CN112342175A - 一种阴道健康益生菌组合物及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种阴道健康益生菌组合物，包含植物乳杆菌L‑137和至少一种女性益生菌，所述女性益生菌为健康女性阴道或尿道内分离出的乳杆菌。灭活后的植物乳杆菌L‑137具有能够促进益生菌生长的作用，尤其是乳杆菌的生长。本发明的组合物能够恢复阴道菌群，进而抑制有害菌增值，缓解阴道痛痒、干涩等不适，祛除异味，平衡pH值，强化阴道粘膜免疫防御机能。辅助治疗阴道炎以及预防阴道炎的发生和复发。
Description
技术领域
本发明涉及一种益生菌组合，特别涉及一种阴道健康益生菌组合。
背景技术
女性阴道菌群健康是一种常见的人体菌群健康要求。有害菌的繁殖容易导致妇科问题，因此抑制阴道有害菌势在必行；传统的抑菌剂，如制霉素、克霉唑、甲硝唑等容易造成菌群紊乱。一款益生菌产品的成分为LbV88、LbV150N、LbV116和LbV96，其在美国专利号为US8846027B2，包含该菌株的产品可以口服和外用。而进一步增强产品的保健效果，是研发的趋势；而单纯的增加产品中的活菌数的话，一方面大幅增加产品生产成本，另一方面产品的货架期，活菌死亡数量大幅增加，消费者使用时活菌量并没有太多的提升。
因此，一款能够促进女性益生菌生长繁殖的产品是需要解决的技术问题。
发明内容
本发明的目的在于针对现有技术的不足之处，提供一种阴道健康益生菌组合物，包含植物乳杆菌L-137和至少一种女性益生菌，所述女性益生菌为健康女性阴道或尿道内分离出的益生菌，优选为乳杆菌。
优选的，女性益生菌的增殖有利于抑制有害菌的增殖，有利于阴道和尿道的菌群的平衡。
进一步的，所述植物乳杆菌L-137的为活菌体，或为死菌体，或为包含活菌体和死菌体。优选为至少含有死菌体。死菌体和活菌体的组合中，死菌体与活菌体的比例为99:1、95:5、90:10、80:20、75:25、60:40、50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、1:99。
进一步所述死菌体，灭活方式可以为加热、紫外辐照、化学处理；优选为热灭活菌体。所述热灭活菌体可以为在培养结束后，收集菌体后制备加热死菌体，或者也可以不将菌体从培养液中暂时分离，而是将培养液中的菌体制成加热死菌体，然后采集该加热死菌体。植物乳杆菌L-137的加热死菌体加热温度通常约为60～100℃，优选约为70～90℃，作为加热手段，可以为使用加热器的公知手段。在达到所需温度后，加热时间通常约为5～40分钟，优选约为10～30分钟。
死菌体可进一步进行研磨、破碎或冻结干燥处理等，从而制成死菌体处理物。在本发明中，所述死菌体处理物也可适宜地用作死菌体。
本发明中死菌体的形态可以为糊状形态、悬浊液形态、乳状形态、粉状形态、颗粒形态，优选为粉末形态。
所述女性益生菌为优选为阴道乳杆菌，进一步优选为卷曲乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、格氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、瑞士乳杆菌、干酪乳酸杆菌、嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌、罗伊氏乳酸杆菌中的一种或两种以上的组合；再进一步优选为卷曲乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、格氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、罗伊氏乳酸杆菌中的一种或两种以上的组合；再进一步优选为LbV88、LbV150N、LbV116、LbV96、GR-1、RC-14的一种或两种以上的组合。
副干酪乳杆菌可以选择为Lactobacillus paracasei HA-196，干酪乳酸杆菌可以选择为Lactobacillus casei HA-108，格氏乳酸杆菌可以选择为Lactobacillus gasseriLBV 150N (DSM 22583)，Lactobacillus gasseri LBV 162 (DSM 23750)，Lactobacillusgasseri LBV 62 (DSM 23751)；卷曲乳酸杆菌可以选择为Lactobacillus crispatus LBV88 (DSM 22566)，Lactobacillus crispatus LBV 10 (DSM 23744)，Lactobacilluscrispatus LBV 61 (DSM 23745)；罗伊氏乳酸杆菌可以选择为Lactobacillus reuteriRC-14 (ATCC 55845)，Lactobacillus reuteri