CN112194698B - 一种三萜类化合物及其制备方法和用途 - Google Patents

一种三萜类化合物及其制备方法和用途 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种式I所示化合物、或其药学上可接受的盐、或其光学异构体、或其立体异构体、或其溶剂合物。本发明的化合物结构新颖，能明显改善心衰斑马鱼的心衰指标，并且其改善作用明显优于阳性对照药物。本发明化合物可以作为改善结构性心脏病变和心脏前负荷和后负荷的先导化合物，在制备预防和/或治疗心衰的药物上，具有非常良好的应用前景。
Figure DDA0002122395730000011

Description

一种三萜类化合物及其制备方法和用途
技术领域
本发明属于药物制备领域，具体涉及一种三萜类化合物及其制备方法和用途。
背景技术
近17年来，冠心病是最常见的心血管疾病之一，严重威胁人类健康。目前冠心病的治疗药物存在种种局限，冠心病药物研发方兴未艾。在寻找新型药物的过程中，天然产物备受关注。据《开宝本草》记载，传统中药盐肤木(Rhus chinensis Mill.)，其树白皮主破血止血，根茎能活血化瘀。以盐肤木为原药材的闽产单味制剂——舒冠通糖浆(国药准字Z35020635)，治疗冠心病临床疗效确凿。1973至1978年，全国十余个单位对舒冠通糖浆的临床作用进行验证，共治疗冠心病346例，临床总有效率达80％以上。药理研究表明，盐肤木提取物可明显改善冠心病动物模型的血液流变性，采用盐肤木提取物静脉注射实验犬，可使其冠状血流量增加59.7％，血管阻力降低51％，心肌耗氧量减少24.2％。
然而，盐肤木根治疗冠心病的药效物质基础至今未明。迄今为止，国内外学者对盐肤木根的化学成分亦研究不足，除了黄酮、酚酸、鞣质外，已报道的三萜仅12个(比如KimGS,Jeong TS,Kim YO,Baek NI,Cha SW,Lee JW,Song KS.Human acyl-CoA:Cholesterolacyltransferase-inhibiting dammarane triterpenes from Rhus chinensis.J KoreanSoc for Appl Biol Chem 2010；53:417–21)。
因此，研究盐肤木根中的化学成分，寻找能够有效治疗冠心病的药物，具有非常重要的意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能够有效治疗心血管疾病的新的化合物。
本发明提供了一种式I所示化合物、或其药学上可接受的盐、或其光学异构体、或其立体异构体、或其溶剂合物：
Figure GDA0003970731410000011
其中，R1选自被0～4个R7取代的烷基、被0～4个R7取代的烯基、被0～4个R7取代的炔基、卤素、羟基、羧基、H；R7选自被0～3个Ra取代的C1-5烷基、被0～3个Ra取代的C2-5烯基、被0～3个Ra取代的C2-5炔基、卤素、羟基、羧基、H；Ra选自羧基、卤素、羟基、C1-5烷基、C1-5烷氧基；
R2、R3、R4、R5、R6各自独立地选自H、C1-10烷基、C1-10烷氧基、C2-10烯基、C2-10炔基、羟基、羧基、氨基、卤素。
进一步地，所述化合物的结构如式II所示：
Figure GDA0003970731410000021
其中，R7选自被0～3个Ra取代的C1-5烷基、被0～3个Ra取代的C2-5烯基、被0～3个Ra取代的C2-5炔基、卤素、羟基、羧基、H；Ra选自羧基、卤素、羟基、C1-5烷基、C1-5烷氧基。
进一步地，R7选自被1个Ra取代的C2-5烯基；Ra为羧基。
进一步地，所述化合物的结构为：
Figure GDA0003970731410000022
进一步地，所述化合物的结构为：
Figure GDA0003970731410000023
本发明还提供了上述化合物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
