CN111265500B

CN111265500B - 一种防治covid-19的药物组合物及其制备方法

Info

Publication number: CN111265500B
Application number: CN202010135846.1A
Authority: CN
Inventors: 李超乾; 林艳荣
Original assignee: First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University
Current assignee: First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University
Priority date: 2020-03-02
Filing date: 2020-03-02
Publication date: 2022-02-01
Anticipated expiration: 2040-03-02
Also published as: CN111265500A

Abstract

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种防治COVID‑19（新型冠状病毒所引起的疾病）的药物组合物及其制备方法，所述的药物组合物包含注射用母牛分枝杆菌和硫酸沙丁胺醇的活性成分，其成分和重量比例为：注射用母牛分枝杆菌:硫酸沙丁胺醇为1:50‑200。采用所述的药物组合物制成的药物可采用雾化吸入的治疗方式，通过短期雾化吸入，提供给患者这种特定用途的药物可以提高患者的依从性，使患者用药方便，降低医疗费用。本发明所述的防治COVID‑19的药物组合物不仅能够有效防治COVID‑19，减轻病人转成重症或危重症，核酸转阴时间缩短均数约4天，治疗时间也相应缩短，同时也能非特异性防治其它呼吸道病毒感染，为临床防治COVID‑19、防治呼吸道病毒感染提供了新的途径和方案。

Description

一种防治COVID-19的药物组合物及其制备方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种防治COVID-19（新型冠状病毒所引起的疾病）的药物组合物及其制备方法。

背景技术

干扰素（IFN）是体内最重要、也可能是唯一天然非特异性抗病毒天然成分。IFN是目前发现并公认的体内最重要的非特异性抗病毒成份，其被分为I型（IFN-β和IFN-α），II型（IFN-γ）和III型（IFN-λ1、IFN-λ2、IFN-λ3）IFN。IFN产生后通过激活被感染部位的细胞内JAK-STAT途径，调节数百种相关效应抗病毒基因（ISG）转录，进而抑制病毒增殖，促进被感染细胞的凋亡，并且使未感染的细胞进入抗病毒状态，IFN还能促进各种天然免疫细胞、适应性免疫细胞和效应细胞发育成熟，促进适应性免疫反应发挥抗病毒作用。I型及III型IFN具有抗病毒的作用，尤其是III型IFN在呼吸道抗病毒防御中至关重要。当呼吸道病毒感染后，IFN作用于被感染细胞IFN受体，随后通过JAK-STAT途径,激活Mx1、ISG15等抗病毒效应基因表达，抑制呼吸道病毒转录及蛋白合成，促进被病毒感染气道上皮细胞的凋亡发挥抗病毒效应。此外，Petersen E等人的研究表明，用聚（I·C）（TLR3激动剂）和较小程度的CpG，R848或脂多糖（TLR9，TLR7 / 8或TLR4激动剂）对小鼠进行鼻内预处理，上调了肺中的β干扰素（IFN-β），IFN-γ，IL-1β和肿瘤坏死因子（TNF）基因的表达，发挥了预防SARS冠状病毒感染的作用。目前，在最新诊治方案（2020年1月27日国家卫生健康委员会发布的《新型冠状病毒感染的肺炎诊疗方案（试行第五、六版）》）推荐雾化吸入α-IFN（成人每次500 万U，加入灭菌注射用水2ml，每日2 次），但其实际疗效果仍不确切，究其原因可能与外源性IFN不良反应大、常规剂量未达抗病毒效果有关，此外还需考虑其昂贵的成本和雾化吸入α-IFN能否到达下呼吸道和肺组织等问题。

