CN112245457A - 改善或预防腹泻的益生菌组合物、制法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了一种用于改善或预防腹泻的益生菌组合物，所述组合物包含必要组分和可选择性组分，按重量份计，所述必要组分包含0.1‑30份细菌益生菌，0.1‑30份酵母益生菌，0.1‑50份益生元，所述可选择性组分包括酵母抽提物和/或辅料。本发明提供了上述所述的益生菌组合物的制备方法以及上述所述的益生菌组合物在改善或预防腹泻中的应用。本发明提供的益生菌制剂对各类人群腹泻具有良好的治疗效果，尤其对于儿童和婴幼儿而言，本发明可显著缩短腹泻持续的时间，减少抗生素的使用。

Description

改善或预防腹泻的益生菌组合物、制法和应用
技术领域
本发明涉及食品或保健食品技术领域，具体涉及一种用于改善或预防腹泻的益生菌组合物、制法和应用。
背景技术
腹泻是一种常见症状，是指排便次数明显超过平日习惯的频率，粪质稀薄，水分增加，每日排便量超过200g，或含未消化食物或脓血、黏液。腹泻常伴有排便急迫感、肛门不适、失禁等症状。正常人每日大约有9L液体进入胃肠道，通过肠道对水分的吸收，最终粪便中水分仅约100～200ml。若进入结肠的液体量超过结肠的吸收能力或(和)结肠的吸收容量减少，就会导致粪便中水分排出量增加，便产生腹泻。临床上按病程长短，将腹泻分急性和慢性两类。急性腹泻发病急剧，病程在2～3周之内，大多系感染引起。慢性腹泻指病程在两个月以上或间歇期在2～4周内的复发性腹泻，发病原因更为复杂，可为感染性或非感染性因素所致。
对于儿童及婴幼儿而言，引起急性腹泻的主要致病因素是轮状病毒。但是，在轮状病毒疫苗高普及的国家，诺如病毒感染已远远超过了轮状病毒，成为了儿童急性胃肠炎的首要元凶。不同国家的常见致病菌也有所不同，主要是以弯曲杆菌属或沙门氏菌为主。轮状病毒感染的腹泻常伴有发热、严重脱水以及嗜睡，表明有系统性的损害并与严重腹泻相关。
腹泻的治疗原则主要包括合理饮食，维持营养；迅速纠正水、电解质平衡紊乱；控制肠道内外感染；对症治疗加强护理、防治并发症；避免滥用抗生素。
随着抗生素的大量应用及不当应用，抗生素耐药现象越来越严重，所以我国也相继出台了很多政策，对抗生素实行分级管理，限制其应用。
目前腹泻的治疗手段主要包括饮食治疗、液体治疗、控制感染、对症治疗、补锌(对于儿童)等。其中对症治疗就包括止泻，改善肠道微生态环境和其他助消化剂。然而，这多数属于药物治疗手段，会存在一定的不良反应。
随着近些年肠道微生物研究的火热及益生菌相关产品的大量上市，消费者越来越认同益生菌在调理健康方面的作用，而服用益生菌食品也渐渐成为抵御某些疾病(如腹泻)的越来越重要的选择。
FAO对益生菌的定义为通过摄取适当的量、对食用者的身体健康能发挥有效作用的活菌。益生菌在腹泻方面的效果得到了权威的认可，比如FAO和WHO举办的“益生菌专家会议(Expert consultation ofProbiotics)”上提出益生菌可预防和治疗轮状病毒引发的儿童急性腹泻。
中国专利CN 106361778 A涉及微生物筛选技术领域，具体提供了一种乳酸菌制剂及其在小儿腹泻治疗中的应用，该发明所提供的乳酸菌制剂选用一种从自然发酵的酸菜汁中筛选出的新型噬酸乳杆菌；中国CN 105920606 A涉及儿科用药技术领域，具体涉及一种用于治疗小儿腹泻病的复方口服液及其制备方法，该口服液中也添加了益生菌，所述的益生菌是地衣芽孢杆菌、酪酸梭菌、枯草杆菌、肠球菌二联活菌按2:3:5:6的质量比混合而成的混合菌。中国专利CN 107485626 A属于药物领域，具体涉及一种治疗腹泻的益生菌药物及其制备方法，包括以下重量配比的原料：丁酸梭菌(又名酪酸菌、丁酸梭状芽孢杆菌)菌粉10-40份、嗜酸乳杆菌菌粉10-40份，乳双歧杆菌菌粉10-40份，维生素C1-6份，低聚果糖24-34份，脱脂奶粉10-40份，麦芽糊精2-7份，乳糖2-7份，菊粉5-15份，总活菌数在1×107cfu/g以上。
发明内容
为此，本发明所解决的技术的问题是：现有技术中存在的益生菌制剂，产品形式过于单一，所选用菌株不适合所有人群，尤其是婴幼儿人群的推广应用。
具体来说本发明提供了如下技术方案：
本发明提供了一种用于改善或预防腹泻的益生菌组合物，所述组合物包含必要组分和可选择性组分，按重量份计，所述必要组分包含0.1-30份细菌益生菌，0.1-30份酵母益生菌，0.1-50份益生元，所述可选择性组分包括酵母抽提物和/或辅料。
优选的，以上所述的益生菌组合物，其中，按重量份计，所述可选择性组分包含0-10份酵母抽提物。
优选的，以上所述的益生菌组合物，其中，按重量份计，所述组合物包含2-25份细菌益生菌；2-25份酵母益生菌；5-40份益生元；2-8份酵母抽提物。
优选的，以上所述的益生菌组合物，其中，按重量份计，所述组合物包含5-20份细菌益生菌；5-20份酵母益生菌；10-30份益生元，2-5份酵母抽提物。
优选的，以上所述的益生菌组合物，其中，细菌益生菌选自鼠李糖乳杆菌，动物双歧杆菌，乳双歧杆菌，长双歧杆菌，短双歧杆菌和干酪乳杆菌中的一种或两种以上，优选为鼠李糖乳杆菌、动物双歧杆菌、乳双歧杆菌和干酪乳杆菌中的一种或两种以上，更优选为鼠李糖乳杆菌和/或动物双歧杆菌。
优选的，以上所述的益生菌组合物，其中，所述酵母益生菌选自于啤酒酵母、假丝酵母、毕赤氏酵母和布拉迪酵母中的一种或两种以上，优选为布拉迪酵母和/或啤酒酵母。
优选的，以上所述的益生菌组合物，其中，所述益生元选自于低聚果糖、水苏糖、低聚半乳糖、低聚异麦芽糖和酵母β-葡聚糖中的一种或两种以上，优选为水苏糖、低聚半乳糖和低聚果糖中的一种或两种以上。
优选的，以上所述的益生菌组合物，其中，所述组合物还包含辅料，所述辅料选自于无水葡萄糖、麦芽糊精、葵花籽油和抗性糊精中的一种或两种以上，优选的为无水葡萄糖和/或麦芽糊精。
优选的，所述辅料的重量份为0.01-99.7份，较优选的，所述辅料的重量份为9.9-81份，更优选的，所述辅料的重量份为25-80份。
优选的，以上所述的益生菌组合物，其中，以干重计，所述益生菌组合物中的益生菌的含量为106-1012菌落形成单位，优选为107-1011菌落形成单位。
