CN112220967B - 一种靶向抗菌和原位促成骨双功能材料及其制备方法和应用 - Google Patents

一种靶向抗菌和原位促成骨双功能材料及其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种靶向抗菌和原位促成骨双功能材料及其制备方法和应用，属于牙周组织修复与再生技术领域。所述双功能材料包括由PEG‑DA和Peptide交联形成的具有温敏特性且能够响应牙龈素的凝胶支架，以及材料进一步负载的具备募集干细胞归巢功能的SDF‑1。通过开发和制备的牙龈素响应型温敏凝胶材料，可以随着短抗菌肽和SDF‑1的释放，同时实现牙周缺损部位的长效靶向抗菌和原位促再生。经试验证明，本发明制得的PEG‑DA‑Peptide@SDF‑1双功能材料温敏可注射施用，其长效靶向抗菌和原位促再生效果好，因此具有良好的实际应用之价值。

Description

一种靶向抗菌和原位促成骨双功能材料及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于牙周组织修复与再生技术领域，具体涉及一种靶向抗菌和原位促成骨双功能材料及其制备方法和应用。
背景技术
公开该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
牙周炎是由牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonasgingivalis，P.gingivalis)等多种厌氧致病菌的侵染所导致的牙周疾病，其所导致的牙槽骨吸收被认为是成人失牙的主要原因。牙周炎不仅会导致牙龈出血、溃烂和牙齿松动，而且与糖尿病、阿尔兹海默症等全身系统性疾病有着密切的相关关系。牙周组织工程是目前临床上治疗牙周炎的主要技术手段，主要依托植入支架材料、干细胞、细胞因子等来实现局部炎症控制和牙周组织修复。但是，传统的组织工程存在炎症控制效果不佳，外源性干细胞干性丧失，支架材料缺乏可塑性等问题，大大降低了牙周炎患者接受治疗的舒适度和依从性，导致疗效下降甚至治疗失败。
厌氧致病菌是牙周炎的始动因素，长期高效的靶向抗菌药剂是治疗关键。有研究表明，口腔是人体四大菌库之一，口腔其他部位如唾液，舌背等部位的细菌会不断进入牙周，造成致病菌的定植。因此，在牙周炎症部位持续供给抗菌药物，可以更好地抑制致病菌繁殖和控制局部炎症。但是，目前口内应用的抗菌药物是以盐酸米诺环素为主的抗生素，仍存在抗菌作用周期较短、局部药物过载和致病菌易产生耐药性等问题。
温敏支架材料负载SDF-1可实现缓释、延展作用范围、提升新骨质量。研究表明，基质细胞衍生因子-1(stromal cell-derived factor-1，SDF-1)可以将间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)和牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells，PDLSCs)等招募至牙周缺损部位，促进牙周组织修复和骨再生。因此，在原位牙周组织工程中，将SDF-1负载至支架材料中，可以在局部缺损处发挥很好地招募干细胞的作用。但是，发明人发现，在漫长的牙周炎临床治疗周期中，由于支架材料缺乏可塑性，适应度较差且无法充分填充牙周缺损，往往会产生患者接受治疗的舒适度和依从性降低，导致治疗效果不佳甚至失败等问题。
发明内容
