CN112063715A - 一种用于肝细胞癌早期筛查的系统 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于肝细胞癌早期筛查的系统。所述用于肝细胞癌早期筛查的系统包括检测SNORD3B‑1、hsa‑circ‑0080695和hsa‑miR‑122三个ncRNA表达量的系统。所述检测SNORD3B‑1、hsa‑circ‑0080695和hsa‑miR‑122三个ncRNA表达量的系统包括检测SNORD3B‑1、hsa‑circ‑0080695和hsa‑miR‑122三个ncRNA相对表达量的引物。本发明提供的系统可以早期筛查肝细胞癌，具有重要的应用价值。

Description

一种用于肝细胞癌早期筛查的系统
技术领域
本发明属于生物医学领域，具体涉及一种用于肝细胞癌早期筛查的系统。
背景技术
肝细胞癌起病隐匿，早期缺乏明显症状，通常在晚期才得以确诊，而肝细胞癌晚期患者的5年生存率只有7％左右，早期能达到50％-70％，因此早发现、早诊断、早治疗尤为重要。目前肝细胞癌的筛查方法主要依赖于影像学检查和血液中的标志物甲胎蛋白(AFP)的检测。影像学检查比较直观，但癌变早期存在检查费用高、敏感性低和特异性低等局限性；AFP这种单一的标志物也存在着灵敏度低、特异性低等缺陷，因为一部分的肝细胞癌不分泌AFP，血液中的AFP水平没有明显升高，且肝炎等良性病变也会导致血液中的AFP水平升高。因此，发现新的肝细胞癌肿瘤标志物具有重要的意义。
最近的研究表明，无细胞循环RNA(cfRNA)有望成为液体活检中生物标志物新的组成部分。RNA作为生物标志物有其独特的优势，如高敏感性、组织特异性和低检测成本。关于exRNA作为生物标志物的研究主要集中在miRNA上，很多细胞外miRNA被报道能预测不同的癌症。已有研究发现，血浆中的miRNA可以作为肝细胞癌诊断的生物标志物(Jian Zhou，LeiYu，Xue Gao，et al.Plasma microRNA panel to diagnose hepatitis B virus-relatedhepatocellular carcinoma.Journal of Clinical Oncology.2011.38.2697)，该文章的研究成果也申请了专利“由血浆microRNA组合成的肝细胞癌诊断标志物及一种诊断肝细胞癌的新方法”(专利号：ZL201110462133.7)，在该专利中所述的试剂盒可用于诊断肝细胞癌，尤其是早期肝细胞癌，然而该专利并没有检测在AFP阴性患者上的检测效果。
高通量测序技术的发展使研究人员无需事先知道其序列，就能同时监测样品中不同种类的RNA片段，exRNA测序已成为发现新型生物标志物的有力工具。血液中的非编码RNA由于自身的二级结构或者被RNA结合蛋白的保护，可以稳定存在于血液中，因此可以作为体液无创检测的分子标志物。
发明内容
本发明的目的是进行肝细胞癌早期筛查。
本发明首先保护一种系统，可包括检测SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122三个ncRNA表达量的系统；所述系统用于肝细胞癌早期筛查。
所述系统具体可由检测SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122三个ncRNA表达量的系统组成。
上述任一所述系统中，所述检测SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122三个ncRNA表达量的系统可包括通过荧光定量PCR方法检测所述三个ncRNA相对表达量所需的试剂和/或仪器。
进一步的，所述通过荧光定量PCR方法检测所述三个ncRNA相对表达量所需的试剂和/或仪器可包括检测SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122三个ncRNA相对表达量的引物。
更进一步的，所述通过荧光定量PCR方法检测所述三个ncRNA相对表达量所需的试剂和/或仪器还可包括检测内参的引物和/或检测外参的引物。所述SNORD3B-1的相对表达量具体可为SNORD3B-1相对外参的表达量。所述hsa-circ-0080695的相对表达量具体可为hsa-circ-0080695相对外参的表达量。所述hsa-miR-122的相对表达量具体可为hsa-miR-122相对内参的表达量。
所述内参具体可为hsa-miR-1228-5p。
所述外参可为ERCC Spike-in。
上述任一所述系统还可包含数据处理装置。所述数据处理装置内设模块或软件。所述模块或软件的功能可如下：采用决策树算法处理待测者血浆中所述三个ncRNA的相对表达量的数据，获得癌症风险分数值，之后根据所述癌症风险分数值预测待测者是否患有或是否疑似患有肝细胞癌。
所述决策树算法可为随机森林决策树算法。
所述随机森林决策树算法处理待测者血浆中所述三个ncRNA的相对表达量的数据，获得癌症风险分数值的具体方法和步骤可见实施例。在本发明的实施例中，当模型得分大于0.165时认为样本患癌风险较大(患有或疑似患有肝细胞癌)即，当模型分小于0.165时认为样本患癌风险较小(不患有或疑似不患有肝细胞癌)。
