CN112005938B - 一种提高长牡蛎度夏存活率的制种方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉属于海洋生物技术中贝类遗传育种领域,具体地说,涉及一种提高长牡蛎度夏存活率的制种方法。该方法包括:亲本选择、选育系构建、稚贝优化和种质纯化等步骤。本发明利用牡蛎在不同发育阶段的抗性特征,在稚贝期和成贝期分别采用干露和高温两种极端急性环境胁迫对牡蛎进行高效筛查,提高了选育效率,并缩短了选育周期,显著提升牡蛎的度夏存活率。本方法具有实用性强、效果显著、易于推广的优点。通过本发明可获得度夏存活率高的牡蛎新品系种质,显著降低牡蛎养殖产业的系统风险。

Description

一种提高长牡蛎度夏存活率的制种方法
技术领域
本发明涉属于海洋生物技术中贝类遗传育种领域,具体地说,涉及一种提高长牡蛎度夏存活率的制种方法。
背景技术
长牡蛎是我国北方的传统养殖贝类,也是世界上养殖量最大、分布最广的牡蛎品种。长牡蛎通常在开放海域养殖,环境因素无法人为干预。近十几年来,长牡蛎的夏季大规模死亡问题在世界各地频繁发生,在部分国家海域的死亡率可达50%-90%,对牡蛎生产造成重大威胁,是牡蛎产业平稳健康发展的瓶颈因素。提高长牡蛎的度夏存活率是牡蛎产业的焦点问题,但由于长牡蛎度夏死亡的影响因素较为复杂,目前对引起死亡的具体因子尚无统一定论。传统育种方法一般采用病毒或高温等单因子胁迫进行选育,但存在育种周期长、费用高和目标针对性不强等问题。
发明内容
为了解决目前长牡蛎产业存在的度夏存活率低的问题,本发明提供一种可显著提升长牡蛎在夏季的度夏存活率,可为其新品种培育提供重要技术支持的制种方法。
为实现上述目的,本发明采用技术方案为:本发明提供一种提高长牡蛎度夏存活率的制种方法,包括(1)亲本选择、(2)选育系构建、(3)优化、(4)种质纯化等步骤,其特征在于:以潮下带海区水温为4-8℃、壳高大于5cm、性腺未发育的长牡蛎为备选亲本,而后对亲本进行高温应激后繁殖获得子代,在子代的稚贝和成贝阶段分别以干露和高温作为抗性特征,通过对抗性特征进行极端急性环境胁迫进而实现牡蛎筛查,而后重复上述筛查方式待遗传稳定,即获得度夏存活率高的长牡蛎新品系。
所述步骤(1)中亲本选择的方法为:以潮下带海区水温为4-8℃、壳高大于5cm、性腺未发育的长牡蛎为备选亲本;对亲本进行高温应激处理,待无死亡个体后将其置于潮下带海区进行育肥;
所述步骤(2)中选育系构建的步骤为:上述育肥个体在繁殖期前15-30天,分别收集每个个体的精子或卵子,采用群体交配方式繁育构建选育系群体;
所述步骤(3)中稚贝优化的步骤为:当稚贝壳高达到2-3cm时,将牡蛎从附着基上分离,并在16-18℃的海水中适应5-7天,去除牡蛎外壳表面海水后,在气温为28-30℃的干燥暗室内干露48h,取存活稚贝放置到潮下带海区养殖到成贝;
所述步骤(4)中种质纯化的步骤为:以步骤3的成贝为高度夏存活率选育系的候选亲本,重复步骤(1)-(3)直至获得遗传稳定,度夏存活率高的长牡蛎,即为新品系。
所述步骤(1)中高温应激处理为将牡蛎放到水温为41.5-42.5℃的海水中高温应激处理0.5-2小时后,放到水温为4-8℃的自然海水中,每8-12h挑拣死亡个体一次,经过反复处理,直至无死亡个体,待用。
所述步骤(1)中潮下带海区为水流速度为0.1-0.5m/s,低潮时水深4-10米,硅藻含量平均值在50cells/mL以上离岸1-4千米的海区。
所述步骤(2)中选育系构建时将收集每个个体的精子或卵子,采用群体交配,而后采用常规方式进行苗种培育,牡蛎稚贝密度控制在15-20个/片附着基,进行选育。
所述步骤(4)中以步骤3的成贝为亲本,重复步骤(1)-(3)1-2次,待遗传稳定,度夏存活率高的长牡蛎,即为新品系。
