CN112004553A - 人抗pd-l1抗体的配制品 - Google Patents
人抗pd-l1抗体的配制品 Download PDFInfo
- Publication number
- CN112004553A CN112004553A CN201980027437.5A CN201980027437A CN112004553A CN 112004553 A CN112004553 A CN 112004553A CN 201980027437 A CN201980027437 A CN 201980027437A CN 112004553 A CN112004553 A CN 112004553A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- antibody
- seq
- amino acid
- acid sequence
- formulation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 201
- 238000009472 formulation Methods 0.000 title claims abstract description 126
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 title claims abstract description 38
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 36
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 36
- 238000000533 capillary isoelectric focusing Methods 0.000 claims description 35
- 238000012781 high pressure - size exclusion chromatography Methods 0.000 claims description 35
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 claims description 35
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims description 35
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims description 35
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 claims description 35
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 33
- QZNNVYOVQUKYSC-JEDNCBNOSA-N (2s)-2-amino-3-(1h-imidazol-5-yl)propanoic acid;hydron;chloride Chemical compound Cl.OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 QZNNVYOVQUKYSC-JEDNCBNOSA-N 0.000 claims description 32
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 32
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 24
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 22
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 19
- 108010074708 B7-H1 Antigen Proteins 0.000 claims description 15
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 claims description 13
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 claims description 10
- DPVHGFAJLZWDOC-PVXXTIHASA-N (2r,3s,4s,5r,6r)-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxane-3,4,5-triol;dihydrate Chemical group O.O.O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 DPVHGFAJLZWDOC-PVXXTIHASA-N 0.000 claims description 8
- 229940074409 trehalose dihydrate Drugs 0.000 claims description 8
- 150000004676 glycans Chemical group 0.000 claims description 7
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 6
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 6
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 claims description 6
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 6
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 5
- 239000012931 lyophilized formulation Substances 0.000 claims description 4
- 125000000487 histidyl group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C([H])=N1 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 44
- 102000008096 B7-H1 Antigen Human genes 0.000 claims 1
- 125000000185 sucrose group Chemical group 0.000 claims 1
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 53
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 28
- HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N α-D-glucopyranosyl-α-D-glucopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(O)C(O)C(O)C(CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 20
- HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N Trehalose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-WSWWMNSNSA-N 0.000 description 20
- HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N alpha,alpha-trehalose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 HDTRYLNUVZCQOY-LIZSDCNHSA-N 0.000 description 20
- 229940074410 trehalose Drugs 0.000 description 20
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 16
- 102100024216 Programmed cell death 1 ligand 1 Human genes 0.000 description 15
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 15
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 14
- 238000013456 study Methods 0.000 description 14
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 description 10
- 238000004704 ultra performance liquid chromatography Methods 0.000 description 10
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 9
- 238000000113 differential scanning calorimetry Methods 0.000 description 8
- 239000012537 formulation buffer Substances 0.000 description 8
- 230000002776 aggregation Effects 0.000 description 7
- 238000004220 aggregation Methods 0.000 description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 7
- 239000013020 final formulation Substances 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 7
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000013461 design Methods 0.000 description 6
- 229940126534 drug product Drugs 0.000 description 6
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 230000008859 change Effects 0.000 description 5
- 229940088679 drug related substance Drugs 0.000 description 5
- 108091007744 Programmed cell death receptors Proteins 0.000 description 4
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 4
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 230000008569 process Effects 0.000 description 4
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 4
