CN112342224A - 一种坛紫菜谷氨酸脱氢酶基因及其应用 - Google Patents

一种坛紫菜谷氨酸脱氢酶基因及其应用 Download PDF

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    • C12N9/0016—Oxidoreductases (1.) acting on nitrogen containing compounds as donors (1.4, 1.5, 1.6, 1.7) acting on the CH-NH2 group of donors (1.4) with NAD or NADP as acceptor (1.4.1)
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    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
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    • C12Y104/01002—Glutamate dehydrogenase (1.4.1.2)

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Abstract

本发明属于分子生物学技术领域，具体的说是一种坛紫菜谷氨酸脱氢酶基因及其应用。谷氨酸脱氢酶(GDH)基因为序列表SEDIQ No.1中的碱基所示。本发明基于坛紫菜转录组测序结果，从坛紫菜中克隆得到一种转录水平较高的谷氨酸脱氢酶(GDH)基因的cDNA序列，其开放阅读框(ORF)为1668bp，编码含555个氨基酸的蛋白质序列。利用体外原核表达体系，成功获得可溶性重组蛋白表达。

Description

一种坛紫菜谷氨酸脱氢酶基因及其应用
技术领域
本发明属于分子生物学技术领域，具体的说是一种坛紫菜谷氨酸脱氢酶基因及其应用。
背景技术
谷氨酸是坛紫菜体内氮代谢的基本氨基酸之一，同时也是坛紫菜中重要的呈味物质，谷氨酸含量的高低会影响坛紫菜的鲜味，进而影响紫菜的食用价值和营养价值。谷氨酸在生物体内的合成途径为：葡糖糖进行糖酵解形成6-磷酸葡萄糖，6-磷酸葡萄糖经过一些列反应形成3-磷酸甘油酸，再通过磷酸烯醇式丙酮酸最终形成丙酮酸，丙酮酸转化成柠檬酸进入三羧酸循环，转化成α-酮戊二酸，后者可在谷氨酸脱氢酶(GDH)的作用下转化成谷氨酸。另外，当植物处于逆境的时候，如病原体的浸染，干旱以及盐胁迫时，GDH的活性会有所提高，降低体内NH4+的浓度，减少对植物造成的伤害。
现阶段大多数人认为植物体内谷氨酸脱氢酶途径是在一定程度上起解除氨毒及辅助GS/GOGAT循环途径的作用，所以其合成谷氨酸的能力以及对NH4+的亲和能力需要进一步的验证。
发明内容
本发明目的在于提供一种坛紫菜谷氨酸脱氢酶基因及其应用。
为实现上述目的，本发明采用技术方案为：
一种坛紫菜谷氨酸脱氢酶基因，谷氨酸脱氢酶(GDH)基因为序列表SEDIQNo.1中的碱基所示。
所述基因所编码的蛋白为序列表SEDIQ No.2中氨基酸所示。
一种坛紫菜谷氨酸脱氢酶基因，所述基因所编码的蛋白在谷氨酸合成中的应用。
一种坛紫菜谷氨酸脱氢酶基因的重组质粒，所述重组质粒含所述的谷氨酸脱氢酶(GDH)基因所编码的蛋白。
一种坛紫菜谷氨酸合成酶基因的重组质粒的应用，所述质粒在谷氨酸合成中的应用。
本发明的突出优点如下：
本发明从坛紫菜中克隆获得谷氨酸脱氢酶基因，并通过体外原核表达技术获得该基因开放阅读框(ORF)全长序列，对其编码蛋白质的特征进行在线预测分析；通过低温诱导表达，得到GDH蛋白，通过SDS-PAGE及Western blot检测目的蛋白的可溶性。
本发明所得坛紫菜GDH蛋白可在原核表达系统中得到可溶性表达；且序列中经检测发现含有ELFV_dehydrog_N，ELFV_dehydrog和Bac_GDH结构域，可进行谷氨酸的合成，为研究谷氨酸的合成代谢途径提供理论依据。
附图说明
图1为本发明是实例提供的GDH基因克隆电泳图与western blot结果图；其中，a.GDH基因扩增；b.western blot检测结果。
具体实施方式
以下结合实例对本发明的具体实施方式做进一步说明，应当指出的是，此处所描述的具体实施方式只是为了说明和解释本发明，并不局限于本发明。
本发明基于坛紫菜转录组测序结果，从坛紫菜中克隆得到一种转录水平较高的谷氨酸脱氢酶(GDH)基因的cDNA序列，其开放阅读框(ORF)为1668bp，编码含555个氨基酸的蛋白质序列。利用体外原核表达体系，成功获得可溶性重组蛋白表达。
实施例1