HA-188，Lactobacillus reuteri PBS072DSM 25175；瑞士乳酸杆菌可以选择为Lactobacillus helveticus LAFTI® L10，Lactobacillus helveticus HA-128；嗜酸乳杆菌可以选择为Lactobacillus acidophilusHA-122，Lactobacillus acidophilus PBS066 DSM 24936；鼠李糖乳酸杆菌可以选择为Lactobacillus rhamnosus LBV 96 (DSM 22560)，Lactobacillus rhamnosus LBV 69(DSM 23748)，Lactobacillus rhamnosus LBV 136 (DSM 23749)，Lactobacillusrhamnosus GR-1 (ATCC 55826)，Lactobacillus rhamnosus Rosell® -11，Lactobacillus rhamnosus HA-111，Lactobacillus rhamnosus HA-114，Lactobacillusrhamnosus PBS070 （DSM 25568）。詹氏乳酸杆菌可以选择为Lactobacillus jensenii LBV116 (DSM 22567)，Lactobacillus jensenii LBV 8 (DSM 23746)，Lactobacillusjensenii LBV 110 (DSM 23747)；植物乳杆菌可以选择为Lactobacillus plantarumPBS067 （DSM 24937）。
植物乳杆菌L-137与女性益生菌用量比例为0.25mg:100亿女性益生菌至1000mg:100亿女性益生菌；进一步的，0.5mg:100亿女性益生菌、1mg:100亿女性益生菌、5mg:100亿女性益生菌、10mg:100亿女性益生菌、50mg:100亿女性益生菌、100mg:100亿女性益生菌、500mg:100亿女性益生菌、1000mg:100亿女性益生菌。
或者植物乳杆菌L-137与女性益生菌用量比例为1亿：100亿至1000亿：100亿。进一步的，2亿：100亿、10亿：100亿、50亿：100亿、100亿：100亿、200亿：100亿、500亿：100亿。植物乳杆菌L-137的数量为死菌体和活菌体之和。植物乳杆菌L-137的死菌体的数量为其活菌的数量灭活后的死菌体数量。因死菌体数量的检测手段的有限性，本发明中，死菌体的菌体数量可由对生产该死菌体的植物乳杆菌L-137的活菌活菌数、活菌密度进行检测而推算确定。
进一步的，组合物中包含或者不包含填充剂/载体，组合物中女性益生菌的用量为0.5亿/g-500亿/g，进一步1亿/g-100亿/g，进一步10亿/g-50亿/g，进一步20亿/g-30亿/g。
或包含或者不包含填充剂/载体，组合物中女性益生菌的用量为0.5亿/ml-500亿/ml，进一步1亿/ml-100亿/ml，进一步10亿/ml-50亿/ml，进一步20亿/ml-30亿/ml。
本发明中所述的组合物的产品可以为各种剂型，包括也不局限于药品常见剂型，如粉剂、栓剂、凝胶、口服液、硬胶囊、软胶囊，也可以为保健食品和膳食补充剂的常见剂型，如饮料、固体饮料、软饮料、硬胶囊、软胶囊、多层硬胶囊、溶豆、冻干粉、奶豆、巧克力、夹心软糖、夹心巧克力、茶饮料、冷萃咖啡，还可以为日化抑菌洗剂等常见剂型，如抑菌液（抑制有害菌）、抑菌凝胶（抑制有害菌）、栓剂、凝胶等。
本发明中所述的治疗女性阴道炎的产品的灭活的植物乳杆菌L137和女性益生菌可以微胶囊处理或不进行微胶囊处理，优选的，灭活的植物乳杆菌L137不进行微胶囊化处理，而女性益生菌进行微胶囊化处理。
本发明中所述的治疗女性阴道炎的产品的各种剂型可以按照药品、保健食品、普通食品、日化、饲料、添加剂等的常规生产制备方法制备。将该组分中的一种或者多种载体混合，然后制成所需的剂型。
在一个实施方式中，本发明中所述的治疗女性阴道炎症的产品制备方法是：可选择的将需要控制水分指标的物料制粒或不制粒后至生产所需水分指标，将植物乳杆菌L137与女性益生菌混合，可选择的加入物料所需流动剂后进行胶囊灌装，可选择的将灌装好的胶囊挑选出不合格的后进行包衣（肠溶包衣）或不包衣，可选择的将包衣后的胶囊根据包装所需规格数量灌装至内包材即可。