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N Pyroglutamic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 3
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 3
- 239000012906 subvisible particle Substances 0.000 description 3
- 239000012905 visible particle Substances 0.000 description 3
- PXBFMLJZNCDSMP-UHFFFAOYSA-N 2-Aminobenzamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CC=C1N PXBFMLJZNCDSMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000003670 Carboxypeptidase B Human genes 0.000 description 2
- 108090000087 Carboxypeptidase B Proteins 0.000 description 2
- 238000005033 Fourier transform infrared spectroscopy Methods 0.000 description 2
- 102000005744 Glycoside Hydrolases Human genes 0.000 description 2
- 108010031186 Glycoside Hydrolases Proteins 0.000 description 2
- 101001117317 Homo sapiens Programmed cell death 1 ligand 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 2
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 description 2
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 230000003044 adaptive effect Effects 0.000 description 2
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 2
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002983 circular dichroism Methods 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000013401 experimental design Methods 0.000 description 2
- 238000012395 formulation development Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 2
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 2
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000009477 glass transition Effects 0.000 description 2
- 238000002868 homogeneous time resolved fluorescence Methods 0.000 description 2
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 2
- 238000012792 lyophilization process Methods 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- -1 polypropylene Polymers 0.000 description 2
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 description 2
- 238000007363 ring formation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000012723 sample buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000001370 static light scattering Methods 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- 102100025877 Complement component C1q receptor Human genes 0.000 description 1
- 101710200508 Complement component C1q receptor Proteins 0.000 description 1
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 description 1
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 238000003109 Karl Fischer titration Methods 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 102000001696 Mannosidases Human genes 0.000 description 1
- 108010054377 Mannosidases Proteins 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- OSKIPPQETUTOMW-YHLOVPAPSA-N N-[(2R,3R,4R,5S,6R)-5-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-5-[(2R,3S,4S,5R,6R)-4-[(2R,3S,4S,5S,6R)-3-[(2S,3S,4S,5S,6R)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-3-[(2R,3S,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-6-[[(2S,3S,4S,5R,6R)-6-[[(2S,3S,4S,5S,6R)-4,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-3-[(2R,3S,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxymethyl]-3,5-dihydroxy-4-[(2R,3S,4S,5S,6R)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxymethyl]-3,5-dihydroxyoxan-2-yl]oxy-4-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxy-2,4-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]acetamide Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NC(=O)C)[C@H](O)O[C@H](CO)[C@H]1O[C@H]1[C@H](NC(C)=O)[C@@H](O)[C@H](O[C@@H]2[C@H]([C@@H](O[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O[C@@H]3[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O3)O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]3[C@H]([C@@H](O[C@@H]4[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]4[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O[C@@H]4[C@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O4)O)O3)O)O2)O)[C@@H](CO)O1 OSKIPPQETUTOMW-YHLOVPAPSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N N-acelyl-D-glucosamine Natural products CC(=O)NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O OVRNDRQMDRJTHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N N-acetyl-beta-D-glucosamine Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O OVRNDRQMDRJTHS-FMDGEEDCSA-N 0.000 description 1
- MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N N-acetylglucosamine Natural products CC(=O)N[C@@H](C=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO MBLBDJOUHNCFQT-LXGUWJNJSA-N 0.000 description 1
- GHAZCVNUKKZTLG-UHFFFAOYSA-N N-ethyl-succinimide Natural products CCN1C(=O)CCC1=O GHAZCVNUKKZTLG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N N-ethylmaleimide Chemical compound CCN1C(=O)C=CC1=O HDFGOPSGAURCEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920002274 Nalgene Polymers 0.000 description 1
- 102000000447 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Human genes 0.000 description 1
- 108010055817 Peptide-N4-(N-acetyl-beta-glucosaminyl) Asparagine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 101710165315 Sialidase A Proteins 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000012086 alpha-L-Fucosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010061314 alpha-L-Fucosidase Proteins 0.000 description 1
