CN1120845C - 从发酵液中分离提取乳链菌肽的方法 - Google Patents
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Abstract
一种从发酵液中分离提取乳链菌肽的方法，它是采用释放乳链菌肽、吸附、解吸附及喷雾干燥的技术手段，从乳酸乳球菌的发酵液中提取乳链菌肽，获得食用防腐剂乳链菌肽产品，利用廉价的吸附剂从乳酸乳球菌的发酵液中提取乳链菌肽，以简化提取工艺，降低成本，获得可在食品防腐中广泛应用的乳链菌肽产品。
Description
技术领域
本发明涉及微生物产物的提取方法，特指一种用吸附剂从乳酸乳球菌的发酵液中分离提取乳链菌肽的方法。
背景技术
众所周知，乳链菌肽是由某些乳酸乳球菌(Lactococcus lactis)产生的一种小肽，分子量约为3510Da。由于它对许多革兰氏阳性菌，尤其对引起食品腐败的芽孢杆菌、梭菌、葡萄球菌、利斯特氏菌等有强烈抑杀作用，加之其可被消化道中酶降解，是一种对人体无毒的天然食品防腐剂，已被广泛应用于乳制品、罐装食品、肉制品和饮料的防腐保鲜剂。
自从1944年从乳酸乳球菌的培养物中发现乳链菌肽以来，人们一直努力寻找从含有乳链菌肽的发酵液中提取乳链菌肽的可行的方法。近几年，研究者们探索用吸附剂吸附提取乳链菌肽的方法，如Coventry等人用商品名为“Micro-Cel”的硅酸钙抗粘剂，从乳酸乳球菌的发酵液中吸附乳链菌肽，但是，使用该方法得到的吸附复合物，欲解吸附非常困难，因为在pH1.0-12.0的范围内都不能使吸附的乳链菌肽被解吸附，经过反复地实验，加入约1％的十二烷基磺酸钠(SDS)可以解吸附。但是SDS是一种去垢剂，用此法制备的乳链菌肽不宜在食品中使用。
Janes等人用硅酸作为吸附剂从乳酸乳球菌的发酵液中提取并浓缩乳链菌肽，同样，使用硅酸作为吸附剂得到的吸附复合液，欲解吸附也非常困难，实际他们采用的技术路线是，浓缩这一步骤是通过冷冻干燥达到的。其冷冻干燥步骤之前是采用了22100g的高速离心除菌，其解吸附过程又必须在4℃以下搅拌过夜。其主要缺陷在于：技术要求苛刻，成本较高，不适宜用于生产。
针对上述缺陷，本发明人经过长期的研究和实验，创造出本发明的技术方案。
发明内容
本发明的主要目的在于提供一种用吸附剂从乳酸乳球菌发酵液中分离提取乳链菌肽的方法。克服现有技术的弊端，达到利用廉价的吸附剂从乳酸乳球菌的发酵液中提取乳链菌肽，获得可在食品防腐中广泛应用的乳链菌肽产品。
本发明的目的是这样实现的：一种从发酵液中分离提取乳链菌肽的方法，其特征在于：它是采用释放乳链菌肽、吸附、解吸附及喷雾干燥的技术手段，从乳酸乳球菌的发酵液中提取乳链菌肽，获得食用防腐剂乳链菌肽产品，具体步骤如下：
(一)释放乳链菌肽：
首先将由乳酸乳球菌发酵产生的含有乳链菌肽的发酵液用酸调pH至1.8-3.5，于70-100℃加热1-60分钟，杀死细菌并使乳链菌肽完全释放于发酵液中；
(二)吸附：
随后，在20-50℃下加入为发酵液体积0.1-5％(最适量为0.35-3％)的吸附剂进行吸附，保温搅拌0.5-3小时，制成吸附剂-乳链菌肽复合物；
(三)解吸附：