灭活的植物乳杆菌L-137的应用正在被广泛的开发，CN111163788A公开了植物乳杆菌L-137用于促进透明质酸生成的组合物，CN101720935A公开了植物乳杆菌L-137诱导IL-12产生活性。CN111558033A公开了植物乳杆菌L-137作为一种口腔清洁组合物的成分，减少接受支持性牙周治疗的患者的牙周袋深度。Heat-killed Lactobacillus plantarumL-137 suppresses naturally fed antigen–specific IgE production by stimulationof IL-12 production in mice 中公开了热灭活的植物乳杆菌L-137通过刺激IL-12产生进而抑制IgE的产生。Oral administration of heat-killed Lactobacillus plantarumL-137 enhances protection against influenza virus infection by stimulation oftype I interferon production in mice 中公开了热灭活的植物乳杆菌L-137通过刺激I型干扰素的产生进而产生抗流感病毒的作用。Daily Intake of Heat-KilledLactobacillus plantarum L-137 Augments Acquired Immunity in Healthy Adults 公开了采用在乳制品中添加热灭活的植物乳杆菌L-137提高机体免疫力。以上的应用基本为采用灭活的植物乳杆菌L-137。商业上对于具有功能性的灭活的菌体称为“后生元”。
而发明人意外发现，灭活后的植物乳杆菌L-137具有能够促进益生菌生长的作用，尤其是乳杆菌的生长。应用层面上，发明人将灭活后的植物乳杆菌L-137应用于健康阴道中的乳杆菌，发现灭活后的植物乳杆菌L-137能够促进阴道各类乳杆菌的增长，因此本发明中将灭活后的植物乳杆菌L-137用于女性益生菌产品制备组合物，该组合物可以应用于药物、保健食品、清洗日化产品。
本发明的组合物能够恢复阴道菌群，进而抑制有害菌增值，缓解阴道痛痒、干涩等不适，祛除异味，平衡pH值，强化阴道粘膜免疫防御机能。辅助治疗阴道炎以及预防阴道炎的发生和复发。
术语解释
本文所用的“抗”，包含有预防、抑制、清除的效果。
本文所用的“死菌体”，为灭活的菌体。
本文所用的“后生元”，为益生菌经加工处理后的益菌成分统称，包括菌体与代谢产物。在不特别指明的情况下，表示灭活后的植物乳杆菌L-137。
本文所用的“植物乳杆菌L-137”，在未标明是否灭活的情况下，表达的为已经灭活的植物乳杆菌L-137。
本文所用的“产品”，在未标明的情况下，表达的为已经灭活的植物乳杆菌L-137与女性益生菌的组合。
本文所用的“女性益生菌”，在未标明的情况下，表达的为健康女性阴道或尿道内分离出的益生菌。
附图说明
图1为灭活的植物乳杆菌L-137促进益生菌抑制大肠杆菌液体发酵中pH降低情况。
图2为灭活的植物乳杆菌L-137在大肠杆菌模型组中促进益生菌的情况。
图3为灭活的植物乳杆菌L-137在白色念珠菌模型组中促进益生菌的情况。
具体实施方式
为了便于本领域技术人员的理解，下面结合实施例对本发明作进一步的说明，实施方式提及的内容并非对本发明的限定。
实施例1
一种组合物，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV88，植物乳杆菌L-137为50mg，乳杆菌为100亿活菌。
实施例2
一种组合物，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV150N，植物乳杆菌L-137为50mg，乳杆菌为100亿活菌。
实施例3
一种组合物，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV116，植物乳杆菌L-137为50mg，乳杆菌为100亿活菌。
实施例4
一种组合物，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV96，植物乳杆菌L-137为50mg，乳杆菌为100亿活菌。
实施例5
一种组合物，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌GR-1，植物乳杆菌L-137为50mg，乳杆菌为100亿活菌。
实施例6
一种组合物，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌RC-14，植物乳杆菌L-137为50mg，乳杆菌为100亿活菌。
实施例7
一种组合物，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV88、乳杆菌LbV150N，植物乳杆菌L-137为50mg，乳杆菌为100亿活菌，乳杆菌LbV88和乳杆菌LbV150N分别为50亿活菌。
实施例8
一种组合物，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96，植物乳杆菌L-137为50mg，乳杆菌为100亿活菌，乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96分别为50亿活菌。