- 238000003277 amino acid sequence analysis Methods 0.000 description 1
- VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N ammonium formate Chemical compound [NH4+].[O-]C=O VZTDIZULWFCMLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003945 anionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 1
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 102000007478 beta-N-Acetylhexosaminidases Human genes 0.000 description 1
- 108010085377 beta-N-Acetylhexosaminidases Proteins 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 230000006652 catabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000003093 cationic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000001186 cumulative effect Effects 0.000 description 1
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000001938 differential scanning calorimetry curve Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000397 disodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019800 disodium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 229950009791 durvalumab Drugs 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- 239000011544 gradient gel Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 102000048776 human CD274 Human genes 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical group 0.000 description 1
- 238000002013 hydrophilic interaction chromatography Methods 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000000899 immune system response Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 125000003010 ionic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000006317 isomerization reaction Methods 0.000 description 1
- 231100000225 lethality Toxicity 0.000 description 1
- 238000004895 liquid chromatography mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical group 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229950006780 n-acetylglucosamine Drugs 0.000 description 1
- 210000004967 non-hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 239000006174 pH buffer Substances 0.000 description 1
- 238000012510 peptide mapping method Methods 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000013341 scale-up Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000013458 shaking study Methods 0.000 description 1
- 238000003998 size exclusion chromatography high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910052938 sodium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011152 sodium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000588 tumorigenic Toxicity 0.000 description 1
- 230000000381 tumorigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000001195 ultra high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 229910021642 ultra pure water Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012498 ultrapure water Substances 0.000 description 1
- 238000012431 visual particle testing Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
- A61K39/39591—Stabilisation, fragmentation
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/22—Heterocyclic compounds, e.g. ascorbic acid, tocopherol or pyrrolidones
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2827—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against B7 molecules, e.g. CD80, CD86
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
- C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
- C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
- C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
- C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
- C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
本披露内容涉及针对人抗PD‑L1的抗体如德瓦鲁单抗的配制品和组合物。
Description
背景
1.技术领域
本披露内容涉及针对人抗PD-L1的抗体如德瓦鲁单抗的配制品和组合物。
2.背景技术
程序性死亡配体1(PD-L1)也称为B7H1，是一种40kDa、对抗癌免疫力产生了主要障碍的跨膜蛋白。PD-L1与程序性死亡受体(PD-1)的结合使T细胞失活，保护肿瘤细胞并抑制免疫系统的检测，从而允许癌细胞不受抑制地增殖。PD-L1还与CD80(一种共刺激分子)结合。
多种致瘤的和活化的免疫细胞类型天然表达PD-L1，包括抗原呈递细胞、巨噬细胞、单核细胞、B细胞、T细胞和非造血细胞。此外，炎性细胞因子，如干扰素γ(IFNγ)，可以诱导PD-L1表达。例如，活化的T细胞产生IFNγ，它是PD-L1最有效的诱导剂。由IFNγ诱导的PD-L1表达促进肿瘤保护，这是一种被称为适应性免疫抗性的机制。
用于对抗适应性免疫抗性和PD-L1致死性的一种策略是使用抗PD-L1抗体。与该方法一致，可以使用抗PD-L1抗体德瓦鲁单抗(其是一种149kDa、破坏PD-L1与PD-1结合的亲和力优化的抗PD-L1单克隆IgGl三重突变体(TM))来消除PD-L1对细胞毒性T细胞的免疫抑制作用。结果是减弱了促进肿瘤生长的负抑制信号和增强抗肿瘤免疫力(增强免疫系统杀死肿瘤细胞的应答)。
重要的是，保留液体药物物质和冻干药物产品稳定性的抗PD-L1抗体缓冲液配制品对于抗PD-L1抗体的有效性是至关重要的。
发明内容
在一个方面，本披露内容提供了抗体配制品，其包含：40mg/mL至50mg/mL的抗PD-L1抗体、15mM至35mM缓冲液、255mM至275mM二糖、0.01％(w/v)至0.05％(w/v)表面活性剂，并且其中该配制品的pH为约pH 5.5至约pH 7.2。
在一个方面，本披露内容提供了抗体配制品，其包含：50mg/mL的人抗PD-L1抗体、26mM组氨酸/组氨酸-HCl缓冲液、275mM海藻糖脱水物、0.02％(w/v)聚山梨醇酯80，并且其中该配制品的pH为pH 6.0。
在一个方面，本披露内容提供了抗体配制品，其包含：50mg/mL的人抗PD-L1抗体、25mM组氨酸/组氨酸-HCl缓冲液、265mM海藻糖脱水物、0.02％(w/v)聚山梨醇酯80，并且其中该配制品的pH为约pH 5.5。
在一个方面，本披露内容提供了抗体配制品，其包含：50mg/mL的人抗PD-L1抗体、25mM组氨酸/组氨酸-HCl缓冲液、265mM海藻糖脱水物、0.02％(w/v)聚山梨醇酯80，并且其中该配制品的pH为约pH 6.5。
在一个方面，本披露内容提供了抗体配制品，其包含：50mg/mL的人抗PD-L1抗体、25mM组氨酸/组氨酸-HCl缓冲液、265mM海藻糖脱水物、0.04％(w/v)聚山梨醇酯80，并且其中该配制品的pH为约pH 6.0。
在一个方面，本披露内容提供了抗体配制品，其包含：50mg/mL的人抗PD-L1抗体、25mM组氨酸/组氨酸-HCl缓冲液、265mM蔗糖、0.02％(w/v)聚山梨醇酯80，并且其中该配制品的pH为约pH 6.0。
在一个方面，本披露内容提供了组合物，其包含：抗PD-L1抗体，该抗PD-L1抗体含有具有与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链和具有与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链；和主要形式的抗体，该主要形式的抗体占该组合物中蛋白质的大于或等于45％，如使用该组合物的毛细管等电聚焦(cIEF)所测量的。
