CN112190536A - 一种生发防脱的外泌体中药洗发乳及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种生发防脱的外泌体中药洗发乳及其制备方法，其中外泌体中药洗发乳由如下组分组成：月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠10％‑20％、十二烷基硫酸钠3％‑6％、十二烷基甜菜碱4％‑8％、阳离子表面活性剂2％‑5％、水50％‑60％、无机添加剂8％‑12％、珠光剂2％‑4％、色素0‑1％、中药提取物3％‑6％、香精0‑1％、人脐带间充质干细胞外泌体提取液0.5％‑1.5％。本发明是中药结合外泌体的双效精华的洗发乳，对防治脱发有显著功效。

Description

一种生发防脱的外泌体中药洗发乳及其制备方法

技术领域

本发明涉及洗发乳技术领域，具体涉及一种生发防脱的外泌体中药洗发乳及其制备方法。

背景技术

2019年国家卫健委发布的脱发人群调查数据显示，我国的脱发人群超过2.5亿，平均每6个人中就有1名脱发患者，其中20岁至40岁的脱发人群在总脱发人数中占此较大，脱发的年轻化趋势明显。近四分之一的男性会在21岁开始脱发，66％的男性会在35岁经历脱发；而接近1亿的女性脱发群体中，有60％的人在25岁就出现了脱发现象。

毛囊控制毛发的生长，人类拥有大约5百万毛囊，其中大约8万到15万在头皮部位，正常的毛发生长周期包括3个阶段：2～6年的生长期，2～3周的退化期和大约12周的休止期。正常头发90％～95％的毛囊在生长期，1％进入退行期，5％～10％为休止期，至休止期时毛发脱落，进入下一个生长周期。

秃头绝大多数是患上了一种叫雄激素性秃发(AGA)的疾病，毛囊中的5α-脱氢酶把大量无害的睾酮转化成了二氢睾酮(DHT)。DHT与雄激素受体(AR)结合之后，会让毛囊生长期缩短，毛囊萎缩，发生一个叫毛囊微型化的过程。占脱发的90％以上，患者的头发生长期明显缩短，其主要原因是体内雄激素过高，头皮毛囊对二氢睾酮的敏感性增加，导致毛囊萎缩、毛囊微型化、毛干变细变黄，头发变细脱落。脂溢性脱发的临床表现初期常有头痒，搔抓或梳头时头发大量脱落，脱落之毛发毛根短小，毛球消失。脱发症状经过缓慢，可呈阶段性，时轻时重，数年后可致头顶或两鬓毛发稀疏，头皮光亮。头部油腻多脂或脱碎屑，毛发细软发黄。

斑秃俗称“鬼剃头”，约占5％，是一种突发的局限性的脱发，具体发病原因不明，但研究者普遍认为是一种具有遗传素质和环境激发因素的自身免疫病，目前的治疗和防治措施包括植发、服用药物、注射毛囊刺激物和戴假发。临床上常用固醇类激素搭配外用米诺地尔使用。无论是雄激素性脱发还是斑秃，虽然现有的药物都有一定的临床效果，但副反应大，停药后仍会复发，因此迫切需要一种能从根本上解决脱发的药物或产品。

人脐带间充质干细胞(human umbilical cord mesnchymalstem cells，hUCMSC)是来源于新生儿脐带组织的一种具有自我更新能力、多向分化多潜能和较强免疫调节功能的间充质干细胞，它具有干细胞的所有共性。hUCMSC能分泌多种细胞因子和外泌体。外泌体(exosome，Exo)活细胞分泌的直径为30-150nm的双层膜性囊泡，主要负责细胞间的物质运输和信息传递。1983年，外泌体首次于绵羊网织红细胞中被发现，1987年Johnstone将其命名为“exosome”，即外泌体。外泌体起源于细胞内吞过程中形成的内体，最后再从细胞中释放到胞外。人体几乎所有类型的细胞都能分泌外泌体，外泌体广泛存在并分布于各种体液中(包括血液、唾液、尿液和母乳)，作为重要的传递信号分子，形成了一种全新的细胞-细胞间信息传递系统。研究表明hUCMSC来源的外泌体携带多种蛋白质、mRNA、miRNA和脂质类物质等，具有组织修复、免疫调节等多种功能。与传统的干细胞疗法不同，外泌体是活细胞分泌的囊泡，通过全新的细胞-细胞间信息传递系统，能行使大部分的干细胞功能，此外在被注射到身体的受损伤部位后，不会发展成为癌细胞。因此，干细胞的外泌体治疗的新策略正在迅速获得重视，并且能够克服细胞治疗中的诸多风险和困难。外泌体的应用有诸多的优势：

