CN112043726A - 一种治疗勃起功能障碍的子宫内膜干细胞制剂及制备方法 - Google Patents

一种治疗勃起功能障碍的子宫内膜干细胞制剂及制备方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种治疗勃起功能障碍的子宫内膜干细胞制剂及制备方法，干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞；干细胞移植以直接分化取代受损细胞或者旁分泌大量细胞因子的形式使治疗过程简单化，这与药物只针对特定的分子或者信号通路不同，因此本申请通过体外培养具有血管再生、修复活性的组织修复细胞——子宫内膜干细胞，采用微注射种植技术，让活性细胞靶向种植在男性海绵体内，一方面可以促进新生小血管的生成，另一方面能够修复受损而堵塞的小动脉，改善血管微循环，增加背动脉向海绵体供血速度和供血量，为治疗勃起功能障碍提供了一条安全、有效的治疗手段。

Description

一种治疗勃起功能障碍的子宫内膜干细胞制剂及制备方法
技术领域
本发明涉及生物医药技术领域，具体是一种治疗勃起功能障碍的子宫内膜干细胞制剂及制备方法。
背景技术
勃起功能障碍(Erectiledisorder，ED)，俗称为阳萎(Impotence)，是一种典型的男性性功能障碍，通常是指成年男性在有性刺激和性欲情况下，阴茎(持续至少6个月)不能勃起或勃起不坚，勃起时间短促，以致不能插入阴道完成性交过程。
勃起障碍的病因较复杂，涉及神经、内分泌、血管系统、激素水平、心理状态等诸多因素，其中约60％的主要病因系精神、心理因素，约有30％存在器质性病变，对于非器质性障碍或疾病引起的勃起功能障碍采用心理行为或者药物可能有治疗效果，但对于由器质性疾病引起的勃起功能障碍，则需要药物或者手术治疗，如现在常见的糖尿病引起的勃起功能障碍。
目前临床上一些V型磷酸二酯酶(phospho-diesterasetypev)抑制剂药物、激素类药物等，广泛用于阳痿的治疗，然而这些药物可能对于非器质性障碍疾病治疗效果明显，但对于器质性疾病引起的勃起功能障碍治疗效果并不明显，反而会因其严重副作用而产生心理负担。因此，对于勃起功能障碍的治疗，需要新的安全、有效治疗手段。
针对该问题，我们提供了一种治疗勃起功能障碍的子宫内膜干细胞制剂及制备方法，这是我们亟待解决的技术问题之一。
发明内容
本发明的目的在于提供一种治疗勃起功能障碍的子宫内膜干细胞制剂及制备方法，经该法使用的子宫内膜干细胞制备干细胞制剂，能产生更高水平的生长因子，具有更好的治疗效果，以解决现有技术中的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种治疗勃起功能障碍的子宫内膜干细胞制剂，所述干细胞制剂包括生理盐水重悬的干细胞和激活剂。
较优化的方案，所述干细胞为子宫内膜干细胞。
本申请中子宫内膜干细胞的来源不局限于经血，也可以是子宫宫壁等。
较优化的方案，所述激活剂由氯化钙、人血白蛋白、生理盐水配制得到，具体可选择2.5mg/mL氯化钙+10％人血白蛋白+90％生理盐水进行激活剂配制。
较优化的方案，一种治疗勃起功能障碍的子宫内膜干细胞制剂的制备方法，包括以下步骤：
1)培养子宫内膜干细胞；
2)子宫内膜干细胞的冻存；
3)配制激活剂，激活生理盐水重悬的子宫内膜干细胞，得到干细胞制剂。
较优化的方案，包括以下步骤：
1)培养子宫内膜干细胞；
2)子宫内膜干细胞的冻存；
3)取子宫内膜干细胞，置于37℃水浴中恒温处理，在1000rpm下离心5min，再将复苏后的细胞用生理盐水重悬、洗涤，1000rpm离心5min，去上清，重复洗涤，得到生理盐水重悬的干细胞；