制成的吸附剂-乳链菌肽复合物的沉淀用蒸馏水洗涤两次，然后用10％-20％发酵液体积的解吸附剂进行解吸附，使用的解吸附剂为聚乙二醇与有机酸盐或无机酸盐的水溶液，在20-40℃下搅拌5-60分钟进行解吸附；
(四)喷雾干燥：
上述解吸附后的上清解吸附液，用酸调pH至2.0-3.5，之后在喷雾干燥器上进行喷雾干燥，喷雾干燥液用1-5倍牛奶稀释，浓度控制在5000-20000IU/ml。热风进口温度为120-180℃，出口温度为70-100℃，即得粉末状食品级的乳链菌肽产品。
该吸附剂为硅藻土、白土、皂土、三氧化二铝、沸石、活性炭、石英砂、多孔玻璃、大孔树脂、纤维素中的至少一种；该聚乙二醇的分子量为6000-30000Da，浓度为1-20％；有机酸盐或无机酸盐，包括氯化物、硫酸盐、碳酸盐、磷酸盐、硝酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐中的至少一种，浓度为1-20％。
本发明的主要优点是利用廉价的吸附剂从乳酸乳球菌的发酵液中提取乳链菌肽，以简化提取工艺，降低成本，获得可在食品防腐中广泛应用的乳链菌肽产品。
下面结合较佳实施例和附图进一步说明。
附图说明
图1是本发明的制造方法工艺示意图。
具体实施方式
实施例1
参阅图1
本发明的方法是提供一种简便易行的提取乳链菌肽的新工艺。也就是采用释放乳链菌肽、吸附、解吸附及喷雾干燥等技术手段，从乳酸乳球菌的发酵液中提取乳链菌肽，获得天然食品防腐剂乳链菌肽产品。具体步骤如下：
(一)释放乳链菌肽：
首先将由乳酸乳球菌发酵产生的含有乳链菌肽的发酵液用酸调pH至1.8-3.5，实验证明最适合的pH范围是2.0-3.0，于70-100℃加热1-60分钟，杀死细菌并使乳链菌肽完全释放于发酵液中；
(二)吸附：
随后，在20-50℃下加入为发酵液体积0.1-5％，(最适量为0.35-3％)的吸附剂进行吸附，常用的吸附剂为硅藻土、白土、皂土、三氧化二铝、沸石、活性炭、石英砂、多孔玻璃、大孔树脂、纤维素中的至少一种，保温搅拌0.5-3小时，最适宜时间为1-2小时，制成吸附剂-乳链菌肽复合物；
(三)解吸附：
制成的吸附剂-乳链菌肽复合物的沉淀用蒸馏水洗涤两次，然后用10％-20％发酵液体积的解吸附剂进行解吸附，使用的解吸附剂为聚乙二醇与有机酸盐或无机酸盐的水溶液，其中聚乙二醇的分子量为6000-30000Da，浓度为1-20％；有机酸盐或无机酸盐，包括氯化物、硫酸盐、碳酸盐、磷酸盐、硝酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐或酒石酸盐中的至少一种，浓度为1-20％，常用的如氯化钾、氯化钠、氯化铵、氯化钙、氯化亚铁、硫酸钾、磷酸钠、柠檬酸钠、醋酸钠或醋酸钾等，在20-40℃下搅拌5-60分钟，进行解吸附；
(四)喷雾干燥：
上述解吸附后的上清解吸附液，用酸调pH至2.0-3.5，之后在喷雾干燥器上进行喷雾干燥，喷雾干燥液用1-5倍牛奶稀释，浓度控制在5000-20000IU/ml。热风进口温度为120-180℃，出口温度为70-100℃，即得粉末状食品级的乳链菌肽产品。
