CN112011476A - 一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，其包括以下步骤，（1）获得脱氮硫杆菌的水溶液；（2）将聚乙烯醇和海藻酸钠加入水中，加热中使其变成粘稠液体，冷却后向其中加入火山岩粉，得到火山岩粉改性聚乙烯醇复合海藻酸钠包埋剂；（3）将牡蛎壳研磨成牡蛎粉；（4）步骤（3）得到的牡蛎粉和步骤（1）得到的湿菌体混合制得用于包埋的包埋体；（5）将包埋体和包埋剂混合均匀，滴加到交联剂中反应，直到凝固成球形获得固定化微球；（6）得到包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球。本发明的固定化微球具有较高的机械强度和弹性，增强了水凝胶的使用寿命，具有很高的实际应用价值。

Description

一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法
技术领域
本发明属于废水处理领域，尤其涉及一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法。
背景技术
自养反硝化逐渐成为目前研究的热点，而自养反硝化中，硫自养反硝化具有一定的代表性，其利用脱氮硫杆菌，在缺氧条件下以单质硫作为电子供体，NO3－-N作为电子受体，从而实现反硝化脱氮的过程，在处理低C/N污水的时与利用异养型兼性厌氧的细菌的传统反硝化相比，具有产泥量极少、无需外加碳源、运行操作费用低的优点。然而，硫自养反硝化技术还面临许多新的挑战，如效率不高、菌种易流失，对温度和pH值等因素的变化比较敏感等。微生物包埋固定化技术在废水处理中的应用具有生物量高，优势菌种明显，流失少，处理装置占地少，产泥量低等优点，可使系统在更苛刻的条件下获得更好的处理效果，但是传统微生物包埋如海藻酸钠包埋具有机械强度低，抗降解能力差，凝胶网络的空隙尺寸大，不适宜多种微生物的包埋的缺点；聚乙烯醇包埋具有成型困难，易出现粘连现象且在实际应用中存在较大的水溶胀性，久而久之会导致强度大大减弱的缺点。
针对这一问题，需要开发一种能够提高脱氮硫杆菌包埋及提高其固定化微球强度的方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于提供一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，制得的包埋脱氮硫杆菌固定化微球去除水中NO3-N效果好且菌种不易流失，本发明的固定化微球具有较高的机械强度和弹性，增强了水凝胶的使用寿命，具有很高的实际应用价值。
为实现上述目的，本发明的技术方案为：本发明提供了一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，其包括以下步骤，
（1）将脱氮硫杆菌接种到水性培养基中培养，得到脱氮硫杆菌的水溶液，得到的脱氮硫杆菌的水溶液中脱氮硫杆菌的浓度大于108CFU/ml，然后离心得到湿菌体；
（2）将聚乙烯醇和海藻酸钠加入水中，在95-99℃水浴加热中使其变成粘稠液体，然后冷却到50-60℃，向其中加入火山岩粉，冷却之后在115-125℃下高温灭菌，得到火山岩粉改性聚乙烯醇复合海藻酸钠包埋剂；
（3）将牡蛎壳研磨成牡蛎粉，然后灭菌；
（4）步骤（3）得到的牡蛎粉和步骤（1）得到的湿菌体混合均匀后吸附10-20min后，制得用于包埋的包埋体；
（5）将步骤（4）得到的包埋体和步骤（2）得到的灭菌之后的包埋剂混合均匀，滴加到交联剂中反应，直到凝固成球形获得固定化微球；所述包埋体和包埋剂的质量比8:1-10:1，滴加到交联剂中反应，交联剂过量。
（6）将步骤（5）得到的固定化微球用去离子水洗涤后，在-20℃下冷冻保存，冷冻期间解冻风干1-2次，最后解冻得到包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球。