(1)取盐肤木根，经干燥、粉碎，用醇类溶液提取后，将提取液减压浓缩，得总浸膏；
(2)用水悬浮总浸膏，然后用石油醚进行萃取，取石油醚相，采用硅胶柱进行梯度洗脱，洗脱液为体积比(70～0)：1的二氯甲烷与甲醇的混合溶液，保留体积比9：1的二氯甲烷与甲醇混合溶液洗脱出的液体，命名为Fr.7；
(3)取步骤(2)所得Fr.7，采用硅胶柱进行梯度洗脱，洗脱液为体积比(15～0)：1的二氯甲烷与甲醇的混合溶液，保留体积比10：1的二氯甲烷与甲醇混合溶液洗脱出的液体，命名为Fr.7G，
(4)取步骤(3)所得Fr.7G，采用硅胶柱进行梯度洗脱，洗脱液为体积比(2.25～1.00)：1的二氯甲烷与丙酮的混合溶液，保留体积比5：2的二氯甲烷与丙酮混合溶液洗脱出的液体，命名为Fr.7G-2；
(5)取步骤(4)所得Fr.7G-2，采用MCI柱进行梯度洗脱，洗脱液为体积浓度85％～100％的甲醇水溶液，保留体积浓度95％的甲醇水溶液洗脱出的液体，命名为Fr.7G-2-5；
(6)取步骤(5)所得Fr.7G-2-5，经过高效液相色谱分离，即得。
本发明中，Fr.表示fraction，意为组分。
进一步地，步骤(1)中，所述醇类溶液为95％甲醇，提取温度为70℃回流提取，提取次数为4次，每次提取时间为6小时。
本发明还提供了上述化合物在制备预防和/或治疗心血管疾病药物上的用途。
进一步地，所述心血管疾病选自心衰、冠心病。
前缀C x-y表示任何含“x”至“y”个碳原子的基团。因此，例如，C1-5烷基是指包含任何含1～5个碳原子的直链或支链的烷基。
“取代”是指分子中的1个、2个或多个氢原子被其它不同的原子或分子所替换，包括该分子中同位原子或异位原子上的1个、2个或多个取代。
本发明所用混合溶剂的比例均为体积比。
本文采用质谱引导分离，并应用现代波谱技术(NMR、MS)结合ECD、DFT密度泛函数计算法等方法，制得了具有罕见结构的新化合物。不同于常规的达玛烷型三萜，本发明的化合物为独特带17α-侧链的达玛烷型三萜。
实验结果表明，本发明化合物能明显改善心衰斑马鱼的心衰指标，并且其改善作用明显优于阳性对照药物。本发明化合物可以作为改善结构性心脏病变和心脏前负荷和后负荷的先导化合物，在制备预防和/或治疗心衰的药物上，具有非常良好的应用前景。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
附图说明
图1.化合物1的空间距离实验值(根据NOE积分强度计算而得，绿色)以及理论值(由DFT计算而得，红色)。
图2.A:rhuslactone(1)的实验ECD谱图(蓝色),(3S,5S,8R,9S,10R,13R,14R,17R,22S)-1a及(3S,5S,8R,9S,10R,13R,14R,17R,22R)-1b的计算ECD谱图(红色，灰色)。
图3.供试品处理4.5小时后斑马鱼心脏扩大和静脉窦淤血面积改善表型图(心脏和静脉窦瘀血部位分别以红色和黄色虚线框标记)：(A)空白对照组，(B)模型对照组，(C)阳性对照组(0.8μg/mL)，(H)给药组[本发明化合物6在浓度为其最大耐受浓度(MTC)处理斑马鱼]；以及供试品在浓度为其MTC时处理后，斑马鱼的心脏面积(N)以及静脉窦瘀血面积(O)；与模型对照组比较：*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。本发明化合物在图中为“6”。
图4.各实验组在浓度为其MTC时处理后，斑马鱼心输出量(A),血流速度(B)和心率(C)；与模型对照组比较：*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001。本发明化合物在图中为“6”。
图5.A:H-21b/Me-30的NOE交叉峰体积是指本发明化合物中H-1β/H-19b的体积.B:由NOE强度(红色)计算本发明化合物的H-21b/Me-30的实验动态距离。