为了克服上述技术问题，本发明提供一种靶向抗菌和原位促成骨双功能材料及其制备方法和应用。本发明从头设计并合成了功能多肽模块(Peptide)，具备交联PEG-DA的作用和响应牙龈素释放短抗菌肽的功能。进而通过将PEG-DA、Peptide和SDF-1混合均匀以形成负载SDF-1的牙龈素响应型温敏凝胶材料，当有牙龈卟啉单胞菌(P.gingivalis)生长并释放牙龈素时，材料可以应激响应并释放短抗菌肽，以实现对包括P.gingivalis在内的多种致病菌的强效杀灭。随着短抗菌肽的释放，材料逐步降解，同时释放出负载的SDF-1，募集多种干细胞归巢只牙周缺损部位，在抗菌消炎的前提下，进一步促进原位骨再生。所制备的双功能材料具有良好的牙龈素响应性，可根据微环境中的P.gingivalis数量和活力按需释放短抗菌肽，从而延长材料抗菌作用周期，有效避免局部抗菌药物过载。短抗菌肽良好的生物相容性和较高的抗菌活性可以降低致病菌耐药性的产生。另外，所制备材料具有温敏特性，良好的延展性保证了其可充分填充不同形状的牙周缺损，提升所负载药物的延展性，促进原位组织再生。基于上述研究成果，从而完成本发明。
本发明的目的之一在于提供一种靶向抗菌和原位促成骨双功能材料。
本发明的目的之二在于提供上述靶向抗菌和原位促成骨双功能材料的制备方法。
本发明的目的之三在于提供上述靶向抗菌和原位促成骨双功能材料的应用。
为实现上述技术目的，本发明采用的技术方案如下：
本发明的第一个方面，提供一种靶向抗菌和原位促成骨双功能材料，所述靶向抗菌和原位促成骨双功能材料具体为PEG-DA-Peptide@SDF-1复合材料，包括：温敏支架，所述温敏支架由聚乙二醇二丙烯酸酯和从头设计的功能多肽模块交联形成；以及，
负载在温敏支架上的SDF-1。
本发明的第二个方面，提供上述靶向抗菌和原位促成骨双功能材料的制备方法，所述制备方法包括：将聚乙二醇二丙烯酸酯、SDF-1和功能多肽模块混合均匀即得。
本发明的第三个方面，提供上述靶向抗菌和原位促成骨双功能材料在制备牙周疾病治疗药物中的应用。
其中，所述牙周疾病包括牙周炎。
所述牙周疾病治疗药物至少具有如下一种或多种用途：
a)长效靶向抗菌；
b)促进细胞成骨向分化；
c)促进原位牙周组织再生。
本发明的第四个方面，提供一种牙周疾病治疗药物，所述药物其活性成分包含上述靶向抗菌和原位促成骨双功能材料。
所述牙周疾病治疗药物为温敏型水凝胶制剂。在室温下(25℃)为液态，当转移至37℃环境中，可在30min内自动交联为水凝胶态。
上述一个或多个技术方案的有益技术效果在于：
上述技术方案提供一种PEG-DA-Peptide@SDF-1双功能材料，所述材料包括由PEG-DA和Peptide交联形成的具有温敏特性且能够响应牙龈素的凝胶支架，以及材料进一步负载的具备募集干细胞归巢功能的SDF-1。其中，一方面，牙龈素响应型温敏凝胶材料可以在牙周炎症部位发挥长效靶向抗菌作用；另一方面，负载的SDF-1可以有效募集多种干细胞归巢至牙周缺损处，有效地促进原位牙周组织再生。上述技术方案通过开发和制备的牙龈素响应型温敏凝胶材料，可以随着短抗菌肽和SDF-1的释放，同时实现牙周缺损部位的长效靶向抗菌和原位促再生。
经试验证明，上述技术方案制得的PEG-DA-Peptide@SDF-1双功能材料温敏可注射施用，其长效靶向抗菌和原位促再生效果好，因此具有良好的实际应用之价值。
附图说明
构成本发明的一部分的说明书附图用来提供对本发明的进一步理解，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。
图1为本发明实施例中双功能温敏可注射材料PEG-DA-Peptide@SDF-1在牙周炎症局部发挥长效靶向抗菌和原位促进牙周组织再生作用的示意图；其中，右侧展示牙龈卟啉单胞菌入侵和材料响应牙龈素释放短抗菌肽实现广谱杀菌的过程；左侧展示材料负载的SDF-1募集干细胞归巢，促进缺损的牙周组织原位再生的过程。
图2为本发明实施例中关于PEG-DA-Peptide@SDF-1材料的制备和表征；其中，A展示双功能材料的温敏特性；B展示双功能材料在不同缓冲液中响应牙龈素释放短抗菌肽的释放曲线；C展示材料表面疏松多孔的形貌；D展示经傅里叶红外光谱检测材料的成功制备。
图3为本发明实施例中关于PEG-DA-Peptide@SDF-1材料的生物相容性检测；其中，A展示牙周膜干细胞(PDLSCs)在材料上生长时的细胞骨架和细胞形态；B展示PDLSCs在材料浸提液中的增殖情况；C展示PDLSCs在材料上生长的活/死荧光染色情况；D展示细胞活/死荧光染色的相对荧光强度的统计分析。