实施例9
一种组合物，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌GR-1、乳杆菌RC-14，植物乳杆菌L-137为50mg，乳杆菌为100亿活菌，乳杆菌GR-1、乳杆菌RC-14分别为50亿活菌。
实施例10
一种组合物，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV88、乳杆菌LbV150N、乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96，植物乳杆菌L-137为50mg，乳杆菌为100亿活菌，乳杆菌LbV88、乳杆菌LbV150N、乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96分别为25亿活菌。
实施例11
一种组合物，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV88、乳杆菌LbV150N、乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96、乳杆菌GR-1、乳杆菌RC-14，植物乳杆菌L-137为50mg，乳杆菌为100亿活菌，乳杆菌LbV88、乳杆菌LbV150N、乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96分别为12.5亿活菌，乳杆菌GR-1、乳杆菌RC-14分别为25亿活菌。
实施例12
一种组合物，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV88，植物乳杆菌L-137为1亿，乳杆菌为100亿活菌。植物乳杆菌L-137的菌体数量可由对生产该死菌体的植物乳杆菌L-137的活菌活菌数、活菌密度进行检测而推算确定。
实施例13
一种组合物，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV150N，植物乳杆菌L-137为2亿，乳杆菌为100亿活菌。植物乳杆菌L-137的菌体数量可由对生产该死菌体的植物乳杆菌L-137的活菌活菌数、活菌密度进行检测而推算确定。
实施例14
一种组合物，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV116，植物乳杆菌L-137为5亿，乳杆菌为100亿活菌。植物乳杆菌L-137的菌体数量可由对生产该死菌体的植物乳杆菌L-137的活菌活菌数、活菌密度进行检测而推算确定。
实施例15
一种组合物，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV96，植物乳杆菌L-137为10亿，乳杆菌为100亿活菌。植物乳杆菌L-137的菌体数量可由对生产该死菌体的植物乳杆菌L-137的活菌活菌数、活菌密度进行检测而推算确定。
实施例16
一种组合物，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌GR-1，植物乳杆菌L-137为50亿，乳杆菌为100亿活菌。植物乳杆菌L-137的菌体数量可由对生产该死菌体的植物乳杆菌L-137的活菌活菌数、活菌密度进行检测而推算确定。
实施例17
一种组合物，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌RC-14，植物乳杆菌L-137为100亿，乳杆菌为100亿活菌。植物乳杆菌L-137的菌体数量可由对生产该死菌体的植物乳杆菌L-137的活菌活菌数、活菌密度进行检测而推算确定。
实施例18
一种组合物，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV88、乳杆菌LbV150N，植物乳杆菌L-137为200亿，乳杆菌为100亿活菌，乳杆菌LbV88和乳杆菌LbV150N分别为50亿活菌。植物乳杆菌L-137的菌体数量可由对生产该死菌体的植物乳杆菌L-137的活菌活菌数、活菌密度进行检测而推算确定。
实施例19
一种组合物，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96，植物乳杆菌L-137为500亿，乳杆菌为100亿活菌，乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96分别为50亿活菌。植物乳杆菌L-137的菌体数量可由对生产该死菌体的植物乳杆菌L-137的活菌活菌数、活菌密度进行检测而推算确定。
实施例20
一种组合物，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌GR-1、乳杆菌RC-14，植物乳杆菌L-137为1000亿，乳杆菌为100亿活菌，乳杆菌GR-1、乳杆菌RC-14分别为50亿活菌。植物乳杆菌L-137的菌体数量可由对生产该死菌体的植物乳杆菌L-137的活菌活菌数、活菌密度进行检测而推算确定。
实施例21
一种组合物，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV88、乳杆菌LbV150N、乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96，植物乳杆菌L-137为20亿，乳杆菌为100亿活菌，乳杆菌LbV88、乳杆菌LbV150N、乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96分别为25亿活菌。植物乳杆菌L-137的菌体数量可由对生产该死菌体的植物乳杆菌L-137的活菌活菌数、活菌密度进行检测而推算确定。
实施例22
一种组合物，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV88、乳杆菌LbV150N、乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96、乳杆菌GR-1、乳杆菌RC-14，植物乳杆菌L-137为80亿，乳杆菌为100亿活菌，乳杆菌LbV88、乳杆菌LbV150N、乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96分别为12.5亿活菌，乳杆菌GR-1、乳杆菌RC-14分别为25亿活菌。植物乳杆菌L-137的菌体数量可由对生产该死菌体的植物乳杆菌L-137的活菌活菌数、活菌密度进行检测而推算确定。
实施例23
一种益生菌药品，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV88。
实施例24
一种益生菌药品，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV88、乳杆菌LbV150N、乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96。
实施例25
一种益生菌药品，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌GR-1、乳杆菌RC-14。
实施例26
一种益生菌药品，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV88、乳杆菌LbV150N、乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96、乳杆菌GR-1、乳杆菌RC-14。
实施例27
一种益生菌药品，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV88、乳杆菌LbV150N、乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96、乳杆菌GR-1、乳杆菌RC-14。
实施例28
一种益生菌保健食品，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV88。
实施例29
一种益生菌保健食品，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV88、乳杆菌LbV150N、乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96。
实施例30
一种益生菌保健食品，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌GR-1、乳杆菌RC-14。
实施例31
一种益生菌保健食品，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV88、乳杆菌LbV150N、乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96、乳杆菌GR-1、乳杆菌RC-14。
实施例32
一种益生菌保健食品，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV88、乳杆菌LbV150N、乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96、乳杆菌GR-1、乳杆菌RC-14。
实施例33
一种益生菌栓剂，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV88、乳杆菌LbV150N、乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96、乳杆菌GR-1、乳杆菌RC-14。
实施例34
一种益生菌阴道清洗液，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV88、乳杆菌LbV150N、乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96、乳杆菌GR-1、乳杆菌RC-14。
实施例35
一种益生菌阴道凝胶，包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV88、乳杆菌LbV150N、乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96、乳杆菌GR-1、乳杆菌RC-14。
实施例36
一种益生菌药品的制备方法，原料包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV88、乳杆菌LbV150N、乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96、乳杆菌GR-1、乳杆菌RC-14。将原料混合，灌入胶囊。
实施例37
一种益生菌保健食品的制备方法，原料包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV88、乳杆菌LbV150N、乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96、乳杆菌GR-1、乳杆菌RC-14。将原料混合，制片，包装。
实施例38
一种益生菌产品的制备方法，原料包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV88、乳杆菌LbV150N、乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96、乳杆菌GR-1、乳杆菌RC-14。将原料制备微胶囊，混合，根据剂型要求制备产品。
实施例39
一种益生菌产品的制备方法，原料包含灭活的植物乳杆菌L-137和乳杆菌LbV88、乳杆菌LbV150N、乳杆菌LbV116、乳杆菌LbV96、乳杆菌GR-1、乳杆菌RC-14。将原料制备混合，微胶囊化，根据剂型要求制备产品。
实施例40
本组合物在制备口服的药品或保健食品时，所制备的口服药品或保健食品，使用方法为：饭后服用，不和抗生素同用。
实施例41
本组合物在制备洗剂、凝胶、栓剂时，所制备的洗剂、凝胶、栓剂使用时，使用方法为：清洗时或清洗后使用，不和抗生素同用。
试验例一、灭活后的植物乳杆菌L137与益生菌的抑菌效果实验
以阴道炎症致病菌大肠杆菌作为指示菌，利用混合培养法来检测菌落数和培养pH值的变化。
试验例1.1 单株益生菌的抑菌效果实验：
设置大肠杆菌组（对照组）、大肠杆菌+益生菌组（组1）、大肠杆菌+益生菌+灭活的植物乳杆菌L-137组（组2）、大肠杆菌+灭活的植物乳杆菌L-137组（组3）。
大肠杆菌+益生菌+灭活的植物乳杆菌L-137组试验方法为：活化致病菌即大肠杆菌后，挑取新鲜的单菌落转接至LB培养基中，37℃，120 rpm 培养14h，收集此时的菌液，按5%接种量转接至新的LB培养基中；将灭活后的植物乳杆菌L137稀释至OD600=1.0，将益生菌（选择卷曲乳酸杆菌Lactobacillus crispatus LBV 88 (DSM 22566)）稀释至OD600=1.0，取稀释后的灭活后的植物乳杆菌L137液和益生菌液各1mL至接种了大肠杆菌的新的LB培养基中，37℃，120 rpm培养14h。每隔2h进行取样，记录菌液pH值。将培养后的菌液稀释梯度涂布于大肠杆菌显色平板，37℃倒置过夜培养，记录蓝色大肠杆菌落数量。
大肠杆菌组同上，加入2ml蒸馏水替代稀释后的灭活后的植物乳杆菌L137液和益生菌液。
大肠杆菌+益生菌组同上，加入1ml蒸馏水替代稀释后的灭活后的植物乳杆菌L137悬液。
大肠杆菌+灭活的植物乳杆菌L-137组同上，加入1ml蒸馏水替代稀释后的益生菌液。
挑选其余乳酸杆菌，进行相同实验，记录14 h的pH值，同样进行稀释涂布，进行菌落计数。
试验结果如下：
表1 灭活的植物乳杆菌L-137促进LBV88抑制大肠杆菌液体发酵情况
益生菌LBV88是一种卷曲乳酸杆菌，对数期后期和稳定期产酸，发酵液的pH会降低。由表1可知的发酵液的pH可知在实验室的液体发酵中，单独加入灭活的植物乳杆菌L-137，pH有所降低，说明对大肠杆菌的繁殖具有一定的抑制效果，但效果并不明显；而比较加入益生菌LBV88和加入益生菌LBV88和灭活的植物乳杆菌L-137的情况，益生菌增殖后的代谢产物抑制了大肠杆菌的生长，且伴随着发酵液pH的降低，而同时加入灭活的植物乳杆菌L-137的组，发酵液的pH会进一步降低，且降低幅度更大，说明灭活的植物乳杆菌L-137对LBV88的增殖有一定的促进作用，进而能够进一步抑制大肠杆菌的增殖。
灭活植物乳杆菌L-137对LBV88对植物乳杆菌生长起着促进作用原因：L-137具有较厚的细胞壁，细胞壁含有不同种类的多糖，随着植物乳杆菌的灭活，细胞壁的成分，如多糖更容易脱落，某种多糖或数种多糖或其他成分可能参与LBV88内相应的循环，进而形成对LBV88的生长代谢起促进效果。也不排除是灭活菌体的胞内成分，随着灭活后更易溢出胞外。对活性成分的筛选，也是进一步研究的方向。
表2 灭活的植物乳杆菌L-137促进LBV88而抑制大肠杆菌菌落情况
液体培养14 h后取菌液，稀释至合适浓度后进行涂板，单独加入灭活的植物乳杆菌L-137，大肠杆菌的菌落数有所降低，说明灭活的植物乳杆菌L-137对大肠杆菌的繁殖具有一定的抑制效果；加入LBV88的大肠杆菌菌落数大范围下降，也说明了益生菌的增殖对大肠杆菌形成了竞争性抑制。而比较加入益生菌LBV88和加入益生菌LBV88和灭火的植物乳杆菌L-137的情况，说明灭活的植物乳杆菌L-137对益生菌LBV88的增殖有促进作用，进而进一步的降低大肠杆菌的增殖。
由表3，表4可知，灭活的植物乳杆菌L-137对卷曲乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、格氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、瑞士乳杆菌、干酪乳酸杆菌、嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌、罗伊氏乳酸杆菌的增殖均有一定的促进作用。可见灭活的植物乳杆菌L-137是对乳杆菌这类具有代表性的菌类均有效果。
试验例1.2 混菌的抑菌效果实验：挑选合适的培养好n株的益生菌（以两株菌鼠李糖乳酸杆菌 Lactobacillus rhamnosus GR-1 (ATCC 55826)和罗伊氏乳酸杆菌Lactobacillus reuteri RC-14 (ATCC 55845)为例）稀释至终浓度为 OD600=1.0，各取1/nml（各取0.5 ml），作为一份益生菌混液。活化大肠杆菌后，挑取新鲜的单菌落转接至LB培养基中，37℃，120 rpm 培养12-18 h，收集此时的菌液，按5%接种量转接至新的LB培养基中，并混合相应稀释至 OD600=1.0的灭活的植物乳杆菌L-137、益生菌混液各1 ml至发酵培养基中，37℃，120rpm培养14h，记录14 h的pH值，取菌液进行稀释涂布，37℃倒置过夜培养，进行菌落计数。
实验结果如表3所示，表明灭活的植物乳杆菌L-137与益生菌的组合同样达到抑制大肠杆菌的效果，且灭活的植物乳杆菌L-137与益生菌的组合更能够更好的维持阴道健康菌群的多样性，恢复阴道菌群的稳态，对大肠杆菌的抑制效果更加明显。
表3 灭活的植物乳杆菌L-137促进不同杆菌抑制大肠杆菌液体发酵情况
表4 不同序号的菌种以及其种类
实验例二 小兔阴道抑菌性实验
本发明实施例二以兔为模型，结果显示出口服后生元和女性益生菌对阴道菌群的改善的非常明显。对于口服女性益生菌对阴道菌群的改善，作用机理还未完全明晰，一般认同的是益生菌迁移，即肛门到阴道的益生菌迁移。不同地区和类型的报道，也佐证了口服益生菌的效果。如《口服微生态制剂对孕妇肠道和阴道大肠杆菌 K1 和 B 族链球菌定殖的干预》，方恋，微生物学报，2018, 58(11): 1989-1996；又如，US8846027B2公开了几种女性益生菌及其组合，并公开了其在口服上和阴道上的在改善阴道菌群的应用。
1.致病菌的培养及菌悬液的制备：
致病菌培养：将本实验室保藏的大肠杆菌平板活化后，转接至装液量为30ml的250 ml的LB液体培养基中，将摇瓶放于37℃，220 rpm旋转摇床中培养，培养12-18 h后，4℃，4000rpm条件下离心收集菌体。
将本实验室保藏的白色念珠菌平板活化后，转接至装液量为30ml的250 ml 的YPD液体培养基中，将摇瓶置于30℃，220 rpm旋转摇床中培养，培养24-36 h后，4℃，4000 rpm条件下离心收集菌体。
菌悬液制备：将收集的菌体置于生理盐水中，稀释成OD600=10的菌悬液，立即使用或置于冰箱中备用。
2.小兔模型
细菌性阴道炎模型小兔：取体重为2 kg的无阴道炎症的健康的实验兔作为实验对象。取制备好的高浓度的大肠杆菌菌悬液0.5 ml，用带导管的注射器，注射入小兔阴道深处，并将小兔倒置放置2 min。每天一次，连续一周进行注射。取小兔阴道分泌物做临床检测，规定小兔阴道出现明显红肿，阴道镜检中出现典型致病菌增多、胺实验后呈阳性，阴道pH值较原先有显著升高（pH升高量>1），即为模型构造成功。
霉菌性阴道炎模型小兔：制备方式与细菌性阴道炎类似，将大肠杆菌菌悬液替换为白色念珠菌菌悬液。
3.阴道炎症改善实验
细菌性阴道炎症的改善：将建模成功的具有阴道炎症的5只小兔和1只健康小兔作为实验对象，对造模成功的4只小兔分别以5 ml的液体进行灌胃，1只健康小兔和1只造模小兔进行5ml生理盐水灌胃，每日一次，连续一周。一周后对小兔进行处死。取处死小兔的阴道进行10 ml无菌生理盐水的冲洗，收集冲洗液。将冲洗液稀释后，进行菌种的鉴别和计数。重复六组实验。
5 ml的液体分别为：1.含1份益生菌菌悬液 5 ml的液体；2.含2份益生菌的菌悬液5 ml的液体；3.含1份后生元的悬液 5 ml的液体；4.含1份产品菌悬液的5 ml的液体。以上1~5的悬液代表按照一份为按照实施例11的配比，将灭活的植物乳杆菌L-137、益生菌及其组合物制成OD600=10的菌悬液。
菌种的鉴别和计数：取收集的冲洗液，按照细菌/真菌DNA提取试剂盒说明书的方法进行混合液的DNA提取。以提取的DNA为模板进行菌株多样性测序。本次鉴定只针对乳酸杆菌、大肠杆菌和白色念珠菌。
霉菌性阴道炎症组实验与细菌性阴道炎症组试验方法类似。
由图2和图3，可以看出1.对细菌性阴道炎和霉菌性阴道炎组菌株分布的改善来说，改善效果总体呈现着：1份后生元+1份益生菌的组合>2份益生菌>1份益生菌>1份后生元的趋势。从菌体分布来说，口服益生菌的方式是能够带来阴道处菌群分布的改善的。
2. 对细菌性阴道炎和霉菌性阴道炎组的改善来说，对细菌性阴道炎的改善更明显。这可能是因为真菌性微生物的细胞壁更厚更能够抵御环境变化带来的影响。
3.对pH的改善来说，改善效果总体也呈现着：1份后生元+1份益生菌的组合>2份益生菌>1份益生菌>1份后生元的趋势。
综上，本发明中的植物乳杆菌L137对女性益生菌具有促进生长定植的作用，进一步的维持阴道菌群平衡和pH稳定。强化阴道粘膜免疫防御机能。辅助治疗阴道炎以及预防阴道炎的发生和复发。
本技术领域技术人员可以理解，除非另外定义，这里使用的所有术语(包括技术术语和科学术语)，具有与本发明所属领域中的普通技术人员的一般理解相同的意义。还应该理解的是，诸如通用字典中定义的那些术语，应该被理解为具有与现有技术的上下文中的意义一致的意义，并且除非像这里一样被特定定义，否则不会用理想化或过于正式的含义来解释。
应当理解，以上借助优选实施例对本发明的技术方案进行的详细说明是示意性的而非限制性的。本领域的普通技术人员在阅读本发明说明书的基础上可以对各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。
Claims (9)
1.一种组合物，其特征在于，包含植物乳杆菌L-137和至少一种阴道益生菌，所述阴道益生菌为卷曲乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、格氏乳杆菌、詹氏乳杆菌、瑞士乳杆菌、干酪乳酸杆菌、嗜酸乳杆菌、副干酪乳杆菌、罗伊氏乳酸杆菌、植物乳杆菌中的一种或两种以上的组合。
2.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，所述植物乳杆菌L-137中含有灭活的植物乳杆菌L-137。
3.根据权利要求2所述的组合物，其特征在于，所述灭活的植物乳杆菌L-137为热灭活菌体。
4.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，植物乳杆菌L-137与女性益生菌用量比例为0.25mg:100亿女性益生菌至1000mg:100亿女性益生菌；
或者植物乳杆菌L-137与女性益生菌用量比例为：1亿植物乳杆菌L-137：100亿女性益生菌至1000亿植物乳杆菌L-137：100亿女性益生菌。
5.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，组合物中女性益生菌的用量为1千万/g-1千亿/g，或为1千万/ml-1千亿/ml。
6.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，还包含植物提取物，和/或生理可接受的辅料。
7.根据权利要求1所述的组合物，其特征在于，女性益生菌采用微胶囊化处理。
8.一种权利要求1-7之一所述的组合物在制备阴道健康的清洗护理产品、保健品、抑菌产品、化妆品、饲料、饲料添加剂、药物中的应用。
9.一种产品，其特征在于，包含权利要求1-7之一的组合物，所述产品为药物、保健品、膳食补充剂、普通食品、抑菌产品、清洗护理产品、化妆品、饲料或饲料添加剂。
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