本发明的方法中，整个流程中吸附剂吸附乳链菌肽的吸附率为95-100％，解吸附剂的解吸附率为80-90％，喷雾干燥的收率为80-95％。
本发明的创造性在于研制出低成本、高效率的系列吸附剂，其吸附率高达95-100％；并研制出低成本、高效率的系列解吸附剂，用聚乙二醇与有机酸盐或无机酸盐代替现有技术中的不适合食用的十二烷基磺酸钠，使从吸附剂-乳链菌肽复合物中解吸附乳链菌肽，其解吸附剂的解吸附率为80-90％；同时浓缩乳链菌肽溶液，使得后一步喷雾干燥的收率达80-95％，从而开创了廉价提取食用乳链菌肽的创新技术，具有更广泛及实用的经济效果。
实施例2
本实施例中，从乳酸乳球菌发酵液中提取乳链菌肽的具体步骤如下：
(一)释放乳链菌肽：
首先取乳链菌肽发酵液2000毫升，用酸调pH至2.0，在搅拌下于90-100℃加热5分钟，杀死细菌并使乳链菌肽完全释放于发酵液中；
(二)吸附：
随后，用冷水冷却至40℃下，按发酵液体积0.65％的比例，在搅拌下加入白土吸附剂进行吸附，保温搅拌1小时，制成吸附剂白土-乳链菌肽复合物沉淀，静止沉淀2小时，小心倾出上清液，沉淀物备用；
(三)解吸附：
制成的吸附剂白土-乳链菌肽复合的沉淀物用蒸馏水洗涤两次，然后用400毫升的解吸附剂分两次进行解吸附，使用的解吸附剂为10％的聚乙二醇与3％的磷酸氢钠的水溶液，在30℃下搅拌每次各20分钟进行解吸附；
(四)喷雾干燥：
上述两次解吸附后的上清解吸附液，用酸调pH至2.2，用2倍的牛奶稀释，之后在喷雾干燥器上进行喷雾干燥，热风进口温度为120-180℃，出口温度为80-100℃，即得粉末状食品级的乳链菌肽产品。
经过测试，整个流程中吸附剂吸附乳链菌肽的吸附率为96％，解吸附剂的解吸附率为80％，喷雾干燥的收率为80％。
实施例3
本实施例中，从乳酸乳球菌发酵液中提取乳链菌肽的具体步骤如下：
(一)释放乳链菌肽：
首先取乳链菌肽发酵液5000毫升，用酸调pH至2.5，在搅拌下于80℃加热30分钟，杀死细菌并使乳链菌肽完全释放于发酵液中；
(二)吸附：
随后，用冷水冷却至20℃下，按发酵液体积1.5％的比例，在搅拌下加入沸石吸附剂进行吸附，保温搅拌3.0小时，制成吸附剂沸石-乳链菌肽复合物沉淀，静止沉淀2小时，小心倾出上清液，沉淀物备用；
(三)解吸附：
制成的吸附剂沸石-乳链菌肽复合的沉淀物用蒸馏水洗涤两次，然后用600毫升的解吸附剂进行解吸附，使用的解吸附剂为15％的聚乙二醇与6％的酒石酸钾钠的水溶液，在40℃下搅拌60分钟进行解吸附；
(四)喷雾干燥：
上述两次解吸附后的上清解吸附液，用酸调pH至2.5，用3倍的牛奶稀释，之后在喷雾干燥器上进行喷雾干燥，热风进口温度为120-180℃，出口温度为80-100℃，即得粉末状食品级的乳链菌肽产品。
经过测试，整个流程中吸附剂吸附乳链菌肽的吸附率为97％，解吸附剂的解吸附率为82％，喷雾干燥的收率为81％。
实施例4
以下的实施例为中间实验，从乳酸乳球菌发酵液中提取乳链菌肽的具体步骤如下：
(一)释放乳链菌肽：
首先取乳链菌肽发酵液1000立升置于具有夹套的反应釜中，用酸调pH至2.2，在搅拌下于90℃加热10分钟，杀死细菌并使乳链菌肽完全释放于发酵液中；
(二)吸附：
