CN112263583A - 一种治疗帕金森疾病的药物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗帕金森疾病的药物及所述药物的制备方法。具体而言，所述药物包含作为活性成分的N‑{(4aR,7aR)‑7a‑(5‑氰基噻吩‑2‑基)‑6‑[5‑氟‑4‑(2‑羟基丙烷‑2‑基)嘧啶‑2‑基]‑4,4a,5,6,7,7a‑六氢吡咯并[3,4‑d][1,3]噻嗪‑2‑基}苯甲酰胺或其可药用盐和可药用赋形剂。本发明还涉及所述药物的制备方法和前述化合物在制备用于治疗帕金森病的药物中的用途。

Description

一种治疗帕金森疾病的药物及其制备方法

技术领域

本发明涉及神经变性疾病的治疗领域。具体而言，本发明涉及一种治疗帕金森疾病(以下简称帕金森病)的药物及所述药物的制备方法。

背景技术

帕金森病(Parkinson'sdisease,PD)是以震颤、肌肉强直、运动迟缓、姿势异常和姿势反射障碍为主要临床症状的神经变性疾病。帕金森病多发生于老年人，且随着年龄的增长发病率逐渐增高，其中大于65岁的老年人的发病率为约1％，大于85岁的老年人的发病率可多达5％。帕金森病的主要病变部位位于黑质致密带，但也可累及迷走神经背核、蓝斑等部位，其基本病理改变为中脑黑质致密部含黑色素的多巴胺能神经元选择性地逐步丧失，同时伴有蛋白聚集和路易小体的形成。路易小体是一种嗜酸性包涵体，亦是帕金森病的重要病理特征，其以α-突触核蛋白为主要成分，还含有细胞骨架成分和其它蛋白。大脑中的细胞在暴露于α-突触核蛋白后可引起趋化因子和促炎症因子的上调，神经胶质细胞活化，神经毒性增加，酪氨酸羟化酶的表达收到抑制，从而导致多巴胺能神经元减少。另外，当α-突触核蛋白发生突变或过表达时，蛋白质结构易出现错误折叠，积聚为有神经毒性的寡聚物，并能吸引正常结构的α-突触核蛋白聚集。同时，帕金森病患者的血脑屏障滤过率发生改变，脑对α-突触核蛋白的摄取量增加，使其在中枢神经系统内堆积，损伤多巴胺能神经元，进一步引起帕金森病的进展。

帕金森病的发病机制十分复杂，病因迄今尚未明了，并认为与环境因素、遗传因素、氧化应激、线粒体功能障碍、免疫异常、细胞凋亡等诸多因素有关。例如，现已明确，长期接触杀虫剂、除草剂等农药和某些金属、化学溶剂、一氧化碳等物质，可能会增加患帕金森病的风险。再者，还已知有多种的基因突变(包括但不限于SNCA基因、Parkin蛋白编码基因、UCH-L1基因、DJ-1基因、PINK1基因突变)可能与帕金森病发病有关：基因突变导致其编码的蛋白质功能发生异常，影响多巴胺能神经元的存活。此外，还发现随着人体年龄的增长，脑细胞的抗氧化系统出现缺陷，谷胱甘肽过氧化物酶、超氧化物歧化酶等酶的活性下降，可使脂质发生过氧化、DNA和蛋白质发生氧化损伤，从而破坏细胞膜的结构，细胞膜通透性发生改变，细胞内外的电解质等物质分布失衡，溶酶体、线粒体等细胞器发生裂解，导致细胞死亡。目前普遍认为帕金森病并非单一因素致病，可能有多种因素参与。

目前，临床上对帕金森病均采用对症治疗，尚无有效的治疗手段能够恢复变性神经元。帕金森病的治疗以药物治疗为主，这些药物主要基于帕金森病发病机制相关的关键靶点或信号通路而研发，可缓解帕金森病的症状。对于防治帕金森病药物的研发一直是医药领域的重要课题，一些新型药物尚在研发过程中。