分枝杆菌制剂（如卡介苗、灭活草分枝杆菌、注射用母牛分枝杆菌等）是多功能免疫调节剂，可以用于防治感染，主要通过影响免疫应答反应而调节机体免疫功能，增强Th细胞活性，刺激B细胞进入增殖、分化阶段，最终促进特异性抗体形成。杨静等研究表明灭活草分枝杆菌可以显著提高哮喘病者外周血单个核细胞（PBMC）中Th ( 包括Th1、Th2) 细胞功能，促进PBMC产生IFN-γ和IL-4，尤以Th1类细胞因子IFN-γ提高为著，在促进Th1和Th2细胞成熟的同时，上调哮喘病儿Th1功能，使哮喘病儿Th2优势状态部分纠正，从而改善哮喘病儿Th1/Th2失衡状态，在哮喘防治中发挥重要作用。

发明内容

本发明的目的在于提供一种安全有效的临床防治COVID-19（新型冠状病毒所引起的疾病）的药物组合物及其制备方法。

本发明人发现，含有注射用母牛分枝杆菌和硫酸沙丁胺醇活性成分的组合物，不仅能够有效防治COVID-19，同时也能非特异性防治其它呼吸道病毒感染。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种防治COVID-19的药物组合物，所述的药物组合物包含注射用母牛分枝杆菌和硫酸沙丁胺醇的活性成分，其成分和重量比例为：注射用母牛分枝杆菌：硫酸沙丁胺醇为1:50-200。

上述的防治COVID-19的药物组合物，其制备方法是：将注射用母牛分枝杆菌配成4.0-5.5μg/ml的生理盐水注射液，硫酸沙丁胺醇配成0.5mg/ml的生理盐水溶液，然后按照1:50-200的重量比例混合使用，混合后做成气雾剂给患者吸入，或在5L/min的氧流量下射流雾化给患者吸入。

或者，所述的防治COVID-19的药物组合物，其制备方法是：将注射用母牛分枝杆菌配成4.5-5.0μg/ml的生理盐水注射液，硫酸沙丁胺醇配成0.5mg/ml的生理盐水溶液，单独做成气雾剂给患者吸入，或在5L/min的氧流量下射流雾化给患者吸入。

本发明所述的防治COVID-19的药物组合物，可以作为单独制剂，也可以和其它药物配伍，加入适量药剂学上可接受的载体，采用现有技术制成可药用的剂型。采用所述的药物组合物制成的可药用的剂型包括气雾剂、水剂和粉剂。

本发明进一步公开了所述的防治COVID-19的药物组合物在制备用于雾化吸入非特异性防治呼吸系病毒感染药物的用途。

上述所述的注射用母牛分枝杆菌和硫酸沙丁胺醇（万托林）两种化合物组合后在无菌状态、4℃以下保存1个月不会出现化学反应或生物变质的情况，与单独存放时药效相同。

以下分别介绍两种化合物的性能和单独临床应用的效果：

注射用母牛分枝杆菌（微卡），英文名：Mycobacterium vaccae for Injection；【药品类型】生物制品，【主要组成成份】母牛分枝杆菌菌体蛋白，【性状】白色疏松状粉末，【规格】22.5μg/瓶，【药理作用】注射用母牛分枝杆菌具有双向免疫调节功能，能提高正常小鼠腹腔巨噬细胞产生过氧化氢、一氧化氮水平及促进T淋巴细胞增殖反应，可明显抑制结核菌感染豚鼠反应，对免疫功能低下小鼠淋巴细胞转化、巨噬细胞吞噬功能具有明显增强作用；【适应症】本品为双向免疫调节制剂，可作为联合用药，用于结核病化疗的辅助治疗，【临床前安全性】以3种不同剂量经肌肉途径注射小鼠，分别为人用剂量5000倍、2500倍、1250倍，均未引起小鼠的异常症状及死亡。对大白鼠以相当于人用剂量的78倍与1560倍给药，对试验犬相当于临床人用量的4倍和100倍给药，实验结果表明:在该剂量下，试验犬和大鼠在一般行为、血液学、生化学和病理学等指标方面均未出现毒性反应；【不良反应】极个别患者可能出现局部皮疹、硬结或发热。【禁忌症】（1）对本品过敏或过敏体质者。（2）严重心脏病、心肌损害、显著血管硬化、心内膜炎患者。（3）妊娠期妇女。（4）极度衰弱及重症贫血者。