在一个方面，本披露内容提供了组合物，其包含：抗PD-L1抗体，该抗PD-L1抗体含有具有与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链和具有与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链；主要形式的抗体，该主要形式的抗体占该组合物中蛋白质的大于或等于45％，如使用该组合物的cIEF所测量的；以及酸性形式的抗体，该酸性形式的抗体占该组合物中蛋白质的45％至50％，如使用该组合物的cIEF所测量的。
在一个方面，本披露内容提供了组合物，其包含：抗PD-L1抗体，该抗PD-L1抗体含有具有与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链和具有与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链；主要形式的抗体，该主要形式的抗体占该组合物中蛋白质的大于或等于45％，如使用该组合物的cIEF所测量的；以及碱性形式的抗体，该碱性形式的抗体占该组合物中蛋白质的18％至23％，如使用该组合物的cIEF所测量的。
在一个方面，本披露内容提供了组合物，其包含：抗PD-L1抗体，该抗PD-L1抗体含有具有与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链和具有与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链；主要形式的抗体，该主要形式的抗体占该组合物中蛋白质的大于或等于45％，如使用该组合物的cIEF所测量的；酸性形式的抗体，该酸性形式的抗体占该组合物中蛋白质的45％至50％，如使用该组合物的cIEF所测量的；以及碱性形式的抗体，该碱性形式的抗体占该组合物中蛋白质的18％至23％，如使用该组合物的cIEF所测量的。
在一个方面，本披露内容提供了组合物，其包含：抗PD-L1抗体，该抗PD-L1抗体含有具有与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链和具有与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链；并且该抗PD-L1抗体的聚糖结构包含G0f、G1f、G2f和G0糖型。
在一个方面，本披露内容提供了组合物，其包含：抗PD-L1抗体，该抗PD-L1抗体含有具有与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链和具有与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链；如通过高压尺寸排阻色谱法(HP-SPEC)测量的，1.5％-2.5％的抗PD-L1抗体形成聚集体；以及如通过HP-SEC测量的，97％-98％的抗PD-L1抗体以单体存在。
附图说明
图1示出了德瓦鲁单抗配制品开发活动的示意图。
图2示出了3mg/mL的德瓦鲁单抗在配制品缓冲液(26mM组氨酸/组氨酸-HCl、275mM海藻糖脱水物、0.02％(w/v)聚山梨醇酯80，pH 6.0)中的差示扫描量热(DSC)图谱，其中Tm1如图所示为64.5℃并且Tm2如图所示为73.04℃。
图3是德瓦鲁单抗在配制品缓冲液(26mM组氨酸/组氨酸-HCl、275mM海藻糖脱水物、0.02％(w/v)聚山梨醇酯80，pH 6.0)中的毛细管等电聚焦(cIEF)图谱。四个峰的pI范围在8.3至8.8之间。主峰的pI为8.6。
图4显示了德瓦鲁单抗克隆1或克隆2在5℃或40℃在配制品缓冲液(26mM组氨酸/组氨酸-HCl、275mM海藻糖脱水物、0.02％(w/v)聚山梨醇酯80，pH 6.0)中孵育1个月后的液体稳定性。
图5A-5C描绘了德瓦鲁单抗在5℃(图5A)、25℃(图5B)和40℃(图5C)储存三个月后的电泳图。在25℃和40℃储存3个月后，还存在额外的焦谷氨酸峰。
图6显示了冷冻干燥显微镜检查，其示出了德瓦鲁单抗在配制品缓冲液(26mM组氨酸/组氨酸-HCl、275mM海藻糖脱水物、0.02％(w/v)聚山梨醇酯80，pH 6.0)中的崩解开始温度和完全崩解温度。
图7描绘了DSC热谱图，其示出了德瓦鲁单抗在配制品缓冲液(26mM组氨酸/组氨酸-HCl、275mM海藻糖脱水物、0.02％(w/v)聚山梨醇酯80，pH 6.0)中的玻璃化转变(Tg′)温度。
图8是设计空间生成的过程模型。实验设计的运行改变了初始干燥温度、压力、初始干燥时间和最高产品温度。标出了循环中点(以点表示)和围绕腔室压力和搁板温度的过程稳健性(浅色、三角区)。
图9显示了德瓦鲁单抗NMF冻干运行数据，其中皮拉尼真空计在大约103小时处发生收敛(Δ10微巴)，进入115小时的干燥步骤。这相当于10％的安全裕度。
图10显示了在Amsco冷冻干燥机(Amsco freeze-dryer)中进行的更大规模的NMF冻干运行。结果示出了产品热电偶在指定的初始时间内的收敛。
图11显示了德瓦鲁单抗震动研究的微流成像(MFI)结果。
图12显示了德瓦鲁单抗上2-AB标记的寡糖的超高效液相色谱(UPLC)峰鉴别。
具体实施方式
本披露内容涉及针对抗PD-L1的抗体如德瓦鲁单抗的配制品和组合物。
如根据本披露内容所使用，除非另外指出，以下术语应理解为具有以下含义。除非上下文另有要求，单数术语应包括复数形式，并且复数术语应包括单数形式。
如本文所用，术语“抗体”是指能够识别并特异性结合抗原的蛋白质。普通的或常规的哺乳动物抗体包含四聚体，其通常由两对相同的多肽链构成，每对由一条“轻”链(通常具有约25kDa的分子量)和一条“重”链(通常具有约50-70kDa的分子量)组成。如本文所用，术语“重链”和“轻链”是指具有足够的可变结构域序列以赋予对靶抗原的特异性的任何免疫球蛋白多肽。每条轻链和重链的氨基末端部分典型地包括通常负责抗原识别的约100个至110个或更多个氨基酸的可变结构域。每条链的羧基末端部分典型地定义负责效应子功能的恒定结构域。因此，在天然存在的抗体中，全长重链免疫球蛋白多肽包括可变结构域(VH)和三个恒定结构域(CH1、CH2和CH3)以及CH1和CH2之间的铰链区，其中VH结构域位于多肽的氨基末端且CH3结构域位于羧基末端，并且全长轻链免疫球蛋白多肽包括可变结构域(VL)和恒定结构域(CL)，其中VL结构域位于多肽的氨基末端且CL结构域位于羧基末端。
在全长轻链和重链内，可变结构域和恒定结构域通常由约12个或更多个氨基酸的“J”区域连接，重链还包括约10个以上氨基酸的“D”区域。每个轻/重链对的可变区通常形成抗原结合位点。天然存在的抗体的可变结构域通常表现出由三个高变区(也称为互补决定区或CDR)连接的相对保守的框架区(FR)的相同的一般结构。来自每对的两条链的CDR通常通过框架区比对，这可以使得能够结合至特定表位。从氨基末端到羧基末端，轻链和重链可变结构域通常都包含结构域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。
本文披露的抗体配制品包含抗PD-L1抗体。在特定的实施例中，配制品包含30mg/mL、35mg/mL、40mg/mL、45mg/mL、50mg/mL、55mg/mL、或60mg/mL的抗PD-L1抗体。在其他实施例中，配制品包含40mg/mL至50mg/mL的抗PD-L1抗体。在其他实施例中，配制品包含50mg/mL的抗PD-L1抗体。在特定的实施例中，抗PD-L1抗体是人抗体。
本文披露的抗体配制品包含一种或多种缓冲液。如本文所用，“缓冲液”是指用于维持配制品的pH的赋形剂。在特定的实施例中，缓冲液是组氨酸/组氨酸-HCl缓冲液。缓冲液以约15mM、20mM、25mM或30mM的浓度存在。在特定的实施例中，缓冲液浓度为26mM。
在特定的实施例中，抗体配制品包含二糖。在某些实施例中，二糖是海藻糖二水合物或蔗糖。二糖以约250mM、255mM、260mM、265mM、270mM、275mM、或280mM的浓度存在。在特定的实施例中，二糖浓度为265mM。在其他实施例中，二糖浓度为275mM。
在特定的实施例中，抗体配制品包含表面活性剂。如本文所用，术语“表面活性剂”是指具有两亲结构的有机物质；即，此类物质由具有相反溶解度倾向的基团(典型地是油溶性烃链和水溶性离子基团)构成。表面活性剂可以根据表面活性部分的电荷分为阴离子型、阳离子型和非离子型表面活性剂。表面活性剂通常用作生物材料的不同药物配制品和制剂的润湿剂、乳化剂、增溶剂和分散剂。在特定的实施例中，表面活性剂是聚山梨醇酯80。表面活性剂以约0.001％至约0.5％(按体积计)的浓度存在。
在特定的实施例中，本文披露了抗体配制品，其包含：40mg/mL至50mg/mL的抗PD-L1抗体、15mM至35mM缓冲液、255mM至275mM二糖、0.01％(w/v)至0.05％(w/v)表面活性剂，并且其中该配制品的pH为约pH 5.5至约pH 7.2。在特定的实施例中，抗体配制品包含：50mg/mL的人抗PD-L1抗体、26mM组氨酸/组氨酸-HCl缓冲液、275mM海藻糖脱水物、0.02％(w/v)聚山梨醇酯80，并且其中该配制品的pH为约6.0。在其他实施例中，抗体配制品包含：50mg/mL的人抗PD-L1抗体、25mM组氨酸/组氨酸-HCl缓冲液、265mM海藻糖脱水物、0.02％(w/v)聚山梨醇酯80，并且其中该配制品的pH为约5.5。在其他实施例中，抗体配制品包含：50mg/mL的人抗PD-L1抗体、25mM组氨酸/组氨酸-HCl缓冲液、265mM海藻糖脱水物、0.02％(w/v)聚山梨醇酯80，并且其中该配制品的pH为约6.5。在其他实施例中，抗体配制品包含：50mg/mL的人抗PD-L1抗体、25mM组氨酸/组氨酸-HCl缓冲液、265mM海藻糖脱水物、0.04％(w/v)聚山梨醇酯80，并且其中该配制品的pH为约6.0。在其他实施例中，抗体配制品包含：50mg/mL的人抗PD-L1抗体、25mM组氨酸/组氨酸-HCl缓冲液、265mM蔗糖、0.02％(w/v)聚山梨醇酯80，并且其中该配制品的pH为约6.0。在其他实施例中，抗体配制品包含：50mg/mL的人抗PD-L1抗体、25mM组氨酸/组氨酸-HCl缓冲液、265mM蔗糖、0.02％(w/v)聚山梨醇酯80，并且其中该配制品的pH为约6.0。
在特定的实施例中，人抗PD-L1抗体包含含有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的轻链可变结构域和含有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的重链可变结构域。在其他实施例中，人抗PD-L1抗体包含具有SEQ ID NO：3的氨基酸序列的VH CDR1、具有SEQ ID NO：4的氨基酸序列的VH CDR2、具有SEQ ID NO：5的氨基酸序列的VH CDR3、具有SEQ ID NO：6的氨基酸序列的VLCDR1、具有SEQ ID NO：7的氨基酸序列的VL CDR2、和具有SEQ ID NO：8的氨基酸序列的VLCDR3。
在特定的实施例中，人抗PD-L1抗体包含含有与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有小于100％同一性的氨基酸序列的轻链可变结构域和含有与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有小于100％同一性的氨基酸序列的重链可变结构域。在其他实施例中，人抗PD-L1抗体包含轻链可变结构域和重链可变结构域，该轻链可变结构域含有与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有90％序列同一性、91％序列同一性、92％序列同一性、93％序列同一性、94％序列同一性、95％序列同一性、96％序列同一性、97％序列同一性、98％序列同一性、或99％序列同一性的氨基酸序列；该重链可变结构域含有与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有90％序列同一性、91％序列同一性、92％序列同一性、93％序列同一性、94％序列同一性、95％序列同一性、96％序列同一性、97％序列同一性、98％序列同一性、或99％序列同一性的氨基酸序列。
