CN112374927A - 有机肥的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种有机肥的制备方法，包括：将有机废弃物与微生物复合发酵菌剂均匀混合并堆积形成混合料堆，对所述混合料堆进行免翻堆发酵处理制备有机肥，其中，所述微生物复合发酵菌剂的有效活菌数含量≥5×108 cfu/mL，且包括液体兼氧芽孢杆菌和液体高温固氮菌，所述液体兼氧芽孢杆菌和所述液体高温固氮菌的适应温度均包括30℃～55℃。本发明提供的上述有机肥的制备方法具有发酵期间无需翻堆、分解效果好、减少氮素挥发、保肥性强、腐熟时间短、环保、杀菌杀虫、除草等作用。

Description

有机肥的制备方法
技术领域
本发明属于肥料领域，具体涉及一种有机肥的制备方法。
背景技术
有机肥主要以有机废弃物为原料，并与土壤亲和，容易吸收，效果良好，而且对土壤性质的影响相对较小，所以有机肥的研究和使用是农业发展的一个趋势。目前有机肥主要通过对有机废弃物进行厌氧发酵或好氧发酵的方式制备。现有的厌氧发酵中有机质分解缓慢，有机肥生产效率低，一般需要数月，且厌氧发酵所需设备要求高、投资大。现有的好氧发酵有机物分解效率高，堆肥周期短，但发酵过程需要持续供氧，运行成本高。
为此，绵阳市国本农业科技有限公司于2017年7月3日申请的、申请号为CN2017105335274的中国发明专利申请中公开了一种兼氧发酵菌剂用于制造有机肥的方法。其中，所述兼氧发酵菌剂利用兼氧发酵菌群制备而成，所述兼氧发酵菌群包括以下组分：乳酸菌、嗜酸乳酸杆菌、枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、凝结芽孢杆菌、米曲霉、巨大芽孢杆菌、侧孢芽孢杆菌、苏云金芽孢杆菌、粪链球菌、光合菌、酵母菌和淡紫拟青霉菌、固氮菌、放线菌。所述兼氧发酵菌剂在用于制造有机肥的过程中，需要将混匀后的堆肥物料进行堆肥发酵，定期翻抛，待发酵槽内无粪便臭味、含水率降低至30％及以下即完成堆肥物料的兼氧发酵；其中，所述堆肥物料在发酵槽内发酵的总时间为20～30天，且翻抛频率为每隔50～72小时翻抛一次。
上述发明专利申请中公开有机肥的制备方法虽然是兼氧发酵，且能够高效转化有机质并抑制有害菌生长。但是有机肥在发酵制备过程中，仍需要翻堆多次用于增加物料中氧气含量，促进发酵进程，使得发酵成本增加；同时由于发酵高温阶段解氨菌大量繁殖，氮素挥发损失较大。
发明内容
有鉴于此，确有必要提供一种有机肥的制备方法，以解决上述问题。
本发明提供一种有机肥的制备方法，包括：将有机废弃物与微生物复合发酵菌剂均匀混合并堆积形成混合料堆，对所述混合料堆进行免翻堆发酵处理制备有机肥，其中，所述微生物复合发酵菌剂的有效活菌数含量≥5×108cfu/mL，且包括液体兼氧芽孢杆菌和液体高温固氮菌，所述液体兼氧芽孢杆菌和所述液体高温固氮菌的适应温度均包括30℃～55℃。
其中，所述微生物复合发酵菌剂为棕黄色酸香味液体，其中的兼氧芽孢杆菌和高温固氮菌都属于兼氧发酵菌，而且适应温度为30℃～55℃的温度，所述兼氧芽孢杆菌和高温固氮菌既能在所述混合料堆的发酵中温阶段生长，又能在所述混合料堆的发酵高温阶段生长，完全适应有机废弃物发酵过程中的温度变化，保障有机废弃物的免翻堆发酵进程的有效进行。