随后，于夹套中通入冷水，冷却至30℃下，按发酵液体积0.5％的比例，在搅拌下加入皂土和硅藻土混合吸附剂进行吸附，保温搅拌5小时，制成吸附剂皂土和硅藻土-乳链菌肽复合物沉淀，静止沉淀2小时，小心倾出上清液，沉淀物备用；
(三)解吸附：
制成的吸附剂皂土和硅藻土-乳链菌肽复合的沉淀物用蒸馏水洗涤两次，然后用160立升的解吸附剂进行解吸附，使用的解吸附剂为5％的聚乙二醇与10％的氯化铵的水溶液，在30℃下搅拌30分钟进行解吸附；
(四)喷雾干燥：
上述解吸附后的上清解吸附液，用酸调pH至2.2，用2倍的牛奶稀释，之后在喷雾干燥器上进行喷雾干燥，热风进口温度为120-180℃，出口温度为80-100℃，即得粉末状食品级的乳链菌肽产品。
经过测试，整个流程中吸附剂吸附乳链菌肽的吸附率为97％，解吸附剂的解吸附率为81％，喷雾干燥的收率为81％。
实施例5
本实施例为中间实验，从乳酸乳球菌发酵液中提取乳链菌肽的具体步骤如下：
(一)释放乳链菌肽：
首先取乳链菌肽发酵液2000立升置于具有夹套的反应釜中，用酸调pH至2.8，在搅拌下于85℃加热10分钟，杀死细菌并使乳链菌肽完全释放于发酵液中；
(二)吸附：
随后，于夹套中通入冷水，冷却至45℃下，按发酵液体积0.35％的比例，在搅拌下加入硅藻土吸附剂进行吸附，保温搅拌2小时，制成吸附剂硅藻土-乳链菌肽复合物沉淀，静止沉淀2小时，小心倾出上清液，沉淀物备用；
(三)解吸附：
制成的吸附剂硅藻土-乳链菌肽复合的沉淀物用蒸馏水洗涤两次，然后用300立升的解吸附剂分三次进行解吸附，使用的解吸附剂为5％的聚乙二醇与10％的氯化钠的水溶液，在30℃下搅拌10分钟进行解吸附；
(四)喷雾干燥：
上述解吸附后的上清解吸附液，用酸调pH至2.5，用2倍的牛奶稀释，之后在喷雾干燥器上进行喷雾干燥，热风进口温度为120-180℃，出口温度为80-100℃，即得粉末状食品级的乳链菌肽产品。
经过测试，整个流程中吸附剂吸附乳链菌肽的吸附率为98％，解吸附剂的解吸附率为83％，喷雾干燥的收率为85％。
实施例6
本实施例为中间实验，从乳酸乳球菌发酵液中提取乳链菌肽的具体步骤如下：
(一)释放乳链菌肽：
首先取乳链菌肽发酵液500立升置于具有夹套的反应釜中，用酸调pH至2.5，在搅拌下于95℃加热8分钟，杀死细菌并使乳链菌肽完全释放于发酵液中；
(二)吸附：
随后，于夹套中通入冷水，冷却至50℃下，按发酵液体积1.5％的比例，在搅拌下加入活性炭吸附剂进行吸附，保温搅拌1.5小时，制成吸附剂活性炭-乳链菌肽复合物沉淀，静止沉淀2小时，小心倾出上清液，沉淀物备用；
(三)解吸附：
制成的吸附剂活性炭-乳链菌肽复合的沉淀物用蒸馏水洗涤两次，然后用50立升的解吸附剂进行解吸附，使用的解吸附剂为10％的聚乙二醇与5％的醋酸钾的水溶液，在35℃下搅拌5分钟进行解吸附；
(四)喷雾干燥：
上述解吸附后的上清解吸附液，用酸调pH至3.0，用2倍的牛奶稀释，之后在喷雾干燥器上进行喷雾干燥，热风进口温度为120-180℃，出口温度为80-100℃，即得粉末状食品级的乳链菌肽产品。
经过测试，整个流程中吸附剂吸附乳链菌肽的吸附率为99％，解吸附剂的解吸附率为86％，喷雾干燥的收率为90％。
实施例7