1.外泌体具有磷脂双层膜结构，可直接进入受体细胞；

2.外泌体包含多种细胞因子；

3.外泌体具有高度生物相容性，具备免疫惰性。

4.体积小，能够穿越人体厚实的组织屏障。

《科学》杂志的子刊Science Advances报道了美国北卡罗来纳州立大学的程柯教授团队的一项研究。这项研究主要有两个成果：一是，发现了3D培养的、毛乳头细胞(DPs)的外泌体能够使毛发再生；二是，从外泌体中筛选出了效果最好的一种miRNA分子——miR-218-5p，或可能将其用于开发治疗脱发的药物。因此，开发一种基于人脐带间充质干细胞的外泌体洗发乳用于治疗和防止脱发

有重要的意义。

中国专利文献CN110693910A公开了一种具有生发功效的外泌体制备，包括人脐带间充质干细胞的原代分离与培养、上清液收集和外泌体提取三个步骤，步骤一：所述人脐带间充质干细胞的原代分离与培养分为以下步骤：1)无菌采集临床健康的足月产婴儿脐带，用含双抗的缓冲液清洗后分离得到华通氏胶，组织块贴壁培养法获得原代脐带间充质干细胞；2)脐带间充质干细胞常规培养至细胞密度为85％-90％时，消化液消化，按照1∶2-1∶4的此例传代扩大；步骤二：所述的上清液收集包括以下步骤：1)选用P2-P10代之间的细胞，常规培养基培养至细胞密度达到80-85％时，换无血清培养基饥饿培养；2)无菌收取细胞培养上清，过滤除菌后，-20℃低温保存。步骤三：所述外泌体的提取包括以下步骤：1)将步骤二得到的无菌细胞培养上清，经低温高速离心(12000-2000×g)后，弃上清，留沉淀；2)获得的沉淀中加入生理盐水，混匀后得到人脐带间充质干细胞外泌体注射液。使用时，在患部皮下注射，能有效改善患者脱发情况。该发明是单独使用人脐带间充质干细胞外泌体注射液来改善患者脱发情况。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的就在于提出一种生发防脱的外泌体中药洗发乳及其制备方法，其是中药结合外泌体的双效精华的洗发乳，对防治脱发有显著功效。

所采用的技术方案为：

一种生发防脱的外泌体中药洗发乳，由如下组分组成：

月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠10％-20％、十二烷基硫酸钠3％-6％、十二烷基甜菜碱4％-8％、阳离子表面活性剂2％-5％、水50％-60％、无机添加剂8％-12％、珠光剂2％-4％、色素0-1％、中药提取物3％-6％、香精0-1％、人脐带间充质干细胞外泌体提取液0.5％-1.5％。

进一步地，所述中药提取物为当归、何首乌、川芎、熟地黄、菟丝子、丹参、枸杞、女贞子，白芍、黄芩的混合提取物。

所述中药提取物是通过如下步骤制备的：将等重量份的当归、何首乌、川芎、熟地黄、菟丝子、丹参、枸杞、女贞子、白芍、黄芩混合后粉碎，过20目筛，以95vol％乙醇5000mL渗漉，渗漉液回收乙醇至稠膏状，即得。

进一步地，所述人脐带间充质干细胞外泌体提取液是通过如下步骤制备的：

S1.将人脐带间充质干细胞置于培养箱中，用DMEM/F12培养液进行培养；

S2.直到细胞达60％-70％融合时，改用无血清的饥饿培养液，培养12-16h；

S3.将无血清的饥饿培养液换为含有胰岛素样生长因子IGF-1、肝细胞生长因子HGF、血管内皮生长因子VEGF、碱性成纤维细胞生长因子BFGF的DMEM/F12培养液，培养至细胞处于对数生长期，收集细胞培养上清液；

S4.将细胞培养上清液梯度离心，将离心所得的上清液用滤器过滤，得到人脐带间充质干细胞外泌体提取液。

进一步地，S3中，含有胰岛素样生长因子IGF-1、肝细胞生长因子HGF、血管内皮生长因子VEGF、碱性成纤维细胞生长因子BFGF的DMEM/F12培养液，其细胞因子浓度为10-20ng/ml。

进一步地，所述阳离子表面活性剂为十二烷基二甲基氧化胺、十八烷基三甲基氯化铵与阳离子瓜儿胶中的一种或几种。

进一步地，所述无机添加剂为氯化钠、氯化钾、氯化镁与氯化锂的一种或几种。

上述所述的生发防脱的外泌体中药洗发乳的制备方法，包括如下步骤：

S1.在水中分别加入月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠、十二烷基硫酸钠、十二烷基甜菜碱、阳离子表面活性剂、无机添加剂与珠光剂，并充分搅拌；