进一步地，步骤（1）中，将脱氮硫杆菌接种培养基中，脱氮硫杆菌的接种量为10%，调节所述培养基的pH到7.0，121℃下灭菌30min，控温28-32℃，培养12-24h，得到的脱氮硫杆菌的水溶液中脱氮硫杆菌的浓度大于108CFU/ml，最后离心得到湿菌体；
所述培养基包括以下重量份的组分，去离子水1000份，五水合硫代硫酸钠5-6份，硝酸钾2-3份，碳酸氢钠1-2份，磷酸二氢钾1-2份，六水合氯化镁0.5-1 份。
进一步地，步骤（1）中，离心机转速为3000-4000r/min，离心时间为5-8min。
进一步地，步骤（2）中得到火山岩粉改性聚乙烯醇复合海藻酸钠包埋剂中，聚乙烯醇的质量分数为7.5%-10%，海藻酸钠的质量分数为0.8%-3%，火山岩粉的质量分数为0.5%-5%，余量为水；
冷却温度为20-26℃。
进一步地，步骤（2）中火山岩粉粒径为30-45μm。
进一步地，步骤（3）中，将牡蛎壳先在水中冲洗去除泥沙，然后在水中浸泡，浸泡时间为48-72h，浸泡完成后捞出后在95-100℃下烘干，然后用盐酸将牡蛎壳表面清洗干净，最后，用蒸馏水将牡蛎壳表面的残余盐酸洗净；洗净后将牡蛎壳研磨粉碎成牡蛎壳然后烘干；
步骤（3）中，灭菌为将在紫外灯下照射25-30min。
进一步地，所述盐酸的质量分数为3%-5%；
洗净后将牡蛎壳研磨粉碎成40-60目，然后在120-160℃下烘干。
进一步地，步骤（4）中，步骤（3）得到的牡蛎粉和步骤（1）得到的湿菌体的质量比为8:1-10:1。
进一步地，步骤（5）中，所述交联剂为饱和硼酸和氯化钙的混合溶液，其中氯化钙的质量分数为2%-5%。
进一步地，步骤（6）中，冷冻保存时间为24-48h；冷冻期间解冻和最后解冻的温度均为0℃-3℃。
本发明积极效果如下：
（1）在聚乙烯醇和海藻酸钠水凝胶中加入了火山岩粉，火山岩粉的主要成分二氧化硅以无定型状态均匀分布于水凝胶基质中，聚乙烯醇分子中O-H与火山岩分子中的O-H、Al-H及水分子中的O-H之间易形成氢键而形成三维体系的网络结构，大大提高了水凝胶的机械强度和弹性，增强了水凝胶的使用寿命，具有很高的实际应用价值。
（2）火山岩粉具有很强的吸附力，可以起到吸附水中可以提高NO3－-N的吸附率，增强处理效果。
（3）牡蛎壳粉具有很好的亲水性以及生物亲和性，可以起到富集脱氮硫杆菌的效果增加其浓度，也可以提供脱氮硫杆菌所需要的微量元素。
附图说明
图1为模拟升流式固定床反应器。
1反应器本体、2恒温水浴套、3第一出水口、4第二出水口、5第一蠕动泵、6恒温水浴箱、7第二蠕动泵、8进水箱。
具体实施方式
实施例1
本发明提供了一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，其包括以下步骤，
其包括以下步骤，
（1）将脱氮硫杆菌接种到水性培养基中培养，得到脱氮硫杆菌的水溶液，得到的脱氮硫杆菌的水溶液中脱氮硫杆菌的浓度大于108CFU/ml，然后离心得到湿菌体；
步骤（1）中，将脱氮硫杆菌接种培养基中，脱氮硫杆菌的接种量为10%，调节所述培养基的pH到7.0，121℃下灭菌30min，控温30℃，培养20h，得到的脱氮硫杆菌的水溶液中脱氮硫杆菌的浓度大于108CFU/ml，最后离心得到湿菌体；
所述培养基包括以下重量份的组分，去离子水1000份，五水合硫代硫酸钠5.5份，硝酸钾2份，碳酸氢钠2份，磷酸二氢钾1.5份，六水合氯化镁1 份。
步骤（1）中，离心机转速为3500r/min，离心时间为6min。
（2）将聚乙烯醇和海藻酸钠加入水中，在97℃水浴加热中使其变成粘稠液体，然后冷却到55℃，向其中加入火山岩粉，冷却之后在120℃下高温灭菌，得到火山岩粉改性聚乙烯醇复合海藻酸钠包埋剂；
得到火山岩粉改性聚乙烯醇复合海藻酸钠包埋剂中，聚乙烯醇的质量分数为10%，海藻酸钠的质量分数为0.8%，火山岩粉的质量分数为3%，余量为水；
