CN112294947A - 一种多肽在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用 - Google Patents

一种多肽在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112294947A
CN112294947A CN202011245590.6A CN202011245590A CN112294947A CN 112294947 A CN112294947 A CN 112294947A CN 202011245590 A CN202011245590 A CN 202011245590A CN 112294947 A CN112294947 A CN 112294947A
Authority
CN
China
Prior art keywords
arl13b
amino acid
acid fragment
polypeptide
protein
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN202011245590.6A
Other languages
English (en)
Inventor
罗时文
陈丽敏
谢新生
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Nanchang University
Original Assignee
Nanchang University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Nanchang University filed Critical Nanchang University
Priority to CN202011245590.6A priority Critical patent/CN112294947A/zh
Publication of CN112294947A publication Critical patent/CN112294947A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/10—Peptides having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Abstract

本发明公开一种多肽在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用，属于医药领域；所述多肽包括Arl13b蛋白的氨基酸片段或其变体或其衍生物；所述多肽可作为Arl13b‑Smo相互作用的抑制剂、Hedgehog(Hh)信号通路的抑制剂用于预防和/或治疗肿瘤，所述多肽也可与Smo抑制剂联合使用；所述肿瘤包括所有的实体类的肿瘤和白血病。Arl13b中与Smo相互作用的多肽片段作为Arl13b‑Smo相互作用的抑制剂和Hh信号通路活性的抑制剂能够有效地抑制Arl13b‑Smo的相互作用，从而调节Hh信号通路的活性，进而有效地预防和治疗与Hh信号异常活化的相关疾病，并能协同Hh的抑制剂发挥作用。