图4为本发明实施例中关于PEG-DA-Peptide@SDF-1材料促进PDLSCs成骨向分化能力的测试；其中，包括通过ALP染色和ALP半定量分析检测材料浸提液促进PDLSCs成骨蛋白表达的情况，以及通过茜素红染色检测材料浸提液促进PDLSCs成骨向分化及矿化的情况。
图5为本发明实施例中关于PEG-DA-Peptide@SDF-1材料抑制牙龈卟啉单胞菌生长和增殖的实验；在含有不同材料浸提液的血平皿上涂布等量牙龈卟啉单胞菌菌液，经7天生长后进行菌落计数以及统计学分析。
图6为本发明实施例中关于PEG-DA-Peptide@SDF-1材料注射进入牙周炎动物模型牙周缺损处，在体内促进原位牙周组织再生的情况的Micro-CT分析。
具体实施方式
应该指出，以下详细说明都是例示性的，旨在对本发明提供进一步的说明。除非另有指明，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属技术领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
需要注意的是，这里所使用的术语仅是为了描述具体实施方式，而非意图限制根据本发明的示例性实施方式。如在这里所使用的，除非上下文另外明确指出，否则单数形式也意图包括复数形式，此外，还应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、步骤、操作、器件、组件和/或它们的组合。应理解，本发明的保护范围不局限于下述特定的具体实施方案；还应当理解，本发明实施例中使用的术语是为了描述特定的具体实施方案，而不是为了限制本发明的保护范围。
如前所述，在牙周炎临床治疗周期中，由于支架材料缺乏可塑性，适应度较差且无法充分填充牙周缺损，往往会产生患者接受治疗的舒适度和依从性降低，导致治疗效果不佳甚至失败等问题。
有鉴于此，本发明的一个具体实施方式中，提供一种靶向抗菌和原位促成骨双功能材料，所述靶向抗菌和原位促成骨双功能材料具体为PEG-DA-Peptide@SDF-1复合材料，包括：温敏支架，所述温敏支架由聚乙二醇二丙烯酸酯和从头设计的功能多肽模块交联形成；以及，
负载在温敏支架上的SDF-1。
其中，所述从头设计的功能多肽模块由“锚定短肽-短抗菌肽-锚定短肽”三部分组成；
一方面，所述锚定短肽在序列设计上包含可被牙龈素切断的多肽序列，从而实现材料响应牙龈素并释放其中的短抗菌肽的目的；另一方面，锚定短肽的末端为带有巯基的半胱氨酸，可与聚乙二醇二丙烯酸酯末端的烯烃基发生迈克尔加成反应并形成温敏凝胶，进而实现功能多肽模块作为材料交联剂的作用。通过从头设计的新型功能多肽模块，双功能材料可以实现长效靶向抗菌的目的。同时，由于材料的温敏特性，也可以实现通过材料自身的延展性提升所负载药物的作用范围的目的。
在本发明的又一具体实施方式中，所述从头设计的功能多肽模块的氨基酸序列具体为:CGPQRIWGQCGGVVFGVGFGCGPQRIWGQC(SEQ ID NO.1)；
其中，CGPQRIWGQC为锚定短肽；GGVVFGVGFG为抗菌短肽。
在本发明的又一具体实施方式中，提供上述靶向抗菌和原位促成骨双功能材料的制备方法，所述制备方法包括：将聚乙二醇二丙烯酸酯、SDF-1和功能多肽模块混合均匀即得。
本发明的又一具体实施方式中，所述制备方法采用二次混匀方式进行，即将聚乙二醇二丙烯酸酯与SDF-1混合后，再加入功能多肽模块进行混匀，此时，聚乙二醇二丙烯酸酯与功能多肽模块发生迈克尔加成反应并形成温敏凝胶。经试验证明，凝胶溶液在室温下(25℃)为液态，当转移至37℃环境中，可在30min内自动交联为水凝胶态。
