CN112111538A - 一种可调节肠促胰岛素定位释放的功能糖及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种可调节肠促胰岛素定位释放的功能糖及其制备方法,属于现代营养食品技术领域。本发明以淀粉类糊精和功能单糖为底物,通过糖链水解转苷与受体介导技术制备得到可调节肠促胰岛素定位释放的功能糖。本发明方法具有工艺绿色环保、加工成本低等优点,所制备产品生理活性显著,具有调控食欲和胃排空速率功能,涉及功能食品、慢病干预、体重管理等多个领域。

Description

一种可调节肠促胰岛素定位释放的功能糖及其制备方法
技术领域
本发明属于现代营养食品技术领域,具体涉及一种可调节肠促胰岛素定位释放的功能糖及其制备方法。
背景技术
近年来与膳食结构和生活习惯相关的非传染性慢性病及代谢综合症患者剧增。这些慢性疾病及其危险因素水平的快速上升趋势,已成为威胁我国人民健康的突出问题。世界卫生组织(WHO)对影响人类健康因素的评估结果表明,膳食营养因素(13%)对健康的作用仅次于遗传因素(15%),而大于医疗因素(8%)。因此,膳食营养干预调控具有重要市场意义和前景。
当前,世界各国重视食品营养健康科技创新与产业发展,以精准个性化营养健康调控为代表的创新关键技术已成为产业热点和难点。已有专家正在将现代分子营养设计等前沿制造技术靶向生产精准营养与个性化食品,开发出系列高品质健康食品。其中,功能糖集营养、保健、食疗于一体,广泛应用于食品、保健品、饮料等领域。作为益生元,功能糖具有改善肠道微生态、促进脂质、蛋白质与矿物类代谢等功能,近年来国际上颇为流行,代表性产品为低聚异麦芽糖、低聚果糖、低聚半乳糖产品为主。同时,胰高血糖素样肽-1(GLP-1)是由存在于小肠末端和结肠近端L-细胞所分泌的肠促胰素,可调控机体血糖反应和食欲等诸多生理过程,对预防代谢综合症和身体健康具有重要作用。食品大分子营养素的消化产物包括单糖、氨基酸、脂肪酸以及白藜芦醇、咖啡多酚、葡萄籽原花青素等植物营养化学物均能刺激GLP-1的分泌,但正常条件下,大多数食品营养素和其他组分是在小肠的近端区域被消化和吸收,几乎不可能到达小肠末端。
发明内容
本发明的目的旨在提供一种可用于调节肠促胰岛素定位释放的功能糖及其加工方法。本发明方法具有工艺绿色环保、加工成本低等优点,所制备产品生理活性显著,具有调控食欲和胃排空速率功能,该功能糖在小肠末端刺激L细胞分泌GLP-1并通过脑肠轴机制来实现,涉及功能食品、慢病干预、体重管理等多个领域。
本发明目的通过如下技术方案实现:
一种制备可调节肠促胰岛素定位释放的功能糖的方法,所述方法是将淀粉类糊精供体和功能单糖受体分散于水中,混匀,形成混合液;然后加入多功能酶制剂进行酶解,结束后,即可获得可调节肠促胰岛素定位释放的功能糖;
其中,所述的功能单糖受体选自如下任意一种或多种:2-脱氧葡萄糖、甘露糖、岩藻糖、阿洛糖、海藻糖、塔格糖、麦芽糖醇、甘露醇;
多功能酶制剂选自如下任意一种或多种:水解糖酶家族70、13的蔗糖-4-葡糖基转移酶、蔗糖-6-葡糖基转移酶、蔗糖-1,6(3)-α-葡聚糖6(3)-葡糖基转移酶、α-4,6-葡糖基转移酶、α-4,3-葡糖基转移酶、罗伊氏蔗糖酶。
在本发明一种实施方式中,所述淀粉类糊精是通过采用如下方法制备得到:采用对淀粉链进行酶切水解;或者对环化糊精进行开环解聚获得线性糊精。所述酶切水解涉及的酶为:α-淀粉酶或者异淀粉酶。所述环化糊精进行开环解聚涉及的酶为新普鲁兰酶。所述酶切水解中添加150-200U/gα-淀粉酶,或者5-10U/g异淀粉酶。所述环化糊精中添加80-100U/g新普鲁兰酶。
在本发明一种实施方式中,所述混合液中淀粉类糊精供体的浓度为5-50mg/mL。
在本发明一种实施方式中,所述混合液中淀粉类糊精供体与功能单糖受体的质量比为1:1-1:20。
在本发明一种实施方式中,所述多功能酶制剂相对底物淀粉类糊精的添加量为100-500U/g。
在本发明一种实施方式中,所述酶解是在30-80℃下反应3-24h。
在本发明一种实施方式中,所述方法还包括:酶解结束后,灭酶活、膜滤分级、离心处理。