图6.本发明化合物的高分辨质谱。
图7.本发明化合物的紫外光谱。
图8.本发明化合物的红外光谱。
图9.本发明化合物的1H-NMR(500MHz,CDCl3)。
图10.本发明化合物的13C-NMR(125MHz,CDCl3)。
图11.本发明化合物的DEPT135(125MHz,CDCl3)。
图12.本发明化合物的1H-1H COSY(500MHz,CDCl3)。
图13.本发明化合物的HSQC(500MHz,CDCl3)。
图14.本发明化合物的HMBC(500MHz,CDCl3)。
图15.本发明化合物的NOESY(500MHz,CDCl3)。
具体实施方式
本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。
1实验试剂
柱色谱硅胶(100–200目、200–300目，青岛海洋化工厂)；MCI填料(75–150μm,日本三菱化工有限公司)；ODS反相硅胶(50μm,加拿大Silicycle公司)；薄层色谱板(GF254，0.20–0.25mm，青岛海洋化工厂)；甲醇、乙醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、石油醚(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；乙腈、甲醇(色谱纯，德国MERCK公司)；Milli-Q超纯水(美国Millipore公司)。
2实验仪器
高分辨三重四极杆液质联用仪(美国waters公司)；LC-20A分析兼具半制备高效液相色谱仪(日本岛津公司)；ELSD-LTⅡ蒸发光散射检测器(日本岛津公司)；安捷伦XDB C18色谱柱(250×4.6mm,5μm)；2545 AutoPurification自动纯化系统(美国waters公司)；WFH-203B三用紫外分析仪(上海精科实业有限公司)；Autopol IV自动旋光仪；Hitachi U-2900E紫外可见分光光度计；Avatar 360 ESP FTIR红外光谱仪；JASCO-810分光偏振仪；DRX-500MHz核磁共振仪(德国Bruker公司)；Daltonics micrOTOF-QII高分辨质谱仪(德国Bruker公司)；DBS-160F电脑自动部份收集器(上海精科实业有限公司)；多功能提取浓缩设备(上海顺仪科技有限公司)；RE-2000A旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；RV 10旋转蒸发仪(德国IKA公司)；中型旋转蒸发仪(南京贝帝实验仪器有限公司)；万分之一电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司)；KQ-500E台式超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。
3实验药材
盐肤木药材于2017年3月采集自云南省腾冲市，经云南省农业科学院方波博士鉴定为漆树科盐肤木属盐肤木(Rhus chinensis Mill)的干燥根，其凭证标本(No.20170310002)存放于福建中医药大学药学院标本室。
4量子化学计算方法
Confab用于搜索低能构象。进一步用PM7(MOPAC2016)]方法进行优化。选取4kcal/mol的能量窗,进一步使用密度泛函理论法(DFT)进行优化，其方法为B3LYP方法结合6-31G*基组。碳谱数据基于13C NMR was calculated onωB97x-D方法结合6-31G*基组以及气态下。ECD计算基于B3LYP理论结合/6-311G*基组,用SpecDis v1.71软件处理。所得的碳谱，ECD以及原子空间距离的计算值均为基于吉布斯自由能的玻尔兹曼平均值。所有的DFT计算均使用Gaussian09软件处理。
实施例1、本发明化合物的制备