上述任一所述的系统中，所述肝细胞癌可为早期肝细胞癌。所述早期肝细胞癌可为巴塞罗那0期肝细胞癌、巴塞罗那A期肝细胞癌、巴塞罗那B期或巴塞罗那C期肝细胞癌。
上述任一所述的系统中，检测SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122三个ncRNA表达量可为检测血浆中SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122三个ncRNA表达量，即检测对象为血浆。
本发明还保护上述任一所述的系统的应用，可为(b1)或(b2)：
(b1)制备用于肝细胞癌早期筛查的产品；
(b2)肝细胞癌早期筛查。
本发明还保护SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122三个ncRNA作为标志物的应用，可为(b1)或(b2)：
(b1)制备用于肝细胞癌早期筛查的产品；
(b2)肝细胞癌早期筛查。
本发明还保护检测SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122三个ncRNA表达量的物质的应用，可为(b1)或(b2)：
(b1)制备用于肝细胞癌早期筛查的产品；
(b2)肝细胞癌早期筛查。
本发明还保护检测SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122三个ncRNA表达量的物质和上述任一所述数据处理装置的应用，可为(b1)或(b2)：
(b1)制备用于肝细胞癌早期筛查的产品；
(b2)肝细胞癌早期筛查。
上述任一所述的应用中，所述肝细胞癌可为早期肝细胞癌。所述早期肝细胞癌可为巴塞罗那0期肝细胞癌、巴塞罗那A期肝细胞癌、巴塞罗那B期或巴塞罗那C期肝细胞癌。
上述任一所述的应用中，所述检测SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122三个ncRNA表达量的物质可包括通过荧光定量PCR方法检测所述三个ncRNA相对表达量所需的试剂和/或仪器。
进一步的，所述通过荧光定量PCR方法检测所述三个ncRNA相对表达量所需的试剂和/或仪器可包括检测SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122三个ncRNA相对表达量的引物。
更进一步的，所述通过荧光定量PCR方法检测所述三个ncRNA相对表达量所需的试剂和/或仪器还可包括检测内参的引物和/或检测外参的引物。所述SNORD3B-1的相对表达量具体可为SNORD3B-1相对外参的表达量。所述hsa-circ-0080695的相对表达量具体可为hsa-circ-0080695相对外参的表达量。所述hsa-miR-122的相对表达量具体可为hsa-miR-122相对内参的表达量。
所述内参具体可为hsa-miR-1228-5p。
所述外参可为ERCC Spike-in。
上述任一所述检测SNORD3B-1、hsa-circ-0080695、hsa-miR-122、hsa-miR-1228-5p和ERCC Spike-in的引物具体如实施例中的表2所示。
上述任一所述的应用中，SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122三个ncRNA表达量是指血浆中SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122三个ncRNA表达量，即检测对象为血浆。
上述任一所述SNORD3B-1的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。上述任一所述hsa-circ-0080695的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。上述任一所述hsa-miR-122的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。
本发明根据血浆中SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122三个ncRNA的表达量建立了用于肝细胞癌早期筛查的“3-ncRNA Panel”分类模型，其接受者操作特征曲线下面积(AUC)可达89.4％。“3-ncRNA Panel”分类模型对AFP阳性(AFP>400ng/ml)患者进行筛查，可达到100％的灵敏度；对于AFP阴性患者，可达到77.8％的灵敏度；对于健康人和慢性乙型肝炎患者，特异性分别达到96.2％和91.7％。
本发明提供的“3-ncRNA Panel”分类模型是以血浆为检测对象，借助血浆中三个ncRNA的表达情况可以对肝细胞癌进行早期筛查。因此，血浆中SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122三个ncRNA可以作为肝细胞癌标志物，是对早期肝细胞癌诊断技术的良好补充，具有重要的应用价值。
附图说明
图1为“3-ncRNA Panel”分类模型预测肝细胞癌的ROC曲线分析结果。
图2为“3-ncRNA Panel”分类模型在AFP阴性患者上的性能评估。(A)三个ncRNA(SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122)在训练集和测试集的表现，模型为随机森林模型。阳性训练集为甲胎蛋白(AFP)阳性(AFP>400ng/ml)的肝细胞癌患者，阴性训练集包括健康者和慢性乙型肝炎患者。*：早期阶段(0/A)用红色标记。NA：健康人和慢性乙型肝炎患者AFP值的记录。(B)三个ncRNA在所有样本中的预测值。训练集中阈值的选择是根据在健康人中特异性大于95％而定。三角形的点表示AFP介于20ng/ml到400ng/ml之间的患者，红色的点表示早期患者(0/A)。
图3通过RT-qPCR验证“3-ncRNA Panel”分类模型中的三个ncRNA(SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122)的生物标志物，其中，SNORD3B-1和hsa-circ-0080695验证队列为38个肝细胞癌患者和37个健康捐赠者，hsa-miR-122由于部分样本的血浆剩余量不够，验证队列为26个肝细胞癌患者和26个健康者。Wilcoxon秩和检验。*表示差异显著，p<0.05；**表示差异显著，p<0.01。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行进一步的详细描述，给出的实施例仅为了阐明本发明，而不是为了限制本发明的范围。以下提供的实施例可作为本技术领域普通技术人员进行进一步改进的指南，并不以任何方式构成对本发明的限制。
下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，按照本领域内的文献所描述的技术或条件或者按照产品说明书进行。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
下述实施例中，如无特殊说明，各核苷酸序列的第1位均为5′末端核苷酸，末位均为3′末端核苷酸。
下述实施例中，所有的志愿者或提供者均知情同意。
灵敏度(真阳性率)：实际有病而按试验标准被正确判断为有病的百分率。灵敏度越大越好，理想灵敏度为100％。
特异度(真阴性率)：实际无病而按试验标准被正确判断为无病的百分率。特异度越大越好，理想特异度为100％。
下述实施例中，各个患者和健康者的临床病理特征见表1。
表1
Figure BDA0002668842710000051
实施例、
一、研究对象
肝细胞癌(HCC)组：入选标准为活检标本病理学检查以及临床诊断确认为肝细胞癌患者。肝细胞癌组共38个肝细胞癌患者组成。
慢性乙型肝炎(CHB)组：入选标准为HBsAg+(即HBsAg检测为阳性)的慢性乙型肝炎患者。慢性乙型肝炎组由24个慢性乙型肝炎患者组成。
健康(HD)组：入选标准为未患有肝细胞癌、无乙肝丙肝感染史、无肝纤维化，无干扰素或其他抗病毒药物治疗。健康组由37个健康者组成。
二、qPCR检测血浆中3-ncRNA Panel中三个ncRNA的-△Ct值
3-ncRNA Panel由三个ncRNA组成，分别为SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122。
1、双引物qPCR检测血浆中SNORD3B-1和hsa-circ-0080695的-△Ct值
双引物qPCR定量检测血浆中每个ncRNA的含量的具体步骤如下：
(1)采用QIAzol Lysis Reagent(QIAGEN公司的产品，产品目录号为79306)提取待测者血浆的总RNA。
(2)取待测者血浆的总RNA，采用TIANScript II cDNA第一链合成试剂盒(TIANGEN公司的产品，产品目录号为KR107)进行反转录，得到待测者血浆的cDNA。随机引物、5×TIANScriptIIRTase Buffer、RNasin和TIANScript II RTase均为TIANScript II cDNA第一链合成试剂盒中的组件。
(2-1)制备反应体系1。反应体系1为14.5μl，包括待测者血浆的总RNA、2μl随机引物、1μl 10mM dNTP mix和无核酸酶水。
(2-2)将反应体系1置于PCR仪，65℃孵育5min，然后置于冰上2min，得到反应液。
(2-3)制备反应体系2。反应体系2为20μl，包括14.5μl步骤(2-2)得到的反应液、4μl 5×TIANScriptIIRTase Buffer、0.5μl RNasin(浓度为40U/μl)、1μl TIANScript IIRTase(浓度为200U/μl)。
(2-4)将反应体系2置于PCR仪，首先25℃孵育10min，之后42℃孵育60min，最后85℃加热5min(目的为终止反应)，得到待测者血浆的cDNA。