如本文所用，术语“MEDI4736”和“德瓦鲁单抗”是指选择性结合人抗PD-L1并阻断PD-L1与PD-1和CD80受体结合的抗体，如美国专利号8,779,108和9,493,565中所披露的，将所述文献各自通过引用以其全部内容并入本文。德瓦鲁单抗的片段可结晶(Fc)结构域在IgG1重链的恒定结构域中含有三重突变，该三重突变减少与负责介导抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)的补体组分C1q和Fcγ受体的结合。德瓦鲁单抗可以在体外解除PD-L1介导的对人T细胞活化的抑制，并且经由T细胞依赖性机制在异种移植物模型中抑制肿瘤生长。
如本文所用，短语“药物配制品”、“配制品”和“抗体配制品”可互换使用，并且是指包含抗PD-L1抗体和一种或多种合适的缓冲液和/或赋形剂的组合物。合适地，本文所描述的药物配制品是“药学上可接受的”，并且因此将满足联邦或州政府的管理机构所要求的或在美国药典、欧洲药典或其他公认的药典中列出的必要批准要求，以便用于动物，更具体地用于人类。
本文披露的抗体配制品可以配制为液体配制品、冷冻配制品、冻干配制品、或重构配制品。
冻干可经由在烘箱中干燥、真空离心或本领域技术人员已知的其他方式进行。冻干的德瓦鲁单抗在重构后仍保留抗PD-L1抗体的活性。
在包含抗PD-L1抗体的配制品的上下文中，如本文所用，术语“稳定性”和“稳定的”是指在给定的制造、制备、运输、以及储存条件下，配制品中的抗体对聚集、降解或片段化的抗性。“稳定的”配制品在给定的制造、制备、运输、以及储存条件下保留生物活性。与参考配制品相比，如通过高压尺寸排阻色谱法(HP-SEC)、静态光散射(SLS)、傅立叶变换红外光谱法(FTIR)、圆二色性(CD)、尿素展开技术(urea unfolding technique)、内源色氨酸荧光、差示扫描量热法、和/或ANS结合技术所测量的，抗体的稳定性可以通过聚集、降解、或片段化的程度来评估。包含人PD-L1抗体的配制品的整体稳定性可以通过不同免疫学测定来评估，包括例如使用分离的抗原分子的ELISA和放射免疫测定。
在特定的实施例中，如通过HP-SEC测定的，在40摄氏度下储存约1个月后，小于约1％的抗PD-L1抗体形成聚集体。在其他实施例中，如通过HP-SPEC测量的，在约40摄氏度下储存约1个月后，至少97％的人抗PD-L1抗体以单体存在。在其他实施例中，如通过HP-SPEC测量的，在约40摄氏度下储存约1个月后，至少99％的人抗PD-L1抗体以单体存在。在其他实施例中，如通过HP-SPEC测量的，在约5摄氏度下储存约1个月后，至少98％的人抗PD-L1抗体以单体存在。在特定的实施例中，抗体配制品在至少三个冷冻/解冻循环后仍维持稳定性。
在特定的实施例中，本文披露的组合物包含抗PD-L1抗体，其含有具有与SEQ IDNO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链和具有与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链；并且其中主要形式的抗体占该组合物中蛋白质的大于或等于45％，如使用该组合物的毛细管等电聚焦(cIEF)所测量的。在其他实施例中，本文披露的组合物包含抗PD-L1抗体，其含有具有与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链和具有与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链；其中主要形式的抗体占该组合物中蛋白质的大于或等于45％，如使用该组合物的cIEF所测量的；并且其中酸性形式的抗体占该组合物中蛋白质的45％至50％，如使用该组合物的cIEF所测量的。在其他实施例中，本文披露的组合物包含抗PD-L1抗体，其含有具有与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链和具有与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链；其中主要形式的抗体占该组合物中蛋白质的大于或等于45％，如使用该组合物的cIEF所测量的；并且其中碱性形式的抗体占该组合物中蛋白质的18％至23％，如使用该组合物的cIEF所测量的。在其他实施例中，本文披露的组合物包含抗PD-L1抗体，其含有具有与SEQ IDNO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链和具有与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链；其中主要形式的抗体占该组合物中蛋白质的大于或等于45％，如使用该组合物的cIEF所测量的；其中酸性形式的抗体占该组合物中蛋白质的45％至50％，如使用该组合物的cIEF所测量的；并且其中碱性形式的抗体占该组合物中蛋白质的18％至23％，如使用该组合物的cIEF所测量的。
在特定的实施例中，本文披露的组合物包含抗PD-L1抗体，其含有具有与SEQ IDNO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链和具有与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链；并且其中该抗PD-L1抗体的聚糖结构包含G0f、G1f、G2f和G0糖型。在其他实施例中，针对G0f、G1f、G2f和G0形式，抗PD-L1抗体的聚糖结构的含量大于约90％。在一些实施例中，抗PD-L1抗体的组合物包含约65％-75％的G0f含量、13％-23％的G1f含量、0-3％的G2f含量、和0-4％的G0含量。在其他实施例中，抗PD-L1抗体的组合物包含约71.9％的G0f含量、18.4％的G1f含量、1.5％的G2f含量、和1.9％的G0含量。
在特定的实施例中，本文披露的组合物包含抗PD-L1抗体，其含有具有与SEQ IDNO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链和具有与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链；其中如通过高压尺寸排阻色谱法(HP-SPEC)测定的，1.5％-2.5％的抗PD-L1抗体形成聚集体；并且其中如通过HP-SEC测量的，97％-98％的抗PD-L1抗体以单体存在。
在不限制本披露内容的情况下，以下出于说明目的描述了本披露内容的多个实施例。以下实例说明了本发明的具体实施例及其各种用途。对这些实施例的阐述仅出于解释目的，而不应视为限制本发明。
实例1
材料和方法
1.蛋白质浓度测定
通过在安捷伦UV-V分光光度计(Aligent UV-V spectrophotometer)上测量280nm处的吸光度来测定德瓦鲁单抗蛋白质浓度。在配制品缓冲液中进行稀释。通过使用1.55(mg/mL)-1cm-1的理论消光系数来计算蛋白质浓度。在测定子集中，将1.52(mg/mL)-1cm-1的实验系数用于计算中。
2.高压尺寸排阻色谱法(HP-SEC)分析
首先用0.1M磷酸二钠(含0.1M硫酸钠，pH 6.8)以1.0mL/分钟的流速等度洗脱用于HP-SEC分析的样品。在280nm的吸光度处检测洗脱的蛋白质。将结果报告为与所有其他峰相比产物单体峰的面积百分比。从报告的结果中排除了在大约12分钟时观察到的缓冲液相关峰。将早于单体峰洗脱的任何峰记录为聚集体百分比。将单体峰之后洗脱的峰记录为片段百分比。
3.目测分析
通过使用具有光背景和暗背景两者的灯箱检查玻璃小瓶的颜色、澄清度以及颗粒和纤维物质的存在，对样品进行目测检查。评估可见颗粒和澄清度。
4.经由高精度(HIAC)液体颗粒计数器进行可见颗粒分析
将样品用过滤的配制品缓冲液稀释至5mg/mL，然后允许在分析前静置30分钟。在三次超纯水冲洗的falcon管中制备样品。蛋白质浓度＜5mg/mL的样品被分析为纯的。使用Pacific Standard HIAC Royco 3000A和8通道颗粒计数器8000A获得每个样品的六个读数。将最后三个读数的平均值记录为最终亚可见颗粒计数。记录＞10-25μm的累积颗粒计数。
5.重量摩尔渗透压浓度和pH
使用Gonotec Osmomat 030-D渗透压计测量重量摩尔渗透压浓度。使用PHM220Lab pH计测量溶液的pH。
6.卡尔费舍尔(Karl Fischer)分析
使用卡尔费舍尔滴定法(梅特勒-托利多公司(Mettler Toledo))测量冷冻干燥配制品中残余水的存在。使用无水甲醇重构冷冻干燥材料。根据无水甲醇中的水量和总固体重量测定残余水。
7.毛细管等电聚焦(cIEF)
将样品用HPLC级水调节至0.25mg/mL。将样品在37℃下用羧肽酶B(CBP)消化10分钟，然后用1％甲基纤维素溶液、Pharmalyte(pH 3-10)、pI标记物9.46、和pI标记物5.85稀释。将样品加载到iCE280分析仪上，并在1500V下聚焦1分钟，然后在3000V下聚焦7分钟。使用EZChrom软件分析所得电泳图，并将其与参考标准进行比较。
8.还原性和非还原性凝胶电泳
通过还原性和非还原性凝胶电泳，使用采用蛋白质230LabChip技术(安捷伦公司(Agilent))的安捷伦2100生物分析器来分析德瓦鲁单抗。LabChip通道允许分离、染色、脱色和检测。将样品和标准品在PBS中调节至4mg/mL，并在60mM N-乙基马来酰亚胺(非还原性)或60mM二硫苏糖醇(还原性)的存在下与SDS变性样品缓冲液以1∶1混合。然后将样品加热、离心、在水中稀释并加载到LabChip上的孔中。在第一维中，分离具有与4％-20％梯度凝胶相当的分辨率的蛋白质。将蛋白质在第二维中按分子量分离。将存在于样品缓冲液中的荧光染料在633nm处进行激发。
9.差示扫描量热法
使用差示扫描量热法(DSC)测定熔融温度(Tm1)。
10.粘度
使用Anton Paar AMVn粘度计测量样品和缓冲液的粘度。在目标浓度下进行测量。
11.热点氨基酸序列分析
使用BLAZE软件分析德瓦鲁单抗的氨基酸序列，以鉴定热点或潜在修饰位点的氨基酸残基。基于其他单克隆抗体的经验，将热点反应性的风险评分指定为高、中或低，这与序列倾向标准相一致。
12.德瓦鲁单抗中N-联寡糖的鉴定
使用具有FLR检测器的Waters UPLC系统，鉴定了在超高效液相色谱(UPLC)中作为显著峰检测到的、德瓦鲁单抗中的N-联寡糖。将在26mM组氨酸/组氨酸-HCl、275mM海藻糖二水合物、0.02％(w/v)聚山梨醇酯80，pH 6.0中配制的德瓦鲁单抗参考标准品(10.2mg/mL；100μg)在50mM Tris缓冲液(pH 7.8)中重构至0.5mg/mL。将样品用2μL N-糖苷酶F(普洛麦格公司(Promega))消化，用荧光标签2-氨基苯甲酰胺(2-AB；西格玛奥德里奇公司(Sigma-Aldrich))标记，用HILIC SPE柱清洗，并洗脱到水中以进行UPLC概况分析(profiling)。将2-AB标记的寡糖用各种外切糖苷(包括岩藻糖苷酶、唾液酸酶A、甘露糖苷酶、β-半乳糖苷酶、和β-N-乙酰基己糖胺酶)进一步消化，以进行峰鉴别。
使用50mM甲酸铵，pH 4.4作为流动相A和100％乙腈作为流动相B，将样品注入到Waters UPLC系统上的Acquity
BEH聚糖柱(1.7μM，2.1x 150mm)中。获取数据并将经糖苷酶消化的样品的图谱与未消化的样品进行仔细比较，以鉴定聚糖及其寡糖键。
实例2
可开发性研究
按照可开发性研究测定德瓦鲁单抗配制品，该研究包括热点分析，熔融温度、等电点(pI)和稳定性的测定(图1)。
1.热点分析
德瓦鲁单抗在储存中的稳定性对于单克隆抗体的有效性至关重要。抗体储存的风险是活性的损失，其中主要降解途径是经由聚集进行。另外，由长期储存导致的氨基酸残基修饰可影响抗体的稳定性和活性。