美国礼来公司(EliLillyandCompany)的PCT发明专利申请WO2013/151832A1公开了一种用于治疗Aβ肽介导的病症(诸如阿尔茨海默氏病)的新颖的四氢吡咯并噻嗪化合物，包含所述化合物的药物组合物以及使用所述化合物治疗Aβ肽介导的病症(诸如阿尔茨海默氏病)的方法。该专利申请公开了化合物N-{(4aR,7aR)-7a-(5-氰基噻吩-2-基)-6-[5-氟-4-(2-羟基丙烷-2-基)嘧啶-2-基]-4,4a,5,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基}苯甲酰胺(N-{(4aR,7aR)-7a-(5-Cyanothiophen-2-yl)-6-[5-fluoro-4-(2-hydroxypropan-2-yl)pyrimidin-2-yl]-4,4a,5,6,7,7a-hexahydropyrrolo[3,4-d][1,3]thiazin-2-yl}benzamide，参见制备例122，以下简称化合物A)

然而，该专利申请并未公开化合物A具有治疗任何疾病的作用。

发明内容

本发明所要解决的技术问题

本发明旨在解决的技术问题是提供用于治疗帕金森病的药物及其制备方法。所述技术问题已因为发明人对化合物A在治疗帕金森病方面的预料不到的发现而得到了解决。由于化合物A具有与已知的治疗帕金森病的化合物不同的结构，故所述化合物被认为可用于制备新颖的治疗帕金森病的药物。

技术问题的解决方案

本申请的发明人为开发可用作用于治疗帕金森病的药物进行了深入研究。结果，本申请的发明人在现有技术WO2013/151832A1的基础上，通过实验意外地发现化合物A具有治疗帕金森病的活性。以上研究的结果导致本发明的技术方案的完成。

更具体地，在本发明的第一方面中，提供了一种治疗帕金森病的药物，其包含作为活性成分的化合物A或其可药用盐和可药用赋形剂：

在一个实施方案中，所述化合物A或其可药用盐是所述药物中的唯一的活性成分。

在另一个实施方案中，所述药物除所述化合物A或其可药用盐以外还包含治疗帕金森病的其它活性成分。

本发明对于治疗帕金森病的其它活性成分的种类没有限制，只要其对帕金森病具有治疗作用并且不会抵消所述化合物A或其可药用盐的活性即可。例如，所述治疗帕金森病的其它活性成分可以选自作用于多巴胺能系统的药物和作用于胆碱能系统的药物。作用于多巴胺能系统的药物，根据药物作用靶点的差异，又可分为DR激动剂、AADC抑制剂、MAO-B抑制剂、COMT抑制剂、DAT抑制剂等。作用于胆碱能系统的药物主要是抗胆碱能药。在本发明中，所述治疗帕金森病的其它活性成分优选地选自DR激动剂、AADC抑制剂、MAO-B抑制剂、COMT抑制剂、DAT抑制剂中的一种或多种。

在一个实施方案中，所述药物含有治疗有效量的化合物A或其可药用盐。根据本发明，所述化合物A或其可药用盐的治疗有效量优选为0.001-1000mg，进一步优选为0.01-100mg，又进一步优选为0.1-50mg，更进一步优选为0.5-30mg。

在本发明的第二方面中，提供了一种所述治疗帕金森病的药物的制备方法，其包括将所述化合物A或其可药用盐与可药用赋形剂混合的步骤。采用本发明所述的制备方法可以将所述化合物A或其可药用盐制成任何一种临床可接受的剂型。本发明优选将化合物A或其可药用盐制成片剂、胶囊剂、颗粒剂等口服施用的制剂或注射剂、输液、注射用无菌粉末等胃肠外施用的制剂。

在本发明的第三方面中，提供了化合物A或其可药用盐在制备用于治疗帕金森病的药物中的用途。

发明的有利技术效果

本发明的化合物A具有明显改善帕金森病模型大鼠行为学异常、降低黑质区总氧自由基(ROS)活力和增加总抗氧化能力以及抑制黑质区细胞凋亡的作用，并且在这些作用方面优于左旋多巴(帕金森病的现有治疗剂)，因而在帕金森病的治疗中是非常有用的。