硫酸沙丁胺醇（万托林），英文名：SAlbutamol Sulfate；【化学名】1-(4-羟基-3-羟甲基苯基)-2-(叔丁氨基)乙醇硫酸盐；【分子式】C13H21NO3；【分子量】239.31；【药效学】沙丁胺醇是一选择性的β2—肾上腺素受体激动剂，在治疗剂量下，治疗可逆性气道阻塞性疾病，5分钟内快速起效，药效持续4至6小时，其主要作用于位于支气管平滑肌上的β2—肾上腺素能受体；【临床前安全性】与其它选择性β2—激动剂相似，对小鼠皮下注射沙丁胺醇显示致畸性；【适应症】本品主要用于缓解哮喘或慢性阻塞性肺部疾患(可逆性气道阻塞疾病)患者的支气管痉挛，及急性预防运动诱发的哮喘，或其他过敏原诱发的支气管痉挛。

虽然目前文献报道硫酸沙丁胺醇作为气雾剂治疗哮喘或慢性组赛性肺病的常用药物，但是与注射用母牛分枝杆菌（微卡）联合雾化吸入用于临床防治呼吸道病毒感染未见报道，也未见有采用注射用母牛分枝杆菌和硫酸沙丁胺醇组合治疗COVID-19的报道。

使用本发明药物组合物防治COVID-19的步骤如下：注射用母牛分枝杆菌（微卡）22.5微克×2+生理盐水10ml，配成生理盐水注射液，在5L/min的氧流量下射流雾化吸入（射流雾化吸入治疗的示例图见附图1），Qd，10天/疗程；雾化前先喷吸硫酸沙丁胺醇气雾剂，即“万托林”3喷，以舒张支气管，并防诱发气道痉挛；雾化时嘱患者做深慢呼吸，吸气后稍屏气，从鼻孔呼气；常规备“万托林”等急救药品，如雾化时发生气紧、气喘或明显咳嗽、咽痒、皮肤瘙痒、皮疹等症状，立即停止本次雾化，并再喷吸“万托林”3喷以终止气喘发作。

本发明所述的防治COVID-19的药物组合物可制成气雾剂、水剂和粉剂等，可采用雾化吸入的治疗方式，雾化吸入的治疗方式药物直接进入气道，起效快；而且颗粒均匀易于沉积气道，雾化吸入的药物直接作用于病变的支气管、细支气管、肺组织，能够增加药物的治疗作用，且全身副作用少；雾化时间短、病人耐受性好；操作简单、易于配合（老幼皆宜）。通过短期雾化吸入，提供给患者这种特定用途的药物可以提高患者的依从性，使患者用药方便，降低医疗费用，具有很好市场前景。

本发明的有益效果如下：

1、本发明防治COVID-19的药物组合物中，所包含的注射用母牛分枝杆菌能够快速提升呼吸道—肺组织内源性干扰素水平而抑制病毒RNA复制，减少细胞损伤或促进受损细胞修复而起到预防、治疗作用，同时由于是提升内源性干扰素水平，避免或减少了外源性干扰素制剂难以避免的不良反应。

2、本发明所述的防治COVID-19的药物组合物，可将药物组合物的剂型制成的气雾剂，在雾化的药物中含有注射用母牛分枝杆菌和硫酸沙丁胺醇的活性成分，并产生以下作用：（1）物理作用：雾化吸入生理盐水本身可能起到清洗、稀释咽部病毒作用而可能使核酸检测阴性；稀释、破坏呼吸道痰液，促进排痰，使气道通畅。（2）利用呼吸道粘膜免疫特性，数天内提高呼吸道—肺组织Ⅰ、Ⅲ-IFN表达，抑制病毒复制，并促进免疫细胞杀灭病毒和细胞修复。通过雾化吸入稀释、破坏气道粘液，使气道通畅是因为根据尸体解剖报告，感染COVID-19以后的患者，在其肺部气道中粘液增多，而且非常浓稠，阻碍了气道的通畅，氧气不能够进入肺泡中，就可导致病人出现呼吸不通畅，而最终导致血氧浓度下降、呼吸衰竭，出现脑部细胞以及内脏各个器官供氧不足，难以医治，变成重症，导致死亡的情况，通过雾化吸入药物进入气道（注射用母牛分枝杆菌和硫酸沙丁胺醇及生理盐水雾化后也有湿润气道和气泡作用）后，气道粘液的表面张力被破坏，降低其粘稠性而容易咳出，并使气道通畅，高浓度的氧气立刻改善通气，提高血氧浓度，使患者呼吸困难的症状得到很快改善，从而避免重症化，或使重症患者病情能够很快减轻，大大缩短治疗时间。