取盐肤木根(43.03kg)，经干燥、粉碎，用95％甲醇于70℃回流提取4次，每次6小时，减压浓缩，得甲醇总浸膏(6.61kg)。用水悬浮甲醇浸膏，用石油醚进行萃取，选取石油醚部位浸膏，采用硅胶柱(100–200目，120cm*15cm)，用二氯甲烷/甲醇(体积比70:1–0:1)进行梯度洗脱。根据TLC展开系统的结果进行综合分析与判断，对收集液进行合并，最终得到13个亚组分(Fr.1–13)。基于我们构建的TLC联合HPLC-DAD/ELSD/MS化合物检测方法以及对各亚组分进行LC-MS化学轮廓分析，根据测定结果确定所需要分离的目标组分。
取其中的Fr.7(137.52g,硅胶柱二氯甲烷/甲醇9:1洗脱部位)采用硅胶柱(100–200目)进行分离，选择二氯甲烷/甲醇(体积比15:1–0:1)进行梯度洗脱，得到11个亚组分(Fr.7A–Fr.7K)。Fr.7G(20.3g,硅胶柱二氯甲烷/甲醇10:1洗脱部位)通过硅胶柱，以二氯甲烷/丙酮(体积比5.5:2–1:1)洗脱，得到4个亚组分(Fr.7G-1–Fr.7G-4)。取Fr.7G-2(4.3g,硅胶柱二氯甲烷/丙酮5:2洗脱部位)用MCI柱(即小孔树脂凝胶柱),以甲醇/水系统(体积浓度85％–100％)进行梯度洗脱，得到Fr.7G-2-1–Fr.7G-2-9。取Fr.7G-2-5(375.0mg，MCI柱95％甲醇/水洗脱部位)经HPLC制备，得到白色无定形粉末，即本发明化合物(80.54mg，11.5min)。
本发明化合物的结构确认：
本发明化合物的HRESIMS显示分子离子峰为m/z 471.3499[M+H]+，计算值为471.3474(C30H47O4)，从而推出其分子式为C30H46O4，不饱和度为8。本发明化合物的碳谱和DEPT谱显示化合物的结构中含有5个sp3甲基，1个sp2和11个sp3杂化的亚甲基(包括1个连氧亚甲基)，1个sp2和4个sp3杂化的次甲基，8个季碳(包括1个酮羰基和1个半缩醛碳)。通过综合分析本发明化合物的氢谱、碳谱和DEPT谱(表1，图11)，可以推出，本发明化合物的结构中含1个羧基(δ172.4)，1个半缩醛氧桥结构(δ98.3,68.2)，1个三取代双键和1个环外双键(δ146.0,126.4；δ109.8,151.5)以及4个单峰和1个烯甲基。以上所有基团满足4个不饱和度，从而表明化合物为1个侧链不成环的四环三萜。其波谱数据与文献(Seon Lee等，ChemPharm Bull,2001；49:1024–6)中报道的semialatic acid的波谱数据高度相似。H-17与C-13/C-20/C-21；H2-21与C-20的HMBC相关确定了C20(21)环外双键的存在；H-24与C-26，C-27以及H3-26与C-25，C-27的的HMBC相关证明三取代双键位于C-24(25)上。通过H3-26/H-24的NOE相关确定C-24的双键为顺式。
本发明化合物绝对构型的确定是通过与化合物1进行对照而得以解析的。化合物1的NOEST谱显示了一个明显的H-21/H3-30相关峰，因此我们可以根据H-21/H3-30的NOE相关峰的积分面积来计算H-21/H3-30的空间距离(Wang WX等，J Nat Prod,2016；79:704–10.)。基于B3LYP/6-31G*理论的构象优化，我们计算了化合物1分别为17α和17β侧链两种构型(1a，1c)时H-21/H3-30的波尔兹曼平均距离，分别为2.05和
Figure GDA0003970731410000051
(表2)。以位于刚性结构环内H-1β(δ2.18)/H-19b(δ3.72)的NOE相关峰积分以及其原子距离(
Figure GDA0003970731410000052
)为参照，依据公式：[rH-21/Me-30＝rref(aref/aH-21/Me-30)1/6]1/6(Wang WX等，J Nat Prod,2016；79:704–10.)，计算出H-21/H3-30的实验距离为
Figure GDA0003970731410000053