具体实施方式

为使本领域技术人员能够更加清楚地理解本发明的要旨，提供以下具体实施例。但是，应当明确的是，这些实施例只是用于举例说明的目的，而绝非对本发明的技术方案构成限制。

实施例1化合物A的合成

参考WO2013/151832A1的制备例122的方法，以N-[(4aR,7aR)-7a-(5-氰基噻吩-2-基)-4,4a,5,6,7,7a-六氢吡咯并[3,4-d][1,3]噻嗪-2-基]苯甲酰胺、二异丙基乙胺和2-(2-氯-5-氟嘧啶-4-基)丙烷-2-醇为主要原料制备淡黄色的化合物A。

实施例2片剂

【处方组成】

【制备方法】

(1)将聚维酮k25加热熔融后，趁热将化合物A分散于其中，骤冷后粉碎，过20目筛，得到化合物A的基质混合物；

(2)将磷酸钙、羧甲基淀粉钠和羟丙基甲基纤维素分别粉碎，过80目筛，然后将磷酸钙、羧甲基淀粉钠和占总量1/2的羟丙基甲基纤维素混合均匀，用适量泊洛沙姆的50％乙醇溶液(通过将泊洛沙姆溶解于适量的50％乙醇中制备，作为润湿剂)制软材，先后用8目和14目筛网制粒，于50℃干燥；

(3)将步骤(1)得到的基质混合物、步骤(2)得到的干颗粒和余量的羟丙基甲基纤维素混合均匀，用12目筛整粒，用压片机压制成1000片。

实施例3药效学实验

1、实验目的

本实验的目的是考察化合物A对6-羟基多巴胺单侧纹状体微量注射法建立的帕金森病大鼠模型的治疗效果，为化合物A的临床开发提供初步实验依据。

2、实验动物

本实验采用的实验动物是体重在200±10g之间的雄性Wistar大鼠(购自北京维通利华实验动物技术有限公司)。实验开始之前，先将大鼠放入清洁的实验动物房(室内温度为约22℃，相对湿度为50-55％，每12小时切换光照/黑暗)中适应环境2天。大鼠可自由摄取清洁的食物和饮用水。

3、实验方法

a.帕金森病大鼠模型的建立

将Wistar大鼠随机分为5个实验组(10只/组)，即正常组、假手术组、模型组、左旋多巴组和化合物A组。对于后三个实验组，通过腹腔注射10％水合氯醛(4mL/kg)麻醉大鼠。将麻醉后的大鼠以颅平位固定于大鼠脑立体定位仪上。用医用酒精消毒后，沿大鼠正中矢状线暴露前囟，依据Paxinos图谱确定右侧纹状体两注射点坐标：第1点为前囟前0.7mm，中线右侧3.0mm，硬膜下4.5mm；第2点为前囟后0.2mm，中线右侧2.6mm，硬膜下6.0mm。以0.5μL/min的速度用微量注射器分别向以上各点注射15μg6-羟基多巴胺(3μL6-羟基多巴胺的生理盐水溶液(含0.2％维生素C))。注射完毕后留针3min，缓慢退出针头，缝合头皮。另外，正常组不做任何处理，假手术组的注射方法和部位同上，但注射等体积的含0.2％维生素C的生理盐水。

b.给药

左旋多巴组和化合物A组于造模成功后，分别以50mg/kg的剂量灌胃给予左旋多巴和化合物A，总体积为1mL，每日1次，连续4周；正常组、假手术组、模型组动物以等体积生理盐水取代药物灌胃给药。

c.行为学检测

术后第4周时，以0.5mg/kg的剂量于大鼠背部皮下注射阿朴吗啡，10min后开始观察并记录大鼠旋转次数，观察时间为60min。凡平均转速超过6r/min视为成功模型，否则为不成功模型。