Description

一种多肽在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用
技术领域
本发明涉及医药领域，特别是涉及一种多肽在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用。
背景技术
Hedgehog(Hh)信号通路是在进化上保守的信号通路，在胚胎发育、器官形成和成人干细胞调控中扮演着重要的角色。Hh信号通路的紊乱与先天性缺陷和多种肿瘤发生有关。Hh信号通路参与髓母细胞瘤、基底细胞癌、胃癌等的发生和发展，主要有三大方面的作用：启动肿瘤发生、促进肿瘤发展以及调控经治疗后残余癌细胞的生长。比如，激活Hh信号通路能够导致基底细胞癌、髓母细胞瘤、横纹肌肉瘤等的发生；该信号通路在小细胞肺癌中只起促进肿瘤发展的作用而不能促进肿瘤的发生；该信号通路也参与经化疗或放疗后的肿瘤的耐药和复发。
在脊椎动物细胞中，经典的Hh信号通路主要由Hh配体(Sonic(Shh),Indian(IHH)或Desert(DHH))、十二次跨膜蛋白Ptch、七次跨膜蛋白Smoothened(Smo)、SUFU(Suppressorof Fused)和转录因子Glis(Gli1，Gli2和Gli3)组成。Hh配体与Ptch结合起始Hh信号通路的传导。Hh配体的结合使Ptch失活，从而解除其对Smo的抑制作用，解抑制的Smo被转运到初级纤毛上将细胞外的Hh信号转导到细胞内，激活转录因子Glis。Smo抑制肿瘤抑癌蛋白SUFU(Suppressor of Fused)，PKA(protein kinase A)，CK1α(casein kinase 1α)和GSK3β(glycogen synthase kinase 3β)的活性，从而抑制其将转录因子Glis降解成抑制型形式。Hh信号通路活化的情况下，SUFU-Glis复合物在初级纤毛顶端富集，促进SUFU-Gli复合物的解离，释放出活化的全长转录因子Glis转运到细胞核内，从而激活Hh信号通路的靶基因转录。Hh信号通路的靶基因包括参与Hh信号通路反馈、细胞增殖、细胞凋亡、血管生成、上皮-间充质转化和干细胞自我更新等生命过程。由于Hh信号通路在肿瘤发生发展中起着非常重要的作用，因此Hh信号通路作为一种癌症治疗靶点已经引起了广泛的关注。根据Hh信号的转导过程，可以通过Hh配体抑制剂、Smo抑制剂和Gli抑制剂的途径调控Hh信号通路的活性。
成熟的N-Shh与Ptch结合启动Hh信号通路，因此Shh配体被认为是调节Hh信号通路的靶点。通过小分子芯片筛选方法发现了与Shh结合的小分子化合物Robotnikinin能抑制Hh信号活性。另外，研究报道Shh的单克隆抗体5E1能在小鼠体内抑制髓母细胞瘤和胰腺癌细胞的生长，经5E1治疗的小鼠，肿瘤细胞增殖减慢、凋亡增多。但是，Robotnikinin和5E1未能进入临床试验。
Smo是研发Hh信号通路抑制剂的主要靶点。抑制Smo能够阻断下游转录因子Gli的活化，阻止肿瘤生长和恶化相关基因的转录。在结构上，Smo具有保守的GPCR功能域，包含一个细胞外N端半胱氨酸富集区段(CRD,cysteine rich domain)、三个细胞外环状区段(ECL,extracellular loop)、三个细胞内环状区段(ICL,intracellular loop)、七次跨膜区段(TM,transmembrane domain)和一个细胞内C端尾。根据作用位点，可以将目前发现的Smo抑制剂分为两大类：(1)与TM结合的Smo抑制剂(Cyclopamine,Saridegib,Vismodegib,Sonidegib,SANT-1,Taladegi b和AntaXV等)；(2)与CRD结合的Smo抑制剂(22-NHC,Budesonide,Ciclesonide和Allo-1等)。Cyclopamine是Hh信号通路的第一个抑制剂，它与Smo结合抑制Hh信号通路活性。Cyclopamine与Smo的TM结合阻止其构象改变成激活型。虽然研究发现Cyclopamine能显著抑制多种肿瘤(神经胶质瘤、黑色素瘤、结肠癌、胰腺癌和前列腺癌等)裸鼠原位移植瘤的生长，但是Cyclopamine由于其在小鼠上较强的副作用(比如体重下降、脱水、死亡)未被用于临床试验。目前，市场上已经研发出能解决Cyclopamine溶解性和稳定性问题的衍生物，比如Roche/Genentech/Curis研发的Vismodegib和Novaritis研发的Sonidegib。Vismodegib在2012年1月被FDA批准用于癌症的治疗，目前其被用于治疗成人恶性基底细胞癌或复发的且无手术和化疗方案的恶性基底细胞癌；Sonidegib在2015年7月被FDA批准用于治疗复发的且无手术和化疗方案的恶性基底细胞癌。
Smo突变除了导致肿瘤形成，还会使肿瘤细胞对Smo抑制剂不敏感。对与Hh密切相关的肿瘤如髓母细胞瘤、基底细胞癌、脑膜瘤和成釉细胞瘤进行基因组分析，在Smo上发现了众多能致使肿瘤形成的突变，包括S278I、L412F、S533N、W535L和R562Q。Smo突变导致的肿瘤形成在基底细胞癌中约占10％，在成人髓母细胞瘤中占30％左右。W535L(被公认地定义为Smo-M2)是被研究地最清楚的突变，其位于第七次跨膜区段的末端致使Smo蛋白处于活化构象。目前，临床上具有Smo抑制剂耐药特征的Smo突变是D473H，D473H突变是从经Vismodegib后复发的髓母细胞瘤的活体组织中鉴定到的，D473参与Smo药物结合口袋入口处氢键网络的形成。突变研究发现将D473突变成碱性或结构巨大的氨基酸将导致Smo的组成性激活。在髓母细胞瘤的小鼠模型中，Sonidegib的获得性耐药与Smo的L225R、N223D、D388N、S391N和G457S突变有关。