本发明所述坛紫菜GDH基因的克隆方法，主要包括以下步骤：
1.坛紫菜叶状体总RNA提取及cDNA合成；
2.GDH基因特异性引物合成及PCR扩增产物测序；
3.GDH蛋白质结构预测分析。
具体操作如下：
1.坛紫菜叶状体总RNA的提取：取适量坛紫菜样品(≤100mg)，于液氮预冷的研钵内研磨，重复3～5次，取研磨好的粉末进行RNA提取。按照OMEGA公司的植物RNA提取试剂盒(Plant RNA Kit)步骤提取海带总RNA。利用Roche公司的Transcriptor First StrandcDNA Synthesis Kit合成试剂盒反转录合成cDNA，用于基因扩增。详细操作参见各试剂盒说明书。
2.GDH基因特异性引物合成及PCR扩增产物测序：在坛紫菜转录数据基础上，利用Primer Premier 5软件，设计扩增GDH基因ORF的特异性引物GDH-F和GDH-R(表1)。扩增体系为：0.5μl cDNA，1μl GDH-F，1μl GDH-R，10μl TAKARA PrimerSTAR，7.5μlddH2O。反应程序为：98℃预变性5min；然后进入35个循环：98℃变性10s，55℃退火15s，72℃延伸1.5min；最后进行72℃延伸10min。PCR产物经DNA电泳检测、胶回收、连接与转化后，测序验证。
3.GDH蛋白质结构分析：对获得的目的SEDIQ No.1所示的GDH基因序列，用ORFfinder工具测其开放阅读框，并将核酸序列翻译为氨基酸序列如SEDIQ No.2所示。用ProtParam在线工具测蛋白的分子量(MW)和等电点(pI)，同时用SignalP 4.1预测蛋白的信号肽序列，用TMHMMServer v.2.0预测蛋白是否含有跨膜结构。经测，GDH基因ORF全长1668bp，编码555个氨基酸序列，编码蛋白分子量MW为56.78kDa，理论等电点为7.10，是一种胞内蛋白。
表1引物及其核苷酸序列
引物名称 引物序列(5’-3’)
GDH-F CCGGAATTCATGGCGACGCGGGCAGGGGGGGTTC
GDH-R CCCAAGCTTTCAAGGCCACAGCCCGCGGCTCTCA
SEDIQ No.1坛紫菜谷氨酸脱氢酶(GDH)基因碱基序列
ATGGCGACGCGGGCAGGGGGGGTTCCCGCCGCCGCTCCCCCCACCGCCGCTCCTGCCCCCGCCGTCGCTGCTGCTGCTGGCGTGGCGGGTCTCGCCTCCCTGTCACCCCCCCCACGGTCCGTGCGGGCACGCCGCCCGGCGGTTGCCGCCGCTGGCGCGGCGGCCGCCGCGTCCACCACCACTGCGAGCGGCGGTCCGCCGCCGCCGACGTCGCCCGGGGCGGCGGCCAAAGGCGAGCCAGAAGGGGGCACCTTCCTCGAGGGCGTCGACGCCAACTTTCGGGCGGCGAGCGCGCACCTGCGGTCGGTGGACCCCGCGCTGCTGGAGAATATCCGCCGGTGCAACAGCACGACCGAGTTTGCCTTTCCGCTCAAGCGGGACGACGGGAGCATCACCACCCTCACCGGCTACCGGGCGGTGCATTCGTACCATATGACGCCGTCCAAGGGCGGCATCCGCTACGCGCCGTCCGTGTCGCGGTCCGAGGTGGAGGCGCTCGCATGCCTGATGACGCTCAAGTGTGCGGTCGTGGAGGTGCCGTACGGGGGGGCCAAGGGGGGGGTGGCCATCAACCGCGGTGACTACTCGCCGGCAGAGGTGGAGCGCATCACCCGCCGCTTCACGACTGAGCTGTACCGGCGCAACCTGATCGGCCCGGCCGTGGACGTGCCGGCGCCCGACTTTGGCACCACCGCGGGGGACATGGCGCACATTAAGGATACGTACATGCAGCTGGAGGGCAAGTCGATGTTTGGGGCGGCGGCGGTGACGGGCAAGCCCGTCAGCCAGGGGGGCATCCGCGGGCGGGAGGAGGCCACCGGCCTGGGCGTCTACTTTGGCGTCCGCGAGTTCCTGTCCGACCCGTCGGTCGCGGCGGCCGCGGGGCTGCCCACCCCGTGGAGCGTCCCAAAGTCGACGTTTGCCATCCAGGGGCTTGGCAACGTCGGCTACTGGGCCGCCCACTTTATTGCCAAGAATGGCGGCCTCATCACGGCCGTCGGCGAGCGGGACGGGACCGTGTCGGACCCGGCGGGTGTGGACGTGGAGGCCCTCAAGGTGCACCTGACCACTAATGGTGGCACGGTGGTCGGCTTTACCAATGGCGGCAGCCCGTCGCTGTCGGTGATGCCCGACCCGTCGCTCGTCTTGTCTGCCGACGTGGACGTGCTCATCCCGGCGGCGCTGGAAGGCGCCATCACGACCGCCAACGCGCGGGCGGTGCGCGCCAAGGTGGTCGCCGAGGCCGCCAATGGCCCCGTCACTGCTGGCGCGGACGTGGTACTCGCCTCCGCCGGCGTGGTGGTCCTCCCCGACCTGGTCATGAACGCCGGCGGCGTGACGGTGAGCTACTTTGAGGTGGCCAAGAACTTGGCGGGCCTCCGCTTTGGGCGGCTGACCCAGCGCGCGGAGGAGGCGGCGATGGAGAACCTGCTCGCGACACTGCAGACCCACGGCGTCACCATCACCGACCGCGACCGCCGGCGGCTGATCATTGGCGCCGACGAGCGCGCGCACGTGTACAGCGGGCTGGAGGACAGCATGTGCGCGGCGTGTGGGGAGACGGTCAAGGTGGCCGCGGAGCTGGGCGTGTCGCTCCGCATCGCCGCCTACTACACCGCCATCCGGCGGGTGGCCGACACGTTTGAGAGCCGCGGGCTGTGGCCTTGA
(a)序列特征：
·长度：1668
·类型：碱基序列
·链型：单链
·拓扑结构：线性
(b)分子类型：DNA
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：坛紫菜
SEDIQ No.2坛紫菜谷氨酸脱氢酶(GDH)基因编码蛋白氨基酸序列MATRAGGVPAAAPPTAAPAPAVAAAAGVAGLASLSPPPRSVRARRPAVAAAGAAAAASTTTASGGPPPPTSPGAAAKGEPEGGTFLEGVDANFRAASAHLRSVDPALLENIRRCNSTTEFAFPLKRDDGSITTLTGYRAVHSYHMTPSKGGIRYAPSVSRSEVEALACLMTLKCAVVEVPYGGAKGGVAINRGDYSPAEVERITRRFTTELYRRNLIGPAVDVPAPDFGTTAGDMAHIKDTYMQLEGKSMFGAAAVTGKPVSQGGIRGREEATGLGVYFGVREFLSDPSVAAAAGLPTPWSVPKSTFAIQGLGNVGYWAAHFIAKNGGLITAVGERDGTVSDPAGVDVEALKVHLTTNGGTVVGFTNGGSPSLSVMPDPSLVLSADVDVLIPAALEGAITTANARAVRAKVVAEAANGPVTAGADVVLASAGVVVLPDLVMNAGGVTVSYFEVAKNLAGLRFGRLTQRAEEAAMENLLATLQTHGVTITDRDRRRLIIGADERAHVYSGLEDSMCAACGETVKVAAELGVSLRIAAYYTAIRRVADTFESRGLWP
(a)序列特征：
·长度：555
·类型：氨基酸序列
·链型：单链
·拓扑结构：线性
(b)分子类型：蛋白质
(c)假设：否
(d)反义：否
(e)最初来源：坛紫菜
结构特点：349bp—729bp处为ELFV_dehydrog_N结构域，790bp-1389bp处为ELFV_dehydrog结构域，1207bp-1362bp处为Bac_GDH结构域。
实施例2
坛紫菜GDH重组蛋白表达及纯化方法，主要包括以下步骤：
1.GDH重组质粒构建与转化；
2.GDH重组蛋白表达；
3.GDH重组蛋白可溶性检测
具体操作如下：
1.GDH重组质粒构建与转化：为了实现目的蛋白的可溶性表达，选择实验室保存的冷休克蛋白表达载体pColdI进行目的蛋白的表达，利用该载体表达的蛋白N端带有His标签，可用于后续的融合蛋白纯化。根据目的基因序列信息，选择EcoRI和HindIII作为双酶切位点，设计带酶切位点和保护碱基的扩增引物，即GDH-F和GDH-R(表1),以实施例1所述的cDNA为模板，对GDH基因进行扩增。PCR扩增条件同ORF条件一致，扩增得到目的条带，电泳图如图1a。表达载体的构建按照
Figure BDA0002794887060000041
II One Step Cloning Kit说明书进行，进而获得重组质粒，将其转化至Trans1-T1感受态细胞。对其进行测序，将测序结果为阳性的菌株接种到100mL LB培养基中，于37℃条件下过夜摇菌，提取质粒，再转化至Transetta(DE3)感受态细胞，测序验证。