3、本发明通过临床试验证明雾化吸入注射用母牛分枝杆菌（微卡）治疗COVID-19有较好的临床效果，结合硫酸沙丁胺醇使用治疗效果更佳，经过十几天国家三甲专科医院---广西南宁市第四人民医院（传染病专科医院）临床试验，轻症患者不容易转为重症或危重，治愈率高，30多例COVID-19患者无死亡发生，平均治疗时间缩短了4天，有利于目前的COVID-19防控，值得进一步临床推广应用。本发明所述的防治COVID-19的药物组合物不仅能够有效防治COVID-19，同时也能非特异性防治其它呼吸道病毒感染，为临床防治COVID-19、防治呼吸道病毒感染提供了新的途径和方案。

附图说明

图1为采用射流式雾化器对注射用母牛分枝杆菌进行射流雾化吸入治疗的示例图；

图2为临床试验中采用Kaplan-Meier法进行转阴时间分析得出的 Kaplan-Meier曲线图；

图3为临床试验中干预组患者A（普通型）在治疗前的胸部CT图；

图4为临床试验中干预组患者A（普通型）在治疗后的胸部CT图，从图中可见患者治疗后病灶较治疗前明显吸收；

图5为临床试验中干预组患者B（普通型）在治疗前的胸部CT图；

图6为临床试验中干预组患者B（普通型）在治疗后的胸部CT图，从图中可见患者治疗后病灶较治疗前明显吸收。

具体实施方式

实施例1

将微卡22.5微克x2+生理盐水10ml，在5L/min的氧流量下射流雾化吸入（见附图1），直至全部药液吸完（约20分钟左右）， Qd，10天/疗程；雾化前先喷吸硫酸沙丁胺醇气雾剂，即“万托林”3喷。

实施例2

将微卡25微克/瓶×2瓶+沙丁胺醇按重量比1:50-200配成10ml生理盐水无菌混合液，在5L/min的氧流量下射流雾化吸入，直至全部药液吸完（约20分钟左右）， Qd，10天/疗程。

实施例3

将微卡25微克/瓶×2瓶+沙丁胺醇按重量比1:50-200配成5ml生理盐水灭菌混合液，单独制成气雾剂，每天1瓶， Qd，10天/疗程。

以下是本发明药物组合物的临床试验：

1.材料与方法

1.1 材料和设备：注射用母牛分枝杆菌（商品名：微卡，成份是母牛分枝杆菌菌体蛋白，国药准字S200110003）购自安徽智飞龙科马生物制药有限公司；SW-Ⅱ型射流式雾化器[桂械注准20182540033，桂食药监械生产许20110001号]。

1.2 方法

1.2.1 研究对象及纳入标准：自2020年2月5日起收住在南宁市第四人民医院（定点医院），按国家卫健委《新型冠状病毒肺炎诊疗方案（试行第五版）》，确诊普通型的患者共32例。

1.2.2 研究对象分组：按随机、盲法、对照组设置。分常规对照组和干预组，分别为18例和14例，两组一般资料具有可比性。

1.2.3 治疗分配及输液：

1）应用电脑生成的随机方案来分配患者

2）指定一人配药（对照组雾化吸入生理盐水10毫升，干预组用微卡2支溶于10毫升生理盐水中再雾化吸入。）

3）临床团队、研究人员和病人对治疗药物成分不知情（盲法）。

4）常规治疗对照组严格按指南方案的治疗+雾化吸入生理盐水，干预组是在常规治疗对照组的基础上+雾化吸入微卡。每天一次，每次直至吸完药液（大概20分钟），雾化治疗前两组均喷吸万托林3喷。