本发明所具有的有益效果
本发明利用牡蛎在不同发育阶段的抗性特征,在稚贝期和成贝期分别采用干露和高温两种极端急性胁迫因子对牡蛎进行高效筛查,提高了选育效率,并缩短了选育周期,显著提升牡蛎的度夏存活率。本方法具有实用性强、效果显著、易于推广的优点。通过本发明可以获得度夏存活率高的牡蛎新品系种质,显著降低牡蛎养殖产业的系统风险。
具体实施方式
下面结合具体实施例,进一步阐述本发明。应理解,以下实施例是对本发明的进一步说明,而不是对本发明的限制。此外应理解,在阅读了本发明讲授的内容之后,本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改,这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
本发明利用针对牡蛎抗性相关生理和生化指标发生显著的改变的高温和干露两个环境因子,在牡蛎不同的发育时期采用多种环境胁迫因子进行选择可显著提升度夏存活率选育的效率,可为提高长牡蛎的度夏存活率提供新的制种途径。
实施例1:
亲本选择:在青岛即墨区鳌山湾采集野生长牡蛎约5000只,当海水温度为4-8℃时,选择壳高大于5cm、性腺未发育的牡蛎为备选亲本放至中国科学院海洋研究所的贝类养殖实验室。
将牡蛎分离为单体并去除贝壳表面的污物,采用过滤海水在室内自然水温条件下适应14天。将牡蛎放到水温为42℃的海水中高温应激处理1小时后,使亲本在短期内经历低温到极端高温的温度胁迫,从而快速纯化亲本,而后放到自然海水中,并且每12h挑拣死亡个体一次到14天后无死亡个体,且连续72h无死亡个体后,统计存活率为36.75%,将存活个体装到牡蛎养殖笼中,放至青岛胶南的潮下带海区进行育肥作为实验组,使牡蛎迅速在4-8℃的自然海水环境中尽快恢复正常生理状态,从而避免高温期自然海区海水中其他细菌或病毒等因素对亲本选择的干扰。将未经高温应激的个体作为对照组同步育肥。
选育系构建:将上述实验组和对照组育肥个体分别在自然繁殖产卵前20天,选择性腺发育良好的个体,采用现有技术分别分辨雌雄性别。用500ml烧杯分别收集每个个体的精子或卵子,将卵子在海水中熟化1小时,并剔除污染了精子的个体,选取30个个体的精子和30个个体的卵子,将卵子等量混合后再均分为30份,然后用30个个体的精子分别与30份卵子受精,使每个个体均可获得等量的子代,从而扩大选育的基础群体数,降低后代遗传漂变和近交衰退的风险。当各组完成卵裂后将30份受精烧杯混合后孵化,选育系和对照组均采用群体交配的方式构建选育系G1。采用常规方式进行苗种培育,牡蛎稚贝密度控制在15-20个/片附着基。
稚贝优化:当实验组和对照组分别稚贝壳高长至达到2-3cm时,将牡蛎从附着基上分离,并在16-18℃的海水中暂养5-7天,取外壳完整,无附着物的牡蛎1378只。用吸水纸去除牡蛎外壳表面海水使牡蛎外壳保持同等干燥程度,在气温为30℃的干燥暗室内干露48h,定期将死亡个体取出避免死亡个体感染病菌影响其他牡蛎的存活,取存活的653只稚贝放置到青岛市古镇口湾的潮下带海区进行养殖作为高度夏存活率选育系的候选亲本。
种质纯化:上述获得候选亲本养殖在潮下带海区,待海水温度为4-8℃时,选择壳高长至大于5cm、性腺未发育的牡蛎采用步骤(1)的方法进行亲本的高温应激选择,然后采用步骤(2)的方法构建选育系G2,即可获得遗传稳定,度夏存活率显著提升的长牡蛎新品系。
对上述获得品系,进行度夏存活率测试:将实验组耐高温选育系和对照组采用吊绳养殖的方式进行稚贝养殖,在3-4月当壳高达到6cm时,将牡蛎分为单体,以20只/层的密度装到养殖笼中,放到即墨鳌山湾海区的潮下带进行度夏存活率的测试。2019年10月经过度夏后,选育系的度夏存活率为85.47%,对照组的度夏存活率为62.75%,选育系较对照组提高了36.21%。
实施例2:
亲本选择:在青岛即墨区鳌山湾的潮下带采集野生长牡蛎,当海水温度为4-8℃时,选择壳高大于5cm、性腺未发育的牡蛎为备选亲本放至中国科学院海洋研究所的贝类养殖实验室。
将牡蛎分离为单体并去除贝壳表面的污物,采用过滤海水在室内自然水温条件下适应14天。将1726只牡蛎放到水温为42℃的海水中高温应激处理1小时后,使亲本在短期内经历低温到极端高温的温度胁迫,从而快速纯化亲本,而后放到自然海水中。每12h挑拣死亡个体一次到14天后无死亡个体,且连续72h无死亡个体后,统计存活率为37.19%。将存活个体装到牡蛎养殖笼中,放至青岛胶南的潮下带海区进行育肥作为实验组,使牡蛎迅速在4-8℃的自然海水环境中尽快恢复正常生理状态,从而避免高温期自然海区海水中其他细菌或病毒等因素对亲本选择的干扰。将未经高温应激的个体作为对照组同步育肥。
选育系构建:将上述实验组和对照组育肥个体分别在自然繁殖产卵前20天,选择性腺发育良好的个体,采用现有技术分别分辨雌雄性别。用500ml烧杯分别收集每个个体的精子或卵子,将卵子在海水中熟化1小时,并剔除污染了精子的个体,选取30个个体的精子和30个个体的卵子,将卵子等量混合后再均分为30份,然后用30个个体的精子分别与30份卵子受精,使每个个体均可获得等量的子代,从而扩大选育的基础群体数,降低后代遗传漂变和近交衰退的风险。当各组完成卵裂后将30份受精烧杯混合后孵化,选育系和对照组均采用群体交配的方式构建选育系G1。采用常规方式进行苗种培育,牡蛎稚贝密度控制在15-20个/片附着基。
种质纯化:上述获得候选亲本养殖在潮下带海区,待海水温度为4-8℃时,选择壳高长至大于5cm、性腺未发育的牡蛎采用步骤(1)的方法进行亲本的高温应激选择,然后采用步骤(2)的方法构建选育系G2。
对上述获得的选育系,进行度夏存活率测试:将实验组耐高温选育系和对照组采用吊绳养殖的方式进行稚贝养殖,在3-4月当壳高达到6cm时,将牡蛎分为单体,以20只/层的密度装到养殖笼中,放到即墨鳌山湾海区的潮下带进行度夏存活率的测试。经过度夏后,选育系G2的度夏存活率为73.31%,对照组的度夏存活率为62.75%,选育系较对照组提高了16.82%。
实施例3:
亲本选择:在青岛超下带海区集野生长牡蛎约3000只,当海水温度为4-8℃时,选择壳高大于5cm、性腺未发育的牡蛎为备选亲本放至中国科学院海洋研究所的贝类养殖实验室。
将牡蛎分离为单体并去除贝壳表面的污物,采用过滤海水在室内自然水温条件下适应14天。将牡蛎放到水温为41℃的海水中高温应激处理2小时后,使亲本在短期内经历低温到极端高温的温度胁迫,从而快速纯化亲本,而后放到自然海水中,并且每12h挑拣死亡个体一次到14天后无死亡个体,且连续72h无死亡个体后,统计存活率为73.79%,将存活个体装到牡蛎养殖笼中,放至青岛胶南的潮下带海区进行育肥作为实验组,避免高温期自然海区海水中其他细菌或病毒等因素对亲本选择的干扰。将未经高温应激的个体作为对照组同步育肥。
选育系构建:将上述实验组和对照组育肥个体分别在自然繁殖产卵前20天,选择性腺发育良好的个体,采用现有技术分别分辨雌雄性别。用500ml烧杯分别收集每个个体的精子或卵子,将卵子在海水中熟化1小时,并剔除污染了精子的个体,选取30个个体的精子和30个个体的卵子,将卵子等量混合后再均分为30份,然后用30个个体的精子分别与30份卵子受精,使每个个体均可获得等量的子代,从而降低后代遗传漂变和近交衰退的风险。当各组完成卵裂后将30份受精烧杯混合后孵化,选育系和对照组均采用群体交配的方式构建选育系G1。采用常规方式进行苗种培育,牡蛎稚贝密度控制在15-20个/片附着基。
稚贝优化:当实验组和对照组分别稚贝壳高长至达到2-3cm时,将牡蛎从附着基上分离,并在16-18℃的海水中暂养5-7天,取外壳完整,无附着物的牡蛎320只。用吸水纸去除牡蛎外壳表面海水使牡蛎外壳保持同等干燥程度,在气温为28℃的干燥暗室内干露48h,定期将死亡个体取出,取存活的稚贝放置到青岛市古镇口湾的潮下带海区进行养殖作为选育系的候选亲本。
种质纯化:上述获得的候选亲本养殖在潮下带海区,待海水温度为4-8℃时,选择壳高长至大于5cm、性腺未发育的牡蛎采用步骤(1)的方法进行亲本的高温应激选择,然后采用步骤(2)的方法构建选育系G2,即可获得遗传稳定,度夏存活率显著提升的长牡蛎新品系。
对上述获得品系,进行度夏存活率测试:将实验组耐高温选育系和对照组采用吊绳养殖的方式进行稚贝养殖,在3-4月当壳高达到6cm时,将牡蛎分为单体,以20只/层的密度装到养殖笼中,放到即墨鳌山湾海区的潮下带进行度夏存活率的测试。经过度夏后,选育系的度夏存活率为71.58%,对照组的度夏存活率为62.75%,选育系较对照组提高了14.07%。
由上述各实施例可见,实施例1的度夏存活率远高于实施例2和实施例3,其中实施例1与2的主要技术差异为实施例2缺少稚贝干露处理,说明稚贝的干露处理可以提升子代的度夏存活率;实施例1与3的主要差异为实施例3的成贝高温应激温度为41℃,低于实施例1中的42℃,说明高温应激的温度必须在41.5-42.5℃的范围内才能获得理想的效果;因此,只有通过本专利规定的特定条件下的干露和高温胁迫,才能获得度夏存活率显著提升的长牡蛎新品系。
上述仅为发明的具体实施例,但本发明的设计构思并不局限于此,凡利用构思对本发明进行非实质性的改动,均应属于侵犯本发明保护范围的行为。

Claims (1)

1.一种提高长牡蛎度夏存活率的制种方法,包括亲本选择、选育系构建、优化、种质纯化步骤,其特征在于:以潮下带海区水温为4-8℃、壳高大于5cm、性腺未发育的长牡蛎为备选亲本,而后对亲本进行高温应激后繁殖获得子代,在子代的稚贝和成贝阶段分别以干露和高温作为抗性特征,通过对抗性特征进行极端急性环境胁迫进而实现牡蛎筛查,而后重复上述筛查方式待遗传稳定,即获得度夏存活率高的长牡蛎新品系;
具体为:
(1)亲本选择:以潮下带海区水温为4-8℃、壳高大于5cm、性腺未发育的长牡蛎为备选亲本;对亲本进行高温应激处理,待无死亡个体后将其置于潮下带海区进行育肥;
(2)选育系构建:上述育肥个体在繁殖期前15-30天,分别收集每个个体的精子或卵子,采用群体交配方式繁育构建选育系的群体;
(3)选育系子代稚贝优化:当稚贝壳高达到2-3cm时,将牡蛎从附着基上分离,并在16-18℃的海水中适应5-7天,去除牡蛎外壳表面海水后,在气温为28-30℃的干燥暗室内干露48h,取存活稚贝放置到潮下带海区养殖到成贝;
(4)种质纯化:以步骤3的成贝为高度夏存活率选育系的候选亲本,重复步骤(1)-(3)直至获得遗传稳定,度夏存活率高的长牡蛎,即为新品系;
所述步骤(1)高温应激处理为将长牡蛎放到水温为41.5-42.5℃的海水中高温应激处理0.5-2小时后,放到水温为4-8℃的自然海水中,每8-12h挑拣死亡个体一次,经过反复处理,直至无死亡个体,待用;
所述步骤(2)中选育系构建时将收集每个个体的精子或卵子,采用群体交配构建选育系群体,而后采用常规方式进行苗种培育,牡蛎稚贝密度控制在15-20个/片附着基,进行选育;
所述步骤(4)中以步骤3的成贝为亲本,重复步骤(1)-(3)1-2次,待遗传稳定,度夏存活率高的长牡蛎,即为新品系。
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