CN112326539A - 一种全器官细胞增殖定量检测方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种全器官细胞增殖定量检测方法，包括：S1，EdU处理全器官组织，机械破碎组织后孵育细胞；S2，加入多聚甲醛固定细胞状态；S3，加入荧光染料标记细胞中带有EdU的细胞；S4，加入DAPI荧光标记全部细胞；S5，将标记后的细胞重悬于PBS溶液中，定量检测细胞总数量和增殖数量。本发明提供的方法避免了传统切片检测方法难以定量分析整体组织细胞增殖的问题，对于定量分析不均质组织的细胞增殖情况十分适用。
Description
技术领域
本发明涉及细胞检测技术领域，具体涉及一种全器官细胞增殖定量检测方法。
背景技术
对于传统的细胞增殖检测技术，通常采用冰冻切片或石蜡切片的方式获得目标组织截面，再通过标记该截面上的增殖细胞来分析整体组织的细胞增殖情况。而对于脑质等不均质组织来说，采用组织切片的方法常会出现不同脑截面中增殖细胞比例不一致的情况，影响定性分析。此外，因获得相对一致的脑组织截面困难，从而难以定量分析该组织的整体细胞增殖情况。
发明内容
(一)要解决的技术问题
针对上述问题，本发明提供了一种全器官细胞增殖定量检测方法，用于至少部分解决传统方法难以定量分析组织的整体细胞增殖情况等技术问题。
(二)技术方案
本发明提供了一种全器官细胞增殖定量检测方法，包括：S1，5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2’-deoxyuridine，EdU)处理全器官组织，机械破碎组织后孵育细胞；S2，加入多聚甲醛固定细胞状态；S3，加入荧光染料标记细胞中带有EdU的细胞；S4，加入4′，6-二脒基-2-苯基吲哚(4′，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI)荧光标记全部细胞；S5，将标记后的细胞重悬于磷酸缓冲盐溶液(Phosphate Buffer Saline，PBS)溶液中，定量检测细胞总数量和增殖数量。
进一步地，S1中孵育细胞具体包括在含有木瓜蛋白酶的哌嗪-1，4-二乙磺酸溶液中孵育细胞。
进一步地，木瓜蛋白酶的浓度为200～500μg/mL。
进一步地，S2之前还包括：S20，将孵育后的细胞离心，收集解离的细胞。
进一步地，S20中离心加速度为300～400g、温度范围为4℃、时长为8-10min。
进一步地，S3中多聚甲醛的浓度为4％。
进一步地，S2、S3、S4每一操作之后离心洗涤细胞，离心洗涤的离心加速度为300～400g、温度范围为4℃、时长为8～10min。
进一步地，全器官细胞包括爪蛙、斑马鱼、小鼠的全脑细胞。
进一步地，定量检测的方法包括单细胞悬液使用流式细胞仪检测、将单细胞悬液涂至载玻片上制成玻片样品在荧光显微镜下检测。
进一步地，S5中将细胞重悬于PBS溶液后还包括将其置于4℃避光条件下保存备检。
(三)有益效果
本发明实施例提供的一种全器官细胞增殖定量检测方法，可以定量分析不均质组织的整体细胞增殖情况。
附图说明
图1示意性示出了根据本发明实施例一种全器官细胞增殖定量检测方法的流程图；
图2示意性示出了根据本发明实施例非洲爪蛙蝌蚪全脑解离后DAPI染色图片；
图3示意性示出了根据本发明实施例非洲爪蛙蝌蚪全脑解离后EdU染色图片；
图4示意性示出了根据本发明实施例非洲爪蛙蝌蚪全脑解离后DAPI染色图片和EdU染色图片的叠加。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图，对本发明进一步详细说明。
本发明的实施例提供一种全器官细胞增殖定量检测方法，请参见图1，包括：S1，EdU处理全器官组织，机械破碎组织后孵育细胞；S2，加入多聚甲醛固定细胞状态；S3，加入荧光染料标记细胞中带有EdU的细胞；S4，加入DAPI荧光标记全部细胞；S5，将标记后的细胞重悬于PBS溶液中，定量检测细胞总数量和增殖数量。
EdU在细胞增殖时能够插入正在复制的DNA分子中，基于EdU与染料的共轭反应可以进行高效快速的细胞增殖检测分析，可以有效地检测细胞增殖的数量。多聚甲醛用于固定细胞，以维持细胞在后续染色过程中的形态稳定及状态稳定。S3中的荧光染料为与EdU搭配使用的
荧光染料，该荧光染料能与EdU定向结合用于检测增殖细胞数量。DAPI荧光染料能够与DNA强力结合，用于细胞核的染色，以统计总细胞数量。通过EdU阳性细胞数量与DAPI标记的总细胞数量的比值，可反应脑组织中的细胞增殖水平。PBS溶液起分散细胞的作用，并且能够维持溶液中渗透压稳定，便于维持细胞的形态完整。
在上述实施例的基础上，S1中孵育细胞具体包括在含有木瓜蛋白酶的哌嗪-1，4-二乙磺酸溶液中孵育细胞。
木瓜蛋白酶用于解离细胞，哌嗪-1，4-二乙磺酸溶液用于为活细胞提供良好的生存环境。
在上述实施例的基础上，木瓜蛋白酶的浓度为200～500μg/mL。
木瓜蛋白酶的浓度在该范围内具有促进组织解离成为单细胞的技术效果。
在上述实施例的基础上，S2之前还包括：S20，将孵育后的细胞离心，收集解离的细胞。
将孵育后的细胞进行离心后再收集目的在于去除上清液，将细胞从不需要的组分中分离出来。
在上述实施例的基础上，S20中离心加速度为300～400g、温度为4℃、时长为8～10min。
离心加速度、温度、时长在该范围内具有将细胞离心沉底的技术效果。
在上述实施例的基础上，多聚甲醛的浓度为4％。
多聚甲醛的浓度在该范围内具有保存细胞原有形态结构，阻止细胞自溶的优点。
在上述实施例的基础上，S2、S3、S4每一操作之后离心洗涤细胞，离心洗涤的离心加速度为300～400g、温度为4℃、时长为8～10min。
S2、S3、S4每一操作之后都进行离心目的在于去除不必要的组分，更换细胞所处环境。
在上述实施例的基础上，全器官细胞包括爪蛙、斑马鱼、小鼠的全脑细胞。
本发明的方法非常适合用于检测爪蛙、斑马鱼、小鼠的全脑细胞的增殖数量，是因为本方法可以定量表征脑中细胞增殖情况，避免了以切片基础的传统细胞增殖定性表征方法中难以获得具有可比性截面的情况。
在上述实施例的基础上，定量检测的方法包括单细胞悬液使用流式细胞仪检测、将单细胞悬液涂至载玻片上制成玻片样品在荧光显微镜下检测。
方法分别具有能够直接出具定性表征结果及呈现更加直观的荧光图片的优点。
在上述实施例的基础上，S5中将细胞重悬于PBS溶液后还包括将其置于4℃避光条件下保存备检。
4℃避光条件有利于保持细胞中的荧光染料稳定，减缓荧光猝灭的过程。
本发明的一种全器官细胞增殖定量检测技术方法，适用于定量检测非洲爪蛙、斑马鱼及小鼠的脑组织的细胞增殖，避免传统切片检测方法难以定量分析整体组织细胞增殖的问题，对于定量分析不均质组织的细胞增殖情况，此方法十分适用。
下面以一具体实施例对本发明的方法进行详细说明，以非洲爪蛙蝌蚪的全脑组织作为实验材料。
(1)取孵育过EdU的新鲜组织并称重；
(2)称取0.003g木瓜蛋白酶，溶于1mL 1.11mmol/L半胱氨酸盐酸盐及0.64mmol/L乙二胺四乙酸的混合溶液中，室温激活20min；
(3)将20mg新鲜组织浸入含有1mL 10％激活的木瓜蛋白酶的哌嗪-1，4-二乙磺酸溶液的1.5mL离心管中，使用眼科剪破碎组织后置于旋转摇床上26℃孵育10min；
(4)加入50μL DNase I(10mg/mL)，用1mL移液器轻柔吹散组织块，继续置于旋转摇床上26℃孵育20min；
(5)在4℃下，以300g离心10min收集细胞或细胞团；
(6)加入1mL PBS，温和重悬，在4℃下，以300g离心10min，弃上清；
(7)加入4％多聚甲醛重悬细胞，室温放置10-20min，其间每隔2min轻弹管底，使细胞充分接触溶液，在4℃下，以300g离心10min，弃上清；
(8)重复步骤(6)两次；
(9)加入100-200μL
染色液，室温避光放置30min，其间每隔5min轻弹管底，使细胞充分接触溶液，在4℃下，以300g离心10min，弃上清；
(10)重复步骤(6)；
(11)加入100-200μL 1∶1000稀释的DAPI溶液重悬细胞，室温避光放置3min，在4℃下，以300g离心10min，弃上清；
(12)重复步骤(6)两次；
(13)加入适量PBS重悬细胞，4℃避光保存备检。
本发明取孵育过EdU的新鲜组织浸入含有木瓜蛋白酶的哌嗪-1，4-二乙磺酸溶液的离心管中，机械破碎组织后置于旋转摇床上孵育，随后通过300g离心10min收集细胞，然后分别加入4％多聚甲醛固定、
荧光染料标记EdU、DAPI标记细胞核，以上每步操作后都采用300g离心10min的方法进行洗涤，最后重悬于PBS溶液中并于4℃避光保存备检，检测方法包括但不限于流式细胞仪及高内涵成像系统。图2是非洲爪蛙蝌蚪全脑解离后DAPI染色图片，图3是非洲爪蛙蝌蚪全脑解离后EdU染色图片，图4是附图2、附图3的叠加，可以得到DAPI标记的总细胞数为151个，EdU标记的增殖细胞数为25个，该脑中增殖细胞比例为16.6％的结论。
以上所述的具体实施例，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种全器官细胞增殖定量检测方法，包括：
S1，EdU处理全器官组织，机械破碎所述组织后孵育细胞；
S2，加入多聚甲醛固定所述细胞状态；
S3，加入荧光染料标记所述细胞中带有所述EdU的细胞；
S4，加入DAPI荧光标记全部细胞；
S5，将所述标记后的细胞重悬于PBS溶液中，定量检测细胞总数量和增殖数量。
2.根据权利要求1所述的全器官细胞增殖定量检测方法，其特征在于，所述S1中孵育细胞具体包括在含有木瓜蛋白酶的哌嗪-1，4-二乙磺酸溶液中孵育细胞。
3.根据权利要求2所述的全器官细胞增殖定量检测方法，其特征在于，所述木瓜蛋白酶的浓度为200～500μg/mL。
4.根据权利要求1所述的全器官细胞增殖定量检测方法，其特征在于，所述S2之前还包括：
S20，将所述孵育后的细胞离心，收集解离的细胞。
5.根据权利要求4所述的全器官细胞增殖定量检测方法，其特征在于，所述S20中离心加速度为300～400g、温度范围为4℃、时长为8～10min。
6.根据权利要求1所述的全器官细胞增殖定量检测方法，其特征在于，所述S3中多聚甲醛的浓度为4％。
7.根据权利要求1所述的全器官细胞增殖定量检测方法，其特征在于，所述S2、S3、S4每一操作之后离心洗涤细胞，所述离心洗涤的离心加速度为300～400g、温度范围为4℃、时长为8～10min。
8.根据权利要求1所述的全器官细胞增殖定量检测方法，其特征在于，所述全器官细胞包括爪蛙、斑马鱼、小鼠的全脑细胞。
9.根据权利要求1所述的全器官细胞增殖定量检测方法，其特征在于，所述定量检测的方法包括将单细胞悬液使用流式细胞仪检测、将单细胞悬液涂至载玻片上制成玻片样品在荧光显微镜下检测。
10.根据权利要求1所述的全器官细胞增殖定量检测方法，其特征在于，所述S5中将细胞重悬于PBS溶液后还包括将其置于4℃避光条件下保存备检。
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Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102288471A (zh) * | 2011-07-27 | 2011-12-21 | 上海交通大学医学院附属仁济医院 | 一种悬浮细胞的免疫荧光染色方法 |
| US20130045485A1 (en) * | 2010-02-11 | 2013-02-21 | Chemometec A/S | Method for analysis of cellular dna content |
| CN106929484A (zh) * | 2017-03-15 | 2017-07-07 | 山东大学 | 一种乙型肝炎病毒基因组dna的5‑乙炔基‑2’脱氧尿嘧啶核苷的标记和检测方法 |
| CN108449995A (zh) * | 2015-11-06 | 2018-08-24 | 文塔纳医疗系统公司 | 代表性诊断 |
-
2020
- 2020-10-28 CN CN202011175487.9A patent/CN112326539A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20130045485A1 (en) * | 2010-02-11 | 2013-02-21 | Chemometec A/S | Method for analysis of cellular dna content |
| CN102288471A (zh) * | 2011-07-27 | 2011-12-21 | 上海交通大学医学院附属仁济医院 | 一种悬浮细胞的免疫荧光染色方法 |
| CN108449995A (zh) * | 2015-11-06 | 2018-08-24 | 文塔纳医疗系统公司 | 代表性诊断 |
| CN106929484A (zh) * | 2017-03-15 | 2017-07-07 | 山东大学 | 一种乙型肝炎病毒基因组dna的5‑乙炔基‑2’脱氧尿嘧啶核苷的标记和检测方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| CHENBO ZENG 等: "Evaluation of 5-ethynyl-2′-deoxyuridine staining as a sensitive and reliable method for studying cell proliferation in the adult nervous system", 《BRAIN RESEARCH》 * |
| 张赟 等: "《细胞和分子免疫学实用实验技术》", 30 April 2013, 第四军医大学出版社 * |
| 苏程程等: "基于5-乙炔基-2"-脱氧尿苷渗入法的不同细胞增殖检测方法比较", 《武警后勤学院学报(医学版)》 * |
| 苏程程等: "基于5-乙炔基-2'-脱氧尿苷渗入法的不同细胞增殖检测方法比较", 《武警后勤学院学报(医学版)》 * |
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