2.GDH重组蛋白表达：取上述阳性菌液适量，于37℃条件下过夜摇菌；接种至4LLB培养基(含氨苄青霉素)中，培养至OD600约为0.6时，将培养瓶于15℃冰浴中预冷30min，加入0.1mM IPTG，于15℃条件下，120rpm，摇菌24h。
3.重组蛋白可溶性检测：将菌液于4000rpm，4℃条件下离心30min，收集菌体沉淀，重悬于磷酸钠缓冲液(20mM磷酸钠，pH8.0，500mM NaCl，20mM咪唑)中，在冰浴条件下超声破碎，破碎5s，间隔10s，将菌液破碎至澄清；破碎液于4℃，13000rpm，离心45min，离心所得上清液用0.45μm滤膜过滤。将15μL蛋白上清液与5μL 4X LDS Sample Buffer(金斯瑞)在离心管中混合，PCR仪控温95℃变性10min，SDS-PAGE于120v电压下反应55min。根据Anti His-Tag Mouse Monoclonal Antibody和Goat Anti-Mouse IgG,HRP Conjugated说明书分别以1:500和1:2000(v/v)的比例稀释一抗和二抗。用iBlot转印仪和iBind蛋白印迹处理仪完成蛋白转膜和孵育。显色后用BIO-RAD凝胶成像系统观察膜片，在预测位置出现明显的条带，说明得到的重组蛋白为可溶性蛋白。结果如图1b所示。
由上述可见所得坛紫菜GDH蛋白可在原核表达系统中得到可溶性表达；且序列中经检测发现含有脱氢酶结构域。
而后可利用上述获得的坛紫菜GDH蛋白进行合成谷氨酸，具体为：
利用所述坛紫菜GDH蛋白，以NADH为辅酶，硫酸铵为NH4 +供体，催化α-酮戊二酸的还原氨基化，最终生成谷氨酸，具体反应体系为5mMα-酮戊二酸,50mM硫酸铵,0.12mM ADP,0.16mM NADH以及20mM磷酸钠缓冲液(pH＝8.0),反应温度为25℃，可通过NADH的减少量来表征催化反应的速率，25μL纯化GDH蛋白在反应十分钟后可催化生成大约60μmol的谷氨酸；
可见利用本发明所得蛋白可以进一步研究影响酶活性的因素，为谷氨酸合成代谢途径的研究提供理论依据。
序列表
<110> 中国科学院海洋研究所
<120> 一种坛紫菜谷氨酸脱氢酶基因及其应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1668
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atggcgacgc gggcaggggg ggttcccgcc gccgctcccc ccaccgccgc tcctgccccc 60
gccgtcgctg ctgctgctgg cgtggcgggt ctcgcctccc tgtcaccccc cccacggtcc 120
gtgcgggcac gccgcccggc ggttgccgcc gctggcgcgg cggccgccgc gtccaccacc 180
actgcgagcg gcggtccgcc gccgccgacg tcgcccgggg cggcggccaa aggcgagcca 240
gaagggggca ccttcctcga gggcgtcgac gccaactttc gggcggcgag cgcgcacctg 300
cggtcggtgg accccgcgct gctggagaat atccgccggt gcaacagcac gaccgagttt 360
gcctttccgc tcaagcggga cgacgggagc atcaccaccc tcaccggcta ccgggcggtg 420
cattcgtacc atatgacgcc gtccaagggc ggcatccgct acgcgccgtc cgtgtcgcgg 480
tccgaggtgg aggcgctcgc atgcctgatg acgctcaagt gtgcggtcgt ggaggtgccg 540
tacggggggg ccaagggggg ggtggccatc aaccgcggtg actactcgcc ggcagaggtg 600
gagcgcatca cccgccgctt cacgactgag ctgtaccggc gcaacctgat cggcccggcc 660
gtggacgtgc cggcgcccga ctttggcacc accgcggggg acatggcgca cattaaggat 720
acgtacatgc agctggaggg caagtcgatg tttggggcgg cggcggtgac gggcaagccc 780
gtcagccagg ggggcatccg cgggcgggag gaggccaccg gcctgggcgt ctactttggc 840
gtccgcgagt tcctgtccga cccgtcggtc gcggcggccg cggggctgcc caccccgtgg 900