(图1)。由此得出结论，H-21/Me-30空间距离的实验值与(3S,5S,8R,9S,10R,13R,14R,17R,22S)-1a，即17α侧链构型的理论值一致，而与1c，即17β侧链构型偏差较大。因此，证实连接在C-17的侧链的相对构型为α。为了进一步确定C-17的绝对构型，基于ωB97x-D/6-31G*//B3LPY/6-31G*方法，采用文献报道的参数(Kutateladze AG等,J Org Chem 2017；82:3368–81)，计算了化合物1的4个C-17和C-22非对映异构体碳谱数据(1a-1d，表3)。计算四种C-17和C-22非对映异构体(1a-1d)的sDP4+概率(表3)。结果发现17R的sDP4+概率远大于17S。因此，C-17的绝对构型被确定为R。然而，1a与其22R差向异构体1b的sDP4+概率差值很小，无法据此判断C-22的绝对构型。为了进一步确认C-22的绝对构型，对1a和1b进行了ECD计算。如图2所示，计算出的(3S,5S,8R,9S,10R,13R,14R,17R,22S)-1a的ECD曲线与实验曲线高度匹配，证明了C-22的绝对构型为S。最终将化合物1鉴定为rhuslactone(1)，与1a的结构一致。
Figure GDA0003970731410000061
本发明化合物的结构分析图谱见图6～15。根据本发明化合物的H-21b/H3-30α空间距离(
Figure GDA0003970731410000062
图5),与化合物1的H-21b/H3-30α空间距离相近，故可确定本发明化合物的C-17的绝对构型为R。因此最终鉴定本发明化合物为(17R)-3,19-epoxy-dammara-20,24(Z)-diene-27-oic acid，命名为化合物6，结构如下：
Figure GDA0003970731410000063
表1本发明化合物6的氢谱数据(500MHz)和碳谱数据(500，125MHz；CDCl3)
Figure GDA0003970731410000071
表2.化合物1的(3S,5S,8R,9S,10R,13R,14R,17R,22S)-1a及其17S-差向异构体(1c)中H-21与H3-30的玻尔兹曼平均距离计算值
Figure GDA0003970731410000081
表3.化合物1的碳谱实验值以及化合物1的4个C-17，C-22非对映体(1a–1d)的碳谱计算值
Figure GDA0003970731410000082
Figure GDA0003970731410000091
以下通过实验例证明本发明化合物的有益效果。
1实验仪器解剖显微镜(SZX7,OLYMPUS,Japan)；与显微镜相连的相机(TK-C1481EC)；精密电子天平(CP214,OHAUS,America)；六孔微板(Nest Biotech,Shanghai,China)；心跳血流分析系统(Zebralab3.3(PB2084C)。
2实验试剂与药物甲基纤维素(Aladdin,Shanghai,China)；二甲基亚砜(DMSO,Sigma,批号：BCBN0845V)；盐酸维拉帕米(批号：L1303078，上海晶纯实业有限公司)；地高辛(批号：K1417048，上海晶纯实业有限公司)；邻联茴香胺(Sigma，批号：MKBG4648V)；普纳替尼(批号：13771，MedChemExpress)；阿司匹林(批号：059K0199，上海晶纯实业有限公司)化合物用DMSO配制成50mg/mL的母液备用，-20℃储存；临用时用DMSO按需稀释，最终工作液中DMSO浓度为0.1％。
其中，LCZ696是一种双效血管紧张素受体-脑啡肽酶抑制剂(ARNI)，在增强心脏的保护性神经内分泌系统(NP系统，钠尿肽系统)的同时，抑制有害系统(RAAS系统，肾素-血管紧张素-醛固酮系统)。在史上最大型PARADIGM-HF研究中，LCZ696被证明在临床研究中疗效显著超越标准治疗药物依那普利。2015年获美国FDA批准，2017年获中国NMPA批准上市。依那普利是血管紧张素转换酶抑制药；地高辛是Na+/K+ATP酶抑制剂，是心脏正性肌力药物；氢氯噻嗪是一种利尿药；美托洛尔是一个选择性β1肾上腺素受体拮抗剂。厄贝沙坦是血管收缩素受体拮抗剂。以上药物都是目前治疗心力衰竭的一线药物。