优选的，以上所述的益生菌组合物，其中，所述益生菌组合物以粉末、片剂、固体饮料、胶囊、汤或液体悬浮物的形式存在。
本发明还提供了一种以上所述的益生菌组合物的制备方法，其将以上所述的细菌益生菌、酵母益生菌、酵母抽提物、益生元和/或辅料进行混合从而得到该益生菌组合物。
优选的，以上所述的制备方法，其中，将辅料、益生元、酵母抽提物中的一种或两种以上的物质混合，冷却至室温，然后加入细菌益生菌和或酵母益生菌进行混合得到所述的益生菌混合物。
优选的，以上所述的制备方法，其中，在混合之后冷却至室温之前，还包含烘干步骤；优选的，所述烘干步骤为烘干至水分活度为0.2以下。
本发明还提供了一种以上所述的益生菌组合物在改善或预防腹泻中的应用。
本发明还提供了一种具有改善或预防腹泻的保健食品组合物，其包含以上所述的益生菌组合物。
本发明所取得的有益效果是：
本发明提供的益生菌制剂对各类人群腹泻具有良好的治疗效果，尤其对于儿童和婴幼儿而言，本发明可显著缩短腹泻持续的时间，减少抗生素的使用。
菌株保藏信息
本发明所用的菌种布拉迪酵母安琪1.27(Saccharomyces boulardii安琪1.27)于2012年04月16日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M2012116，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，邮政编码：430072；电话：(027)-68754052。
该菌株从岭南荔枝皮上分离得到，通过光学显微镜观察，该布拉迪酵母，呈椭球形，以出芽方式无性繁殖；在固体培养基平板上28℃培养72h后，为浅黄色，光滑不透明的圆形菌落，菌落边缘完整。
本发明所用的菌种毕赤酵母C1.8(Cyberlindnera fabianii C1.8)于2017年12月11日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M2017780，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，邮政编码：430072；电话：(027)-68754052。
该菌株从葡萄园土壤中分离得到，而且通过光学显微镜观察，该毕赤酵母菌株，呈现椭球形，以出芽方式无性繁殖；在固体培养基平板上28℃培养72h后，为乳白色，光滑不透明，圆形菌落，直径1-2mm。
本发明所用的菌种啤酒酵母A3.12(Saccharomyces cerevisiaeA3.12)于2017年12月11日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M2017781，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，邮政编码：430072；电话：(027)-68754052。
该菌株从葡萄皮中分离得到，而且通过光学显微镜观察，该啤酒酵母菌株，呈现圆球形，以出芽方式无性繁殖；在固体培养基平板上28℃培养72h后，为乳白色，不透明，光滑圆形菌落，直径0.5-1mm。
本发明所用的菌种假丝酵母C1.7(Wickerhamomyces anomalus C1.7)于2017年12月11日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M2017782，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，邮政编码：430072；电话：(027)-68754052。
该菌株从发酵酱醪中分离得到，而且通过光学显微镜观察，该假丝酵母菌株，呈现椭球形，以出芽方式无性繁殖；在固体培养基平板上28℃培养72h后，为乳白色，不透明，圆形菌落。
本发明所用的菌种长双歧杆菌001(Bifidobacterium longum 001)于2017年10月25日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M2017627，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，邮政编码：430072；电话：(027)-68754052。
该菌株从乳品发酵剂中分离得到，在含0.1％L-半胱氨酸盐酸盐的MRS培养基上划线培养48h后形成明显的菌落，直径在0.5-2.5mm之间，光滑圆形，凸面，乳白色或白色，不透明。
本发明所用的菌种短双歧杆菌001(Bifidobacterium breve 001)于2017年10月25日保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏编号为CCTCC NO:M2017626，保藏地址：中国.武汉.武汉大学，邮政编码：430072；电话：(027)-68754052。
该菌株从乳品发酵剂中分离得到，在MRS固体平板上菌落为光滑圆形、乳白色、半透明、直径为1～2mm。
具体实施方式
如上所述，本发明提供了一种用于改善或预防腹泻的益生菌组合物，按重量份计，所述组合物包含0.1-30份细菌益生菌，0.1-30份酵母益生菌，0-10份酵母抽提物，0.1-50份益生元，可选择性的辅料。
所述的鼠李糖乳杆菌LGG于1985年从健康成年人的粪便样品中分离，符合理想的益生菌菌株标准：耐胃酸和胆汁、能够粘附于人类肠道上皮细胞、定植在人类小肠、产生抗菌类物质、具有确切的健康益处。LGG是我国批准的可用于婴幼儿食品的9株益生菌之一。《欧洲急性小儿胃肠炎诊治的循证医学南》(2008)中提及“经过RCTs分析证明LGG(I，A)与布拉迪酵母菌(II，B)对于控制腹泻具有辅助治疗作用”，认为LGG可显著缩短腹泻病程，尤其是轮状病毒性腹泻，降低腹泻迁延至7d的风险，缩短住院时间。分析结论认为，LGG对于治疗婴幼儿急性腹泻具有相当的治疗作用。