agcgtcccaa agtcgacgtt tgccatccag gggcttggca acgtcggcta ctgggccgcc 960
cactttattg ccaagaatgg cggcctcatc acggccgtcg gcgagcggga cgggaccgtg 1020
tcggacccgg cgggtgtgga cgtggaggcc ctcaaggtgc acctgaccac taatggtggc 1080
acggtggtcg gctttaccaa tggcggcagc ccgtcgctgt cggtgatgcc cgacccgtcg 1140
ctcgtcttgt ctgccgacgt ggacgtgctc atcccggcgg cgctggaagg cgccatcacg 1200
accgccaacg cgcgggcggt gcgcgccaag gtggtcgccg aggccgccaa tggccccgtc 1260
actgctggcg cggacgtggt actcgcctcc gccggcgtgg tggtcctccc cgacctggtc 1320
atgaacgccg gcggcgtgac ggtgagctac tttgaggtgg ccaagaactt ggcgggcctc 1380
cgctttgggc ggctgaccca gcgcgcggag gaggcggcga tggagaacct gctcgcgaca 1440
ctgcagaccc acggcgtcac catcaccgac cgcgaccgcc ggcggctgat cattggcgcc 1500
gacgagcgcg cgcacgtgta cagcgggctg gaggacagca tgtgcgcggc gtgtggggag 1560
acggtcaagg tggccgcgga gctgggcgtg tcgctccgca tcgccgccta ctacaccgcc 1620
atccggcggg tggccgacac gtttgagagc cgcgggctgt ggccttga 1668
<210> 2
<211> 555
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Met Ala Thr Arg Ala Gly Gly Val Pro Ala Ala Ala Pro Pro Thr Ala
1 5 10 15
Ala Pro Ala Pro Ala Val Ala Ala Ala Ala Gly Val Ala Gly Leu Ala
20 25 30
Ser Leu Ser Pro Pro Pro Arg Ser Val Arg Ala Arg Arg Pro Ala Val
35 40 45
Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Ala Ala Ser Thr Thr Thr Ala Ser Gly
50 55 60
Gly Pro Pro Pro Pro Thr Ser Pro Gly Ala Ala Ala Lys Gly Glu Pro
65 70 75 80
Glu Gly Gly Thr Phe Leu Glu Gly Val Asp Ala Asn Phe Arg Ala Ala
85 90 95
Ser Ala His Leu Arg Ser Val Asp Pro Ala Leu Leu Glu Asn Ile Arg
100 105 110
Arg Cys Asn Ser Thr Thr Glu Phe Ala Phe Pro Leu Lys Arg Asp Asp
115 120 125
Gly Ser Ile Thr Thr Leu Thr Gly Tyr Arg Ala Val His Ser Tyr His
130 135 140
Met Thr Pro Ser Lys Gly Gly Ile Arg Tyr Ala Pro Ser Val Ser Arg
145 150 155 160
Ser Glu Val Glu Ala Leu Ala Cys Leu Met Thr Leu Lys Cys Ala Val
165 170 175
Val Glu Val Pro Tyr Gly Gly Ala Lys Gly Gly Val Ala Ile Asn Arg
180 185 190
Gly Asp Tyr Ser Pro Ala Glu Val Glu Arg Ile Thr Arg Arg Phe Thr
195 200 205