1.2.4 观察指标：

1）试验首要结果为呼吸道标本和血液标本病毒核酸。

2）次要结果为胸部CT、血常规、CRP、肝肾功能、心肌酶、动脉血气分析。雾化吸入治疗前及雾化后每小时记录指脉氧饱和度。

3）治疗期间重症化率，死亡率、住院时长和并发症情况。

1.2.5统计学分析

组间以Kaplan-Meier法进行转阴时间分析，采用SPSS 22.0软件进行统计学分析,双侧检验,检验水准α=0.05， P<0.05 被认为差异具有统计学意义。

1.3 部分结果

1.3.1 两组咽拭子核酸转阴时间的比较（见下表1、表2、表3以及附图2）

干预组与常规对照组相比，P<0.05

干预组转阴时间（5.333±0.800）与常规对照组（9.143±1.678）相比，P<0.05，提示干预组转阴时间较常规治疗组明显缩短。

1.3.2 两组转阴率、重症化率、死亡率情况比较

干预组全部转阴，常规治疗组仍有1例未转阴（已长达1个月尚未转阴）；干预组无转为重症病例，而常规治疗组有1例转为重症，两组均无死亡病例。

1.3.3 个案举例及其CT改变照片

（1）普通型患者A，女，49岁，经确诊为新型冠状病毒肺炎，为干预组病例，治疗前，2020-02-15胸部CT平扫(常规)，CT图见附图3，从图中可见两肺炎症，符合新型冠状病毒肺炎。给予常规治疗+注射用母牛分枝杆菌雾化吸入调节免疫。经治疗后症状好转， 2020-02-24胸部CT提示病灶明显吸收，新型冠状病毒核酸检测：未检出，好转出院，治疗后的 CT图见附图4。

（2）普通型患者B，男，49岁，经确诊为新型冠状病毒肺炎，为干预组病例，治疗前，2020-02-08胸部CT平扫(常规)，CT图见附图5，从图中可见两肺炎症，符合新型冠状病毒肺炎。给予常规治疗+注射用母牛分枝杆菌雾化吸入调节免疫。经治疗后症状好转， 2020-02-23胸部CT提示病灶明显吸收，新型冠状病毒核酸检测：未检出，好转出院，治疗后的 CT图见附图6。

1.4 讨论

分枝杆菌制剂（如卡介苗、灭活草分枝杆菌、注射用母牛分枝杆菌等）能提升干扰素水平。分枝杆菌制剂是多功能免疫调节剂，可以用于防治感染，主要通过影响免疫应答反应而调节机体免疫功能，增强Th细胞活性，刺激B细胞进入增殖、分化阶段，最终促进特异性抗体形成。我们的前期系列研究亦证实并首创雾化吸入灭活分枝杆菌能调节Th1/Th2平衡，可使轻、中度支气管哮喘患者气道反应性明显降低，哮喘症状缓解，并证实其主要机理是快速上调呼吸道粘膜——肺组织干扰素水平，纠正了Th1/Th2失衡。同时还发现呼吸道吸入免疫与皮内、皮下注射免疫的免疫反应性具有显著差别，特别是时效性以及局部免疫反应强度方面，表现为免疫反应既快又强的特点，而且，在500多例的临床应用中未发现明显不良反应。（系列研究成果先后获得广西科技进步二等奖和一等奖）。基于这些前期系列研究，再结合病毒感染与哮喘免疫的同类性（均为Th2优势应答）以及呼吸道病毒感染诱发哮喘的临床现象，我们推测：（1）雾化吸入灭活分枝杆菌能够非特异性防治呼吸道病毒感染。（2）雾化吸入灭活分枝杆菌可能通过调控DC先天免疫增加I型IFN、III型IFN表达，非特异性防治呼吸道病毒感染。（3）雾化吸入注射用母牛分枝杆菌能够防治COVID-19。