在本发明一种实施方式中,多功能酶制剂为来源于水解糖酶家族70或13的蔗糖-4-葡糖基转移酶、蔗糖-6-葡糖基转移酶、蔗糖-1,6(3)-α-葡聚糖6(3)-葡糖基转移酶、α-4,6-葡糖基转移酶、α-4,3-葡糖基转移酶、罗伊氏蔗糖酶等中一种或多种;上述酶可来源于古生菌、细菌或者植物。
在本发明的一种实施方式中,所述方法具体包括如下步骤:
将淀粉类糊精溶解于水中,配成质量百分比浓度5-50mg/mL的淀粉类糊精供体溶液;按照1:1-1:20比例将受体功能单糖添加到淀粉类糊精供体溶液,混合均匀;置于30-80℃水浴加热20-60min后,然后加入100-500U/g多功能酶制剂并保温反应3-24h;加热灭酶活、膜滤分级、离心处理,将所获得上清液进行干燥即得目标产物。
本发明的第二个目的是提供一种可调节肠促胰岛素定位释放的功能糖。
在本发明的一种实施方式中,所述可调节肠促胰岛素定位释放的功能糖中功能单糖受体在淀粉类糊精上的接枝率为40-80%。
在本发明的一种实施方式中,所述可调节肠促胰岛素定位释放的功能糖的平均分子尺寸为DP 3-30。
在本发明的一种实施方式中,所述可调节肠促胰岛素定位释放的功能糖在L细胞系模型中刺激肠道激素GLP-1释放水平大于1.05pM/μg蛋白。
本发明的第三个目的是将上述可调节肠促胰岛素定位释放的功能糖应用于制备糖尿病特膳食品、轻断食产品、运动食品、低升糖食品等新型营养品中。
本发明有以下优点:
1)本发明充分利用我国资源丰富的淀粉类糊精和功能单糖,以淀粉类糊精和功能单糖为底物,通过糖链水解转苷与受体介导技术制备得到可调节肠促胰岛素定位释放的功能糖,提升现代食品营养品质,实现个性化和营养精准食品的制造。
2)本发明功能糖制备过程步骤简便,反应条件可控,实现了连续化和低成本绿色生产。
3)本发明功能糖产品具有营养干预健康调控功能,能够在L细胞系模型中刺激肠道激素GLP-1释放水平达1.15pM/μg蛋白以上。本发明功能糖既可作为终端产品直接投放市场供消费者食用,还可用作于糖尿病特膳食品、轻断食产品、运动食品、低升糖食品的原料,市场前景广阔,经济和社会效益显著。
附图说明
图1为功能糖分子尺寸分布液相图。
具体实施方式
下面结合实例进一步阐明本发明的内容,但本发明所保护的内容不仅仅局限于下面的实例。
功能糖平均分子尺寸采用高效液相色谱测定:色谱条件为:将制备得到功能糖用0.22μm针头式滤膜过滤,然后采用HPLC方法进行检测。色谱柱:Zorbax Carbohydrate柱(4.6×150mm),检测器:示差折光检测器,流动相:乙腈:水=75:25(v:v),流速1.0mL/min,柱温35℃,上样体积10μL。
肠道激素GLP-1测定:采用小鼠内分泌细肠胞系STC-1,首先在含有10%胎牛血清和1%青霉素-链霉素的DMEM杜氏改良Eagle培养基中进行培养,将洗涤培养基用含消化上清液(稀释到消化淀粉产品为20-200mmol/L)的Hank's平衡盐溶液代替,保温培养2小时后收集样品,加入蛋白酶抑制PMSF(100μmol/L),采用ELISA试剂盒分析GLP-1水平
接枝率测定过程、计算方法:采用液相色谱方法监测反应过程中游离功能单糖含量。接枝率(%)=(1–反应后游离单糖含量/反应前游离单糖含量)×100。
酶来源说明:下述实施例涉及到的商业化α-淀粉酶液、α-4,3-葡糖基转移酶、新普鲁兰酶、蔗糖-6-葡糖基转移酶、商业化异淀粉酶、罗伊氏蔗糖酶购置于爱尔兰Megzyme公司;或者根据Microbial Starch-Converting Enzymes:Recent Insights andPerspectives,ComprehensiveReviews in Food Science and Food Safety,2018,17:1238-1260现有报道的已知方法自制得到。
实施例1
直链淀粉链酶切水解产物的制备过程:玉米直链淀粉融于纯净水配成质量百分比10%的溶液,添加200U/g的商业化α-淀粉酶液,在50℃水浴反应2h,加热灭酶活、离心处理后,将上清液喷雾干燥即得直链淀粉链酶切水解产物。