基于上述，所述液体兼氧芽孢杆菌中的兼氧芽孢杆菌菌株来源于淤泥，其筛选方法包括：(1)将淤泥自然风干并加入无菌水中静置；(2)进行75℃～90℃水浴处理，并冷却获得淤泥混合物；(3)所述淤泥混合物进行摇床培养处理，形成兼氧芽孢杆菌原菌液；(4)采用梯度稀释法对所述兼氧芽孢杆菌原菌液进行肉汤平板培养，在第一平板上获得兼氧芽孢杆菌一代菌落；5)挑取所述第一平板中所述兼氧芽孢杆菌一代菌落比较大的菌种进行液体三角瓶培养，并从浑浊度较强的三角瓶中选取兼氧芽孢杆菌单菌株；6)对所述兼氧芽孢杆菌单菌株进行温度适宜范围验证试验，从中选取温度适应范围为30℃～55℃的菌株为最终的目标兼氧芽孢杆菌菌株。
基于上述，所述液体高温固氮菌中的高温固氮菌菌株来源于花生地的土壤，其筛选方法包括：(1)将花生地的土壤自然风干并加入无菌水中静置，然后进行摇床处理，并二次静置获得上清菌液；(2)对所述上清菌液接入无氮液体培养基中，先在45℃～50℃进行培养，再降温至42℃～38℃进行培养，获得高温固氮菌原菌液；(3)采用梯度稀释法对所述高温固氮菌原菌液进行无氮培养基固体平板培养，在第二平板上获得高温固氮菌一代菌落；(4)挑取所述第二平板中所述高温固氮菌一代菌落比较大的菌种进行无氮斜面培养基培养，得到高温固氮菌单菌株；(5)对所述高温固氮菌单菌株进行温度适宜范围验证试验，从中选取温度适应范围为30℃～55℃的菌株为最终的目标高温固氮菌菌株。
基于上述，所述液体兼氧芽孢杆菌和所述液体高温固氮菌的体积比为7:3～9:1，且所述液体兼氧芽孢杆菌的浓度为5.5×108cfu/mL～1.0×109cfu/mL，所述液体高温固氮菌的浓度为0.5×108cfu/mL～1.0×108cfu/mL。
基于上述，所述液体兼氧芽孢杆菌和所述液体高温固氮菌的体积比为3:1～9:1，例如，3:1、4:1、5:1、17:3、6:1、7:1、8:1、9:1等。
基于上述，所述微生物复合发酵菌剂还包括菌株活性保护剂，该菌株活性保护剂占所述两元微生物复合发酵菌剂总质量的10％～15％。
基于上述，所述菌株活性保护剂包括质量分数为80％的糖蜜和质量分数为40％的氨基酸，其中，所述糖蜜与氨基酸的质量比为13:7～9:1。具体地，所述糖蜜与氨基酸的质量比可以为13:7、7:3、3:1、4:1、17:3、8:1或9:1等。
其中，所述菌株活性保护剂为兼氧芽孢杆菌和高温固氮菌生长提供养分，糖蜜和氨基酸分别为微生物复合发酵菌的生长提供碳源和氮源，主要作为微生物复合发酵菌的速效养分，能够避免所述微生物复合发酵菌的活性迅速下降，延长所述微生物复合发酵菌剂的保质期和货架期，解决了因液体菌剂的特点，菌种活性下降快，保质期短等问题。
基于上述，形成所述混合料堆的步骤包括：先将所述有机废弃物与所述微生物复合发酵菌剂按照质量比1:7000～11000的比例均匀混合，然后堆积形成所述混合料堆，其中，所述有机废弃物的含水率为55％～70％。
基于上述，所述混合料堆免翻堆发酵12～20天，制得所述有机肥。
基于上述，所述有机废弃物为动物粪便、农作物秸秆、农作物下脚料或污泥中的一种或几种的组合物。
其中，所述动物粪便包括厩肥，具体地，可以为鸡粪便、猪粪便、牛粪便、羊粪便、马粪便、鸡厩肥、猪厩肥、牛厩肥、羊厩肥、马厩肥等动物粪便中的一种或几种的组合。所述农作物秸秆为玉米秸秆、小麦秸秆、稻壳等植物废料。所述农作物下脚料包括油枯、蘑菇渣、香菇渣、平菇渣、锯末等。优选地，所述有机废弃物为鸡粪便、猪粪便、牛粪便、羊粪便、马粪便、鸡厩肥、猪厩肥、牛厩肥、羊厩肥、马厩肥、农作物秸秆、农作物下脚料或淤泥中的至少两种的组合物。