为此，我们前期进行了相关预实验，包括体外细胞实验和动物实验，结果显示：短期内预防性雾化吸入注射用母牛分枝杆菌（商品名：微卡）5 天，预防组小鼠肺内RSV 浸润明显减少、RSV mRNA 表达量也明显减少，气道炎症明显减轻，气道反应性与正常对照组无差别，同时经过雾化吸入灭活分枝杆菌干预后，小鼠（感染RSV 前）肺内IFN-α，IFN-β表达较正常组明显升高。这一结果初步证实了我们的预测，也摸索出了5天雾化吸入注射用母牛分枝杆菌调控气道免疫的方案。此次出现的新型冠状病毒（COVID-19）感染，其致病机制同样为感染肺部后，病毒清除期间疾病的严重程度会增加，这表明宿主的气道免疫反应既具有保护性又具有致病性。同时病毒表面相关蛋白能够抑制气道抗病毒免疫发挥效应，比如N蛋白能够抑制抗病毒效应因子IFN-γ。由此，我们推测雾化吸入注射用母牛分枝杆菌能够调节气道免疫，增加内源性IFN-γ，从而治疗COVID-19。至此，系列前期研究为此的针对COVID-19的临床试验提供了扎实的临床前期，并制定了前述的治疗方案，通过雾化吸入注射用母牛分枝杆菌治疗COVID-19患者，观察该方案对COVID-19患者群体、器官、组织水平上的相关指标变化，以评价其有效性及安全性（已在WHO中国临床试验注册中心成功注册，注册号为：ChiCTR2000030016），为临床防治呼吸道病毒感染提供新途径和新方案。

初步结果表明，干预组所有患者均在数天内全部转阴（常规治疗组仍有1例已1个月尚未转阴）、且转阴时间较常规治疗组明显缩短，无1例转为重症或死亡，该医院近期的出院病例则明显增加，治愈出院率很快超过了60%（见25日的广西动态疫情报告），也未发现与药物有关的不良反应；并且，由于该方案所系设备、材料、技术十分简单，可在任何医疗机构开展，体现了简单、价廉、容易推广、适合基层疫情防控的特点。正如前所述，吸入微卡主要是通过快速（3-5天）提升呼吸道—肺组织内源性干扰素水平而抑制病毒RNA复制，减少细胞损伤或促进受损细胞修复而起到预防、治疗作用，此外，雾化吸入生理盐水本身可能起到清洗、稀释咽部病毒、稀释呼吸道痰液促进排痰作用而促使核酸检测阴性。同时由于是提升内源性干扰素水平，避免或减少了外源性干扰素制剂难以避免的不良反应。遗憾的是，由于患者标本采集、运输、储存以及相关实验的严格控制，未能开展相应的基础研究。而且，由于是独立医院进行的样本量偏少的临床试验，还需扩大样本量以及多中心的临床循证试验。

结论:本次临床试验初步验证了我们的科学假说，雾化吸入注射用母牛分枝杆菌（微卡）治疗COVID-19有较好的临床效果，结合硫酸沙丁胺醇使用治疗效果更佳，有利于目前的COVID-19防控，值得进一步临床推广应用，“注射用母牛分枝杆菌”可望成为针对COVID-15甚至其它呼吸道病毒感染兼具预防和治疗作用的疫苗。

Claims

1.注射用母牛分枝杆菌和硫酸沙丁胺醇在制备防治COVID-19的气雾剂中的用途，其中注射用母牛分枝杆菌：硫酸沙丁胺醇的重量比为1:50-200。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述气雾剂的制备方法是：将注射用母牛分枝杆菌配成4.0-5.5μg/ml的生理盐水注射液，硫酸沙丁胺醇配成0.5mg/ml的生理盐水溶液，混合后制成气雾剂。