冷却温度为23℃。
步骤（2）中火山岩粉粒径为30-45μm。
（3）将牡蛎壳研磨成牡蛎粉，然后灭菌；
步骤（3）中，将牡蛎壳先在水中冲洗去除泥沙，然后在水中浸泡，浸泡时间为55h，浸泡完成后捞出后在98℃下烘干，然后用盐酸将牡蛎壳表面清洗干净，最后，用蒸馏水将牡蛎壳表面的残余盐酸洗净；洗净后将牡蛎壳研磨粉碎成50目，然后在140℃下烘干。
步骤（3）中灭菌为将牡蛎粉在滤纸中摊平，在紫外灯下照射25min。
所述盐酸的质量分数为4%。
（4）步骤（3）得到的牡蛎粉和步骤（1）得到的湿菌体混合均匀后吸附10-20min后，制得用于包埋的包埋体；步骤（4）中，步骤（3）得到的牡蛎粉和步骤（1）得到的湿菌体的质量比为9:1。
（5）将步骤（4）得到的包埋体和步骤（2）得到的灭菌之后的包埋剂混合均匀，可使用针型管滴入到交联剂中反应，直到凝固成球形获得固定化微球；
所述步骤（4）得到的包埋体和步骤（2）得到的包埋剂的质量比9:1，滴加到交联剂中反应，交联剂过量。
步骤（5）中，所述交联剂为饱和硼酸和氯化钙的混合溶液，其中氯化钙的质量分数为4%。
（6）将步骤（5）得到的固定化微球用去离子水洗涤后，在-20℃下冷冻保存，冷冻期间解冻风干1-2次，最后解冻得到包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球。步骤（6）中，冷冻保存时间为35h；冷冻期间解冻和最后解冻的温度均为2℃。
实施例2
本发明提供了一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，其包括以下步骤，
其包括以下步骤，
（1）将脱氮硫杆菌接种到水性培养基中培养，得到脱氮硫杆菌的水溶液，得到的脱氮硫杆菌的水溶液中脱氮硫杆菌的浓度大于108CFU/ml，然后离心得到湿菌体；
步骤（1）中，将脱氮硫杆菌接种培养基中，脱氮硫杆菌的接种量为10%，调节所述培养基的pH到7.0，121℃下灭菌30min，控温32℃，培养12h，得到的脱氮硫杆菌的水溶液中脱氮硫杆菌的浓度大于108CFU/ml，最后离心得到湿菌体；
所述培养基包括以下重量份的组分，去离子水1000份，五水合硫代硫酸钠5份，硝酸钾2.5份，碳酸氢钠1份，磷酸二氢钾1份，六水合氯化镁0.9份。
步骤（1）中，离心机转速为3000r/min，离心时间为5min。
（2）将聚乙烯醇和海藻酸钠加入水中，在95℃水浴加热中使其变成粘稠液体，然后冷却到60℃，向其中加入火山岩粉，冷却之后在115℃下高温灭菌，，得到火山岩粉改性聚乙烯醇复合海藻酸钠包埋剂；
得到火山岩粉改性聚乙烯醇复合海藻酸钠包埋剂中，聚乙烯醇的质量分数为8%，海藻酸钠的质量分数为3%，火山岩粉的质量分数为0.5%；
冷却温度为20℃。
步骤（2）中火山岩粉粒径为30-45μm。
（3）将牡蛎壳研磨成牡蛎粉，然后灭菌；
步骤（3）中，将牡蛎壳先在水中冲洗去除泥沙，然后在水中浸泡，浸泡时间为48h，浸泡完成后捞出后在100℃下烘干，然后用盐酸将牡蛎壳表面清洗干净，最后，用蒸馏水将牡蛎壳表面的残余盐酸洗净；洗净后将牡蛎壳研磨粉碎成40目，然后在120℃下烘干。
步骤（3）中灭菌为将牡蛎粉在滤纸中摊平，在紫外灯下照射26min。
所述盐酸的质量分数为3%。
（4）步骤（3）得到的牡蛎粉和步骤（1）得到的湿菌体混合均匀后吸附10-20min后，制得用于包埋的包埋体；步骤（4）中，步骤（3）得到的牡蛎粉和步骤（1）得到的湿菌体的质量比为10:1。
（5）将步骤（4）得到的包埋体和步骤（2）得到的灭菌之后的包埋剂混合均匀，可使用针型管滴入到交联剂中反应，直到凝固成球形获得固定化微球；所述包埋体和包埋剂的质量比10:1，滴加到交联剂中反应，所述交联剂为过量。
步骤（5）中，所述交联剂为饱和硼酸和氯化钙的混合溶液，其中氯化钙的质量分数为2%。
（6）将步骤（5）得到的固定化微球用去离子水洗涤后，在-20℃下冷冻保存，冷冻期间解冻风干1-2次，最后解冻得到包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球。步骤（6）中，冷冻保存时间为48h；冷冻期间解冻和最后解冻的解冻的温度均为3℃。
实施例3
本发明提供了一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，其包括以下步骤，
其包括以下步骤，
（1）将脱氮硫杆菌接种到水性培养基中培养，得到脱氮硫杆菌的水溶液，得到的脱氮硫杆菌的水溶液中脱氮硫杆菌的浓度大于108CFU/ml，然后离心得到湿菌体；
步骤（1）中，将脱氮硫杆菌接种培养基中，脱氮硫杆菌的接种量为10%，调节所述培养基的pH到7.0，121℃下灭菌30min，控温28℃，培养24h，得到的脱氮硫杆菌的水溶液中脱氮硫杆菌的浓度大于108CFU/ml，最后离心得到湿菌体；
所述培养基包括以下重量份的组分，去离子水1000份，五水合硫代硫酸钠6份，硝酸钾3份，碳酸氢钠1.5份，磷酸二氢钾2份，六水合氯化镁0.5份。
步骤（1）中，离心机转速为4000r/min，离心时间为8min。
（2）将聚乙烯醇和海藻酸钠加入水中，在99℃水浴加热中使其变成粘稠液体，然后冷却到50℃，向其中加入火山岩粉，冷却之后在125℃下高温灭菌，得到火山岩粉改性聚乙烯醇复合海藻酸钠包埋剂；
得到火山岩粉改性聚乙烯醇复合海藻酸钠包埋剂中，聚乙烯醇的质量分数为7.5%，海藻酸钠的质量分数为1%，火山岩粉的质量分数为5%，余量为水；
冷却温度为26℃。
步骤（2）中火山岩粉粒径为30-45μm。
（3）将牡蛎壳研磨成牡蛎粉，然后灭菌；
步骤（3）中，将牡蛎壳先在水中冲洗去除泥沙，然后在水中浸泡，浸泡时间为72h，浸泡完成后捞出后在95℃下烘干，然后用盐酸将牡蛎壳表面清洗干净，最后，用蒸馏水将牡蛎壳表面的残余盐酸洗净；洗净后将牡蛎壳研磨粉碎成60目，然后在160℃下烘干。
步骤（3）中灭菌为将牡蛎粉在滤纸中摊平，在紫外灯下照射30min。
所述盐酸的质量分数为5%。
（4）步骤（3）得到的牡蛎粉和步骤（1）得到的湿菌体混合均匀后吸附10-20min后，制得用于包埋的包埋体；步骤（4）中，步骤（3）得到的牡蛎粉和步骤（1）得到的湿菌体的质量比为8:1。
（5）将步骤（4）得到的包埋体和步骤（2）得到的灭菌之后的包埋剂混合均匀，可使用针型管滴入到交联剂中反应，直到凝固成球形获得固定化微球；所述包埋体和包埋剂的质量比8:1，滴加到交联剂中反应，交联剂为过量。
步骤（5）中，所述交联剂为饱和硼酸和氯化钙的混合溶液，其中氯化钙的质量分数为5%。
（6）将步骤（5）得到的固定化微球用去离子水洗涤后，在-20℃下冷冻保存，冷冻期间解冻风干1-2次，最后解冻得到包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球。步骤（6）中，冷冻保存时间为24h；冷冻期间解冻和最后解冻的解冻温度均为0℃。
本发明中，用牡蛎粉将脱氮硫杆菌湿菌体吸附，一方面牡蛎粉为湿菌体提供了附着地，另一方面牡蛎粉为湿菌体提供了微量元素的供给。本发明创造性的加入了火山岩粉，大大增强了固定化微球的强度，在聚乙烯醇和海藻酸钠水凝胶中加入了火山岩粉，火山岩粉的主要成分二氧化硅以无定型状态均匀分布于水凝胶基质中，聚乙烯醇分子中O-H与火山岩分子中的O-H、Al-H及水分子中的O-H之间易形成氢键而形成三维体系的网络结构，大大提高了水凝胶的机械强度和弹性，增强了水凝胶的使用寿命，具有很高的实际应用价值。
包埋体和包埋剂混合均匀后，经过交联反应凝固成球形胶状物即固定化微球，反复冷冻解冻后成为包埋脱氮硫杆菌固定化微球，由此，当将包埋脱氮硫杆菌固定化微球投入到废水中时，由于包埋剂为脱氮硫杆菌湿菌体提供了庇护的场所，脱氮硫杆菌不易流失，同时脱氮硫杆菌又可以透过包埋剂去处理废水中的氮，在包埋剂、火山岩粉和牡蛎粉的保护下，火山岩粉具有很强的吸附力，可以起到吸附水中可以提高NO3－-N的吸附率，增强处理效果，同时降低脱氮硫杆菌对环境温度和pH值等因素的变化的敏感度。