通过均相时间分辨荧光(HTRF)评估德瓦鲁单抗的活性的损失。在高和低pH缓冲液两者中于40℃孵育1个月后，未观察到活性的损失。在40℃于pH 6.0缓冲液中1个月后，通过肽图分析检测到D54(G)处的仅痕量水平的天冬氨酸异构化。
2.熔融温度、等电点(pI)和稳定性的测定
使用配制品缓冲液中3mg/mL的德瓦鲁单抗的差示扫描量热法(DSC)来测定抗体的熔点。分别使用毛细管等电聚焦和高压尺寸排阻色谱法(HPSEC)测定德瓦鲁单抗的pI和稳定性。
德瓦鲁单抗的DSC图谱显示Tm1在64.5℃处且Tm2在73.04℃处(图2)。在德瓦鲁单抗的毛细管等电聚焦(cIEF)图谱中检测到范围为8.3-8.8的四个峰。主峰的等电点为8.6(图3)。液体稳定性研究表明，在5℃或40℃下孵育1个月后，克隆1和克隆2在默认配制品中是稳定的(图4)。可开发性研究结果总结于表1中。
表1.可开发性研究结果
实例3
冻干配制品
筛选了五种配制品以评估液体药物物质和冻干药物产品的稳定性。所筛选的配制品如表2中所示。
使用初始水平(即0.02％w/v)的P80。在随后的配制品筛选期间，在重构含0.02％(w/v)P80的配制品后观察到颗粒的情况下，对于冻干配制品还包括0.04％(w/v)P80(配制品4)。根据这项研究的数据，发现0.02％(w/v)P80是德瓦鲁单抗的最佳表面活性剂水平。
表2.所筛选的配制品
将配制品冻干用于配制品筛选研究。在Virtis Genesis 25EL冷冻干燥机中对配制品进行冷冻、退火、初级干燥和次级干燥。冻干循环参数提供于表3中。
表3.用于冻干配制品筛选的冻干循环参数
| 步骤 | 搁板温度(℃) | 压力(毫托) | 时间(分钟) |
| 冷冻 | -40 | N/A | 120 |
| 退火 | -8 | N/A | 60 |
| 初级干燥 | -25 | 100 | 升压测试控制 |
| 次级干燥 | 20 | 200 | 720 |
1.稳定性
在40℃下1个月后，所有冻干配制品的单体损失率均＜0.3％/月(表4A)。在5℃下，所有配制品的单体损失率/月均＜0.1％/月。在40℃下4周后，所有配制品在聚集方面都是等同的(表4B)。在40℃下4周后，配制品的任一中均不存在聚集(表4C)。
对所有五种配制品进行了冷冻-解冻研究。对配制品进行0、1和3个由在-70℃下冷冻和在环境温度下解冻组成的冷冻-解冻循环。在循环结束时，对样品进行目测检查并经由HP-SEC分析。HP-SEC结果表明，通过HP-SEC任何样品中的纯度均无显著变化。在三个循环后，所有样品几乎没有可见颗粒。
表4A.德瓦鲁单抗配制品的单体形成百分比
表4B.德瓦鲁单抗配制品的聚集百分比
表4C.德瓦鲁单抗配制品的聚集百分比
2.重构后稳定性
在5℃和25℃下储存长达24小时，对所有五种冻干配制品的重构后稳定性进行了测试。如通过SEC-HPLC评估的，五种配制品均未显示出可见颗粒数量的变化或单体纯度的显著降低。表5A中示出了在T0的结果，表5B中示出了在5℃下24小时的结果，并且表5C中示出了在25℃下24小时的结果。
表5A.重构后稳定性(T0)
表5B.重构后稳定性(在5℃下24hr)
表5C.重构后稳定性(在25℃下24hr)
3.对26mM组氨酸/组氨酸-HCl、275mM海藻糖脱水物、0.02％(w/v)聚山梨醇酯80，pH 6.0配制品中的德瓦鲁单抗进行冷冻-解冻研究
评估与反复冷冻/解冻循环有关的抗体结构降解以检查德瓦鲁单抗的稳定性。与此一致的是，使用冷冻-解冻研究测试德瓦鲁单抗的稳定性。
在配制品(26mM组氨酸/组氨酸-HCl、275mM海藻糖脱水物、0.02％(w/v)聚山梨醇酯80，pH 6.0)上进行德瓦鲁单抗未配制药物物质(UDS)的冷冻-解冻研究。将德瓦鲁单抗在8mL耐洁(Nalgene)瓶(填充5.6mL)或30mL Celsius Pak袋(填充20mL)中进行0、1和3个不受控制的冷冻-解冻循环。将耐洁瓶在-80℃下冷冻并将Celsius Pak袋在-40℃下冷冻，并将两者在环境温度下解冻。然后通过高压尺寸排阻色谱法(HP-SEC)分析对样品的纯度进行分析，通过A280测定蛋白质浓度，并在每个冷冻-解冻循环后评估目测外观。
发现德瓦鲁单抗在3个冷冻-解冻循环后保持稳定，如下表6A(耐洁瓶)和6B(Celsius Pak)中所示：
表6A.耐洁瓶中德瓦鲁单抗的冷冻/解冻结果
表6B.Celsius Pak中德瓦鲁单抗的冷冻/解冻结果
这些结果表明，德瓦鲁单抗在耐洁瓶和Celsius Paks两者中经历反复冷冻/解冻循环后是稳定的。
实例4：
焦谷氨酸的形成与检测
德瓦鲁单抗在重链和轻链上均具有N-末端谷氨酸。随时间推移，谷氨酸环化为焦谷氨酸。在25℃和40℃下储存三个月后，在cIEF测定中检测到为pI 8.8处的峰的该转化。在2℃-8℃下24个月后，该峰也出现(图4)。冻干和液体两种形式均发生了环化。产生了突变的德瓦鲁单抗，其显示环化对抗体的效力没有影响。
实例5：
最终冻干配制品的参数和稳定性
该26mM组氨酸/组氨酸-HCl、275mM海藻糖脱水物、0.02％(w/v)聚山梨醇酯80，pH6.0冻干配制品含有50mg/mL德瓦鲁单抗。表7示出了该26mM组氨酸/组氨酸-HCl、275mM海藻糖脱水物、0.02％(w/v)聚山梨醇酯80，pH 6.0配制品的参数，并且表8提供了最终配制品中冻干药物产品的稳定性。表9呈现了在聚丙烯管内最终配制品中冻干药物物质的溶解度概况。
表7. 26mM组氨酸/组氨酸-HCl、275mM海藻糖脱水物、0.02％(w/v)聚山梨醇酯80，pH 6.0配制品的药物产品参数
表8.最终配制品中冻干药物产品的稳定性概况
表9：在聚丙烯管内最终配制品中冻干药物物质的溶解度概况
实例6
冻干循环开发
冻干循环开发产生的参数示出于表10中。
表10：冻干循环开发结果的概述
冷冻干燥显微镜检查用于评估崩解开始(-33℃)和完全崩解(-27.3℃；图6)的冻干循环温度。通过差示扫描量热法(DSC；图7)确定玻璃化转变温度(Tg′)为-27.14℃。
采用实验设计(DoE)方法使用Design Expert 7产生冻干过程的设计空间模型。使用DoE方法可实现＜7天的稳健、保守循环。表11列出了所选的运行条件，它们代表实验空间的中点(围绕Tg’)和四个“角”。
表11.针对德瓦鲁单抗冻干循环开发的实验设计(DoE)
所有实验循环都具有与最终循环中所述相同的爬坡率(ramp rate)、冷冻温度和次级干燥条件。最终德瓦鲁单抗冻干循环条件如表12中所示。
表12.德瓦鲁单抗循环1最终冻干循环参数
开发冻干循环的主要标准是：(1)维持产品温度高于崩解温度(约等于Tg’)；(2)确保初级干燥时间不超过115小时，以使循环时间少于六天；(3)提供足以用于扩大规模的稳健性(2℃-3℃搁板温度和40毫托腔室压力)。
表11中的实验运行导致了冻干过程的设计空间。由五个实验运行产生的设计空间在图8中示出。简言之，测定了循环中点和围绕腔室和搁板温度的过程稳健性。来自NMFEdwards冷冻干燥机的数据显示了皮拉尼真空计在大约103小时处的收敛(Δ10微巴)，进入115小时的初级干燥步骤。这相当于大约10％的安全裕度(图9)。这与先前的大规模运行相一致，其中Amsco冷冻干燥机显示出产品热电偶在指定的初始时间内的收敛(图10)。
实例7
液体配制品开发
1.用于表面活性剂水平的优化的震动研究
经由小瓶中的震动研究评估聚山梨醇酯80的液体配制品适用性。将含有0、0.005％、0.01％、0.02％、0.03％、0.04％和0.05％(w/v)聚山梨醇酯80的样品放入管中，其中最坏情况下的气液体积比为6.5mL。将管在环境温度下以600rpm剧烈搅动四小时。然后通过目测分析、A280、BioA、HP-SEC和微流成像(MFI)检查样品。还分析了置于2℃-8℃下的对照未震动管。
如通过BioA和HP-SEC分析的，未观察到纯度百分比的变化。震动没有引起A280蛋白质浓度的变化。MFI分析表明，所有样品均具有＞10μm和＞25μm的低水平的亚可见颗粒(图11)。所有管中的亚可见颗粒水平总体较低，其中选择0.02％的聚山梨醇酯80作为液体配制品的最佳表面活性剂水平。
2.受控制的冷冻-解冻研究
对26mM组氨酸/组氨酸-HCl、275mM海藻糖脱水物、0.02％聚山梨醇酯80，pH 6.0配制品进行五个受控制的冷冻-解冻循环，在5℃下解冻并在-40℃下冷冻。在第五个冷冻/解冻循环结束时，测定纯度、目测外观、亚可见颗粒和蛋白质浓度。在第五个冷冻-解冻循环后，未观察到产品质量的显著变化(表13)。
表13.冷冻/解冻循环结果(26mM组氨酸/组氨酸-HCl、275mM海藻糖脱水物、0.02％聚山梨醇酯80，pH 6.0配制品)
3.配制品稳定性总结
表14提供了最终配制品中冻干药物产品的稳定性概况。结果表明，最终配制品中的冻干德瓦鲁单抗在长期储存后仍保持稳定。
表14：最终配制品中冻干药物产品的稳定性概况
实例8
N-联寡糖鉴定
德瓦鲁单抗的Fc区含有N-联寡糖链，该链附接至重链上Asn-301处的单个位点。德瓦鲁单抗上寡糖的结构表征对于理解产品的结构微异质性至关重要。当过程变化时，质量控制也很重要。
通过超高效液相色谱(UPLC)对从德瓦鲁单抗切割的、存在于2-AB标记的N-联寡糖图谱中的寡糖进行了表征，包括低丰度糖型在内。用如表15中所述的外切糖苷酶消化2-AB标记的寡糖以验证非还原性末端单糖残基。如表16中所示完成寡糖概况分析。使用LC/MS分析验证分子量。
表15：用于德瓦鲁单抗寡糖消化的样品制备
表16：UPLC寡糖概况分析的梯度
| 时间 | ％A | ％B |
| 初始 | 27 | 73 |
| 23 | 41 | 59 |
| 23.1 | 100 | 0 |
| 27.5 | 100 | 0 |
| 27.6 | 27 | 73 |
| 30 | 27 | 73 |
鉴定了在UPLC中作为显著峰检测到的德瓦鲁单抗中的N-联寡糖，并将结果示于图12中。德瓦鲁单抗的主要糖型是岩藻糖基化的双触角复合型寡糖，其不具有末端半乳糖残基(G0f)或具有单半乳糖基化(G1f)和双半乳糖基化(G2f)形式。次要复合糖型是未岩藻糖基化的G0和G1，无N-乙酰基-葡萄糖胺的截短的G0f和G0形式(GlcNAc)，唾液酸化的G1f和G2f形式(G1f+NAc、G2f+NAc、或G2f+2NAc)，以及等分结构G0fb和G1fb。取决于收获IgG时中国仓鼠卵巢(CHO)细胞的成熟度，还存在高甘露糖糖型(Man4、Man5、Man6、Man7、和Man8)。
应当理解，前述披露内容强调了本发明的某些特定实施例，并且等同于其的所有修改或替代都在如所附权利要求书所阐述的本发明的精神和范围内。
序列列表
Claims (35)
1.一种抗体配制品，其包含：
(a)40mg/mL至50mg/mL的抗PD-L1抗体；
(b)15mM至35mM缓冲液；
(c)255mM至275mM二糖；以及
(d)0.01％(w/v)至0.05％(w/v)表面活性剂；并且
其中该配制品的pH为pH 5.5至pH 7.2。
2.如权利要求1所述的抗体配制品，其中该抗PD-L1抗体包含：
(a)含有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的轻链可变结构域和含有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的重链可变结构域；或
(b)具有SEQ ID NO：3的氨基酸序列的VH CDR1；以及
具有SEQ ID NO：4的氨基酸序列的VH CDR2；以及
具有SEQ ID NO：5的氨基酸序列的VH CDR3；以及
具有SEQ ID NO：6的氨基酸序列的VL CDR1；以及
具有SEQ ID NO：7的氨基酸序列的VL CDR2；以及
具有SEQ ID NO：8的氨基酸序列的VL CDR3。
3.如权利要求1所述的抗体配制品，其中该缓冲液是组氨酸/组氨酸-HCl缓冲液。
4.如权利要求1所述的抗体配制品，其中该二糖是海藻糖二水合物。
5.如权利要求1所述的抗体配制品，其中该二糖是蔗糖。
6.如权利要求1所述的抗体配制品，其中该表面活性剂是聚山梨醇酯80。