其中，所述聚乙二醇二丙烯酸酯、SDF-1和功能多肽模块的质量比不做具体限定，可根据牙周炎、牙周缺损情况以等实际情况调整三者用量比例，在本发明的又一具体实施方式中，所述聚乙二醇二丙烯酸酯、SDF-1和功能多肽模块的质量比为1～10×105:0.1～10:100～1000。
所述聚乙二醇二丙烯酸酯可通过市售或者现有方法制备获得，本发明的又一具体实施方式中，所述聚乙二醇二丙烯酸酯的制备方法包括：将PEG20000加热至70～80℃，再依次加入丙烯酸和对甲苯磺酸搅拌，升温至105-110℃后，维持回流反应1～3小时，再升温到120℃直至不再有水生成，纯化即得聚乙二醇二丙烯酸酯。
在本发明的又一具体实施方式中，所述PEG20000、丙烯酸和对甲苯磺酸的摩尔质量比为0.1～0.5mol:0.2～1mol:1～5g；
在本发明的又一具体实施方式中，所述纯化步骤包括：调pH至中性、洗涤、萃取、分离有机层并过滤，干燥即得。
在本发明的又一具体实施方式中，所述功能多肽模块采用固相多肽合成法制得。
在本发明的又一具体实施方式中，提供上述靶向抗菌和原位促成骨双功能材料在制备牙周疾病治疗药物中的应用。
其中，所述牙周疾病包括牙周炎。
所述牙周疾病治疗药物至少具有如下一种或多种用途：
a)长效靶向抗菌；
b)促进细胞成骨向分化；
c)促进原位牙周组织再生。
在本发明的又一具体实施方式中，提供一种牙周疾病治疗药物，所述药物其活性成分包含上述靶向抗菌和原位促成骨双功能材料。
所述牙周疾病治疗药物为温敏型水凝胶制剂。在室温下(25℃)为液态，当转移至37℃环境中，可在30min内自动交联为水凝胶态。
以下通过实施例对本发明做进一步解释说明，但不构成对本发明的限制。应理解这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。
实施例
实验材料方法：
(一)PEG-DA-Peptide@SDF-1双功能材料的制备与表征
1.功能多肽模块的开发与制备：采用固相多肽合成法，从头合成总长度为30个氨基酸的肽链，肽链的氨基酸序列为：CGPQRIWGQCGGVVFGVGFGCGPQRIWGQC(SEQ ID NO.1)。其中包括10个氨基酸的锚定短肽-10个氨基酸的短抗菌肽-10个氨基酸的锚定短肽。
2.聚乙二醇二丙烯酸酯的制备：在装有分水器的三口瓶中，将0.1mol的PEG20000(阻聚剂为0.3g的对苯二酚)加热至70摄氏度，再依次加入0.3mol的丙烯酸和4g的对甲苯磺酸搅拌。升温至110摄氏度后，维持回流反应2小时，再升温到120摄氏度直至不再有水生成，反应全部结束。向上述粗产品中加入饱和Na2CO3溶液调节至pH中性，然后用饱和的NaCl溶液洗涤，再用乙醚萃取PEG-DA，分离有机层并过滤，在低温下减压条件下真空干燥12小时以上，即可得到聚乙二醇二丙烯酸酯。
3.负载SDF-1的牙龈素响应型温敏凝胶的制备：按照凝胶制备量，将100mg的PEG-DA加入899mL的PBS(pH＝7.4)溶液中，混匀后加入浓度为200μg/mL一定量的SDF-1溶液1μl；再次混匀后，加入浓度为1mg/mL的功能多肽模块溶液100μl，充分混匀后，得到负载SDF-1的牙龈素响应型温敏凝胶溶液。此时的凝胶溶液在室温下(25℃)为液态，当转移至37℃环境中，可在30min内自动交联为水凝胶态(图2，A)。
材料的表征通过扫描电镜(SEM)观察复合材料的超微结构；通过FTIR(傅里叶红外光谱)分析材料的理化性质；通过凝胶降解实验检测温敏凝交材料完全降解的时间。
(二)体外实验研究研究PEG-DA-Peptide@SDF-1双功能材料对PDLSCs生物学活性的影响
1.生物相容性检测
(1)将牙周膜干细胞(PDLSCs)接种在负载SDF-1的牙龈素响应型温敏凝胶材料表面，通过CCK-8检测细胞增殖情况。
(2)通过活死细胞染色检测细胞在材料上的生长情况。
(3)通过罗丹明鬼笔环肽染色检测细胞在材料上的细胞形态。
2.成骨性能的检测
分别将牙周膜干细胞(PDLSCs)接种在负载SDF-1的牙龈素响应型温敏凝胶材料表面，进行矿化诱导，通过ALP染色和茜素红染色检测细胞的成骨蛋白表达情况和成骨向分化情况。