相比于现有技术，本发明的优势在于：（1）容易获得高浓度的脱氮硫杆菌溶液，将其中的脱氮硫杆菌吸附于牡蛎壳粉后，微生物浓度增加，且牡蛎壳粉为脱氮硫杆菌提供必要的微量元素，经过包埋固定化后NO3-N的去除效率大大增加；（2）本发明将聚乙烯醇作为包埋剂溶液，本发明提供一种新型的微生物包埋固定化载体，该载体对微生物无毒、价格低廉，聚乙烯醇作为包埋剂增加了包埋菌的机械强度。（3）在聚乙烯醇和海藻酸钠水凝胶中加入了火山岩粉，火山岩粉的主要成分二氧化硅以无定型状态均匀分布于水凝胶基质中，聚乙烯醇分子中O-H与火山岩分子中的O-H、Al-H及水分子中的O-H之间易形成氢键而形成三维体系的网络结构，大大提高了水凝胶的机械强度和弹性，增强了水凝胶的使用寿命，另，火山岩中的金属微量元素，如Ca2+，Mg2+，Zn2+等可与海藻酸钠发生配位杂化反应，形成正四面体，八面体等构型，从而提高水凝胶的抗压强度，具有很高的实际应用价值。（4）火山岩粉具有很强的吸附力，可以起到吸附水中可以提高NO3－-N的吸附率，增强处理效果。（5）牡蛎壳粉具有很好的亲水性以及生物亲和性，可以起到富集脱氮硫杆菌的效果增加其浓度，也可以提供脱氮硫杆菌所需要的微量元素。
对比例1
和实施例1的区别在于，本对比例中不添加火山岩粉，其余步骤均与实施例1相同。
对比例2
和实施例1的区别在于，本对比例中不添加火山岩粉和牡蛎粉，其余步骤均与实施例1相同。
分别将实施例1～3得到的固定化微球和对比例1和2得到的产品与模拟硝态氮废水投入反应器中，模拟硝态氮废水采用超纯水配制，使用1 L 容量瓶配制，添加0.404 gKNO3、0.2 g KH2PO4、1.25 g NaHCO3、0.88gNa2S2O3。
反应器采用模拟升流式固定床反应器，反应器如图1所示，其包括反应器本体1，套设在所述反应器本体1外周的恒温水浴套2，所述反应器本体1上分别设置有第一出水口3和第二出水口4，所述恒温水浴套2依次与第一蠕动泵5和恒温水浴箱6连接。所述反应器本体1的底部依次与第二蠕动泵7和进水箱8连接。
每个反应器的有效容积为1L，且反应器外套着一个恒温水浴套，使反应器内的温度保持在（29.5℃-32.8℃），向反应器内投加包埋脱氮硫杆菌的固定化微球，体积占反应器容积的20％，反应器在本实验条件下驯化3天后，测得实施例1，对比例1和对比例2硝酸盐的去除率分别为，95.76%、77.19%、67.23%。
将实施例1得到的固定化微球和对比例1和2产品进行了机械强度的测试，实施例1得到的固定化微球抗压缩性能比对比例1产品提高了11%，实施例1得到的固定化微球抗压缩性能比对比例2产品提高了26%，实施例1得到的固定化微球比只包含聚乙烯醇且不包含海藻酸钠、火山岩粉和牡蛎粉的提高了52％。
综上所述，可以发现，本发明的包埋脱氮硫杆菌的固定化微球，对废水中硝态氮去除效率高且去除效果稳定，且其强度，抗压缩性能有明显增强，提高了复合水凝胶的使用寿命降低其成本，具有很好的实际应用价值。
对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其他实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。

Claims (10)

1.一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，其特征在于：其包括以下步骤，
（1）将脱氮硫杆菌接种到水性培养基中培养，得到脱氮硫杆菌的水溶液，得到的脱氮硫杆菌的水溶液中脱氮硫杆菌的浓度大于108CFU/ml，然后离心得到湿菌体；
（2）将聚乙烯醇和海藻酸钠加入水中，在95-99℃水浴加热中使其变成粘稠液体，然后冷却到50-60℃，向其中加入火山岩粉，冷却之后在115-125℃下高温灭菌，得到火山岩粉改性聚乙烯醇复合海藻酸钠包埋剂；
（3）将牡蛎壳研磨成牡蛎粉，然后灭菌；
（4）步骤（3）得到的牡蛎粉和步骤（1）得到的湿菌体混合均匀后吸附10-20min后，制得用于包埋的包埋体；
（5）将步骤（4）得到的包埋体和步骤（2）得到的灭菌之后的包埋剂混合均匀，所述包埋体和包埋剂的质量比8:1-10:1，滴加到交联剂中反应，直到凝固成球形获得固定化微球；
（6）将步骤（5）得到的固定化微球用去离子水洗涤后，在-20℃下冷冻保存，冷冻期间解冻风干1-2次，最后解冻得到包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球。
2.根据权利要求1所述的一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，将脱氮硫杆菌接种培养基中，脱氮硫杆菌的接种量为10%，调节所述培养基的pH到7.0，121℃下灭菌30min，控温28-32℃，培养12-24h，得到的脱氮硫杆菌的水溶液中脱氮硫杆菌的浓度大于108CFU/ml，最后离心得到湿菌体；
所述培养基包括以下重量份的组分，去离子水1000份，五水合硫代硫酸钠5-6份，硝酸钾2-3份，碳酸氢钠1-2份，磷酸二氢钾1-2份，六水合氯化镁0.5-1 份。
3.根据权利要求2所述的一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，其特征在于：步骤（1）中，离心机转速为3000-4000r/min，离心时间为5-8min。
4.根据权利要求1所述的一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，其特征在于：步骤（2）中得到火山岩粉改性聚乙烯醇复合海藻酸钠包埋剂中，聚乙烯醇的质量分数为7.5%-10%，海藻酸钠的质量分数为0.8%-3%，火山岩粉的质量分数为0.5%-5%；
冷却温度为20-26℃。
5.根据权利要求1所述的一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，其特征在于：步骤（2）中火山岩粉粒径为30-45μm。
6.根据权利要求1所述的一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，其特征在于：步骤（3）中，将牡蛎壳先在水中冲洗去除泥沙，然后在水中浸泡，浸泡时间为48-72h，浸泡完成后捞出后在95-100℃下烘干，然后用盐酸将牡蛎壳表面清洗干净，最后，用蒸馏水将牡蛎壳表面的残余盐酸洗净；洗净后将牡蛎壳研磨粉碎成牡蛎壳然后烘干；
步骤（3）中，灭菌为将在紫外灯下照射25-30min。
7.根据权利要求6所述的一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，其特征在于：所述盐酸的质量分数为3%-5%；
洗净后将牡蛎壳研磨粉碎成40-60目，然后在120-160℃下烘干。
8.根据权利要求1所述的一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，其特征在于：步骤（4）中，步骤（3）得到的牡蛎粉和步骤（1）得到的湿菌体的质量比为8:1-10:1。
9.根据权利要求1所述的一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，其特征在于：步骤（5）中，所述交联剂为饱和硼酸和氯化钙的混合溶液，其中氯化钙的质量分数为2%-5%。
10.根据权利要求1所述的一种包埋脱氮硫杆菌的高强度固定化微球的制备方法，其特征在于：步骤（6）中，冷冻保存时间为24-48h；解冻的温度为0℃-3℃。
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