本实施例为中间实验，从乳酸乳球菌发酵液中提取乳链菌肽的具体步骤如下：
(一)释放乳链菌肽：
首先取乳链菌肽发酵液500立升置于具有夹套的反应釜中，用酸调pH至2.1，在搅拌下于100℃加热5分钟，杀死细菌并使乳链菌肽完全释放于发酵液中；
(二)吸附：
随后，于夹套中通入冷水，冷却至28℃下，按发酵液体积0.8％的比例，在搅拌下加入大孔树脂和纤维素混合吸附剂进行吸附，保温搅拌1小时，制成吸附剂大孔树脂和纤维素-乳链菌肽复合物沉淀，静止沉淀1小时，小心倾出上清液，沉淀物备用；
(三)解吸附：
制成的吸附剂大孔树脂和纤维素-乳链菌肽复合物的沉淀物用蒸馏水洗涤两次，然后用85立升的解吸附剂进行解吸附，使用的解吸附剂为5％的聚乙二醇与5％的氯化钾的水溶液，在20℃下搅拌15分钟进行解吸附；
(四)喷雾干燥：
上述解吸附后的上清解吸附液，用酸调pH至3.2，用2倍的牛奶稀释，之后在喷雾干燥器上进行喷雾干燥，热风进口温度为120-180℃，出口温度为80-100℃，即得粉末状食品级的乳链菌肽产品。
经过测试，整个流程中吸附剂吸附乳链菌肽的吸附率为98％，解吸附剂的解吸附率为90％，喷雾干燥的收率为95％。
当然，还可以选择上述的其它吸附剂及解吸附剂实施本发明的技术方案，由于工艺方法基本相同，故不重述。
Claims (3)
1、一种从发酵液中分离提取乳链菌肽的方法，其特征在于：它是采用释放乳链菌肽、吸附、解吸附及喷雾干燥的技术手段，从乳酸乳球菌的发酵液中提取乳链菌肽，获得食用防腐剂乳链菌肽产品，具体步骤如下：
(一)释放乳链菌肽：
首先将由乳酸乳球菌发酵产生的含有乳链菌肽的发酵液用酸调pH至1.8-3.5，于70-100℃加热1-60分钟，杀死细菌并使乳链菌肽完全释放于发酵液中；
(二)吸附：
随后，在20-50℃下加入为发酵液体积0.1-5％的吸附剂进行吸附，保温搅拌0.5-3小时，制成吸附剂-乳链菌肽复合物；
(三)解吸附：
制成的吸附剂-乳链菌肽复合物的沉淀用蒸馏水洗涤两次，然后用10％-20％发酵液体积的解吸附剂进行解吸附，使用的解吸附剂为聚乙二醇与有机酸盐或无机酸盐的水溶液，在20-40℃下搅拌5-60分钟进行解吸附；
(四)喷雾干燥：
上述解吸附后的上清解吸附液，用酸调pH至2.0-3.5，之后在喷雾干燥器上进行喷雾干燥，喷雾干燥液用1-5倍牛奶稀释，浓度控制在5000-20000IU/ml。热风进口温度为120-180℃，出口温度为70-100℃，即得粉末状食品级的乳链菌肽产品。
2、如权利要求1所述的从发酵液中分离提取乳链菌肽的方法，其特征在于：该吸附剂为硅藻土、白土、皂土、三氧化二铝、沸石、活性炭、石英砂、多孔玻璃、大孔树脂或纤维素中的至少一种。
3、如权利要求1所述的从发酵液中分离提取乳链菌肽的方法，其特征在于：该聚乙二醇的分子量为6000-30000Da，浓度为1-20％；有机酸盐或无机酸盐，包括氯化物、硫酸盐、碳酸盐、磷酸盐、硝酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐或酒石酸盐中的至少一种，浓度为1-20％。
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