本发明提供的有机肥的制备方法主要是利用微生物复合发酵菌剂对所述有机废弃物进行免翻堆发酵处理，在有机废弃物免翻堆发酵过程中，有机废弃物的混合料堆快速起温，并使温度升至所述兼氧芽孢杆菌和高温固氮菌适合生长的范围，所述混合料堆在所述兼氧芽孢杆菌和所述高温固氮菌的作用下分解，形成易于植物吸收的养分，尤其是可以形成符合NY525-2012标准的有机肥；同时在发酵高温阶段的解氨菌的作用下形成的氮化物不易挥发至周围环境中，有效减少氮素挥发损失，而且所含兼氧芽孢杆菌等有益微生物有解磷、解钾、固氮功效。
另外，本发明提供的有机肥的制备方法，在有机废弃物发酵过程中免翻堆，起温快，2～3天就可以消除所述有机废弃物料堆的臭味，没有大批量苍蝇、小飞虫出现；而且发酵高温阶段时间长，可以杀灭病菌、虫卵、杂草种子；甚至因发酵高温分解农药或兽药残留，其中的微生物将其转换成其他的无毒成分。
因此，本发明提供的有机肥的制备方法具有发酵期间无需翻堆、分解效果好、减少氮素挥发、保肥性强、腐熟时间短、环保、杀菌杀虫、除草等作用。
附图说明
图1是本发明实施例中采用的兼氧芽孢杆菌菌落图。
图2是本发明实施例中采用的兼氧芽孢杆菌菌株的显微镜照片图。
图3是本发明实施例中采用的高温固氮菌菌落图。
具体实施方式
下面通过具体实施方式，对本发明的技术方案做进一步的详细描述。
本发明提供一种有机肥的制备方法，该方法主要是利用微生物复合发酵菌剂对所述有机废弃物进行免翻堆发酵处理制备有机肥。其中，所述微生物复合发酵菌剂的有效活菌数含量≥5×108cfu/mL的液体复合发酵菌，所述液体复合发酵菌包括浓度为5.5×108cfu/mL～1.0×109cfu/mL的液体兼氧芽孢杆菌和浓度为0.5×108cfu/mL～1.0×108cfu/mL的液体高温固氮菌，且所述液体兼氧芽孢杆菌和所述液体高温固氮菌的体积比为7:3～9:1。
其中，本发明以下各实施例或试验中采用的液体兼氧芽孢杆菌的菌株和液体高温固氮菌的来源、筛选及培养条件分别如下。其中，以下各试验或实施例中用于筛选或培养兼氧芽孢杆菌的培养基为常用的肉汤培养基，用于筛选或培养高温固氮菌的无氮培养基为市售的阿什比无氮培养基(Ashby nitrogen-free medium)。
1、液体兼氧芽孢杆菌
1.1来源鹤壁市泰山路护城河挖取的淤泥
1.2筛选目标兼氧芽孢杆菌菌株
1)将从鹤壁市泰山路护城河挖取的淤泥进行自然风干处理，称取其中10g到100ml无菌水中，静置30min后，放入80℃水浴锅中处理60min，取出冷却30min获得淤泥混合物；
2)将所述获得淤泥混合物放置于摇床中37℃，200rpm培养24h，形成兼氧芽孢杆菌原菌液；
3)采用梯度稀释法将10-3、10-4、10-5三个梯度的1ml所述兼氧芽孢杆菌原菌液倾注到常用的肉汤平板中，每个梯度3个平板；将接种有所述兼氧芽孢杆菌原菌液的肉汤平板置于37℃培养箱中培养36h，获得兼氧芽孢杆菌一代菌落，该菌落形态如图1所示；
4)挑取所述肉汤平板中兼氧芽孢杆菌一代菌落比较大的菌种，进行液体三角瓶培养，三角瓶采用针头抽出空气，密封，静置培养，从其中浑浊度较强的三角瓶中选取目标单菌株；
5)对所述目标单菌株进行涂片、制片、染色显微镜观察，如图2所示，确定为兼氧芽孢杆菌；
6)验证兼氧芽孢杆菌单菌株的温度适应范围，将兼氧芽孢杆菌单菌株平板分别置于30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃培养箱中进行培养，进一步选取温度适应范围为30℃～55℃的菌株作为最终的目标兼氧芽孢杆菌菌株。
1.3兼氧芽孢杆菌菌株培养方法