4)激活剂的制备：取25mg氯化钙溶解到9mL的生理盐水中，用0.22μm的膜过滤除菌，再加入1ml无菌的20％人血白蛋白混匀，得到激活剂；
5)取制备好的激活剂，重悬细胞，37℃或室温静置激活30-180min，得到干细胞制剂。
较优化的方案，步骤1)中，所述子宫内膜干细胞的培养方法包括以下步骤：
a)在月经期第二天植入月经杯，持续取经血12-14h，将取得的经血转入抗凝剂中，加入青霉素/链霉素和两性霉素B，再加入生理盐水，制成混悬液；
b)取淋巴细胞分离液，将步骤a)得到的混悬液铺到淋巴细胞分离液上层，淋巴细胞分离液与混悬液比例为1∶3,800g离心20min，得到位于淋巴细胞分离液、混悬液之间的白膜层；
c)取白膜层，加入生理盐水，2000rpm下离心5min，弃去上清，再加入生理盐水，2000rpm下离心5min，弃去上清后，细胞沉淀悬浮于培养基中，37℃孵箱中培养；
d)每2天换1次培养液，培养至16-17d，直到细胞长至80-90％，传代培养至第四代，得到子宫内膜干细胞。
较优化的方案，步骤3)中，所述培养基为含有胎牛血清、碱性成纤维生长因子的DME/F-12培养基。
较优化的方案，步骤1)中，培养得到子宫内膜干细胞后进行鉴定及检测，具体步骤如下：
(I)取培养得到的子宫内膜干细胞，离心并悬浮于1×PBS，细胞计数仪上计数，细胞与CD45、CD34、CD90、CD105、7-AAD孵育，所有抗体均直接标记；培育后，收集细胞，离心并重悬于1×PBS，采用流式细胞仪检测；
(II)取培养得到的子宫内膜干细胞，采用安度斯鲎试剂进行内毒素检测；
(III)取培养得到的子宫内膜干细胞，进行真菌、细菌检测；
(IV)取培养得到的子宫内膜干细胞，采用培养法检测支原体检测；
(V)步骤(I)-步骤(IV)均检测通过后，得到合格的子宫内膜干细胞，并进行冻存。
较优化的方案，步骤2)中，所述子宫内膜干细胞的冻存具体包括以下步骤：
1)取合格的子宫内膜干细胞，去除培养液，用PBS清洗细胞两次；
2)加入温和酶消化细胞，摇晃培养瓶，放回培养箱放置1-2min，用倒置显微镜观察细胞以确保所有细胞都分离且漂浮，轻拍培养瓶的一侧来释放残留的贴壁细胞；
3)加入PBS稀释温和酶终止消化；取出100-200μL用于计数；将剩余的细胞1000rpm离心5min，在冻存液中，以1×106个细胞/mL的密度重悬细胞，吸取细胞悬液转移至冻存管中，放置-80℃过夜，转移到液氮罐中保存。
较优化的方案，一种治疗勃起功能障碍的子宫内膜干细胞制剂的使用方法，具体使用方法为：先对患者阴茎部位消毒，用扎带扎住阴茎根部，利用进针器将子宫内膜干细胞制剂注射到两条海绵体内，共注射8点，每次注射完后按压止血；注射完后扎带继续扎住阴茎根部15-20min，促进激活的子宫内膜干细胞的归巢。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞；干细胞移植以直接分化取代受损细胞或者旁分泌大量细胞因子的形式使治疗过程简单化，这与药物只针对特定的分子或者信号通路不同，因此本申请通过体外培养具有血管再生、修复活性的组织修复细胞——子宫内膜干细胞，采用微注射种植技术，让活性细胞靶向种植在男性海绵体内，一方面可以促进新生小血管的生成，另一方面能够修复受损而堵塞的小动脉，改善血管微循环，增加动脉向海绵体供血速度和供血量。
本公司在研发过程中还尝试利用血管内皮干细胞进行干细胞制剂的制备，并通过“100pg/VEGF+10％人血白蛋白+90％生理盐水”制备激活剂对其进行激活，但得到的干细胞制剂的治疗效果无法满足我们的实际需求，因此在此基础上，本公司又经过长时间的研发和改进，对干细胞选择和激活剂制备进行优化改进，最终选择利用激活后的子宫内膜干细胞进行干细胞制剂的制备，子宫内膜干细胞具有优异的血管再生、修复效果，在激活剂钙离子(Ca2+)的激活下，制备得到的干细胞制剂的细胞因子的表达和分泌效果明显优异其他干细胞，且与未激活的子宫内膜干细胞相比，其细胞因子的表达和分泌也大大提高。
本申请中通过激活剂对生理盐水重悬的干细胞进行激活，通过钙离子(Ca2+)信号来调整其细胞功能包括增殖活性、细胞迁移、细胞因子的表达和分泌等多种生物学效应，当胞内(Ca2+)浓度的持续升高时会使干细胞产生连续的增殖反应，促进干细胞增殖，其增殖机理与钙离子敏感蛋白的磷酸化和转录因子有关；通过Ca2+离子激活子宫内膜干细胞的增殖和迁移活性，促进子宫内膜干细胞的分化，使细胞因子的表达和分泌增加，具体包括MMP3(基质金属蛋白酶3)、MMP4(基质金属蛋白酶4)、PDGF-BB(血小板衍生生长因子BB)和ANG-2(血管生成素)的分泌大大增加。
MMP3(基质金属蛋白酶3)、MMP4(基质金属蛋白酶4)均为真皮细胞创伤愈合过程中的重要基质蛋白酶，亦促进血管修复；PDGF-BB(血小板衍生生长因子BB)为造血生长因子，参与造血调节作用，能促进炎症生成，提高角皮细胞增殖能力，促进局部血管生成；ANG-2(血管生成素)是一种有效的血管生成因子，是RNase超家族中唯一具有促血管生成能力的成员，具有诱导新血管生成的能力进一步；上述细胞因子的表达和分泌增加，能够有效提高干细胞制剂治疗勃起功能障碍的效果。
本发明公开了一种治疗勃起功能障碍的子宫内膜干细胞制剂及制备方法，制备得到的干细胞制剂可有效治疗勃起功能障碍，利用细胞因子的高表达和高分泌来修复因受损而堵塞的小动脉，改善血管微循环，增加背动脉向海绵体供血速度和供血量，实用效果优异，为治疗勃起功能障碍提供了一条安全、有效的治疗手段。
附图说明
为了使本发明的内容更容易被清楚地理解，下面根据具体实例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明。
图1为本发明实例8中患者治疗前的阴茎血管造影图；
图2为本发明实例8中患者治疗后的阴茎血管造影图。
具体实施方式
下面将结合本发明实例中的附图，对本发明实例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实例仅仅是本发明一部分实例，而不是全部的实例。基于本发明中的实例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实例，都属于本发明保护的范围。
实例1：培养子宫内膜干细胞：
在月经期第二天植入月经杯，持续取经血12h，将取得的经血转入抗凝剂中，加入青霉素/链霉素和两性霉素B，再加入生理盐水，制成混悬液；
取淋巴细胞分离液，将混悬液铺到淋巴细胞分离液上层，淋巴细胞分离液与混悬液比例为1∶3,800g离心20min，得到位于淋巴细胞分离液、混悬液之间的白膜层；
取白膜层，加入生理盐水，2000rpm下离心5min，弃去上清，再加入生理盐水，2000rpm下离心5min，弃去上清后，细胞沉淀悬浮于培养基中，37℃孵箱中培养；每2天换1次培养液，培养至16d，直到细胞长至80％，传代培养至第四代，得到子宫内膜干细胞。
实例2：
取实例1制备的子宫内膜干细胞，并进行以下鉴定检测实验：
①取培养得到的子宫内膜干细胞，离心并悬浮于1×PBS，细胞计数仪上计数，细胞与CD45、CD34、CD90、CD105、7-AAD孵育，所有抗体均直接标记；培育后，收集细胞，离心并重悬于1×PBS，采用流式细胞仪检测；
流式细胞仪通道设置条件分别为：CD90FITC：455V；CD45FITC：455V；CD105PE：730V；CD34PE：730V；7AAD：876V。发射波长分别为：FITC为488nm；PE为570nm；7AAD为647nm。按剂量组分别检测。
②取培养得到的子宫内膜干细胞，内毒素检测使用湛江安度斯鲎试剂检测；
③取培养得到的子宫内膜干细胞，进行真菌、细菌检测；
采用培养法检测，取细胞悬液分别接种到改良马丁培养基、琼脂糖培养基、硫乙醇酸盐培养基，各两块；并做阳性及阴性对照；分别于28℃及37℃培养，24h，48h后观察结果。
④取培养得到的子宫内膜干细胞，采用培养法检测支原体检测。试剂采用珠海银科支原体检测试剂盒，培养48h观察检测结果。
结论：1、实例1制备的子宫内膜干细胞的所有样品，其CD105和CD90的表达均大于90％，而CD45、CD34均小于5％，7-AAD检测结果显示细胞活力大于90％。
2、实例1制备的子宫内膜干细胞的所有样品，内毒素含量＜5EU/mL。
3、实例1制备的子宫内膜干细胞的所有样品，观察结果显示，细胞悬液均呈现阴性。
4、实例1制备的子宫内膜干细胞的所有样品，观察结果显示均呈现阴性。
实例3：子宫内膜干细胞的冻存：
取实例1制备的合格的子宫内膜干细胞，去除培养液，用PBS清洗细胞两次；加入温和酶消化细胞，摇晃培养瓶，放回培养箱放置1-2min，用倒置显微镜观察细胞以确保所有细胞都分离且漂浮，轻拍培养瓶的一侧来释放残留的贴壁细胞；
再加入PBS稀释温和酶终止消化；取出100μL用于计数；将剩余的细胞1000rpm离心5min，在冻存液中，以1×106个细胞/mL的密度重悬细胞，吸取细胞悬液转移至冻存管中，放置-80℃过夜，转移到液氮罐中保存。
实例4：制备干细胞制剂：
取冻存的合格子宫内膜干细胞，置于37℃水浴中恒温处理，在1000rpm下离心5min，再将复苏后的细胞用生理盐水重悬、洗涤，1000rpm离心5min，去上清，重复洗涤，得到生理盐水重悬的干细胞；
激活剂的制备：取25mg氯化钙溶解到9mL的生理盐水中，用0.22μm的膜过滤除菌，再加入1ml无菌的20％人血白蛋白混匀，得到激活剂；取制备好的激活剂，重悬细胞，室温静置激活3h，得到干细胞制剂。
实例5：制备干细胞制剂：
取冻存的合格子宫内膜干细胞，置于37℃水浴中恒温处理，在1000rpm下离心5min，再将复苏后的细胞用生理盐水重悬、洗涤，1000rpm离心5min，去上清，重复洗涤，得到生理盐水重悬的干细胞；
激活剂的制备：取25mg氯化钙溶解到9mL的生理盐水中，用0.22μm的膜过滤除菌，再加入1ml无菌的20％人血白蛋白混匀，得到激活剂；取制备好的激活剂，重悬细胞，室温静置激活1h，得到干细胞制剂。
实例6：制备干细胞制剂：
取冻存的合格子宫内膜干细胞，置于37℃水浴中恒温处理，在1000rpm下离心5min，再将复苏后的细胞用生理盐水重悬、洗涤，1000rpm离心5min，去上清，重复洗涤，得到生理盐水重悬的干细胞；
激活剂的制备：取25mg氯化钙溶解到9mL的生理盐水中，用0.22μm的膜过滤除菌，再加入1ml无菌的20％人血白蛋白混匀，得到激活剂；取制备好的激活剂，重悬细胞，37℃静置激活30min，得到干细胞制剂。
对比例1：
取冻存的合格子宫内膜干细胞，置于37℃水浴中恒温处理，在1000rpm下离心5min，再将复苏后的细胞用生理盐水重悬、洗涤，1000rpm离心5min，去上清，重复洗涤一次，得到干细胞制剂。
对比例2：
再取冻存的合格脐带血干细胞，置于37℃水浴中恒温处理，在1000rpm下离心5min，再将复苏后的细胞用生理盐水重悬、洗涤，1000rpm离心5min，去上清，重复洗涤一次，得到干细胞制剂。
对比例3：
再取冻存的合格骨髓干细胞，置于37℃水浴中恒温处理，在1000rpm下离心5min，再将复苏后的细胞用生理盐水重悬、洗涤，1000rpm离心5min，去上清，重复洗涤一次，得到干细胞制剂。
对比例4：
再取冻存的合格血管内皮干细胞，置于37℃水浴中恒温处理，在1000rpm下离心5min，再将复苏后的细胞用生理盐水重悬、洗涤，1000rpm离心5min，去上清，重复洗涤一次，得到干细胞制剂。
对比例5：
再取冻存的合格血管内皮干细胞，置于37℃水浴中恒温处理，在1000rpm下离心5min，再将复苏后的细胞用生理盐水重悬、洗涤，1000rpm离心5min，去上清，重复洗涤一次，再取制备好的激活剂，重悬细胞，37℃静置激活30min，得到干细胞制剂。
激活剂的配制为：100pg/VEGF+10％人血白蛋白+90％生理盐水。
实施例7：
取实例4-6、对比例1-5制备的干细胞制剂，其中实例4-6采用激活后的子宫内膜干细胞制备，对比例1采用未激活的子宫内膜干细胞(ERC)制备，对比例2采用脐带血干细胞(BioE)制备，对比例3中采用骨髓干细胞(MYZb)制备，对比例4采用血管内皮干细胞(ESC)制备；对比例5为激活剂激活血管内皮干细胞(ESC)制备的干细胞制剂。
检测方法：取干细胞制剂，分别置于24孔板中培养，重复3孔，1×106/孔，于培养箱中培养72h，ELISA检测测定细胞分泌的细胞因子MMP3(基质金属蛋白酶3)、MMP4(基质金属蛋白酶4)、PDGF-BB(血小板衍生生长因子BB)、ANG-2(血管生成素)的含量(pg/mL)。具体检测数据如表1所示：
Figure BDA0002625617260000131
结论：本发明经过激活剂激活的子宫内膜干细胞制备的干细胞制剂，其细胞因子(包括MMP3、MMP4、PDGF-BB、ANG-2)的表达和分泌得到明显提升。
实例8：干细胞制剂的治疗实验：
现有患者男，姓孟，患有勃起功能障碍，治疗时先对患者阴茎部位消毒，用扎带扎住阴茎根部，利用进针器将子宫内膜干细胞制剂注射到两条海绵体内，共注射8点，每次注射完后按压止血；注射完后扎带继续扎住阴茎根部18min，共治疗2个疗程，每个疗程治疗3次，每次时间间隔为25天，并于治疗前后进行对阴茎血管进行造影，测定两侧阴茎海绵体动脉根部直径及其勃起时间后的血流速度(PSV)，PSV代表男性生殖器的充血能力。
具体血管造影结果可如下图(附图1、附图2)所示，检测的血流速度数据如下表(患者治疗前后勃起时茎海绵体动脉根部直径对比及勃起后不同时间的PSV值对比)所示：
Figure BDA0002625617260000141
结论：由治疗前后血管造影图可知，其治疗后血管数量明显增多；由上表可知，治疗后左右两侧的阴茎海绵体动脉根部直径增大，治疗后勃起时每秒钟阴茎血管的血流量增大。
即本申请公开的干细胞制剂可改善血管微循环，增加背动脉向海绵体供血速度和供血量，为治疗勃起功能障碍提供了一条安全、有效的治疗手段。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。

Claims (10)

1.一种治疗勃起功能障碍的子宫内膜干细胞制剂，其特征在于：所述干细胞制剂包括生理盐水重悬的干细胞和激活剂。
2.根据权利要求1所述的一种治疗勃起功能障碍的子宫内膜干细胞制剂，其特征在于：所述干细胞为子宫内膜干细胞。
3.根据权利要求1所述的一种治疗勃起功能障碍的子宫内膜干细胞制剂，其特征在于：所述激活剂由氯化钙、人血白蛋白、生理盐水配制得到。
4.一种治疗勃起功能障碍的子宫内膜干细胞制剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)培养子宫内膜干细胞；
2)子宫内膜干细胞的冻存；
3)配制激活剂，激活生理盐水重悬的子宫内膜干细胞，得到干细胞制剂。