3实验动物
斑马鱼与人的基因具有超过71％的同源性。斑马鱼在信号通路和对药物的反应上，与人类有极高的相似度。此外，斑马鱼的其他特征，如：体外受精、繁殖能力强、发育快速等，使之成为一个广受欢迎的心脑血管药物筛选模型。经200μM维拉帕米诱导0.5小时后，斑马鱼出现了心包水肿、静脉瘀血、心动过缓以及血液循环受阻等症状。这些症状与冠心病病人的临床症状几乎一致，可以很好的模拟冠心病发病状态。
本发明采用的野生型AB系斑马鱼，以自然成对交配繁殖方式进行。共1500尾，年龄为受精后2天。以上斑马鱼均饲养于28℃的养鱼用水中(水质：每1L反渗透水中加入200mg速溶海盐，电导率为480～510μS/cm；pH为6.9～7.2；硬度为53.7～71.6mg/L CaCO3)，实验动物使用许可证号为：SYXK(浙)2012-0171。饲养管理符合国际AAALAC认证的要求。
4实验方法
成年AB品系斑马鱼由杭州环特生物科技股份有限公司提供。将所选化合物溶解在100％DMSO中配置成母液，给药时将母液用养鱼用水稀释，最终工作液中DMSO浓度为0.1％w/v。200μM盐酸维拉帕米处理斑马鱼0.5小时，诱导斑马鱼心衰模型。0.1％DMSO处理的实验组作为正常对照组。采用临床常规治疗心衰药物地高辛(0.8μg/mL)作为阳性对照药。再采用其它文献报道的六个临床常用心衰药物LCZ696、依那普利、地高辛、氢氯噻嗪、厄贝沙坦、美托洛尔作为对照药。
预防斑马鱼心衰的评价实验方法完全参照之前文献(Zhu XY,Wu SQ,Guo SY,YangH,Xia B,Li P,Li CQ.A zebrafish heart failure model for assessing therapeuticagents.Zebrafish 2018；15:243–53.)。首先，测定化合物的MTC。接下来，评价所测化合物浓度在其MTC时对斑马鱼心衰的预防作用。各实验组按照文献方法给药处理后，分析统计心脏扩张面积(A1)和静脉窦瘀血面积(A2)，心输出量(CO)，血流速度(BFV)和心率(HR)。预防斑马鱼心衰的评价实验方法在文献方法(Zhu XY,Liu HC,Guo SY,Xia B,Song RS,Lao QC,Xuan YX,Li CQ.Azebrafish thrombosis model for assessing antithromboticdrugs.Zebrafish 2016；13:335–44)基础上进行了一些修改。P<0.05代表具有统计学意义。
供试品对于心脏扩大、静脉窦瘀血、心输出量、血流速度、心率的改善作用，分别采用formula-1～formula-5进行计算。formula-1(2):心脏扩大改善作用(％)＝[A1(2)(模型组)-A1(2)(化合物组)]/[A1(2)(模型组)–A1(2)(空白组)]×100％；formula-3:心输出量增加作用(％)＝[CO(化合物组)-CO(模型组)]/[CO(空白组)-CO(模型组)]×100％；formula-4:血流速度增加作用(％)＝[BFV(化合物组)-BFV(模型组)]/[BFV(空白组)-BFV(模型组)]×100％；formula-5:心率增加作用(％)＝[HR(化合物组)-HR(模型组)]/[HR(空白组)-HR(模型组)]×100％。
实验例1、本发明化合物对斑马鱼心力衰竭的预防作用
首先，测试了本发明化合物6在斑马鱼心衰模型中的最大耐受浓度(MTC)，为0.5μg/mL。随后，评价该化合物浓度为其MTC时对斑马鱼心力衰竭形成的预防作用。