所述的低聚果糖也被称为菊粉，是一种可被人体微生物群发酵的水溶性纤维。在本发明中，低聚果糖被定义为一种非消化性寡糖，包括一条聚合度(DP)为2至250的β连接的果糖单元的链，90％以上的果糖单元有β(2→1)键连接。果糖链的末端可以有也可以没有葡萄糖单元。因而，低聚果糖可以由Gfn或Fn表示，其中G代表葡萄糖基本单元，F代表果糖基本单元，n为互相连接的果糖基本单元的数目，n为2或者更多。低聚果糖能选择性的刺激肠道细菌、特别是益生菌的生长和/或活性，这种刺激尤其是发生在结肠中，从而有利于降低pH值，形成了有机酸如乳酸和短链脂肪酸，这种低pH的肠道环境有利于抑制有害菌的生长，且有机酸能作为肠道上皮细胞的能量来源，从而起到修复肠壁的作用。它们还有助于矿物保持，这在腹泻时是特别有利的。
面包酵母、酿酒酵母等是我国传统可用于食品加工的菌种。不仅可用于发酵面食、酿酒等，有的特殊的酿酒酵母属还具有益生菌作用。比如布拉迪酵母被多项临床研究发现在腹泻、克罗恩病、肠炎等方面具有积极的治疗效果。此外，酵母本身是一个营养宝库，含有优质蛋白质、完整的B族维生素、功能性酵母多糖等营养成分。对于腹泻人群而言，由于肠道微生态的紊乱，可能导致B族维生素合成不足。因此，添加酿酒酵母还可以起到补充B族维生素的作用。
酵母抽提物是以食品用酵母为主要原料，以酵母自身的酶或外加食品级酶的共同作用下，酶解自溶(可再经分离提取)后得到的产品，并富含核苷酸、氨基酸、肽、多肽等酵母细胞中的可溶性成分。
婴幼儿在腹泻的情况下，不可避免会存在营养成分的丢失。其中，蛋白质是构成生命的最重要物质基础之一，因此，补充氨基酸和肽等营养物质可以弥补腹泻所带来的营养成分不足或缺失。核苷酸也是人类生命早期的必需营养物质，虽然小儿本身可以在体内制造核苷酸，但如果膳食中能适量，婴幼儿的生长发育、胃肠道发育、免疫功能将会更好。此外，已有大量研究显示，在婴幼儿饮食中添加核苷酸有助于改善肠道微生物菌群，促进肠道内双歧杆菌生长。核苷酸还可通过降低粪便pH值来抑制致病菌，从而降低感染性腹泻发生率。也就是说，酵母抽提物中的核苷酸一定程度上还能起到益生元的作用。
具体来说本发明提供了如下技术方案：
本发明提供了一种用于改善或预防腹泻的益生菌组合物，所述组合物包含必要组分和可选择性组分，按重量份计，所述必要组分包含0.1-30份细菌益生菌，0.1-30份酵母益生菌，0.1-50份益生元，所述可选择性组分包括酵母抽提物和/或辅料。
优选的，以上所述的益生菌组合物，其中，按重量份计，所述可选择性组分包含0-10份酵母抽提物。
优选的，以上所述的益生菌组合物，其中，按重量份计，所述组合物包含2-25份细菌益生菌；2-25份酵母益生菌；5-40份益生元；2-8份酵母抽提物。
优选的，以上所述的益生菌组合物，其中，按重量份计，所述组合物包含5-20份细菌益生菌；5-20份酵母益生菌；10-30份益生元，2-5份酵母抽提物。
优选的，以上所述的益生菌组合物，其中，细菌益生菌选自鼠李糖乳杆菌，动物双歧杆菌，乳双歧杆菌，长双歧杆菌，短双歧杆菌和干酪乳杆菌中的一种或两种以上，优选为鼠李糖乳杆菌、动物双歧杆菌、乳双歧杆菌和干酪乳杆菌中的一种或两种以上，更优选为鼠李糖乳杆菌和/或动物双歧杆菌。
优选的，以上所述的益生菌组合物，其中，所述酵母益生菌选自于啤酒酵母、假丝酵母、毕赤氏酵母和布拉迪酵母中的一种或两种以上，优选为布拉迪酵母和/或啤酒酵母。
优选的，以上所述的益生菌组合物，其中，所述益生元选自于低聚果糖、水苏糖、低聚半乳糖、低聚异麦芽糖和酵母β-葡聚糖中的一种或两种以上，优选为水苏糖、低聚半乳糖和低聚果糖中的一种或两种以上。
优选的，以上所述的益生菌组合物，其中，所述组合物还包含辅料，所述辅料选自于无水葡萄糖、麦芽糊精、葵花籽油和抗性糊精中的一种或两种以上，优选的为无水葡萄糖和/或麦芽糊精。
优选的，所述辅料的重量份为0.01-99.7份，较优选的，所述辅料的重量份为9.9-81份，更优选的，所述辅料的重量份为25-80份。
优选的，以上所述的益生菌组合物，其中，以干重计，所述益生菌组合物中的益生菌的含量为106-1012菌落形成单位，优选为107-1011菌落形成单位。
优选的，以上所述的益生菌组合物，其中，所述益生菌组合物以粉末、片剂、固体饮料、胶囊、汤或液体悬浮物的形式存在。
本发明还提供了一种以上所述的益生菌组合物的制备方法，其将以上所述的细菌益生菌、酵母益生菌、酵母抽提物、益生元和/或辅料进行混合从而得到该益生菌组合物。
优选的，以上所述的制备方法，其中，将辅料、益生元、酵母抽提物中的一种或两种以上的物质混合，冷却至室温，然后加入细菌益生菌和或酵母益生菌进行混合得到所述的益生菌混合物。
优选的，以上所述的制备方法，其中，在混合之后冷却至室温之前，还包含烘干步骤；优选的，所述烘干步骤为烘干至水分活度为0.2以下。
本发明还提供了一种以上所述的益生菌组合物在改善或预防腹泻中的应用。
本发明还提供了一种具有改善或预防腹泻的保健食品组合物，其包含以上所述的益生菌组合物。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，以干重计，所述益生菌组合物中的益生菌的含量为106-1012菌落形成单位。
在本发明优选的一种具体实施方式中，其中，所述益生菌组合物以粉末、片剂、固体饮料、胶囊、汤或液体悬浮物的形式存在，优选的，所述益生菌组合物可以以婴儿配方、后续配方、成长奶、婴儿谷物、婴儿食品、酸奶、谷物棒、早餐谷物、甜点、冷冻食物、汤、液体悬浮物、粉末、片剂、固体饮料、胶囊、糖果、营养组合为或营养补充物的形式存在。
本发明提供了一种上述所述益生菌组合物的制备方法，将所述的细菌益生菌、酵母益生菌、酵母抽提物、益生元和/或辅料进行混合从而得到该益生菌组合物。
下面对本实施例所用的原料及设备的生产厂家，以及产品分析使用的设备和分析方法进行说明如下，其中所述的化学物质没有标明的均为常规试剂的化学纯级别。实施例所用到的原料的信息及实验设备如表1和表2所示
表1实施例中所用到的原料的信息
Figure BDA0002138914130000091
Figure BDA0002138914130000101
表2实施例中所用到的实验设备的信息
设备名称 型号 生产厂家
沸腾制粒机(干燥设备) FL-300C 重庆佳玛机械制造有限公司