兼氧芽孢杆菌菌株参照枯草芽孢杆菌的扩培培养方法进行扩培培养。具体地，本实施例中，将所述目标兼氧芽孢杆菌菌株接种至肉汤培养基中在55℃培养56h，获得浓度为8.5×108～10×108cfu/mL的液体兼氧芽孢杆菌。
2、高温固氮菌菌株
2.1来源：鹤壁市石林镇花生地10～20cm土壤
2.2筛选目标高温固氮菌菌株
1)将从鹤壁市石林镇花生地挖取的10～20cm厚的土壤进行自然风干处理，称取其中10g到100ml无菌水中，静置30min后，放置于摇床中37℃、200rpm、1h，取出静置30min，得到分层的混合物；
2)从所述分层的混合物中取10ml上清菌液，并接入到灭菌的无氮培养基中，45℃培养12h，降温至40℃培养48h，获得高温固氮菌原菌液；
3)采用梯度稀释法将10-3、10-4、10-5三个梯度的0.1ml的所述高温固氮菌原菌液涂布到无氮培养基固体平板中，每个梯度3个平板；并于42℃培养箱中培养36h在平板上获得高温固氮菌一代菌落，该菌落形态如图3所示；
4)挑取上述平板中所述高温固氮菌一代菌落比较大的菌种，转接到无氮斜面培养基培养，得到高温固氮菌单菌株；
5)验证所述高温固氮菌单菌株的温度适应范围，将所述高温固氮菌单菌株平板分别置于30℃、35℃、40℃、45℃、50℃、55℃培养箱中进行培养，进一步选取温度适应范围30℃～55℃的菌株作为最终的目标高温固氮菌菌株。
2.3高温固氮菌菌株培养方法
将所述目标高温固氮菌菌株接种至无氮培养基中，在42℃培养56h，获得浓度为0.5×108～1.0×108cfu/mL的液体高温固氮菌。
实施例1
本发明实施例提供一种有机肥的制备方法，该制备方法包括：用污泥和稻壳按照3:1比例复配后进行水分调节，按照质量百分比65％水分进行调节配比获得有机废弃物混合料；按照微生物复合发酵菌剂和所述有机废弃物混合料的质量比1:10000的比例向所述有机废弃物混合料中加入所述微生物复合发酵菌剂，采用翻抛设备充分混匀后堆积，形成混合料堆；该混合料堆不翻堆发酵15天即制备得到实施例1有机肥。其中，所述微生物复合发酵菌剂的有效活菌数含量为5.0×108cfu/mL，主要由浓度为5.5×108cfu/mL的液体兼氧芽孢杆菌和浓度为0.5×108cfu/mL的液体高温固氮菌按照体积比9:1均匀混合而成。
对比例1
本对比例1提供一种有机肥的制备方法，该制备方法与实施例1提供的有机肥的制备方法基本相同，主要不同之处在于：对比例1采用人元促腐剂替换实施例1采用的微生物复合发酵菌剂，且本对比例的发酵试验按照正常发酵工艺翻堆发酵，制得对比例1有机肥。其中，各对比例中的“人元促腐剂”是指鹤壁市人元生物技术发展有限公司市场销售的促腐剂。
测试方法：实施例1和对比例1提供的有机肥的制备方法各重复3次，并按照标准NY525-2012对制备的实施例1有机肥和对比例1有机肥进行养分测定，测定结果见表1。
表1 实施例1和对比例1制备的有机肥养分表
Figure BDA0002783311780000081
从表1中可以看出：本发明实施例1提供的有机肥的制备方法采用微生物复合发酵菌剂及不翻堆工艺发酵制备的有机肥，与对比例1提供的利用人元促腐剂及翻堆工艺制备的有机肥相比，氮素含量高0.72个百分点，pH值低1.13，可以实现固氮和降低pH的作用。
实施例2
