CN112063627A - 一种调控银杏类黄酮合成的关键基因GbMYB11及其表达的蛋白、载体和应用 - Google Patents

一种调控银杏类黄酮合成的关键基因GbMYB11及其表达的蛋白、载体和应用 Download PDF

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操萌
贾志超
王莉
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Abstract

本发明公开了一种调控银杏类黄酮合成的关键基因GbMYB11及其表达的蛋白、载体和应用，所述关键基因GbMYB11其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，其表达的蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。本发明以银杏叶片为材料，克隆了GbMYB11基因，通过酶切连接构建含基因GbMYB11的过量表达载体35S::GbMYB11并转入银杏愈伤组织以及拟南芥中，GbMYB11转基因银杏愈伤组织和转基因拟南芥中类黄酮的含量均明显升高。这表明GbMYB11能够促进类黄酮的合成，因此调控GbMYB11的表达在提高银杏叶片药用品质等方面具有重要的应用价值。

Description

一种调控银杏类黄酮合成的关键基因GbMYB11及其表达的蛋 白、载体和应用
技术领域
本发明属于植物基因工程技术领域，具体涉及一种调控银杏类黄酮合成的关键基因GbMYB11及其表达的蛋白、载体和应用。
背景技术
银杏(Ginkgo biloba L.)，银杏科银杏属的孑遗植物，是中国特有的重要经济林树种。银杏提取物(Ginkgo biloba Extract,GbE)是多种药物的原材料，对预防和治疗早期阿尔兹海默症、心血管疾病等有一定的效果。类黄酮化合物是GbE的主要活性成分，目前已经从银杏中分离出40多种的类黄酮化合物，主要包含黄酮、黄烷酮、黄酮醇、二氢黄酮醇等。类黄酮(flavonoids)作为一类低分子量的多酚化合物，是银杏中重要的次生代谢产物，具有多种生物学功能。类黄酮的生物合成过程较为复杂，其受到内外多种因素的影响，随着对类黄酮研究的不断深入，发现MYB转录因子在类黄酮转录调控方面发挥着重要作用。
黄酮醇是植物中含量相对较高的一种类黄酮化合物，通常以单糖苷、二糖苷或三糖苷的形式存在。黄酮醇通路的调控模式具有物种的特异性，可受到单独的MYB转录因子或形成MYB-bHLH二聚体及MYB-bHLH-WD40(MBW)复合物的调控影响。在拟南芥R2R3-MYB的S7亚族中发现，AtMYB12和AtMYB111均可以单独地激活编码黄酮醇合成酶的关键基因，譬如CHS、CHI、F3H、FLS，进而影响黄酮醇的含量。另外，AtMYB12和AtMYB111存在差异的空间表达模式，前者主要在根中调控黄酮醇的合成，而后者在幼苗的子叶中参与黄酮醇的合成调控。将AtMYB12基因转入烟草中过量表达，可使烟草叶片黄酮醇含量得到数倍积累，而后把转基因的烟草叶片放入培养皿里诱导愈伤组织，相比于野生型，转基因形成的愈伤组织中黄酮醇合成基因表达增强，芦丁含量显著提高。拟南芥bHLH家族中的TCP3蛋白能够与AtMYB12和AtMYB111发生相互作用形成MBW复合物，促进黄酮醇含量的提高。在可见光和紫外辐射下，拟南芥bZIP转录因子ELONGATED HYPOCOTYL5(HY5)能够调控AtMYB12基因的表达，提高黄酮醇含量，同时AtMYB12的过量表达还可以增强拟南芥种苗对紫外的耐受性。
虽然MYB等转录因子在模式植物拟南芥中已有一些研究，但由于银杏树生长周期长、无性系培养生根难、遗传转化技术体系尚未成熟等原因，采用常规生物技术及遗传学方法很难鉴定和研究参与类黄酮合成调控的关键基因及其具体生物学功能。此外，由于类黄酮化合物在自然界中含量较低，以及对它们生物合成通路的研究十分有限。而基于对类黄酮合成通路的调控，利用基因工程技术，可有效提高转基因植物中类黄酮物质的含量十分重要。
发明内容
发明目的：针对现有技术中存在的不足，本发明的目的是提供一种调控银杏类黄酮合成的关键基因GbMYB11，通过促进该基因的表达能够提高银杏类黄酮含量。
本发明还提供了所述的调控银杏类黄酮合成的关键基因GbMYB11表达的蛋白、载体及其应用。
技术方案：为了实现上述目的，本发明所述一种调控银杏类黄酮合成的关键基因GbMYB11，其核苷酸序列如SEQ NO.1所示。
本发明所述的调控银杏类黄酮合成的关键基因GbMYB11表达的蛋白，其氨基酸序列如SEQ NO.2所示。
本发明所述含有所述的调控银杏类黄酮合成的关键基因GbMYB11的表达载体。
其中，所述表达载体在GbMYB11基因的5’端组装了组成型强表达启动子CaMV35S。