称取一定质量(1g)的直链淀粉链酶切水解产物溶解于纯净水配成质量百分比浓度10mg/mL,按照1:1比例将受体麦芽糖醇添加到上述溶液,混合均匀;置于35℃水浴加热40min后,然后加入100U/g的α-4,3-葡糖基转移酶并保温反应24h;加热灭酶活、膜滤分级、离心处理,将所获得上清液进行干燥即得功能糖。
所得功能糖的平均分子尺寸为DP12.5,接枝率为45%。
所得功能糖在L细胞系模型中刺激肠道激素GLP-1释放水平1.21pM/μg蛋白。
实施例2
直链淀粉链酶切水解产物的制备过程:玉米直链淀粉融于纯净水配成质量百分比10%的溶液,添加150U/g的商业化α-淀粉酶液,在50℃水浴反应1h,加热灭酶活、离心处理后,将上清液喷雾干燥即得直链淀粉链酶切水解产物。
称取一定质量(0.5g)的直链淀粉链酶切水解产物溶解于纯净水配成质量百分比浓度10mg/mL,按照1:1比例将受体麦芽糖醇添加到上述溶液,混合均匀;置于35℃水浴加热40min后,然后加入100U/g的α-4,6-葡糖基转移酶并保温反应24h;加热灭酶活、膜滤分级、离心处理,将所获得上清液进行干燥即得功能糖。
所得功能糖的平均分子尺寸为13.6,接枝率为54%。
所得功能糖在L细胞系模型中刺激肠道激素GLP-1释放水平1.15pM/μg蛋白。
实施例3
β-环糊精开环解聚产物:商业化β-环糊精融于纯净水配成质量百分比2%的溶液,添加80U/g新普鲁兰酶,在40℃水浴反应6h,加热灭酶活、离心处理后,将上清液喷雾干燥即得β-环糊精开环解聚产物。
称取一定质量的β-环糊精开环解聚产物溶解于纯净水配成质量百分比浓度50mg/mL,按照1:10比例将甘露糖添加到上述溶液,混合均匀;置于70℃水浴加热20min后,然后加入500U/g蔗糖-6-葡糖基转移酶并保温反应10h;加热灭酶活、膜滤分级、离心处理,将所获得上清液进行干燥即得功能糖。
所得功能糖的平均分子尺寸为DP8.3,接枝率为42%。
所得功能糖在L细胞系模型中刺激肠道激素GLP-1释放水平1.15pM/μg蛋白。
实施例4
支链淀粉链酶切水解产物的制备过程:
玉米支链淀粉融于纯净水配成质量百分比10%的溶液,添加5U/g的商业化异淀粉酶,在30℃水浴反应12h,加热灭酶活、离心处理后,将上清液喷雾干燥即得支链淀粉链酶切水解产物。
称取一定质量的支链淀粉链酶切水解产物溶解于纯净水配成质量百分比浓度20mg/mL,按照1:20比例将海藻糖添加到上述溶液,混合均匀;置于30℃水浴加热60min后,然后加入400U/g罗伊氏蔗糖酶并保温反应3h;加热灭酶活、膜滤分级、离心处理,将所获得上清液进行干燥即得功能糖。
所得功能糖的平均分子尺寸为DP 20.1,接枝率为61%。
所得功能糖在L细胞系模型中刺激肠道激素GLP-1释放水平1.18pM/μg蛋白。
实施例5探究不同淀粉类糊精供体对所得功能糖的性能影响
参照实施例1,将淀粉类糊精供体由直链淀粉链酶切水解产物替换为表1所示的未进行处理的直链淀粉,其他条件不变,制得相应的功能糖。所得功能糖在L细胞系模型中GLP-1释放水平结果见表1。
参照实施例3,将淀粉类糊精供体由β-环糊精开环解聚产物替换为表1所示的未进行处理的β-环糊精,其他条件不变,制得相应的功能糖。所得功能糖在L细胞系模型中GLP-1释放水平结果见表1。
参照实施例4,将淀粉类糊精供体由支链淀粉链酶切水解产物替换为表1所示的未进行处理的支链淀粉,其他条件不变,制得相应的功能糖。所得功能糖在L细胞系模型中GLP-1释放水平结果见表1。
表1不同淀粉类糊精供体所得功能糖的功效结果
淀粉类糊精供体 接枝率 L细胞系模型中GLP-1释放水平
直链淀粉 18% 0.25pM/μg蛋白
β-环糊精 3% 0.08pM/μg蛋白
支链淀粉 32% 0.35pM/μg蛋白
由表1可知,未经过酶切处理、直接利用直链淀粉、β-环糊精、支链淀粉制备功能糖,所得功能糖在L细胞系模型中刺激肠道激素GLP-1释放水平远小于1.05pM/μg蛋白。
实施例6探究不同多功能酶系用量对所得功能糖的性能影响
参照实施例1,将α-4,3-葡糖基转移酶的用量由100U/g分别替换为80U/g、600U/g,制得相应的功能糖产品。所得功能糖产品的性能结果见表2。