3.抗菌性能的检测
将负载SDF-1的牙龈素响应型温敏凝胶材料的浸提液掺入血平板中，分别在不同的血平板上涂布等量的牙龈卟啉单胞菌菌液，37℃厌氧培养7天后，通过平板计数法检测材料浸提液对牙龈卟啉单胞菌生长和繁殖的抑制情况。
(三)体内实验检测PEG-DA-Peptide@SDF-1双功能材料在牙周炎症部位长效靶向抗菌和促进原位牙周组织再生的作用和效果
1.动物实验分为三组，分别为空白对照组(negative control，NC)，单纯牙龈素响应型温敏凝胶支架材料组(PEGP组)，负载SDF-1的牙龈素响应型温敏凝胶材料组(PEGP@SDF-1组)。
2.牙周炎动物模型的构建：在6w龄的雄性Wistar大鼠双侧上颌骨第二磨牙周围系线，同时均匀涂抹牙龈卟啉单胞菌菌液，直至2周后成功建立大鼠牙周炎动物模型。具体表现为：上颌第二磨牙牙龈红肿，探诊出血，牙槽骨吸收等。
3.处死大鼠后通过对不同组别的上颌骨样本进行微计算机断层扫描(microcomputedtomography,micro CT),观察牙龈素响应型温敏凝胶材料对由牙龈卟啉单胞菌感染所引起的牙周炎和牙槽骨吸收的逆转作用，以及材料在牙周炎症部位发挥的长效靶向抗菌和原位促成骨的两方面作用。
实验结果：
(一)材料表征
1.SEM结果显示，所制备的负载SDF-1的牙龈素响应型温敏凝交材料表面及内部为疏松多孔状，孔径大小较为均一，约52±5.6μm。这为干细胞迁移进入材料内部生长和分化奠定了良好基础(图2，C)。并且，材料在不同浓度的精氨酸蛋白酶的缓冲液中的完全降解时间不同，表明所制备的双功能材料可以很好地响应牙龈素的刺激，进而发挥其长效靶向抗菌的功能(图2，B)。
2.FTIR结果提示，相比原料PEG-DA和Peptide，所制备的双功能材料的特征峰发生变化。PEG-DA在1633cm-1处的烯烃基特征峰消失，偏移至1627cm-1。这表明PEG-DA和Peptide已经成功发生迈克尔加成反应并交联形成的温敏凝胶支架材料(图2，D)。
(二)体外实验
1.CCK-8细胞增殖实验结果表明负载SDF-1的温敏凝胶支架材料可以显著地促进PDLSCs增殖，而支架材料自身对细胞增殖没有促进或抑制作用(图3，B)。活/死细胞染色及其总荧光强度分析结果提示与对照组TCP相比，牙龈素响应型温敏支架材料(PEGP)和负载SDF-1的牙龈素响应型温敏材料(PEGP@SDF-1)均具备良好的生物相容性(图3，C和D)；罗丹明鬼笔环肽染色表明，PEGP和PEGP@SDF-1对细胞骨架和细胞形态没有明显影响(图3，A)。
2.成骨诱导结果显示，相比于单纯在TCP上培养和成骨诱导的PDLSCs，额外添加材料浸提液的成骨诱导实验组PEGP@SDF-1对细胞的成骨向分化有明显的促进作用，且对成骨蛋白ALP等的表达量上调有显著地促进作用(图4)。
3.通过血平板抑菌实验可以观察到，与对照组相比，实验组PEGP和PEGP@SDF-1均可以显著地抑制牙龈卟啉单胞菌在血平皿上的生长和增殖，平板计数也显示相比于NC组，PEGP@SDF-1有明显的抑制牙龈卟啉单胞菌生长的作用(图5)。
(三)体内实验
1.Micro-CT结果显示，相比于牙周炎组(P组)的上颌骨第二磨牙处的牙槽骨退缩和吸收情况，注射了负载SDF-1的牙龈素响应型温敏凝胶材料的实验组(PEGP@SDF-1组)的牙槽骨高度得到明显恢复，且上颌第二磨牙的牙颈部至牙槽嵴顶(CEJ-AB)的高度显著下降，接近阴性对照组(NC组)的水平(图6)。
综上，本实施例成功制备的PEG-DA-Peptide@SDF-1温敏凝交材料，具备良好的长效靶向抗菌和原位促成骨双功能效应。
最后应该说明的是，以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。上述虽然对本发明的具体实施方式进行了描述，但并非对本发明保护范围的限制，所属领域技术人员应该明白，在本发明的技术方案的基础上，本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可做出的各种修改或变形仍在本发明的保护范围以内。