其中，所述表达载体在GbMYB11基因的3’端组装了终止子OCS。
其中，所述表达载体上组装有NPTⅡ基因表达盒，作为转基因银杏和拟南芥的筛选标记，可以用卡那霉素进行转基因转基因银杏和拟南芥的筛选。
其中，所述表达载体上组装有LB(T-Border left)和RB(T-Border right)序列，促使组装于其间的基因表达框架和筛选标记基因NPTⅡ整合至银杏和拟南芥受体细胞染色体中。
本发明所述含有所述的表达载体的宿主细胞。
本发明所述的关键基因GbMYB11在调控银杏类黄酮合成中的应用。
本发明所述的关键基因GbMYB11表达的蛋白在调控银杏类黄酮合成中的应用。
本发明以银杏叶片为材料，克隆了GbMYB11基因。同时，采用通过酶切连接将该基因构建到过量表达载体pCAMBIA2300-35S-OCS，获得35S::GbMYB11载体。该基因位于启动子CaMV35S之后，在启动子CaMV35S的驱动下，GbMYB11可在银杏和拟南芥体内高效表达，从而促进类黄酮的合成。研究成果将为采用基因调控技术改良提高银杏黄酮类物质合成与积累提供理论依据，并为推广应用生物工程生产银杏次生代谢产物提供技术支撑。
有益效果：与现有技术相比，本发明具有以下优点：
本发明通过将GbMYB11基因转入银杏和拟南芥体，过量表达GbMYB11基因的转基因银杏和拟南芥体的类黄酮含量都明显增加，说明GbMYB11是促进银杏类黄酮合成的关键基因，GbMYB11能够促进类黄酮的合成，因此调控GbMYB11的表达在提高银杏叶片药用品质等方面具有重要的应用价值。通过对GbMYB11基因进行克隆和功能研究为采用基因调控技术改良提高银杏黄酮类物质合成与积累提供理论依据，并为推广应用生物工程生产银杏次生代谢产物提供技术支撑。
附图说明
图1是GbMYB11的克隆(a)和菌液检测(b)；
图2是pCAMBIA2300-35S-OCS载体结构示意图；
图3是GbMYB11载体构建阳性检测；
图4是构建好的植物表达载体35S::GbMYB11的结构示意图；
图5是GbMYB11转基因银杏愈伤组织的表达量检测；
图6是GbMYB11转基因银杏愈伤组织的类黄酮含量检测；
图7是GbMYB11转基因拟南芥的DNA检测；
图8是GbMYB11转基因银拟南芥的类黄酮含量检测。
具体实施方式
以下结合附图和实施例对本发明作进一步说明。
实施例1
克隆GbMYB11基因
(1)基于银杏基因组和银杏的转录组数据，筛选得到了一个MYB基因，通过序列比对和进化分析命名为GbMYB11。使用Primer Premier 5.0软件进行人工设计GbMYB11的ORF引物。其中，GbMYB11 ORF正向引物(ORF F引物)为SEQ ID NO.3：5’-ATGGGTCGAGCTCCGTGC-3’，GbMYB11 ORF反向引物(ORF R引物)为SEQ ID NO.4：5’-GCCGGATGGGGGACG-3’。
(2)利用高保真酶PrimeSTAR Max(Takara，日本)PCR扩增，PCR体系如下：
Figure BDA0002612205910000031
Figure BDA0002612205910000041
将上述混合液轻柔混匀，瞬时低速离心后放置于普通PCR反应仪中，设置如下程序：
Figure BDA0002612205910000042
跑胶：取出PCR仪中的基因扩增产物，利用电泳仪将适量产物点在1％的琼脂糖凝胶上进行检测，25min左右后拿出应用成像系统进行观察，获得目的片段(图1a)。
(3)纯化片段与克隆载体的连接反应
参照pEASY-Blunt Simple Cloning Kit(全式金，中国)操作说明书将胶回收产物连接到克隆载体上，具体体系如下：
Figure BDA0002612205910000043
在微型管中将体系中的溶液混合，室温反应5min。反应结束后放在冰上待用。
(4)大肠杆菌转化
参照Trans1-T1 Phage Resistant Chemically Competent Cell产品说明书(全式金，中国)，将已连接的产物与感受态细胞混合，经过冰浴、热激、复苏后，取适量涂布于LB平板上，倒置平板，37℃过夜培养。
(5)阳性克隆筛选及测序分析
从筛选培养板上挑选单菌落接种于LB液体培养基中，37℃、250rmp摇菌过夜；直接以培养过夜的菌液为模板进行重组转化子的PCR检测。
反应体系:
Figure BDA0002612205910000044
Figure BDA0002612205910000051
反应程序：
Figure BDA0002612205910000052
菌液PCR检测为阳性的克隆(图1b)送英骏生物技术公司(上海)测序鉴定，测得GbMYB11的ORF序列为1182bp，序列如SEQ ID NO.1所示，用于后续实验，其表达的蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
SEQ ID NO.1
ATGGGTCGAGCTCCGTGCTGTGCCAAGGTTGGATTGAATAGGGGCCGATGGACTGCTGAAGAAGATGACATTTTAGCTAGATATATTGAAGCCCATGGCGAAGGTTGCTGGCGAGCACTTCCCAAAAATGCAGGATTGCTGCGGTGCGGAAAGAGTTGCAGGTTGAGATGGATCAACTATCTTCGTTCGGATGTGAAGCGTGGCAACATTTGCGAAGAAGAAGAGGAGCTTATCATCAAACTCCACAATCTTCTGGGCAATCGGTGGTCATTGATTGCAGGCCGTATGCCTGGTCGAACGGACAATGAGATAAAAAACTACTGGAATACTCATCTAAGCCGGAAGCTCGTAGACAGAGGAATCAATCCCGTGACCCACAAGCCATTAGATGCTAAAGTCATGCCTAAGCCCTCCGCATGTATCAGCAATGCGGCGAAGCTGAAGAAAACAGACGAGTGTGGTATTGTTGATCAAGTGTCTGGAATAACCCGACGAGATGTGGTTTTGCAGAAGCCCGAGAAAGAAGAGAATCCAAGATCTCGAGTAAGCCAGAAAACTGTGGAAAAAAACGCAGAGGATTCCACTGTTAAAGGCAAAAGGAAGAGGACTTCGTTAAAATTGGCTTCCAGCAGTGAAGGCCGAGGTCAGAAGCTGAAAATGTTGGGCGACCTTAAATTAACTGAACAACCTTCCTCCACAGTTTCAGTGCAGTCGAGCTGTGAATCATGTTCCGACTTCGATTCCCCTCCCCTGGAGGCCATGACATCTAATCCTAGTTGTTCTGATCAGGCTCAGTTGTTTTGTGAAAAAGCTTCACAGAGTGCCCAGGTAGAGGCAAAGGAAAATGAAGATTACAAGGTACAAGATGCAGGAATTGCGGTAGCATTACAGGAAGATCCAAGCAGTTCATTTACTGTTAATTCGGATTCTCTGTGGGATAATTCGTTTTCGTCGCAGATACTTTCTTCAGACATGGACTTGTTTGGATCATTAGAAACGGAAGCTCTGTTCGAGTATTGTTTACCTAATGCGGATGCGAATTCAAATGCAGAGAGCATGGAGATGTCTGGCGATCCAGACGAACTGTGGTCTTTCTTTCAGTCTGCAAATGCAGGAGGAGGAGACTCAACTTATCCCAACTCCTTGGCATGGATTCTTCCTCCGCGTCCCCCATCCGGCTGA
SEQ ID NO.2
MGRAPCCAKVGLNRGRWTAEEDDILARYIEAHGEGCWRALPKNAGLLRCGKSCRLRWINYLRSDVKRGNICEEEEELIIKLHNLLGNRWSLIAGRMPGRTDNEIKNYWNTHLSRKLVDRGINPVTHKPLDAKVMPKPSACISNAAKLKKTDECGIVDQVSGITRRDVVLQKPEKEENPRSRVSQKTVEKNAEDSTVKGKRKRTSLKLASSSEGRGQKLKMLGDLKLTEQPSSTVSVQSSCESCSDFDSPPLEAMTSNPSCSDQAQLFCEKASQSAQVEAKENEDYKVQDAGIAVALQEDPSSSFTVNSDSLWDNSFSSQILSSDMDLFGSLETEALFEYCLPNADANSNAESMEMSGDPDELWSFFQSANAGGGDSTYPNSLAWILPPRPPSG
实施例2
GbMYB11基因植物表达载体构建
(1)本实验采用TaKaRa QuickCut限制酶(TaKaRa，日本)对pCAMBIA2300-35S-OCS载体(图2)(Genome-wide identification and analysis of thegrowth-regulatingfactor family in Chinesecabbage(Brassica rapa L.ssp.pekinensis)，Wang etal.BMC Genomics 2014，15:807)和GbMYB11的ORF序列分别进行酶切反应实验，具体反应体系如下：
Figure BDA0002612205910000061
体系中各溶液混合后进行瞬时离心，在37℃水浴锅中保温30min后结束酶切反应，琼脂糖凝胶电泳观察酶切条带，随后分别将目的基因和载体片段切胶回收，用于后续的载体连接反应。
(2)参照TaKaRa T4 DNA Ligase(TaKaRa，日本)操作说明书，将双酶切反应后回收的表达载体与目的DNA片段产物相互连接，体系如下：
Figure BDA0002612205910000071
在微型管中将体系中的溶液混合，在金属浴中16℃反应5-6h。
通过PCR检测，确认GbMYB11的过量表达载体构建成功(图3)，命名为35S::GbMYB11(图4)，如图4所示，所构建的表达载体在GbMYB11基因的5’端组装了组成型强表达启动子CaMV35S，3’端组装了终止子OCS，表达载体上装NPTⅡ基因表达盒，作为转基因银杏和拟南芥的筛选标记，同时表达载体上组装LB(T-Border left)和RB(T-Border right)序列，促使组装于其间的基因表达框架和筛选标记基因NPTⅡ整合至银杏和拟南芥受体细胞染色体中。
(3)转化农杆菌
参照GV3101/EHA105 Chemically Competent Cell产品(全式金，中国)操作说明书，将步骤(2)构建的35S::GbMYB11表达载体质粒与感受态细胞混合，依次经过静置5min、液氮5min、37℃水浴5min、冰浴5min后，加入培养基振荡培养。取适量涂布于LB平板上，28℃培养箱倒置培养。挑取平板上的单克隆，加入适量的LB液体培养基，培养48h，对菌液测序，获得含有35S::GbMYB11载体的农杆菌。
实施例3
GbMYB11基因的遗传转化
1、拟南芥遗传转化
(1)于正常生长环境种植野生型拟南芥；
(2)选取土壤中培养四周左右刚开花的拟南芥植株，用剪刀剪去已经开过的花和已有角果，用于农杆菌转化；
(3)将实施例2获得含有35S::GbMYB11载体的农杆菌接种到带有Kana和Rif抗生素的LB液体培养基中，放入摇床28℃，过夜培养18-24h，至OD600＝1.0-1.5；
(4)将符合要求的菌液放入离心管中，4℃，6000rpm，10min离心后去掉上清液；
(5)向步骤(4)的沉淀中加入50mL拟南芥转化液(5％蔗糖+0.02％Silwet L-77)，重悬沉淀；
(6)经6000rpm，10min离心后去掉上清，加入转化液后再次重悬沉淀；
(7)将步骤(2)制备的拟南芥整个花序浸泡在转化液中30sec；
(8)侵染过的拟南芥浇水后，用塑料袋覆盖保湿，放于阴暗环境下培养24h后，去除塑料袋，将拟南芥移到光照培养箱中(16h光照/8h黑暗)正常培养生长；
(9)7d后按照上述方法再浸泡一次，正常培养至种子成熟。
2、拟南芥遗传筛选
(1)将上述采收的拟南芥成熟种子干燥后，取适量放入离心管中，加入质量分数15％的次氯酸钠溶液浸泡消毒3min，期间上下反复颠倒摇晃，然后放入体积分数70％的酒精中继续浸泡3min，然后用无菌水冲洗；
(2)将种子铺洒到含有卡那霉素的1/2MS固体培养基的平板中，封口膜封口；
(3)将培养皿放在4℃环境下春化2d，然后转移到23℃人工培养箱中培养，条件为：16h光照/8h黑暗；
(4)种子在培养基中生长7-10d后，将具有抗性的幼苗植株移入营养土中，继续用光照培养箱(16h光照/8h黑暗)里培养生长，用于后期的阳性检测和类黄酮含量测定。
3、银杏愈伤组织转化
(1)将实施例2获得含有35S::GbMYB11载体的农杆菌涂在LB平板。经过培养后挑取LB平板上的农杆菌单克隆，将其接种到LB液体培养基中，28℃培养16h至OD600为0.5-0.6；
(2)菌液放入离心管中，18℃，3500rpm，15min离心后去掉上清液；
(3)向离心管加入重悬液(100mL MS液体培养基含100μM乙酰丁香酮)重悬底部菌体，并在室温放置2h；
(4)将大小一致的银杏愈伤组织小块放入农杆菌重悬液中，室温静置浸泡15min，然后用镊子轻轻夹出，用无菌滤纸吸掉表面的重悬液液体；
(5)将侵染过的愈伤组织放置在愈伤培养基(MS+4.0mg·L-1NAA+2.0mg·L-1KT+100μM乙酰丁香酮)上，25℃黑暗培养3d，取出放入液氮中速冻，保存在超低温冰箱中，应用于后续的类黄酮含量测定。
4、转基因材料的检测与类黄酮含量的测定
利用实时定量PCR技术，检测外源基因在RNA水平的表达情况，步骤3得到的转基因银杏愈伤组织中GbMYB11的表达量显著升高(图5)。利用植物类黄酮提取试剂盒(苏州柯铭生物技术有限公司，中国)对未转基因(CK)和转基因银杏愈伤组织的类黄酮含量进行测定，发现转基因愈伤组织中的类黄酮含量显著增高(图6)。对步骤2转基因拟南芥进行阳性检测，获得了3个阳性植株(图7)。通过类黄酮含量测定发现，转基因拟南芥中的类黄酮含量高于CK(未转基因)(图8)。这些结果表明，GbMYB11基因促进类黄酮的合成。
序列表
<110> 扬州大学
<120> 一种调控银杏类黄酮合成的关键基因GbMYB11及其表达的蛋白、载体和应用
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1182
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
atgggtcgag ctccgtgctg tgccaaggtt ggattgaata ggggccgatg gactgctgaa 60
gaagatgaca ttttagctag atatattgaa gcccatggcg aaggttgctg gcgagcactt 120
cccaaaaatg caggattgct gcggtgcgga aagagttgca ggttgagatg gatcaactat 180
cttcgttcgg atgtgaagcg tggcaacatt tgcgaagaag aagaggagct tatcatcaaa 240
ctccacaatc ttctgggcaa tcggtggtca ttgattgcag gccgtatgcc tggtcgaacg 300
gacaatgaga taaaaaacta ctggaatact catctaagcc ggaagctcgt agacagagga 360
atcaatcccg tgacccacaa gccattagat gctaaagtca tgcctaagcc ctccgcatgt 420
atcagcaatg cggcgaagct gaagaaaaca gacgagtgtg gtattgttga tcaagtgtct 480
ggaataaccc gacgagatgt ggttttgcag aagcccgaga aagaagagaa tccaagatct 540
cgagtaagcc agaaaactgt ggaaaaaaac gcagaggatt ccactgttaa aggcaaaagg 600
aagaggactt cgttaaaatt ggcttccagc agtgaaggcc gaggtcagaa gctgaaaatg 660
ttgggcgacc ttaaattaac tgaacaacct tcctccacag tttcagtgca gtcgagctgt 720
gaatcatgtt ccgacttcga ttcccctccc ctggaggcca tgacatctaa tcctagttgt 780
tctgatcagg ctcagttgtt ttgtgaaaaa gcttcacaga gtgcccaggt agaggcaaag 840
gaaaatgaag attacaaggt acaagatgca ggaattgcgg tagcattaca ggaagatcca 900
agcagttcat ttactgttaa ttcggattct ctgtgggata attcgttttc gtcgcagata 960
ctttcttcag acatggactt gtttggatca ttagaaacgg aagctctgtt cgagtattgt 1020
ttacctaatg cggatgcgaa ttcaaatgca gagagcatgg agatgtctgg cgatccagac 1080
gaactgtggt ctttctttca gtctgcaaat gcaggaggag gagactcaac ttatcccaac 1140
tccttggcat ggattcttcc tccgcgtccc ccatccggct ga 1182
<210> 2
<211> 393
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Met Gly Arg Ala Pro Cys Cys Ala Lys Val Gly Leu Asn Arg Gly Arg
1 5 10 15
Trp Thr Ala Glu Glu Asp Asp Ile Leu Ala Arg Tyr Ile Glu Ala His
20 25 30
Gly Glu Gly Cys Trp Arg Ala Leu Pro Lys Asn Ala Gly Leu Leu Arg
35 40 45
Cys Gly Lys Ser Cys Arg Leu Arg Trp Ile Asn Tyr Leu Arg Ser Asp
50 55 60
Val Lys Arg Gly Asn Ile Cys Glu Glu Glu Glu Glu Leu Ile Ile Lys
65 70 75 80
Leu His Asn Leu Leu Gly Asn Arg Trp Ser Leu Ile Ala Gly Arg Met
85 90 95
Pro Gly Arg Thr Asp Asn Glu Ile Lys Asn Tyr Trp Asn Thr His Leu
100 105 110
Ser Arg Lys Leu Val Asp Arg Gly Ile Asn Pro Val Thr His Lys Pro
115 120 125
Leu Asp Ala Lys Val Met Pro Lys Pro Ser Ala Cys Ile Ser Asn Ala
130 135 140
Ala Lys Leu Lys Lys Thr Asp Glu Cys Gly Ile Val Asp Gln Val Ser
145 150 155 160
Gly Ile Thr Arg Arg Asp Val Val Leu Gln Lys Pro Glu Lys Glu Glu
165 170 175
Asn Pro Arg Ser Arg Val Ser Gln Lys Thr Val Glu Lys Asn Ala Glu
180 185 190
Asp Ser Thr Val Lys Gly Lys Arg Lys Arg Thr Ser Leu Lys Leu Ala
195 200 205
Ser Ser Ser Glu Gly Arg Gly Gln Lys Leu Lys Met Leu Gly Asp Leu
210 215 220
Lys Leu Thr Glu Gln Pro Ser Ser Thr Val Ser Val Gln Ser Ser Cys
225 230 235 240
Glu Ser Cys Ser Asp Phe Asp Ser Pro Pro Leu Glu Ala Met Thr Ser
245 250 255
Asn Pro Ser Cys Ser Asp Gln Ala Gln Leu Phe Cys Glu Lys Ala Ser
260 265 270
Gln Ser Ala Gln Val Glu Ala Lys Glu Asn Glu Asp Tyr Lys Val Gln
275 280 285
Asp Ala Gly Ile Ala Val Ala Leu Gln Glu Asp Pro Ser Ser Ser Phe
290 295 300
Thr Val Asn Ser Asp Ser Leu Trp Asp Asn Ser Phe Ser Ser Gln Ile
305 310 315 320
Leu Ser Ser Asp Met Asp Leu Phe Gly Ser Leu Glu Thr Glu Ala Leu
325 330 335
Phe Glu Tyr Cys Leu Pro Asn Ala Asp Ala Asn Ser Asn Ala Glu Ser
340 345 350
Met Glu Met Ser Gly Asp Pro Asp Glu Leu Trp Ser Phe Phe Gln Ser
355 360 365
Ala Asn Ala Gly Gly Gly Asp Ser Thr Tyr Pro Asn Ser Leu Ala Trp
370 375 380
Ile Leu Pro Pro Arg Pro Pro Ser Gly
385 390
<210> 3
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
atgggtcgag ctccgtgc 18
<210> 4
<211> 15
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
gccggatggg ggacg 15

Claims (10)

1.一种调控银杏类黄酮合成的关键基因GbMYB11，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。
2.一种权利要求1所述的调控银杏类黄酮合成的关键基因GbMYB11表达的蛋白，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.一种含有权利要求1所述的调控银杏类黄酮合成的关键基因GbMYB11的表达载体。
4.根据权利要求3所述的载体，其特征在于，所述表达载体在GbMYB11基因的5’端组装了组成型强表达启动子CaMV35S。
5.根据权利要求3所述的载体，其特征在于，所述表达载体在GbMYB11基因的3’端组装了终止子OCS。
6.根据权利要求3所述的载体，其特征在于，所述表达载体优选组装有NPTⅡ基因表达盒，作为转基因银杏和拟南芥的筛选标记。
7.根据权利要求3所述的载体，其特征在于，所述表达载体组装有LB(T-Border left)和RB(T-Border right)序列，促使组装于其间的基因表达框架和筛选标记基因NPTⅡ整合至银杏和拟南芥受体细胞染色体中。
8.一种含有权利要求3所述的表达载体的宿主细胞。
9.一种权利要求1所述的关键基因GbMYB11在调控银杏类黄酮合成中的应用。
10.一种权利要求1所述的关键基因GbMYB11表达的蛋白在调控银杏类黄酮合成中的应用。
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