CN112301004B - 一种灭活猪细小病毒的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种灭活猪细小病毒的方法,使含有猪细小病毒的产品在质量百分浓度为70%±3%的乙醇溶液的存在下,在49℃±5℃的条件下处理以对所述产品中的猪细小病毒灭活。本发明中猪细小病毒的灭活剂乙醇溶液环保无毒,本发明的灭活方法高效简单且灭活温度温和。

Description

一种灭活猪细小病毒的方法
技术领域
本发明涉及生物医药行业病毒灭活领域,尤其涉及一种灭活猪细小病毒的方法。
背景技术
猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)属于细小病毒科(Parvoviridae)细小病毒属(Parvovirus),同属病毒中主要有猪细小病毒(PPV)、牛细小病毒(BPV)、犬细小病毒(CPV)等。猪细小粒子直径约18~24nm,外观呈六角形或圆形,无囊膜。猪细小病毒会导致母猪不孕、流产,产死胎、木乃伊胎等,给养猪业造成严重损失。猪细小病毒对热、酸碱具有较强抵抗力,能抵抗乙醚、氯仿等脂溶剂。
目前,普遍使用的灭活剂有甲醛、β-丙内酯(β-PL)、N-乙酰乙烯亚胺(AEI)、二乙烯亚胺(BEI)等。专利CN 107648599 A公开了一种利用甲醛作为灭活剂灭活猪细小病毒的方法,37℃灭活18~24h,该方法以甲醛作为灭活剂,甲醛有毒易致癌,不环保;专利CN102688485 A公开了一种利用二乙烯亚胺作为灭活剂灭活猪细小病毒的方法,32℃,灭活72h,猪细小病毒可彻底灭活,该方法灭活时间长且易使样品中核酸或蛋白收率变低;中国文献《不同配方的冻干保护剂对人凝血因子Ⅷ制品干热法灭活猪细小病毒效果的影响》(《中国生物制品学杂志》 2013年12期)采用干热法灭活猪细小病毒,在100℃、30min的条件下,可有效灭活配方A制备的人凝血因子Ⅷ半成品中的指示病毒PPV,该方法灭活时间虽然缩短但灭活温度高,破坏病毒蛋白。如何在短时间、温度适宜、灭活剂环保的情况下灭活猪细小病毒对工业生产具有重要意义。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种环保、温度适宜、高效灭活猪细小病毒的方法。
为达到上述目的,本发明采用的技术方案是:
本发明的一方面提供一种灭活猪细小病毒的方法,使含有猪细小病毒的产品在质量百分浓度为70%±3%的乙醇溶液的存在下,在49℃±5℃的条件下处理以对所述产品中的猪细小病毒灭活。
优选地,所述乙醇溶液的质量百分浓度为70%±2%;处理的温度为49℃±3℃。
进一步优选地,所述乙醇溶液的质量百分浓度为70%±1%;处理的温度为49℃±2℃。
进一步优选地,所述乙醇溶液的质量百分浓度为70%±0.5%;处理的温度为49℃±1℃。
优选地,控制处理的时间为30~50min。
进一步优选地,控制处理的时间为35~45min。
优选地,所述处理方法为在控制温度的条件下,使所述产品静置在所述乙醇溶液中。
优选地,所述乙醇可通过低温旋转蒸发去除。
优选地,所述乙醇溶液与所述猪细小病毒的投料质量比为40~60:1,优选为50~60:1。
优选地,所述产品为生物制品。
本发明的另一方面提供质量百分浓度为70%±3%的乙醇溶液结合49℃±5℃的条件在灭活猪细小病毒中的应用。
由于上述技术方案运用,本发明与现有技术相比具有下列优点:
本发明人意外发现当采用特定浓度的乙醇溶液配合特定温度时,能够高效灭活猪细小病毒,并且该方法环保无毒,条件温和,不易对产品造成不良影响。
附图说明
图1为阴性ST细胞的显微镜图;
图2 PPV病毒接种于ST细胞的显微镜图;
图3为实施例1处理后的PPV病毒接种于ST细胞的显微镜图;
图4为实施例1和对比例1-2的病毒滴度随时间变化趋势图;
图5为对比例3至6的病毒滴度随时间变化趋势图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步描述。但本发明并不限于以下实施例。实施例中采用的实施条件可以根据具体使用的不同要求做进一步调整,未注明的实施条件为本行业中的常规条件。本发明各个实施方式中所涉及到的技术特征只要彼此之间未构成冲突就可以相互组合。
如图1-2所示,分别在显微镜中观察了阴性ST细胞、接种PPV病毒的ST细胞的形态,PPV可以侵染ST细胞形成病变。
实施例1
配制质量百分浓度为70%乙醇溶液,向其中加入PPV,乙醇溶液与PPV的质量比为50:1,49℃静置40min,病毒滴度从5.68 lgTCID50降至1.03 lgTCID50。40min内病毒下降趋势见图5。
将上述处理后的PPV接种于ST细胞,用显微镜观察ST细胞,如图3所示,ST细胞正常,可见,处理后的病毒基本灭活。
对比例1
将PPV于49℃下静置40min,病毒滴度从5.68 lgTCID50降至4.93lgTCID50。40min病毒下降趋势见图4。
对比例2
配制质量百分浓度为70%乙醇溶液,向其中加入PPV,乙醇溶液与PPV的质量比为50:1,常温静置40min,病毒滴度从5.68 lgTCID50降至5.30 lgTCID50。40min内病毒下降趋势见图4。
对比例3
配置质量百分浓度为70%乙醇溶液,向其中加入PPV,乙醇溶液与PPV的质量比为50:1,40℃静置40min,病毒滴度从5.93 lgTCID50降至4.55 lgTCID50。40min病毒下降趋势见图5。
对比例4
配置质量百分浓度为75%乙醇溶液,向其中加入PPV,乙醇溶液与PPV的质量比为50:1,40℃静置40min,病毒滴度从5.93 lgTCID50降至4.80 lgTCID50。40min病毒下降趋势见图5。
对比例5
配置质量百分浓度为75%乙醇溶液,向其中加入PPV,乙醇溶液与PPV的质量比为50:1,常温静置40min,病毒滴度从5.93 lgTCID50降至5.55 lgTCID50。40min病毒下降趋势见图5。
对比例6
将PPV于40℃下静置40min,病毒滴度从5.93 lgTCID50降至5.43 lgTCID50。40min病毒下降趋势见图5。
发明人研究发现,猪细小病毒对热具有较强抵抗力,病毒在40℃极为稳定,56℃48小时、70℃ 2小时病毒的感染性和血凝性均无明显改变;对酸碱有较强的抵抗力,在pH3.0~9.0之间稳定;能抵抗乙醚、氯仿等脂溶剂,但l%~1.5%氢氧化钠5分钟能杀灭病毒,2%戊二醛需20分钟,甲醛蒸气和紫外线需要相当长的时间才能杀死该病毒。高温、强酸强碱虽然可以有效灭活产品中猪细小病毒,但存在溶剂不温和、处理时间长等问题,可能会造成样品中的核酸或蛋白收率较低。
发明人通过研究发现70%乙醇常温条件下对无囊膜的PPV病毒没有灭活效果,49℃处理40min对无囊膜的PPV病毒基本没有灭活效果,但70%乙醇和49℃处理两者结合时,40min内即可高效灭活PPV。乙醇溶液可低温旋转蒸发去除,环保无毒,本案中的灭活PPV的方法不会造成样品中的核酸或蛋白收率低的问题。
以上对本发明做了详尽的描述,其目的在于让熟悉此领域技术的人士能够了解本发明的内容并加以实施,并不能以此限制本发明的保护范围,凡根据本发明的精神实质所作的等效变化或修饰,都应涵盖在本发明的保护范围内。

Claims (9)

1.一种灭活猪细小病毒的方法,其特征在于:使含有猪细小病毒的产品在质量百分浓度为70%±3%的乙醇溶液的存在下,在49℃±5℃的条件下处理以对所述产品中的猪细小病毒灭活,控制处理的时间为30~50min。
2.如权利要求1所述的灭活猪细小病毒的方法,其特征在于:所述乙醇溶液的质量百分浓度为70%±2%;处理的温度为49℃±3℃。
3.如权利要求2所述的灭活猪细小病毒的方法,其特征在于:所述乙醇溶液的质量百分浓度为70%±1%;处理的温度为49℃±2℃。
4.如权利要求2或3所述的灭活猪细小病毒的方法,其特征在于:所述乙醇溶液的质量百分浓度为70%±0.5%;处理的温度为49℃±1℃。
5.如权利要求1所述的灭活猪细小病毒的方法,其特征在于:控制处理的时间为35~45min。
6.如权利要求1所述的灭活猪细小病毒的方法,其特征在于:所述处理方法为在控制温度的条件下,使所述产品静置在所述乙醇溶液中。
7.如权利要求1所述的灭活猪细小病毒的方法,其特征在于:所述乙醇溶液与所述猪细小病毒的投料质量比为40~60:1。
8.如权利要求1所述的灭活猪细小病毒的方法,其特征在于:所述产品为生物制品。
9.质量百分浓度为70%±3%的乙醇溶液结合49℃±5℃的条件及30~50min的处理时间在灭活猪细小病毒中的应用。
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Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005028643A1 (en) * 2003-09-23 2005-03-31 Zlb Behring Ag Inactivation of non enveloped viruses
CN101397339A (zh) * 2008-09-24 2009-04-01 上海天伟生物制药有限公司 糖蛋白中去除/灭活病毒的方法
CN102196724A (zh) * 2008-10-24 2011-09-21 麒麟协和食品株式会社 杯状病毒灭活方法
CN102688485A (zh) * 2011-09-16 2012-09-26 扬州优邦生物制药有限公司 一种猪细小病毒灭活疫苗的制备方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005028643A1 (en) * 2003-09-23 2005-03-31 Zlb Behring Ag Inactivation of non enveloped viruses
CN101397339A (zh) * 2008-09-24 2009-04-01 上海天伟生物制药有限公司 糖蛋白中去除/灭活病毒的方法
CN102196724A (zh) * 2008-10-24 2011-09-21 麒麟协和食品株式会社 杯状病毒灭活方法
CN102688485A (zh) * 2011-09-16 2012-09-26 扬州优邦生物制药有限公司 一种猪细小病毒灭活疫苗的制备方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
羧甲基壳聚糖病毒灭活/去除工艺验证;杨倩等;《中国生物制品学杂志》;20160531;第29卷(第5期);全文 *

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