Thr Glu Leu Tyr Arg Arg Asn Leu Ile Gly Pro Ala Val Asp Val Pro
210 215 220
Ala Pro Asp Phe Gly Thr Thr Ala Gly Asp Met Ala His Ile Lys Asp
225 230 235 240
Thr Tyr Met Gln Leu Glu Gly Lys Ser Met Phe Gly Ala Ala Ala Val
245 250 255
Thr Gly Lys Pro Val Ser Gln Gly Gly Ile Arg Gly Arg Glu Glu Ala
260 265 270
Thr Gly Leu Gly Val Tyr Phe Gly Val Arg Glu Phe Leu Ser Asp Pro
275 280 285
Ser Val Ala Ala Ala Ala Gly Leu Pro Thr Pro Trp Ser Val Pro Lys
290 295 300
Ser Thr Phe Ala Ile Gln Gly Leu Gly Asn Val Gly Tyr Trp Ala Ala
305 310 315 320
His Phe Ile Ala Lys Asn Gly Gly Leu Ile Thr Ala Val Gly Glu Arg
325 330 335
Asp Gly Thr Val Ser Asp Pro Ala Gly Val Asp Val Glu Ala Leu Lys
340 345 350
Val His Leu Thr Thr Asn Gly Gly Thr Val Val Gly Phe Thr Asn Gly
355 360 365
Gly Ser Pro Ser Leu Ser Val Met Pro Asp Pro Ser Leu Val Leu Ser
370 375 380
Ala Asp Val Asp Val Leu Ile Pro Ala Ala Leu Glu Gly Ala Ile Thr
385 390 395 400
Thr Ala Asn Ala Arg Ala Val Arg Ala Lys Val Val Ala Glu Ala Ala
405 410 415
Asn Gly Pro Val Thr Ala Gly Ala Asp Val Val Leu Ala Ser Ala Gly
420 425 430
Val Val Val Leu Pro Asp Leu Val Met Asn Ala Gly Gly Val Thr Val
435 440 445
Ser Tyr Phe Glu Val Ala Lys Asn Leu Ala Gly Leu Arg Phe Gly Arg
450 455 460
Leu Thr Gln Arg Ala Glu Glu Ala Ala Met Glu Asn Leu Leu Ala Thr
465 470 475 480
Leu Gln Thr His Gly Val Thr Ile Thr Asp Arg Asp Arg Arg Arg Leu
485 490 495
Ile Ile Gly Ala Asp Glu Arg Ala His Val Tyr Ser Gly Leu Glu Asp
500 505 510
Ser Met Cys Ala Ala Cys Gly Glu Thr Val Lys Val Ala Ala Glu Leu
515 520 525
Gly Val Ser Leu Arg Ile Ala Ala Tyr Tyr Thr Ala Ile Arg Arg Val
530 535 540
Ala Asp Thr Phe Glu Ser Arg Gly Leu Trp Pro
545 550 555

Claims (5)

1.一种坛紫菜谷氨酸脱氢酶基因，其特征在于：谷氨酸脱氢酶(GDH)基因为序列表SEDIQ No.1中的碱基所示。
2.按权利要求1所述的坛紫菜谷氨酸脱氢酶基因，其特征在于：所述基因所编码的蛋白为序列表SEDIQ No.2中氨基酸所示。
3.一种权利要求1所述的坛紫菜谷氨酸脱氢酶基因，其特征在于：所述基因所编码的蛋白在谷氨酸合成中的应用。
4.一种坛紫菜谷氨酸脱氢酶基因的重组质粒，其特征在于：所述重组质粒含权利要求1所述的谷氨酸脱氢酶(GDH)基因所编码的蛋白。
5.一种权利要求4所述的坛紫菜谷氨酸合成酶基因的重组质粒的应用，其特征在于：所述质粒在谷氨酸合成中的应用。
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