d.组织学检测

实验结束后，将各组大鼠迅速断头取脑，置于冰盘上分离中脑，其中一部分组织以4％甲醛固定，石蜡包埋，切片，进行TUNEL染色，另一部分新鲜脑组织置于-70℃冰箱保存，进行ROS、抗氧化酶检测(具体方法参见例如王彦春等，虎杖白藜芦醇及其脂质体剂型对帕金森病模型大鼠黑质细胞保护作用的研究，《中国中药杂志》，第36卷第8期，第1060-1066页，2011年4月)。

e.统计学方法

采用SPSS16.0统计软件进行数据处理，数据采用“均值±标准差”表示，各组间比较采用单因素方差分析。

4、实验结果

a.化合物A改善帕金森病模型大鼠的行为学异常

术后第4周时，经大鼠背部皮下注射阿朴吗啡诱导，帕金森病模型大鼠出现一种无法控制的旋转行为，而经左旋多巴和化合物A治疗干预的大鼠的旋转频率和旋转持续时间均显著减少(参见表1)，说明化合物A具有显著改善帕金森病模型大鼠的行为学异常的作用。

表1各实验组的大鼠的旋转频率和旋转持续时间数据汇总

注：*表示与模型组比较：P<0.05。

b.化合物A降低帕金森病模型大鼠黑质区总ROS活力，提高总抗氧化能力

术后第4周时，相较于正常组和假手术组大鼠，帕金森病模型大鼠黑质区总ROS活力显著升高，而总抗氧化能力显著降低。经左旋多巴和化合物A治疗干预后，帕金森病模型大鼠黑质区组织总ROS活力较模型组显著下降，组织总抗氧化能力(T-AOC)显著提高。从数据比较来看，化合物A的抗氧化效应更为明显(表2)。

表2各实验组的大鼠的黑质区组织总ROS活力和总抗氧化能力数据汇总

组别	总ROS活力	总抗氧化能力
			正常组	17.32±1.93	11.36±1.39
假手术组	18.40±1.75	10.98±1.03
			模型组	49.20±3.92	2.67±0.87
左旋多巴组	37.57±2.85*	5.99±1.16*
			化合物A组	26.26±2.10*	7.34±1.32*

注：*表示与模型组比较：P<0.05。

c.化合物A抑制帕金森病模型大鼠黑质区细胞凋亡

术后第4周时，相较于正常组和假手术组大鼠，帕金森病模型大鼠黑质区的凋亡细胞数量明显增加。经左旋多巴和化合物A治疗干预后，帕金森病模型大鼠黑质区凋亡细胞数量显著下降。从数据比较来看，化合物A的抗细胞凋亡效应更为明显(表3)。

表3各实验组的大鼠的黑质区细胞凋亡数据汇总

注：*表示与模型组比较：P<0.05。

5、结论

表1-3中的实验结果表明，本发明的化合物A具有明显改善帕金森病模型大鼠行为学异常、降低黑质区总ROS活力和增加总抗氧化能力以及抑制黑质区细胞凋亡的作用，并且在这些作用方面优于左旋多巴(帕金森病的现有治疗剂)，因而在帕金森病的治疗中是非常有用的。

Claims (8)

1.一种治疗帕金森病的药物，其包含作为活性成分的化合物A或其可药用盐和可药用赋形剂：

2.根据权利要求1所述的药物，其中所述化合物A或其可药用盐是所述药物中的唯一的活性成分。

3.根据权利要求1所述的药物，其中所述药物除所述化合物A或其可药用盐以外还包含治疗帕金森病的其它活性成分。

4.根据权利要求3所述的药物，其中所述治疗帕金森病的其它活性成分选自DR激动剂、AADC抑制剂、MAO-B抑制剂、COMT抑制剂、DAT抑制剂中的一种或多种。

5.根据权利要求1-4中任一项所述的药物，其中所述药物含有治疗有效量的化合物A或其可药用盐。

6.根据权利要求5所述的药物，其中所述治疗有效量是0.001-1000mg。

7.一种根据权利要求1-6中任一项所述的治疗帕金森病的药物的制备方法，其包括将所述化合物A或其可药用盐与可药用赋形剂混合的步骤。

8.化合物A或其可药用盐在制备用于治疗帕金森病的药物中的用途