7.如权利要求1-6中任一项所述的抗体配制品，其中该配制品是液体配制品、冷冻配制品、冻干配制品、或重构配制品。
8.如权利要求1所述的抗体配制品，其中如通过高压尺寸排阻色谱法(HP-SPEC)测量的，在40摄氏度下储存约1个月后，小于约1％的该抗PD-L1抗体形成聚集体。
9.如权利要求1所述的抗体配制品，其中如通过高压尺寸排阻色谱法(HP-SEC)测量的，在约40摄氏度下储存约1个月后，至少97％的该抗PD-L1抗体以单体存在。
10.如权利要求1所述的抗体配制品，其中如通过高压尺寸排阻色谱法(HP-SEC)测量的，在约40摄氏度下储存约1个月后，至少99％的该抗PD-L1抗体以单体存在。
11.如权利要求1所述的抗体配制品，其中如通过高压尺寸排阻色谱法(HP-SEC)测量的，在约5摄氏度下储存约1个月后，至少98％的该抗PD-L1抗体以单体存在。
12.如权利要求1所述的抗体配制品，其中该抗体配制品在至少三个冷冻/解冻循环后仍维持稳定性。
13.一种抗体配制品，其包含：
(a)50mg/mL的人抗PD-L1抗体；
(b)26mM组氨酸/组氨酸-HCl缓冲液；
(c)275mM海藻糖二水合物；以及
(d)0.02％(w/v)聚山梨醇酯80；并且
其中该配制品的pH为pH 6.0。
14.一种抗体配制品，其包含：
(a)50mg/mL的人抗PD-L1抗体；
(b)25mM组氨酸/组氨酸-HCl缓冲液；
(c)265mM海藻糖二水合物；以及
(d)0.02％(w/v)聚山梨醇酯80；并且
其中该配制品的pH为pH 5.5。
15.一种抗体配制品，其包含：
(a)50mg/mL的人抗PD-L1抗体；
(b)25mM组氨酸/组氨酸-HCl缓冲液；
(c)265mM海藻糖二水合物；以及
(d)0.02％(w/v)聚山梨醇酯80；并且
其中该配制品的pH为pH 6.5。
16.一种抗体配制品，其包含：
(a)50mg/mL的人抗PD-L1抗体；
(b)25mM组氨酸/组氨酸-HCl缓冲液；
(c)265mM海藻糖二水合物；以及
(d)0.04％(w/v)聚山梨醇酯80；并且
其中该配制品的pH为pH 6.0。
17.一种抗体配制品，其包含：
(a)50mg/mL的人抗PD-L1抗体；
(b)25mM组氨酸/组氨酸-HCl缓冲液；
(c)265mM蔗糖；以及
(d)0.02％(w/v)聚山梨醇酯80；并且
其中该配制品的pH为pH 6.0。
18.如权利要求13-17中任一项所述的抗体配制品，其中该人抗PD-L1抗体包含具有SEQID NO：1的氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的重链。
19.如权利要求13-17中任一项所述的抗体配制品，其中该人抗PD-L1抗体包含：
具有SEQ ID NO：3的氨基酸序列的VH CDR1；以及
具有SEQ ID NO：4的氨基酸序列的VH CDR2；以及
具有SEQ ID NO：5的氨基酸序列的VH CDR3；以及
具有SEQ ID NO：6的氨基酸序列的VL CDR1；以及
具有SEQ ID NO：7的氨基酸序列的VL CDR2；以及
具有SEQ ID NO：8的氨基酸序列的VL CDR3。
20.如权利要求13-17中任一项所述的抗体配制品，其中该配制品是液体配制品、冷冻配制品、冻干配制品、或重构配制品。
21.如权利要求13-17中任一项所述的抗体配制品，其中如通过高压尺寸排阻色谱法(HP-SPEC)测定的，在40摄氏度下储存约1个月后，小于约1％的该人抗PD-L1抗体形成聚集体。
22.如权利要求13-17中任一项所述的抗体配制品，其中如通过高压尺寸排阻色谱法(HP-SEC)测量的，在约40摄氏度下储存约1个月后，至少97％的该人抗PD-L1抗体以单体存在。
23.如权利要求13-17中任一项所述的抗体配制品，其中如通过高压尺寸排阻色谱法(HP-SEC)测量的，在约40摄氏度下储存约1个月后，至少99％的该人抗PD-L1抗体以单体存在。
24.如权利要求13-17中任一项所述的抗体配制品，其中如通过高压尺寸排阻色谱法(HPSEC)测量的，在约5摄氏度下储存约1个月后，至少98％的该人抗PD-L1抗体以单体存在。
25.如权利要求13-17中任一项所述的抗体配制品，其中该抗体配制品在至少三个冷冻/解冻循环后仍维持稳定性。
26.一种组合物，其包含：
(a)抗PD-L1抗体，其含有具有与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链和具有与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链；以及
(b)主要形式的该抗体，其占该组合物中蛋白质的大于或等于45％，如使用该组合物的毛细管等电聚焦(cIEF)所测量的。
27.一种组合物，其包含：
(a)抗PD-L1抗体，其含有具有与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链和具有与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链；
(b)主要形式的该抗体，其占该组合物中蛋白质的大于或等于45％，如使用该组合物的cIEF所测量的；以及
(c)酸性形式的该抗体，其占该组合物中蛋白质的45％至50％，如使用该组合物的cIEF所测量的。
28.一种组合物，其包含：
(a)抗PD-L1抗体，其含有具有与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链和具有与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链；
(b)主要形式的该抗体，其占该组合物中蛋白质的大于或等于45％，如使用该组合物的cIEF所测量的；以及
(c)碱性形式的该抗体，其占该组合物中蛋白质的18％至23％，如使用该组合物的cIEF所测量的。
29.一种组合物，其包含：
(a)抗PD-L1抗体，其含有具有与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链和具有与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链；
(b)主要形式的该抗体，其占该组合物中蛋白质的大于或等于45％，如使用该组合物的cIEF所测量的；
(c)酸性形式的该抗体，其占该组合物中蛋白质的45％至50％，如使用该组合物的cIEF所测量的；以及
(d)碱性形式的该抗体，其占该组合物中蛋白质的18％至23％，如使用该组合物的cIEF所测量的。
30.一种组合物，其包含：
(a)抗PD-L1抗体，其含有具有与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链和具有与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链；以及
(b)该抗PD-L1抗体的聚糖结构包含G0f、G1f、G2f和G0糖型。
31.如权利要求30所述的组合物，其中针对G0f、G1f、G2f和G0糖型，该抗PD-L1抗体的聚糖结构的含量大于90％。
32.如权利要求30所述的组合物，其中该抗PD-L1抗体包含71.9％的G0f含量、18.4％的G1f含量、1.5％的G2f含量、和1.9％的G0含量。
33.一种组合物，其包含：
(a)抗PD-L1抗体，其含有具有与SEQ ID NO：1的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的轻链和具有与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有至少90％同一性的氨基酸序列的重链；
(b)如通过高压尺寸排阻色谱法(HP-SPEC)测定的，1.5％-2.5％的该抗PD-L1抗体形成聚集体；以及
(c)如通过HP-SEC测量的，97％-98％的该抗PD-L1抗体以单体存在。
34.如权利要求26-33中任一项所述的组合物，其中该PD-L1抗体包含：
具有SEQ ID NO：3的氨基酸序列的VH CDR1；以及
具有SEQ ID NO：4的氨基酸序列的VH CDR2；以及
具有SEQ ID NO：5的氨基酸序列的VH CDR3；以及
具有SEQ ID NO：6的氨基酸序列的VL CDR1；以及
具有SEQ ID NO：7的氨基酸序列的VL CDR2；以及
具有SEQ ID NO：8的氨基酸序列的VL CDR3。
35.一种抗体配制品，其包含：
(a)50mg/mL的人抗PD-L1抗体；
(b)26mM组氨酸/组氨酸-HCl缓冲液；
(c)275mM海藻糖二水合物；以及
(d)0.02％(w/v)聚山梨醇酯80；并且
其中该配制品的pH为pH 6.0，并且其中该人抗PD-L1抗体包含具有SEQ ID NO：1的氨基酸序列的轻链和具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的重链。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201862662324P | 2018-04-25 | 2018-04-25 | |
| US62/662324 | 2018-04-25 | ||
| PCT/EP2019/060498 WO2019206987A1 (en) | 2018-04-25 | 2019-04-24 | Formulations of human anti-pd-l1 antibodies |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN112004553A true CN112004553A (zh) | 2020-11-27 |
Family
ID=66349513
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201980027437.5A Pending CN112004553A (zh) | 2018-04-25 | 2019-04-24 | 人抗pd-l1抗体的配制品 |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20210054079A1 (zh) |
| EP (1) | EP3784279A1 (zh) |
| JP (1) | JP2021522209A (zh) |
| KR (1) | KR20210005096A (zh) |
| CN (1) | CN112004553A (zh) |
| AR (1) | AR115365A1 (zh) |
| AU (1) | AU2019258330A1 (zh) |
| BR (1) | BR112020020390A2 (zh) |
| CA (1) | CA3096993A1 (zh) |
| EA (1) | EA202092508A1 (zh) |
| IL (1) | IL278151A (zh) |
| SG (1) | SG11202010324TA (zh) |
| WO (1) | WO2019206987A1 (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2022142053A1 (en) * | 2020-12-30 | 2022-07-07 | I-Mab Biopharma Co., Ltd | Formulations of anti-cd73 antibodies |
Families Citing this family (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113474360A (zh) | 2019-02-18 | 2021-10-01 | 伊莱利利公司 | 治疗性抗体制剂 |
| CN115243718A (zh) * | 2020-01-24 | 2022-10-25 | 瑞泽恩制药公司 | 稳定的抗体制剂 |
