CN112353794B - 一种治疗脑梗死疾病的药物组合物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种药物组合及其应用，所述药物组合包含山奈酚和木犀草素，以及任选地药学上可接受的载体；本发明同时公开了所述药物组合在制备治疗心脑血管疾病特别是缺血性脑卒中的工具中的应用。

Description

一种治疗脑梗死疾病的药物组合物及其应用

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种药物组合及其应用。

背景技术

脑梗死(cerebral ischemic stroke)，又称缺血性脑卒中，是世界范围内最常见的高死亡率和致残性疾病，其后遗症的高发生率，已经严重影响病人生活质量，并造成巨大家庭和社会负担。脑梗死疾病涉及众多病理环节，其中大部分包括血栓形成、血管损伤、血脑屏障破坏、神经细胞缺氧性损伤、神经组织炎症反应等多个环节和组织，这些机制和环节相互交叉，相互影响，形成了复杂的病理过程。

抗脑缺血现代药物的研发已经经历了数十年的努力，但目前除溶栓药物在临床上表现出可以定量评价的有效性之外，其他药物均未能降低脑缺血后神经元损伤，神经功能缺损和死亡率，有待进一步的研究和观察。鉴于脑梗死病理过程的复杂性，研发治疗药物必然需要应对复杂的病理过程。中药多层次、多靶点、多途径的特点对治疗脑梗死具有独特优势。

丹参(Salvia miltiorrhiza Bunge)，具有祛淤止痛、活血通经、清心除烦之功效，是一种安全、可靠的治疗血管疾病的天然中药。黄芪(Radix Astragali)，具有补气固表、利水退肿、托毒排脓、生肌等功效。栀子(Gardenia jasminoides Ellis)具有泻火除烦，清热利湿，凉血解毒，外用消肿止痛等作用。我们前期通过研究证实丹参-黄芪-栀子联用可改善脑梗死后脑血流，改善脑梗死后神经功能评分，进一步通过网络药理学分析丹参-黄芪-栀子药对发现其有效成分山奈酚(Kaempferol)和木樨草素(Luteolin)的药物组合具有较好的对抗脑梗死后继发性脑损伤靶点作用。

山奈酚成分来源于中药黄芪、栀子，可作用于脑梗死后补体和凝血级联反应通路(Complement and coagulation cascades)和MAPK信号通路(MAPK signaling pathway)。木樨草素是丹参的有效成分之一，可作用于MAPK信号通路、趋化因子信号通路(Chemokinesignaling pathway)和白细胞经内皮迁移(Leukocyte transendothelial migration)。

目前尚无山奈酚和木樨草素联用这样的治疗方式和治疗药物。现有技术还没有关于山奈酚和木樨草素联合应用的报道，尤其没有二者联合应用于预防和治疗脑梗死损伤。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种具有协同效果的联用药物组合物。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括单体化合物山奈酚和木犀草素。

进一步，山奈酚包括山奈酚、山奈酚衍生物。

进一步，木犀草素包括木犀草素、木犀草素衍生物。

进一步，所述药物组合物中两种单体化合物以联合治疗有效量提供。

进一步，山奈酚与木犀草素的浓度比为5:1～1:4。

进一步，所述药物组合物中两种单体化合物以协同有效量提供。

进一步，所述两种单体化合物山奈酚与木犀草素的浓度比为5:1。

进一步，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体。

进一步，所述药物组合物剂型包括液体剂型、半固体剂型、固体剂型、气雾剂型。

本发明的第二方面提供了一种产品，所述产品包括本发明第一方面所述的药物组合物，和/或产品说明书。

进一步，所述产品还包括使用药物组合物的辅助用工具。

本发明的第三方面提供了本发明第一方面所述的药物组合物、第二方面所述的产品在制备治疗心脑血管疾病工具中的应用。

进一步，所述心脑血管疾病为脑卒中。

进一步，所述脑卒中为缺血性脑卒中。

附图说明

图1是山奈酚与木犀草素联合对脑梗死的治疗效果图。

具体实施方式

如本文所用的术语“组合”或“药物组合”，是指一种单位剂型(例如，胶囊、片剂或小袋)的固定组合，非固定组合或用于组合施用的一套组分，其中山奈酚或其衍生物、和木犀草素或其衍生物可以同时施用、在相同的时间独立施用，或在允许这些组合配偶体显示协作(例如，协同效应、或累加效应)的时间间隔内分开施用。