根据表4可知，化合物在其MTC时表现了显著的对斑马鱼心衰的预防作用(P<0.05，P<0.01，P<0.001)。根据图3和图4可知，本发明化合物对心脏扩大及静脉窦瘀血面积有改善作用，对心输出量(CO，图4中A)、斑马鱼背部主动脉血流速度(BFV，图4中B)和心率(HR，图4中C)有增加作用；而且，与模型组比较，本发明化合物能更加显著的改善以上五个心衰指标(P<0.001)。而CO作为评估心脏射血功能的重要指标，会受到结构性心脏病变和心脏超载前负荷和后负荷的影响。所以，本发明化合物能明显改善心衰斑马鱼的心衰指标，可以作为改善结构性心脏病变和心脏前负荷和后负荷的先导化合物。
为了更好的评价本发明化合物对斑马鱼心衰的改善作用，我们将文献报道的六个临床常用心衰药物LCZ696、依那普利、地高辛、氢氯噻嗪、厄贝沙坦、美托洛尔在同浓度(0.5μg/mL)或更高浓度(10μg/mL)下对斑马鱼心衰的改善作用与本发明化合物进行比较(表4)。
结果表明，本发明化合物在对心脏扩大的改善作用及对CO和BFV的增加作用上，明显优于对照药依那普利(10μg/mL)、美托洛尔及厄贝沙坦(0.5μg/mL)。而且，本发明化合物对于除HR的四个方面改善作用上，均明显优于这三个常规一线对照药物。更值得注意的是，本发明化合物对CO及BFV的增加作用分别为72％和83％，均强于同等浓度甚至更高浓度的以上六个一线治疗心衰对照药物；同时，本发明化合物对于心脏扩大的改善作用为65％，仅次于LCZ696(90％)；对静脉窦瘀血的改善作用为62％，仅次于LCZ696(89％)和地高辛(73％)，而均优于其他药物。
表4化合物对于斑马鱼心衰的预防作用以及其与文献报道的常规心衰药物作用比较
Figure GDA0003970731410000111
与模型组比较:*P<0.05,**P<0.01,***P<0.001.
综上，本发明化合物能明显改善心衰斑马鱼的心衰指标，并且其改善作用明显优于阳性对照药物。本发明化合物可以作为改善结构性心脏病变和心脏前负荷和后负荷的先导化合物，在制备预防和/或治疗心衰药物上，具有非常良好的应用前景。

Claims (5)

1.一种化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于：所述化合物的结构为：
Figure DEST_PATH_IMAGE001
。
2.权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于：所述方法包括以下步骤：
（1）取盐肤木根，经干燥、粉碎，用醇类溶液提取后，将提取液减压浓缩，得总浸膏；
（2）用水悬浮总浸膏，然后用石油醚进行萃取，取石油醚相，采用硅胶柱进行梯度洗脱，洗脱液为体积比（70~0）：1的二氯甲烷与甲醇的混合溶液，保留体积比9：1的二氯甲烷与甲醇混合溶液洗脱出的液体，命名为Fr.7；
（3）取步骤（2）所得Fr.7，采用硅胶柱进行梯度洗脱，洗脱液为体积比（15~0）：1的二氯甲烷与甲醇的混合溶液，保留体积比10：1的二氯甲烷与甲醇混合溶液洗脱出的液体，命名为Fr.7G，
（4）取步骤（3）所得Fr.7G，采用硅胶柱进行梯度洗脱，洗脱液为体积比（2.25~1.00）：1的二氯甲烷与丙酮的混合溶液，保留体积比5：2的二氯甲烷与丙酮混合溶液洗脱出的液体，命名为Fr. 7G-2；
（5）取步骤（4）所得Fr. 7G-2，采用MCI柱进行梯度洗脱，洗脱液为体积浓度85%~100%的甲醇水溶液，保留体积浓度95%的甲醇水溶液洗脱出的液体，命名为Fr. 7G-2-5；
（6）取步骤（5）所得Fr. 7G-2-5，经过高效液相色谱分离，即得。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述醇类溶液为95%甲醇，提取温度为70 °C回流提取，提取次数为4次，每次提取时间为6小时。
4.权利要求1所述化合物在制备预防和/或治疗心血管疾病药物上的用途。
5.根据权利要求4所述的用途，其特征在于：所述心血管疾病选自心衰、冠心病。
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