S2.加入中药提取物，充分搅拌；

S3.加入人脐带间充质干细胞外泌体提取液充分搅拌；

S4.根据需要适量加入色素和香精，全部物料加入乳化罐内进行乳化处理，控制乳化罐内温度为40-45℃，最后冷却至常温，得到生发防脱的外泌体中药洗发乳。

在上述技术方案中，

第一方面，人间充质干细胞外泌体中含有促进毛囊生长的胰岛素样生长因子IGF-1(Insulin-like growth factor-1)、细胞生长因子HGF(Hepatocyte growth factor)、血管内皮生长因子VEGF(vascular endothelial growth factor)、碱性成纤维细胞生长因子BFGF(basic Fibroblast Growth Factor)等生长因子。经过饥饿培养的脐带间充质干细胞，再经过IGF-1、VEGF和BFGF等生长因子刺激后，分泌更多的促进毛囊生长的营养因子，促进头发生长的效果更卓越。

第二方面，中药作为我国传统医药治疗方法，在治疗脱发问题上讲求内外平衡。中医理论来讲，肾其华在发。发的生长与脱落、润泽与枯槁均有赖于肾中精版气所充养和血液的权养。肾藏精，精又能化血，血以养发。肾精充足，精能化血，血旺毛发得养，则毛发润泽、生长迅速；肾精亏虚，化血不足，毛发失养，则毛早白，或枯槁脱落。总结为：脱发是由于血气衰弱，肾气不足所致。草本中药采用纯天然的传统中药材：当归、何首乌、川芎、熟地黄、菟丝子、丹参、枸杞、女贞子，白芍、黄芩等。纯天然草本中药的好处在于，性质温和，安全无毒，对皮肤无任何刺激作用。通过萃取其以上多种草药中的有效防脱护发成分，其中加入脐带间充质干细胞的外泌体成分，制成中药结合外泌体的双效精华的洗发乳，对防治脱发有显著功效。

附图说明

图1为不同处理组对小鼠的背部毛发生成作用的照片组图。

具体实施方式

下面通过具体的实施例对本发明进行详细说明，但这些例举性实施方式的用途和目的仅用来例举本发明，并非对本发明的实际保护范围构成任何形式的任何限定，更非将本发明的保护范围局限于此。

实施例1

一种生发防脱的外泌体中药洗发乳，由如下组分组成：

月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AEs)13％、十二烷基硫酸钠(AS)5％、十二烷基甜菜碱(BS-12)5％、阳离子表面活性剂3％、水53％、无机添加剂10％、珠光剂3％、中药提取物5％、人脐带间充质干细胞外泌体提取液1％、色素1％、香精1％。

中药提取物是通过如下步骤制备的：

将等重量份的当归、何首乌、川芎、熟地黄、菟丝子、丹参、枸杞、女贞子、白芍、黄芩混合后粉碎，过20目筛，以95vol％乙醇5000mL渗漉，渗漉液回收乙醇至稠膏状，即得。

人脐带间充质干细胞外泌体提取液是通过如下步骤制备的：

S1.将人脐带间充质干细胞置于培养箱中，用DMEM/F12培养液进行培养；

S2.直到细胞达60％-70％融合时，改用无血清的饥饿培养液，培养12-16h；

S3.将无血清的饥饿培养液换为含有胰岛素样生长因子IGF-1、肝细胞生长因子HGF、血管内皮生长因子VEGF、碱性成纤维细胞生长因子BFGF的DMEM/F12培养液，其细胞因子浓度为10-20ng/ml，培养至细胞处于对数生长期，收集细胞培养上清液；

S4.将细胞培养上清液梯度离心60-120min，将离心所得的上清液用0.22μm滤器过滤，得到人脐带间充质干细胞外泌体提取液。

外泌体中药洗发乳是通过如下步骤制备的：

S1.在水中分别加入月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠、十二烷基硫酸钠、十二烷基甜菜碱、阳离子表面活性剂、无机添加剂与珠光剂，并充分搅拌；

S2.加入中药提取物，充分搅拌；

S3.加入人脐带间充质干细胞外泌体提取液充分搅拌；

S4.根据需要适量加入色素和香精，全部物料加入乳化罐内进行乳化处理，控制乳化罐内温度为40-45℃，最后冷却至常温，得到生发防脱的外泌体中药洗发乳。

实施例2

参照实施例1，与实施例1不同的是，本实施例的一种生发防脱的外泌体中药洗发乳，由如下组分组成：

月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AEs)15％、十二烷基硫酸钠(AS)5％、十二烷基甜菜碱(BS-12)5％、阳离子表面活性剂3％、水53％、无机添加剂10％、珠光剂3％、

中药提取物5％、人脐带间充质干细胞外泌体提取液1％。

实施例3

参照实施例1，与实施例1不同的是，本实施例的一种生发防脱的外泌体中药洗发乳，由如下组分组成：

月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠(AEs)10％、十二烷基硫酸钠(AS)4％、十二烷基甜菜碱(BS-12)5％、阳离子表面活性剂4％、水57％、无机添加剂10％、珠光剂3％、中药提取物4％、人脐带间充质干细胞外泌体提取液1％、色素1％、香精1％。

试验：

通过小鼠背部皮肤的效果对此组，可以看出，使用米诺地尔治疗组在10天有部分毛发生长出来，中药提取物孵育组情况稍好于使用米诺地尔治疗组，但是次于实施例1的中药提取物+外泌体提取物组。中药提取物+外泌体提取物组的生发效果是三组中最好的。接着我们观察到15天，情况与前面一致，生发效果最好的是中药提取物+外泌体提取物组，参见图1所示。

上文所列出的一系列的详细说明仅仅是针对本发明的可行性实施例的具体说明，它们并非用以限制本发明的保护范围，凡未脱离本发明技艺精神所作的等效实施例或变更均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种生发防脱的外泌体中药洗发乳，其特征在于，由如下组分组成：

月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠10％-20％、十二烷基硫酸钠3％-6％、十二烷基甜菜碱4％-8％、阳离子表面活性剂2％-5％、水50％-60％、无机添加剂8％-12％、珠光剂2％-4％、色素0-1％、中药提取物3％-6％、香精0-1％、人脐带间充质干细胞外泌体提取液0.5％-1.5％。

2.根据权利要求1所述的生发防脱的外泌体中药洗发乳，其特征在于，所述中药提取物为当归、何首乌、川芎、熟地黄、菟丝子、丹参、枸杞、女贞子，白芍、黄芩的混合提取物。

3.根据权利要求2所述的生发防脱的外泌体中药洗发乳，其特征在于，所述中药提取物是通过如下步骤制备的：将等重量份的当归、何首乌、川芎、熟地黄、菟丝子、丹参、枸杞、女贞子、白芍、黄芩混合后粉碎，过20目筛，以95vol％乙醇5000mL渗漉，渗漉液回收乙醇至稠膏状，即得。

4.根据权利要求1所述的生发防脱的外泌体中药洗发乳，其特征在于，所述人脐带间充质干细胞外泌体提取液是通过如下步骤制备的：

S1.将人脐带间充质干细胞置于培养箱中，用DMEM/F12培养液进行培养；

S2.直到细胞达60％-70％融合时，改用无血清的饥饿培养液，培养12-16h；

S3.将无血清的饥饿培养液换为含有胰岛素样生长因子IGF-1、肝细胞生长因子HGF、血管内皮生长因子VEGF、碱性成纤维细胞生长因子BFGF的DMEM/F12培养液，培养至细胞处于对数生长期，收集细胞培养上清液；

S4.将细胞培养上清液梯度离心，将离心所得的上清液用滤器过滤，得到人脐带间充质干细胞外泌体提取液。

5.根据权利要求4所述的生发防脱的外泌体中药洗发乳，其特征在于，S3中，含有胰岛素样生长因子IGF-1、肝细胞生长因子HGF、血管内皮生长因子VEGF、碱性成纤维细胞生长因子BFGF的DMEM/F12培养液，其细胞因子浓度为10-20ng/ml。

6.根据权利要求1所述的生发防脱的外泌体中药洗发乳，其特征在于，所述阳离子表面活性剂为十二烷基二甲基氧化胺、十八烷基三甲基氯化铵与阳离子瓜儿胶中的一种或几种。

7.根据权利要求1所述的生发防脱的外泌体中药洗发乳，其特征在于，所述无机添加剂为氯化钠、氯化钾、氯化镁与氯化锂的一种或几种。

8.权利要求1-7任一所述的生发防脱的外泌体中药洗发乳的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

S1.在水中分别加入月桂醇聚氧乙烯醚硫酸钠、十二烷基硫酸钠、十二烷基甜菜碱、阳离子表面活性剂、无机添加剂与珠光剂，并充分搅拌；

S2.加入中药提取物，充分搅拌；

S3.加入人脐带间充质干细胞外泌体提取液充分搅拌；

S4.根据需要适量加入色素和香精，全部物料加入乳化罐内进行乳化处理，控制乳化罐内温度为40-45℃，最后冷却至常温，得到生发防脱的外泌体中药洗发乳。

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