SEQUENCE LISTING
<110> 山东大学
<120> 一种靶向抗菌和原位促成骨双功能材料及其制备方法和应用
<130>
<160> 1
<170> PatentIn version 3.3
<210> 1
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<400> 1
Cys Gly Pro Gln Arg Ile Trp Gly Gln Cys Gly Gly Val Val Phe Gly
1 5 10 15
Val Gly Phe Gly Cys Gly Pro Gln Arg Ile Trp Gly Gln Cys
20 25 30

Claims (12)

1.一种靶向抗菌和原位促成骨双功能材料，其特征在于，所述靶向抗菌和原位促成骨双功能材料具体为PEG-DA-Peptide@SDF-1复合材料，包括：温敏支架，所述温敏支架由聚乙二醇二丙烯酸酯和从头设计的功能多肽模块交联形成；以及，
负载在温敏支架上的SDF-1；
所述从头设计的功能多肽模块由“锚定短肽-短抗菌肽-锚定短肽”三部分组成；
所述锚定短肽在序列设计上包含被牙龈素切断的多肽序列，且锚定短肽的末端为带有巯基的半胱氨酸；
所述从头设计的功能多肽模块的氨基酸序列具体为:CGPQRIWGQCGGVVFGVGFGCGPQRIWGQC(SEQ ID NO.1)。
2.权利要求1所述靶向抗菌和原位促成骨双功能材料的制备方法，其特征在于，所述制备方法包括：将聚乙二醇二丙烯酸酯、SDF-1和功能多肽模块混合均匀即得。
3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述制备方法采用二次混匀方式进行，即将聚乙二醇二丙烯酸酯与SDF-1混合后，再加入功能多肽模块进行混匀。
4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述聚乙二醇二丙烯酸酯、SDF-1和功能多肽模块的质量比为1～10×105:0.1～10:100～1000。
5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述聚乙二醇二丙烯酸酯的制备方法包括：将PEG20000加热至70～80℃，再依次加入丙烯酸和对甲苯磺酸搅拌，升温至105-110℃后，维持回流反应1～3小时，再升温到120℃直至不再有水生成，纯化即得聚乙二醇二丙烯酸酯。
6.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述PEG20000、丙烯酸和对甲苯磺酸的摩尔质量比为0.1～0.5mol:0.2～1mol:1～5g。
7.如权利要求5所述的制备方法，其特征在于，所述纯化步骤包括：调pH至中性、洗涤、萃取、分离有机层并过滤，干燥即得。
8.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述功能多肽模块采用固相多肽合成法制得。
9.权利要求1所述靶向抗菌和原位促成骨双功能材料在制备牙周疾病治疗药物中的应用。
10.如权利要求9所述应用，其特征在于，所述牙周疾病包括牙周炎。
11.如权利要求9所述应用，其特征在于，所述牙周疾病治疗药物至少具有如下一种或多种用途：
a)长效靶向抗菌；
b)促进细胞成骨向分化；
c)促进原位牙周组织再生。
12.一种牙周疾病治疗药物，其特征在于，所述药物其活性成分包含权利要求1所述靶向抗菌和原位促成骨双功能材料；
所述牙周疾病治疗药物为温敏型水凝胶制剂。
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