(3)以待测者血浆的cDNA为模板，采用FastFire快速荧光定量PCR预混试剂(TIANGEN公司的产品，产品目录号为FP207)在荧光定量PCR仪中进行qPCR，根据输出的Ct值，使用2-ΔΔCt法获得SNORD3B-1和hsa-circ-0080695的-△Ct值(以ERCC Spike-in作为外参)。2×FastFire qPCR PreMix为FastFire快速荧光定量PCR预混试剂中的组件。
反应体系为20μl，包括1μl待测者血浆的cDNA、0.6μl正向引物水溶液(浓度为10μM)、0.6μl反向引物水溶液(浓度为10μM)、10μl 2×FastFire qPCR PreMix和无核酸酶水。
反应程序：95℃1min；95℃5s，60℃15s，40个循环。
检测SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和ERCC Spike-in的正向引物和反向引物的核苷酸序列见表2，核苷酸序列均由擎科公司合成。
表2
Figure BDA0002668842710000061
Figure BDA0002668842710000071
2、单引物qPCR检测血浆中hsa-miR-122的-△Ct值
单引物qPCR检测血浆中hsa-miR-122的-△Ct值的具体步骤如下：
(1)采用QIAzol Lysis Reagent(QIAGEN公司的产品，产品目录号79306)提取待测者血浆的总RNA。
(2)取待测者血浆的总RNA，采用miRcute增强型miRNA cDNA第一链合成试剂盒(TIANGEN公司的产品，产品目录号为KR211)进行反转录，得到待测者的反转录产物。2×miRNA RT Reaction Buffer和miRNA RT Enzyme Mix均为miRcute增强型miRNA cDNA第一链合成试剂盒中的组件。
反应体系为20μl，包括5μl待测者血浆的总RNA、10μl 2×miRNA RT ReactionBuffer、2μl miRNA RT Enzyme Mix和无核酸酶水。
反应程序为：42℃60min，95℃3min。
(3)取待测者的反转录产物，采用FastFire快速荧光定量PCR预混试剂(TIANGEN公司的产品，产品目录号为FP207)在荧光定量PCR仪中进行qPCR，根据输出的Ct值，使用2-ΔΔCt法获得hsa-miR-122的-△Ct值(以hsa-miR-1228-5p作为内参)。2×miRcute Plus miRNAPremix(with SYBR&ROX)和通用反向引物均为FastFire快速荧光定量PCR预混试剂中的试剂。
反应体系为20μl，包括1μl待测者的反转录产物、0.4μl正向引物水溶液(浓度为10μM)、0.4μl通用反向引物水溶液(浓度为10μM)、10μl 2×miRcute Plus miRNA Premix(with SYBR&ROX)和无核酸酶水。
反应程序：95℃15min；94℃20s，60℃34s，40个循环。
检测hsa-miR-122和hsa-miR-1228-5p的正向引物的核苷酸序列见表2。
三、构建“3-ncRNA Panel”分类模型
本发明的发明人根据SNORD3B-1、hsa-circ-0080695、hsa-miR-122qPCR的-△Ct值，训练机器学习模型，最终确定一个随机森林的机器学习模型作为分类模型(即“3-ncRNAPanel”分类模型)。训练数据为qPCR的-△Ct值，特征为SNORD3B-1、hsa-circ-0080695、hsa-miR-122等三个生物标记物。为了确定随机森林的超参数，本发明的发明人使用网格搜索算法进行优化(使用scikit-learn Python包中的GridSearchCV类)，选择决策树的数量(sklearn.ensemble.randomforest分类器中的参数n_estimators)可以为25、50和75；选择最大树深度(参数max_depth)可以为3、4和5。
最终得到癌症分类的随机森林模型，具体参数为RandomForestClassifier(bootstrap＝True，class_weight＝None，criterion＝'gini'，max_depth＝5，max_features＝'auto'，max_leaf_nodes＝None，min_impurity_decrease＝0.0，min_impurity_split＝None，min_samples_leaf＝1，min_samples_split＝2，min_weight_fraction_leaf＝0.0，n_estimators＝25，n_jobs＝None，oob_score＝False，random_state＝None，verbose＝0，warm_start＝False)。本发明的发明人将癌症分类模型存为pkl文件格式，模型输出为0-1之间的癌症风险分数值，当模型得分大于0.165时认为样本患癌风险较大，当模型分小于0.165时认为样本患癌风险较小。
“3-ncRNA Panel”分类模型预测肝细胞癌的ROC曲线分析结果见图1。3-ncRNA包括SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122，分类模型为随机森林模型。AUC可达89.4％。
本发明的发明人将8例AFP阳性(AFP>400ng/ml)肝细胞癌患者作为阳性训练集，26名健康者和24名慢性乙型肝炎患者作为阴性训练集，建立随机森林模型。对于训练集的健康者，该模型的特异性大于95％(特异性：96.2％)时，该模型准确预测了所有AFP阳性患者(敏感度：100％)，并将肝细胞癌患者与大多数的CHB患者区分开来(特异性：91.7％)(见图2中左半部分)。
为了方便应用，本发明的发明人给出了“3-ncRNA Panel”的分类模型进行新样本癌症风险分数计算代码(cancer_prediction.py)，代码详情如下：
代码包括三个输入：model_path是模型pkl文件存储路径；data_path是输入样本数据，为Excel格式，表头为sample_id，SNORD3B-1，hsa-circ-0080695，hsa-miR-122，表名Sheet1；result_path为结果文件路径，输出结果包括sample_id，pred_proba(患癌概率)，pred_label(表示患癌，0表示健康)1。调用举例：python3cancer_prediction.py--model_path/model.pkl--data_path data.xls-result_path result.xls。
Figure BDA0002668842710000081
Figure BDA0002668842710000091
四、临床验证结果
1、三个ncRNA的差异表达验证
对于“3-ncRNA Panel”分类模型中的三个ncRNA(SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122)，本发明的发明人在75份独立队列(38个肝细胞癌患者和37个健康人)的血浆样本中使用RT-qPCR验证。通过差异表达分析，进一步验证了相对于健康人，三个ncRNA在肝细胞癌症患者的血浆里的表达具有显著差异(见图3)
2、“3-ncRNA Panel”分类模型在AFP阴性患者上的评估
本发明的发明人进一步评估鉴定“3-ncRNA Panel”分类模型(SNORD3B-1，在AFP阴性(AFP<400ng/ml)患者中的表现。血清甲胎蛋白是目前应用最广泛的肝细胞癌无创检测的生物标志物。在临床上，AFP水平超过400ng/ml被诊断为阳性即患癌。然而，只有一小部分患者被观察到具有如此高的值，这表明AFP对肝细胞癌的检测灵敏度很低。
采用“3-ncRNA Panel”分类模型计算癌症风险分数阈值，并根据癌症风险分数值判断结果。“3-ncRNA Panel”分类模型在对18例AFP阴性患者进行检测时，18例患者中有14例预测为阳性(敏感度：77.8％)(见图2中右半部分)。
以上对本发明进行了详述。对于本领域技术人员来说，在不脱离本发明的宗旨和范围，以及无需进行不必要的实验情况下，可在等同参数、浓度和条件下，在较宽范围内实施本发明。虽然本发明给出了特殊的实施例，应该理解为，可以对本发明作进一步的改进。总之，按本发明的原理，本申请欲包括任何变更、用途或对本发明的改进，包括脱离了本申请中已公开范围，而用本领域已知的常规技术进行的改变。按以下附带的权利要求的范围，可以进行一些基本特征的应用。
<110>清华大学
<120>一种用于肝细胞癌早期筛查的系统
<160>3
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 582
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<400> 1
agacuauacu uucagggauc auuucuauag uguguuacua gagaaguuuc ucugaacgug 60
uagagcaccg aaaaccccga ggaagagagg uagcguuuuc uccugagcgu gaagccggcu 120
uucuggcguu gcuuggcugc aacugccguc agccauugau gaucguucuu cucuccguau 180
uggggaguga gagggagaga acgcggucug agugguuuuu ccuucuugau ggcucaauga 240
cagagacuag cucguaaacu ccgggccguu uccgggcugu ucgcuccugc uuggcaaugu 300
cgcgagaaag guuuucgccu ccuguuucag cggugacggc uuuuggguuu uccucggggu 360
ggcuuuuuaa uuuuagucuu ggcgcgaggc gggggaugcu guguggcacc uccuauuguc 420
ucuuuuugcg uuuucuccca uucucgcucc cucuuuuguc gccguuuccc gcccgccacu 480
cccaccccca gacggggucu ccgggucucu uguucugucu gccggccccg gcuggagugc 540
aguggcgcga ucucggcucc uagcaacauc ugccucccgg gc 582
<210> 2
<211> 762
<212> RNA
<213> ArUificial sequence
<400> 2
gggccagugu cauucaaaga uguggcugug gauuucaccc aggaggagug gcggcaacug 60
gacccugaug agaagauagc auacggggau gugauguugg agaacuacag ccaucuaguu 120
ucuguggggu augauuauca ccaagccaaa caucaucaug gaguggaggu gaaggaagug 180
gagcagggag aggagccgug gauaauggaa ggugaauuuc caugucaaca uaguccagua 240
cagaaccugc uaaggccauc aaaccuauug aucggaaguc aguccaucag auuugcucug 300
ggccaguggu acugagucua agcacugcag ugaaggaguu aguagaaaac agucuggaug 360
cuggugccac uaauauugau cuaaagcuua aggacuaugg aguggaucuc auugaaguuu 420
cagacaaugg auguggggua gaagaagaaa acuuugaagg cuuaaucucu uucagcucug 480
aaacaucaca cauguaagau ucaagaguuu gccgaccuaa cugaaguuga aacuuucggu 540
uuucaggggg aagcucugag cucacugugu gcacugagcg augucaccau uucuaccugc 600
cacgcgucgg ugaagguugg gacucgacug guguuugauc acgaugggaa aaucauccag 660
gaaacccccu acccccaccc cagagggacc acagucagcg ugaagcaguu auuuucuacg 720
cuaccugugc gccauaagga auuucaaagg aauauuaaga ag 762
<210> 3
<211> 22
<212> RNA
<213> Artificial sequence
<400> 3
uggaguguga caaugguguu ug 22

Claims (10)

1.一种系统，包括检测SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122三个ncRNA表达量的系统；所述系统用于肝细胞癌早期筛查。
2.如权利要求1所述的系统，其特征在于：所述检测SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122三个ncRNA表达量的系统包括通过荧光定量PCR方法检测所述三个ncRNA相对表达量所需的试剂和/或仪器。
3.如权利要求2所述的系统，其特征在于：所述通过荧光定量PCR方法检测所述三个ncRNA相对表达量所需的试剂和/或仪器包括检测SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122三个ncRNA相对表达量的引物。
4.如权利要求3所述的系统，其特征在于：所述通过荧光定量PCR方法检测所述三个ncRNA相对表达量所需的试剂和/或仪器还包括检测内参的引物和/或检测外参的引物。
5.如权利要求1至4任一所述的系统，其特征在于：所述系统还包含数据处理装置；所述数据处理装置内设模块或软件；所述模块或软件的功能如下：采用决策树算法处理待测者血浆中所述三个ncRNA的相对表达量的数据，获得癌症风险分数值，之后根据所述癌症风险分数值预测待测者是否患有或是否疑似患有肝细胞癌。
6.权利要求1至5任一所述的系统的应用，为(b1)或(b2)：
(b1)制备用于肝细胞癌早期筛查的产品；
(b2)肝细胞癌早期筛查。
7.如权利要求1至5任一所述的系统或权利要求6所述的应用，其特征在于：所述肝细胞癌为早期肝细胞癌；所述早期肝细胞癌为巴塞罗那0期肝细胞癌、巴塞罗那A期肝细胞癌、巴塞罗那B期或巴塞罗那C期肝细胞癌。
8.SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122三个ncRNA作为标志物的应用，为(b1)或(b2)：
(b1)制备用于肝细胞癌早期筛查的产品；
(b2)肝细胞癌早期筛查。
9.检测SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122三个ncRNA表达量的物质的应用，为(b1)或(b2)：
(b1)制备用于肝细胞癌早期筛查的产品；
(b2)肝细胞癌早期筛查。
10.检测SNORD3B-1、hsa-circ-0080695和hsa-miR-122三个ncRNA表达量的物质和权利要求5中所述数据处理装置的应用，为(b1)或(b2)：
(b1)制备用于肝细胞癌早期筛查的产品；
(b2)肝细胞癌早期筛查。
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