| WO2022006091A1 (en) * | 2020-06-29 | 2022-01-06 | Anovent Pharmaceutical (U.S.), Llc | Biopharmaceutical formulation of anti-pd-1, anti-pd-l1, and anti-vegfr therapeutic monoclonal antibodies and method for treating nsclc by inhalation |
| CA3189452A1 (en) * | 2020-07-31 | 2022-02-03 | Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co., Ltd. | Anti-pd-1 antibody pharmaceutical composition and use thereof |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107106590A (zh) * | 2014-10-24 | 2017-08-29 | 阿斯利康(瑞典)有限公司 | 组合 |
| WO2017176565A1 (en) * | 2016-04-07 | 2017-10-12 | Eli Lilly And Company | Combinations of an anti-b7-h1 antibody and a cxcr4 peptide antagonist for treating a solid tumor |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB0624500D0 (en) * | 2006-12-07 | 2007-01-17 | Istituto Superiore Di Sanito | A novel passive vaccine for candida infections |
| MX359551B (es) | 2009-11-24 | 2018-10-02 | Medimmune Ltd | Agentes de union diana contra b7-h1. |
| CA2874083C (en) * | 2014-12-05 | 2024-01-02 | Universite Laval | Tdp-43-binding polypeptides useful for the treatment of neurodegenerative diseases |
| KR20180011839A (ko) * | 2015-06-08 | 2018-02-02 | 제넨테크, 인크. | 항-ox40 항체를 이용한 암의 치료 방법 |
| JP2019514889A (ja) * | 2016-04-25 | 2019-06-06 | メディミューン，エルエルシー | 抗ｐｄ−ｌ１および抗ｃｔｌａ−４抗体の共製剤を含む組成物 |
-
2019
- 2019-04-24 CN CN201980027437.5A patent/CN112004553A/zh active Pending
- 2019-04-24 KR KR1020207033249A patent/KR20210005096A/ko unknown
- 2019-04-24 JP JP2020558048A patent/JP2021522209A/ja active Pending
- 2019-04-24 WO PCT/EP2019/060498 patent/WO2019206987A1/en unknown
- 2019-04-24 EP EP19720817.6A patent/EP3784279A1/en active Pending
- 2019-04-24 US US17/049,839 patent/US20210054079A1/en active Pending
- 2019-04-24 BR BR112020020390-4A patent/BR112020020390A2/pt unknown
- 2019-04-24 SG SG11202010324TA patent/SG11202010324TA/en unknown
- 2019-04-24 EA EA202092508A patent/EA202092508A1/ru unknown
- 2019-04-24 CA CA3096993A patent/CA3096993A1/en active Pending
- 2019-04-24 AU AU2019258330A patent/AU2019258330A1/en active Pending
- 2019-04-25 AR ARP190101098A patent/AR115365A1/es unknown
-
2020
- 2020-10-19 IL IL278151A patent/IL278151A/en unknown
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN107106590A (zh) * | 2014-10-24 | 2017-08-29 | 阿斯利康(瑞典)有限公司 | 组合 |
| WO2017176565A1 (en) * | 2016-04-07 | 2017-10-12 | Eli Lilly And Company | Combinations of an anti-b7-h1 antibody and a cxcr4 peptide antagonist for treating a solid tumor |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| JEFFREY L. CLELAND等: "A Specific Molar Ratio of Stabilizer to Protein is Required for Storage Stability of a Lyophilized Monoclonal Antibody", JOURNAL OF PHARMACEUTICAL SCIENCES, vol. 90, no. 3, pages 310 - 321 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2022142053A1 (en) * | 2020-12-30 | 2022-07-07 | I-Mab Biopharma Co., Ltd | Formulations of anti-cd73 antibodies |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2019258330A1 (en) | 2020-12-10 |
| SG11202010324TA (en) | 2020-11-27 |
| KR20210005096A (ko) | 2021-01-13 |
| EA202092508A1 (ru) | 2021-03-16 |
| US20210054079A1 (en) | 2021-02-25 |
| WO2019206987A1 (en) | 2019-10-31 |
| EP3784279A1 (en) | 2021-03-03 |
| AR115365A1 (es) | 2021-01-13 |
| BR112020020390A2 (pt) | 2021-01-19 |
| IL278151A (en) | 2020-11-30 |
| CA3096993A1 (en) | 2019-10-31 |
| JP2021522209A (ja) | 2021-08-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN112004553A (zh) | 人抗pd-l1抗体的配制品 | |
| JP2024016177A (ja) | 単独のおよびプログラム死受容体１（ｐｄ－１）抗体と組み合わされた抗ｔｉｇｉｔ抗体の安定な製剤、ならびにその使用方法 | |
| EP2473191B1 (en) | Antibody coformulations | |
| KR20200003107A (ko) | 항-lag3 항체의 제제, 및 항-lag3 항체 및 항-pd-1 항체의 공동-제제 | |
| JP2023109942A (ja) | 単独およびプログラム死受容体１（ｐｄ－１）抗体と組み合わされた抗ｃｔｌａ４抗体の安定な製剤、ならびにその使用方法 | |
| US20100226928A1 (en) | Lyophilised Antibody Formulation | |
| CN113316458B (zh) | 抗lag3抗体和抗pd-1抗体的共制剂 | |
| US20220411505A1 (en) | Pharmaceutical compositions comprising bispecific antibodies directed against cd3 and cd20 and their uses | |
| KR20070092197A (ko) | 안정화 제형 | |
| JP6400595B2 (ja) | 抗ｈｅｒ２抗体製剤 | |
| JP2021178862A (ja) | タンパク質製剤 | |
| TW201028167A (en) | Pharmaceutical composition | |
| KR20190112299A (ko) | 결합제 | |
| EP4186522A1 (en) | Pd-l1/lag-3 bispecific antibody preparation, and preparation method therefor and use thereof | |
| TW201927337A (zh) | 一種ｌａｇ－３抗體醫藥組成物及其用途 | |
| US20230310324A1 (en) | Method of making lyophilized protein formulations | |
| CN113194925A (zh) | 抗体制剂 | |
| KR20210100671A (ko) | 항-191p4d12 항체 약물 컨쥬게이트를 포함하는 약제학적 조성물 및 이의 사용 방법 | |
| WO2008029908A1 (fr) | Préparation pharmaceutique lyophilisée stable comprenant un anticorps | |
| WO2024108053A1 (en) | Ceacam5 antibody-drug conjugates and methods of use thereof | |
| AU2020333023A1 (en) | Aqueous pharmaceutical composition of anti-PD1 antibody prolgolimab and the use thereof | |
| Wang et al. | Structural and functional characterization of glycosylation in an immunoglobulin G1 to Cryptococcus neoformans glucuronoxylomannan | |
| US20230272106A1 (en) | Stable formulation for recombinant anti-pd-1 monoclonal antibody | |
| TW202333788A (zh) | 一種抗ｔｎｆｒ２抗體藥物組合物 | |
| CN116474090A (zh) | 药物组合物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |