CN112007212A - 胶原蛋白植入物及其在制备手术辅助复原物中的应用 - Google Patents

胶原蛋白植入物及其在制备手术辅助复原物中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN112007212A
CN112007212A CN202010733287.4A CN202010733287A CN112007212A CN 112007212 A CN112007212 A CN 112007212A CN 202010733287 A CN202010733287 A CN 202010733287A CN 112007212 A CN112007212 A CN 112007212A
Authority
CN
China
Prior art keywords
collagen
implant
acid
weight
stirring
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
CN202010733287.4A
Other languages
English (en)
Inventor
不公告发明人
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Hangzhou Luyang Technology Co Ltd
Original Assignee
Hangzhou Luyang Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hangzhou Luyang Technology Co Ltd filed Critical Hangzhou Luyang Technology Co Ltd
Priority to CN202010733287.4A priority Critical patent/CN112007212A/zh
Publication of CN112007212A publication Critical patent/CN112007212A/zh
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/50—Materials characterised by their function or physical properties, e.g. injectable or lubricating compositions, shape-memory materials, surface modified materials
    • A61L27/56—Porous materials, e.g. foams or sponges
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/14—Macromolecular materials
    • A61L27/22—Polypeptides or derivatives thereof, e.g. degradation products
    • A61L27/24—Collagen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/28—Materials for coating prostheses
    • A61L27/34—Macromolecular materials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61L—METHODS OR APPARATUS FOR STERILISING MATERIALS OR OBJECTS IN GENERAL; DISINFECTION, STERILISATION OR DEODORISATION OF AIR; CHEMICAL ASPECTS OF BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES; MATERIALS FOR BANDAGES, DRESSINGS, ABSORBENT PADS OR SURGICAL ARTICLES
    • A61L27/00—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses
    • A61L27/36—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix
    • A61L27/3604—Materials for grafts or prostheses or for coating grafts or prostheses containing ingredients of undetermined constitution or reaction products thereof, e.g. transplant tissue, natural bone, extracellular matrix characterised by the human or animal origin of the biological material, e.g. hair, fascia, fish scales, silk, shellac, pericardium, pleura, renal tissue, amniotic membrane, parenchymal tissue, fetal tissue, muscle tissue, fat tissue, enamel
    • A61L27/362—Skin, e.g. dermal papillae

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Transplantation (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)

Abstract

本发明涉及生物医学材料技术领域，特别是关于一种胶原蛋白植入物及其在制备手术辅助复原物中的应用。所述胶原蛋白植入物以胶原蛋白为原料，材料易得、价格便宜，安全无毒，胶原蛋白与环氧化物接枝后再经聚乳酸‑羟基乙酸共聚物包裹，使得植入物的热稳定能大大提高，降解速率下降，具有明显的药物缓释效果，钙化率低，能够起到长效治疗的目的。

Description

胶原蛋白植入物及其在制备手术辅助复原物中的应用
技术领域
本发明属于生物医学材料技术领域，特别是关于一种胶原蛋白植入物及其在制备手术辅助复原物中的应用。
背景技术
植入物是放置于外科操作造成的或者生理存在的体腔中的可植入型物品，医疗植入物的材料主要有合金、合成高分子材料、天然高分子材料等。在众多的医疗植入物中，蛋白植入物是非常有益的，与非生物材料型的植入物相比，蛋白植入物介入活体尤其是人体中时，能避免形成血栓，且安全无毒，是医疗植入物中较为受欢迎的材料。
蛋白植入物中常用的为胶原蛋白。胶原蛋白为动物体内含量最高的蛋白质，广泛存在动物体的结缔组织间造成稳固的支架作用。胶原蛋白具有独特的稳定的三股螺旋结构，并且具有低免疫原性和良好的生物相容性等，其产品广泛应用于生物医学领域，具有良好的生物相容性；能保持细胞的正常生长、分化、增殖能力和分泌基质；具有可控的降解时间；材料及其降解产物对机体无毒副作用；具有可消毒性；但抗水性差、遇水易溶胀和或水解，严重限制了胶原蛋白的应用。此外，胶原蛋白分子中含有大量的游离胺官能团和羧基，这些游离胺官能团是植入物在活体中受到排斥的主要原因之一，且后期会导致植入物的钙化，因此胶原蛋白使用前必须对其进行预处理。为避免排斥反应，目前将胶原蛋白与戊二醛、己异二氰酸酯、碳化二亚胺、叠氮二苯基磷等进行接枝，最常用的为戊二醛，双醛官能团能与胺反应生成亚胺官能团(-C＝N-)，但其具有细胞毒性，且其用量难以控制，随着接枝度的增加，吸水能力和膨胀度却会降低，最为重要的是，亚胺官能团会加速植入物的钙化，从而导致硬化，这就会导致植入物需要定期更换，造成材料的大量消耗，因此，如何有效去除游离胺官能团又不导致植入物的钙化意义重大。
以上背景技术内容的公开仅用于辅助理解本发明的发明构思及技术方案，其并不必然属于本专利申请的现有技术，在没有明确的证据表明上述内容在本专利申请的申请日已经公开的情况下，上述背景技术不应当用于评价本申请的新颖性和创造性。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种胶原蛋白植入物及其在及其在制备手术辅助复原物中的应用，该胶原蛋白植入物原料来源于鱼皮，材料便宜易得，该胶原蛋白植入物安全无毒，钙化率低，且变性温度高、热稳定性能高，耐降解性能优良，可用于制备手术辅助复原物。
为了实现上述目的，本发明所采取的技术方案为：
一种胶原蛋白植入物，所述胶原蛋白植入物为聚乳酸-羟基乙酸共聚物包裹的胶原蛋白基植入物，其中，
聚乳酸-羟基乙酸共聚物中乳酸含量不低于70％；
胶原蛋白基含量为60～80％。
本发明所述胶原蛋白植入物以胶原蛋白为原料，材料易得、价格便宜，胶原蛋白经接枝后再经聚乳酸-羟基乙酸共聚物包裹，使得植入物的热稳定能大大提高，降解速率下降，具有明显的药物缓释效果，能够起到长效治疗的目的。
在本发明的一些具体实施例中，所述胶原蛋白经由包括下述步骤的方法制备得到：
1)预处理：将1重量份干燥脱水后的鱼皮研磨搅碎，加入15～20重量份的正己烷脱脂(质量分数为6～12％)，0～4℃搅拌8～12小时后排除废液，超纯水清洗干净后加入5～10重量份的1.0～2.0mol/L的酸性溶液浸泡至少12h，然后用超纯水清洗干净备用；
2)提取：将预处理好的鱼皮与10～15重量倍的超纯水混合，60～70℃条件下搅拌2～6h，然后加入胃蛋白酶，加入0.5～1.0mol/L的HCl溶液调节pH至1.6～2.2，30～37℃下提取4～10h，得胶原蛋白粗提物；
3)纯化：将胶原蛋白粗提物离心，弃沉淀，往上清液中加入终浓度0.5～1.0mol/L的NaCl，混合均匀后静置20～24h，再离心，最后的沉淀在0～4℃干燥得胶原蛋白。
本发明所述方法从鱼皮中提取纯化胶原蛋白，首先将鱼皮粉碎成小颗粒，然后经正己烷脱脂、酸性溶液脱钙处理，然后经热水处理后再用霉解法提取胶原蛋白，提取得到的胶原蛋白分子为第I型胶原蛋白，其三股螺旋结构未被破坏，热稳定性好，具有松散、均匀的孔径结构。
更具体地，所述制备胶原蛋白的步骤1)中，鱼皮选自鲢鱼鱼皮、鳙鱼鱼皮或草鱼鱼皮。
更具体地，所述制备胶原蛋白的步骤1)中，酸性溶液是指盐酸/有机酸混合酸，其中，有机酸为乙酸、柠檬酸、苹果酸、酒石酸的一种，盐酸/有机酸混合比为1:0.2～0.6。相比于利用单一的盐酸或有机酸，选用盐酸/有机酸混合酸提取胶原蛋白，可明显提高胶原蛋白产率和纯度，且有助于增益终产品植入物的性能。
更具体地，所述制备胶原蛋白的步骤2)中，胃蛋白酶的添加量为混合溶液重量的0.8～1.5％。
更具体地，所述制备胶原蛋白的步骤3)中，离心转速为3000～5000r/min。
经本发明所述方法提取胶原蛋白，热水处理和霉解法提取胶原蛋白，有助于减少霉解法过程中胃蛋白霉的用量，且效率明显提高，能降低胶原的抗原性，所得胶原蛋白纯度高，热稳定性好，具有松散、均匀的孔径结构。
在本发明的一些具体实施例中，所述胶原蛋白植入物的制备方法，具体包括下述步骤：
1)将胶原蛋白置于20～24℃的真空炉中，升高温度至100～110℃，处理3～5d后得脱水胶原蛋白；
2)将脱水胶原蛋白加入到5～10重量倍的超纯水中，搅拌溶解，升高温度至70～80℃，然后加入0.05～0.2重量份的碱性溶液，温度升高至90～95℃，加入环氧化物，搅拌反应3～5h，温度降至室温，继续搅拌反应4～10h；
3)将聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶于10～15重量倍的二氯甲烷溶液中，然后加入步骤2)得到的溶液，搅拌分散，1.5～3h后升温至50～60℃使二氯甲烷挥发；
4)反应产物用超纯水洗涤3～5次，干燥后即得。
本发明首先将胶原蛋白经重度脱水，然后在碱性条件下与环氧化物接枝，然后用聚乳酸-羟基乙酸共聚物包裹得到胶原蛋白植入物，胶原蛋白经重度脱水使分子间交联，游离的羧基和胺官能团减少；环氧化物的接枝引入，将胶原蛋白中游离的胺官能团转化成酰胺基团，减少游离的氨基数量，避免过量氨基与组织发生黏连的问题，且避免了使用细胞毒性组分戊二醛导致的促使植入物钙化的问题，聚乳酸-羟基乙酸共聚物的包裹使其具有显著的药物缓释作用，并明显提高其热稳定性；此外，经重度脱水和环氧化物的接枝，基质材料内部孔道更小且致密，且使胶原蛋白的生物相容性、热稳定性提高，降解时间大大延长。
更具体地，所述制备胶原蛋白植入物的步骤1)中，真空炉的真空度为10～20Pa。
更具体地，所述制备胶原蛋白植入物的步骤2)中，碱性溶液为氢氧化钾、碳酸钾、碳酸氢钾、叔丁醇钾中的一种，碱性溶液浓度为1.0～2.0mol/L。
更具体地，所述制备胶原蛋白植入物的步骤2)中，环氧化物为具有式(1)结构的单体：
Figure BDA0002603994350000041
其中，R为具有1～6个碳原子的直链或芳环结构的烷烃或烯烃。
更具体地，环氧化物为1,2环氧丁烷、环氧丁烯、1,2-环氧己烷、1,2-环氧基-5-己烯或环氧苯乙烷中的一种。
更具体地，所述制备胶原蛋白植入物的步骤2)中，环氧化物和胶原蛋白的重量比为1.5～2.5:1。
更具体地，所述制备胶原蛋白植入物的步骤2)中，搅拌速率为160～300r/min。
更具体地，所述制备胶原蛋白植入物的步骤3)中，聚乳酸-羟基乙酸共聚物的重均分子量是50000～250000。
更具体地，所述制备胶原蛋白植入物的步骤3)中，聚乳酸-羟基乙酸共聚物与胶原蛋白添加重量比为0.7～1.5:1，且聚乳酸-羟基乙酸共聚物中乳酸含量不低于70％，优选70～85％，更优选75～82％，最优选78％。相比于选择聚乳酸或聚乳酸含量低的聚乳酸-羟基乙酸共聚物，选取乳酸含量不低于70％的聚乳酸-羟基乙酸共聚物来包覆植入物，不仅可以提高植入物热稳定性，且使其具有显著的药物缓释作用，能够起到长效作用，降解速率方面也具有优异的表现。
更具体地，所述制备胶原蛋白植入物的步骤3)中，搅拌速度为60～150r/min，
更具体地，所述制备胶原蛋白植入物的步骤4)中，干燥是指在-10～-30℃下冷冻干燥6～10h。
经本发明所述方法制备得到胶原蛋白植入物，胶原蛋白的重度脱水和环氧化物的接枝，减少了胶原蛋白分子中游离的羧基和胺官能团，且未引入毒性物质，控制反应条件，环氧化物的接枝率为18～26％，可以有效减少植入物钙化的产生，提高植入物的热稳定性；控制聚乳酸-羟基乙酸共聚物与胶原蛋白的添加重量比使植入物中胶原蛋白含量为60～80％，可以提高植入物的热稳定性，且在降解速率方面具有优异的表现。
在本发明的一些具体实施例中，前述所述的胶原蛋白植入物在制备手术辅助复原物中的应用。
本发明的有益效果为：
1)相比于利用单一的盐酸或有机酸，选用混合比为1:0.2～0.6的盐酸/有机酸混合酸提取胶原蛋白，可明显提高胶原蛋白产率和纯度，且有助于增益终产品植入物的性能；
2)热水处理和霉解法提取胶原蛋白，有助于减少霉解法过程中胃蛋白霉的用量，且效率明显提高，能降低胶原的抗原性，所得胶原蛋白纯度高，热稳定性好，具有松散、均匀的孔径结构；
3)相比于选择聚乳酸或聚乳酸含量低的聚乳酸-羟基乙酸共聚物，选取乳酸含量不低于70％的聚乳酸-羟基乙酸共聚物来包覆植入物，不仅可以提高植入物热稳定性，且使其具有显著的药物缓释作用，能够起到长效作用，降解速率方面也具有优异的表现；
4)控制反应条件，环氧化物的接枝率为18～26％，可以有效减少植入物钙化的产生，提高植入物的热稳定性；
5)一种胶原蛋白植入物，其原料来源于鱼皮，材料便宜易得，该胶原蛋白植入物具有三维立体孔洞，结构紧密，钙化率低，且变性温度高、热稳定性能高，耐降解性能优良。
本发明采用了上述技术方案提供范文，弥补了现有技术的不足，设计合理，操作方便。
附图说明
为让本发明的上述和其他目的、特征、优点与实施例能更明显易懂，所附附图的说明如下：
图1为本发明实施例1环氧化物接枝胶原蛋白的核磁氢谱图；
图2为本发明胶原蛋白植入物的钙化测试结果示意图。
具体实施方式
本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当替换和/或改动工艺参数实现，然而特别需要指出的是，所有类似的替换和/或改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明所述产品和制备方法已经通过较佳实例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的产品和制备方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
除非另有定义，本文所使用的技术和科学术语，具有本发明所属领域的普通技术人员通常所理解的相同的含义。本文中所描述的材料、方法和实例仅是说明性的，并不是用来作为限制。所有出版物、专利申请案、专利案、临时申请案、数据库条目及本文中提及的其它参考文献等，其整体被并入本文中作为参考。若有冲突，以本说明书包括定义为准。
除非具体说明，本文所描述的材料、方法和实例仅是示例性的，而非限制性的。尽管与本文所述的那些方法和材料类似或等同的方法和材料可用于本发明的实施或测试，但本文仍描述了合适的方法和材料。
以下结合具体实施方式和附图对本发明的技术方案作进一步详细描述。
实施例1：一种胶原蛋白植入物：
本实施例提供了一种胶原蛋白植入物，所述胶原蛋白植入物为聚乳酸-羟基乙酸共聚物包裹的胶原蛋白基植入物，其中，
聚乳酸-羟基乙酸共聚物中乳酸含量为78％；
胶原蛋白基含量为75％。
本实施例所述填胶原蛋白植入物具体经由下述步骤制备得到：
1)制备胶原蛋白：
1.1)预处理：将2g干燥脱水后的鱼皮研磨搅碎，加入30g的正己烷(质量分数为10％)脱脂，4℃搅拌12h后排除废液，用超纯水清洗干净后加入16g的1.0mol/L的盐酸/乙酸混合溶液(混合比1:0.6)浸泡12h，然后用超纯水清洗干净备用；
1.2)提取：将预处理好的鱼皮与20g的超纯水混合，70℃条件下搅拌4.5h，然后加入混合容量重量1.2％的胃蛋白酶，再加入1.0mol/L的HCl溶液调节pH至2.0，37℃下提取8h，得胶原蛋白粗提物；
1.3)纯化：将胶原蛋白粗提物离心(转速为4000r/min)，弃沉淀往上清液中加入终浓度1moL/L的NaCl，静止24h，再离心，最后的沉淀在4℃干燥得胶原蛋白。
2)制备胶原蛋白植入物：
2.1)将前述1g胶原蛋白置于24℃的真空炉(真空度为10Pa)中，升高温度至100℃，处理4d后得脱水胶原蛋白；
2.2)将脱水胶原蛋白加入到10g的超纯水中，180r/min转速下搅拌溶解，升高温度至70℃，然后加入0.1g的叔丁醇钾溶液(浓度为1mol/L)，温度升高至90℃，加入2g环氧苯乙烷，搅拌反应4h，温度降至室温，继续搅拌反应6h；
2.3)将1g聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶于15g二氯甲烷中，然后加入步骤2)得到的溶液，80r/min转速下搅拌分散，2h后升温至60℃使二氯甲烷挥发；
2.4)反应产物用超纯水洗涤5次，-20℃下冷冻干燥6h即得。
实施例2：另一种胶原蛋白植入物：
本实施例提供另一种胶原蛋白植入物，所述制备方法与实施例1基本相同，不同之处在于本实例中，制备胶原蛋白的步骤1)中，利用盐酸溶液代替盐酸/乙酸混合溶液。
实施例3：另一种胶原蛋白植入物：
本实施例提供另一种胶原蛋白植入物，所述制备方法与实施例1基本相同，不同之处在于本实例中，制备胶原蛋白的步骤1)中，利用乙酸溶液代替盐酸/乙酸混合溶液。
实施例4：另一种胶原蛋白植入物：
本实施例提供另一种胶原蛋白植入物，所述制备方法与实施例1基本相同，不同之处在于本实例中，制备胶原蛋白植入物过程中，胶原蛋白未经过重度脱水处理即与环氧化物接枝共聚。
实施例5：另一种胶原蛋白植入物：
本实施例提供另一种胶原蛋白植入物，所述制备方法与实施例1基本相同，不同之处在于本实例中，制备胶原蛋白植入物步骤2)中，环氧苯乙烷与胶原蛋白添加重量比为1:1。
实施例6：另一种胶原蛋白植入物：
本实施例提供另一种胶原蛋白植入物，所述制备方法与实施例1基本相同，不同之处在于本实例中，制备胶原蛋白植入物步骤2)中，环氧苯乙烷与胶原蛋白添加重量比为1.5:1。
实施例7：另一种胶原蛋白植入物：
本实施例提供另一种胶原蛋白植入物，所述制备方法与实施例1基本相同，不同之处在于本实例中，制备胶原蛋白植入物步骤2)中，环氧苯乙烷与胶原蛋白添加重量比为2.5:1。
实施例8：另一种胶原蛋白植入物：
本实施例提供另一种胶原蛋白植入物，所述制备方法与实施例1基本相同，不同之处在于本实例中，制备胶原蛋白植入物步骤2)中，环氧苯乙烷与胶原蛋白添加重量比为3:1。
实施例9：另一种胶原蛋白植入物：
本实施例提供另一种胶原蛋白植入物，所述制备方法与实施例1基本相同，不同之处在于本实例中，胶原蛋白未经环氧化物接枝共聚，即用胶原蛋白代替胶原蛋白与环氧化物接枝共聚物制备胶原蛋白植入物。
实施例10：另一种胶原蛋白植入物：
本实施例提供另一种胶原蛋白植入物，所述制备方法与实施例1基本相同，不同之处在于本实例中，制备胶原蛋白植入物步骤3)中，聚乳酸-羟基乙酸共聚物中聚乳酸含量50％。
实施例11：另一种胶原蛋白植入物：
本实施例提供另一种胶原蛋白植入物，所述制备方法与实施例1基本相同，不同之处在于本实例中，制备胶原蛋白植入物步骤3)中，聚乳酸-羟基乙酸共聚物中聚乳酸含量70％。
实施例12：另一种胶原蛋白植入物：
本实施例提供另一种胶原蛋白植入物，所述制备方法与实施例1基本相同，不同之处在于本实例中，制备胶原蛋白植入物步骤3)中，聚乳酸-羟基乙酸共聚物中聚乳酸含量95％。
实施例13：另一种胶原蛋白植入物：
本实施例提供另一种胶原蛋白植入物，所述制备方法与实施例1基本相同，不同之处在于本实例中，制备胶原蛋白植入物步骤3)中，聚乳酸-羟基乙酸共聚物与胶原蛋白添加重量比为0.5:1。
实施例14：另一种胶原蛋白植入物：
本实施例提供另一种胶原蛋白植入物，所述制备方法与实施例1基本相同，不同之处在于本实例中，制备胶原蛋白植入物步骤3)中，聚乳酸-羟基乙酸共聚物与胶原蛋白添加重量比为1.5:1。
实施例15：另一种胶原蛋白植入物：
本实施例提供另一种胶原蛋白植入物，所述制备方法与实施例1基本相同，不同之处在于本实例中，制备胶原蛋白植入物步骤3)中，聚乳酸-羟基乙酸共聚物与胶原蛋白添加重量比为2:1。
实施例16：另一种胶原蛋白植入物：
本实施例提供另一种胶原蛋白植入物，所述制备方法与实施例1基本相同，不同之处在于本实例中，胶原蛋白植入物未经过聚乳酸-羟基乙酸共聚物包覆。
实验例1：胶原蛋白性能测试：
以实施例1～3中的胶原蛋白为检测对象，分别测试纯度、提取率、热变性。测试结果如表1所示：
表1胶原蛋白性能
实施例 提取率/％ 纯度/％ 热变性温度/℃
1 98.1 99.1 35.7
2 85.3 97.2 29.8
3 92.1 95.3 30.3
从表1测试结果可以看出，经本发明所述方法制备得到的胶原蛋白提取率高、纯度高，提取胶原蛋白过程中，酸性溶液对产物具有很大的影响，利用盐酸/乙酸混合溶液比利用单一酸性溶液的提取效果好。
实验例2：接枝率测试：
以实施例1、5～8中的环氧化物接枝后的胶原蛋白为检测对象，进行接枝率测试，通过下述公式(2)计算接枝率(GD/％)，
Figure BDA0002603994350000091
式(2)中，m1是环氧化物接枝后的胶原蛋白的质量(g)，m0是未经环氧化物接枝后的胶原蛋白的质量(g)。
测试结果可知，实施例1、5～8的接枝率分别为23.2％、12.4％、19.1％、25.7％、28.2％，实施例1和实施例6、7中的接枝共聚物具有本申请合适的接枝率(18～26％)，改变环氧化物和胶原蛋白的添加量会改变环氧化物的接枝率，接枝率的过高或过低均会对终产物胶原蛋白植入物产生影响。
实验例3：生物安全性测试：
以实施例1～16中的胶原蛋白植入物为检测对象，进行生物安全性测试，测试方法如下：
将胶原蛋白植入物剪成约宽1mm、长10mm尺寸，用75％酒精消毒；将12天的新生大鼠分为16组，每组10只，然后以无菌手术法将胶原蛋白植入物植入大鼠左臀肌肉中，观察动物在28天内是否有病变或死亡等不良反应，在试验结束日(植入28天后)，将动物人道牺牲，取下围绕测试物的肌肉组织并进行肉眼巨观观察。
测试结果发现，在所有试验动物中，植入手术皆相当成功，在28天的观察期间并无任何症状，亦无任何动物死亡；在最后一天的肌肉巨观观察结果显示，所有试验组皆无观察到有明显的病变或症状；结果表明，经由本发明所述方法制备得到的胶原蛋白植入物可安全使用。
实验例4：钙化测试：
以实施例1～16中的胶原蛋白植入物为检测对象，进行钙化测试，测试方法如下：
将胶原蛋白皮下注射到12天的新生大鼠体内，大鼠断奶，每天按每公斤大鼠体重给与含有332mg钙、236mg磷、9.6mg铁、60UI维生素D3的部分谷物组成的食物，不限制饮水；10个月后，将植入样品取出，清洗、冻干、称重，将冻干后的样品在95℃下、1mL70％的浓硝酸中消化约15min，然后用超纯水将介质定容到5mL，用火焰原子分光光度计分析样品中的钙。测试结果如图2所示。
观察图2可以看出，本发明所述方法制备得到的胶原蛋白植入物，钙化低，对比实施例1和5～9可明显看出，胶原蛋白与环氧化物的接枝共聚有助于减少胶原蛋白分子中游离的胺官能团，从而减少钙化的产生；对比实施例1和4可以看出，重度脱水处理对减少钙化的产生也具有明显的影响，这是因为重度脱水导致胶原蛋白分子间接枝，减少了游离羧基和胺官能团，从而减少了钙化的产生。
实验例5：体内生物降解性测试：
以实施例1～16中的胶原蛋白植入物为检测对象，进行体内生物降解性测试，测试方法如下：
选用封闭群纯系雄性SD大鼠作为试验动物，在背部皮下为植入位点，每个植入点植入一片直径5mm的胶原蛋白，分别在第1、2、4、8、12周分别处死动物，每次2只，观察胶原蛋白残留情况。
测试结果显示，前两周胶原蛋白植入物降解缓慢；两周后，实施例10和16的胶原蛋白植入物降解速度明显加快，至6周周末肉眼已经无法观察到植入物；从第四周开始，其他实施例的胶原蛋白植入物降解速率开始加快，至12周周末时，肉眼已看不出植片；结果表明，无论是环氧化物的接枝共聚、聚乳酸-羟基乙酸的包覆均会对胶原蛋白植入物的降解速率产生影响。
上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术，故在此不再详细赘述。
本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的精神或者超越所附权利要求书所定义的范围。
尽管对本发明已作出了详细的说明并引证了一些具体实施例，但是对本领域熟练技术人员来说，只要不离开本发明的精神和范围可作各种变化或修正是显然的。
虽然上述具体实施方式已经显示、描述并指出应用于各种实施方案的新颖特征，但应理解，在不脱离本公开内容的精神的前提下，可对所说明的装置或方法的形式和细节进行各种省略、替换和改变。另外，上述各种特征和方法可彼此独立地使用，或可以各种方式组合。所有可能的组合和子组合均旨在落在本公开内容的范围内。上述许多实施方案包括类似的组分，并且因此，这些类似的组分在不同的实施方案中可互换。虽然已经在某些实施方案和实施例的上下文中公开了本发明，但本领域技术人员应理解，本发明可超出具体公开的实施方案延伸至其它的替代实施方案和/或应用以及其明显的修改和等同物。因此，本发明不旨在受本文优选实施方案的具体公开内容限制。

Claims (10)

1.一种胶原蛋白植入物，其特征在于，所述胶原蛋白植入物为聚乳酸-羟基乙酸共聚物包裹的胶原蛋白基植入物，其中，
聚乳酸-羟基乙酸共聚物中乳酸含量不低于70％；
胶原蛋白基含量为60～80％。
2.根据权利要求1所述胶原蛋白植入物，其特征在于，所述胶原蛋白经由包括下述步骤的方法制备得到：
1)预处理：将1重量份干燥脱水后的鱼皮研磨搅碎，加入15～20重量份的正己烷脱脂(质量分数为6～12％)，0～4℃搅拌8～12小时后排除废液，超纯水清洗干净后加入5～10重量份的1.0～2.0mol/L的酸性溶液浸泡至少12h，然后用超纯水清洗干净备用；
2)提取：将预处理好的鱼皮与10～15重量倍的超纯水混合，60～70℃条件下搅拌2～6h，然后加入胃蛋白酶，加入0.5～1.0mol/L的HCl溶液调节pH至1.6～2.2，30～37℃下提取4～10h，得胶原蛋白粗提物；
3)纯化：将胶原蛋白粗提物离心，弃沉淀，往上清液中加入终浓度0.5～1.0mol/L的NaCl，混合均匀后静置20～24h，再离心，最后的沉淀在0～4℃干燥得胶原蛋白。
3.根据权利要求2所述胶原蛋白植入物，其特征在于，所述制备胶原蛋白的步骤1)中，酸性溶液是指盐酸/有机酸混合酸，其中，有机酸为乙酸、柠檬酸、苹果酸、酒石酸的一种，盐酸/有机酸混合比为1:0.2～0.6。
4.权利要求1～3任一项所述胶原蛋白植入物的制备方法，其特征在于，包括下述步骤：
1)将胶原蛋白置于20～24℃的真空炉中，升高温度至100～110℃，处理3～5d后得脱水胶原蛋白；
2)将脱水胶原蛋白加入到5～10重量倍的超纯水中，搅拌溶解，升高温度至70～80℃，然后加入0.05～0.2重量份的碱性溶液，温度升高至90～95℃，加入环氧化物，搅拌反应3～5h，温度降至室温，继续搅拌反应4～10h；
3)将聚乳酸-羟基乙酸共聚物溶于10～15重量倍的二氯甲烷溶液中，然后加入步骤2)得到的溶液，搅拌分散，1.5～3h后升温至50～60℃使二氯甲烷挥发；
4)反应产物用超纯水洗涤3～5次，干燥后即得。
5.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述步骤2)中碱性溶液为氢氧化钾、碳酸钾、碳酸氢钾、叔丁醇钾中的一种，碱性溶液浓度为1.0～2.0mol/L。
6.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述环氧化物为具有式(1)结构的单体：
Figure FDA0002603994340000021
其中，R为具有1～6个碳原子的直链或芳环结构的烷烃或烯烃。
7.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述步骤2)中环氧化物的接枝率为18～26％。
8.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述步骤3)中聚乳酸-羟基乙酸共聚物分子量是50～250KDa，共聚物中乳酸含量不低于70％，优选70～85％，更优选75～82％，最优选78％。
9.根据权利要求4所述方法，其特征在于，所述步骤3)中聚乳酸-羟基乙酸共聚物与胶原蛋白添加重量比为0.7～1.5:1。
10.权利要求1～9任一项所述方法制备得到的胶原蛋白植入物在制备手术辅助复原物中的应用。
CN202010733287.4A 2020-07-27 2020-07-27 胶原蛋白植入物及其在制备手术辅助复原物中的应用 Withdrawn CN112007212A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010733287.4A CN112007212A (zh) 2020-07-27 2020-07-27 胶原蛋白植入物及其在制备手术辅助复原物中的应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010733287.4A CN112007212A (zh) 2020-07-27 2020-07-27 胶原蛋白植入物及其在制备手术辅助复原物中的应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN112007212A true CN112007212A (zh) 2020-12-01

Family

ID=73499286

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010733287.4A Withdrawn CN112007212A (zh) 2020-07-27 2020-07-27 胶原蛋白植入物及其在制备手术辅助复原物中的应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN112007212A (zh)

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108744023B (zh) 一种丝素蛋白医用生物粘合剂及其制备方法
CN106421927A (zh) 矿化胶原/高分子复合多孔骨材料及其制备方法
CN106039416A (zh) 壳聚糖—丝胶蛋白复合生物支架及其制备方法和应用
CN110639050A (zh) 丝素纳米纤维和基于丝素纳米纤维的载银抗菌敷料的制备方法
CN113663137B (zh) 复合生物补片及其制备方法及应用
CN112023120A (zh) 一种可注射预灌装骨修复颗粒及其制备方法和应用
CN107198794B (zh) 具有活性离子释放功能的天然高分子生物活性创伤修复材料及其制备方法
CN101164626A (zh) 脱脂灭菌深低温同种异体骨的制备方法及应用
CN114099787A (zh) 可吸收生物膜、制法及其应用
CN105251061A (zh) 一种可生物降解的术后防粘连复合膜及其制备方法
CN112007212A (zh) 胶原蛋白植入物及其在制备手术辅助复原物中的应用
CN102989041A (zh) 一种复合人的骨髓间充质干细胞的甲壳素纤维增强胶原基骨组织工程支架及制备方法
CN108187139A (zh) 一种用于修复骨缺损的载药人工骨材料及其制备方法
CN108619552B (zh) 吸附GGTAl基因敲除猪胶原的可吸收创面修复材料及其制备方法
Nowacki et al. Are agricultural and natural sources of bio-products important for modern regenerative medicine? A review
CN111870739A (zh) 一种多功能改性壳聚糖自愈合水凝胶的制备方法及应用
CN114874479B (zh) 一种海绵状大孔水凝胶的制备方法及在抗菌中的应用
De Olyveira et al. Bacterial cellulose nanobiocomposites for periodontal disease
CN112336917A (zh) 一种可降解的植入型血管支架
CN106913899A (zh) 利用二次冷冻法制备植物多糖止血海绵
CN113521386A (zh) 一种可注射型含rhBMP-2的骨修复水凝胶及其制备方法
RU2433828C1 (ru) Инъекционный гетерогенный биополимерный гидрогель для заместительной и регенеративной хирургии и способ его получения
CN116869950B (zh) 一种降血压生物降解皮下埋植棒及其制备方法
CN115252909B (zh) 一种医用可降解复合材料及其制备方法
CN114366844B (zh) 一种明胶-壳聚糖-三七素复合止血膜材料及其制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WW01 Invention patent application withdrawn after publication
WW01 Invention patent application withdrawn after publication

Application publication date: 20201201