病毒都属于冠状病毒，但其形成了另外一簇的进化分枝，因此被认为是可以感染人类的冠状病毒科中的第七个新成员。目前已证实，新型冠状病毒可以持续性人传人，主要传播途径为直接传播、气溶胶传播和接触传播，特别在家庭成员、病人与医护人员之间，尤其是医护人员的防护措施不到位的时候往往出现集群性的传播。

当前，为应对新型冠状病毒感染肺炎疫情，我国科研人员正在全力奋战推动药物开发，全球大量科研机构和制药公司也相继投入资金和人员进行相关疫苗和抗病毒药物的研究与开发。有研究表明，通过增强人体自身免疫系统的免疫功能，可有效抵抗新冠病毒感染，治愈新冠病毒感染引发的肺炎。人体自身免疫系统中的单核吞噬细胞和巨噬细胞在发现新冠病毒侵入人体后，可以直接吞噬病毒，并将病毒分解。对于已经被病毒感染的细胞，机体杀灭的方法多种多样：可以巨噬细胞吞噬，然后将抗原通过抗原递呈细胞呈递给T细胞，引起链式T细胞增殖；也可以激活B细胞，产生抗体，中和病毒；还可以激发淋巴细胞的记忆效应，记住入侵的抗原病毒。理论上，被感染的人体细胞，会给免疫系统递呈抗原，通过抗原-MHC复合体，通过MHC-TCR系统递呈给T细胞。（论文“人类免疫系统的控制者—巨噬细胞”，《国外医学情报》1989年第8期）。

中国专利也公开了一些关于治疗新冠肺炎的药物及方法，例如申请号为202010648732.7《洛伐他叮在制备治疗新冠肺炎药物中的应用》；申请号202010123400.7《2019-nCoV3CL水解酶抑制剂与IL-6单抗在制备治疗新冠肺炎药物中的应用》；申请号202010167535.3《龙葵果在预防和治疗新冠病毒或流感病毒感染中的应用》；申请号202010311160.3《鞣花酸在防治新型冠状病毒感染中的应用》等等,但尚未发现有涉及纤连蛋白应用于新冠病毒的内容。

发明内容

本发明正是利用了纤连蛋白能够调动单核吞噬细胞与巨噬细胞，增强单核吞噬细胞与巨噬细胞的活性，促进单核吞噬细胞与巨噬细胞对新冠病毒以及被新冠病毒感染的细胞进行吞噬杀灭的原理，将纤连蛋白作为主要有效成分制备成喷雾制剂，通过肺部给药的方式输送到人体呼吸道以及肺部组织，再通过肺泡壁上的空隙被吸收或者被肺泡中的吞噬细胞吞噬进入淋巴系统，进而进入血液循环，到达全身。

本发明的利用纤连蛋白FN雾化吸入治疗新冠肺炎的机理在于：

新冠肺炎患者肺部开始白化已经开始显现纤维化症状者，FN 通过雾化直接喷涂到新冠肺炎患者肺部，阻止其进一步纤维化并促使其肺部细胞再生，达到救治新冠肺炎重症患者的目的，新冠肺炎轻症患者临床可通过雾化直接FN 肺部给药，阻止纤维化，避免不可逆。纤连蛋白FN 可促使患者逾越过肺部纤维化诱导再生修复，新冠肺炎患者会出现肺纤维化，即肺脏间质组织由胶原蛋白、弹性素及蛋白醣类构成，当成纤维细胞受到化学性或物理性伤害时，会分泌胶原蛋白进行肺间质组织的修补，进而造成肺脏纤维化。纤连蛋白FN在避免肺细胞修复过程胶原蛋白过度表达从而致使肺部纤维化中的作用至关重要。FN 不仅可以增加胶原酶的表达量，还增强胶原酶的活性，从而有利于促进胶原蛋白的降解。另外，FN 还可以通过IL-1 依赖途径间接诱导胶原酶表达。FN 通过活化MAPK 依赖的信息途径，并激活PKC，促进AP-1 和IL-1 启动子的结合，从而在基因转录水平促进IL-1β的表达，通过IL-1促进胶原酶的合成。整合素α5β1 介导了FN 片段对胶原酶的诱导。FN 通过降解细胞修复过程后段的胶原蛋白合成，避免肺部细胞纤维化，促使肺部细胞逾越过纤维化愈合而实现再生修复。FN 可有效促进新冠肺炎患者肺部新生血管形成：如果没有新生血管的形成，新冠肺炎患者肺部的康复就缺乏有力的支撑。新血管生成时，首先需要建立一个含有FN 和蛋白多糖的临时介质ECM，继而形成基底膜结构，然后血管内皮细胞敷着于基底膜上。FN 在此过程中，吸引外周血中的单核细胞移行运动到病毒损伤部位，成为活跃的巨噬细胞并释放更多的血管生成因子。综合已有的研究结果，不同类型或来源的巨噬细胞的识别吞噬机制不尽相同，但几乎都是多种机制协同作用，且与凋亡细胞的类型关系不大。所以，FN对新冠肺炎患者肺部细胞的凋亡细胞能起到有效的识别、清除和调控，并通过调控胶原合成促使其逾越过纤维化，实现肺部细胞的再生修复。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

本发明公开了纤连蛋白（FN）的新用途是在制备治疗新型冠状病毒肺炎（COVID-19）药物中的应用。

在本发明中，所述纤连蛋白的浓度不低于0.1mg/ml，优选0.2 mg/ml -0.8mg/ml。

所述纤连蛋白可直接制成液体制剂，通过喷雾、雾化方式输送到人体呼吸道以及肺部组织。

所述纤连蛋白也可与其他成分共同制成组合液体制剂，通过喷雾、雾化方式输送到人体呼吸道以及肺部组织，所述其他成分可为层粘连蛋白。

所述组合液体制剂中还可包含药学上可接受的载体。

所述纤连蛋白制成液体制剂的方法及使用如下：

（1）取纤连蛋白；

（2）将纤连蛋白用生理盐水进行稀释、溶解，得到纤连蛋白料液；

（3）采用微孔滤膜过滤的方式对纤连蛋白料液进行过滤除菌，得到纤连蛋白无菌液；

（4）纤连蛋白无菌液中纤连蛋白的含量不低于0.1mg/ml；

（5）将纤连蛋白无菌液灌装于无菌西林瓶内，密封。

（6）使用纤连蛋白无菌液时，打开西林瓶，采用肺部给药的方式对新冠肺炎患者进行给药。

本发明的有益效果在于将纤连蛋白输送到肺部组织，利用纤连蛋白的生物学特性，调动激活单核吞噬细胞与巨噬细胞，促进单核吞噬细胞与巨噬细胞吞噬杀灭新冠病毒以及被新冠病毒感染的细胞，达到治愈新冠肺炎的效果。

具体实施方式

本发明以下结合实施例做进一步描述：

实施例1

（1）取0.5g纤连蛋白；

（2）将0.5g纤连蛋白用1000ml浓度为0.85%的生理盐水进行溶解、稀释，得到纤连蛋白料液，含量为0.5mg/ml；

（3）采用微孔滤膜过滤的方式对（2）中得到的纤连蛋白料液进行过滤除菌，得到纤连蛋白无菌液；

（4）将纤连蛋白无菌液灌装于无菌西林瓶内，密封；

（5）使用纤连蛋白无菌液时，打开西林瓶，采用肺部给药的方式对新冠肺炎患者进行给药。

实施例2

（1）取0.4g纤连蛋白；

（2）将0.4g纤连蛋白用1000ml浓度为0.85%的生理盐水进行溶解、稀释，得到纤连蛋白料液，含量为0.4mg/ml；

（3）采用微孔滤膜过滤的方式对（2）中得到的纤连蛋白料液进行过滤除菌，得到纤连蛋白无菌液；

（4）将纤连蛋白无菌液灌装于无菌西林瓶内，密封；

（5）使用纤连蛋白无菌液时，打开西林瓶，采用肺部给药的方式对新冠肺炎患者进行给药。

实施例3

（1）取0.6g纤连蛋白，0.2g层粘连蛋白；

（2）将0.6g纤连蛋白与0.2g层粘连蛋白混匀，用1000ml浓度为0.85%的生理盐水进行溶解、稀释，得到纤连蛋白与层粘连蛋白的混合料液，其中纤连蛋白含量为0.6mg/ml，层粘连蛋白含量为0.2mg/ml；

（3）采用微孔滤膜过滤的方式对（2）中得到的纤连蛋白与层粘连蛋白混合料液进行过滤除菌，得到纤连蛋白与层粘连蛋白混合无菌液；

（4）将纤连蛋白与层粘连蛋白混合无菌液灌装于无菌西林瓶内，密封；

（5）使用纤连蛋白与层粘连蛋白混合无菌液时，打开西林瓶，采用肺部给药的方式对新冠肺炎患者进行给药。

上述实施例是对本发明的说明，不是对本发明的限定，任何对本发明简单变换后的方案均属于本发明的保护范围。

应用实例：

2020年2月10日至3月10日，齐齐哈尔医学院在某地开展了纤连蛋白FN（郑州弗博瑞生物技术有限公司生产，生产批号FN201909）雾化吸入治疗新冠肺炎的临床观察。现将临床观察情况报告如下：

本次临床观察的观察对象为28名该病区收治的新冠肺炎COVID-19确诊患者。28名确诊新型冠状病毒肺炎的患者病情相对稳定，并处于疾病的恢复期，新冠病毒核酸检测均为阳性。患者胸部CT显示双肺散在磨玻璃影（以胸膜下病灶为主）。临床给予应用纤连蛋白FN雾化吸入，促进新冠肺炎患者病灶吸收，预防患者肺间质纤维化的发生，观察FN治疗新冠肺炎缓解期病人的效果。本次临床观察男性患者17人，女性患者11名。年龄范围为24岁-76岁。其中轻症患者16人，占57%；重症患者12人，占43%（以新冠肺炎诊疗第七版标准分类），均给予按新冠肺炎诊疗方案规范治疗。

结果显示：

FN雾化治疗COVID-19患者临床效果如下

临床症状	临床效果观察
		呼吸困难	减轻
咳嗽	减轻
		咳痰	减轻
肺部渗出液	减少
		排痰	顺畅
肺部CT影响	病灶减少

齐齐哈尔医学院给出的观察结果与建议如下：

1、临床治疗新冠肺炎患者，可通过肺部给药方式直接雾化应用纤连蛋白FN进行治疗；

2、纤连蛋白FN可以促进新冠肺炎患者肺部渗出病灶吸收；

3、纤连蛋白FN可以改善新冠肺炎患者呼吸困难、咳嗽、咳痰等症状，并促使排痰顺畅；

4、纤连蛋白FN可以阻止新冠肺炎患者肺部纤维化；

5、临床应用纤连蛋白FN可以减少新冠肺炎病患治疗周期、缩短患者住院时间；

6、临床应用纤连蛋白FN治疗新冠肺炎病患不良反应小，安全性高，临床效果明显；

7、由于时间关系，本次临床观察的观察患者数量、观察检测手段、观察检测项目、观察指标分析等都还需要进一步加强；此报告仅为初步观察报告，我们将进一步扩大观察范围，继续深入研究。

具体临床观察报告已作为实质审查参考资料一并提交。

Claims (6)

1.纤连蛋白在制备治疗新型冠状病毒肺炎药物中的应用。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于：所述纤连蛋白的浓度不低于0.1mg/ml，优选0.2 mg/ml -0.8mg/ml。

3.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述纤连蛋白可直接制成液体制剂，通过喷雾、雾化方式输送到人体呼吸道以及肺部组织。

4.根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于：所述纤连蛋白可与其他成分共同制成组合液体制剂，通过喷雾、雾化方式输送到人体呼吸道以及肺部组织，所述其他成分可为层粘连蛋白。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述组合液体制剂中还包含药学上可接受的载体，如氯化钠、纯化水。

6.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述纤连蛋白制成液体制剂的方法如下：

（1）取纤连蛋白；

（2）将纤连蛋白用生理盐水进行稀释、溶解，得到纤连蛋白料液；

（3）采用微孔滤膜过滤的方式对纤连蛋白料液进行过滤除菌，得到纤连蛋白无菌液；

（4）纤连蛋白无菌液中纤连蛋白的含量不低于0.1mg/ml；

（5）将纤连蛋白无菌液灌装于无菌西林瓶内，密封。