本发明实施例提供一种有机肥的制备方法，该制备方法包括：用猪粪和锯末按照3:1比例复配后进行水分调节，按照质量百分比60％水分进行调节配比获得有机废弃物混合料；按照微生物复合发酵菌剂和所述有机废弃物混合料的质量比1:10000的比例向所述有机废弃物混合料中加入所述微生物复合发酵菌剂，采用翻抛设备充分混匀后堆积，形成混合料堆；该混合料堆不翻堆发酵18天即制备得到实施例2有机肥。其中，所述微生物复合发酵菌剂的有效活菌数含量为5.9×108cfu/mL，主要由浓度为6.5×108cfu/mL的液体兼氧芽孢杆菌和浓度为0.5×108cfu/mL的液体高温固氮菌按照体积比8:1均匀混合而成。
对比例2
本对比例2提供一种有机肥的制备方法，该制备方法与实施例2提供的有机肥的制备方法基本相同，主要不同之处在于：对比例2采用人元促腐剂替换实施例2采用的微生物复合发酵菌剂，且本对比例的发酵试验按照正常发酵工艺翻堆发酵，制得对比例2有机肥。
测试方法：实施例2和对比例2提供的有机肥的制备方法各重复3次，并按照标准NY525-2012对制备的实施例2有机肥和对比例2有机肥进行养分测定，测定结果见表2。
表2 实施例2和对比例2制备的有机肥养分表
Figure BDA0002783311780000091
从表2中可以看出：本发明实施例2提供的有机肥的制备方法采用微生物复合发酵菌剂及不翻堆工艺发酵制备的有机肥，与对比例2提供的利用人元促腐剂及翻堆工艺制备的有机肥相比，氮素含量高0.65个百分点，pH值低1.10，可以实现固氮和降低pH的作用。
实施例3
本发明实施例提供一种有机肥的制备方法，该制备方法包括：用羊粪和蘑菇渣按照3:1比例复配后进行水分调节，按照质量百分比56％水分进行调节配比获得有机废弃物混合料；按照微生物复合发酵菌剂和所述有机废弃物混合料的质量比1:11000的比例向所述有机废弃物混合料中加入所述微生物复合发酵菌剂，采用翻抛设备充分混匀后堆积，形成混合料堆；该混合料堆不翻堆发酵12天即制备得到实施例3有机肥。其中，所述微生物复合发酵菌剂的有效活菌数含量为7.25×108cfu/mL，主要由浓度为8.0×108cfu/mL的液体兼氧芽孢杆菌和浓度为0.5×108cfu/mL的液体高温固氮菌按照体积比17:3均匀混合而成。
对比例3
本对比例3提供一种有机肥的制备方法，该制备方法与实施例3提供的有机肥的制备方法基本相同，主要不同之处在于：对比例3采用人元促腐剂替换实施例3采用的微生物复合发酵菌剂，且本对比例的发酵试验按照正常发酵工艺翻堆发酵，制得对比例3有机肥。
测试方法：实施例3和对比例3提供的有机肥的制备方法各重复3次，并按照标准NY525-2012对制备的实施例3有机肥和对比例3有机肥进行养分测定，测定结果见表3。
表3 实施例3和对比例3制备的有机肥养分表
Figure BDA0002783311780000101
从表3中可以看出：本发明实施例3提供的有机肥的制备方法采用微生物复合发酵菌剂及不翻堆工艺发酵制备的有机肥，与对比例3提供的利用人元促腐剂及翻堆工艺制备的有机肥相比，氮素含量高0.72个百分点，pH值低1.08，可以实现固氮和降低pH的作用。
实施例4
本发明实施例提供一种有机肥的制备方法，该制备方法包括：用油枯和玉米秸秆按照3:1比例复配后进行水分调节，按照质量百分比70％水分进行调节配比获得有机废弃物混合料；按照微生物复合发酵菌剂和所述有机废弃物混合料的质量比1:7000的比例向所述有机废弃物混合料中加入所述微生物复合发酵菌剂，采用翻抛设备充分混匀后堆积，形成混合料堆；该混合料堆不翻堆发酵20天即制备得到实施例4有机肥。其中，所述微生物复合发酵菌剂的有效活菌数含量为7.75×108cfu/mL，主要由浓度为8.5×108cfu/mL的液体兼氧芽孢杆菌和浓度为1.0×108cfu/mL的液体高温固氮菌按照体积比3:1均匀混合而成。
对比例4
本对比例4提供一种有机肥的制备方法，该制备方法与实施例4提供的有机肥的制备方法基本相同，主要不同之处在于：对比例4采用人元促腐剂替换实施例4采用的微生物复合发酵菌剂，且本对比例的发酵试验按照正常发酵工艺翻堆发酵，制得对比例4有机肥。
测试方法：实施例4和对比例4提供的有机肥的制备方法各重复3次，并按照标准NY525-2012对制备的实施例4有机肥和对比例4有机肥进行养分测定，测定结果见表4。
表4 实施例4和对比例4制备的有机肥养分表
Figure BDA0002783311780000121
从表4中可以看出：本发明实施例4提供的有机肥的制备方法采用微生物复合发酵菌剂及不翻堆工艺发酵制备的有机肥，与对比例4提供的利用人元促腐剂及翻堆工艺制备的有机肥相比，氮素含量高0.78个百分点，pH值低1.39，可以实现固氮和降低pH的作用。
实施例5
本发明实施例提供一种有机肥的制备方法，该制备方法包括：用牛粪和鸡粪按照质量比1:1比例复配后，添加干蘑菇渣进行水分调节，按照质量百分比65％水分进行调节配比获得有机废弃物混合料；按照微生物复合发酵菌剂和所述有机废弃物混合料的质量比1:10000的比例向所述有机废弃物混合料中加入所述微生物复合发酵菌剂，采用翻抛设备充分混匀后堆积，形成混合料堆；该混合料堆不翻堆发酵15天即制备得到实施例5有机肥。其中，所述微生物复合发酵菌剂的有效活菌数含量为6.85×108cfu/mL，以质量百分数计，所述微生物复合发酵菌剂由浓度为9.0×108cfu/mL的液体兼氧芽孢杆菌75％、浓度为1.0×108cfu/mL的液体高温固氮菌10％和菌株活性保护剂15％组成。其中，以质量百分数计，所述菌株活性保护剂由质量分数为80％的糖蜜90％和质量分数为40％的氨基酸10％组成。
对比例5
本对比例5提供一种有机肥的制备方法，该制备方法与实施例5提供的有机肥的制备方法基本相同，主要不同之处在于：对比例5采用人元促腐剂替换实施例5采用的微生物复合发酵菌剂，且本对比例的发酵试验按照正常发酵工艺翻堆发酵，制得对比例5有机肥。
测试方法：实施例5和对比例5提供的有机肥的制备方法各重复3次，并按照标准NY525-2012对制备的实施例5有机肥和对比例5有机肥进行养分测定，测定结果见表5。
表5 实施例5和对比例5制备的有机肥养分表
Figure BDA0002783311780000131
从表5中可以看出：本发明实施例5提供的有机肥的制备方法采用微生物复合发酵菌剂及不翻堆工艺发酵制备的有机肥，与对比例5提供的利用人元促腐剂及翻堆工艺制备的有机肥相比，氮素含量高0.76个百分点，pH值低1.43，可以实现固氮和降低pH的作用。
最后应当说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对其限制；尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细的说明，所属领域的普通技术人员应当理解：依然可以对本发明的具体实施方式进行修改或者对部分技术特征进行等同替换；而不脱离本发明技术方案的精神，其均应涵盖在本发明请求保护的技术方案范围当中。

Claims (10)