表2不同多功能酶系用量所得功能糖的功效结果
用量(U/g) L细胞系模型中GLP-1释放水平
80 0.53pM/μg蛋白
600 1.01pM/μg蛋白
实施例7探究不同多功能酶系用量对所得功能糖的性能影响
参照实施例1,将直链淀粉链酶切水解产物的质量浓度由10mg/mL分别替换为2mg/mL、5mg/mL、60mg/mL,制得相应的功能糖产品。所得功能糖产品的性能结果见表3。
表3混合液中不同淀粉类糊精供体的质量浓度所得功能糖的功效结果
混合液质量浓度(mg/mL) L细胞系模型中GLP-1释放水平
2 0.19pM/μg蛋白
5 0.53pM/μg蛋白
60 0.70pM/μg蛋白
对比例1
参照肠道激素GLP-1测定过程,直接将麦芽糖醇、甘露糖和海藻糖分布在L细胞系模型中进行测定,相应十分结果如表4所示。
表4功能单糖在L细胞系模型中GLP-1释放水平结果
单糖 L细胞系模型中GLP-1释放水平
麦芽糖醇 0.39pM/μg蛋白
甘露糖 0.61pM/μg蛋白
海藻糖 0.53pM/μg蛋白
可见,功能单糖也能刺激GLP-1的分泌,但是GLP-1释放水平远小于1.05pM/μg蛋白。
本发明所描述的具体实施案例仅作为对本发明精神和部分实验做举例说明。本发明所述领域的技术人员可以对所描述的具体实施案例做出各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代,但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。

Claims (10)

1.一种制备用于调节肠促胰岛素定位释放的功能糖的方法,其特征在于,所述方法是将淀粉类糊精供体和功能单糖受体分散于水中,混匀,形成混合液;然后加入多功能酶制剂进行酶解,结束后,即可获得可调节肠促胰岛素定位释放的功能糖;
其中,所述的功能单糖受体选自如下任意一种或多种:2-脱氧葡萄糖、甘露糖、岩藻糖、阿洛糖、海藻糖、塔格糖、麦芽糖醇、甘露醇;
多功能酶制剂选自如下任意一种或多种:蔗糖-4-葡糖基转移酶、蔗糖-6-葡糖基转移酶、蔗糖-1,6(3)-α-葡聚糖6(3)-葡糖基转移酶、α-4,6-葡糖基转移酶、α-4,3-葡糖基转移酶、罗伊氏蔗糖酶。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述混合液中淀粉类糊精供体的浓度为5-50mg/mL。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述混合液中淀粉类糊精供体与功能单糖受体的质量比为1:1-1:20。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述多功能酶制剂相对底物淀粉类糊精的添加量为100-500U/g。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述淀粉类糊精是通过采用如下方法制备得到:采用对淀粉链进行酶切水解;或者对环化糊精进行开环解聚获得线性糊精。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述酶切水解过程中包括添加150-200U/gα-淀粉酶,或者5-10U/g异淀粉酶;所述环化糊精过程中包括添加80-100U/g新普鲁兰酶。
7.权利要求1-6任一项所述方法制备得到的一种用于调节肠促胰岛素定位释放的功能糖。
8.根据权利要求7所述的用于调节肠促胰岛素定位释放的功能糖,其特征在于,所述用于调节肠促胰岛素定位释放的功能糖中功能单糖受体在淀粉类糊精上的接枝率为40-80%。
9.根据权利要求7所述的用于调节肠促胰岛素定位释放的功能糖,其特征在于,所述可调节肠促胰岛素定位释放的功能糖的平均分子尺寸为DP 3-30。
10.权利要求7-9任一项所述的用于调节肠促胰岛素定位释放的功能糖在制备糖尿病特膳食品、轻断食产品、运动食品、低升糖食品中的应用。
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