5.根据权利要求4所述的一种治疗勃起功能障碍的子宫内膜干细胞制剂的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
1)培养子宫内膜干细胞；
2)子宫内膜干细胞的冻存；
3)取子宫内膜干细胞，置于37℃水浴中恒温处理，在1000rpm下离心5min，再将复苏后的细胞用生理盐水重悬、洗涤，1000rpm离心5min，去上清，重复洗涤，得到生理盐水重悬的干细胞；
4)激活剂的制备：取25mg氯化钙溶解到9mL的生理盐水中，用0.22μm的膜过滤除菌，再加入1ml无菌的20％人血白蛋白混匀，得到激活剂；
5)取制备好的激活剂，重悬细胞，37℃静置激活30-180min，得到干细胞制剂。
6.根据权利要求5所述的一种治疗勃起功能障碍的子宫内膜干细胞制剂的制备方法，其特征在于：步骤1)中，所述子宫内膜干细胞的培养方法包括以下步骤：
a)在月经期第二天植入月经杯，持续取经血12-14h，将取得的经血转入抗凝剂中，加入青霉素/链霉素和两性霉素B，再加入生理盐水，制成混悬液；
b)取淋巴细胞分离液，将步骤a)得到的混悬液铺到淋巴细胞分离液上层，淋巴细胞分离液与混悬液比例为1∶3，800g离心20min，得到位于淋巴细胞分离液、混悬液之间的白膜层；
c)取白膜层，加入生理盐水，2000rpm下离心5min，弃去上清，再加入生理盐水，2000rpm下离心5min，弃去上清后，细胞沉淀悬浮于培养基中，37℃孵箱中培养；
d)每2天换1次培养液，培养至16-17d，直到细胞长至80-90％，传代培养至第四代，得到子宫内膜干细胞。
7.根据权利要求6所述的一种治疗勃起功能障碍的子宫内膜干细胞制剂的制备方法，其特征在于：步骤3)中，所述培养基为含有胎牛血清、碱性成纤维生长因子的DME/F-12培养基。
8.根据权利要求5所述的一种治疗勃起功能障碍的子宫内膜干细胞制剂的制备方法，其特征在于：步骤1)中，培养得到子宫内膜干细胞后进行鉴定及检测，具体步骤如下：
(I)取培养得到的子宫内膜干细胞，离心并悬浮于1×PBS，细胞计数仪上计数，细胞与CD45、CD34、CD90、CD105、7-AAD孵育，所有抗体均直接标记；培育后，收集细胞，离心并重悬于1×PBS，采用流式细胞仪检测；
(II)取培养得到的子宫内膜干细胞，采用斯鲎试剂进行内毒素检测；
(III)取培养得到的子宫内膜干细胞，进行真菌、细菌检测；
(IV)取培养得到的子宫内膜干细胞，采用培养法检测支原体检测；
(V)步骤(I)-步骤(IV)均检测通过后，得到合格的子宫内膜干细胞，并进行冻存。
9.根据权利要求5所述的一种治疗勃起功能障碍的子宫内膜干细胞制剂的制备方法，其特征在于：步骤2)中，所述子宫内膜干细胞的冻存具体包括以下步骤：
1)取合格的子宫内膜干细胞，去除培养液，用PBS清洗细胞两次；
2)加入温和酶消化细胞，摇晃培养瓶，放回培养箱放置1-2min，用倒置显微镜观察细胞以确保所有细胞都分离且漂浮，轻拍培养瓶的一侧来释放残留的贴壁细胞；
3)加入PBS稀释温和酶终止消化；取出100-200μL用于计数；将剩余的细胞1000rpm离心5min，在冻存液中，以1×106个细胞/mL的密度重悬细胞，吸取细胞悬液转移至冻存管中，放置-80℃过夜，转移到液氮罐中保存。
10.根据权利要求1-9中任一项所述的一种治疗勃起功能障碍的子宫内膜干细胞制剂的使用方法，其特征在于：具体使用方法为：先对患者阴茎部位消毒，用扎带扎住阴茎根部，利用进针器将子宫内膜干细胞制剂注射到两条海绵体内，共注射8点，每次注射完后按压止血；注射完后扎带继续扎住阴茎根部15-20min，完成操作。
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