1. 一种有机肥的制备方法，包括：将有机废弃物与微生物复合发酵菌剂均匀混合并堆积形成混合料堆，对所述混合料堆进行免翻堆发酵处理制备有机肥，其中，所述微生物复合发酵菌剂的有效活菌数含量≥5×108 cfu/mL，且包括液体兼氧芽孢杆菌和液体高温固氮菌，所述液体兼氧芽孢杆菌和所述液体高温固氮菌的适应温度均包括30℃～55℃。
2.根据权利要求1所述的有机肥的制备方法，其特征在于，所述液体兼氧芽孢杆菌中的兼氧芽孢杆菌菌株来源于淤泥，其筛选方法包括：（1）将淤泥自然风干并加入无菌水中静置；（2）进行75℃～90℃水浴处理，并冷却获得淤泥混合物；（3）所述淤泥混合物进行摇床培养处理，形成兼氧芽孢杆菌原菌液；（4）采用梯度稀释法对所述兼氧芽孢杆菌原菌液进行肉汤平板培养，在第一平板上获得兼氧芽孢杆菌一代菌落；5）挑取所述第一平板中所述兼氧芽孢杆菌一代菌落比较大的菌种进行液体三角瓶培养，并从浑浊度较强的三角瓶中选取兼氧芽孢杆菌单菌株；6）对所述兼氧芽孢杆菌单菌株进行温度适宜范围验证试验，从中选取温度适应范围为30℃～55℃的菌株为最终的目标兼氧芽孢杆菌菌株。
3.根据权利要求1或2所述的有机肥的制备方法，其特征在于，所述液体高温固氮菌中的高温固氮菌菌株来源于花生地的土壤，其筛选方法包括：（1）将花生地的土壤自然风干并加入无菌水中静置，然后进行摇床处理，并二次静置获得上清菌液；（2）对所述上清菌液接入无氮液体培养基中，先在45℃～50℃进行培养，再降温至42℃～38℃进行培养，获得高温固氮菌原菌液；（3）采用梯度稀释法对所述高温固氮菌原菌液进行无氮培养基固体平板培养，在第二平板上获得高温固氮菌一代菌落；（4）挑取所述第二平板中所述高温固氮菌一代菌落比较大的菌种进行无氮斜面培养基培养，得到高温固氮菌单菌株；（5）对所述高温固氮菌单菌株进行温度适宜范围验证试验，从中选取温度适应范围为30℃～55℃的菌株为最终的目标高温固氮菌菌株。
4. 根据权利要求3所述的有机肥的制备方法，其特征在于，所述液体兼氧芽孢杆菌和所述液体高温固氮菌的体积比为7:3 ～ 9:1，且所述液体兼氧芽孢杆菌的浓度为5.5×108cfu/mL～1.0×109 cfu/m，所述液体高温固氮菌的浓度为0.5×108 cfu/mL～1.0×108cfu/mL。
5. 根据权利要求4所述的有机肥的制备方法，其特征在于，所述液体兼氧芽孢杆菌和所述液体高温固氮菌的体积比为3:1 ～ 9:1。
6.根据权利要求1或4所述的有机肥的制备方法，其特征在于，所述微生物复合发酵菌剂还包括菌株活性保护剂，该菌株活性保护剂占所述两元微生物复合发酵菌剂总质量的10%～15%。
7. 根据权利要求6所述的有机肥的制备方法，其特征在于，所述菌株活性保护剂包括质量分数为80%～100%的糖蜜和质量分数为40%～60%的氨基酸，其中，所述糖蜜与氨基酸的质量比为13:7 ～ 9:1。
8. 根据权利要求1所述的有机肥的制备方法，其特征在于，形成所述混合料堆的步骤包括：先将所述有机废弃物与所述微生物复合发酵菌剂按照质量比1 : 7000～11000的比例均匀混合，然后堆积形成所述混合料堆，其中，所述有机废弃物的含水率为55%～70%。
9.根据权利要求8所述的有机肥的制备方法，其特征在于，所述混合料堆免翻堆发酵12～20天，制得所述有机肥。
10.根据权利要求1所述的有机肥的制备方法，其特征在于，所述有机废弃物为动物粪便、农作物秸秆、农作物下脚料或污泥中的一种或几种的组合物。
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