转录因子Glis是Hh信号通路的末端效应因子。研究发现GANT-58和GANT61能抑制Gli介导的基因转录活性，但是GANT61能更特异地与Gli蛋白结合、有效地抑制Gli1和Gli2与DNA结合的能力。在人类前列腺癌细胞裸鼠移植瘤模型中，GANT61抑制肿瘤细胞的生长和增殖，显著降低Ptch mRNA的水平。然而，目前仍未有GANT61用于治疗癌症的临床试验的报道。有研究报道三氧化二砷(Arsenic Trioxide)与Gli1和Gli2直接结合，抑制其活性，从而抑制经典Hh信号通路靶基因的表达。Kim等发现三氧化二砷降低Gli2蛋白的稳定性，阻止其在初级纤毛中聚集。
初级纤毛在Hh信号转导中起着核心的作用。Arl13b是一个小GTPase，其特异性地在多种器官的纤毛中聚集。Arl13b对纤毛的形成和功能的发挥起着非常关键的作用，参与囊泡运输、细胞分化、细胞运动和细胞骨架形成等过程。在Arl13b蛋白缺失的情况下，纤毛短小且结构受损。在人类中，Arl13b基因的突变会导致Joubert综合症。Arl13b基因缺失的小鼠有纤毛结构受损和Hh信号通路活性异常等现象，并表现出与Joubert综合症病人相似的症状。有文献报道Arl13b能够影响Hh信号通路组分的定位，例如Smo在纤毛内的分布。我们已发表的前期研究发现Arl13b通过N端(氨基酸1-150)与Smo的细胞内C端尾部(氨基酸550-787)直接相互作用；Arl13b通过抑制Smo泛素化增加其稳定性，促进Smo在细胞膜和初级纤毛是的定位，激活Hh信号通路，从而促进肿瘤细胞生长；抑制Smo-Arl13b相互作用能抑制肿瘤细胞的生长。Arl13b的缺失会抑制Hh信号的活性并抑制髓母细胞瘤的形成。因为Smo在纤毛上的富集是其进行Hh信号转导的关键，所以探究Smo与Arl13b的关系将能为Hh信号的调控提供新靶点。针对该靶点的调节剂将能用作调控Hh信号通路的研究工具和用于防治或治疗相关疾病，例如癌症。
发明内容
本发明的目的是提供一种多肽在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用，以解决上述现有技术存在的问题。
为实现上述目的，本发明提供一种多肽在制备Smo蛋白抑制剂中的应用，所述多肽为Arl13b蛋白质的氨基酸片段，所述Arl13b蛋白质的氨基酸片段的氨基酸序列如SEQ IDNO：1所示。
进一步的，所述多肽为Arl13b蛋白质的氨基酸片段的74到88位氨基酸片段，所述Arl13b蛋白质的氨基酸片段的74到88位氨基酸片段如SEQ ID NO：2所示。
本发明还提供一种多肽在制备Hh信号通路抑制剂中的应用，所述多肽为Arl13b蛋白质的氨基酸片段，所述Arl13b蛋白质的氨基酸片段的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
进一步的，所述多肽为Arl13b蛋白质的氨基酸片段的74到88位氨基酸片段，所述Arl13b蛋白质的氨基酸片段的74到88位氨基酸片段如SEQ ID NO：2所示。
进一步的，所述Hh信号通路抑制剂与Smo蛋白抑制剂联合使用。
本发明还提供一种多肽在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用，所述多肽为Arl13b蛋白质的氨基酸片段，所述Arl13b蛋白质的氨基酸片段的氨基酸序列如SEQ IDNO：1所示。
进一步的，所述多肽为Arl13b蛋白质的氨基酸片段的74到88位氨基酸片段，所述Arl13b蛋白质的氨基酸片段的74到88位氨基酸片段如SEQ ID NO：2所示。
进一步的，所述肿瘤为胃癌或神经胶质瘤。
进一步的，所述肿瘤为携带Smo突变的胃癌或神经胶质瘤。
进一步的，所述药物中可添加药物学上可接受的载体或辅料。
本发明公开了以下技术效果：Arl13b中与Smo相互作用的多肽片段作为Arl13b-Smo相互作用的抑制剂和Hh信号通路活性的抑制剂能够有效地抑制Arl13b-Smo的相互作用，从而调节Hh信号通路的活性，进而有效地预防和治疗与Hh信号异常活化的相关疾病，并能协同Hh的抑制剂发挥作用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为实施例1中Arl13b的氨基酸片段与Smo结合的Western blot检测结果；
图2为实施例1中Arl13b的氨基酸片段与Smo结合的Western blot检测结果；
图3为实施例1中Arl13b的氨基酸片段与Smo结合的Western blot检测结果；
图4为实施例2中Arl13b的氨基酸片段(Arl13b(74-88))抑制Arl13b-Smo相互作用的Western blot检测结果；
图5为实施例3中穿膜肽修饰的Arl13b(74-88)多肽抑制Arl13b-Smo相互作用的Western blot检测结果；
图6为实施例4中Arl13b的氨基酸片段(Arl13b(74-88))抑制Hh信号通路活性；
图7为实施例5中Arl13b的氨基酸片段(Arl13b(74-88))与Smo的抑制剂协同作用；
图8为实施例6中Arl13b的氨基酸片段抑制胃癌细胞增殖；
图9为实施例6中Arl13b的氨基酸片段抑制神经胶质瘤细胞增殖；
图10为实施例7中Arl13b的氨基酸片段抑制神经胶质瘤细胞侵袭。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细的说明。
