CN112326956A - 一种肿瘤特异性生长因子胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种肿瘤特异性生长因子胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法,其中肿瘤特异性生长因子胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒包括试剂R1和试剂R2。本发明采用多株多抗分别交联到胶乳微球上混合后形成的胶乳增强免疫比浊法试剂盒,相比酶联免疫法,该方法测定TSGF,可在全自动生化分析仪上使用,成本低廉且自动化高节省检测时间,相比于比色法该方法具有更高的灵敏度和特异度。
Description
技术领域
本发明涉及免疫学测定分析领域,具体涉及一种肿瘤特异性生长因子胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法。
背景技术
恶性肿瘤的早期诊断一直是目前十分备受关注的问题。人们虽普遍认为AFP是最好的肝癌诊断指标,但有关文献报道,AFP在肝癌诊断中的阳性率只有60%~70%,CA199对胰腺癌诊断的敏感性为70%,CEA对肺癌诊断的灵敏度仅为65%。由此可见各项指标单独测定对恶性肿瘤的诊断有一定的局限性。
肿瘤特异性生长因子(Tumor specific growth factors,TSGF)是1989年加拿大多伦多大学学者发现的肿瘤标志物,它是肿瘤在形成和生长时促使肿瘤周边毛细血管大量增殖并释放到外周血液中的因子,TSGF属于非血细胞生长因子大类,相对分子质量不大,是数种国际公认的与恶性肿瘤生长相关的糖类物质和代谢物的统称,此类物质包括上皮生长因子(Epidermal Growth Factor,EGF)、神经细胞生长因子(Nerve Growth Factor,NGF)、转化生长因子(Transforming Growth Factor-β,TGF-β)、肝细胞生长因子(HepatocyteGrowth Factor,HGF)等。能促进肿瘤形成、生长、扩散,其机制可能是:直接诱导靶细胞内与恶性转化有关的显性表达;抑制机体免疫监视系统;使机体细胞因子网络调节严重失控,并可抑制IgG、IgM产生,影响某些克隆的T淋巴细胞分化,增加肿瘤细胞对自然杀伤(NK)细胞的抵抗性,促进肿瘤血管增生。
目前,市售的肿瘤特异性生长因子(TSGF)检测试剂盒主要是采用酶联免疫法和比色法,酶联免疫法存在灵敏度低、线性范围窄、操作步骤复杂、耗时等问题,且无法满足临床应用要求;比色法存在灵敏度低、特异度差的问题。因此,目前尚需一种污染小、灵敏度高、操作简单、自动化程度高、特异性好、成本低的肿瘤特异性生长因子(TSGF)的快速定量检测方法。
发明内容
本发明提供了一种肿瘤特异性生长因子胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒及其制备方法,可代替酶联免疫和比色检测方法,提高检测效率,扩大检测样本量。同时该方法和比色法相关性良好,且适用于各类全自动生化分析仪分析,便于临床应用。
为实现上述目的,根据本发明的一个方面,提供了一种肿瘤特异性生长因子胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒,包括试剂R1和试剂R2;
所述试剂R1包括如下组分:
所述试剂R2包括如下组分:
所述混合多克隆抗体胶乳微球为EGF、NGF、TGF-β、HGF四种多克隆抗体胶乳微球按1:2:1:1混合后的混合物。
进一步的,四种所述多克隆抗体胶乳微球由EGF、NGF、TGF-β、HGF四种多克隆抗体分别交联到聚苯乙烯胶乳微球上得到的产物。
进一步的,还包括试剂校准品,所述试剂校准品包括如下组分:
进一步的,所述试剂盒的分析方法如下:
分析方法:两点终点法;
反应方向:上升反应;
校准方式:Logit-Log(4P);
测定波长:570nm;
测定温度:37℃;
样本:试剂R1:试剂R2=20:180:60(μL);
测试步骤:吸取20μL样本,加入180μL试剂R1,37℃孵育5min,加入60μL试剂R2,1min后读取吸光值A1,3min后读取吸光值A2,计算ΔA。
根据本发明的另一个方面,提供了一种肿瘤特异性生长因子胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒的制备方法,包括如下步骤:
步骤1,试剂R1的制备方法:称取试剂R1配方中的MES缓冲液、PEG6000、BSA、NaCl、MgCl2、NaN3和EDTA,溶剂为纯化水,混合后得到试剂R1;
步骤2,试剂R2的制备方法:称取试剂R2配方中的MES缓冲液、BSA、NaCl、混合多克隆抗体的胶乳微球、曲拉通-100、NaN3和EDTA,溶剂为纯化水,混合后得到试剂R2;
步骤3,试剂校准品的制备方法:称取试剂校准品配方中的MES缓冲液、BSA、NaCl、EGF、NGF、TGF-β、HGF、NaN3和EDTA,溶剂为纯化水,混合后得到试剂校准品;
步骤4,试剂盒的制备方法:将步骤1与步骤2得到的试剂R1和试剂R2按照体积比3:1分别放置在试剂盒内,并将步骤3得到的试剂校准品放置在试剂盒内,从而得到肿瘤特异性生长因子胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒。
进一步的,试剂R2中使用到的混合多克隆抗体胶乳微球的制备方法包括将EGF、NGF、TGF-β、HGF多克隆抗体分别交联至直径100~300nm聚苯乙烯胶乳微球,得到四种多克隆抗体胶乳微球,将四种多克隆抗体胶乳微球按照1:2:1:1进行混合得到混合多克隆抗体胶乳微球。
胶乳增强免疫比浊法是在高分子胶乳微球的表面交联抗体,当交联有抗体的微球与抗原结合后,在短时间内会迅速聚集在一起,改变了反应液透光性能(即吸光度);而且,反应液透光性能的改变与被测抗原的浓度有较强的相关性,在一定范围内可以反映被测抗原的浓度;胶乳增强免疫比浊法是在均相反应体系中进行抗原、抗体反应及结果的测定,抗原、抗体反应后,直接测定反应液的吸光度值,几分钟就能获得结果,成本低且省时省力;此外,该方法可以在大型全自动生化仪上使用,不需要添置额外的设备,胶乳增强免疫比浊法操作步骤的简化也相应地避免了许多人为操作因素和试剂、环境等外界因素的干扰,稳定性和重复性都较好,能较真实地反映被测物质的含量。
本发明与现有技术相比,有如下特点:
采用多株多抗分别交联到胶乳微球上混合后形成的胶乳增强免疫比浊法试剂盒,相比酶联免疫法,该方法测定TSGF,可在全自动生化分析仪上使用,成本低廉且自动化高节省检测时间,相比于比色法该方法具有更高的灵敏度和特异度。
附图说明
图1为本发明一实施例的试剂盒与比色法测试结果的相关性曲线图。
图2为本发明一实施例的试剂盒线性范围验证图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明的一部分实施例,而不是全部的实施例。在不冲突的情况下,本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。
实施例1:
一种肿瘤特异性生长因子胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒,包括试剂R1和试剂R2;
所述试剂R1包括如下组分:
所述试剂R2包括如下组分:
所述混合多克隆抗体胶乳微球为EGF、NGF、TGF-β、HGF四种多克隆抗体胶乳微球按1:2:1:1混合后的混合物。
四种所述多克隆抗体胶乳微球由EGF、NGF、TGF-β、HGF四种多克隆抗体分别交联到聚苯乙烯胶乳微球上得到的产物。
还包括试剂校准品,所述试剂校准品包括如下组分:
所述试剂盒的分析方法如下:
分析方法:两点终点法;
反应方向:上升反应;
校准方式:Logit-Log(4P);
测定波长:570nm;
测定温度:37℃;
样本:试剂R1:试剂R2=20:180:60(μL);
测试步骤:吸取20μL样本,加入180μL试剂R1,37℃孵育5min,加入60μL试剂R2,1min后读取吸光值A1,3min后读取吸光值A2,计算ΔA。
一种肿瘤特异性生长因子胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒的制备方法,包括如下步骤:
步骤1,试剂R1的制备方法:称取试剂R1配方中的MES缓冲液、PEG6000、BSA、NaCl、MgCl2、NaN3和EDTA,溶剂为纯化水,混合后得到试剂R1;
步骤2,试剂R2的制备方法:称取试剂R2配方中的MES缓冲液、BSA、NaCl、混合多克隆抗体的胶乳微球、曲拉通-100、NaN3和EDTA,溶剂为纯化水,混合后得到试剂R2;
步骤3,试剂校准品的制备方法:称取试剂校准品配方中的MES缓冲液、BSA、NaCl、EGF、NGF、TGF-β、HGF、NaN3和EDTA,溶剂为纯化水,混合后得到试剂校准品;
步骤4,试剂盒的制备方法:将步骤1与步骤2得到的试剂R1和试剂R2按照体积比3:1分别放置在试剂盒内,并将步骤3得到的试剂校准品放置在试剂盒内,从而得到肿瘤特异性生长因子胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒。
试剂R2中使用到的混合多克隆抗体胶乳微球的制备方法包括将EGF、NGF、TGF-β、HGF多克隆抗体分别交联至直径100nm聚苯乙烯胶乳微球,得到四种多克隆抗体胶乳微球,将四种多克隆抗体胶乳微球按照1:2:1:1进行混合得到混合多克隆抗体胶乳微球。
实施例2:
一种肿瘤特异性生长因子胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒,包括试剂R1和试剂R2;
所述试剂R1包括如下组分:
所述试剂R2包括如下组分:
所述混合多克隆抗体胶乳微球为EGF、NGF、TGF-β、HGF四种多克隆抗体胶乳微球按1:2:1:1混合后的混合物。
四种所述多克隆抗体胶乳微球由EGF、NGF、TGF-β、HGF四种多克隆抗体分别交联到聚苯乙烯胶乳微球上得到的产物。
还包括试剂校准品,所述试剂校准品包括如下组分:
所述试剂盒的分析方法如下:
分析方法:两点终点法;
反应方向:上升反应;
校准方式:Logit-Log(4P);
测定波长:570nm;
测定温度:37℃;
样本:试剂R1:试剂R2=20:180:60(μL);
测试步骤:吸取20μL样本,加入180μL试剂R1,37℃孵育5min,加入60μL试剂R2,1min后读取吸光值A1,3min后读取吸光值A2,计算ΔA。
一种肿瘤特异性生长因子胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒的制备方法,包括如下步骤:
步骤1,试剂R1的制备方法:称取试剂R1配方中的MES缓冲液、PEG6000、BSA、NaCl、MgCl2、NaN3和EDTA,溶剂为纯化水,混合后得到试剂R1;
步骤2,试剂R2的制备方法:称取试剂R2配方中的MES缓冲液、BSA、NaCl、混合多克隆抗体的胶乳微球、曲拉通-100、NaN3和EDTA,溶剂为纯化水,混合后得到试剂R2;
步骤3,试剂校准品的制备方法:称取试剂校准品配方中的MES缓冲液、BSA、NaCl、EGF、NGF、TGF-β、HGF、NaN3和EDTA,溶剂为纯化水,混合后得到试剂校准品;
步骤4,试剂盒的制备方法:将步骤1与步骤2得到的试剂R1和试剂R2按照体积比3:1分别放置在试剂盒内,并将步骤3得到的试剂校准品放置在试剂盒内,从而得到肿瘤特异性生长因子胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒。
试剂R2中使用到的混合多克隆抗体胶乳微球的制备方法包括将EGF、NGF、TGF-β、HGF多克隆抗体分别交联至直径200nm聚苯乙烯胶乳微球,得到四种多克隆抗体胶乳微球,将四种多克隆抗体胶乳微球按照1:2:1:1进行混合得到混合多克隆抗体胶乳微球。
实施例3:
一种肿瘤特异性生长因子胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒,包括试剂R1和试剂R2;
所述试剂R1包括如下组分:
所述试剂R2包括如下组分:
所述混合多克隆抗体胶乳微球为EGF、NGF、TGF-β、HGF四种多克隆抗体胶乳微球按1:2:1:1混合后的混合物。
进一步的,四种所述多克隆抗体胶乳微球由EGF、NGF、TGF-β、HGF四种多克隆抗体分别交联到聚苯乙烯胶乳微球上得到的产物。
进一步的,还包括试剂校准品,所述试剂校准品包括如下组分:
进一步的,所述试剂盒的分析方法如下:
分析方法:两点终点法;
反应方向:上升反应;
校准方式:Logit-Log(4P);
测定波长:570nm;
测定温度:37℃;
样本:试剂R1:试剂R2=20:180:60(μL);
测试步骤:吸取20μL样本,加入180μL试剂R1,37℃孵育5min,加入60μL试剂R2,1min后读取吸光值A1,3min后读取吸光值A2,计算ΔA。
根据本发明的另一个方面,提供了一种肿瘤特异性生长因子胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒的制备方法,包括如下步骤:
步骤1,试剂R1的制备方法:称取试剂R1配方中的MES缓冲液、PEG6000、BSA、NaCl、MgCl2、NaN3和EDTA,溶剂为纯化水,混合后得到试剂R1;
步骤2,试剂R2的制备方法:称取试剂R2配方中的MES缓冲液、BSA、NaCl、混合多克隆抗体的胶乳微球、曲拉通-100、NaN3和EDTA,溶剂为纯化水,混合后得到试剂R2;
步骤3,试剂校准品的制备方法:称取试剂校准品配方中的MES缓冲液、BSA、NaCl、EGF、NGF、TGF-β、HGF、NaN3和EDTA,溶剂为纯化水,混合后得到试剂校准品;
步骤4,试剂盒的制备方法:将步骤1与步骤2得到的试剂R1和试剂R2按照体积比3:1分别放置在试剂盒内,并将步骤3得到的试剂校准品放置在试剂盒内,从而得到肿瘤特异性生长因子胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒。
进一步的,试剂R2中使用到的混合多克隆抗体胶乳微球的制备方法包括将EGF、NGF、TGF-β、HGF多克隆抗体分别交联至直径300nm聚苯乙烯胶乳微球,得到四种多克隆抗体胶乳微球,将四种多克隆抗体胶乳微球按照1:2:1:1进行混合得到混合多克隆抗体胶乳微球。
肿瘤特异性生长因子胶乳增强免疫比浊法试剂盒的评价
1、相关性验证
如图1所示,利用实施例2的配方配制试剂,与比色法进行对照检测,检测50份临床血清样本,检测结果如下表1,获得了本发明试剂盒与比色法相关性曲线,通过检测结果显示,本案试剂与比色法的线性相关曲线为y=0.8569x-3.5032,相关系数R2=0.9805,说明两者较大的相关性。
表1本发明试剂盒与比色法检测相关性比对值
2、线性范围验证
如图2所示,使用100ng/ml的校准液,稀释五个梯度,使用本发明试剂盒测定各测试品浓度,以稀释浓度为自变量,以测定结果为因变量求出线性回归方程,计算测定结果的相对偏差,如表2所示,结果显示测定结果与稀释浓度之间的线性回归方程为y=0.9769x+0.6509,相关系数R2=0.9992,说明线性关系良好,线性范围可达100mg/L。
表2本发明试剂盒线性范围验证
3、准确度及精密验证
取高值血清质控和低值血清各一份,使用所述试剂盒检测6次,取均值,与质控靶值进行比对。结果表明检测值较靶值相对偏差较小,CV较小,准确度及精密度较高,结果见表3。
表3所述试剂盒准确度验证结果
对于本领域技术人员而言,显然本发明不限于上述示范性实施例的细节,而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下,能够以其他的具体形式实现本发明。因此,无论从哪一点来看,均应将实施例看作是示范性的,而且是非限制性的,本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定,因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
Claims (6)
2.如权利要求1所述的肿瘤特异性生长因子胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒,其特征在于:四种所述多克隆抗体胶乳微球由EGF、NGF、TGF-β、HGF四种多克隆抗体分别交联到聚苯乙烯胶乳微球上得到的产物。
4.如权利要求1或2所述的肿瘤特异性生长因子胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒,其特征在于:所述试剂盒的分析方法如下:
分析方法:两点终点法;
反应方向:上升反应;
校准方式:Logit-Log(4P);
测定波长:570nm;
测定温度:37℃;
样本:试剂R1:试剂R2=20:180:60(μL);
测试步骤:吸取20μL样本,加入180μL试剂R1,37℃孵育5min,加入60μL试剂R2,1min后读取吸光值A1,3min后读取吸光值A2,计算ΔA。
5.一种肿瘤特异性生长因子胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒的制备方法,其特征在于:包括如下步骤:
步骤1,试剂R1的制备方法:称取试剂R1配方中的MES缓冲液、PEG6000、BSA、NaCl、MgCl2、NaN3和EDTA,溶剂为纯化水,混合后得到试剂R1;
步骤2,试剂R2的制备方法:称取试剂R2配方中的MES缓冲液、BSA、NaCl、混合多克隆抗体的胶乳微球、曲拉通-100、NaN3和EDTA,溶剂为纯化水,混合后得到试剂R2;
步骤3,试剂校准品的制备方法:称取试剂校准品配方中的MES缓冲液、BSA、NaCl、EGF、NGF、TGF-β、HGF、NaN3和EDTA,溶剂为纯化水,混合后得到试剂校准品;
步骤4,试剂盒的制备方法:将步骤1与步骤2得到的试剂R1和试剂R2按照体积比3:1分别放置在试剂盒内,并将步骤3得到的试剂校准品放置在试剂盒内,从而得到肿瘤特异性生长因子胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒。
6.如权利要求5所述的肿瘤特异性生长因子胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒的制备方法,其特征在于:试剂R2中使用到的混合多克隆抗体胶乳微球的制备方法包括将EGF、NGF、TGF-β、HGF多克隆抗体分别交联至直径100~300nm聚苯乙烯胶乳微球,得到四种多克隆抗体胶乳微球,将四种多克隆抗体胶乳微球按照1:2:1:1进行混合得到混合多克隆抗体胶乳微球。
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Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114935655A (zh) * | 2022-06-16 | 2022-08-23 | 安徽农业大学 | 一种猪il-17胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒及其制备使用方法 |
Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1362623A (zh) * | 2002-01-21 | 2002-08-07 | 陕西超英生物医学研究开发有限公司 | 一种多元免疫微球、该多元免疫微球的制备技术以及对该多元免疫微球进行检测的方法 |
CN101097217A (zh) * | 2006-06-29 | 2008-01-02 | 王珊珊 | 一种提高血清特异性生长因子免疫学测定灵敏度的技术 |
EP3102945A1 (en) * | 2014-02-04 | 2016-12-14 | CellTrend GmbH | Diagnosis of cancer by detecting auto-antibodies against epidermal growth factor (egf) |
CN109975536A (zh) * | 2019-04-11 | 2019-07-05 | 安徽大千生物工程有限公司 | 抗缪勒激素胶乳增强比浊法检测试剂盒及其制备使用方法 |
CN111239406A (zh) * | 2020-01-17 | 2020-06-05 | 王兰珍 | 一种肝细胞生长因子胶乳免疫比浊检测试剂盒及其制备方法和应用 |
CN111721934A (zh) * | 2020-06-24 | 2020-09-29 | 湖南新大陆生物技术有限公司 | 一种改良型特异性生长因子检测试剂盒及其应用 |
-
2020
- 2020-12-03 CN CN202011408347.1A patent/CN112326956A/zh active Pending
Patent Citations (6)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN1362623A (zh) * | 2002-01-21 | 2002-08-07 | 陕西超英生物医学研究开发有限公司 | 一种多元免疫微球、该多元免疫微球的制备技术以及对该多元免疫微球进行检测的方法 |
CN101097217A (zh) * | 2006-06-29 | 2008-01-02 | 王珊珊 | 一种提高血清特异性生长因子免疫学测定灵敏度的技术 |
EP3102945A1 (en) * | 2014-02-04 | 2016-12-14 | CellTrend GmbH | Diagnosis of cancer by detecting auto-antibodies against epidermal growth factor (egf) |
CN109975536A (zh) * | 2019-04-11 | 2019-07-05 | 安徽大千生物工程有限公司 | 抗缪勒激素胶乳增强比浊法检测试剂盒及其制备使用方法 |
CN111239406A (zh) * | 2020-01-17 | 2020-06-05 | 王兰珍 | 一种肝细胞生长因子胶乳免疫比浊检测试剂盒及其制备方法和应用 |
CN111721934A (zh) * | 2020-06-24 | 2020-09-29 | 湖南新大陆生物技术有限公司 | 一种改良型特异性生长因子检测试剂盒及其应用 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
薛国平等: "免疫透射比浊法测定肿瘤特异性生长因子的价值", 《现代医院》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN114935655A (zh) * | 2022-06-16 | 2022-08-23 | 安徽农业大学 | 一种猪il-17胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒及其制备使用方法 |
CN114935655B (zh) * | 2022-06-16 | 2024-02-20 | 安徽农业大学 | 一种猪il-17胶乳增强免疫比浊法检测试剂盒及其制备使用方法 |
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