条状包装机 6列 广州珐玛珈智能设备股份有限公司
全自动硬胶囊充填机 NJP-2000B 北京翰林航宇科技发展股份公司
粉剂包装机 PW-129CO 武汉迈威机械有限公司
本发明的实施例和对比例中用到的干酪乳杆菌来源于北京科拓恒通生物技术股份有限公司，其型号为干酪乳杆菌Zhang；动物双歧杆菌源于北京沐吉健康科技有限公司，其型号为动物双歧杆菌Bb-12；乳双歧杆菌来源于广州市康品新材料有限公司，其型号为乳双歧杆菌HN019；鼠李糖乳杆菌来源于广州市康品新材料有限公司，其型号为鼠李糖乳杆菌HN001。
本发明的实施例和对比例中所用到的布拉迪酵母是由布拉迪酵母安琪1.27(Saccharomyces boulardii安琪1.27)菌体制备得到；毕赤酵母是由毕赤酵母C1.8(Cyberlindnera fabianii C1.8)菌体制备得到；啤酒酵母是由啤酒酵母A3.12(Saccharomyces cerevisiae A3.12)菌体制备得到；假丝酵母是由假丝酵母C1.7(Wickerhamomyces anomalus C1.7)菌体制备得到；长双歧杆菌是由长双歧杆菌001(Bifidobacterium longum 001)菌体制备得到；短双歧杆菌为短双歧杆菌001(Bifidobacterium breve 001)菌体制备得到。其中，制备方法如下：
(一)布拉迪酵母的制备方法
本发明实施例和对比例中采用的布拉迪酵母为布拉迪酵母安琪1.27(Saccharomyces boulardii安琪1.27)失去活性的菌体，上述布拉迪酵母粉通过以下方法制备得到：
1)菌种活化：挑取菌落一环放入YPD液体培养基中，放入摇床中将菌种活化。
2)菌种纯化：将上一步活化后的菌液梯度稀释铺平板，以获取单个菌落。
3)菌种扩大培养：挑取上一步平板中单个菌落接种至200mL YPD液体培养基，在30℃下，220rpm转速下培养18h；二级种子培养，按照二级培养基体积的10％将一级培养的种子接入1L二级培养基，28℃下，200rpm转速下培养18h；其pH控制在5.6。
4)种子富集：5000rpm离心，用钙离子和镁离子含量低的去离子水洗涤3次，富集得到酿酒酵母种子，至酵母湿重为220g/L。
5)酵母乳冻干：对以上得到的酵母乳加入酵母干重10％脱脂奶粉，冷冻干燥至至水分活度为0.15粉碎成粉。
(二)毕赤酵母的制备方法
本发明实施例和对比例中采用的毕赤酵母为毕赤酵母C1.8(Cyberlindnerafabianii C1.8)失去活性的菌体，其制备方法如下：
1)菌种活化：挑取毕赤酵母C1.8菌落一环放入YPD液体培养基中，放入摇床中将菌种活化。
2)菌种纯化：将上一步活化后的菌液梯度稀释铺平板，以获取单个菌落。
3)菌种扩大培养：挑取上一步平板中单个菌落接种至200mL YPD液体培养基，在30℃下，220rpm转速下培养20h；二级种子培养，按照二级培养基体积的10％将一级培养的种子接入1L二级培养基，28℃下，220rpm转速下培养18h；其pH控制在5.5-5.6。
4)种子富集：5000rpm离心，用钙离子和镁离子含量低的去离子水洗涤3次，富集得到酿酒酵母种子，至酵母湿重为220g/L。
5)酵母乳滚筒干燥-流化床干燥：对以上得到的酵母乳经滚筒脱水，进入流化床干燥，进风温度为100℃。待产品温度达到50℃即得到活性酵母粉。
(三)啤酒酵母粉的制备方法
本发明实施例和对比例中采用的啤酒酵母为啤酒酵母A3.12(SaccharomycescerevisiaeA3.12)失去活性的菌体，其制备方法如下：
1)菌种活化：挑取啤酒酵母A3.12菌落一环放入YPD液体培养基中，放入摇床中将菌种活化。
2)菌种纯化：将上一步活化后的菌液梯度稀释铺平板，以获取单个菌落。
3)菌种扩大培养：挑取上一步平板中单个菌落接种至200mL YPD液体培养基，在30℃下，220rpm转速下培养20h；二级种子培养，按照二级培养基体积的10％将一级培养的种子接入1L二级培养基，28℃下，220rpm转速下培养18h；其pH控制在5.5-5.6。
4)种子富集：5000rpm离心，用钙离子和镁离子含量低的去离子水洗涤3次，富集得到酿酒酵母种子，至酵母湿重为220g/L。
5)酵母乳滚筒-流化床干燥：对以上得到的酵母乳经滚筒脱水，进入流化床干燥，进风温度为100℃。待产品温度达到50℃即得到活性酵母粉。
(四)假丝酵母粉的制备方法
本发明实施例和对比例中采用的假丝酵母为假丝酵母C1.7(Wickerhamomycesanomalus C1.7)失去活性的菌体，其制备方法如下：
1)菌种活化：挑取假丝酵母C1.7菌落一环放入麦芽汁培养基中，放入摇床中将菌种活化。
2)菌种纯化：将上一步活化后的菌液梯度稀释铺平板，以获取单个菌落。
3)菌种扩大培养：挑取上一步平板中单个菌落接种至200mL麦芽汁培养基，在30℃下，220rpm转速下培养20h；二级种子培养，按照二级培养基体积的10％将一级培养的种子接入1L二级培养基，28℃下，220rpm转速下培养18h；其pH控制在5.5-5.6。
4)种子富集：5000rpm离心，用钙离子和镁离子含量低的去离子水洗涤3次，富集得到酿酒酵母种子，至酵母湿重为220g/L。
5)酵母乳滚筒干燥-流化床干燥：对以上得到的酵母乳经滚筒脱水，进入流化床干燥，进风温度为100℃。待产品温度达到50℃即得到活性酵母粉。
(五)长双歧杆菌粉的制备方法
本发明实施例和对比例中采用的长双歧杆菌为长双歧杆菌001(Bifidobacteriumlongum 001)失去活性的菌体，其制备方法如下：
1)菌种活化：挑取长双歧杆菌001菌落一环放入MRS液体培养基中，放入摇床中将菌种活化。
2)菌种纯化：将上一步活化后的菌液梯度稀释铺平板，以获取单个菌落。
3)菌种扩大培养：挑取上一步平板中单个菌落接种至200mL MRS液体培养基，在30℃下，220rpm转速下培养20h；二级种子培养，按照二级培养基体积的10％将一级培养的种子接入1L二级培养基，28℃下，220rpm转速下培养18h；其pH控制在6.0-6.2。
4)种子富集：5000rpm离心，用钙离子和镁离子含量低的去离子水洗涤3次，富集得到乳酸菌发酵乳，至菌体湿重为250g/L。
5)乳酸菌发酵液冷冻干燥：对以上得到的乳酸菌发酵液加入菌体干重10％的脱脂奶粉和0.5％维生素C，冷冻干燥至至水分活度为0.15粉碎成粉得到活性长双歧杆菌粉。
(六)短双歧杆菌粉的制备方法
本发明实施例和对比例中采用的短双歧杆菌为短双歧杆菌001(Bifidobacteriumbreve 001)失去活性的菌体，其制备方法如下：
1)菌种活化：挑取短双歧杆菌001菌落一环放入MRS液体培养基中，放入摇床中将菌种活化。
2)菌种纯化：将上一步活化后的菌液梯度稀释铺平板，以获取单个菌落。
3)菌种扩大培养：挑取上一步平板中单个菌落接种至200mL MRS液体培养基，在30℃下，220rpm转速下培养20h；二级种子培养，按照二级培养基体积的10％将一级培养的种子接入1L二级培养基，28℃下，220rpm转速下培养18h；其pH控制在6.0-6.2。
4)种子富集：5000rpm离心，用钙离子和镁离子含量低的去离子水洗涤3次，富集得到乳酸菌发酵乳，至菌体湿重为250g/L。
5)乳酸菌发酵液冷冻干燥：对以上得到的乳酸菌发酵液加入菌体干重10％的脱脂奶粉和0.5％维生素C，冷冻干燥至至水分活度为0.15粉碎成粉得到活性长双歧杆菌粉。
实施例1
将69.8g无水葡萄糖和0.1g低聚果糖混合均匀，烘干至水分活度为0.15，冷却至室温后将0.1g鼠李糖乳杆菌和30g啤酒酵母加入并混合均匀。将此混合好的物料用条式包装机分包为1g一袋的益生菌固体饮料。
按照GB4789.35-2016中的方法测定每袋中益生菌的含量，经检测，每袋含有6.0*109CFU啤酒酵母菌，3*107CFU鼠李糖乳杆菌。
乳酸菌和酵母菌的检测方法如下：
(一)其中，乳酸菌的测定步骤如下：
1样品制备
1.1样品的全部制备过程均应遵循无菌操作程序。
以无菌操作称取25g样品，置于装有225mL生理盐水的无菌均质杯内，于8000r/min～10000r/min均质1min～2min，制成1:10样品匀液；或置于225mL生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1min～2min制成1:10的样品匀液。
1.2步骤
1.2.1用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1:10样品匀液1mL，沿管壁缓慢注于装有9mL生理盐水的无菌试管中(注意吸管尖端不要触及稀释液)，振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀，制成1:100的样品匀液。
1.2.2另取1mL无菌吸管或微量移液器吸头，按上述操作顺序，做10倍递增样品匀液，每递增稀释一次，即换用1次1mL灭菌吸管或吸头。
1.2.3乳酸菌计数
1.2.3.1乳酸菌总数
根据待检样品活菌总数的估计，选择2个～3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取0.1mL样品匀液分别置于2个MRS琼脂平板，使用L形棒进行表面涂布。36℃±1℃，厌氧培养48h±2h后计数平板上的所有菌落数。从样品稀释到平板涂布要求在15min内完成。
1.2.3.2双歧杆菌计数
根据对待检样品双歧杆菌含量的估计，选择2个～3个连续的适宜稀释度，每个稀释度吸取0.1mL样品匀液于莫匹罗星锂盐(Li-Mupirocin)改良MRS琼脂平板，使用灭菌L形棒进行表面涂布，每个稀释度作两个平板。36℃±1℃，厌氧培养48h±2h后计数平板上的所有菌落数。从样品稀释到平板涂布要求在15min内完成。
1.2.3.4乳杆菌计数
1.2.3.1项乳酸菌总数结果减去1.2.3.2项双歧杆菌菌计数结果即得乳杆菌计数。
1.3菌落计数
可用肉眼观察，必要时用放大镜或菌落计数器，记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-forming units，CFU)表示。
1.3.1选取菌落数在30CFU～300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。
1.3.2其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。
1.3.3当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数。
1.4结果的表述
1.4.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数，作为每g(mL)中菌落总数结果。
1.4.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时，按公式(1)计算
N＝∑c/(n1+0.1n2)d……………………………(1)
式中：
N——样品中菌落数；
∑C——平板(含适宜范围菌落数的平板)菌落数之和；
n1——第一稀释度(低稀释倍数)平板个数；
n2——第二稀释度(高稀释倍数)平板个数；
d——稀释因子(第一稀释度)。
1.4.3若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
1.4.4若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
1.4.5若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算。
1.4.6若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU～300CFU之间，其中一部分小于30CFU或大于300CFU时，则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
1.5菌落数的报告
1.5.1菌落数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。
1.5.2菌落数大于或等于100CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
1.5.3称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。
2.结果与报告
根据菌落计数结果出具报告，报告单位以CFU/g(mL)表示。
(二)根据GB 4789.15-2016规定的方法测定样品中的酵母菌数。步骤如下：
1.样品制备
1.1固体和半固体样品：称取25g样品至盛有225mL灭菌蒸馏水的锥形瓶中,充分振摇，即为1:10稀释液。或放入盛有225mL灭菌蒸馏水的均质袋中，用拍击式均质器拍打2min，制成1:10的样品均质液。
1.2液体样品：以无菌吸管吸取25mL样品盛有225mL灭菌蒸馏水的锥形瓶(可在瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中，充分混匀，制成1:10的样品匀液。
1.3取1mL1:10稀释液注入含有9mL灭菌水的试管中另换一支1mL灭菌吸管反复吹吸,此液为1:100稀释液。
1.4按取5.1.3操作程序，制备10倍系列稀释样品匀液,每递增稀释一次,换用1次1mL无菌吸管。
1.5根据对样品污染状况的估计,选择2个～3个适宜的稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10倍递增稀释的同时,每个稀释度分别吸取1mL样品匀液于2个无菌平皿内。同时分别取1mL样品稀释液加入2个无菌平皿做空白对照。
1.6及时将15mL～20mL冷却至46℃的马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基或孟加拉红培养基(可放置于46±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。
2.培养
待琼脂凝固后,将平皿倒置，28±1℃培养5d，观察并记录。
3.菌落计数
肉眼观察，必要时可用放大镜，记录各稀释倍数和相应的酵母数。以菌落形成单位(colony forming units,CFU)表示。
选取菌落数10CFU～150CFU的平板，根据菌落形态分别计数霉菌和酵母数。霉菌蔓延生长覆盖整个平板的可记录为多不可计。菌落数应采用两个平板的平均数。
4.结果与报告
计算两个平板菌落数的平均值，再将平均值乘以相应稀释倍数计算。
4.1若所有平板上菌落数大于150CFU，则对稀释度最高的平板进行计数，其他平板可记录为多不可计，结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。
4.2若所有平板上菌落数小于10CFU，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。
4.3若所用稀释度平板均无菌落生长，则以小于1乘以最低稀释倍数计算；如为原液，则以小于1计数。
实施例2
将9.9g麦芽糊精、10g酵母抽提物、50g低聚半乳糖混合均匀，烘干至水分活度为0.09，冷却至室温后将30g动物双歧杆菌，0.1g布拉迪酵母菌加入并混合均匀。将此混合好的物料用胶囊填充机填充为0.3g净含量的胶囊。
经检测，每粒胶囊含有0.6*107CFU布拉迪酵母菌,2.7*109CFU动物双歧杆菌。
实施例3
将99.7g无水葡萄糖和0.1g酵母β-葡聚糖混合均匀，用20％酒精一步制粒并烘干至水分活度为0.18。冷却至室温后将0.1g长双歧杆菌和0.1g布拉迪酵母菌加入并混合均匀。将此混合好的物料用包装机填充为1g净含量的婴幼儿辅食。
经检测，每袋中含有0.6*107CFU布拉迪酵母菌,1.0*108CFU动物双歧杆菌。
实施例4
将30g低聚果糖、10g酵母抽提物混合均匀，烘干至水分活度为0.15，冷却至室温后将30g乳双歧杆菌，30g毕赤酵母加入并混合均匀。将此混合好的物料用条式包装机分包为2g一袋的益生菌固体饮料。
经检测，每袋中6.0*109CFU毕赤酵母菌，6.0*1010CFU乳双歧杆菌。
实施例5
将81g抗性糊精、5g低聚异麦芽糖和2g酵母抽提物混合均匀，用20％酒精一步制粒并烘干至水分活度为0.05。冷却至室温后将1g长双歧杆菌，1g乳双歧杆菌、10g毕赤酵母，15g布拉迪酵母加入并混合均匀。然后用压片机压成0.5g片重的片剂。
经检测，每片含有4.2*108CFU乳双歧杆菌；3.9*108CFU长双歧杆菌；4.5*108CFU毕赤酵母；1.4*109CFU布拉迪酵母。
实施例6
将5g低聚半乳糖和2g酵母抽提物混合均匀，并烘干至水分活度为0.19，然后和2g鼠李糖乳杆菌，2g假丝酵母一起加入至89g葵花籽油中，搅拌均匀。分装至玻璃瓶中密封，每瓶8g。
经检测，每瓶中含有3.2*109CFU假丝酵母，4.5*109CFU鼠李糖乳杆菌。
实施例7
将40g水苏糖、25g无水葡萄糖和8g酵母抽提物混合均匀，并烘干至水分活度为0.09，冷却至室温后加入20g干酪乳杆菌，5g短双歧杆菌，以及2g假丝酵母并混合均匀。将此混合好的物料用条式包装机分包为1g一袋的益生菌固体饮料。
经检测，每袋含有2.1*1010CFU干酪乳杆菌，1.5*109CFU短双歧杆菌，3.9*108CFU假丝酵母。
实施例8
将42g酵母β-葡聚糖、和8g酵母抽提物混合均匀，并烘干至水分活度为0.15，冷却至室温后加入10g鼠李糖乳杆菌，10g动物双歧杆菌，5g长双歧杆菌，10g啤酒酵母，10g毕赤酵母以及5g布拉迪酵母并混合均匀。将此混合好的物料用条式包装机分包为1g一袋的益生菌固体饮料。
经检测，每袋含有3.1*109CFU鼠李糖乳杆菌，3.2*109CFU动物双歧杆菌，4.8*109CFU长双歧杆菌，2.0*109CFU啤酒酵母，1.9*109CFU毕赤酵母，1.0*109CFU布拉迪酵母。
实施例9
将10g酵母β-葡聚糖和2g酵母抽提物混合均匀，并烘干至水分活度为0.14，然后和3g鼠李糖乳杆菌，2g动物双歧杆菌，5g布拉迪酵母一起加入至78g葵花籽油中，搅拌均匀。分装至玻璃瓶中密封，每瓶8g。
经检测，每瓶含有7.2*109CFU鼠李糖乳杆菌，4.8*109CFU动物双歧杆菌，8.0*109CFU布拉迪酵母。
实施例10
将25g抗性糊精、30g低聚半乳糖、5g酵母抽提物混合均匀，并烘干至水分活度为0.15，冷却至室温后加入20g乳双歧杆菌，20g布拉迪酵母并混合均匀。将此混合好的物料用条式包装机分包为2g一袋的益生菌固体饮料。
经检测，每袋含有8.0*109CFU布拉迪酵母，4.1*1010CFU乳双歧杆菌。
实施例11
将40g无水葡萄糖、25g低聚半乳糖、5g酵母抽提物混合均匀，并烘干至水分活度0.104，冷却至室温后加入15g长双歧杆菌，15g啤酒酵母并混合均匀。将此混合好的物料用条式包装机分包为2g一袋的益生菌固体饮料。
经检测，每袋含有6.0*109CFU啤酒酵母,3.2*1010CFU长双歧杆菌。
实施例12
将50g水苏糖、10g酵母抽提物混合均匀，并烘干至水分活度为0.15，冷却至室温后加入10g鼠李糖乳杆菌，10g动物双歧杆菌，10g干酪乳杆菌，10g布拉迪酵母并混合均匀。将此混合好的物料用条式包装机分包为2g一袋的益生菌固体饮料。
经检测，每袋含有6.3*109CFU鼠李糖乳杆菌，5.9*109CFU动物双歧杆菌，2.1*1010CFU干酪乳杆菌，4.2*109CFU布拉迪酵母。
对比例1
将50g水苏糖、10g酵母抽提物，10g鼠李糖乳杆菌，10g动物双歧杆菌，10g干酪乳杆菌，10g布拉迪酵母混合均匀，并烘干至水分活度0.15。将此混合好的物料用条式包装机分包为2g一袋的益生菌固体饮料。
经检测，每袋含有3.5*107CFU鼠李糖乳杆菌，2.4*106CFU动物双歧杆菌，8.9*106CFU干酪乳杆菌，1.5*107CFU布拉迪酵母。
对比例1和实施例12的区别是实施例1是烘干后加入鼠李糖乳杆菌、动物双歧杆菌、干酪乳杆菌和布拉迪酵母，而对比例1是加入所有原料进行烘干。可以看出，对比例1中菌含量较实施例12相比含量较低。
对比例2
将50g水苏糖、10g酵母抽提物混合均匀，并烘干至水分活度为0.3，冷却至室温后加入10g鼠李糖乳杆菌，10g动物双歧杆菌，10g干酪乳杆菌，10g布拉迪酵母并混合均匀。将此混合好的物料用条式包装机分包为2g一袋的益生菌固体饮料。
按照实施例1所述的方法测定每袋中益生菌的含量，经测定，每袋中含有每袋含有6.2*109CFU鼠李糖乳杆菌，5.5*109CFU动物双歧杆菌，2.1*1010CFU干酪乳杆菌，4.0*109CFU布拉迪酵母。
将实施例12与对比例2进行对比，其区别在于，水分活度不同，实施例1制备过程中控制水分活度在0.1，而对比例2的水分活度为0.3，从所得到的结果可以看出，实施例12中所得到的益生菌的含量较高，而对比例2所得到的益生菌的含量相对较低。
将实施例12以及对比例2所得到的每袋益生菌在1个月后检测，实施例12中的每袋含有6.3*109CFU鼠李糖乳杆菌，5.9*109CFU动物双歧杆菌，2.1*1010CFU干酪乳杆菌，4.2*109CFU布拉迪酵母；而对比例2中的每袋含有5.5*107CFU鼠李糖乳杆菌，6.8*106CFU动物双歧杆菌，1.5*108CFU干酪乳杆菌，3.8*108CFU布拉迪酵母。2个月后再检测，实施例1中的每袋含有6.2*109CFU鼠李糖乳杆菌，5.9*109CFU动物双歧杆菌，2.2*1010CFU干酪乳杆菌，4.0*109CFU布拉迪酵母，而对比例2中的每袋含有3.6*106CFU鼠李糖乳杆菌，2.7*105CFU动物双歧杆菌，4.2*106CFU干酪乳杆菌，3.1*106CFU布拉迪酵母。从上述对比结果可以看出，实施例12中的益生菌数相对稳定，而对比例2中的益生菌有一定程度损失，说明益生菌对水分活度要求较高，水分活度一般在0.2以下较稳定，水分活度越高，菌的衰减越快。
对比例3
将50g无水葡萄糖、10g酵母抽提物混合均匀，并烘干至水分活度为0.15，冷却至室温后加入10g鼠李糖乳杆菌，10g动物双歧杆菌，10g干酪乳杆菌，10g布拉迪酵母并混合均匀。将此混合好的物料用条式包装机分包为2g一袋的益生菌固体饮料。
经检测，每袋含有6.1*109CFU鼠李糖乳杆菌，5.5*109CFU动物双歧杆菌，2.0*1010CFU干酪乳杆菌，4.1*109CFU布拉迪酵母。
对比例4
将30g无水葡萄糖、50g水苏糖、10g酵母抽提物混合均匀，并烘干至水分活度为0.15，冷却至室温后加入10g布拉迪酵母并混合均匀。将此混合好的物料用条式包装机分包为2g一袋的益生菌固体饮料。
经检测，每袋含有4.0*109CFU布拉迪酵母。
对比例5
将10g无水葡萄糖、50g水苏糖、10g酵母抽提物混合均匀，并烘干至水分活度为0.15，冷却至室温后加入10g鼠李糖乳杆菌，10g动物双歧杆菌，10g干酪乳杆菌并混合均匀。将此混合好的物料用条式包装机分包为2g一袋的益生菌固体饮料。
经检测，每袋含有6.2*109CFU鼠李糖乳杆菌，5.9*109CFU动物双歧杆菌，2.0*1010CFU干酪乳杆菌。
对比例6
将35g水苏糖、10g酵母抽提物混合均匀，并烘干至水分活度为0.15，冷却至室温后加入15g鼠李糖乳杆菌，15g动物双歧杆菌，15g干酪乳杆菌，10g布拉迪酵母并混合均匀。将此混合好的物料用条式包装机分包为2g一袋的益生菌固体饮料。
经检测，每袋含有8.6*109CFU鼠李糖乳杆菌，9.2*109CFU动物双歧杆菌，3.3*1010CFU干酪乳杆菌，4.2*109CFU布拉迪酵母。
对比例7
将10g水苏糖、10g酵母抽提物混合均匀，并烘干至水分活度为0.15，冷却至室温后加入10g鼠李糖乳杆菌，10g动物双歧杆菌，10g干酪乳杆菌，50g布拉迪酵母并混合均匀。将此混合好的物料用条式包装机分包为2g一袋的益生菌固体饮料。
经检测，6.3*109CFU鼠李糖乳杆菌，6.1*109CFU动物双歧杆菌，2.1*1010CFU干酪乳杆菌，2.4*1010CFU布拉迪酵母。
应用例1
1.治疗对象：发明人选取宜昌市第一人民医院2017年3月-2018年9月临床收治的小儿腹泻患者(年龄3岁以下)209例，患者症见：大便次数每天数次至十几次，呈稀糊状、蛋花汤样或水样，伴泡沫或带奶块，严重者常呈喷射状，或伴有腹泻频繁、体温升高、精神萎靡、面色苍白、烦躁不安。将患者均分为19组，每组11例。
2.治疗方法：除了给予基础补液治疗外，
第一组服用实施例1所制备得到的益生菌组合物，每次2g，每日1次；
第二组服用实施例2所制备得到的益生菌组合物，每次1.8g(打开胶囊，里面内容物冲水)，每日1次；
第三组服用实施例3所制备得到的益生菌组合物，每次1g，每日2次；
第四组服用实施例4所制备得到的益生菌组合物，每次2g，每日1次；
第五组服用实施例5所制备得到的益生菌组合物，每次2片，每日2次；
第六组服用实施例6所制备得到的益生菌组合物，每次10滴，每日1次；
第七组服用实施例7所制备得到的益生菌组合物，每次1g，每日1次；
第八组服用实施例8所制备得到的益生菌组合物，每次1g，每日2次；
第九组服用实施例9所制备得到的益生菌组合物，每次10滴，每日2次；
第十组服用实施例10所制备得到的益生菌组合物，每次2g，每日1次；
第十一组服用实施例11所制备得到的益生菌组合物，每次2g，每日1次；
第十二组服用实施例12所制备得到的益生菌组合物，每次2g，每日1次；
第十三组服用对比例1所制备得到的益生菌组合物，每次2g，每日1次；
第十四组服用对比例2所制备得到的益生菌组合物，每次2g，每日1次；
第十五组服用对比例3所制备得到的益生菌组合物，每次2g，每日1次；
第十六组服用对比例4所制备得到的益生菌组合物，每次2g，每日1次；
第十七组服用对比例5所制备得到的益生菌组合物，每次2g，每日1次；
第十八组服用对比例6所制备得到的益生菌组合物，每次2g，每日1次；
第十九组服用对比例7所制备得到的益生菌组合物，每次2g，每日1次。
3.治疗结果及疗效标准：
表3治疗效果表
Figure BDA0002138914130000231
Figure BDA0002138914130000241
其中：疗效标准为：
痊愈：腹泻消失，精神状态良好；
有效：腹泻缓解，精神状态好转；
无效：所以症状都没缓解。
通过以上临床治疗可以发现，本发明的益生菌组合物对于小儿腹泻有效率达85％以上，能有效缓解小儿腹泻，且无需另外服用抗生素。从对比例3-5可以看出，该益生菌组合物是细菌益生菌和酵母益生菌以及益生元三者的共同作用，当三者中缺乏一种时抗腹泻的效果都会降低，而从对比例6、7可以看出，即使加入过量的细菌益生菌或酵母益生菌，其对抗腹泻的效果并没有提升很多，反而增加了成本。
以上所述，仅是本发明实施的较佳实施例，并非对本发明做任何形式上的限制，凡在本发明的精神和原则之内所做的修改、等同替换和改进等，均需要包含在本发明的保护范围之内。

Claims (15)

1.一种用于改善或预防腹泻的益生菌组合物，所述组合物包含必要组分和可选择性组分，按重量份计，所述必要组分包含0.1-30份细菌益生菌，0.1-30份酵母益生菌，0.1-50份益生元，所述可选择性组分包括酵母抽提物和/或辅料。
2.根据权利要求1所述的益生菌组合物，其中，按重量份计，所述可选择性组分包含0-10份酵母抽提物。
3.根据权利要求1或2所述的益生菌组合物，其中，按重量份计，所述组合物包含2-25份细菌益生菌；2-25份酵母益生菌；5-40份益生元；2-8份酵母抽提物。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的益生菌组合物，其中，按重量份计，所述组合物包含5-20份细菌益生菌；5-20份酵母益生菌；10-30份益生元，2-5份酵母抽提物。
5.根据权利要求1-4中任一项所述的益生菌组合物，其中，细菌益生菌选自鼠李糖乳杆菌，动物双歧杆菌，乳双歧杆菌，长双歧杆菌，短双歧杆菌和干酪乳杆菌中的一种或两种以上，优选为鼠李糖乳杆菌、动物双歧杆菌、乳双歧杆菌和干酪乳杆菌中的一种或两种以上，更优选为鼠李糖乳杆菌和/或动物双歧杆菌。
6.根据权利要求1-5中任一项所述的益生菌组合物，其中，所述酵母益生菌选自于啤酒酵母、假丝酵母、毕赤氏酵母和布拉迪酵母中的一种或两种以上，优选为布拉迪酵母和/或啤酒酵母。
7.根据权利要求1-6中任一项所述的益生菌组合物，其中，所述益生元选自于低聚果糖、水苏糖、低聚半乳糖、低聚异麦芽糖和酵母β-葡聚糖中的一种或两种以上，优选为水苏糖、低聚半乳糖和低聚果糖中的一种或两种以上。
8.根据权利要求1-7中任一项所述的益生菌组合物，其中，所述组合物还包含辅料，所述辅料选自于无水葡萄糖、麦芽糊精、葵花籽油和抗性糊精中的一种或两种以上，优选的为无水葡萄糖和/或麦芽糊精；优选的，所述辅料的重量份为0.01-99.7份，较优选的，所述辅料的重量份为9.9-81份，更优选的，所述辅料的重量份为25-80份。
9.根据权利要求1-8中任一项所述的益生菌组合物，其中，以干重计，所述益生菌组合物中的益生菌的含量为106-1012菌落形成单位，优选为107-1011菌落形成单位。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的益生菌组合物，其中，所述益生菌组合物以粉末、片剂、固体饮料、胶囊、汤或液体悬浮物的形式存在。
11.权利要求1-10中任一项所述的益生菌组合物的制备方法，其将权利要求1-10任一项所述的细菌益生菌、酵母益生菌、酵母抽提物、益生元和/或辅料进行混合从而得到该益生菌组合物。
12.根据权利要求11所述的制备方法，其中，将辅料、益生元、酵母抽提物中的一种或两种以上的物质混合，冷却至室温，然后加入细菌益生菌和或酵母益生菌进行混合得到所述的益生菌混合物。
13.根据权利要求12所述的制备方法，其中，在混合之后冷却至室温之前，还包含烘干步骤；优选的，所述烘干步骤为烘干至水分活度为0.2以下。
14.权利要求1-10任一项所述的益生菌组合物或权利要求11-13任一项所述的制备方法制备得到的益生菌组合物在改善或预防腹泻中的应用。
15.一种具有改善或预防腹泻的保健食品组合物，其包含权利要求1-10任一项所述的益生菌组合物或权利要求11-13中任一项所述的制备方法制备得到的益生菌组合物。
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