实施例1Pull down方法检测Arl13b的氨基酸片段与Smo结合Pull down实验：提前准备好转染了Arl13b的氨基酸片段的细胞，用移液器吸去培养基，用PBS洗2遍，每个10cmdish加入500μL CO-IP buffer冰上裂解15min，然后用细胞刮取并转移至新1.5ml Ep管，再冰上裂解45min，13000rpm×15min、4℃离心，将上清转移合并至新的1.5ml Ep管。同时在细胞裂解的期间，预处理MBP beads，分别吸取40μL 50％MBP beads至两个新1.5ml Ep管，再加入1ml PBS颠倒几次，1000rpm×3min、4℃离心弃上清，重复洗一遍。一管加入1ml MBP-Smo裂解液，另一管按之前的比例加入等量的MBP裂解液，4℃垂直混旋仪上孵育2h。孵育2h后，1000rpm×2min、4℃离心弃上清，加入1ml PBS颠倒几次，1000rpm×2min、4℃离心弃上清，重复洗2遍。分别加入500μL细胞裂解液，4℃垂直混旋仪上孵育4h。1000rpm×2min、4℃离心弃上清，再加入1ml PBS颠倒几次，1000rpm×2min、4℃离心弃上清，重复洗3遍。加入30μL 2×Sample Buffer，煮沸10min，取全部上清上样；同时将剩余的细胞裂解液加入SampleBuffer，煮沸10min，上样两孔，各上样20μL，western blot检测。图1-3结果表明，Arl13b的多个氨基酸片段能与Smo有效结合。
实施例2免疫共沉淀方法(Co-IP)检测Arl13b的氨基酸片段对Arl13b-Smo相互作用的影响
免疫共沉淀实验：100mm细胞培养皿的细胞转染Arl13b的氨基酸片段(Arl13b(74-88))48h后，吸净培养基，可用PBS漂洗一次。加入500μL预冷的Co-IP buffer于4℃或冰上放置裂解细胞40min。将细胞裂解液转移到1.5ml eppondorf管内，于冷冻离心机4℃，13000g离心20min。将离心后的上清分为两部分：一份35μL，加入等体积的2×SDS sample buffer,混匀后于100℃煮10min，做为Input于－20℃保存，剩下的另一份用于免疫沉淀，按每个样品一管加入50μL 50％Potein G beads及1μg相应抗体，将抗体和beads混合，再加入400μLCo-IP buffer,垂直混悬仪4℃混匀结合1h后离心(800g 3min，4℃)，弃上清。Co-IP buffer洗三次后，分别加入细胞转染后所得到的相应的蛋白上清并置于垂直混悬仪4℃反应1h。将免疫沉淀后的溶液于800g,4℃，离心3min，去上清，加入500μL Co-IP buffer洗涤beads，共洗涤三次。最后一次洗涤完毕，弃上清,加入40μL 2×SDS sample buffer混合，于100℃煮沸10min，稍离心后取20μL上样Western blot检测。实验结果如图4所示，该结果表明Arl13b的氨基酸片段可以抑制细胞内Arl13b与Smo的结合。
实施例3Pull down检测穿膜肽修饰Arl13b的氨基酸片段对Arl13b-Smo相互作用的影响
在293T细胞中转染过表达Flag-Smo(550-787)，用移液器吸去细胞培养基，用PBS洗2遍，每个10cm dish加入500μl Co-IP buffer裂解，13000rpm×15min，4℃离心，将上清转移合并至新的1.5ml Ep管。同时在细胞裂解的期间，预处理GST-beads，分别吸取40μl50％GST-beads至两个新1.5ml Ep管，再加入1ml PBS颠倒几次，1000rpm×3min，4℃离心弃上清，重复洗一遍。分别加入flag-Smo(550-787)裂解液和预纯化的GST-Arl3b，一管加入10μM无义对照多肽，另一管加入10μM经穿膜肽修饰的Arl13b(74-88)多肽，4℃垂直混旋仪上孵育2h。孵育2h后，1000rpm×2min、4℃离心弃上清，加入1ml PBS颠倒几次，1000rpm×2min、4℃离心弃上清，重复洗2遍。加入30μl 2×Sample Buffer，煮沸10min，取全部上清上样；同时将剩余的细胞裂解液加入Sample Buffer，煮沸10min，上样两孔，各上样20μl，western blot检测。图5结果表明，经穿膜肽修饰的Arl13b的氨基酸片段能与Smo有效结合。
实施例4蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测Arl13b的氨基酸片段(Arl13b(74-88))对Hh信号通路活性的影响。
蛋白免疫印迹实验：细胞转染不同浓度的Arl13b的氨基酸片段(Arl13b(74-88))48小时后，用细胞裂解液裂解细胞。取一定量的蛋白样品与相应的2×或4×sample buffer混合后，于100℃煮沸变性5min。按照每个泳道20-50μg的总蛋白量上样于聚丙烯酰胺凝胶样品孔中，恒压50V电泳至溴酚蓝抵达凝胶底边，约4h。恒流200mA将蛋白转移至NC膜上。转膜结束后取出NC膜TBST漂洗一次后经5％脱脂奶粉(溶于TBST)于4℃封闭1h，一抗4℃冰箱摇床孵育过夜。一抗过夜的NC膜经TBST摇洗3次后与相应二抗于4℃冰箱摇床上孵育4-5h，然后用TBST摇洗3次。最后X-ray胶片曝光、显影、水漂洗后定影，结果如图5所示。结果表明Arl13b的氨基酸片段(Arl13b(74-88))能够抑制Hh信号通路下游靶基因Bcl2和Gli1的表达。
实施例5蛋白免疫印迹(Western blot)方法检测Arl13b的氨基酸片段(Arl13b(74-88))协同Smo抑制剂对Hh信号通路活性的影响。