术语“固定组合”意指如本文所限定的活性成分(即山奈酚)和如本文所限定的一种或多种组合配偶体(即木犀草素)以单一实体或单位剂型的形式同时施用于患者。术语“非固定组合”意指如本文所限定的活性成分(即山奈酚)和如本文所限定的一种或多种组合配偶体(即木犀草素)作为单独的实体同时或无特定时间限制而相继地施用于患者，其中这种施用在患者体内提供治疗有效水平的这两种化合物。这适用于两种活性成分的组合，也适用于鸡尾酒疗法，例如施用三种或更多种活性成分。

术语“药物制剂”在本文中被限定为特别地指“一套组分”，意思是组合配偶体(即如本文所述的山奈酚和木犀草素)可以独立给药，或通过同时或在不同的时间点使用具有显著量的组合配偶体(例如，山奈酚和木犀草素)的不同固定组合来给药。然后可以例如同时施用或按时间顺序交错施用这套组分中的多个组分，所谓按时间顺序交错，即在不同的时间点并且对于这套组分中的任何组分使用相同或不同的时间间隔。在该药物制剂中要施用的一种组合配偶体的总量与另一种组合配偶体的总量的比率可以变化，例如，以便满足待治疗的患者亚群的需求或单个患者的需求。

术语“药物组合物”在本文中被限定为指含有待施用于受试者(例如，哺乳动物或人)，以便预防或治疗影响该哺乳动物或人的特定疾病或病症的至少一种活性成分或治疗剂的混合物或溶液。

术语“药物”、“活性物质”、“活性成分”、“活性剂”、“药剂”应当理解为意指游离形式或药学上可接受的盐形式的化合物，特别是本文指定的化合物。在本文中，术语山奈酚或其衍生物也称为“组合配偶体(i)”。类似地，术语木犀草素或衍生物也称为“组合配偶体(ii)”。

如本文所用的术语“共同施用”或“组合施用”被限定为涵盖将所选择的活性成分施用于有需要的单个受试者(例如患者)，并且旨在包括其中药剂不必通过相同的施用途径施用或同时施用的治疗方案。

如本文所用的术语“治疗”或“疗法”包括解除、减轻或缓解受试者的至少一种症状或者实现疾病进展延迟的治疗。例如，治疗可以是减弱一种或几种障碍症状或者完全根除障碍。在本发明的含义范围内，术语“治疗”还表示阻止、延迟发作(即在疾病的临床表现之前的时间段)和/或降低疾病发展或疾病恶化的风险。术语“保护”在本文中用于表示阻止、延迟或治疗，或者视情况而定既阻止、延迟又治疗受试者(例如哺乳动物或人)体内疾病的发展、持续或恶化。

如本文所用的术语“预防”，包括预防与所预防的状态、疾病或障碍相关联，或者由所预防的状态、疾病或障碍引起的至少一种症状。

如本文所用的术语“联合治疗有效量”，意指治疗剂的这样的量：在分别给予(以按时间顺序交错的方式，尤其是顺序特异性方式)温血动物(尤其是给予待治疗的人)时，显示出(累加，但优选协同)相互作用(联合治疗效应)。

治疗剂组合的术语“药学有效量”是足以提供超过用该组合治疗的障碍的基线可观察指征和症状的可观察改善的量。

如本文所用的术语“协同效应”，是指至少两种治疗剂，即如本文所限定的山奈酚和如本文所限定的木犀草素的这种效应：该效应大于把所施用的每种药物各自的效应简单相加所得的效应。该效应可以是例如减缓疾病或其症状的症状进展。可以如实例中所示计算协同效应。类似地，“协同有效量”是指获得协同效应所需要的量。

如本文所用的术语“受试者”或“患者”，包括易于患上心脑血管疾病或受心脑血管疾病折磨的动物，其中心脑血管疾病包括卒中，或者直接或间接涉及脑卒中的任何障碍。受试者的实例包括哺乳动物，例如人、狗、乳牛、马、猪、绵羊、山羊、猫、小鼠、兔、鼠和转基因非人动物。在优选的实施例中，受试者是人，例如患有心脑血管疾病、有患上心脑血管疾病的风险或潜在易于患上心脑血管疾病的人，其中心脑血管疾病包括卒中，尤其是脑卒中，如缺血性脑卒中。

本发明经过广泛而深入的研究，通过动物实验，发现山奈酚联合木犀草素对卒中具有协同和累加的治疗作用，因此可以有效的治疗心脑血管疾病，如卒中，尤其是脑卒中，如缺血性脑卒中。

除非另外指明，否则说明书和权利要求中对特定化合物的描述或命名旨在包括其各个对映体、非对映混合物、外消旋体或其他。因此，本发明还包括所有这类异构体，包括本发明化合物的非对映混合物和拆分对映体。非对映混合物可以基于其物理化学差异，通过本领域技术人员已知的方法(例如通过色谱法或分步结晶)分成其单独的非对映体。对映体可以如下分离：通过与适当的光学活性化合物(例如，醇)反应将对映体混合物转变成非对映混合物，分离这些非对映体，并将各个非对映体转变(例如，水解)成对应的纯对映体。用于测定立体化学和分离立体异构体的方法是本领域熟知的。

术语“药学上可接受的”在本文中被限定为指在合理医学判断的范围内适合用于与受试者(例如，哺乳动物或人)的组织相接触而无过度毒性、刺激过敏反应和其他问题并发症，并且与合理的益处/风险比相称的那些化合物、材料、组合物和/或剂型。

用于分开施用两种组合配偶体或用于以固定组合施用的药物组合物可以用本身已知的方式制备，并且是适合于经肠(如口服或直肠)和肠胃外施用于哺乳动物(温血动物，包括人)的那些，这些药物组合物单独包含至少一种药理学活性组合配偶体(例如，如上所指示)，或者与一种或多种药学上可接受的载体(尤其是适合于经肠或肠胃外应用的那些)组合。该药物组合物可以含有约0.1％至约99.9％、优选地约1％至约60％的一种或多种治疗剂。

用于经肠或肠胃外施用的组合疗法的合适药物组合物是例如呈单位剂型的那些，如包衣片剂、片剂、胶囊或栓剂、或者安瓿。如果未另外指明，那么这些以本身已知的方式进行制备，例如借助各种常规的混合、粉碎、直接压片、制粒、包衣、溶解、冻干方法或对本领域技术人员来说显而易见的制造技术。应当理解，包含在每种剂型的单独剂量中的组合配偶体的单位含量本身不必构成有效量，因为必需的有效量可以通过施用多个剂量单位达到，或者治疗效应只有在将这两种组合配偶体都施用于受试者之后才可以实现。

有所述药剂组合或所述药剂组合的单独药剂的口服剂型可以为封装在胶囊(例如，明胶胶囊)内部的微片剂的形式。为此，可以使用如药物制剂中所采用的明胶胶囊，如硬明胶胶囊。

本发明的单位剂型可以任选地还包含用于药物的附加的常规载体或赋形剂。此类载体的实例包括但不限于崩解剂、粘结剂、润滑剂、助流剂、稳定剂和填充剂、稀释剂、着色剂、风味剂和防腐剂。本领域普通技术人员可以根据剂型的特定所需特性来选择前述载体中的一种或多种。所使用的每种载体的量可以在本领域常规的范围之内变化。

这些任选的附加的常规载体可以掺入到口服剂型中，方式为在制粒之前或期间将一种或多种常规载体掺入到初始混合物中，或将一种或多种常规载体与包含所述药剂组合或所述药剂组合的单独药剂的口服剂型形式的胶囊混合。在后一个实施例中，该混合的混合物可以进一步共混(例如通过V-共混器)，然后压制或模塑成片剂(例如整块片剂)、用胶囊包封，或填充到小袋中。

根据本发明，本发明的组合的如本文所限定的组合配偶体(即，山奈酚和木犀草素)中的每一者的治疗有效量可以同时施用、或相继且以任何顺序施用，并且这些组合配偶体可以单独施用或作为固定组合施用。例如，根据本发明的治疗心脑血管疾病的方法可以包括以联合治疗有效量(优选地以协同有效量，例如，每日剂量或间断剂量)同时或以任何顺序相继地(1)施用游离形式或药学上可接受的盐形式的山奈酚，以及(2)施用游离形式或药学上可接受的盐形式的木犀草素。本发明的组合的如本文所限定的组合配偶体(即，山奈酚和木犀草素)可以在疗法过程期间的不同时间分别施用，或者以分开的或单一的组合形式同时施用。此外，术语“施用”因而应当理解为包括同时或交替治疗的所有此类方案，并且术语“施用”应当相应地解释。该术语还涵盖使用组合配偶体的前药，该前药在体内转变为像这样的组合配偶体。

在本发明的组合中采用的组合配偶体中的每一者的有效剂量可以根据所采用的具体化合物或药物组合物、施用方式、正在治疗的病症和正在治疗的病症的严重程度而变化。因此，根据多种因素选择本发明的组合的剂量方案，这些因素包括施用途径，以及患者的肾功和肝功。拥有普通技能的临床医生或医师都可以轻易地确定并在处方中开出缓解、对抗或阻止病症进展所需的单种治疗剂的有效量。

本发明的组合例如在缓解、延迟心脑血管疾病(如卒中，特别是脑卒中)的症状的进展，或抑制心脑血管疾病的症状方面，可以提供协同治疗效应。本发明的某些组合例如在缓解、延迟心脑血管疾病(如卒中，特别是脑卒中)的症状的进展，或抑制心脑血管疾病的症状方面，可以提供累加效应。

下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。

实施例1检测化合物山奈酚联合木犀草素对脑梗死的影响

以8-12周龄的C57BL/6小鼠为研究对象，构建小鼠局灶性皮层脑梗死(distalmiddle cerebral artery occlusion,dMCAO)模型，检测化合物山奈酚与木犀草素联用是否具有联合效应。

1、小鼠局灶性皮层脑梗死模型的构建

采用显微镜下电凝法制备小鼠右侧局灶皮层梗死模型。具体步骤如下：①小鼠称重后，用三溴乙醇(0.4g/kg)腹腔注射进行麻醉；②麻醉成功后小鼠取仰卧位固定于手术台，常规备皮、消毒，颈部正中切口约1cm，钝性分离颈部腺体组织、筋膜，暴露右侧颈三角并仔细分离右侧颈总动脉，暴露并永久性结扎右侧颈总动脉，之后缝合颈部皮肤；③小鼠取左侧卧位并固定，在右眼外眦与外耳道之间剪开约1cm皮肤切口，暴露颞肌；④在显微镜下小心分离颞肌暴露颅骨，颅骨下隐约可见右侧大脑中动脉皮层分支；⑤用牙科钻小心在颅骨上钻开一直径约2mm的小洞，暴露出右侧大脑中动脉皮层分支；⑥用凝血器烧灼大脑中动脉皮层分支，注意尽量勿损伤周围脑组织；⑦在显微镜下观察几秒钟，若烧灼动脉分支无复流则复位肌肉组织，缝皮，维持室温约37℃待苏醒。

Sham模型：制作步骤同上，但只分离右侧颈总动脉不结扎，只暴露颅骨并钻孔，但并不烧灼相应动脉。

2、实验方案

以8-12周龄的C57BL/6小鼠为研究对象，构建小鼠局灶性皮层脑梗死模型。分为Sham组、dMCAO组、给药组，每组6只小鼠，连续给药3天，给药方式及给药动物分组见表1。分别在术前、术后即刻、术后3天，采用激光散斑法测量每组药物对脑梗死小鼠脑血流的作用；其中以术前小鼠的脑血流量作为基准(baseline)设为100，采用析因设计方法进行药物剂量筛选及评估联合用药的交互作用----最佳配比的确定，重复2次以上。

脑血流量(cerebral blood flow，CBF)监测：小鼠腹腔注射三溴乙醇麻醉成功后，固定于立体定位仪上，消毒后采用在顶叶中线处的纵向切口切开头皮，充分暴露颅骨，分离骨膜，利用生理盐水保持颅骨表面湿润，同时用棉签将颅骨表面的细小杂质清理干净。随后连同小鼠立体定位仪置于激光散斑成像系统下进行扫描以测量两个半球的CBF，在距颅骨表面10cm的工作距离处获取图像。为了评估CBF变化，使用计算机程序(PimSoft 1.3，Perimed AB，Sweden)计算包括右侧皮层梗死区域的感兴趣区域(ROI)的平均灌注水平来分析。通过计算每个时间点CBF占缺血前CBF百分比来代表CBF改变。在整个手术过程中监测肛温，且通过负反馈控制加热毯保持小鼠体温恒定在(37±0.2)℃。

表1山奈酚联合木犀草素对脑梗死的影响实验动物分组

3、结果计算及分析

(1)治愈率计算公式：

治愈率％＝(用药组血流量－模型组血流量)/(假手术组血流量-模型组血流量)×100％。

(2)采用金氏公式对联合用药(q)进行分析：

q＝E(A+B)/(EA+EB－EA×EB)

E(A+B)：实际联合用药的抑制率；EA：A药的抑制率；EB：B药的抑制率。

参考标准：q>1.15，表示2种药物为协同作用，q在0.85～1.15区间，表示2种药物为相加作用，q<0.85，表示2种药物为拮抗作用。

4、结果

结果如表2所示，山奈酚与木犀草素联合应用于脑梗死的治疗具有较好的累加和协同效果。

表2化合物山奈酚联合木犀草素对脑梗死的治疗效果

实施例2山奈酚与木犀草素组合对脑梗死治疗的影响

1、小鼠局灶性皮层脑梗死模型(dMCAO)的建立

同实施例1。

2、实验方案

本研究采用8-12周龄的健康雄性C57BL/6小鼠为研究对象，通过电凝法建立小鼠局灶性皮层脑梗死模型。每组6只小鼠，连续给药3天，给药方式及给药动物分组见表3。采用激光散斑测量dMCAO前、dMCAO后、72h脑血流，检测受试剂量的治疗效果。

表3山奈酚与木犀草素组合对脑梗死治疗的影响动物分组

分组	样本量	给药方式量
			Sham组	6	假手术+DMSO
dMCAO组	6	dMCAO+DMSO
			Kae组	6	dMCAO+山奈酚(25mg/kg)
Lut组	6	dMCAO+木犀草素(5mg/kg)
			Kae+Lut组	6	dMCAO+山奈酚(25mg/kg)+木犀草素(5mg/kg)
Ator组(阳性对照组)	6	dMCAO+阿托伐他汀组(Ator)

3、结果

检测结果如图1所示，与模型组相比，用药Kae+Lut组血流在脑梗死后72h有明显的改善，与阳性对照(Ator组)具有相似的治疗效果，提示山奈酚与木犀草素应用于脑梗死的治疗具有较好的效果。

上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (7)

1.一种治疗缺血性脑卒中的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的活性成分由单体化合物山奈酚和木犀草素组成，两种单体化合物山奈酚与木犀草素的浓度比为5:1。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体。

3.根据权利要求1-2任一项所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物剂型包括液体剂型、半固体剂型、固体剂型、气雾剂型。

4.一种治疗缺血性脑卒中的产品，其特征在于，所述产品活性成分为权利要求1-3任一项所述的药物组合物。

5.根据权利要求4所述的产品，其特征在于，所述产品还包括产品说明书。

6.根据权利要求4所述的产品，其特征在于，所述产品还包括使用所述药物组合物的辅助用工具。

7.权利要求1-3任一项所述的药物组合物、权利要求4-6任一项所述的产品在制备治疗缺血性脑卒中药物中的应用。