蛋白免疫印迹实验：细胞转染对照或Arl13b的氨基酸片段(Arl13b(74-88))24小时，再加入不同浓度的Smo抑制剂Cyclopamine处理48小时后，细胞裂解液裂解细胞。用蛋白免疫印迹实验检测Gli1和Bcl2的表达情况，具体实验方法同实施例3。图6表明，Arl13b的氨基酸片段(Arl13b(74-88))能够与Smo的抑制剂cyclopamine协同抑制Hh信号通路下游靶基因Bcl2和Gli1的表达。
实施例6克隆形成方法检测Arl13b的氨基酸片段对胃癌和神经胶质瘤细胞增殖的影响。
克隆形成实验：胃癌细胞AGS分别转染对照和Arl13b的氨基酸片段24小时，用流式分选的方法分选阳性细胞，并将其放置于37℃，5％CO2培养箱中培养14-20天。当观察到肉眼可见的克隆时，终止培养。除去培养基，加4％多聚甲醛溶液37℃固定10min。除去固定液后，经PBS洗涤3次后，加入0.2％的结晶紫染色20-30min。PBS多次洗去染色液至PBS澄清后置于空气干燥。将6孔板倒置于专业扫描仪进行扫描。使用Image J软件去除背景并对单位面积(1cm2)的结晶紫染色克隆数进行计算。实验结果如图8所示，结果表明Arl13b的氨基酸片段抑制肿瘤细胞的增殖。
神经胶质瘤细胞U118-MG分别转染对照和Arl13b的氨基酸片段24小时，用流式分选的方法分选阳性细胞，接种于软琼脂中，置于37℃，5％CO2培养箱中培养14天，倒置显微镜拍摄克隆。实验结果如图9所示，结果表明Arl13b的氨基酸片段抑制肿瘤细胞的增殖。
实施例7Transwell实验检测Arl13b的氨基酸片段对神经胶质瘤细胞侵袭的影响。
Transwell实验：神经胶质瘤细胞U118-MG分别转染对照和Arl13b的氨基酸片段24小时，用流式分选的方法分选阳性细胞，并将接种于预铺了Matirgel的Transwell小室中，将小室置于37℃，5％CO2培养箱中培养36小时。除去培养基，加4％多聚甲醛溶液37℃固定10min。除去固定液后，经PBS洗涤3次后，加入0.2％的结晶紫染色20-30min。PBS多次洗去染色液至PBS澄清后置于空气干燥，倒置显微镜拍摄图片。实验结果如图10所示，结果表明Arl13b的氨基酸片段抑制肿瘤细胞的侵袭。
综合上述具体实施例测定结果，本发明的Arl13b的氨基酸片段可以通过抑制Arl13b-Smo蛋白-蛋白相互作用，抑制Hh信号通路活性，从而抑制肿瘤细胞增殖。进一步地，相比Hh信号通路的抑制剂(Shh抑制、Smo抑制剂和Gli抑制剂)，Arl13b的氨基酸片段的作用机制不同。将Arl13b的氨基酸片段与Shh抑制、Smo抑制剂或Gli抑制剂联合使用，对于肿瘤细胞增殖具有更加显著的抑制作用。同时，Arl13b的氨基酸片段能够抑制因Smo突变所引起的Hh信号通路激活和肿瘤细胞增殖。
因此，Arl13b的氨基酸片段可以作为新的预防和/或治疗肿瘤的先导多肽，也可以用于制备预防和/或治疗肿瘤的药物。同样地，Arl13b的氨基酸片段、或其变体和衍生物或含上述任何一种物质的药物组合物可以作为新的预防和/或治疗肿瘤的先导物，也可以用于制备预防和/或治疗肿瘤的有效成分。
以上所述的实施例仅是对本发明的优选方式进行描述，并非对本发明的范围进行限定，在不脱离本发明设计精神的前提下，本领域普通技术人员对本发明的技术方案做出的各种变形和改进，均应落入本发明权利要求书确定的保护范围内。
序列表
<110> 南昌大学
<120> 一种多肽在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用
<160> 2
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 3
<211> 150
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Met Phe Ser Leu Met Ala Ser Cys Cys Gly Trp Phe Lys Arg Trp Arg
1 5 10 15
Glu Pro Val Arg Lys Val Thr Leu Leu Met Val Gly Leu Asp Asn Ala
20 25 30
Gly Lys Thr Ala Thr Ala Lys Gly Ile Gln Gly Glu Tyr Pro Glu Asp
35 40 45
Val Ala Pro Thr Val Gly Phe Ser Lys Ile Asn Leu Arg Gln Gly Lys
50 55 60
Phe Glu Val Thr Ile Phe Asp Leu Gly Gly Gly Ile Arg Ile Arg Gly
65 70 75 80
Ile Trp Lys Asn Tyr Tyr Ala Glu Ser Tyr Gly Val Ile Phe Val Val
85 90 95
Asp Ser Ser Asp Glu Glu Arg Met Glu Glu Thr Lys Glu Ala Met Ser
100 105 110
Glu Met Leu Arg His Pro Arg Ile Ser Gly Lys Pro Ile Leu Val Leu
115 120 125
Ala Asn Lys Gln Asp Lys Glu Gly Ala Leu Gly Glu Ala Asp Val Ile
130 135 140
Glu Cys Leu Ser Leu Glu
145 150
<210> 2
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Gly Gly Ile Arg Ile Arg Gly Ile Trp Lys Asn Tyr Tyr Ala Glu
1 5 10 15

Claims (10)

1.一种多肽在制备Smo蛋白抑制剂中的应用，其特征在于，所述多肽为Arl13b蛋白质的氨基酸片段，所述Arl13b蛋白质的氨基酸片段的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
2.根据权利要求2所述多肽在制备Smo蛋白抑制剂中的应用，其特征在于：所述多肽为Arl13b蛋白质的氨基酸片段的74到88位氨基酸片段，所述Arl13b蛋白质的氨基酸片段的74到88位氨基酸片段如SEQ ID NO：2所示。
3.一种多肽在制备Hh信号通路抑制剂中的应用，其特征在于，所述多肽为Arl13b蛋白质的氨基酸片段，所述Arl13b蛋白质的氨基酸片段的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
4.根据权利要求3所述多肽在制备Hh信号通路抑制剂中的应用，其特征在于：所述多肽为Arl13b蛋白质的氨基酸片段的74到88位氨基酸片段，所述Arl13b蛋白质的氨基酸片段的74到88位氨基酸片段如SEQ ID NO：2所示。
5.根据权利要求3或4所述的应用，其特征在于：所述Hh信号通路抑制剂与Smo蛋白抑制剂联合使用。
6.一种多肽在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用，其特征在于，所述多肽为Arl13b蛋白质的氨基酸片段，所述Arl13b蛋白质的氨基酸片段的氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。
7.根据权利要求6所述多肽在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用，其特征在于：所述多肽为Arl13b蛋白质的氨基酸片段的74到88位氨基酸片段，所述Arl13b蛋白质的氨基酸片段的74到88位氨基酸片段如SEQ ID NO：2所示。
8.根据权利要求6或7所述多肽在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用，其特征在于：所述肿瘤为胃癌或神经胶质瘤。
9.根据权利要求6-8任一项所述多肽在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用，其特征在于：所述肿瘤为携带Smo突变的胃癌或神经胶质瘤。
10.根据权利要求6-8任一项所述多肽在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用，其特征在于：所述药物中可添加药物学上可接受的载体或辅料。
CN202011245590.6A 2020-11-10 2020-11-10 一种多肽在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用 Pending CN112294947A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011245590.6A CN112294947A (zh) 2020-11-10 2020-11-10 一种多肽在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202011245590.6A CN112294947A (zh) 2020-11-10 2020-11-10 一种多肽在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN112294947A true CN112294947A (zh) 2021-02-02

Family

ID=74325442

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202011245590.6A Pending CN112294947A (zh) 2020-11-10 2020-11-10 一种多肽在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112294947A (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113025614A (zh) * 2021-03-22 2021-06-25 四川大学华西医院 一种胶质瘤诊断和/或预后评估标志物及其应用

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107144695A (zh) * 2017-04-19 2017-09-08 南昌大学 Arl13b蛋白在癌症诊断中的应用

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107144695A (zh) * 2017-04-19 2017-09-08 南昌大学 Arl13b蛋白在癌症诊断中的应用

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
施唯: "靶向Arl13b与Smo相互作用多肽抑制剂的发现研究", 中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑, no. 7, pages 5 *

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113025614A (zh) * 2021-03-22 2021-06-25 四川大学华西医院 一种胶质瘤诊断和/或预后评估标志物及其应用

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Malaguarnera et al. p53 family proteins in thyroid cancer
CN110194787B (zh) 靶向抑制Wnt/β-catenin信号活性的多肽及其用途
BRPI0512286B1 (pt) Proteínas quiméricas inibidoras da angiogênese e o uso
Cohen et al. Etk/Bmx regulates proteinase-activated-receptor1 (PAR1) in breast cancer invasion: signaling partners, hierarchy and physiological significance
JP4474163B2 (ja) 免疫調節ペプチド
CN111675765A (zh) 靶向冠状病毒spike的武装嵌合抗原受体细胞及制备方法和应用
JP2010515751A (ja) Ｃｄ２００およびそのレセプターｃｄ２００ｒは破骨細胞の分化を介して骨質量を調節する
WO2013026334A1 (zh) 阻止细胞dna合成、抑制细胞增殖的多肽及其用途
EA006423B1 (ru) Олигопептид, обладающий биологической активностью модулятора рецептора тромбопоэтина, и способы его применения
JP4405916B2 (ja) Ｆａｓペプチド模倣体およびその使用
CN112294947A (zh) 一种多肽在制备用于预防和/或治疗肿瘤的药物中的应用
US8703917B2 (en) Epidermal growth factor receptor variants and pharmaceutical compositions thereof
KR20160048103A (ko) Vegf-c 및 ccbe1의 치료적 용도
CN111793134A (zh) 一种用于癌症治疗中的药物、肿瘤疫苗及抑制剂
Sato et al. Induction of cyclin-dependent kinase inhibitor, p21WAF1, by treatment with 3, 4-dihydro-6-[4-(3, 4)-dimethoxybenzoyl)-1-piperazinyl]-2 (1H)-quinoline (vesnarinone) in a human salivary cancer cell line with mutant p53 gene
CN111499723B (zh) 一种嵌合抗原受体及其应用
US20080248009A1 (en) Regulation of acheron expression
CN109810959A (zh) 一种与keap1结合并调节nrf2蛋白稳定性的蛋白多肽
Cohen et al. Mapping the homodimer interface of an optimized, artificial, transmembrane protein activator of the human erythropoietin receptor
Park et al. Tm4sf19 deficiency inhibits osteoclast multinucleation and prevents bone loss
WO2020143507A1 (zh) 治疗恶性肿瘤的抗体及其应用
KR102658844B1 (ko) 펩티드 유도체 및 약학적 조성물
CN112048021A (zh) 一种靶向ror2的嵌合抗原受体、表达基因、表达载体、t细胞及其应用
KR101385357B1 (ko) 항암 활성을 갖는 ＧＫＮ１ ｂｒｉｃｈｏｓ 도메인의 용도
CN113462651B (zh) 一种b7h3特异性抗性的car-nk细胞

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination