KR20210100671A - 항-191p4d12 항체 약물 컨쥬게이트를 포함하는 약제학적 조성물 및 이의 사용 방법 - Google Patents

항-191p4d12 항체 약물 컨쥬게이트를 포함하는 약제학적 조성물 및 이의 사용 방법 Download PDF

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올라 맥가비
가야트리 라트나스와미
잉큉 선
마리에 로즈 밴 슈라벤디크
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어젠시스 인코포레이티드
씨젠 인크.
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Abstract

약제학적 조성물로서, (a) 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)의 하나 이상의 유닛에 컨쥬게이트된 191P4D12에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항체 약물 컨쥬게이트 및 (b) L-히스티딘, 폴리소르베이트-20(TWEEN-20), 및 트레할로스 이수화물 및 수크로스 중 적어도 하나를 포함하는 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.

Description

항-191P4D12 항체 약물 컨쥬게이트를 포함하는 약제학적 조성물 및 이의 사용 방법
관련 출원의 상호 참조
본 출원은 2018.12.3에 출원된 미국 가특허출원 No. 62/774,819에 대한 우선권의 이익을 주장하고, 그 내용은 전체가 본원에 참조로서 병합된다.
1. 필드
본원에 제공되는 것은 항-191P4D12 항체 약물 컨쥬게이트를 포함하는 약제학적 조성물이다. 약제학적 조성물의 사용 방법은 또한 본원에서 제공된다.
2. 배경기술
약물 물질은 다양하고 특화된 약제학적 기능을 제공하는 하나 이상의 다른 제제와 조합하여 제형의 일부로 일반적으로 투여된다. 약제학적 부형제(excipients)는 다양한 기능을 갖고, 다양한 방식(예컨대, 가용화, 희석, 농축, 안정화, 보존, 착색, 향료 등)으로 약제학적 제형에 기여한다. 활성 약물 물질을 제형화할 때 고려될 수 있는 특성은 생체이용률, 제조 용이성, 투여 용이성, 및 투여 형태의 안정성을 포함한다. 제형화되는 활성 약물 물질의 다양한 특성으로 인해, 제형은 유리한 물리적 및 약제학적 특성을 달성하기 위해, 일반적으로 활성 약물 물질에 고유하게 맞춤화된 약제학적 부형제를 필요로 한다.
따라서, 유리한 물리적 및 약제학적 특성을 갖는 항-191P4D12 항체 약물 컨쥬게이트의 약제학적 조성물에 관한 요구가 존재한다. 본 발명은 이러한 요구를 만족시키고 관련된 이점을 제공한다.
3. 요약
하나의 관점에서, 본원에 제공되는 것은 약제학적 조성물로서, (a) 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)의 하나 이상의 유닛에 컨쥬게이트된 191P4D12에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항체 약물 컨쥬게이트, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:7에 제시된 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역(CDRs)의 아미노산 서열을 포함하는 CDRs를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:8에 제시된 경쇄 가변 영역의 CDRs의 아미노산 서열을 포함하는 CDRs를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하며; 및 (b) L-히스티딘, 폴리소르베이트-20(TWEEN-20), 및 트레할로스 이수화물 및 수크로스 중 적어도 하나를 포함하는 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물이다.
몇몇 구현 예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR H1, SEQ ID NO:10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR H2, SEQ ID NO:11의 아미노산 서열을 포함하는 CDR H3, SEQ ID NO:12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR L1, SEQ ID NO:13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR L2, 및 SEQ ID NO:14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR L3을 포함한다.
몇몇 구현 예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:7의 20번째 아미노산(글루탐산)에서 136번째 아미노산(세린)까지의 범위의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:8의 23 번째 아미노산(아스파르트 산)에서 130 번째 아미노산(아르기닌)까지의 범위의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
몇몇 구현 예에서, 상기 항체는 SEQ ID NO:7의 20 번째 아미노산(글루탐산)에서 466 번째 아미노산(라이신)까지의 범위의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO:8의 23 번째 아미노산(아스파르트 산)에서 236 번째 아미노산(시스테인)까지의 범위의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
몇몇 구현 예에서, 상기 항원 결합 단편은 Fab, F(ab')2, Fv 또는 scFv 단편이다.
몇몇 구현 예에서, 상기 항체는 완전 인간 항체이다.
몇몇 구현 예에서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 재조합적으로 생성된다.
Figure pct00001
몇몇 구현 예에서, 상기 항체 약물 컨쥬게이트는 다음의 구조를 가지며:
Figure pct00002
여기서 L-은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 1 내지 10이다.
몇몇 구현 예에서, p는 2 내지 8이다.
몇몇 구현 예에서, 상기 항체 또는 항원 결합 단편은 링커를 통해 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)의 각 유닛에 링크된다.
몇몇 구현 예에서, 상기 링커는 효소-절단가능한 링커이고, 하나의 구현 예에서, 상기 링커는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 황 원자와 결합을 형성한다.
몇몇 구현 예에서, 상기 링커는 -Aa-Ww-Yy-의 식을 가지며; 여기서 -A-는 스트레처 유닛이고, a는 0 또는 1이고; -W-는 아미노산 유닛이고, w는 0 내지 12의 정수이며; -Y-는 스페이서 유닛이고, y는 0, 1, 또는 2이다.
몇몇 구현 예에서, 상기 스트레처 유닛은 아래 식 (1)의 구조를 가지며; 상기 아미노산 유닛은 발린 시트룰린이고; 및 상기 스페이서 유닛은 아래 식(2)의 구조를 갖는 PAB 그룹이다:
Figure pct00003
식 (1)
Figure pct00004
식 (2)
몇몇 구현 예에서, 상기 스트레처 유닛은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 황 원자와 결합을 형성하고; 상기 스페이서 유닛은 카바메이트기를 통해 MMAE에 링크된다.
몇몇 구현 예에서, 상기 항체 약물 컨쥬게이트는 항체 또는 이의 항원 결합 단편당 1 내지 10 유닛의 MMAE를 포함한다.
몇몇 구현 예에서, 상기 항체 약물 컨쥬게이트는 항체 또는 이의 항원 결합 단편당 2 내지 8 유닛의 MMAE를 포함한다.
몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 약 1 내지 약 20 mg/mL 농도의 항체 약물 컨쥬게이트를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 약 5 내지 약 15 mg/mL 농도의 항체 약물 컨쥬게이트를 포함한다. 다른 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 약 8 내지 약 12 mg/mL 농도의 항체 약물 컨쥬게이트를 포함한다. 또 다른 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 약 10 mg/mL 농도의 항체 약물 컨쥬게이트를 포함한다.
몇몇 구현 예에서, L-히스티딘은 약 5 내지 약 50 mM 범위에서 존재한다. 다른 구현 예에서, L-히스티딘은 약 10 내지 약 40 mM 범위에서 존재한다. 다른 구현 예에서, L-히스티딘은 약 15 내지 약 35 mM 범위에서 존재한다. 다른 구현 예에서, L-히스티딘은 약 15 내지 약 30 mM 범위에서 존재한다. 다른 구현 예에서, L-히스티딘은 약 15 내지 약 25 mM 범위에서 존재한다. 다른 구현 예에서, L-히스티딘은 약 20 mM에서 존재한다.
몇몇 구현 예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.001 내지 약 0.1%(v/v)의 범위이다. 다른 구현 예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.0025 내지 약 0.075%(v/v)의 범위이다. 다른 구현 예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.005 내지 약 0.05%(v/v)의 범위이다. 다른 구현 예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.01 내지 약 0.03%(v/v)의 범위이다. 다른 구현 예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.02%(v/v)의 범위이다.
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 트레할로스 이수화물을 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 상기 트레할로스 이수화물은 약 1 내지 약 20%(w/v)의 범위로 존재한다. 몇몇 구현 예에서, 상기 트레할로스 이수화물은 약 2 내지 약 15%(w/v)의 범위로 존재한다. 다른 구현 예에서, 상기 트레할로스 이수화물은 약 3 내지 약 10%(w/v)의 범위로 존재한다. 또 다른 구현 예에서, 상기 트레할로스 이수화물은 약 4 내지 약 6%(w/v)의 범위로 존재한다. 또 다른 구현 예에서, 상기 트레할로스 이수화물은 약 5.5%(w/v)로 존재한다.
몇몇 구현 예에서, 상기 트레할로스 이수화물은 약 50 mM 내지 약 300 mM의 범위로 존재한다. 몇몇 구현 예에서, 상기 트레할로스 이수화물은 약 75 mM 내지 약 250 mM 범위로 존재한다. 다른 구현 예에서, 상기 트레할로스 이수화물은 약 100 mM 내지 약 200 mM의 범위로 존재한다. 다른 구현 예에서, 상기 트레할로스 이수화물은 약 130 mM 내지 약 150 mM 범위로 존재한다. 다른 구현 예에서, 상기 트레할로스 이수화물은 약 146 mM로 존재한다.
몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 수크로스를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 상기 수크로스는 약 1 내지 약 20 %(w/v)의 범위로 존재한다. 몇몇 구현 예에서, 상기 수크로스는 약 2 내지 약 15%(w/v)의 범위로 존재한다. 다른 구현 예에서, 상기 수크로스는 약 3 내지 약 10%(w/v)의 범위로 존재한다. 다른 구현 예에서, 상기 수크로스는 약 4 내지 약 6%(w/v)의 범위로 존재한다. 다른 구현 예에서, 상기 수크로스는 약 5.5%(w/v)로 존재한다.
몇몇 구현 예에서, 상기 수크로스는 약 50 mM 내지 약 300 mM 범위로 존재한다. 다른 구현 예에서, 상기 수크로스는 약 75 mM 내지 약 250 mM의 범위로 존재한다. 다른 구현 예에서, 상기 수크로스는 약 100 mM 내지 약 200 mM의 범위로 존재한다. 다른 구현 예에서, 상기 수크로스는 약 130 mM 내지 약 150 mM의 범위로 존재한다. 다른 구현 예에서, 상기 수크로스는 약 146 mM으로 존재한다.
몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 약 5.5 내지 약 6.5의 범위의 pH를 갖는다. 몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 약 5.7 내지 약 6.3의 범위의 pH를 갖는다. 다른 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 약 6.0의 pH를 갖는다.
몇몇 구현 예에서, 상기 pH는 실온에서 취해진다. 몇몇 구현 예에서, 상기 pH는 약 15℃ 내지 약 27℃에서 취해진다. 다른 구현 예에서, 상기 pH는 약 4℃에서 취해진다. 다른 구현 예에서, 상기 pH는 약 25℃에서 취해진다.
몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 염산(HCl)을 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 상기 pH는 HCl에 의해 조정된다.
다른 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 숙신산을 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 상기 pH는 숙신산에 의해 조정된다.
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 약 20 mM L-히스티딘, 약 0.02% (w/v) TWEEN-20, 및 약 5.5% (w/v) 트레할로스 이수화물 또는 약 5% (w/v) 수크로스 중 적어도 하나를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 HCl 또는 숙신산을 더욱 포함한다. 몇몇 구현 예에서, pH는 실온에서 약 6.0이다. 다른 구현 예에서, 상기 pH는 25℃에서 약 6.0이다.
몇몇 특정 구현 예에서,
본원에 제공되는 약제학적 조성물은
(a) 다음의 구조를 갖는 항체 약물 컨쥬게이트:
Figure pct00005
여기서 L-은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 1 내지 10이고; 및
(b) 약 20 mM L-히스티딘, 약 0.02% (w/v) TWEEN-20, 약 5.5% (w/v) 트레할로스 이수화물, 및 HCl을 포함하는 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하고,
여기서 상기 pH는 25℃에서 약 6.0이다.
몇몇 구현 예에서, 상기 항체 약물 컨쥬게이트는 약 10 mg/mL의 농도이다.
다른 특정 구현 예에서,
본원에 제공되는 약제학적 조성물은
(a) 다음의 구조를 포함하는 항체 약물 컨쥬게이트:
Figure pct00006
여기서 L-은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 1 내지 10이고; 및
(b) 약 20 mM L-히스티딘, 약 0.02% (w/v) TWEEN-20, 약 5.5% (w/v) 트레할로스 이수화물, 및 숙신산을 포함하는 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하고,
여기서 상기 pH는 25℃에서 약 6.0이다.
몇몇 구현 예에서, 상기 항체 약물 컨쥬게이트는 본원에 제공된 약제학적 조성물의 약 10 mg/mL의 농도이다.
또 다른 특정 구현 예에서,
본원에 제공된 약제학적 조성물은
(a) 다음의 구조를 포함하는 항체 약물 컨쥬게이트:
Figure pct00007
여기서 L-은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 1 내지 10이고; 및
(b) 약 20 mM L-히스티딘, 약 0.02% (w/v) TWEEN-20, 약 5.0% (w/v) 수크로스, 및 HCl을 포함하는 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하고,
여기서 상기 pH는 25℃에서 약 6.0이다.
몇몇 구현 예에서, 상기 항체 약물 컨쥬게이트는 본원에 제공된 약제하적 조성물의 약 10 mg/mL의 농도이다.
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 상기 약제학적 조성물은 액체 형태이다.
다른 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물은 동결 건조된다.
다른 관점에서, 본원에 제공되는 것은 본원에 제공되는 약제학적 조성물을 냉동-건조하여 제조된 동결 건조된 조성물이다.
몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 -80℃, 4℃, 25℃, 또는 37℃로 저장된다.
다른 관점에서, 본원에 제공되는 것은 유효량의 본원에 제공되는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법이다.
몇몇 구현 예에서, 상기 대상체는 인간 대상체이다.
몇몇 구현 예에서, 상기 암은 고형 종양이다. 몇몇 구현 예에서, 상기 암은 대장암, 췌장암, 난소암, 폐암, 방광암, 유방암, 식도암, 두부암, 또는 경부암이다.
특정 구현 예에서, 상기 암은 대장암이다. 특정 구현 예에서, 상기 암은 췌장암이다. 특정 구현 예에서, 상기 암은 난소암이다. 특정 구현 예에서, 상기 암은 폐암이다. 몇몇 구현 예에서, 상기 폐암은 비-소 폐암이다. 특정 구현 예에서, 상기 암은 방광암이다. 특정 구현 예에서, 상기 암은 진행성 방광암이다. 특정 구현 예에서, 상기 암은 전이성 방광암이다. 특정 구현 예에서, 상기 암은 유방암이다. 특정 구현 예에서, 상기 암은 식도암이다. 특정 구현 예에서, 상기 암은 두부암이다. 특정 구현 예에서, 상기 암은 경부암이다. 특정 구현 예에서, 상기 암은 191P4D12를 발현하는 종양 세포를 갖는다.
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공되는 방법은 제2 치료제를 대상체에 투여하는 단계를 더욱 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 상기 제2 치료제는 면역 체크포인트 억제제이다. 몇몇 구현 예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제이다. 다른 구현 예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 PD-1 억제제이다. 다른 구현 예에서, 상기 PD-1 억제제는 펨브롤리주맙 또는 니볼루맙(nivolumab)이다. 다른 구현 예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 PD-L1 억제제이다. 다른 구현 예에서, 상기 PD-L1 억제제는 아테졸리주맙, 아벨루맙, 및 더발루맙으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물에 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 대상체의 체중의 1 내지 10 mg/kg의 용량으로 투여된다. 다른 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물에 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 대상체의 체중의 1 내지 5 mg/kg의 용량으로 투여된다. 다른 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물에 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 대상체의 체중의 1 내지 2.5 mg/kg의 용량으로 투여된다. 몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물에 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 대상체의 체중의 1 내지 1.25 mg/kg의 용량으로 투여된다. 몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물에 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 대상체의 체중의 약 1 mg/kg의 용량으로 투여된다. 몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물에 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 대상체의 체중의 약 1.25 mg/kg의 용량으로 투여된다.
몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물에 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 정맥 내(intravenous, IV) 주사 또는 주입에 의해 투여된다.
몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물에 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 매 3주 사이클에서 2회 약 30분에 걸쳐 정맥 내(IV) 주사 또는 주입에 의해 투여된다. 몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물에 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 매 3주 사이클의 1일차 및 8일차에 약 30분에 걸쳐 정맥 내(IV) 주사 또는 주입에 의해 투여된다. 몇몇 구현 예에서, 상기 방법은 면역 체크포인트 억제제를 매 3주 사이클의 1일차에 정맥 내(IV) 주사 또는 주입에 의해 투여하는 단계를 더욱 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 펨브롤리주맙이고, 여기서 펨브롤리주맙은 약 30 분에 걸쳐 약 200 mg의 양으로 투여된다. 다른 구현 예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 아테졸리주맙이고, 여기서 아테졸리주맙은 약 60분 또는 30분에 걸쳐 약 1200 mg의 양으로 투여된다.
다른 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물의 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 매 4주 사이클에서 3회 약 30분에 걸쳐 정맥 내(IV) 주사 또는 주입에 의해 투여된다. 몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물의 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 매 4주 사이클의 1일, 8일, 및 15일차에 약 30분에 걸쳐 정맥 내(IV) 주사 또는 주입에 의해 투여된다. 몇몇 구현 예에서, 상기 방법은 면역 체크포인트 억제제를 정맥 내(IV) 주사 또는 주입에 의해 투여하는 단계를 더욱 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 펨브롤리주맙이다. 다른 구현 예에서, 상기 면역 체크포인트 억제제는 아테졸리주맙이다.
4. 도면의 설명
도 1a, 1b, 1c, 및 1d는 40℃에서 제형 F1-F14의 14-일 안정성 연구에 대한 SDS-PAGE 분석 결과를 도시한다.
도 1e는 섹션 6.1에 설명된 PR-HPLC 연구의 요약을 도시한다.
도 1f, 1g, 및 1h는 40℃에서 제형 F1-F14의 SE-HPLC 분석의 결과를 도시한다.
도 2a는 T0에서 제형 F4, F9 및 F14의 쉐이드 연구의 결과를 도시한다.
도 2b는 제형 F4, F9 및 F14의 사이클 동결-해동 연구의 SDS-PAGE 결과를 도시한다.
도 2c는 제형 F4, F9 및 F14에 대해 HIAC에 의해 측정된 mL 당 총 누적 카운트를 도시한다.
도 3a는 제형 F4, F9 및 F14에 대한 잔류 수분 분석의 결과를 도시한다.
도 3b는 12주 동시 BDS 및 DP 제형 연구의 A280(농도) 결과를 도시한다.
도 3c는 12주 동시 BDS 및 DP 제형 연구의 A330(탁도) 결과를 도시한다.
도 3d는 T0에서 BDS(동결건조 전)의 SDS-PAGE 분석의 결과를 도시한다.
도 3e는 12주 동안 -70℃ 또는 2-8℃에서 저장된 BDS의 SDS-PAGE 분석의 결과를 도시한다.
도 3f는 동결건조 및 T0에서 재구성 후 DP의 SDS-PAGE 분석의 결과를 도시한다.
도 3g는 12주 동안 25℃ 또는 40℃에서 저장된 DP(동결건조 및 재구성 후)의 SDS-PAGE 분석의 결과를 도시한다.
도 3h는 12주 동안 2-8℃로 저장된 DP(동결건조 및 재구성 후)의 SDS-PAGE 분석의 결과를 도시한다.
도 3i는 12주 동안 25℃/60% RH 및 40℃/75%RH의 조건에서 2-8℃ 및 -70℃로 저장된 AGS-22M6E BDS 및 2-8℃로 저장된 동결건조된 AGS-22M6E에 대한 SE-HPLC 분석의 결과를 도시한다.
도 4는 3.0 및 1.5 mL 충전 부피 모두에서 F4의 동결건조된 제형에 대한 SDS-PAGE 분석의 결과를 도시한다.
도 5a는 191P4D12 단백질의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열을 도시한다.
도 5b는 Ha22-2(2.4)6.1의 중쇄 및 경쇄의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열을 도시한다.
도 5c는 Ha22-2(2.4)6.1의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열을 도시한다.
5. 상세한 설명
본 개시를 더욱 설명하기 전에, 상기 개시가 본원에서 설명되는 특정 구현 예에 제한되지 않음이 이해되어야 하고, 또한 본원에 사용된 용어가 특정 구현 예만을 설명하기 위한 목적이며, 제한하려는 의도가 아님이 이해되어야 한다.
5.1 정의
본원에서 설명되거나 또는 참조된 기술 및 절차는 예를 들어, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (3d ed. 2001); Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al. eds., 2003); Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic (An ed. 2009); Monoclonal Antibodies: Methods and Protocols (Albitar ed. 2010); 및 Antibody Engineering Vols 1 and 2 (Kontermann and Dubel eds., 2d ed. 2010)에 설명된 널리 사용되는 방법론 과 같은, 당업자에 의해 통상적인 방법론을 사용하여 일반적으로 잘 이해되거나 및/또는 일상적으로 잘 사용되는 것들을 포함한다.
본원에서 달리 정의되지 않는 한, 본 설명에서 사용되는 기술적 및 과학적 용어는 당업자에게 일반적으로 이해되는 의미를 갖는다. 본 명세서를 해석하기 위해, 다음 용어의 설명이 적용되며, 적절할 때마다 단수로 사용되는 용어는 또한 복수를 포함할 것이고 그 반대의 경우도 마찬가지이다. 용어의 어떤 설명이 참조로서 본원에 병합된 어떤 문서와 충돌하는 경우, 아래에 설명된 상기 용어의 설명이 우선한다.
용어 "항체", "면역 글로불린", 또는 "Ig"는 본원에서 상호 교환적으로 사용되며, 가장 넓은 의미로 사용되며, 특히 아래에 설명된 바와 같이, 예를 들어, 단일 클론 항체(작용제, 길항제, 중화 항체, 전장(full length) 또는 온전한 단일 클론 항체 포함), 폴리에피토프 또는 모노에피토프 특이성을 갖는 항체 조성물, 다클론성 또는 1가 항체, 다가 항체, 적어도 2개의 온전한 항체로부터 형성되는, 다중 특이성 항체(예컨대, 원하는 생물학적 활성을 나타내는 동안의 이중 특이성 항체), 단일 사슬 항체, 및 이들의 단편을 커버한다. 항체는 인간, 인간화된, 키메라 및/또는 친화성 성숙된, 항체일 수 있을 뿐만 아니라, 예를 들어 쥐, 및 토끼 등과 같은 다른 종의 항체일 수 있다. 상기 용어 "항체"는 특정 분자 항원에 결합할 수 있고 2개의 동일한 폴리펩티드 사슬의 쌍으로 구성되는 폴리펩티드의 면역 글로불린 클래스 내의 B 세포의 폴리펩티드 생성물을 포함하는 것으로 의도되며, 여기서 각 쌍은 하나의 중쇄(약 50-70 kDa) 및 하나의 경쇄(약 25 kDa)를 갖고, 각 사슬의 각 아미노-말단 부분은 약 100 내지 약 130 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함하고, 및 각 사슬의 각 카르복시-말단 부분은 불변 영역을 포함한다. 예컨대, Antibody Engineering (Borrebaeck ed., 2d ed. 1995); 및 Kuby, Immunology (3d ed. 1997)을 참조하라. 특정 구현 예에서, 특정 분자 항원은 폴리펩티드 또는 에피토프를 포함하여, 본원에 제공된 항체에 의해 결합될 수 있다. 항체는 또한 합성 항체, 재조합적으로 생성된 항체, 카멜화된 항체, 인트라바디(intrabody), 항-이디오타임(항-Id) 항체, 및 상기 중 어느 하나의 기능성 단편(예컨대 항원 결합 단편)을 포함하나, 이에 제한되지 않고, 상기 기능성 단편은 단편이 유래된 항체의 결합 활성의 일부 또는 전부를 보유하는 항체 중쇄 또는 경쇄 폴리펩티드의 일부를 지칭한다. 기능성 단편(예컨대 항원-결합 단편)의 비-제한적 예는 단일-사슬 Fvs(scFv)(예컨대, 단일 특이적, 이중 특이적 등을 포함하는), Fab 파편, F(ab') 파편, F(ab)2 파편, F(ab')2 파편, 이황화-링크 Fvs(dsFv), Fd 파편, Fv 파편, 디아바디(diabody), 트리아바디(triabody), 테트라바디(tetrabody), 및 미니바디(minibody)를 포함한다. 특히, 본원에 제공되는 항체는 면역 글로불린 분자 및 면역 글로불린 분자의 면역학적 활성 부분, 예를 들어 항원에 결합하는 항원-결합 부위를 함유하는 항원-결합 도메인 또는 분자 포함한다(예컨대, 항체의 하나 이상의 CDRs). 이러한 항체 단편은 예를 들어 Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual (1989); Mol. Biology and Biotechnology: A Comprehensive Desk Reference (Myers ed., 1995); Huston et al., 1993, Cell Biophysics 22:189-224; Pluckthun and Skerra, 1989, Meth. Enzymol. 178:497-515; 및 Day, Advanced Immunochemistry (2d ed. 1990)에서 발견될 수 있다. 본원에 제공되는 항체는 면역 글로불린 분자의 임의의 클래스(예컨대, IgG, IgE, IgM, IgD, 및 IgA) 또는 임의의 서브클래스(예컨대, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1, 및 IgA2)일 수 있다.
용어 "단일 클론 항체"는 실질적으로 균질한 항체의 집단(즉, 집단을 구성하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 자연 발생 가능 돌연변이를 제외하고 동일함)으로부터 얻어진 항체를 지칭한다. 단일 클론 항체는 단일 항원 부위에 대해 매우 특이적이다. 상이한 결정인자(에피토프)에 대한 상이한 항체를 포함할 수 있는 다클론성 항체 제제와 달리, 각 단일 클론 항체는 항원 상의 단일 결정인자에 지시(directed)된다.
"항원"은 항체가 선택적으로 결합할 수 있는 구조체이다. 표적 항원은 폴리펩티드, 탄수화물, 핵산, 지질, 합텐, 또는 기타 자연 발생 또는 합성 화합물일 수 있다. 몇몇 구현 예에서, 상기 표적 항원은 폴리펩티드이다. 특정 구현 예에서, 항원은 세포와 연관되고, 예를 들어, 세포, 예컨대 암 세포 내 또는 상에 존재한다.
"온전한" 항체는 항원-결합 부위 뿐만 아니라, CL 및 적어도 중쇄 불변 영역 CH1, CH2, 및 CH3를 포함하는 항체이다. 상기 불변 영역은 인간 불변 영역 또는 이들의 아미노산 서열 변이체를 포함할 수 있다. 특정 구현 예에서, 온전한 항체는 하나 이상의 이펙터(effector) 기능을 갖는다.
용어 "항원 결합 단편", "항원 결합 도메인", "항원 결합 영역" 및 유사한 용어는 항원과 상호 작용하고, 결합제에 항원에 대한 특이성 및 친화성을 부여하는 아미노산 잔기를 포함하는 항원의 부분을 지칭한다(예컨대 CDRs). 본원에 사용되는 "항원 결합 단편"은 완전한 항체의 가변 영역 또는 항원-결합과 같은, 완전한 항체의 일부를 포함하는 "항체 단편"을 포함한다. 항체 단편의 예는, 제한 없이, Fab, Fab', F(ab')2, 및 Fv 단편; 디아바디 및 디-디아바디(예컨대, Holliger et al., 1993, Proc. Natl. Acad. Sci. 90:6444-48; Lu et al., 2005, J. Biol. Chem. 280:19665-72; Hudson et al., 2003, Nat. Med. 9:129-34; WO 93/11161; 및 U.S. 특허 No. 5,837,242 및 6,492,123 참고); 단일-사슬 항체 분자(예컨대, U.S. 특허 No. 4,946,778; 5,260,203; 5,482,858; 및 5,476,786 참고); 이중 가변 도메인 항체(예컨대, U.S. 특허 No. 7,612,181 참고); 단일 가변 도메인 항체(sdAbs)(예컨대, Woolven et al., 1999, Immunogenetics 50: 98-101; and Streltsov et al., 2004, Proc Natl Acad Sci USA. 101:12444-49 참고); 및 항체 단편으로부터 형성된 다중 특이성 항체를 포함한다.
용어 "결합" 또는 "결합하는"은 예를 들어, 복합체(complex)를 형성하는 것을 포함하는 분자 간의 상호 작용을 지칭한다. 상호 작용은 수소 결합, 이온 결합, 소수성 상호 작용, 및/또는 반데르발스 상호 작용을 포함하는, 예를 들어, 비-공유 상호작용일 수 있다. 복합체는 공유 또는 비-공유 결합, 상호작용, 또는 포스에 의해 함께 유지되는 둘 이상의 분자의 결합을 또한 포함할 수 있다. 항체의 단일 항원-결합 부위 및 항원과 같은 표적 분자의 단일 에피토프 사이의 총 비-공유 상호작용의 힘은 상기 에피토프에 대한 항체 또는 기능적 단편의 친화성이다. 1가 항원에 대한 결합 분자(예컨대 항체)의 해리 속도(koff) 대 결합 속도(kon)의 비(koff/kon)는 해리상수(KD)이고 이는 친화도와 반비례한다. KD 값이 낮을수록, 항체의 친화도가 높아진다. KD 값은 항체 및 항원의 여러 복합체에 따라 다르며, kon 및 koff 모두에 의존한다. 본원에 제공되는 항체에 대한 해리 상수(KD)는 본원에 제공되는 임의의 방법 또는 당업자에게 공지의 임의의 다른 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 하나의 결합 부위에서의 친화도는 항체 및 항원 간의 상호작용의 진정한 강도를 항상 반영하지는 않는다. 다가 항원과 같은 다중 반복 항원 결정인자를 함유하는 복합체 항원이 다중 결합 부위를 함유하는 항체와 접촉하면, 하나의 부위에서 항원과 항체의 상호작용은 제2 부위에서의 반응 확률을 증가시킬 것이다. 다가 항체 및 항원 사이의 이러한 다중 상호작용의 힘은 결합력(avidity)이라고 한다.
본원에 기재된 항체 또는 이의 항원 결합 단편과 관련하여, "~에 결합하는", "~에 특이적으로 결합하는"과 같은 용어 및 유사한 용어는 또한 본원에서 상호교환적으로 사용되고, 폴리펩티드와 같은 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인의 결합 분자를 지칭한다. 항원에 결합하거나 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편은 관련된 항원과 교차 반응할 수 있다. 특정 구현 예에서, 항원과 결합하거나 또는 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편은 다른 항원과 교차 반응하지 않는다. 항원과 결합하거나 또는 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편은 면역 분석법, Octet®, Biacore®, 또는 당업자에게 공지의 기타 기술에 의해 식별될 수 있다. 몇몇 구현 예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은, 이것이 방사성 면역 분석(RIA), 및 효소 링크 면역 흡착 분석(ELISAs)과 같은 실험 기술을 이용하여 결정된 어떤 교차 반응 항원보다 더 높은 친화도로 항원과 결합하는 경우, 항원과 결합하거나 또는 특이적으로 결합한다. 일반적으로, 특정 또는 선택적 반응은 백그라운드 시그널 또는 노이즈의 적어도 2배일 것이고, 백그라운드보다 10배 초과일 수 있다. 예컨대, 결합 특이성에 관한 논의의 Fundamental Immunology 332-36 (Paul ed., 2d ed. 1989)을 참고하라. 특정 구현 예에서, "비-표적" 단백질에 대한 항체 또는 항원 결합 단편의 결합 정도는 특정 표적 항원, 예를 들어 형광 활성화 세포 분류(FACS) 분석 또는 RIA에 의해 결정된 바와 같은 특정 표적 항원에 대한 결합 분자 또는 항원 결합 도메인의 결합의 약 10% 미만이다. "특이적 결합"과 같은 용어와 관련하여, "~에 특이적으로 결합하는", 또는 "~에 특이적인"은 비-특이적 상호 작용과는 상당히 다른 결합을 의미한다. 특이적 결합은 예를 들어, 대조군 분자의 결합과 비교하여 분자의 결합을 결정함으로써 측정될 수 있고, 여기서 상기 대조군 분자는 일반적으로 결합 활성을 갖지 않는 유사한 구조의 분자이다. 예를 들어, 특정 결합은 표적과 유사한, 예를 들어, 과량의 비-라벨링된 표적과 같은 대조군 분자와의 경쟁에 의해 결정될 수 있다. 항원에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편은 결합 분자가 예를 들어 항원을 표적화하는 진단제로서 유용하도록 충분한 친화도로 항원에 결합할 수 있는 것을 포함한다. 특정 구현 예에서, 항원에 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편은 1000 nM, 800 nM, 500 nM, 250 nM, 100 nM, 50 nM, 10 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM, 1 nM, 0.9 nM, 0.8 nM, 0.7 nM, 0.6 nM, 0.5 nM, 0.4 nM, 0.3 nM, 0.2 nM, 또는 0.1 nM 이하의 해리 상수(KD)를 갖는다. 특정 구현 예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 상이한 종의 항원 중에서(예컨대 인간 및 cyno 종 사이에서) 보존된 항원의 에피토프에 결합한다.
"결합 친화도"는 일반적으로 분자의 단일 결합 부위(예컨대, 항체와 같은 결합 단백질) 및 이의 결합 파트너(예컨대, 항원) 사이의 비공유 상호작용 총 합의 강도를 지칭한다. 달리 표시되지 않는 한, 본원에 사용된 "결합 친화도"는 결합쌍의 멤버(예컨대 항체 및 항원) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화도를 지칭한다. 결합 파트너 Y에 대한 결합 분자 X의 친화도는 일반적으로 해리 상수(KD)로 나타내어질 수 있다. 친화도는 본원에 설명된 것들을 포함하여 당업계에 공지된 일반적인 방법에 의해 측정될 수 있다. 저-친화도 항체는 항원에 일반적으로 천천히 결합하고, 쉽게 해리되는 반면, 고-친화도 항체는 일반적으로 항원에 빠르게 결합하고, 더 오래 결합을 유지하는 경향이 있다. 결합 친화도를 측정하는 다양한 방법이 당업계에 공지되어 있으며, 이들 중 임의의 것이 본 개시의 목적을 위해 사용될 수 있다. 특정 예시적인 구현 예는 다음을 포함한다. 하나의 구현 예에서, "KD" 또는 "KD 값"은 예를 들어 결합 어세이와 같은, 당업계에서 공지의 어세이에 의해 측정될 수 있다. KD는 예를 들어 관심 항체의 Fab 버전 및 이의 항원으로 수행되는, RIA에서 측정될 수 있다(Chen et al., 1999, J. Mol Biol 293:865-81). KD 또는 KD 값은 이용하여 Octet®, 예를 들어 Octet®QK384를 이용하여, 또는 Biacore®, 예를 들어 Biacore®TM-2000 또는 Biacore®TM-3000을 이용하여, 바이오층 간섭계(BLI) 또는 표면 플라스몬 공명(SPR) 어세이를 이용하여 또한 측정될 수 있다. "on-속도", 또는 "결합 속도" 또는 "해리 속도" 또는 "kon"은 위에서 사용하는, 예를 들어 Octet®QK384, Biacore®TM-2000, 또는Biacore®TM-3000 system과 같은 동일한 바이오층 간섭계(BLI) 또는 표면 플라스몬 공명(SPR) 기술로 또한 결정될 수 있다.
특정 구현 예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래되거나, 특정 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 반면, 나머지 사슬(들)이 다른 종으로부터 유래되거나 다른 항체 클래스 또는 서브클레스에 속하는 항체의 상응하는 서열과 동일하거나 상동성인 "키메릭" 서열, 뿐만 아니라 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한 이러한 항체들의 단편을 포함할 수 있다(U.S. 특허 No. 4,816,567; 및 Morrison et al., 1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-55 참조).
특정 구현 예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 천연 CDR 잔기가 원하는 특이성, 친화성, 및 캐패시티를 포함하는 마우스, 래트, 토끼, 또는 비인간 영장류와 같은 비인간 종(예컨대 공여자 항체)의 상응하는 CDR로부터의 잔기로 교체되는 인간 면역 글로불린(예컨대 수용자 항체)을 포함하는 키메릭 항체인 "인간화" 형태의 비인간(예컨대 뮤린) 항체의 일부를 포함할 수 있다. 일부 예에서, 인간 면역 글로불린의 하나 이상의 FR 영역 잔기는 상응하는 비인간 잔기로 교체된다. 또한, 인간화 항체는 수용자 항체에서 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이러한 변형은 항체 성능을 더욱 개선하기 위해 만들어진다. 인간화 항체 중쇄 또는 경쇄는 CDRs의 모두 또는 실질적으로 모두가 비인간 면역 글로불린의 CDRs에 상응하고, FRs의 모두 또는 실질적으로 모두가 인간 면역 글로불린 서열의 FRs인, 적어도 하나 이상의 가변 영역을 실질적으로 모두 포함할 수 있다. 특정 구현 예에서, 인간화 항체는, 일반적으로 인간 면역 글로불린의, 면역 글로불린 불변 영역(Fc)의 적어도 일부를 포함할 것이다. 더 자세한 사항은 Jones et al., 1986, Nature 321:522-25; Riechmann et al., 1988, Nature 332:323-29; Presta, 1992, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-96; Carter et al., 1992, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:4285-89; U.S. 특허. Nos: 6,800,738; 6,719,971; 6,639,055; 6,407,213; 및 6,054,297을 참고하라.
특정 구현 예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 "완전 인간 항체" 또는 "인간 항체"의 일부를 포함할 수 있고, 여기서 상기 용어는 본원에서 상호교환적으로 사용되고, 인간 가변 영역 및 예를 들어, 인간 불변 영역을 포함하는 항체를 지칭한다. 특정 구현 예에서, 상기 용어는 인간 기원의 가변 영역 및 불변 영역을 포함하는 항체를 지칭한다. 특정 구현 예에서, "완전 인간" 항체는 폴리펩티드에 결합하고, 인간 생식세포계열(germline) 면역 글로불린 핵산 서열의 자연 발생 체성(somatic) 변이체인 핵산 서열에 의해 코딩되는 항체를 또한 포함할 수 있다. 용어 "완전 인간 항체"는 Kabat et al에 의해 설명된 바와 같은 인간 생식세포계열 면역 글로불린 서열에 상응하는 가변 및 불변 영역을 포함하는 항체를 포함한다(Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 참고). "인간 항체"는 인간에 의해 생성되고, 및/또는 인간 항체를 제조하기 위한 임의의 기술을 사용하여 제조된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 보유하는 것이다. 인간 항체의 정의는 비-인간 항원-결합 잔기를 포함하는 인간화 항체를 명시적으로 배제한다. 인간 항체는 파지-디스플레이 라이브러리 (Hoogenboom and Winter, 1991, J. Mol. Biol. 227:381; Marks et al., 1991, J. Mol. Biol. 222:581) 및 이스트 디스플레이 라이브러리(Chao et al., 2006, Nature Protocols 1: 755-68)를 포함하여, 당업계의 공지의 다양한 기술을 이용하여 생성될 수 있다. 인간 단일 클론 항체의 제조에 이용가능한 방법은 Cole et al., Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy 77 (1985); Boerner et al., 1991, J. Immunol. 147(1):86-95; 및 van Dijk and van de Winkel, 2001, Curr. Opin. Pharmacol. 5: 368-74. 에 기술된다. 인간 항체는 항원을, 항원 공격에 반응하여 이러한 항체를 생성하도록 변형되었으나, 내인성 유전좌위(loci)가 비활성화가 된, 형질 전환 동물, 예컨대 쥐에게 투여함으로써 제조될 수 있다(예컨대, Jakobovits, 1995, Curr. Opin. Biotechnol. 6(5):561-66; Bruggemann and Taussing, 1997, Curr. Opin. Biotechnol. 8(4):455-58; 및 XENOMOUSETM 기술에 관한 U.S. 특허 Nos. 6,075,181 및 6,150,584 참조). 또한, 예를 들어, 인간 B-세포 융합세포(hybridoma) 기술을 통해 생성된 인간 항체에 관한 Li et al., 2006, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 103:3557-62를 참조하라.
특정 구현 예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 "재조합 인간 항체"의 일부를 포함할 수 있고, 여기서 상기 문구는 숙주 세포로 형질 감염된 재조합 발현 벡터를 이용하여 발현된 항체, 재조합체로부터 분리된 항체, 조합 인간 항체 라이브러리, 인간 면역 글로불린 유전자에 대해 트랜스제닉(transgenic) 및/또는 트랜스염색체(transchromosomal)인 동물(예컨대 마우스 또는 소)로부터 분리된 항체(예컨대, Taylor, L. D. et al. (1992) Nucl. Acids Res. 20:6287-6295 참조), 또는 인간 면역 글로불린 유전자 서열을 다른 DNA 서열로 스플라이싱하는 것을 포함하는 임의의 다른 수단에 의해 제조, 발현, 생성, 또는 분리된 항체와 같은 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 분리된 인간 항체를 포함한다. 이러한 재조합 인간 항체는 인간 생식세포계열 면역 글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 불변 영역을 가질 수 있다(Kabat, E. A. et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 참고). 그러나 특정 구현 예에서, 이러한 재조합 인간 항체는 시험관 내 돌연변이 유발(또는, 인간 Ig 서열에 대한 동물 트랜스제닉이 사용되는 경우, 생체 내 체세포 돌연변이 유발)을 겪고, 따라서 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은, 인간 생식세포계열 VH 및 VL 서열로부터 유래되고 관련되어 있지만, 생체 내 인간 항체 생식세포계역 레퍼토리 내에 자연적으로 존재하지 않을 수 있는 서열이다.
특정 구현 예에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 "단일 클론 항체"의 일부를 포함할 수 있고, 본원에서 사용되는 상기 용어는 실질적으로 동종의 항체의 집단으로부터 얻어지는 항체를 지칭한다. 예컨대, 집단을 구성하는 개별적인 항체는 소량으로 존재할 수 있는 자연 발생 가능한 돌연변이를 제외하고 동일하며, 각 단일 클론 항체는 일반적으로 항원 상의 단일 에피토프를 인식할 것이다. 특정 구현 예에서, 본원에서 사용되는 "단일 클론 항체"는 단일 융합세포 또는 다른 세포에 의해 생성된 항체이다. 용어 "단일 클론"은 항체를 제조하기 위한 임의의 특정 방법으로 제한되지 않는다. 예를 들어, 본 개시에서 유용한 단일 클론 항체는 Kohler et al., 1975, Nature 256:495에 처음 기술된 융합세포 방법론에 의해 제조될 수 있거나 박테리아, 또는 진핵 동말 또는 식물 세포에서 재조합 DNA 방법을 이용하여 제조될 수 있다(예컨대, U.S. 특허 No. 4,816,567 참조). "단일 클론 항체"는 예를 들어 Clackson et al., 1991, Nature 352:624-28 및 Marks et al., 1991, J. Mol. Biol. 222:581-97에 기술된 기술을 이용하여 파지 항체 라이브러리로부터 또한 분리될 수 있다. 클론 세포주 및 이에 의해 발현된 단일 클론 항체의 제조를 위한 다른 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 예컨대, Short Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al. eds., 5th ed. 2002)를 참조하라.
일반적인 4-쇄 항체 유닛은 2개의 동일한 경쇄(L) 및 두개의 동일한 중쇄(H)로 구성된 이종 사량체 당단백질이다. IgGs의 경우, 4-쇄 유닛은 일반적으로 약 150,000 달톤이다. 각 L 사슬은 하나의 공유 이황화 결합에 의해 H 사슬에 링크되는 반면, 두 H 사슬은 H 사슬 아이소타입에 따라 하나 이상의 이황화 결합에 의해 서로 링크된다. 각 H 및 L은 규칙적으로 간격을 둔 사슬내 이황화 브릿지를 또한 갖는다. 각 H 사슬은 N-말단에서, 가변 도메인(VH)을 갖고 그 뒤에 α 및 γ 사슬 각각에 대해 3개의 불변 도메인 및 μ 및 ε 아이소타입에 대해 4개의 CH 도메인이 있다. 각 L 사슬은 N-말단에 가변 도메인(VL)을 갖고, 다른 쪽 말단에 불변 도메인(CL)이 있다. VH은 VH와 정렬(align)되고, CL은 중쇄의 제1 불변 도메인(CH1)과 정렬된다. 특정 아미노산 잔기는 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 사이에 인터페이스를 형성하는 것으로 믿어진다. VH 및 VL의 쌍은 함께 단일 항원-결합 부위를 형성한다. 상이한 클래스의 항체의 구조 및 특성에 대해서는 예를 들어, Basic and Clinical Immunology 71 (Stites et al. eds., 8th ed. 1994); and Immunobiology (Janeway et al. eds., 5th ed. 2001)을 참고하라.
용어 "Fab" 또는 "Fab 영역"은 항원에 결합하는 항체 영역을 지칭한다. 통상적인 IgG는 2개의 Fab 영역을 보통 포함하며, 각각은 Y-형 IgG 구조의 두 암(arm) 중 하나에 있다. 각 Fab 영역은 중쇄 및 경쇄 각각의 하나의 가변 영역 및 하나의 불변 영역으로 일반적으로 구성된다. 보다 구체적으로, Fab 영역에서 종쇄의 가변 영역 및 불변 영역은 VH 및 CH1 영역이고, Fab 영역의 경쇄의 가변 영역 및 불변 영역 은 VL 및 CL 영역이다. Fab 영역의 VH, CH1, VL, 및 CL은 본 개시에 따른 항원 결합 능력을 부여하기 위해 다양한 방식으로 배열될 수 있다. 예를 들어, 종래의 IgG의 Fab 영역과 유사하게 VH 및 CH1 영역은 하나의 폴리펩티드에 있을 수 있고, VL 및 CL 영역은 별도의 폴리펩티드에 있을 수 있다. 대안적으로, VH, CH1, VL 및 CL 영역은 모두 동일한 폴리펩티드 상에 있을 수 있고, 아래 섹션에서 보다 상세히 설명하는 바와 같이 상이한 순서로 배향될 수 있다.
용어 "가변 영역", "가변 도메인", "V 영역" 또는 "V 도메인"은 일반적으로 경쇄 또는 중쇄의 아미노-말단에 위치하고, 중쇄에서 약 120 내지 130개 아미노산의 길이 및 경쇄에서 약 100 내지 110개 아미노산의 길이를 갖고, 및 특정 항원에 대한 각 특정 합체의 결합 및 특이성에 사용되는 항체의 경쇄 도는 중쇄의 일부를 지칭한다. 중쇄의 가변 영역은 "VH"로 지칭될 수 있다. 경쇄의 가변 영역은 "VL"로 지칭될 수 있다. 용어 "가변"은 가변 영역의 특정 세그먼트가 항체간에 서열이 광범위하게 다르다는 사실을 의미한다. V 영역은 항원 결합을 매개하고 특정 항원에 대한 특정 항체의 특이성을 정의한다. 그러나 가변성은 가변 영역의 110개 아미노산 범위에 걸쳐 고르게 분포되지 않는다. 대신, V 영역은 각각 약 9-12개의 아미노산 길이인 "초 가변 영역(hypervariable regions)"이라고 하는 더 큰 가변성(예컨대 극도 가변성)의 더 짧은 영역에 의해 분리된 약 15-30개 아미노산의 프레임워크 영역(FRs)이라고 하는 덜 가변적인(예컨대 상대적으로 불변) 스트레치로 구성된다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 각각 4개의 FR을 포함하며, 이는 주로 β시트 구성을 채택하고, 3개의 초 가변 영역에 의해 연결되며, 이는 루프 연결을 형성하고 일부 경우에는 β 시트 구조의 일부를 형성한다. 각 사슬의 초 가변 영역은 FR에 의해 매우 근접하게 함께 유지되고, 다른 사슬의 초 가변 영역과 함께 항체의 항원 결합 부위 형성에 기여한다(예를 들어, Kabat et al., Sequences of Immunological Interest (5th ed. 1991) 참조). 불변 영역은 항체를 항원에 결합하는 데 직접 관여하지 않지만 항체 의존성 세포 독성(ADCC) 및 보체 의존성 세포 독성(CDC)에 대한 항체의 참여와 같은 다양한 이펙터 기능을 나타낸다. 가변 영역은 상이한 항체 사이에서 서열이 크게 다르다. 특정 구현 예에서, 가변 영역은 인간 가변 영역이다.
용어 "Kabat에 따른 가변 영역 잔기 넘버링" 또는 "Kabat에서와 같은 아미노산 위치 넘버링" 및 이의 변형은 Kabat et al., supra의 항체 컴파일의 중쇄 가변 영역 또는 경쇄 가변 영역에 사용되는 넘버링 시스템을 지칭한다. 이러한 넘버링 시스템을 사용하여, 실제 선형 아미노산 서열은 가변 도메인의 FR 또는 CDR의 단축 또는 삽입에 상응하는 더 적거나 추가의 아미노산을 함유할 수 있다. 예를 들어, 중쇄 가변 도메인은 잔기 52 뒤에 단일 아미노산 삽입물(Kabat에 따른 잔기 52a) 및 잔기 82 뒤에 3개의 삽입된 잔기(예컨대, Kabat에 따른 잔기 82a, 82b 및 82c 등)를 포함할 수 있다. 잔기의 Kabat 넘버링은 "표준" Kabat 넘버링된 서열로 항체 서열의 상동성 영역에서 정렬함으로써 주어진 항체에 대해 결정될 수 있다. Kabat 넘버링 시스템은 일반적으로 가변 도메인의 잔기(대략 경쇄의 1-107개 잔기 및 중쇄의 1-113개 잔기)를 언급할 때 사용된다(예컨대 Kabat et al., supra). "EU 넘버링 시스템" 또는 "EU 인덱스"는 일반적으로 면역 글로불린 중쇄 불변 영역의 잔기를 지칭할 때 사용된다 (예를 들어, Kabat et al.에 보고된 EU 인덱스). "Kabat에서와 같은 EU 인덱스"는 인간 IgG 1 EU 항체의 잔기 넘버링을 지칭한다. 예를 들어 AbM, Chothia, Contact, IMGT 및 AHon과 같은 다른 넘버링 시스템이 설명된다.
항체와 관련하여 사용될 때, 용어 "중쇄"는 약 50-70 kDa의 폴리펩티드 사슬을 지칭하고, 여기서 아미노-말단 부분은 약 120 내지 130개 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함하고, 카르복시-말단 부분은 불변 영역을 포함한다. 불변 영역은 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 기준으로, 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ) 및 뮤(μ)로 지칭되는 5가지 타입(예컨대 아이소타입) 중 하나일 수 있다. 구별되는 중쇄는 크기가 다릅니다: α, δ 및 γ는 약 450개의 아미노산을 함유하는 반면 μ 및 ε은 약 550개의 아미노산을 함유한다. 경쇄와 결합 될 때, 이러한 구별되는 타입의 중쇄는 IgG의 4개의 하위 클래스, 즉 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하여 각각 5개의 잘 알려진 항체 클래스(예컨대 아이소타입), IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM을 생성한다.
항체와 관련하여 사용될 때, 용어 "경쇄"는 약 25kDa의 폴리펩티드 사슬을 지칭하며, 여기서 아미노-말단 부분은 약 100 내지 약 110개 이상의 아미노산의 가변 영역을 포함하고, 카복시-말단 부분은 불변 영역을 포함한다. 경쇄의 대략적인 길이는 아미노산 211 내지 217개다. 불변 도메인의 아미노산 서열을 기준으로 카파(κ) 또는 람다(λ)라고 하는 두 가지 타입이 있다.
본원에 사용된 용어 "초 가변 영역", "HVR", "상보성 결정 영역" 및 "CDR"은 상호 교환적으로 사용된다. "CDR"은 면역 글로불린(Ig 또는 항체) VH β-시트 프레임워크의 비-프레임 워크 영역 내의 3개의 초 가변 영역(H1, H2 또는 H3) 중 하나 또는 항체 VL β-시트 프레임워크의 비-프레임워크 영역 내 3개의 초 가변 영역(L1, L2 또는 L3) 중 하나를 의미한다. 따라서, CDRs은 프레임워크 영역 서열 내에 산재된 가변 영역 서열이다.
CDR 영역은 당업자에게 잘 알려져 있으며, 잘 알려진 넘버링 시스템에 의해 정의된다. 예를 들어, Kabat 상보성 결정 영역(CDR)은 서열 가변성을 기반으로 하며 가장 일반적으로 사용됩니다(예를 들어, Kabat et al., supra 참조). Chothia는 대신 구조적 루프의 위치를 나타낸다(예컨대 Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196 : 901-17 참조). Kabat 넘버링 규칙을 사용하여 넘버링할 때 Chothia CDR-H1 루프의 말단은 루프의 길이에 따라 H32와 H34 사이에서 변한다(이는 Kabat 넘버링 체계가 삽입을 H35A 및 H35B에 배치하기 때문이다; 35A와 35B가 모두 없으면 루프는 32에서 끝난다; 35A만 있으면 루프는 33에서 끝난다; 35A와 35B가 모두 있는 경우 루프는 34에서 끝난다). AbM 초 가변 영역은 Kabat CDRs와 Chothia 구조 루프 사이의 절충안을 나타내며 Oxford Molecular의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에서 사용된다(예컨대 Antibody Engineering Vol. 2 (Kontermann and Dubel eds., 2d ed. 2010) 참조). "콘택트(contact)" 초 가변 영역은 사용 가능한 복합 결정 구조의 분석을 기반으로 한다. 개발되고 널리 채택된 또 다른 범용 넘버링 시스템은 ImMunoGeneTics(IMGT) Information System®이다 (Lafranc et al., 2003, Dev. Comp. Immunol. 27 (1) : 55-77). IMGT는 인간 및 기타 척추 동물의 면역 글로불린(IG), T-세포 수용체(TCR) 및 주요 조직 적합성 복합체(MHC)를 전문으로 하는 통합 정보 시스템이다. 여기서, CDR은 경쇄 또는 중쇄 내의 아미노산 서열과 위치 모두로 지칭된다. 구조적 특징에 따라 가변 도메인 서열을 정렬하는 넘버링 시스템을 사용하여, 면역 글로불린 가변 도메인의 구조 내에서 CDR의 "위치"가 종간에 보존되고 루프라고 하는 구조에 존재하므로, CDR 및 프레임워크 잔기는 쉽게 식별된다. 이 정보는 한 종의 면역 글로불린의 CDR 잔기를, 일반적으로 인간 항체의 수용체 프레임워크로 이식하고 대체하는데 사용할 수 있다. Honegger and Pluckthun, 2001, J. Mol. Biol. 309 : 657-70에 의해 추가 넘버링 시스템(AHon)가 개발되었다. 예를 들어 Kabat 넘버링 및 IMGT 고유 넘버링 시스템을 포함하는 넘버링 시스템 간의 대응은 당업자에게 잘 알려져있다(예를 들어, Kabat, supra; Chothia and Lesk, supra; Martin, supra; Lefranc et al., supra 참고). 각각의 이러한 초 가변 영역 또는 CDR의 잔기는 아래에 명시되어 있다.
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주어진 CDR의 경계는 식별에 사용되는 방식에 따라 달라질 수 있다. 따라서, 달리 명시되지 않는 한, 예를 들어 가변 영역은 물론 항체 또는 이의 영역의 개별 CDR (예컨대 "CDR-H1, CDR-H2)과 같은 주어진 항체 또는 이의 영역의 용어 "CDR"및 "상보성 결정 영역"은 위에서 설명된 임의의 공지된 방식에 의해 정의된 상보성 결정 영역을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 일부 예에서, Kabat, Chothia 또는 Contact 방법에 의해 정의된 CDR과 같이 특정 CDR 또는 CDRs의 식별을 위한 체계가 특정된다. 다른 경우에는, CDR의 특정 아미노산 서열이 주어진다.
초 가변 영역은 다음과 같이 "확장 초 가변 영역"을 포함할 수 있다: VL에서 24-36 또는 24-34 (L1), 46-56 또는 50-56 (L2) 및 89-97 또는 89-96 (L3), 및 VH에서 26-35 또는 26-35A (H1), 50-65 또는 49-65 (H2) 및 93-102, 94-102 또는 95-102 (H3).
용어 "불변 영역" 또는 "불변 도메인"은 항원에 대한 항체의 결합에 직접 관여하지 않지만 Fc 수용체와의 상호 작용과 같은 다양한 이펙터 기능을 나타내는 경쇄 및 중쇄의 카르복시 말단 부분을 지칭한다. 이 용어는 항원 결합 부위를 함유하는 면역 글로불린의 다른 부분, 가변 영역에 비해 보다 보존된 아미노산 서열을 포함하는 면역 글로불린 분자의 부분을 의미한다. 불변 영역은 중쇄의 CH1, CH2 및 CH3 영역 및 경쇄의 CL 영역을 함유할 수 있다.
용어 "프레임워크" 또는 "FR"은 CDRs 옆에 있는 가변 영역 잔기를 지칭한다. FR 잔기는 예를 들어 키메릭, 인간화, 인간, 도메인 항체, 디아바디, 선형 항체 및 이중 특이성 항체에 존재한다. FR 잔기는 초 가변 영역 잔기 또는 CDR 잔기 이외의 가변 도메인 잔기이다.
본원에서 용어 "Fc 영역"은 예를 들어 천연 서열 Fc 영역, 재조합 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함하는 면역 글로불린 중쇄의 C- 말단 영역을 정의하는데 사용된다. 면역 글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계는 다양할 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 종종 위치 Cys226의 아미노산 잔기 또는 Pro230에서 이의 카르복실-말단까지 스트레치되도록 정의된다. Fc 영역의 C-말단 라이신(EU 넘버링 시스템에 따른 잔기 447)은 예를 들어 항체의 생산 또는 정제 동안 또는 항체의 중쇄를 코딩하는 핵산을 재조합적으로 엔지니어링함으로써 제거될 수 있다. 따라서, 온전한 항체의 조성물은 모든 K447 잔기가 제거된 항체 집단, K447 잔기가 제거되지 않은 항체 집단, 및 K447 잔기가 있거나 없는 항체의 혼합물을 포함하는 항체 집단을 포함할 수 있다. "기능적 Fc 영역"은 천연 서열 Fc 영역의 "이펙터 기능"을 보유한다. 예시적인 "이펙터 기능"은 C1q 결합; CDC; Fc 수용체 결합; ADCC; 식균 작용; 세포 표면 수용체(예컨대, B 세포 수용체)의 하향 조절 등을 포함한다. 이러한 이펙터 기능은 일반적으로 Fc 영역이 결합 영역 또는 결합 도메인(예를 들어, 항체 가변 영역 또는 도메인)과 결합될 것을 필요로 하며, 당업자에게 공지된 다양한 분석을 사용하여 평가될 수 있다. "변이 Fc 영역"은 적어도 하나의 아미노산 변형(예를 들어, 치환, 추가 또는 결실)으로 인해 천연 서열 Fc 영역의 것과 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 특정 구현 예에서, 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역 또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역과 비교하여 적어도 하나의 아미노산 치환, 예를 들어 천연 서열 Fc 영역 또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역에서 약 1 개 내지 약 10 개의 아미노산 치환, 또는 약 1 개 내지 약 5 개의 아미노산 치환을 갖는다. 본원의 변이체 Fc 영역은 천연 서열 Fc 영역 및/또는 모 폴리펩티드의 Fc 영역과 적어도 약 80% 상동성, 또는 이들과 적어도 약 90% 상동성, 예를 들어 이들과 적어도 약 95% 상동성을 가질 수 있다 .
본원에 사용된 "에피토프"는 당업계의 용어이고 결합 분자(예를 들어, 항체)가 특이적으로 결합할 수 있는 항원의 국소화된 영역을 지칭한다. 에피토프는 선형 에피토프 또는 입체형태적(conformational), 비선형 또는 불연속 에피토프일 수 있다. 예를 들어, 폴리펩티드 항원의 경우, 에피토프는 폴리펩티드의 인접 아미노산("선형" 에피토프)일 수 있거나 에피토프는 폴리펩티드의 2개 이상의 비-연속 영역의 아미노산을 포함할 수 있다( "입체형태", "비선형" 또는 "불연속" 에피토프). 일반적으로 선형 에피토프는 2차, 3차 또는 4차 구조에 의존하거나 의존하지 않을 수 있다는 것을 당업자는 이해할 것이다. 예를 들어, 몇몇 구현 예에서, 결합 분자는 아미노산 그룹이 천연 3차원 단백질 구조로 접혀 있는지 여부에 관계 없이 아미노산 그룹에 결합한다. 다른 구현 예에서, 결합 분자는 에피토프를 인식하고 결합하기 위해 특정 형태(예를 들어, 구부리기, 꼬임, 뒤집기 또는 접힘)를 나타내는 에피토프를 구성하는 아미노산 잔기를 필요로 한다.
용어 "폴리펩티드" 및 "펩티드" 및 "단백질"은 본원에서 상호 교환적으로 사용되며 임의의 길이의 아미노산 중합체를 지칭한다. 중합체는 선형 또는 분지형일 수 있고, 이는 변형된 아미노산을 포함할 수 있으며, 이는 비-아미노산에 의해 단속될 수 있다. 이 용어는 또한 자연적으로 또는 개입에 의해 변형된 아미노산 중합체를 포함한다; 예를 들어, 이황화 결합 형성, 글리코실화, 지질화, 아세틸화, 인산화 또는 기타 조작 또는 변형. 또한, 예를 들어 비 천연 아미노산뿐만 아니라 당업계에 공지된 다른 변형을 포함하지만 이에 제한되지 않는 하나 이상의 아미노산 유사체를 함유하는 폴리펩티드가 정의 내에 포함된다. 본 개시의 폴리펩티드는 항체 또는 면역 글로불린 슈퍼 패밀리의 다른 멤버에 기초할 수 있기 때문에, 특정 구현 예에서 "폴리펩티드"는 단일 사슬 또는 2개 이상의 연관된 사슬로 발생할 수 있음이 이해된다.
용어 "벡터"는 핵산 서열을 숙주 세포로 도입하기 위해, 예를 들어, 본원에 기재된 결합 분자(예를 들어, 항체)를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는, 핵산 서열을 운반하거나 포함하는데 사용되는 물질을 지칭한다. 사용에 적용할 수 있는 벡터는 예를 들어 발현 벡터, 플라스미드, 파지 벡터, 바이러스 벡터, 에피솜 및 인공 염색체를 포함하며, 숙주 세포의 염색체로의 안정적인 통합을 위해 작동 가능한, 선택 서열 또는 마커를 포함할 수 있다. 추가로, 벡터는 하나 이상의 선택 가능한 마커 유전자 및 적절한 발현 제어 서열을 포함할 수 있다. 포함될 수 있는 선택 가능한 마커 유전자는, 예를 들어, 항생제 또는 독소에 대한 내성을 제공하거나 영양 요구성 결핍을 보완하거나 배양 배지에 없는 중요한 영양소를 공급한다. 발현 제어 서열은 구성적(constitutive) 및 유도성 프로모터, 전사 인핸서, 전사 종결자 등을 포함할 수 있으며, 이는 당업계에 잘 알려져 있다. 둘 이상의 핵산 분자가 공동 발현되어야 하는 경우(예컨대, 항체 중쇄 및 경쇄 또는 항체 VH 및 VL), 두 핵산 분자는 예를 들어 단일 발현 벡터에 삽입되거나 별도의 발현 벡터들에 삽입될 수 있다. 단일 벡터 발현의 경우, 코딩 핵산은 하나의 공통 발현 제어 서열에 작동적으로 링크되거나 하나의 유도성 프로모터 및 하나의 구성적 프로모터와 같은 상이한 발현 제어 서열에 링크될 수 있다. 핵산 분자의 숙주 세포로의 도입은 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 확인될 수 있다. 이러한 방법은 예를 들어, 노던 블롯 또는 mRNA의 중합 효소 연쇄 반응(PCR) 증폭과 같은 핵산 분석, 유전자 산물의 발현을 위한 면역 블롯팅, 또는 도입된 핵산 서열의 발현 또는 그에 상응하는 유전자 산물을 테스트하기 위한 기타 적절한 분석 방법을 포함한다. 당업자는 핵산 분자가 원하는 생성물을 생산하기에 충분한 양으로 발현된다는 것을 이해하고, 발현 수준이 당업계에 잘 알려진 방법을 사용하여 충분한 발현을 얻기 위해 최적화될 수 있음을 추가로 이해한다.
본원에 사용된 용어 "숙주"는 포유 동물(예를 들어, 인간)과 같은 동물을 지칭한다.
본원에 사용 된 용어 "숙주 세포"는 핵산 분자로 형질 감염될 수 있는 특정 대상 세포 및 이러한 세포의 자손 또는 잠재적 자손을 지칭한다. 이러한 세포의 자손은 후속 세대 또는 핵산 분자의 숙주 세포 게놈으로의 통합 에서 발생할 수 있는 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인해 핵산 분자로 형질 감염된 모세포와 동일하지 않을 수 있다.
"단리된 핵산"은 예를 들어 RNA, DNA 또는 혼합 핵산과 같은, 핵산이고, 이는 다른 게놈 DNA 서열뿐만 아니라 단백질 또는 리보솜 및 중합 효소와 같은 복합체와 실질적으로 분리되어 있으며, 자연히 네이티브 서열을 동반한다. "단리된" 핵산 분자는 핵산 분자의 천연 공급원에 존재하는 다른 핵산 분자와 분리된 것이다. 더욱이, cDNA 분자와 같은 "단리된" 핵산 분자는 재조합 기술에 의해 생산될 때 다른 세포 물질 또는 배양 배지가 실질적으로 없을 수 있거나 화학적으로 합성될 때 화학적 전구체 또는 다른 화학 물질이 실질적으로 없을 수 있다. 특정 구현 예에서, 본원에 기재된 항체를 코딩하는 하나 이상의 핵산 분자가 단리되거나 정제된다. 상기 용어는 자연 발생 환경에서 제거된 핵산 서열을 포함하며, 재조합 또는 복제된 DNA 단리물 및 화학적으로 합성된 유사체 또는 이종 시스템에 의해 생물학적으로 합성된 유사체를 포함한다. 실질적으로 순수한 분자는 단리된 형태의 분자를 포함할 수 있다.
본원에서 상호 교환적으로 사용되는 "폴리 뉴클레오티드" 또는 "핵산"은 임의의 길이의 뉴클레오티드의 중합체를 지칭하고 DNA 및 RNA를 포함한다. 뉴클레오티드는 데옥시리보 뉴클레오티드, 리보 뉴클레오티드, 변형된 뉴클레오티드 또는 염기, 및/또는 이들의 유사체, 또는 DNA 또는 RNA 중합 효소 또는 합성 반응에 의해 중합체에 통합될 수 있는 임의의 기질일 수 있다. 폴리 뉴클레오티드는 메틸화된 뉴클레오티드 및 이들의 유사체와 같은 변형된 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 본원에 사용된 "올리고 뉴클레오티드"는 일반적으로 길이가 약 200 뉴클레오티드 미만인, 그러나 반드시 그런 것은 아닌, 짧은, 일반적으로 단일 가닥의, 합성 폴리 뉴클레오티드를 지칭한다. 용어 "올리고 뉴클레오티드" 및 "폴리 뉴클레오티드"는 상호 배타적이지 않다. 폴리 뉴클레오티드에 대한 위의 설명은 올리고 뉴클레오티드에 동등하고 완전히 적용 가능하다. 본 개시의 결합 분자를 생성하는 세포는 모 융합 세포뿐만 아니라 항체를 코딩하는 핵산이 도입된 진핵 숙주 세포 및 박테리아를 포함할 수 있다. 달리 명시되지 않는 한, 본원에 개시된 임의의 단일 가닥 폴리 뉴클레오티드 서열의 좌측 말단은 5' 말단이고; 이중 가닥 폴리 뉴클레오티드 서열의 좌측 방향은 5' 방향이라고 지칭된다. 초기 RNA 전사체의 5'에서 3' 추가의 방향을 전사 방향이라고 하고; RNA 전사체의 5'에서 5' 말단에 있는 RNA 전사체와 동일한 서열을 포함하는 DNA 가닥 상의 서열 영역은 "업스트림 서열"로 지칭되고; RNA 전사체의 3'에서 3' 말단에 있는 RNA 전사체와 동일한 서열을 포함하는 DNA 가닥의 서열 영역은 "다운스트림 서열"로 지칭된다.
본원에 사용된 용어 "약제학적으로 허용되는"은 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되거나, 동물에, 보다 구체적으로 인간에 사용하기 위해 미국 약전, 유럽 약전 또는 기타 일반적으로 인정되는 약전에 열거됨을 의미한다.
"부형제"는 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 용매, 또는 캡슐화 물질과 같은 약제학적으로 허용되는 물질, 조성물, 또는 비히클을 의미한다. 부형제는 예를 들어, 흡수 촉진제, 산화 방지제, 결합제, 완충제, 담체, 코팅제, 착색제, 희석제, 붕해제, 유화제, 증량제, 충전제, 향료, 보습제, 윤활제, 향수, 방부제, 추진제, 이형제, 살균제, 감미료, 가용화제, 습윤제 및 이들의 혼합물과 같은 첨가제 또는 캡슐화 물질를 포함한다. 용어 "부형제"는 또한 희석제, 보조제(예를 들어, 프로이드 어주번트(Freudn's adjuvant)(완전 또는 불완전) 또는 비히클을 지칭할 수 있다.
몇몇 구현 예에서, 부형제는 약제학적으로 허용되는 부형제이다. 약제학적으로 허용되는 부형제의 예는 인산염, 시트레이트 및 기타 유기산과 같은 완충액; 아스코르브 산을 포함한 항산화제; 저 분자량 (예를 들어, 약 10개 미만의 아미노산 잔기) 폴리펩티드; 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역 글로불린과 같은 단백질; 폴리 비닐 피롤리돈과 같은 친수성 중합체; 1-히스티딘, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 라이신과 같은 아미노산; 글루코스, 수크로스, 트레할로스 이수화물, 만노스 또는 덱스트린을 포함하는 단당류, 이당류, 및 기타 탄수화물; EDTA와 같은 킬레이트제; 만니톨 또는 소르비톨과 같은 당 알코올; 나트륨과 같은 염 형성 카운터 이온; 및/또는 TWEEN™, 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 및 PLURONICS™와 같은 비이온성 계면 활성제를 포함한다. 약제학적으로 허용되는 부형제의 다른 예는 Remington and Gennaro, Remington's Pharmaceutical Sciences(18th ed. 1990)에 설명되어 있다.
하나의 구현 예에서, 각 성분은 약제학적 제형의 다른 성분과 양립할 수 있다는 의미에서 "약제학적으로 허용"되고, 합리적인 이익/위험 비율에 상응하는 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 면역원성 또는 기타 문제 또는 합병증 없이, 인간 및 동물의 조직 또는 기관과 접촉하여 사용하기에 적합하다. 예컨대, Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia, PA, 2005; Handbook of Pharmaceutical Excipients, 6th ed.; Rowe et al., Eds.; The Pharmaceutical Press and the American Pharmaceutical Association: 2009; Handbook of Pharmaceutical Additives, 3rd ed.; Ash and Ash Eds.; Gower Publishing Company: 2007; Pharmaceutical Preformulation and Formulation, 2nd ed.; Gibson Ed.; CRC Press LLC: Boca Raton, FL, 2009을 참고하라. 몇몇 구현 예에서, 약제학적으로 허용되는 부형제는 사용되는 투여량 및 농도에서 이에 노출되는 세포 또는 포유 동물에 무독성이다. 몇몇 구현 예에서, 약제학적으로 허용되는 부형제는 수성 pH 완충 용액이다.
몇몇 구현 예에서, 부형제는 땅콩유, 대두유, 광유, 참기름 등과 같은 석유, 동물성, 식물성 또는 합성 기원의 것을 포함하는 물 및 오일과 같은 멸균 액체이다. 물은 조성물(예를 들어, 약제학적 조성물)이 정맥 내로 투여될 때 예시적인 부형제이다. 식염수 용액과 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액도 액체 부형제로서, 특히 주사가능한 용액으로서 사용될 수 있다. 부형제는 또한 전분, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 분필, 실리카겔, 나트륨 스테아레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 탈크, 염화나트륨, 건조 탈지유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함할 수 있다. 원한다면, 조성물은 또한 소량의 습윤제 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 함유할 수 있다. 조성물은 용액, 현탁액, 에멀젼, 정제, 알약, 캡슐, 분말, 서방-형 제형 등의 형태를 취할 수 있다.
약제학적 화합물을 포함하는 조성물은 적합한 양의 부형제와 함께, 예를 들어 분리되거나 정제된 형태의 결합 분자(예를 들어, 항체)를 함유할 수 있다.
약어 "MMAE"는 모노메틸 아우리스타틴 E를 지칭한다.
달리 언급되지 않는 한, 용어 "알킬"은 약 1 내지 약 20개의 탄소 원자(및 그 안의 탄소 원자의 범위 및 특정 수의 모든 조합 및 하위 조합)를 포함하는 포화 직쇄형 또는 분지형 탄화수소를 의미하며, 약 1 내지 약 8개의 탄소 원자가 바람직하다. 알킬기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, 이소-부틸, sec-부틸, tert-부틸, n-펜틸, 2-펜틸, 3-펜틸, 2-메틸-2-부틸, n 헥실, n-헵틸, n-옥틸, n-노닐, n-데실, 3-메틸-2-부틸, 3-메틸-1-부틸, 2 메틸-1-부틸, 1-헥실, 2-헥실, 3-헥실, 2-메틸-2-펜틸, 3-메틸-2-펜틸, 4-메틸-2-펜틸, 3-메틸-3-펜틸, 2-메틸-3-펜틸, 2,3-디메틸-2-부틸 및 3,3-디메틸-2-부틸이다. 알킬기는 단독으로 또는 다른 그룹의 일부로, -할로겐, -O-(C1-C8 알킬), -O-(C2-C8 알케닐), -O-(C2-C8 알키닐), -아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(O)R', -SR', -SO3R', -S(O)2R', -S(O)R', -OH, =O, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 및 -CN을 포함하나, 이에 제한되지 않는 하나 이상의 그룹, 바람직하게는 1 내지 3 개의 그룹(및 할로겐으로부터 선택된 임의의 추가 치환기)으로 선택적으로 치환될 수 있고, 여기서 각 R'는 -H, -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐, -C2-C8 알키닐 또는 -아릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 상기 -O-(C1-C8 알킬), -O-(C2-C8 알케닐),-O-(C2-C8 알키닐),-아릴, -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐 및 -C2-C8 알키닐 그룹은 -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐, -C2-C8 알키닐,-할로겐, -O-(C1-C8 알킬), -O-(C2-C8 알케닐), -O-(C2-C8 알키닐),-아릴, -C(O)R'', -OC(O)R '', -C(O)OR'', -C(O)NH2, -C(O)NHR'', -C(O)N(R'')2, -NHC(O)R'' , -SR'', -SO3R'', -S(O)2R'', -S(O)R'', -OH, -N3, -NH2, -NH(R''), -N(R'')2 및 CN을 포함하나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 그룹으로 선택적으로 더욱 치환될 수 있고, 여기서 각각의 R''은 -H, -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐, -C2-C8 알키닐 또는 -아릴로부터 독립적으로 선택된다.
달리 언급되지 않는 한, 용어 "알케닐" 및 "알키닐"은 약 2 내지 약 20개의 탄소 원자(및 그 안의 탄소 원자의 범위 및 특정 수의 모든 조합 및 하위 조합)를 포함하는 직쇄형 및 분지형 탄소 사슬을 지칭하며, 약 2 내지 약 8개의 탄소 원자가 바람직하다. 알케닐 사슬은 사슬에 적어도 하나의 이중 결합을 갖고 알키닐 사슬은 사슬에 적어도 하나의 삼중 결합을 갖는다. 알케닐 기의 예는 에틸렌 또는 비닐, 알릴, -1 부테닐, -2 부테닐,-이소부틸레닐, -1 펜테닐, -2 펜테닐, -3 메틸 1 부테닐, -2 메틸 2 부테닐 및 2,3 디메틸 -2 부테닐을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 알키닐 기의 예는 아세틸렌, 프로파길, 아세틸레닐, 프로피닐, -1 부티닐, -2 부티닐, -1 펜티닐, -2 펜티닐 및 -3-메틸-1 부티닐을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 알케닐기 및 알키틸기는, 단독으로 또는 다른 그룹의 일부로, -할로겐, -O-(C1-C8 알킬), -O-(C2-C8 알케닐), -O-(C2-C8 알키닐), -아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(O)R', -SR', -SO3R', -S(O)2R', -S(O)R', -OH, =O, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 및 -CN을 포함하나, 이에 제한되지 않는 하나 이상의 그룹, 바람직하게는 1 내지 3 개의 그룹(및 할로겐으로부터 선택된 임의의 추가 치환기)으로 선택적으로 치환될 수 있고, 여기서 각 R'는 -H, -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐, -C2-C8 알키닐 또는 -아릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 상기 -O-(C1-C8 알킬), -O-(C2-C8 알케닐),-O-(C2-C8 알키닐),-아릴, -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐 및 -C2-C8 알키닐 그룹은 -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐, -C2-C8 알키닐,-할로겐, -O-(C1-C8 알킬), -O-(C2-C8 알케닐), -O-(C2-C8 알키닐),-아릴, -C(O)R'', -OC(O)R '', -C(O)OR'', -C(O)NH2, -C(O)NHR'', -C(O)N(R'')2, -NHC(O)R'' , -SR'', -SO3R'', -S(O)2R'', -S(O)R'', -OH, -N3, -NH2, -NH(R''), -N(R'')2 및 CN을 포함하나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 그룹으로 선택적으로 더욱 치환될 수 있고, 여기서 각각의 R''은 -H, -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐, -C2-C8 알키닐 또는 -아릴로부터 독립적으로 선택된다.
달리 언급되지 않는 한, 용어 "알킬렌"은 약 1 내지 약 20 개의 탄소 원자(및 그 안의 탄소 원자의 범위 및 특정 수의 모든 조합 및 하위 조합)를 포함하고, 여기서 약 1 내지 약 8 개의 탄소 원자가 바람직하고, 및 모 알칸의 동일하거나 2개의 상이한 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자를 제거함으로써 유래된 2개의 1가 라디칼 중심을 갖는, 포화된 분지형 또는 직쇄형 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 전형적인 알킬렌은 메틸렌, 에틸렌, 프로필렌, 부틸렌, 펜틸렌, 헥실렌, 헵틸렌, 옥틸렌, 노닐렌, 데칼렌, 1,4-사이클로 헥실렌 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 알킬렌기는, 단독으로 또는 다른 그룹의 일부로, -할로겐, -O-(C1-C8 알킬), -O-(C2-C8 알케닐), -O-(C2-C8 알키닐), -아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(O)R', -SR', -SO3R', -S(O)2R', -S(O)R', -OH, =O, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 및 -CN을 포함하나, 이에 제한되지 않는 하나 이상의 그룹, 바람직하게는 1 내지 3 개의 그룹(및 할로겐으로부터 선택된 임의의 추가 치환기)으로 선택적으로 치환될 수 있고, 여기서 각 R'는 -H, -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐, -C2-C8 알키닐 또는 -아릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 상기 -O-(C1-C8 알킬), -O-(C2-C8 알케닐),-O-(C2-C8 알키닐),-아릴, -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐 및 -C2-C8 알키닐 그룹은 -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐, -C2-C8 알키닐,-할로겐, -O-(C1-C8 알킬), -O-(C2-C8 알케닐), -O-(C2-C8 알키닐),-아릴, -C(O)R'', -OC(O)R '', -C(O)OR'', -C(O)NH2, -C(O)NHR'', -C(O)N(R'')2, -NHC(O)R'' , -SR'', -SO3R'', -S(O)2R'', -S(O)R'', -OH, -N3, -NH2, -NH(R''), -N(R'')2 및 CN을 포함하나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 그룹으로 선택적으로 더욱 치환될 수 있고, 여기서 각각의 R''은 -H, -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐, -C2-C8 알키닐 또는 -아릴로부터 독립적으로 선택된다.
달리 언급되지 않는 한, 용어 "알케닐렌"은 적어도 하나의 탄소-탄소 이중 결합을 함유하는 선택적으로 치환된 알킬렌기를 지칭한다. 예시적인 알케닐렌기는, 예를 들어 에테닐렌(-CH=CH-) 및 프로페닐렌(-CH=CHCH2-)을 포함한다.
달리 언급되지 않는 한, 용어 "알키닐렌"은 적어도 하나의 탄소-탄소 삼중 결합을 함유하는 선택적으로 치환된 알킬렌기를 지칭한다. 예시적인 알키닐렌기는, 예를 들어 아세틸렌(-C≡C-), 프로파길 (-CH2C≡C-) 및 4-펜티닐(-CH2CH2CH2C≡CH-)을 포함한다.
달리 언급되지 않는 한, 용어 "아릴"은 모 방향족 고리 시스템의 단일 탄소 원자에서 하나의 수소 원자를 제거함으로써 유래된 6-20개의 탄소 원자(및 그 안의 탄소 원자의 범위 및 특정 수의 모든 조합 및 하위 조합)의 1가 방향족 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 일부 아릴기는 예시적인 구조에서 "Ar"로 표시된다. 전형적인 아릴 그룹은 벤젠, 치환된 벤젠, 페닐, 나프탈렌, 안트라센, 비페닐 등으로부터 유래된 라디칼을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
아릴기는, 단독으로 또는 다른 그룹의 일부로, -할로겐, -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐, -C2-C8 알키닐, -O-(C1-C8 알킬), -O-(C2-C8 알케닐), -O-(C2-C8 알키닐), -아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(O)R', -SR', -SO3R', -S(O)2R', -S(O)R', -OH, =O, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 및 -CN을 포함하나, 이에 제한되지 않는 하나 이상의 그룹, 바람직하게는 1 내지 5개 또는 심지어 1 내지 2개의 그룹으로 선택적으로 치환될 수 있고, 여기서 각 R'는 -H, -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐, -C2-C8 알키닐 또는 -아릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 상기 -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐, -C2-C8 알키닐, -O-(C1-C8 알킬), -O-(C2-C8 알케닐),-O-(C2-C8 알키닐),-아릴 그룹은 -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐, -C2-C8 알키닐,-할로겐, -O-(C1-C8 알킬), -O-(C2-C8 알케닐), -O-(C2-C8 알키닐),-아릴, -C(O)R'', -OC(O)R '', -C(O)OR'', -C(O)NH2, -C(O)NHR'', -C(O)N(R'')2, -NHC(O)R'' , -SR'', -SO3R'', -S(O)2R'', -S(O)R'', -OH, -N3, -NH2, -NH(R''), -N(R'')2 및 CN을 포함하나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 그룹으로 선택적으로 더욱 치환될 수 있고, 여기서 각각의 R''은 -H, -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐, -C2-C8 알키닐 또는 -아릴로부터 독립적으로 선택된다.
달리 언급되지 않는 한, 용어 "아릴렌"은 2가(즉, 모 방향족 고리 시스템의 동일하거나 2개의 상이한 탄소 원자로부터 2개의 수소 원자의 제거에 의해 유래됨)인 선택적으로 치환된 아릴기를 지칭하며, 예시적인 아릴기로서 페닐을 갖는 다음 구조에 도시된 바와 같이, 오르토, 메타 또는 파라 배열로 존재할 수 있다.
Figure pct00009
전형적인 "-(C1-C8 알킬렌)아릴", "-(C2-C8 알케닐렌)아릴", 및 "-(C2-C8 알키닐렌) 아릴"기는 벤질, 2-페닐에탄-1-일, 2-페닐에텐-1-일, 나프틸메틸, 2-나프틸에탄-1-일, 2-나프 틸에텐-1-일, 나프토벤질, 2-나프토페닐에탄-1-일 등을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
달리 언급되지 않는 한, 용어 "헤테로 사이클"은 3 내지 14개의 고리 원자(고리 멤버라고도 지칭됨)를 갖는 모노 사이클릭, 바이 사이클릭 또는 폴리 사이클릭 고리 시스템을 지칭하며, 여기서 적어도 하나의 고리에서 적어도 하나의 고리 원자는 N, O, P 또는 S로부터 선택된 헤테로 원자이다(그 안의 탄소 원자 및 헤테러 원자의 범위 및 특정 수의 모든 조합 및 하위 조합). 헤테로 사이클은 N, O, P 또는 S로부터 독립적으로 선택된 1 내지 4개의 고리 헤테로 원자를 가질 수 있다. 헤테로 사이클에서 하나 이상의 N, C 또는 S 원자는 산화될 수 있다. 모노 사이클릭 헤테로 사이클은 바람직하게는 3 내지 7개의 고리 멤버(예를 들어, 2 내지 6 개의 탄소 원자 및 N, O, P 또는 S로부터 독립적으로 선택된 1 내지 3 개의 헤테로 원자)를 갖고, 바이 사이클릭 헤테로 사이클은 바람직하게는 5 내지 10 개의 고리 멤버(예컨대, 4 내지 9개의 탄소 원자 및 N, O, P 또는 S에서 독립적으로 선택되는 1 내지 3개의 헤테로 원자)를 갖는다. 헤테로 원자를 포함하는 고리는 방향족 또는 비 방향족일 수 있다. 달리 언급하지 않는 한, 헤테로 사이클은 안정한 구조를 결과하는 임의의 헤테로 원자 또는 탄소 원자의 펜던트기에 부착된다. 헤테로 사이클은 Paquette, "Principles of Modern Heterocyclic Chemistry"(W.A. Benjamin, New York, 1968), 특히 1, 3, 4, 6, 7, 9 장; "The Chemistry of Heterocyclic Compounds, A series of Monographs"(John Wiley & Sons, New York, 1950 ~ 현재), 특히 볼륨 13, 14, 16, 19 및 28; 및 J. Am. Chem. Soc. 82 : 5566 (1960)에 설명되어 있다. "헤테로 사이클"기의 예는 피리딜, 디히드로피리딜, 테트라 히드로 피리딜 (피페리딜), 티아졸릴, 피리 미디닐, 푸라닐, 티에닐, 피롤릴, 피라졸릴, 이미다졸릴, 테트라졸릴, 벤조 푸라닐, 티아나프탈 레닐, 인돌릴, 인돌레닐, 퀴놀리닐, 이소퀴놀리닐, 벤지미다졸릴, 피페리니딜, 4-피페리도닐, 피롤리디닐, 2-피롤리도닐, 피롤리닐, 테트라 히드로 푸라닐, 비스-테트라 히드로 푸라닐, 테트라 하이드로 퀴놀리닐, 테트라하이드로 이소퀴놀리닐, 데카 하이드로이소퀴놀리닐, 아조시닐, 트리아지닐, 6H-1,2,5-티아지닐, 2H, 6H-1,5,2-디티아지닐, 티에닐, 티안트레닐, 피라닐, 이소 벤조푸라닐, 크롬닐, 크산테닐, 페녹사티닐, 2H-피롤릴, 이소티아졸릴, 이속사졸릴, 피라지닐, 피리다지닐, 인돌리지닐, 이소인돌릴, 3H-인돌릴, 1H-인다졸릴, 퓨리닐, 4H-퀴놀리 지닐, 프탈라지닐, 나프티리디닐, 퀴녹살리닐, 퀴나졸리닐, 신놀리닐, 프테리디닐, 4H-카르 바졸릴, 카르바졸릴, β-카볼리닐, 페난트리디닐, 아크리디닐, 피리미디닐, 페난트롤리닐, 페나지닐, 페노티아지닐, 푸라자닐, 페녹사지닐, 이소크로마닐, 크로마닐, 이미다졸리디닐, 이미다졸리닐, 피라졸리디닐, 피라졸리닐, 피페라지닐, 인돌리닐, 이소인돌리닐, 퀴누클리디닐, 모르폴리닐, 옥사졸리디닐, 벤조트리아졸릴, 벤지속사졸릴, 옥신돌릴, 벤조옥사졸리닐 및 이사티노일을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 바람직한 "헤테로 사이클"기는 벤조푸라닐, 벤조티오페닐, 인돌릴, 벤조피라졸릴, 쿠마리닐, 이소퀴놀리닐, 피롤릴, 티오페닐, 푸라닐, 티아졸릴, 이미다졸릴, 피라졸릴, 트리아졸릴, 퀴놀리닐, 피리미디닐, 피리디닐, 피리도닐, 피라지닐, 피리다지닐, 이소티아졸릴, 이속사졸릴 및 테트라졸릴을 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 헤테로 사이클기는, 단독으로 또는 다른 그룹의 일부로, -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐, -C2-C8 알키닐, -할로겐, -O-(C1-C8 알킬), -O-(C2-C8 알케닐), -O-(C2-C8 알키닐), -아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(O)R', -SR', -SO3R', -S(O)2R', -S(O)R', -OH, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 및 -CN을 포함하나, 이에 제한되지 않는 하나 이상의 그룹, 바람직하게는 1 내지 2개의 그룹으로 선택적으로 치환될 수 있고, 여기서 각 R'는 -H, -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐, -C2-C8 알키닐 또는 -아릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 상기 -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐, -C2-C8 알키닐, -O-(C1-C8 알킬), -O-(C2-C8 알케닐),-O-(C2-C8 알키닐),-아릴 그룹은 -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐, -C2-C8 알키닐, -할로겐, -O-(C1-C8 알킬), -O-(C2-C8 알케닐), -O-(C2-C8 알키닐),-아릴, -C(O)R'', -OC(O)R '', -C(O)OR'', -C(O)NH2, -C(O)NHR'', -C(O)N(R'')2, -NHC(O)R'' , -SR'', -SO3R'', -S(O)2R'', -S(O)R'', -OH, -N3, -NH2, -NH(R''), -N(R'')2 및 CN을 포함하나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 그룹으로 선택적으로 더욱 치환될 수 있고, 여기서 각각의 R''은 -H, -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐, -C2-C8 알키닐 또는 -아릴로부터 독립적으로 선택된다.
제한이 아닌 예로서, 탄소-결합된 헤테로 사이클은 다음 위치에서 결합될 수 있다 : 피리딘의 위치 2, 3, 4, 5, 또는 6; 피리다진의 위치 3, 4, 5 또는 6; 피리미딘의 위치 2, 4, 5 또는 6; 피라진의 위치 2, 3, 5 또는 6; 푸란, 테트라히드로푸란, 티오푸란, 티오펜, 피롤 또는 테트라히드로피롤의 위치 2, 3, 4 또는 5; 옥사졸, 이미다졸 또는 티아졸의 위치 2, 4 또는 5; 이속사졸, 피라졸 또는 이소티아졸의 위치 3, 4 또는 5; 아지리딘의 위치 2 또는 3; 아제티딘의 위치 2, 3 또는 4; 퀴놀린의 위치 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8; 또는 이소퀴놀린의 위치 1, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8. 더 일반적으로 탄소 결합된 헤테로 사이클은 2- 피리딜, 3- 피리딜, 4- 피리딜, 5- 피리딜, 6- 피리딜, 3- 피리다지닐, 4- 피리다지닐, 5- 피리다지닐, 6- 피리다지닐, 2- 피리미디닐, 4- 피리미디닐, 5- 피리미디닐, 6- 피리미디닐, 2- 피라지닐, 3- 피라지닐, 5- 피라지닐, 6- 피라지닐, 2- 티아졸릴, 4- 티아졸릴 또는 5- 티아졸릴을 포함한다.
제한이 아닌 예로서, 질소 결합된 헤테로 사이클은 아지리딘, 아제티딘, 피롤, 피롤리딘, 2-피롤린, 3-피롤린, 이미다졸, 이미다졸리 딘, 2-이미다졸린, 3-이미다졸린, 피라졸, 피라졸린, 2- 피라졸린, 3- 피라졸린, 피페리딘, 피페라진, 인돌, 인돌린, 또는 1H-인다졸의 위치 1; 이소인돌 또는 이소인돌린의 위치 2; 모르폴린의 위치 4; 및 카르바졸 또는 β-카르바졸의 위치 9에 결합될 수 있다. 더 일반적으로 질소 결합된 헤테로 사이클은 1- 아지리딜, 1-아제테딜, 1-피롤릴, 1-이미다졸릴, 1-피라졸릴 및 1-피페리디닐을 포함한다.
달리 언급되지 않는 한, 용어 "카르보 사이클"은 3 내지 14개의 고리 원자 (및 그 안의 탄소 원자의 범위 및 특정 수의 모든 조합 및 하위 조합)를 갖는 포화 또는 불포화된 비-방향족 모노 사이클릭, 바이 사이클릭 또는 폴리 사이클릭 고리 시스템을 지칭하고, 여기서 모든 고리 원자는 탄소 원자이다. 모노 사이클릭 카르보 사이클은 바람직하게는 3 내지 6개의 고리 원자, 더욱더 바람직하게는 5 또는 6개의 고리 원자를 갖는다. 바이 사이클릭 카르보 사이클은 예컨대 바이사이클로 [4,5], [5,5], [5,6] 또는 [6,6] 시스템으로 배열된 7 내지 12 개의 고리 원자, 또는 바이사이클로 [5,6] 또는 [6,6] 시스템으로 배열된 9 또는 10개의 고리 원자를 바람직하게는 갖는다. 용어 "카르보 사이클"은 예를 들어 아릴 고리에 융합된 모노 사이클릭 카르보 사이클 고리(예를 들어, 벤젠 고리에 융합된 모노 사이클릭 카르보 사이클 고리)를 포함한다. 카르보사이클은 3 내지 8개의 탄소 고리 원자를 바람직하게는 갖는다. 카르보사이클기는, 단독으로 또는 다른 그룹의 일부로, -할로겐, -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐, -C2-C8 알키닐, -O-(C1-C8 알킬), -O-(C2-C8 알케닐), -O-(C2-C8 알키닐), -아릴, -C(O)R', -OC(O)R', -C(O)OR', -C(O)NH2, -C(O)NHR', -C(O)N(R')2, -NHC(O)R', -SR', -SO3R', -S(O)2R', -S(O)R', -OH, =O, -N3, -NH2, -NH(R'), -N(R')2 및 -CN을 포함하나, 이에 제한되지 않는 하나 이상의 그룹, 바람직하게는 1 또는 2개의 그룹(및 할로겐으로부터 선택된 임의의 추가 치환기)으로 선택적으로 치환될 수 있고, 여기서 각 R'는 -H, -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐, -C2-C8 알키닐 또는 -아릴로부터 독립적으로 선택되고, 여기서 상기 -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐, -C2-C8 알키닐, -O-(C1-C8 알킬), -O-(C2-C8 알케닐),-O-(C2-C8 알키닐), 및 -아릴 그룹은 -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐, -C2-C8 알키닐, -할로겐, -O-(C1-C8 알킬), -O-(C2-C8 알케닐), -O-(C2-C8 알키닐), -아릴, -C(O)R'', -OC(O)R '', -C(O)OR'', -C(O)NH2, -C(O)NHR'', -C(O)N(R'')2, -NHC(O)R'' , -SR'', -SO3R'', -S(O)2R'', -S(O)R'', -OH, -N3, -NH2, -NH(R''), -N(R'')2 및 CN을 포함하나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 그룹으로 선택적으로 더욱 치환될 수 있고, 여기서 각각의 R''은 -H, -C1-C8 알킬, -C2-C8 알케닐, -C2-C8 알키닐 또는 -아릴로부터 독립적으로 선택된다.
모노 사이클릭 카르보 사이클릭 치환기의 예는 -시클로프로필, -시클로부틸, -시클로펜틸, -1-시클로펜트-1-에닐, -1-시클로펜트-2-에닐, -1-시클로 펜트-3-에닐, 사이클로헥실, -1-시클로헥스-1-에닐, -1-시클로헥스-2-에닐, -1-시클로 헥스-3-에닐, -시클로헵틸, -시클로옥틸, -1,3-시클로헥사디에닐, -1,4-시클로헥사디에닐, -1,3-시클로헵타디에닐, -1,3,5-시클로헵타트리에닐 및 -시클로옥타디에닐을 포함한다.
"카르보사이클로"는, 단독으로 또는 다른 그룹의 일부로 사용되는지 여부에 관계없이, 2가인 위에서 정의된 바와 같은 선택적으로 치환된 카르보 사이클기를 지칭한다. (즉, 모 카르보 사이클릭 고리 시스템의 동일하거나 2개의 상이한 탄소 원자에서 2개의 수소 원자를 제거함으로써 유래됨).
문맥에 의해 달리 표시되지 않는 한, 하이픈(-)은 펜던트 분자에 대한 부착 지점을 지정한다. 따라서, 용어 "-(C1-C8 알킬렌) 아릴" 또는 "-C1-C8 알킬렌(아릴)"은 본원에 정의된 바와 같은 C1-C8 알킬렌 라디칼을 지칭하며, 여기서 알킬렌 라디칼은 알킬렌 라디칼의 임의의 탄소 원자에서 펜던트 분자에 부착되고, 알킬렌 라디칼의 탄소 원자에 결합된 수소 원자 중 하나는 본원에 정의 된 아릴 라디칼로 대체된다.
특정 그룹이 "치환"될 때, 상기 그룹은 하나 이상의 치환기, 바람직하게는 1 내지 5개의 치환기, 더욱 바람직하게는 1 내지 3 개의 치환기, 가장 바람직하게는 1 내지 2 개의 치환기를 가질 수 있으며, 이는 치환기의 리스트으로부터 독립적으로 선택된다. 그러나 상기 그룹은 일반적으로 할로겐으로부터 선택된 임의의 수의 치환기를 가질 수 있다. 치환된 그룹은 그렇게 표시됩니다. 분자의 특정 위치에서 임의의 치환기 또는 변경의 정의는 해당 분자의 다른 위치에서 정의와 무관하도록 의도된다. 본 발명의 화합물 상의 치환기 및 치환 패턴은 화학적으로 안정하고 당업계에 공지된 기술 및 본원에 제시된 방법에 의해 쉽게 합성될 수 있는 화합물을 제공하기 위해 당업자에 의해 선택될 수 있는 것으로 이해된다.
본원에 사용된 보호기는 다중 작용성 화합물에서 하나의 반응성 부위를, 일시적 또는 영구적으로, 선택적으로 차단하는 그룹을 지칭한다. 본 발명에 사용하기에 적합한 히드록시-보호기는 약제학적으로 허용되며 화합물이 활성화되기 위해 대상체에게 투여된 후 모 화합물로부터 절단될 필요가 있거나 절단될 필요가 없을 수 있다. 절단은 신체 내의 정상 대사 과정을 통한다. 히드록시 보호기는 당업계에 잘 알려져 있으며, 전체가 참조로서, 그리고 모든 목적을 위해, 본원에 병합된 Protective Groups in Organic Synthesis by T. W. Greene and P. G. M. Wuts (John Wiley & sons, 3rd Edition) 참조하고, 예를 들어, 에테르(예를 들어, 디알킬실릴에테르, 트리알킬실릴에테르, 디알킬알콕시실릴에테르를 포함하는 알킬 에테르 및 실릴 에테르), 에스테르, 카르보네이트, 카르바메이트, 설포네이트 및 포스페이트 보호기를 포함한다. 히드록시 보호기의 예는 메틸 에테르; 메톡시 메틸 에테르, 메틸티오메틸 에테르, (페닐 디메틸 실릴) 메톡시 메틸 에테르, 벤질 옥시 메틸 에테르, p-메톡시 벤질 옥시 메틸 에테르, p- 니트로 벤질 옥시 메틸 에테르, o- 니트로 벤질 옥시 메틸 에테르, (4- 메톡시페녹시) 메틸 에테르, 구아이아콜 메틸 에테르, t- 부톡시 메틸 에테르, 4- 펜테닐 옥시 메틸 에테르, 실록시 메틸 에테르, 2- 메톡시에톡시 메틸 에테르, 2,2,2- 트리클로로에톡시 메틸 에테르, 비스 (2-클로로에톡시) 메틸 에테르, 2-(트리메틸 실릴) 에톡시 메틸 에테르, 멘톡시 메틸 에테르, 테트라 히드로 피라닐 에테르, 1- 메톡시시클로헥실 에테르, 4- 메톡시 테트라 히드로 티오 피라닐 에테르, 4- 메톡시 테트라 하이드로 티오 피라닐 에테르 S, S-다이옥사이드, 1-[(2-코로-4- 메틸) 페닐] -4- 메톡시피페리딘-4-일 에테르, 1-(2- 플루오로프닐) -4- 메톡시피페리딘-4-일 에테르, 1,4- 디옥산-2-일 에테르, 테트라 히드로 푸라닐 에테르, 테트라 히드로 티오 푸라닐 에테르; 다음과 같은 치환된 에틸 에테르 1-에톡시 에틸 에테르, 1-(2-클로로에톡시) 에틸 에테르, 1-[2-(트리메틸 실릴)에 톡시] 에틸 에테르, 1-메틸-1- 메톡시 에틸 에테르, 1-메틸-1- 벤질 옥시 에틸 에테르, 1-메틸-1- 벤질 옥시 -2- 플루오로 에틸 에테르, 1-메틸-1 페녹시 에틸 에테르, 2-트리메틸 실릴 에테르, t-부틸 에테르, 알릴 에테르, 프로파길 에테르, p-클로로페닐 에테르, p-메톡시 페닐 에테르, 벤질 에테르, p-메톡시 벤질 에테르 3,4- 디메톡시 벤질 에테르, 트리메틸 실릴 에테르, 트리 에틸 실릴 에테르, 트리 프로필 실릴 에테르, 디메틸 이소 프로필 실릴 에테르, 디 에틸 이소 프로필 실릴 에테르, 디메틸 헥실 실릴 에테르, t- 부틸 디메틸 실릴 에테르, 디 페닐 메틸 실릴 에테르, 벤조일 포르메이트 에스테르, 아세테이트 에스테르, 클로로 아세테이트 에스테르, 디클로로 아세테이트 에스테르, 트리클로로 아세테이트 에스테르, 트리 플루오로 아세테이트 에스테르, 메톡시 아세테이트 에스테르, 트리페닐 메톡시 아세테이트 에스테르, 페닐 아세테이트 에스테르, 벤조에이트 에스테르, 알킬 메틸 카보네이트, 알킬 9- 플루오레닐 메틸 카보네이트, 알킬 에틸 카보네이트, 알킬 2,2,2,-트리클로로 에틸 카보네이트, 1,1,-디메틸 -2,2,2- 트리클로로 에틸 카보네이트, 알킬 설포네이트, 메탄 설포네이트, 벤질 설포네이트, 토실레이트, 메틸렌 아세탈, 에틸리덴 아세탈 및 t- 부틸 메틸리덴 케탈을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 바람직한 보호기는 다음의 식으로 표시된다, -Ra, -Si(Ra)(Ra), -C(O)Ra, -C(O)ORa, -C(O)NH(Ra), -S(O)2Ra, -S(O)2OH, P(O)(OH)2, 및 -P(OH)(OH)ORa, 여기서 Ra는 C1-C20 알킬, C2-C20 알케닐, C2-C20 알키닐, -C1-C20 알킬렌 (카보사이클), -C2-C20 알케닐렌 (카보사이클), -C2-C20 알키닐렌 (카보사이클), -C6-C10 아릴, -C1-C20 알킬렌 (아릴), -C2-C20 알케닐렌 (아릴), -C2-C20 알키닐렌 (아릴), -C1-C20 알킬렌 (헤테로 사이클), -C2-C20 알케닐렌 (헤테로 사이클), 또는 -C2-C20 알키닐렌 (헤테로 사이클)이고, 여기서 상기 알킬, 알케닐, 알키닐, 알킬렌, 알케닐렌, 알키닐렌, 아릴, 카보사이클 및 헤테로 사이클 라디칼은, 혼자 또는 다른 그룹의 일부로서든 관계 없이, 선택적으로 치환된다.
본원에 사용된 용어 "유효량" 또는 "치료적 유효량"은 본원에 제공된 결합 분자(예컨대, 항체) 또는 약제학적 조성물의 양을 지칭하고, 이는 원하는 결과를 얻기에 충분하다.
용어 "대상체" 및 "환자"는 상호교환적으로 사용될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 특정 구현 예에서, 대상체는 비-영장류 (예를 들어, 소, 돼지, 말, 고양이, 개, 쥐 등) 또는 영장류 (예를 들어, 원숭이 및 인간)와 같은 포유 동물이다. 특정 구현 예에서, 대상체는 인간이다. 한 구현 예에서, 대상체는 질환 또는 장애로 진단된 포유 동물, 예를 들어 인간이다. 또 다른 구현 예에서, 대상체는 질환 또는 장애가 발생할 위험이 있는 포유 동물, 예를 들어 인간이다.
"투여하다" 또는 "투여"는 점막, 피내, 정맥 내, 근육 내 전달 및/또는 본원에 설명된 또는 당업계에 알려진 임의의 기타 방법에 의해, 신체 외부에 있는 물질을 환자에게 주입하거나 물리적으로 전달하는 행위를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "치료하다", "치료" 및 "치료하는"은 하나 이상의 요법의 투여로 인한 질병 또는 질환의 진행, 중증도 및/또는 기간의 감소 또는 개선을 지칭한다. 치료는 환자가 여전히 기저 장애를 앓고있을 수 있음에도 불구하고 환자에게 개선이 관찰되도록 기저 장애와 관련된 하나 이상의 증상의 감소, 완화 및/또는 경감이 있었는지 평가하여 결정될 수 있다. 용어 "치료"는 질병을 관리하고 개선하는 것을 모두 포함한다. 용어 "관리하다", "관리하는" 및 "관리"는 대상체가 질병의 치료를 반드시 결과하지는 않는 요법으로부터 얻는 유익한 효과를 지칭한다.
용어 "예방하다", "예방하는" 및, "예방"은 질병, 장애, 질환, 또는 관련 증상(들)(예컨대, 암)의 발명(또는 재발) 가능성을 감소시키는 것을 지칭한다.
용어 "암" 또는 "암 세포"는 정상 조직 또는 조직 세포와 구별되는 특징을 갖는 신생물(neoplasm)에서 발견되는 조직 또는 세포를 나타내기 위해 본원에서 사용된다. 이러한 특성에는 다음이 포함되지만 이에 한정되지는 않는다: 과형성(anaplasia) 정도, 형태의 불규칙, 세포 윤곽의 불명료함, 핵 크기, 핵 또는 세포질의 구조 변화, 다른 표현형 변화, 암 또는 전암 상태를 나타내는 세포 단백질의 존재, 유사 분열 수 증가 및 전이 능력. "암"과 관련된 단어는 암종, 육종, 종양, 상피종, 백혈병, 림프종, 폴립 및 융모, 형질 전환, 신생물 등을 포함한다.
용어 "약" 및 "대략"은 20% 이내, 15% 이내, 10% 이내, 9% 이내, 8% 이내, 7% 이내, 6% 이내, 5% 이내, 4% 이내, 3% 이내, 2% 이내, 1% 이내 또는 주어진 값 또는 범위 미만을 의미한다.
본 개시 및 청구항에서 사용되는 바와 같은, 단수 형태 "하나" 및 "상기"는 문맥상 명확하게 달리 나타내지 않는 한 복수 형태를 포함한다.
본원에서 "포함하는"이라는 용어로 구현 예가 설명되는 경우, "이루어지는" 및/또는 "필수적으로 이루어지는"의 관점에서 설명된 유사한 구현 예가 또한 제공되는 것으로 이해된다. 또한, "필수적으로 이루어지는"이라는 문구와 함께 본원에서 구현 예가 설명되는 경우, "이루어지는"의 관점에서 설명된 유사한 구현 예가 또한 제공된다는 것이 이해된다.
본원에서 "A 및/또는 B"와 같은 어구에서 사용된 용어 "및/또는"은 A 및 B; A 또는 B; A(단독); 및 B(단독)을 모두 포함하는 것으로 의도된다. 마찬가지로, "A, B, 및/또는 C"와 같은 어구에서 사용된 용어 "및/또는"은 다음 각각의 구현 예를 포괄하는 것으로 의도된다: A, B 및 C; A, B 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A (단독); B (단독); 및 C (단독).
5.2 약제학적 조성물
하나의 관점에서, 본원에 제공된 것은 본원에 제공되는 항체 약물 컨쥬게이트, 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 또는 생리학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, "약제학적 조성물"이다. 특정 구현 예에서, 항체 약물 컨쥬게이트는 하나 이상의 첨가제와 조합하여 또는 이와 별도로 제공된다. 또한 제공되는 것은 이러한 하나 이상의 첨가제 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 또는 생리학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 조성물이다. 특정 구현 예에서, 항체 약물 컨쥬게이트 및 첨가제(들)은 치료적으로 허용되는 양으로 존재한다. 약제학적 조성물은 본원에 제공된 방법 및 용도에 따라 사용될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 약제학적 조성물은 본원에 제공된 치료 방법 및 용도를 실행하기 위해 대상체에게 생체외(ex vivo) 또는 생체 내(in vivo) 투여될 수 있다. 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 의도된 투여 방법 또는 경로와 호환 가능하도록 제형화될 수 있고; 투여의 예시적인 경로는 본원에 제시된다.
몇몇 구현 예에서, 제공되는 것은 암 또는 종양을 조절하는 항체 약물 컨쥬게이트의 약제학적 조성물이다.
몇몇 관점에서, 약제학적 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 다양한 질병 및 장애 (예를 들어, 암)의 치료 또는 예방에 사용될 수 있는 본원에 개시되거나 당업자에게 공지된 다른 치료 활성제 또는 화합물을 더욱 포함할 수 있다. 전술한 바와 같이, 추가의 치료 활성제 또는 화합물은 별도의 약제학적 조성물(들)에 존재할 수 있다.
약제학적 조성물은 전형적으로 치료적 유효량의 본원에 제공된 적어도 하나의 항체 약물 컨쥬게이트 및 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 제형 제제를 포함한다. 특정 구현 예에서, 약제학적 조성물은 본원에 기술된 하나 이상의 첨가제를 더욱 포함한다.
하나의 구현 예에서, 약제학적 조성물은 본원에 제공되는 항체 약물 컨쥬게이트를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 약제학적 조성물은 치료적 유효량의 본원에 제공되는 항체 약물 컨쥬게이트를 포함한다. 특정 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함한다.
몇몇 구현 예에서, 본원에서 제공되는 약제학적 조성물 내의 상기 항체 약물 컨쥬게이트는 아래의 섹션 5.3에서 기술되는 항체 약물 컨쥬게이트로부터 선택된다.
특정 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 0.1-100 mg/mL의 농도의 항체 약물 컨쥬게이트를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 1 내지 20 mg/mL 농도의 항체 약물 컨쥬게이트를 포함한다. 다른 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 5 내지 15 mg/mL 농도의 항체 약물 컨쥬게이트를 포함한다. 다른 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 8 내지 12 mg/mL 농도의 항체 약물 컨쥬게이트를 포함한다. 다른 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 9 내지 11 mg/mL 농도의 항체 약물 컨쥬게이트를 포함한다. 다른 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 약 9.5 mg/mL 농도의 항체 약물 컨쥬게이트를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 약 9.6 mg/mL 농도의 항체 약물 컨쥬게이트를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 약 9.7 mg/mL 농도의 항체 약물 컨쥬게이트를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 약 9.8 mg/mL 농도의 항체 약물 컨쥬게이트를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 약 9.9 mg/mL 농도의 항체 약물 컨쥬게이트를 포함한다. 또 다른 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 약 10 mg/mL 농도의 항체 약물 컨쥬게이트를 포함한다. 또 다른 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 약 10.1 mg/mL 농도의 항체 약물 컨쥬게이트를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 약 10.2 mg/mL 농도의 항체 약물 컨쥬게이트를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 약 10.3 mg/mL 농도의 항체 약물 컨쥬게이트를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 약 10.4 mg/mL 농도의 항체 약물 컨쥬게이트를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 약 10.5 mg/mL 농도의 항체 약물 컨쥬게이트를 포함한다.
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공되는 상기 약제학적 조성물은 L-히스티딘, TWEEN-20, 및 적어도 하나의 트레할로스 이수화물, 또는 수크로스를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공되는 상기 약제학적 조성물은 염산(HCl) 또는 숙신산을 더욱 포함한다.
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물에 유용한 L-히스티딘의 농도는 5 내지 50 mM의 범위 내이다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물에 유용한 L-히스티딘의 농도는 10 내지 40 mM의 범위 내이다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물에 유용한 L-히스티딘의 농도는 15 내지 35 mM의 범위 내이다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물에 유용한 L-히스티딘의 농도는 15 내지 30 mM의 범위 내이다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물에 유용한 L-히스티딘의 농도는 15 내지 25 mM의 범위 내이다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물에 유용한 L-히스티딘의 농도는 15 내지 35 mM의 범위 내이다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물에 유용한 L-히스티딘의 농도는 약 16 mM이다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물에 유용한 L-히스티딘의 농도는 약 17 mM이다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물에 유용한 L-히스티딘의 농도는 약 18 mM이다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물에 유용한 L-히스티딘의 농도는 약 19 mM이다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물에 유용한 L-히스티딘의 농도는 약 20 mM이다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물에 유용한 L-히스티딘의 농도는 약 21 mM이다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물에 유용한 L-히스티딘의 농도는 약 22 mM이다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물에 유용한 L-히스티딘의 농도는 약 23 mM이다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물에 유용한 L-히스티딘의 농도는 약 24 mM이다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물에 유용한 L-히스티딘의 농도는 약 25 mM이다.
몇몇 구현 예에서, 본원에서 제공되는 약제학적 조성물에 유용한 TWEEN-20의 농도는 0.001 내지 0.1%(v/v)의 범위 내이다. 다른 구현 예에서, TWEEN-20의 농도는 0.0025 내지 0.075%(v/v) 범위 내이다. 하나의 구현 예에서, TWEEN-20의 농도는 0.005 내지 0.05%(v/v) 범위 내이다. 다른 구현 예에서, TWEEN-20의 농도는 0.0075 내지 0.025%(v/v) 범위 내이다. 다른 구현 예에서, TWEEN-20의 농도는 0.0075 내지 0.05%(v/v) 범위 내이다. 다른 구현 예에서, TWEEN-20의 농도는 0.01 내지 0.03%(v/v) 범위 내이다. 하나의 특정 구현 예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.015%(v/v)이다. 하나의 특정 구현 예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.016%(v/v)이다. 하나의 특정 구현 예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.017%(v/v)이다. 하나의 특정 구현 예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.018%(v/v)이다. 하나의 특정 구현 예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.019%(v/v)이다. 하나의 특정 구현 예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.020%(v/v)이다. 하나의 특정 구현 예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.021%(v/v)이다. 하나의 특정 구현 예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.022%(v/v)이다. 하나의 특정 구현 예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.023%(v/v)이다. 하나의 특정 구현 예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.024%(v/v)이다. 하나의 특정 구현 예에서, TWEEN-20의 농도는 약 0.025%(v/v)이다.
하나의 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물에 유용한 트레할로스 이수화물의 농도는 1% 내지 20% (w/v) 범위 내이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 2% 내지 15% (w/v) 범위 내이다. 하나의 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 3% 내지 10% (w/v) 범위 내이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 4% 내지 9% (w/v) 범위 내이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 4% 내지 8% (w/v) 범위 내이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 4% 내지 7% (w/v) 범위 내이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 4% 내지 6% (w/v) 범위 내이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 4.5% 내지 6% (w/v) 범위 내이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 4.6% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 4.7% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 4.8% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 4.9% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 5.0% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 5.1% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 5.2% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 5.3% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 5.4% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 5.5% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 5.6% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 5.7% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 5.8% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 5.9% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 6.0% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 6.1% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 6.2% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 6.3% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 6.4% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 농도는 약 6.5% (w/v)이다.
특정 구현 예에서, 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 50 내지 300 mM이다. 다른 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 75 내지 250 mM이다. 몇몇 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 100 내지 200 mM이다. 다른 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 130 내지 150 mM이다. 몇몇 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 135 내지 150 mM이다. 특정 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 약 135 mM이다. 특정 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 약 136 mM이다. 특정 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 약 137 mM이다. 특정 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 약 138 mM이다. 특정 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 약 139 mM이다. 특정 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 약 140 mM이다. 특정 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 약 141 mM이다. 특정 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 약 142 mM이다. 특정 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 약 143 mM이다. 특정 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 약 144 mM이다. 특정 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 약 145 mM이다. 특정 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 약 146 mM이다. 특정 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 약 147 mM이다. 특정 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 약 148 mM이다. 특정 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 약 149 mM이다. 특정 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 약 150 mM이다. 특정 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 약 151 mM이다. 특정 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 약 152 mM이다. 특정 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 약 153 mM이다. 특정 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 약 154 mM이다. 특정 구현 예에서 트레할로스 이수화물의 몰 농도는 약 155 mM이다.
하나의 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물에 유용한 수크로스의 농도는 1% 내지 20% (w/v) 범위 내이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 2% 내지 15% (w/v) 범위 내이다. 하나의 구현 예에서, 수크로스의 농도는 3% 내지 10% (w/v) 범위 내이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 4% 내지 9% (w/v) 범위 내이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 4% 내지 8% (w/v) 범위 내이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 4% 내지 7% (w/v) 범위 내이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 4% 내지 6% (w/v) 범위 내이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 4.5% 내지 6% (w/v) 범위 내이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 약 4.6% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 약 4.7% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 약 4.8% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 약 4.9% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 약 5.0% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 약 5.1% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 약 5.2% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 약 5.3% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 약 5.4% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 약 5.5% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 약 5.6% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 약 5.7% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 약 5.8% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 약 5.9% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 약 6.0% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 약 6.1% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 약 6.2% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 약 6.3% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 약 6.4% (w/v)이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 농도는 약 6.5% (w/v)이다.
특정 구현 예에서, 수크로스의 몰 농도는 50 내지 300 mM이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 몰 농도는 75 내지 250 mM이다. 몇몇 구현 예에서, 수크로스의 몰 농도는 100 내지 200 mM이다. 다른 구현 예에서, 수크로스의 몰 농도는 130 내지 150 mM이다. 몇몇 구현 예에서, 수크로스의 몰 농도는 135 내지 150 mM이다. 특정 구현 예에서, 수크로스의 몰 농도는 약 135 mM이다. 특정 구현 예에서, 수크로스의 몰 농도는 약 136 mM이다. 특정 구현 예에서, 수크로스의 몰 농도는 약 137 mM이다. 특정 구현 예에서, 수크로스의 몰 농도는 약 138 mM이다. 특정 구현 예에서, 수크로스의 몰 농도는 약 139 mM이다. 특정 구현 예에서, 수크로스의 몰 농도는 약 140 mM이다. 특정 구현 예에서, 수크로스의 몰 농도는 약 141 mM이다. 특정 구현 예에서, 수크로스의 몰 농도는 약 142 mM이다. 특정 구현 예에서, 수크로스의 몰 농도는 약 143 mM이다. 특정 구현 예에서, 수크로스의 몰 농도는 약 144 mM이다. 특정 구현 예에서, 수크로스의 몰 농도는 약 145 mM이다. 특정 구현 예에서, 수크로스의 몰 농도는 약 146 mM이다. 특정 구현 예에서, 수크로스의 몰 농도는 약 150 mM이다. 특정 구현 예에서, 수크로스의 몰 농도는 약 151 mM이다. 특정 구현 예에서, 수크로스의 몰 농도는 약 151 mM이다. 특정 구현 예에서, 수크로스의 몰 농도는 약 152 mM이다. 특정 구현 예에서, 수크로스의 몰 농도는 약 153 mM이다. 특정 구현 예에서, 수크로스의 몰 농도는 약 154 mM이다. 특정 구현 예에서, 수크로스의 몰 농도는 약 155 mM이다.
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 HCl을 포함한다. 다른 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 숙신산을 포함한다.
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 5.5 내지 6.5 범위의 pH를 갖는다. 다른 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 5.7 내지 6.3 범위의 pH를 갖는다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 약 5.7의 pH를 갖는다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 약 5.8의 pH를 갖는다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 약 5.9의 pH를 갖는다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 약 6.0의 pH를 갖는다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 약 6.1의 pH를 갖는다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 약 6.2의 pH를 갖는다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 약 6.3의 pH를 갖는다.
몇몇 구현 예에서, 상기 pH는 실온에서 취해진다. 다른 구현 예에서, pH는 15℃ 내지 27℃에서 취해진다. 또 다른 구현 예에서, pH는 4℃에서 취해진다. 또 다른 구현 예에서, pH는 25℃에서 취해진다.
몇몇 구현 예에서, pH는 HCl에 의해 조정된다. 몇몇 구현 예에서, 약제학적 조성물은 HCl을 포함하고, 약제학적 조성물은 실온에서 5.5 내지 6.5 범위의 pH를 갖는다. 몇몇 구현 예에서, 약제학적 조성물은 HCl을 포함하고, 약제학적 조성물은 실온에서 5.7 내지 6.3 범위의 pH를 갖는다. 몇몇 더 구체적인 구현 예에서, 약제학적 조성물은 HCl을 포함하고, 약제학적 조성물은 실온에서 약 5.7의 pH를 갖는다. 몇몇 더 구체적인 구현 예에서, 약제학적 조성물은 HCl을 포함하고, 약제학적 조성물은 실온에서 약 5.8의 pH를 갖는다. 몇몇 더 구체적인 구현 예에서, 약제학적 조성물은 HCl을 포함하고, 약제학적 조성물은 실온에서 약 5.9의 pH를 갖는다. 몇몇 더 구체적인 구현 예에서, 약제학적 조성물은 HCl을 포함하고, 약제학적 조성물은 실온에서 약 6.0의 pH를 갖는다. 몇몇 더 구체적인 구현 예에서, 약제학적 조성물은 HCl을 포함하고, 약제학적 조성물은 실온에서 약 6.1의 pH를 갖는다. 몇몇 더 구체적인 구현 예에서, 약제학적 조성물은 HCl을 포함하고, 약제학적 조성물은 실온에서 약 6.2의 pH를 갖는다. 몇몇 더 구체적인 구현 예에서, 약제학적 조성물은 HCl을 포함하고, 약제학적 조성물은 실온에서 약 6.3의 pH를 갖는다.
몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 HCl을 포함하고, 상기 약제학적 조성물은 15℃ 내지 27℃에서 5.5 내지 6.5 범위의 pH를 갖는다. 몇몇 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 HCl을 포함하고, 상기 약제학적 조성물은 15℃ 내지 27℃에서 5.7 내지 6.3 범위의 pH를 갖는다. 몇몇 보다 구체적인 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 HCl을 포함하고, 상기 약제학적 조성물은 15℃ 내지 27℃에서 약 5.7의 pH를 갖는다. 몇몇 보다 구체적인 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 HCl을 포함하고, 상기 약제학적 조성물은 15℃ 내지 27℃에서 약 5.8의 pH를 갖는다. 몇몇 보다 구체적인 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 HCl을 포함하고, 상기 약제학적 조성물은 15℃ 내지 27℃에서 약 5.9의 pH를 갖는다. 몇몇 보다 구체적인 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 HCl을 포함하고, 상기 약제학적 조성물은 15℃ 내지 27℃에서 약 6.0의 pH를 갖는다. 몇몇 보다 구체적인 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 HCl을 포함하고, 상기 약제학적 조성물은 15℃ 내지 27℃에서 약 6.1의 pH를 갖는다. 몇몇 보다 구체적인 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 HCl을 포함하고, 상기 약제학적 조성물은 15℃ 내지 27℃에서 약 6.2의 pH를 갖는다. 몇몇 보다 구체적인 구현 예에서, 상기 약제학적 조성물은 HCl을 포함하고, 상기 약제학적 조성물은 15℃ 내지 27℃에서 약 6.3의 pH를 갖는다.
몇몇 구현 예에서, pH는 숙신산에 의해 조정된다. 몇몇 구현 예에서, 약제학적 조성물은 숙신산을 포함하고, 약제학적 조성물은 실온에서 5.5 내지 6.5 범위의 pH를 갖는다. 몇몇 구현 예에서, 약제학적 조성물은 숙신산을 포함하고, 약제학적 조성물은 실온에서 5.7 내지 6.3 범위의 pH를 갖는다. 몇몇 보다 구체적인 구현 예에서, 약제학적 조성물은 숙신산을 포함하고, 약제학적 조성물은 실온에서 5.7의 pH를 갖는다. 몇몇 보다 구체적인 구현 예에서, 약제학적 조성물은 숙신산을 포함하고, 약제학적 조성물은 실온에서 5.8의 pH를 갖는다. 몇몇 보다 구체적인 구현 예에서, 약제학적 조성물은 숙신산을 포함하고, 약제학적 조성물은 실온에서 5.9의 pH를 갖는다. 몇몇 보다 구체적인 구현 예에서, 약제학적 조성물은 숙신산을 포함하고, 약제학적 조성물은 실온에서 6.0의 pH를 갖는다. 몇몇 보다 구체적인 구현 예에서, 약제학적 조성물은 숙신산을 포함하고, 약제학적 조성물은 실온에서 6.1의 pH를 갖는다. 몇몇 보다 구체적인 구현 예에서, 약제학적 조성물은 숙신산을 포함하고, 약제학적 조성물은 실온에서 6.2의 pH를 갖는다. 몇몇 보다 구체적인 구현 예에서, 약제학적 조성물은 숙신산을 포함하고, 약제학적 조성물은 실온에서 6.3의 pH를 갖는다.
몇몇 구현 예에서, 약제학적 조성물은 숙신산을 포함하고, 약제학적 조성물은 15℃ 내지 27℃에서 5.5 내지 6.5 범위의 pH를 갖는다. 몇몇 구현 예에서, 약제학적 조성물은 숙신산을 포함하고, 약제학적 조성물은 15℃ 내지 27℃에서 5.7 내지 6.3 범위의 pH를 갖는다. 몇몇 보다 구체적인 구현 예에서, 약제학적 조성물은 숙신산을 포함하고, 약제학적 조성물은 15℃ 내지 27℃에서 약 5.7의 pH를 갖는다. 몇몇 보다 구체적인 구현 예에서, 약제학적 조성물은 숙신산을 포함하고, 약제학적 조성물은 15℃ 내지 27℃에서 약 5.8의 pH를 갖는다. 몇몇 보다 구체적인 구현 예에서, 약제학적 조성물은 숙신산을 포함하고, 약제학적 조성물은 15℃ 내지 27℃에서 약 5.9의 pH를 갖는다. 몇몇 보다 구체적인 구현 예에서, 약제학적 조성물은 숙신산을 포함하고, 약제학적 조성물은 15℃ 내지 27℃에서 약 6.0의 pH를 갖는다. 몇몇 보다 구체적인 구현 예에서, 약제학적 조성물은 숙신산을 포함하고, 약제학적 조성물은 15℃ 내지 27℃에서 약 6.1의 pH를 갖는다. 몇몇 보다 구체적인 구현 예에서, 약제학적 조성물은 숙신산을 포함하고, 약제학적 조성물은 15℃ 내지 27℃에서 약 6.2의 pH를 갖는다. 몇몇 보다 구체적인 구현 예에서, 약제학적 조성물은 숙신산을 포함하고, 약제학적 조성물은 15℃ 내지 27℃에서 약 6.3의 pH를 갖는다.
몇몇 특정 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 약 20 mM L-히스티딘, 약 0.02% (w/v) TWEEN-20, 및 약 5.5% (w/v) 트레할로스 이수화물 또는 약 5% (w/v) 수크로스 중 적어도 하나를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 HCl 또는 숙신산을 더욱 포함한다. 몇몇 구현 예에서, pH는 실온에서 약 6.0이다. 몇몇 구현 예에서, pH는 25℃에서 약 6.0이다.
몇몇 특정 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 약 20 mM L-히스티딘, 약 0.02% (w/v) TWEEN-20, 약 5.5% (w/v) 트레할로스 이수화물 및 HCl을 포함한다. 몇몇 구현 예에서, pH는 실온에서 약 6.0이다. 몇몇 구현 예에서, pH는 25℃에서 약 6.0이다.
몇몇 특정 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 약 20 mM L-히스티딘, 약 0.02% (w/v) TWEEN-20, 약 5% (w/v) 수크로스 및 HCl을 포함한다. 몇몇 구현 예에서, pH는 실온에서 약 6.0이다. 몇몇 구현 예에서, pH는 25℃에서 약 6.0이다.
다른 특정 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 약 20 mM L-히스티딘, 약 0.02% (w/v) TWEEN-20, 약 5.5% (w/v) 트레할로스 이수화물 및 숙신산을 포함한다. 몇몇 구현 예에서, pH는 실온에서 약 6.0이다. 몇몇 구현 예에서, pH는 25℃에서 약 6.0이다.
몇몇 특정 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 약 20 mM L-히스티딘, 약 0.02% (w/v) TWEEN-20, 약 5% (w/v) 수크로스 및 숙신산을 포함한다. 몇몇 구현 예에서, pH는 실온에서 약 6.0이다. 몇몇 구현 예에서, pH는 25℃에서 약 6.0이다.
특정 구현 예에서, 본원에 제공되는 것은
(a) 다음의 구조를 포함하는 항체 약물 컨쥬게이트:
Figure pct00010
여기서 L-은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 1 내지 10이고; 및
(b) 약 20 mM L-히스티딘, 약 0.02% (w/v) TWEEN-20, 약 5.5% (w/v) 트레할로스 이수화물, 및 HCl을 포함하는 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하며, 여기서 상기 항체 약물 컨쥬게이트는 약 10 mg/mL의 농도이며, pH는 25℃에서 약 6.0이다.
다른 특정 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 다음을 포함한다:
(a) 다음의 구조를 포함하는 항체 약물 컨쥬게이트:
Figure pct00011
여기서 L-은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 1 내지 10이고; 및
(b) 약 20 mM L-히스티딘, 약 0.02% (w/v) TWEEN-20, 약 5.5% (w/v) 트레할로스 이수화물, 및 숙신산을 포함하는 약제학적으로 허용가능한 부형제, 여기서 상기 항체 약물 컨쥬게이트는 약 10 mg/mL의 농도이며, 상기 pH는 25℃에서 약 6.0이다.
또 다른 특정 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 다음을 포함한다:
(a) 다음의 구조를 포함하는 항체 약물 컨쥬게이트:
Figure pct00012
여기서 L-은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 1 내지 10이고; 및
(b) 약 20 mM L-히스티딘, 약 0.02% (w/v) TWEEN-20, 약 5.0% (w/v) 수크로스, 및 HCl을 포함하는 약제학적으로 허용가능한 부형제, 여기서 상기 항체 약물 컨쥬게이트는 약 10 mg/mL의 농도이며, 상기 pH는 25℃에서 약 6.0이다.
특정 수(및 이의 수치 범위)가 제공되지만, 특정 구현 예에서, 상기 수(또는 수치 범위)의 예컨대 2%, 5%, 10%, 15%, 또는 20% 내의 수치는 또한 고려되는 것으로 이해된다. 다른 예시적인 약제학적 조성물은 아래 실험 섹션에서 제공된다.
비히클의 주요 용매는 본질적으로 수용성 또는 비수용성일 수 있다. 또한, 비히클은 약제학적 조성물의 pH, 삼투압, 점도, 무균성 또는 안정성을 변형 또는 유지하기 위해 다른 약제학적으로 허용되는 부형제를 함유할 수 있다. 특정 구현 예에서, 약제학적으로 허용되는 비히클은 수용성 완충제이다. 다른 구현 예에서, 비히클은 예를 들어 염화나트륨, 및/EH는 시트르산 나트륨을 포함한다.
본원에 제공된 약제학적 조성물은 본원에 기재된 바와 같은 항체 약물 컨쥬게이트 및/또는 첨가제의 방출 속도를 변경 또는 유지하기 위한 다른 약제학적으로 허용되는 제제를 함유할 수 있다. 이러한 제제에는 서방형 제형을 제조하는데 숙련된 기술자에게 알려진 물질이 포함된다. 약제학적 및 생리학적으로 허용되는 제제에 관한 추가 참조를 위해, 예를 들어, Remington’s Pharmaceutical Sciences, 18th Ed. (1990, Mack Publishing Co., Easton, Pa. 18042) pages 1435-1712, The Merck Index, 12th Ed. (1996, Merck Publishing Group, Whitehouse, NJ); and Pharmaceutical Principles of Solid Dosage Forms (1993, Technonic Publishing Co., Inc., Lancaster, Pa.)을 참고하라. 투여에 적합한 추가 약제학적 조성물은 당업계에 공지되어 있으며 본원에 제공된 방법 및 조성물에 적용 가능하다.
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 액체 형태이다. 다른 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 동결 건조된다.
약제학적 조성물은 용액, 현탁액, 겔, 에멀젼, 고체, 또는 이수화 또는 동결 건조 분말로서 멸균 바이알에 저장될 수 있다. 이러한 조성물은 즉시 사용 가능한 형태, 사용 전 재구성이 필요한 동결 건조 형태, 사용 전에 희석이 필요한 액체 형태, 또는 기타 허용되는 형태로 저장될 수 있다. 몇몇 구현 예에서, 약제학적 조성물은 일회용 용기(예를 들어, 일회용 바이알, 앰플, 주사기 또는 자동 주사기(예를 들어, EpiPen®과 유사))에 제공되는 반면, 다회용 용기(예를 들어, 다회용 바이알)는 다른 구현 예에서 제공된다. 임플란트 (예를 들어, 임플란트 가능한 펌프) 및 카테터 시스템을 포함하는 임의의 약물 전달 장치는 펩티드 및 본원에 기술된 다른 제제를 전달하는데 사용될 수 있으며, 이들 모두는 당업자에게 공지되어있다. 일반적으로 피하 또는 근육 내로 투여되는 데포 주사는 또한 정의된 기간에 걸쳐 본원에 기재된 펩티드 및/또는 다른 제제를 방출하기 위해 이용될 수 있다. 데포 주사는 일반적으로 고체 또는 유성이며 일반적으로 여기에 제시된 제형 성분 중 적어도 하나를 포함한다. 숙련된 기술자는 데포 주사의 가능한 제형 및 용도에 익숙하다. 특정 구현 예에서, Nano Precision Medical’s depot delivery technology (Nano Precision Medical; Emeryville, CA)의 사용이 고려된다.
상기 기술은 단백질 및 펩티드 치료제와 같은 거대 분자의 0-차 방출 속도를 생성하는 티타니아 나노 튜브 막을 사용한다. 생체 적합성 막은 치료용 거대 분자의 장기간 (예컨대, 최대 1년) 일정 속도 전달을 제공하는 작은 피하 임플란트에 보관된다.
약제학적 조성물은 의도된 투여 경로와 호환 가능하도록 제형화될 수 있다. 따라서, 약제학적 조성물은 비경구(예컨대, 피하(s.c.), 정맥 내, 근육 내, 또는 복강 내), 피내, 경구(예컨대, 섭취), 흡입, 강내, 두개 내, 및 경피(국소)를 포함하는 경로에 의한 투여에 적합한 부형제를 포함한다. 다른 예시적인 투여 경로가 본원에 제시되어 있다.
약제학적 조성물은 멸균 주사 가능한 수성 또는 유성 현탁액의 형태일 수 있다. 상기 현탁액은 본 명세서에 개시되거나 당업자에게 공지된 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제를 사용하여 제형화될 수 있다. 멸균 주사 가능한 제제는 또한, 예를 들어 1,3-부탄디올 중의 용액으로서 비-독성 비경구적으로 허용되는 희석제 또는 용매 중의 멸균 주사 용액 또는 현탁액일 수 있다. 사용할 수 있는 허용되는 희석제, 용매 및 분산 매질은 물, 링거 용액, 등장성 염화나트륨 용액, Cremophor EL™(BASF, Parsippany, NJ) 또는 인산염 완충 식염수(PBS), 에탄올, 폴리올(예: 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜), 및 이들의 적합한 혼합물을 포함한다. 또한, 멸균된 고정 오일은 일반적으로 용매 또는 현탁 매체로 사용된다. 이러한 목적을 위해, 합성 모노- 또는 디글리세라이드를 포함하는 임의의 블랜드 고정 오일이 사용될 수 있다. 또한, 올레산과 같은 지방산은 주사제 제조에 사용된다. 특정 주사 가능한 제형의 장기간 흡수는 흡수 지연제(예컨대, 알루미늄 모노스테아레이트 또는 젤라틴)를 포함함으로써 달성될 수 있다.
하나의 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 국부 도는 전신 관리를 위해, 주사, 주입, 또는 이식에 의해 비경구적으로 투여될 수 있다. 본원에 사용된 비경구적 투여는 정맥 내, 동맥 내, 복강 내, 척추 강내, 심실 내, 요도 내, 흉골 내, 두개 내, 근육 내, 활액 내 및 피하 투여를 포함한다.
하나의 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물은 용액, 현탁액, 에멀젼, 미셀, 리포솜, 마이크로스피어, 나노 시스템 및 용액에 적합한 고체 형태 또는 주입하기 전 액체인 현탁액을 포함하는 비경구 투여에 적합한 모든 투여 형태로, 제형화될 수 있다. 이러한 투여 형태는 약제학적 과학 분야의 당업자에게 알려진 기존의 방법에 따라 제조될 수 있다(예를 들어, Remington, The Science and Practice of Pharmacy, supra 참조).
하나의 구현 예에서, 비경구 투여용으로 의도된 약제학적 조성물은 다음을 포함하나, 이에 제한되지 않는 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함할 수 있다: 수용성 비히클, 물과 혼합가능한 비히클, 비-수용성 비히클, 미생물 성장에 대한 항균제 또는 방부제, 안정제, 용해도 향상제, 등장성 제제, 완충제, 항산화제, 국소 마취제, 현탁제 및 분산제, 습윤제 또는 유화제, 착화제, 격리제 또는 킬레이트제, 동결 방지제, 동결 보호제, 증점제, pH 조절제, 및 불활성 기체.
하나의 구현 예에서, 적합한 수성 비히클은 물, 식염수, 생리 식염수, 또는 인산염 완충 식염수(PBS), 염화나트륨 주입, 링거 주입, 등장성 덱스트로스 주입, 멸균수 주입, 덱스트로스 및 락테이티드 링거 주입을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 비-수용성 비히클은 식물 유래 고정 오일, 캐스터 오일, 옥수수유, 목화씨유, 올리브유, 땅콩유, 페퍼민트유, 홍화유, 참기름, 콩기름, 수소화된 식물유, 수소화된 대두유, 및 코코넛 오일의 중-쇄 트리글리세리드, 및 팜씨유를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 수-혼화성 비히클은 에탄올, 1,3- 부탄디올, 액체 폴리에틸렌 글리콜(예: 폴리에틸렌 글리콜(300) 및 폴리에틸렌 글리콜(400)), 프로필렌 글리콜, 글리세린, N-메틸-2-피롤리돈, N,N-디메틸아세트아미드 및 디메틸 설폭사이드를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
하나의 구현 예에서, 적합한 항균제 또는 방부제는 페놀, 크레졸, 수은, 벤질 알코올, 클로로부탄올, 메틸 및 프로필 p-히드록시벤조에이트, 티메로살, 벤잘코늄 클로라이드(예컨대, 벤제토늄 클로라이드), 메틸- 및 프로필-파라벤, 및 소르브산을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 적합한 등장제는 염화 나트륨, 글리세린, 및 덱스트로스를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 적합한 완충제는 포스페이트 및 시트레이트를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 적합한 항산화제는 바이설파이트 및 나트륨 메타바이설파이트를 포함하는, 본원에 기술된 것들이다. 적합한 국소 마취제는 프로카인 하이드로클로라이드를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 적합한 현탁제 및 분산제는 본원에 기재된 것들이며, 나트륨 카복시메틸셀룰로오스, 히드록시프로필 메틸셀룰로오스, 및 폴리비닐피롤리돈을 포함한다. 적합한 유화제는 본원에 설명된 것들을 포함하고, 이는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레이트(80), 및 트리에탄올아민 올레이트를 포함한다. 적합한 격리제 또는 킬레이트제는 EDTA를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 적합한 pH 조절제는 수산화 나트륨, 염산, 시트르산, 및 젖산을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 적합한 착화제는 a-시클로덱스트린, b-시클로덱스트린, 히드록시프로필-b-시클로덱스트린, 설포부틸에테르-b-시클로덱스트린, 및 설포부틸에테르 7-b-시클로덱스트린(CAPTISOL®, CyDex, Lenexa, KS)을 포함하는 시클로덱스트린을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
하나의 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 단일 또는 다중 복용량 투여에 대해 제형화될 수 있다. 단일 투여 제형은 앰플, 바이알, 또는 주사기로 포장된다. 다중 투여 비경구 제형은 정균 또는 정균 농도의 항균제를 함유할 수 있다. 모든 비경구 제형은 당업계에 공지되고 실행되는 바와 같이 멸균되어야 한다.
하나의 구현 예에서, 약제학적 조성물은 즉시 사용 가능한 멸균 용액으로 제공된다. 다른 구현 예에서, 약제학적 조성물은 사용 전에 비히클로 재구성될 동결 건조된 분말 및 피하 정제를 포함하는 멸균 건조 가용성 제품으로 제공된다. 또 다른 구현 예에서, 약제학적 조성물은 즉시 사용 가능한 현탁액으로 제공된다. 또 다른 구현 예에서, 약제학적 조성물은 사용 전 비히클로 재구성될 멸균 건조 불용성 제품으로 제공된다. 또 다른 구현 예에서, 약제학적 조성물은 즉시 사용 가능한 멸균 에멀젼으로 제공된다.
하나의 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 지연, 지속, 펄스, 제어된, 표적화된, 및 프로그래밍된 방출 형태를 포함하는 즉시 또는 변형된 방출 투여 형태로 제형화되었다.
하나의 구현 예에서, 약제학적 조성물은 임플란트된 데포로서 투여하기 위한 현탁액, 고체, 반고체, 또는 요변성 액체로 제형화될 수 있다. 하나의 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물은 체액에 불용성이나 약제학적 조성물의 활성 성분이 확산되도록 하는 외부 중합체 막으로 둘러싸여 있는 고체 내부 매트릭스에 분산된다.
하나의 구현 예에서, 적합한 내부 매트릭스는 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리부틸-메타크릴레이트, 가소화된 또는 가소화되지 않은 폴리비닐클로라이드, 가소화된 나일론, 가소화된 폴리에틸렌 테레프탈레이트, 천연 고무, 폴리이소프렌, 폴리이소부틸렌, 폴리부타디엔, 폴리에틸렌, 에틸렌-비닐 아세테이트 공중합체, 실리콘 고무, 폴리디메틸실록산, 실리콘 카보네이트 공중합체, 아크릴산 및 메타아크릴산의 에스테르의 하이드로겔과 같은 친수성 폴리머, 콜라겐, 가교된 폴리비닐 알코올, 및 가교된 부분적으로 가수분해된 폴리비닐 아세테이트를 포함한다.
하나의 구현 예에서, 적합한 외부 중합체 막은 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 에틸렌/프로필렌 공중합체, 에틸렌/에틸 아크릴레이트 공중합체, 에틸렌/비닐 아세테이트 공중합체, 실리콘 고무, 폴리디메틸 실록산, 네오프렌 고무, 염소화된 폴리에틸렌, 폴리염화비닐, 비닐 아세테이트와의 염화 비닐 공중합체, 염화 비닐리덴, 에틸렌 및 프로필렌, 이오노머 폴리에틸렌 테레프탈레이트, 부틸 고무 에피클로로히드린 고무, 에틸렌/비닐 알코올 공중합체, 에틸렌/비닐옥시에탄올 공중합체, 및 에틸렌/비닐 아세테이트/비닐 알코올 삼원공중합체를 포함한다.
수성 현탁액은 이의 제조에 적합한 부형제와 혼합된 활성 물질을 함유한다. 이러한 부형제는 예를 들어, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 메틸셀룰로오스, 히드록시-프로필메틸셀룰로오스, 알긴산 나트륨, 폴리비닐-피롤리돈, 트래거캔스(tragacanth) 검, 아카시아 검과 같은, 현탁제이고; 분산제 또는 습윤제는 천연 발생 포스파티드, 예를 들어 레시틴, 또는 알킬렌 옥사이드와 지방산의 축합 생성물, 예를 들어 폴리옥시-에틸렌 스테아레이트, 또는 에틸렌 옥사이드와 장쇄 지방족 알코올의 축합 생성물, 예를 들어 헵타데카에틸렌옥시세타놀, 또는 지방산으로부터 유래된 부분 에스테르를 갖는 에틸렌 옥사이드와 폴리옥시에틸렌 소르비톨 모노올레에이트와 같은 헥시톨의 축합 생성물, 또는 지방산으로부터 유래된 부분 에스테르를 갖는 에틸렌 옥사이드 및 예를 들어 폴리에틸렌 소르비탄 모노올레에이트와 같은 헥시톨 무수물의 축합 생성물일 수 있다. 수성 현탁액은 하나 이상의 보존제를 또한 함유할 수 있다.
유성 현탁액은 예를 들어, 아라키스 오일, 올리브유, 참기름, 또는 코코넛유와 같은 식물유, 또는 액체 파라핀과 같은 광유에 활성 성분을 현탁시킴으로써 제형화될 수 있다. 유성 현탁액은 예를 들어, 밀랍, 경질 파라핀, 또는 세틸 알코올과 같은, 증점제를 함유할 수 있다. 상기 언급된 바와 같은 감지제 및 향미제는 첨가되어 맛좋은 경구 제제를 제공할 수 있다.
물의 첨가에 의해 수용성 현탁액의 제조에 적합한 분산성 분말 및 과립은 분산제 또는 습윤제, 현탁제, 및 하나 이상의 보존제와 혼합된 활성 성분을 제공한다. 적합한 분산제 또는 습윤제 및 현탁제는 본원에서 예시된다.
본원에서 제공되는 약제학적 조성물은 또한 수-중-유 에멀젼의 형태일 수 있다. 오일 상은 예컨대 올리브유 또는 아라키스 오일과 같은 식물유, 또는 예를 들어 액체 파라핀과 같은 광유, 또는 이들의 혼합물일 수 있다. 적합한 유화제는 예를 들어, 아카시아 검 또는 트라가칸트 검과 같은 자연-발생 검; 예를 들어, 대두, 레시틴, 및 지방산에서 유래된 에스테르 또는 부분 에스테르와 같은 자연-발생 포스파티드; 예를 들어, 소르비탄 모노올레에이트와 같은, 헥시톨 무수물; 및 예를 들어, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트와 같은 에틸렌 옥사이드와 부분 에스테르의 축합 생성물일 수 있다.
약제학적 조성물은 임플란트, 리포좀, 하이드로겔, 프로드러그, 및 마이크로캡슐화된 전달 시스템을 포함하는 제어된 방출 제형과 같은, 신체로부터의 빠른 분해 또는 제거로부터 조성물을 보호하기 위해 부형제를 또한 포함할 수 있다. 예를 들어, 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 스테아레이트와 같은 시간 지연 물질의 단독, 또는 왁스와의 조합이 사용될 수 있다. 주사 가능한 약제학적 조성물의 연장된 흡수는 흡수를 지연시키는 제제, 예를 들어 알루미늄 모노스테아레이트 또는 젤라틴을 포함함으로써 달성될 수 있다. 미생물 작용의 방지는 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 아스코르브 산, 티메로살 등과 같은 다양한 항균 및 항진균제에 의해 달성될 수 있다.
본원에 제공된 약제학적 조성물은 -80℃, 4℃, 25℃ 또는 37℃에서 저장될 수 있다.
동결 건조된 조성물은 본원에 제공된 액체 약제학적 조성물을 냉동-건조함으로써 제조될 수 있다. 특정 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물은 동결건조된 약제학적 조성물이다. 몇몇 구현 예에서, 약제학적 제형은 용액, 에멀젼 및 기타 혼합물로서 투여를 위해 재구성될 수 있는 동결건조 분말이다. 이들은 또한 재구성되고 고체 또는 겔로 제형화될 수 있다.
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 동결건조된 제형의 제조는 무균 여과, 바이알 충전, 동결-건조기 챔버에서 바이알 동결, 이어서 동결 건조, 스토퍼링 및 캡핑의 동결 건조를 위한 제형화된 벌크 용액의 배치(batching)를 포함한다.
동결 건조기는 동결 건조 제형을 제조하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, VirTis Genesis 모델 EL 파일럿 유닛이 사용될 수 있다. 상기 유닛은 이 장치는 3개의 작업 선반을 갖는 챔버(ca 0.4 제곱 미터의 총 사용 가능한 선반 영역까지), 외부 응축기 및 기계식 진공 펌핑 시스템을 혼입한다(incorporate). 계단식 기계식 냉동은 선반을 -70℃ 이하로 냉각하고, 외부 응축기를 -90℃ 이하로 냉각하는 것을 가능하게 한다. 선반 온도와 챔버 압력은 각각 +/- 0.5℃ 및 +/- 2 마이크론(milliTorr)으로 자동 제어되었다. 상기 유닛에는 커패시턴스 압력계 진공 게이지, 피라니 진공 게이지, 압력 변환기(0에서 1 기압 측정용) 및 상대 습도 센서가 장착되었다.
동결 건조 분말은 본원에 제공된 항체 약물 컨쥬게이트 또는 이의 약제학적으로 허용되는 유도체를 적절한 용매에 용해시켜 제조될 수 있다. 몇몇 구현 예에서, 동결 건조된 분말은 멸균된다. 용액의 후속 멸균 여과 후 당업자에게 공지된 표준 조건 하에서의 동결 건조는 원하는 제형을 제공한다. 하나의 구현 예에서, 생성된 용액은 동결 건조를 위해 바이알에 분배될 것이다. 각 바이알은 항체 약물 컨쥬게이트의 단일 용량 또는 다중 용량을 함유할 것이다. 동결 건조된 분말은 약 4℃ 내지 실온과 같은 적절한 조건하에서 저장될 수 있다.
상기 동결 건조된 분말을 주사용 수로 재구성하는 것은 비경구 투여에 사용하기 위한 제형을 제공한다. 재구성을 위해, 동결건조된 분말에는 멸균수 또는 기타 적절한 부형제가 첨가된다. 이러한 양은 특정 요구에 따라 경험적으로 결정되고 조정될 수 있다.
예시적인 재구성 절차는 다음과 같이 예시된다: (1) 18 또는 20 게이지 바늘이 있는 5 mL 또는 3 mL 주사기를 끼우고 주사기에 WFI 등급의 물을 채운다; (2) 주사기 눈금을 사용하여 적절한 양의 WFI를 측정하여 주사기에 기포가 없는지 확인한다; (3) 고무 스토퍼를 통해 바늘을 삽입한다; (4) 주사기의 전체 내용물을 바이알 벽 아래의 용기에 분배하고 주사기와 바늘을 제거한 다음 날카로운 용기에 넣는다; (4) 완전히 재구성될 때까지(예컨대 약 20-40초) 전체 바이알 내용물을 조심스럽게 가용화하고, 거품을 일으킬 수 있는 단백질 용액의 과도한 교반을 최소화하기 위해 바이알을 계속 휘젓는다.
5.3 항-191P4D12 항체 약물 컨쥬게이트
본원에 제공된 약제학적 조성물, 제형 및 투여 형태는 항-191P4D12 항체 약물 컨쥬게이트를 포함한다. 본원에 제공된 항-191P4D12 항체 약물 컨쥬게이트는 하나 이상의 세포독성제 유닛(또는 약물 유닛)에 컨쥬게이트된 191P4D12에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함한다. 세포 독성제(또는 약물 유닛)는 직접 또는 링커 유닛(LU)를 통해 공유적으로 링크될 수 있다.
몇몇 구현 예에서, 상기 항체 약물 컨쥬게이트 화합물은 다음의 화학식을 갖는다:
L - (LU-D)p (I)
또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매 화합물, 여기서:
L은 항체 유닛, 예컨대 아래 섹션 5.3.1에서 제공되는 바와 같은 항-191P4D12 항체 또는 이의 항체 결합 단편이고, 및
(LU-D)는
링커 유닛-약물 유닛 모이어티이고, 여기서:
LU-는 링커 유닛이고, 및
D는 표적 세포에 대해 세포 증식 억제 또는 세포 독성 활성을 갖는 약물 유닛이며; 및
p는 1 내지 20의 정수이다.
몇몇 구현 예에서, p는 1 내지 10, 1 내지 9, 1 내지 8, 1 내지 7, 1 내지 6, 1 내지 5, 1 내지 4, 1 내지 3, 또는 1 내지 2의 범위이다. 몇몇 구현 예에서, p는 2 내지 10, 2 내지 9, 2 내지 8, 2 내지 7, 2 내지 6, 2 내지 5, 2 내지 4 또는 2 내지 3의 범위이다. 다른 구현 예에서, p는 약 1이다. 다른 구현 예에서, p는 약 2이다. 다른 구현 예에서, p는 약 3이다. 다른 구현 예에서, p는 약 4이다. 다른 구현 예에서, p는 약 5이다. 다른 구현 예에서, p는 약 6이다. 다른 구현 예에서, p는 약 7이다. 다른 구현 예에서, p는 약 8이다. 다른 구현 예에서, p는 약 9이다. 다른 구현 예에서, p는 약 10이다.
몇몇 구현 예에서, 항체 약물 컨쥬게이트 화합물은 다음 화학식을 갖는다:
L - (Aa-Ww-Yy-D)p (II)
또는 이의 약제학적으로 허용되는 염 또는 용매 화합물, 여기서:
L은 항체 유닛, 예컨대 아래 섹션 5.3.1에서 제공되는 바와 같은 항-191P4D12 항체 또는 이의 항체 결합 단편이고, 및
Aa-Ww-Yy-는 링커 유닛(LU)이고, 여기서:
-A-는 스트레처 유닛이고,
a는 0 또는 1이며,
각 -W-는 독립적으로 아미노산 유닛이고,
w는 0 내지 12 범위의 정수이며,
-Y-는 자기-희생적(self-immolative) 스페이서 유닛이고,
y는 0, 1 또는 2이며;
D는 표적 세포에 대해 세포 증식 억제 또는 세포 독성 활성을 갖는 약물 유닛이며; 및
p는 1 내지 20의 정수이다.
몇몇 구현 예에서, a는 0 또는 1이고, w는 0 또는 1이고, y는 0, 1 또는 2이다. 몇몇 구현 예에서, a는 0 또는 1이고, w는 0 또는 1이고, y는 0 또는 1이다. 몇몇 구현 예에서, p는 1 내지 10, 1 내지 9, 1 내지 8, 1 내지 7, 1 내지 6, 1 내지 5, 1 내지 4, 1 내지 3, 또는 1 내지 2의 범위이다. 몇몇 구현 예에서, p는 2 내지 8, 2 내지 7, 2 내지 6, 2 내지 5, 2 내지 4 또는 2 내지 3의 범위이다. 다른 구현 예에서, p는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다. 몇몇 구현 예에서, p는 2 또는 4이다. 몇몇 구현 예에서, w가 0이 아닐 때, y는 1 또는 2이다. 몇몇 구현 예에서, w가 1 내지 12일 때, y는 1 또는 2이다. 몇몇 구현 예에서, w는 2 내지 12이고 y는 1 또는 2이다. 몇몇 구현 예에서, a는 1이고 w 및 y는 0이다.
복수의 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 조성물의 경우, 약물 로딩은 항체 유닛당 약물 분자의 평균 수인 p로 표시된다. 약물 로딩은 항체당 1 내지 20 개의 약물(D)의 범위일 수 있다. 컨쥬게이션 반응의 제조에서 항체당 평균 약물 수는 질량 분광법, ELISA 분석 및 HPLC와 같은 통상적인 수단으로 특성화될 수 있다. p에 대한 항체 약물 컨쥬게이트의 정량적 분포는 또한 결정될 수 있다. 몇몇 경우에, p가 다른 약물 로딩을 갖는 항체 약물 컨쥬게이트로부터의 특정 값인, 동종 항체 약물 컨쥬게이트의 분리, 정제 및 특성화는, 역상 HPLC 또는 전기 영동과 같은 수단에 의해 달성될 수 있다. 예시적인 구현 예에서, p는 2 내지 8이다.
5.3.1 항-191P4D12 항체 또는 항원 결합 단편
하나의 구현 예에서, 191P4D12 관련 단백질에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:2의 아미노산 서열을 포함하는 191P4D12 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원 결합 단편이다(도 5a 참조). 191P4D12 단백질을 코딩하는 상응하는 cDNA는 SEQ ID NO:1의 서열을 갖는다(도 5a 참조).
SEQ ID NO:2의 아미노산 서열을 포함하는 191P4D12 단백질에 특이적으로 결합하는 항체는 다른 191P4D12 관련 단백질에 결합할 수 있는 항체를 포함한다. 예를 들어, SEQ ID NO:2의 아미노산 서열을 포함하는 191P4D12 단백질에 결합하는 항체는 191P4D12 변이체 및 이의 상동체 또는 유사체와 같은 191P4D12 관련 단백질에 결합할 수 있다.
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공되는 항-191P4D12 항체는 단일 클론 항체이다.
몇몇 구현 예에서, 도 5b에 도시된 바와 같이, 항체는 SEQ ID NO:4의 아미노산 서열(SEQ ID NO:3의 cDNA 서열)을 포함하는 중쇄, 및/또는 SEQ ID NO:6의 아미노산 서열(SEQ ID NO:5의 cDNA)을 포함하는 경쇄를 포함한다.
몇몇 구현 예에서, 항-191P4D12 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:7에 제시된 중쇄 가변 영역의 CDRs의 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정 영역(CDRs)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:8에 제시된 경쇄 가변 영역의 CDRs의 아미노산 서열을 포함하는 CDRs를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. SEQ ID NO:7 및 SEQ ID NO:8은 도 5c에 나타낸바와 같고, 아래에 열거된다:
SEQ ID NO:7
MELGLCWVFLVAILEGVQCEVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYNMNWVRQAPGKGLEWVSYISSSSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLSLQMNSLRDEDTAVYYCARAYYYGMDVWGQGTTVTVSSASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKRVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK
SEQ ID NO:8
MDMRVPAQLLGLLLLWFPGSRCDIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISGWLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPPTFGGGTKVEIKRTVAAPSVFIFPPSDEQLKSGTASVVCLLNNFYPREAKVQWKVDNALQSGNSQESVTEQDSKDSTYSLSSTLTLSKADYEKHKVYACEVTHQGLSSPVTKSFNRGEC
몇몇 구현 예에서, 항-191P4D12 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:22에 제시된 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(SEQ ID NO:7의 20번째 아미노산(글루탐산)에서 136번째 아미노산(세린) 범위의 아미노산 서열인) 및 SEQ ID NO:23에 제시된 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(SEQ ID NO:8의 23번째 아미노산(아스파르트 산)에서 130번째 아미노산(아르기닌) 범위의 아미노산 서열인)을 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 항-191P4D12 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:22에 제시된 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역(SEQ ID NO:7의 20번째 아미노산(글루탐산)에서 136번째 아미노산(세린) 범위의 아미노산 서열인) 및 SEQ ID NO:23에 제시된 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역(SEQ ID NO:8의 23번째 아미노산(아스파르트 산)에서 130번째 아미노산(아르기닌) 범위의 아미노산 서열인)을 포함한다. SEQ ID NO:22 및 SEQ ID NO:23은 아래에 열거된다:
SEQ ID NO:22
EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYNMNWVRQAPGKGLEWVSYISSSSSTIYYADSVKGRFTISRDNAKNSLSLQMNSLRDEDTAVYYCARAYYYGMDVWGQGTTVTVSS
SEQ ID NO:23
DIQMTQSPSSVSASVGDRVTITCRASQGISGWLAWYQQKPGKAPKFLIYAASTLQSGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQQANSFPPTFGGGTKVEIKR
CDR 서열은 잘 알려진 넘버링 시스템에 따라 결정될 수 있다. 전술한 바와 같이, CDR 영역은 당업자에게 잘 알려져 있고 잘 알려진 넘버링 시스템에 의해 정의되었다. 예를 들어, Kabat 상보성 결정 영역(CDRs)은 서열 가변성을 기반으로 하며 가장 일반적으로 사용된다(예를 들어, Kabat et al., supra 참조). 대신 Chothia는 구조적 루프의 위치를 나타낸다(예컨대 Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196 : 901-17 참조). Kabat 넘버링 규칙을 사용하여 넘버링할 때 Chothia CDR-H1 루프의 말단은 루프의 길이에 따라 H32와 H34 사이에서 변한다(이는 Kabat 넘버링 체계가 삽입을 H35A 및 H35B에 배치하기 때문이다; 35A와 35B가 모두 없으면 루프는 32에서 끝난다; 35A만 있으면 루프는 33에서 끝난다; 35A와 35B가 모두 있는 경우 루프는 34에서 끝난다). AbM 초 가변 영역은 Kabat CDRs와 Chothia 구조 루프 사이의 절충안을 나타내며 Oxford Molecular의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에서 사용된다(예컨대 Antibody Engineering Vol. 2 (Kontermann and Dubel eds., 2d ed. 2010) 참조). "콘택트(contact)" 초 가변 영역은 사용 가능한 복합 결정 구조의 분석을 기반으로 한다. 개발되고 널리 채택된 또 다른 범용 넘버링 시스템은 ImMunoGeneTics(IMGT) Information System®이다(Lafranc et al., 2003, Dev. Comp. Immunol. 27 (1) : 55-77). IMGT는 인간 및 기타 척추 동물의 면역 글로불린(IG), T-세포 수용체(TCR) 및 주요 조직 적합성 복합체(MHC)를 전문으로 하는 통합 정보 시스템이다. 여기서, CDR은 경쇄 또는 중쇄 내의 아미노산 서열과 위치 모두로 지칭된다. 구조적 특징에 따라 가변 도메인 서열을 정렬하는 넘버링 시스템을 사용하여, 면역 글로불린 가변 도메인의 구조 내에서 CDR의 "위치"가 종간에 보존되고 루프라고 하는 구조에 존재하므로, CDR 및 프레임워크 잔기는 쉽게 식별된다. 이 정보는 한 종의 면역 글로불린의 CDR 잔기를, 일반적으로 인간 항체의 수용체 프레임워크로 이식하고 대체하는데 사용할 수 있다. Honegger and Pluckthun, 2001, J. Mol. Biol. 309 : 657-70에 의해 추가 넘버링 시스템(AHon)가 개발되었다. 예를 들어 Kabat 넘버링 및 IMGT 고유 넘버링 시스템을 포함하는 넘버링 시스템 간의 대응은 당업자에게 잘 알려져있다(예를 들어, Kabat, supra; Chothia and Lesk, supra; Martin, supra; Lefranc et al., supra 참고). 이들 초 가변 영역 또는 CDRs의 각각의 잔기는 위의 표 30에 명시되어 있다.
몇몇 구현 예에서, 항-191P4D12 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 Kabat 넘버링에 따라 SEQ ID NO:7에 제시된 중쇄 가변 영역의 CDRs의 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정 영역(CDRs)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 Kabat 넘버링에 따라 SEQ ID NO:8에 제시된 경쇄 가변 영역의 CDRs의 아미노산 서열을 포함하는 CDRs를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
몇몇 구현 예에서, 항-191P4D12 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 AbM 넘버링에 따라 SEQ ID NO:7에 제시된 중쇄 가변 영역의 CDRs의 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정 영역(CDRs)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 AbM 넘버링에 따라 SEQ ID NO:8에 제시된 경쇄 가변 영역의 CDRs의 아미노산 서열을 포함하는 CDRs를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
다른 구현 예에서, 항-191P4D12 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 Chothia 넘버링에 따라 SEQ ID NO:7에 제시된 중쇄 가변 영역의 CDRs의 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정 영역(CDRs)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 Chothia 넘버링에 따라 SEQ ID NO:8에 제시된 경쇄 가변 영역의 CDRs의 아미노산 서열을 포함하는 CDRs를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
다른 구현 예에서, 항-191P4D12 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 Contact 넘버링에 따라 SEQ ID NO:7에 제시된 중쇄 가변 영역의 CDRs의 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정 영역(CDRs)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 Contact 넘버링에 따라 SEQ ID NO:8에 제시된 경쇄 가변 영역의 CDRs의 아미노산 서열을 포함하는 CDRs를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
또 다른 구현 예에서, 항-191P4D12 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 IMGT 넘버링에 따라 SEQ ID NO:7에 제시된 중쇄 가변 영역의 CDRs의 아미노산 서열을 포함하는 상보성 결정 영역(CDRs)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 IMGT 넘버링에 따라 SEQ ID NO:8에 제시된 경쇄 가변 영역의 CDRs의 아미노산 서열을 포함하는 CDRs를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
전술한 바와 같이, 상이한 넘버링 시스템에 따른 CDR 서열은 예를 들어 항원 수용체 넘버링 및 수용체 분류(ANARCI)에 의해 제공되는 것과 같은 온라인 도구를 사용하여 쉽게 결정될 수 있다. 예를 들어, ANARCI에 의해 결정된 Kabat 넘버링에 따른 SEQ ID NO:7 내의 중쇄 CDR 서열 및 SEQ ID NO:8 내의 경쇄 CDR 서열은 아래 표 31에 열거된다.
Figure pct00013
다른 예로서, ANARCI에 의해 결정된 IMGT 넘버링에 따른 SEQ ID NO:22 내의 중쇄 CDR 서열, 및 SEQ ID NO:23 내의 경쇄 CDR 서열은 아래 표 32에 열거되어 있다.
Figure pct00014
몇몇 구현 예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR H1, SEQ ID NO:10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR H2, SEQ ID NO:11의 아미노산 서열을 포함하는 CDR H3, SEQ ID NO:12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR L1, SEQ ID NO:13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR L2, 및 SEQ ID NO:14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR L3을 포함한다.
몇몇 구현 예에서, 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:7의 20번째 아미노산(글루탐산)에서 136번째 아미노산(세린)까지의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:8의 23번째 아미노산(아스파르트 산)에서 130번째 아미노산(아르기닌)까지의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
몇몇 구현 예에서, 항체는 SEQ ID NO:7의 20번째 아미노산(글루탐산)에서 466번째 아미노산(라이신)까지의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO:8의 23번째 아미노산(아스파르트 산)에서 236번째 아미노산(시스테인)까지의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
몇몇 구현 예에서, 본원에 기재된 항체의 아미노산 서열 변형(들)이 고려된다. 예를 들어, 항체의 결합 친화성 및/또는 특이성, 열 안정성, 발현 수준, 이펙터 기능, 글리코실화, 감소된 면역원성 또는 용해도를 포함 하나 이에 제한되지 않는, 다른 생물학적 특성을 최적화하는 것이 바람직할 수 있다. 따라서, 본원에 기술된 항체에 추가하여, 항체 변이체가 제조될 수 있는 것으로 고려된다. 예를 들어, 항체 변이체는 적절한 뉴클레오티드 변화를 인코딩 DNA에 도입하거나 및/또는 원하는 항체 또는 폴리펩티드의 합성에 의해 제조될 수 있다. 아미노산 변화를 인식하는 당업자는 글리코실화 부위의 수 또는 위치 변경 또는 막 고정 특성 변경과 같은 항체의 번역 후 공정을 변경할 수 있다.
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 항체는 예를 들어 항체에 대한 임의의 유형의 분자의 공유 부착에 의해 화학적으로 변형된다. 항체 유도체는 예를 들어, 글리코실화, 아세틸화, 페길화, 인산화, 아미드화, 공지의 보호/차단기에 의한 유도체화, 단백질 분해 절단, 세포 리간드 또는 다른 단백질에 대한 연결 등에 의해 화학적으로 변형된 항체를 포함할 수 있다. 수많은 화학적 변형은 특정 화학적 절단, 아세틸화, 제형화, 튜니카마이신의 대사 합성 등을 포함 하나 이에 제한되지 않는 공지된 기술에 의해 수행될 수 있다. 추가로, 항체는 하나 이상의 비-표준 아미노산을 함유할 수 있다.
변이는 원래 항체 또는 폴리펩티드와 비교하여 아미노산 서열의 변화를 초래하는 단일 도메인 항체 또는 폴리펩티드를 코딩하는 하나 이상의 코돈의 치환, 결실 또는 삽입일 수 있다. 아미노산 치환은 예를 들어 류신을 세린으로 대체하는 것, 예를 들어 보존적 아미노산 대체와 같은 하나의 아미노산을 유사한 구조적 및/또는 화학적 특성을 포함하는 다른 아미노산으로 대체한 결과일 수 있다. 당업자에게 공지된 표준 기술은 예를 들어 아미노산 치환을 초래하는 부위 지정 돌연변이 유발 및 PCR 매개 돌연변이 유발을 포함하는 본원에 제공된 분자를 코딩하는 뉴클레오티드 서열에 돌연변이를 도입하기 위해 사용될 수 있다. 삽입 또는 결실은 선택적으로 약 1 내지 5개의 아미노산 범위일 수 있다. 특정 구현 예에서, 치환, 결실 또는 삽입은 원래 분자에 비해 25개 미만의 아미노산 치환, 20개 미만의 아미노산 치환, 15개 미만의 아미노산 치환, 10개 미만의 아미노산 치환, 5개 미만의 아미노산 치환, 4개 미만의 아미노산 치환, 3개 미만의 아미노산 치환, 또는 2 개 미만의 아미노산 치환을 포함한다. 특정 구현 예에서, 치환은 하나 이상의 예측된 비-필수 아미노산 잔기에서 만들어진 보존적 아미노산 치환이다. 허용되는 변이는 서열에서 아미노산의 삽입, 결실 또는 치환을 체계적으로 만들고 모 항체에 의해 나타나는 활성에 대한 결과 변이를 테스트하여 결정될 수 있다.
아미노산 서열 삽입은 하나의 잔기에서 다중 잔기를 포함하는 폴리펩티드에 이르는 길이 범위의 아미노- 및/또는 카르복실-말단 융합뿐만 아니라 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열 내 삽입을 포함한다. 말단 삽입의 예는 N-말단 메티오닐 잔기가 있는 항체를 포함한다.
보존적 아미노산 치환에 의해 생성된 항체는 본 개시에 포함된다. 보존적 아미노산 치환에서, 아미노산 잔기는 유사한 전하를 가진 측쇄를 포함하는 아미노산 잔기로 대체된다. 전술한 바와 같이, 유사한 전하를 갖는 측쇄를 포함하는 아미노산 잔기 패밀리는 당업계에 정의되어 있다. 상기 패밀리는 염기성 측쇄(예컨대, 라이신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예컨대, 아스파르트 산, 글루탐산), 하전되지 않은 극성 측쇄(예컨대 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄(예컨대, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지형 측쇄(예컨대, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄(예컨대, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다. 대안적으로, 돌연변이는 포화 돌연변이 유발에 의한 것과 같이, 코딩 서열의 전부 또는 일부를 따라 랜덤하게 도입될 수 있고, 생성된 돌연변이는 생물학적 활성에 대해 스크리닝되어, 활성을 유지하는 돌연변이를 식별할 수 있다. 돌연변이 유발 후에, 코딩된 단백질이 발현될 수 있고 단백질의 활성은 결정될 수 있으며, 보존적(예를 들어, 유사한 특성 및/또는 측쇄를 갖는 아미노산 그룹 내로) 치환은 특성을 유지하거나 크게 변경하지 않기 위해 이루어질 수 있다.
아미노산은 측쇄의 특성의 유사성에 따라 그룹화될 수 있다(예컨대, Lehninger, Biochemistry 73-75 (2d ed. 1975) 참조): (1) 비극성: Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (I), Pro (P), Phe (F), Trp (W), Met (M); (2) 비하전 극성: Gly (G), Ser (S), Thr (T), Cys (C), Tyr (Y), Asn (N), Gln (Q); (3) 산성: Asp (D), Glu (E); 및 (4) 염기성: Lys (K), Arg (R), His(H). 대안적으로, 자연적으로 발생하는 잔기는 일반적인 측쇄 특성에 기초하여 다음의 그룹으로 나눠질 수 있다: (1) 소수성: 노르루신, Met, Ala, Val, Leu, Ile; (2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln; (3) 산성: Asp, Glu; (4) 염기성: His, Lys, Arg; (5) 사슬 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro; 및 (6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
예를 들어, 항체의 적절한 형태를 유지하는데 관여하지 않는 모든 시스테인 잔기는 알라닌이나 세린과 같은, 예를 들어 다른 아미노산으로, 또한 치환되어 분자의 산화 안정성을 개선하고 비정상적인 가교를 방지할 수 있다.
변이는 올리고뉴클레오티드-매개(부위 지정) 돌연변이 유발, 알라닌 스캐닝 및 PCR 돌연변이 유발과 같은 당업계에 알려진 방법을 사용하여 만들어질 수 있다. 부위 지정 돌연변이 유발(예컨대, Carter, 1986, Biochem J. 237:1-7; and Zoller et al., 1982, Nucl. Acids Res. 10:6487-500 참조), 카세트 돌연변이 유발 (예컨대, Wells et al., 1985, Gene 34:315-23 참조) 또는 다른 알려진 기술은 복제된 DNA에서 수행되어, 항-MSLN 항체 변이체 DNA를 생성할 수 있다.
항체의 공유 변이는 본 개시의 범위 내에 포함된다. 공유 변이는 항체의 표적화된 아미노산 잔기를 항체의 선택된 측쇄 또는 N- 또는 C- 말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도체화제와 반응시키는 것을 포함한다. 다른 변이는 글루타미닐 및 아스파라기닐 잔기의 각각 상응하는 글루타밀 및 아스파틸 잔기로의 탈아미드화; 프롤린 및 라이신의 수산화; 세릴 또는 트레오닐 잔기의 하이드록실기의 인산화; 라이신, 아르기닐, 및 히스티딘 측쇄의 α-아미노기의 메틸화(예컨대, Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties 79-86 (1983) 참조); N-말단 아민의 아세틸화; 및 C-말단 카르복실기의 아미드화를 포함한다.
본 개시의 범위 내에 포함되는 항체의 공유 변이의 다른 유형은 항체 또는 폴리펩티드의 천연 글리코실화 패턴을 변경하는 것(예컨대, Beck et al., 2008, Curr. Pharm. Biotechnol. 9:482-501; and Walsh, 2010, Drug Discov. Today 15:773-80 참조) 및 다음에 제시된 방식으로 항체를 예컨대, 폴리에틸렌글리콜(PEG), 폴리프로필렌 글리콜, 또는 폴리옥시알킬렌과 같은 다양한 비단백질성 중합체 중 하나에 링크하는 것을 포함한다: 예를 들어, U.S. 특허 Nos. 4,640,835; 4,496,689; 4,301,144; 4,670,417; 4,791,192; 또는 4,179,337.
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:7에 제시된 바와 같은 중쇄에 대해 70% 초과 상동성을 갖는 중쇄를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:7에 제시된 바와 같은 중쇄에 대해 75% 초과 상동성을 갖는 중쇄를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:7에 제시된 바와 같은 중쇄에 대해 80% 초과 상동성을 갖는 중쇄를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:7에 제시된 바와 같은 중쇄에 대해 85% 초과 상동성을 갖는 중쇄를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:7에 제시된 바와 같은 중쇄에 대해 90% 초과 상동성을 갖는 중쇄를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:7에 제시된 바와 같은 중쇄에 대해 95% 초과 상동성을 갖는 중쇄를 포함한다.
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:8에 제시된 바와 같이 경쇄에 대해 70% 초과 상동성을 갖는 경쇄를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:8에 제시된 경쇄에 대해 75% 초과 상동성을 갖는 경쇄를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:8에 제시된 경쇄에 대해 80% 초과 상동성을 갖는 경쇄를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:8에 제시된 바와 같은 경쇄에 대해 85% 초과 상동성을 갖는 경쇄를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:8에 제시된 바와 같은 경쇄에 대해 90% 초과 상동성을 갖는 경쇄를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 항체 또는 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:8에 제시된 바와 같은 경쇄에 대해 95% 초과 상동성을 갖는 경쇄를 포함한다.
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 항-191P4D12 항체는 American Type Culture Collection(ATCC) Accession NO: PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 Ha22-2(2,4)6.1로 지정된 항체의 중쇄 및 경쇄 CDR 영역, 또는 Ha22-2(2,4)6.1의 중쇄 및 경쇄 CDR 영역의 아미노산 서열에 상동인 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 CDR 영역을 포함하고, 여기서 항체는 American Type Culture Collection(ATCC) Accession NO: PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 Ha22-2(2,4)6.1로 지정된 항-191P4D12 항체의 원하는 기능적 특성을 보유한다.
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 인간화 중쇄 가변 영역 및 인간화 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 :
(a) 중쇄 가변 영역은 American Type Culture Collection(ATCC) Accession NO:PTA-11267 하에 기탁 된 하이브리도마에 의해 생성된 항체에 제시된 중쇄 가변 영역 CDRs의 아미노산 서열을 포함하는 CDRs를 포함하고;
(b) 경쇄 가변 영역은 American Type Culture Collection(ATCC) Accession NO:PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체에 제시된 경쇄 가변 영역 CDRs의 아미노산 서열을 포함하는 CDRs를 포함한다.
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 항-191P4D12 항체는 American Type Culture Collection(ATCC) Accession NO: PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 Ha22-2(2,4)6.1로 지정된 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역(도 3 참조), 또는 Ha22-2(2,4)6.1의 중쇄 및 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열에 상동인 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하고, 여기서 항체는 본원에 제공된 항-191P4D12 항체의 원하는 기능적 특성을 보유한다. 본 발명의 항체의 불변 영역으로서, 불변 영역의 임의의 서브 클래스가 선택될 수 있다. 하나의 구현 예에서, 중쇄 불변 영역으로서 인간 IgG1 불변 영역 및 경쇄 불변 영역으로서 인간 Ig 카파 불변 영역이 사용될 수 있다.
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 항-191P4D12 항체는 American Type Culture Collection(ATCC) Accession NO: PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 Ha22-2(2,4)6.1로 지정된 항체의 중쇄 및 경쇄(도 3 참조), 또는 Ha22-2(2,4)6.1의 중쇄 및 경쇄의 아미노산 서열에 상동인 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 경쇄를 포함하고, 여기서 항체는 본원에 제공된 항-191P4D12 항체의 원하는 기능적 특성을 보유한다.
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 :
(a) 중쇄 가변 영역은 American Type Culture Collection(ATCC) Accession NO:PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 80% 상동성인 아미노산 서열을 포함하고;
(b) 경쇄 가변 영역은 American Type Culture Collection(ATCC) Accession NO:PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 80% 상동성인 아미노산 서열을 포함한다.
몇몇 구현 예에서, 중쇄 가변 영역은 American Type Culture Collection(ATCC) Accession NO:PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 85% 상동성인 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현 예에서, 중쇄 가변 영역은 American Type Culture Collection (ATCC) Accession NO:PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 상동 성인 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현 예에서, 중쇄 가변 영역은 American Type Culture Collection (ATCC) Accession NO:PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 상동 성인 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현 예에서, 중쇄 가변 영역은 American Type Culture Collection (ATCC) Accession NO:PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 상동성일 수 있다.
몇몇 구현 예에서, 경쇄 가변 영역은 American Type Culture Collection(ATCC) Accession NO:PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 85% 상동성인 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현 예에서, 경쇄 가변 영역은 American Type Culture Collection (ATCC) Accession NO:PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 상동성인 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현 예에서, 경쇄 가변 영역은 American Type Culture Collection (ATCC) Accession NO:PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 상동 성인 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현 예에서, 경쇄 가변 영역은 American Type Culture Collection (ATCC) Accession NO:PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 상동성일 수 있다.
다른 구현 예에서, 본원에 제공된 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 중쇄 및 경쇄를 포함하며, 여기서:
(a) 중쇄는 American Type Culture Collection (ATCC) Accession NO:PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 80% 상동성인 아미노산 서열을 포함하고; 및
(b) 경쇄는 American Type Culture Collection (ATCC) Accession NO:PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 80% 상동성인 아미노산 서열을 포함한다.
몇몇 구현 예에서, 중쇄는 American Type Culture Collection(ATCC) Accession NO:PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 85% 상동성인 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현 예에서, 중쇄는 American Type Culture Collection(ATCC) Accession NO:PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 상동성인 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현 예에서, 중쇄는 American Type Culture Collection(ATCC) Accession NO:PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 중쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 상동성인 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현 예에서, 중쇄는 American Type Culture Collection(ATCC) Accession NO:PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 중쇄 아미노산 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 상동성일 수 있다.
몇몇 구현 예에서, 경쇄는 American Type Culture Collection(ATCC) Accession NO:PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 85% 상동성인 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현 예에서, 경쇄는 American Type Culture Collection(ATCC) Accession NO:PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 90% 상동성인 아미노산 서열을 포함한다. 또 다른 구현 예에서, 경쇄는 American Type Culture Collection(ATCC) Accession NO:PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 경쇄 아미노산 서열에 대해 적어도 95% 상동성인 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구현 예에서, 경쇄는 American Type Culture Collection(ATCC) Accession NO:PTA-11267 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생성된 항체의 경쇄 아미노산 서열에 대해 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 상동성일 수 있다.
본원에서 제공된 엔지니어링된 항체는 변형이 VH 및/또는 VL 내의 프레임워크 잔기에 이루어진 항체를 포함한다(예를 들어, 항체의 특성을 개선하기 위해). 일반적으로, 이러한 프레임워크 변형은 항체의 면역원성을 감소시키기 위해 만들어진다. 예를 들어, 하나의 접근법은 하나 이상의 프레임 워크 잔기를 상응하는 생식세포계열 서열로 "역돌연변이(backmutate)"시키는 것이다. 보다 구체적으로, 체세포 돌연변이를 겪은 항체는 항체가 유래된 생식계열세포 서열과 상이한 프레임워크 잔기를 함유할 수 있다. 이러한 잔기는 항체 프레임워크 서열을 항체가 유래된 생식계열세포 서열과 비교함으로써 확인될 수 있다. 프레임워크 영역 서열을 생식계열세포 구성으로 되돌리려면, 체세포 돌연변이는 예를 들어, 부위 지정 돌연변이 유발 또는 PCR 매개 돌연변이 유발에 의해 생식세포계열 서열로 "역 돌연변이"될 수 있다(예컨대, 류신에서 메티오닌으로 "역 돌연변이"). 이러한 "역 돌연변이된" 항체는 또한 본 발명에 포함되는 것으로 의도된다.
또 다른 유형의 프레임워크 변형는 프레임워크 영역 내, 또는 심지어 하나 이상의 CDR 영역 내에서 하나 이상의 잔기를 돌연변이시켜 T-세포 에피토프를 제거함으로써 항체의 잠재적인 면역 원성을 감소시키는 것을 포함한다. 이 접근법은 "탈면역화"라고도 하며, Carr et al에 의한 미국 특허 공개번호 2003/0153043에 더 자세히 설명되어 있다.
프레임워크 또는 CDR 영역 내에서 이루어진 변형에 추가로 또는 대안으로, 본 발명의 항체는 Fc 영역 내에 변형을 포함하여 예컨대 혈청 반감기, 보체 고정, Fc 수용체 결합 및/또는 항원-의존성 세포 독성과 같은, 일반적으로 항체의 하나 이상의 기능적 특성을 변경시키기 위해 엔지니어링될 수 있다. 더욱이, 본원에 제공된 항-191P4D12 항체는 화학적으로 변형되거나(예를 들어, 하나 이상의 화학적 모이어티가 항체에 부착될 수 있음) 또는 항체의 하나 이상의 기능적 특성을 다시 변경하기 위해 이의 글리코실화를 변경하도록 변형될 수 있다. 상기 구현 예 각각은 아래에서 더 상세히 설명된다.
하나의 구현 예에서, CH1의 힌지 영역은 힌지 영역의 시스테인 잔기의 수가 변경, 예를 들어 증가 또는 감소되도록 변형된다. 상기 접근법은 Bodmer et al에 의해 미국 특허 제5,677,425호에 자세히 설명된다. CH1의 힌지 영역에서 시스테인 잔기의 수는 예를 들어 경쇄 및 중쇄의 조립을 용이하게 하거나, 또는 항-191P4D12 항체의 안정성을 증가 또는 감소시키기 위해 변경된다.
또 다른 구현 예에서, 항체의 Fc 힌지 영역은 항-191P4D12 항체의 생물학적 반감기를 감소시키기 위해 돌연변이된다. 보다 구체적으로, 하나 이상의 아미노산 돌연변이는 항체가 천연 Fc-힌지 도메인 SpA 결합에 비해 손상된 스타필로콕킬(Staphylococcyl) 단백질 A(SpA) 결합을 갖도록 Fc- 힌지 단편의 CH2-CH3 도메인 인터페이스 영역으로 도입된다. 이 접근법은 Ward et al에 의한 미국 특허 제6,165,745호에 자세히 설명된다.
또 다른 구현 예에서, 항-191P4D12 항체는 생물학적 반감기를 증가시키도록 변형된다. 다양한 접근이 가능하다. 예를 들어, 돌연변이는 미국 특허 제6,277,375호에 설명된 바와 같이 Ward에 도입될 수 있다. 대안적으로, 생물학적 반감기를 증가시키기 위해, 항체는 Presta et al에 의해 미국 특허 제5,869,046호 및 제6,121,022호에 기재된 바와 같이, IgG의 Fc 영역의 CH2 도메인의 두 루프로부터 취해진 에피토프를 결합하는 샐비지 수용체(salvage receptor)를 함유하기 위해 CH1 또는 CL 영역 내에서 변경될 수 있다.
또 다른 구현 예에서, Fc 영역은 항체의 이펙터 기능(들)을 변경하기 위해 적어도 하나의 아미노산 잔기를 상이한 아미노산 잔기로 대체함으로써 변경된다. 예를 들어, 아미노산 특이적 잔기로부터 선택된 하나 이상의 아미노산은 항체는 항체가 이펙터 리간드에 대해 변경된 친화성을 갖지만 모 항체의 항원-결합 능력을 유지하도록 상이한 아미노산 잔기로 대체될 수 있다. 친화성이 변경되는 이펙터 리간드는 예를 들어 Fc 수용체 또는 보체의 C1 성분일 수 있다. 이 접근법은 Winter et al에 의한 미국 특허 제5,624,821 및 5,648,260 모두에서 보다 자세히 기술되어 있다.
191P4D12 관련 단백질에 대한 항-191P4D12 항체의 반응성은 적절하게 191P4D12 관련 단백질, 191P4D12-발현 세포 또는 이의 추출물을 사용하여, 웨스턴 블롯, 면역 침전, ELISA 및 FACS 분석을 포함하는 여러 잘 알려진 수단에 의해 확립될 수 있다. 191P4D12 항체 또는 이의 단편은 검출 가능한 마커로 라벨링되거나, 또는 두 번째 분자에 컨쥬게이트될 수 있다. 적합한 검출 가능한 마커는 방사성 동위 원소, 형광 화합물, 생물 발광 화합물, 화학 발광 화합물, 금속 킬레이터 또는 효소를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 또한, 2개 이상의 191P4D12 에피토프에 특이적인 이중-특이적 항체는 당업계에 일반적으로 공지된 방법을 사용하여 생성된다. 동종이합체(Homodimeric) 항체는 또한 당업계에 알려진 가교 기술에 의해 생성될 수 있다(예컨대, Wolff et al., Cancer Res. 53: 2560-2565).
또 다른 특정 구현 예에서, 본원에 제공되는 항-191P4D12 항체는 Ha22-2(2,4)6.1로 지정된 항체의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항체이다. Ha22-2(2,4)6.1의 중쇄는 SEQ ID NO:7의 20번째 E 잔기에서 466번째 K 잔기까지의 범위의 아미노산 서열로 이루어지고, Ha22-2(2,4)6.1의 경쇄는 SEQ ID NO:8의 23번째 D 잔기에서 236번째 C 잔기까지의 범위의 아미노산 서열로 이루어진다.
Ha22-2(2,4)6.1로 지정된 항체를 생성하는 하이브리도마는 2010.08.18에 American Type Culture Collection (ATCC), P.O. Box 1549, Manassas, VA 20108로 송부되었고(Federal Express를 통해), Accession number PTA-11267로 할당되었다.
5.3.2 세포 독성제(약물 유닛)
몇몇 구현 예에서, ADC는 돌라스타틴 또는 돌로스타틴 펩티드 유사체 및 유도체에 컨쥬게이트된 항체 또는 이의 항원 결합 단편인 아우리스타틴을 포함한다(미국 특허 제5,635,483; 5,780,588호). 돌라스타틴 및 아우리스타틴은 미세 소관 역학, GTP 가수 분해, 핵 및 세포 분열을 방해하고(Woyke et al (2001) Antimicrob. Agents and Chemother. 45(12):3580-3584), 항암(US 5,663,149) 및 항진균 활성(Pettit et al (1998) Antimicrob. Agents Chemother. 42 : 2961-2965)을 갖는 것으로 나타났다. 돌라스타틴 또는 아우리스타틴 약물 단위는 펩티드 약물 단위(WO 02/088172)의 N(아미노) 말단 또는 C(카르복실) 말단을 통해 항체에 부착될 수 있다.
예시적인 아우리스타틴 구현 예는 “Senter et al, Proceedings of the American Association for Cancer Research, Volume 45, Abstract Number 623, presented March 28, 2004"에 개시되고, 미국 특허 공보 제2005/0238649호에 설명된 N-말단 링크된 모노메틸아우리스타틴 약물 유닛 DE 및 DF를 포함하며, 상기 개시 내용은 전체가 참조로서 명시적으로 병합된다.
몇몇 구현 예에서, 아우리스타틴은 MMAE이다(여기서 물결 선은 항체 약물 컨쥬게이트의 링커에 대한 공유 부착을 나타낸다).
Figure pct00015
몇몇 구현 예에서, MMAE 및 링커 성분(본원에 추가로 설명된)을 포함하는 예시적인 구현 예는 다음 구조를 갖는다(여기서 L은 항체를 나타내고, p는 1 내지 12의 범위이다):
Figure pct00016
일반적으로, 펩티드-계 약물 유닛은 둘 이상의 아미노산 사이에서 펩티드 결합 및/또는 펩티드 단편을 형성함으로써 제조될 수 있다. 이러한 펩티드 결합은 예를 들어, 펩티드 화학 분야에서 잘 알려진 액상 합성 방법(E. Schroder and K. Lubke, “The Peptides”, volume 1, pp 76-136, 1965, Academic Press 참고)에 따라 제조될 수 있다. 상기 아우리스타틴/돌라스타틴 약물 유닛은 하기 방법을 따라 제조될 수 있다: US 5635483; US 5780588; Pettit et al (1989) J. Am. Chem. Soc. 111:5463-5465; Pettit et al (1998) Anti-Cancer Drug Design 13:243-277; Pettit, G.R., et al. Synthesis, 1996, 719-725; Pettit et al (1996) J. Chem. Soc. Perkin Trans. 1 5:859-863; 및 Doronina (2003) Nat Biotechnol 21(7):778-784.
5.3.3 링커
일반적으로, 항체 약물 컨쥬게이트는 약물 단위(예를 들어, MMAE)와 항체 단위(예를 들어, 항-191P4D12 항체 또는 이의 항원 결합 단편) 사이에 링커 유닛을 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 링커는 링커의 절단이 세포 내 환경에서 항체로부터 약물 유닛을 방출하도록, 세포 내 조건 하에서 절단 가능하다. 또 다른 구현 예에서, 링커 유닛은 절단될 수 없고 약물은 예를 들어 항체 분해에 의해 방출된다.
몇몇 구현 예에서, 링커는 세포 내 환경(예를 들어, 리소좀 또는 엔도좀 또는 카베올레아 내)에 존재하는 절단 제에 의해 절단될 수 있다. 링커는, 예를 들어 리소좀 또는 엔도좀 프로테아제를 포함하지만 이에 제한되지 않는, 세포 내 펩티다아제 또는 프로테아제 효소에 의해 절단되는 펩티딜 링커일 수 있다. 몇몇 구현 예에서, 펩티딜링커는 적어도 2개의 아미노산 길이 또는 적어도 3개의 아미노산 길이이다. 절단제는 카텝신 B 및 D 및 플라스민을 포함할 수 있으며, 이들 모두는 디펩티드 약물 유도체를 가수 분해하여 표적 세포 내에서 활성 약물을 방출하는 것으로 알려져 있다(예를 들어, Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123 참조). 가장 전형적인 것은 191P4D12 발현 세포에 존재하는 효소에 의해 절단될 수 있는 펩티딜 링커이다. 예를 들어, 암 조직에서 고도로 발현되는 티올-의존성 프로테아제 카텝신-B에 의해 절단 가능한 펩티딜 링커가 사용될 수 있다(예 : Phe-Leu 또는 Gly-Phe-Leu-Gly 링커(SEQ ID NO:15)). 이러한 링커의 다른 예는 예를 들어, 그 전체가 모든 목적을 위해 본원에 참고로서 병합되는 미국 특허 제6,214,345에 설명되어 있다. 특정 구현 예에서, 세포 내 프로테아제에 의해 절단될 수 있는 펩티딜 링커는 Val-Cit 링커 또는 Phe-Lys 링커이다(예를 들어, Val-Cit 링커와 독소루비신의 합성을 설명하는 미국 특허 6,214,345 참조). 치료제의 세포 내 단백질 분해 방출을 사용하는 한 가지 장점은 컨쥬게이트될 때 제제가 일반적으로 약화되고 컨쥬게이트의 혈청 안정성이 일반적으로 높다는 것이다.
다른 구현 예에서, 절단 가능한 링커는 pH 민감성이다, 즉, 특정 pH 값에서 가수 분해에 민감하다. 일반적으로, pH-민감성 링커는 산성 조건하에서 가수 분해할 수 있다. 예를 들어, 리소좀에서 가수 분해 가능한 산-분해성 링커(예를 들어, 히드라 존, 세미카르바존, 티오세미카르바존, 시스-아코니트산 아미드, 오르토 에스테르, 아세탈, 케탈 등)가 사용될 수 있다(예를 들어, U.S. 특허 제5,122,368; 5,824,805; 5,622,929; Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123; Neville et al., 1989, Biol. Chem. 264:14653-14661 참조). 이러한 링커는 혈액 속의 것들과 같은 중성 pH 조건하에서 비교적 안정하지만 리소좀의 대략적인 pH인 pH 5.5 또는 5.0 미만에서는 불안정하다. 특정 구현 예에서, 가수 분해 가능한 링커는 티오 에테르 링커이다(예를 들어, 아실히드라존 결합을 통해 치료제에 부착된 티오 에테르와 같은(예를 들어, 미국 특허 제5,622,929 참조)).
또 다른 구현 예에서, 링커는 환원 조건하에서 절단될 수 있다(예컨대 디설파이드 링커). 다양한 디설파이드 링커는 예를 들어, SATA(N-succinimidyl-S-acetylthioacetate), SPDP(N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithio)propionate), SPDB (N-succinimidyl-3-(2-pyridyldithio)butyrate) 및 SMPT(N-succinimidyl-oxycarbonyl-alpha-methyl-alpha-(2-pyridyl-dithio)toluene), SPDB 및 SMPT을 사용하여 형성될 수 있는 것들을 포함하여, 당업계에 알려져 있다(예컨대, Thorpe et al., 1987, Cancer Res. 47:5924-5931; Wawrzynczak et al., In Immunoconjugates: Antibody Conjugates in Radioimagery and Therapy of Cancer (C. W. Vogel ed., Oxford U. Press, 1987.) 참조. 또한 U.S. 특허 4,880,935 참조).
또 다른 특정 구현 예에서, 링커는 말로네이트 링커(Johnson et al., 1995, Anticancer Res. 15:1387-93), 말레이미도벤조일 링커(Lau et al., 1995, Bioorg-Med-Chem. 3(10):1299-1304), 또는 3'-N-아미드 유사체(Lau et al., 1995, Bioorg-Med-Chem. 3(10):1305-12)이다.
또 다른 구현 예에서, 링커 유닛은 절단될 수 없고 약물은 항체 분해에 의해 방출된다(전체적으로 그리고 모든 목적을 위해 본원에 참조로서 병합되는 미국 특허 공보 2005/0238649 참조).
일반적으로, 링커는 세포 외 환경에 실질적으로 민감하지 않다. 링커와 관련하여, 본원에서 사용된 "세포 외 환경에 실질적으로 민감하지 않음"은 약 20% 이하, 일반적으로 약 15% 이하, 더 일반적으로 약 10% 이하, 및 심지어 더 일반적으로 약 5% 이하, 약 3% 이하 또는 약 1% 이하의 링커가, 항체 약물 컨쥬게이트의 샘플에서, 항체 약물 컨쥬게이트가 세포 외 환경(예컨대, 혈장 내)에 존재할 때, 절단됨을 의미한다. 링커가 세포 외 환경에 실질적으로 민감하지 않은지 여부는 예를 들어, 항체-약물 컨쥬게이트 화합물을 혈장과 함께 미리 결정된 기간 (예컨대 2, 4, 8, 16 또는 24 시간) 동안 배양한 다음 혈장에 존재하는 유리(free) 약물의 양을 정량화함으로써 결정될 수 있다.
상호 배타적이지 않은 다른 구현 예에서, 링커는 세포 내재화를 촉진한다. 특정 구현 예에서, 링커는 치료제에 컨쥬게이트될 때(즉, 본원에 기재된 항체-약물 컨쥬게이트 화합물의 링커-치료제 모이어티의 환경에서) 세포 내재화를 촉진한다. 또 다른 구현 예에서, 링커는 아우리스타틴 화합물 및 항-191P4D12 항체 또는 이의 항원 결합 단편 둘 다에 컨쥬게이트될 때 세포 내재화를 촉진한다.
본 조성물 및 방법과 함께 사용될 수 있는 다양한 예시적인 링커는 WO 2004-010957, 미국 공개 번호 2006/0074008, 미국 공개 번호 20050238649 및 미국 공개 번호 2006/0024317에 설명된다(각각은 전체가 그리고 모든 목적을 위해 본원에 참고로서 포함된다).
"링커 유닛"(LU)은 항체 약물 컨쥬게이트를 형성하기 위해 약물 유닛 및 항체 유닛을 링크하는데 사용될 수 있는 이작용성 화합물이다. 몇몇 구현 예에서, 링커 유닛은 하기 화학식을 갖는다:
-Aa-Ww-Yy-
여기서: -A-는 스트레처 유닛이고,
a는 0 또는 1이고,
각 -W-는 독립적으로 아미노산 유닛이고,
w는 0에서 12까지의 정수이고,
-Y-는 자기-희생적 스페이서 유닛이고, 및
y는 0, 1 또는 2이다.
몇몇 구현 예에서, a는 0 또는 1이고, w는 0 또는 1이고, y는 0, 1 또는 2이다. 몇몇 구현 예에서, a는 0 또는 1이고, w는 0 또는 1이고, y는 0 또는 1이다. 몇몇 구현 예에서, w가 1 내지 12일 때, y는 1 또는 2이다. 몇몇 구현 예에서, w는 2 내지 12이고 y는 1 또는 2이다. 몇몇 구현 예에서, a는 1이고 w 및 y는 0이다.
5.3.3.1 스트레처 유닛
스트레처 유닛(A)은, 존재하는 경우, 항체 유닛을 아미노산 유닛(-W-)(존재하는 경우), 스페이서 유닛(-Y-)(존재하는 경우); 또는 약물 유닛(-D)에 연결할 수 있다. 항-191P4D12 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예 : Ha22-2(2,4)6.1)에 자연적으로 또는 화학적 조작을 통해 존재할 수 있는 유용한 작용기는 설프히드릴, 아미노, 하이드록실, 탄수화물의 아노머하이드록실 그룹 및 카복실을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 적합한 작용기는 설프히드릴 및 아미노이다. 하나의 예에서, 설프히드릴 그룹은 항-191P4D12 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 분자 내 이황화 결합의 감소에 의해 생성될 수 있다. 다른 구현 예에서, 설프히드릴 그룹은 항-191P4D12 항체 또는 항원 결합 단편의 라이신 모이어티의 아미노기 및 2-이미노티올란(트라우트 시약) 또는 다른 설프히드릴 생성 시약과의 반응에 의해 생성될 수 있다. 특정 구현 예에서, 항-191P4D12 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 재조합 항체이고 하나 이상의 라이신을 운반하도록 엔지니어링된다. 특정 다른 구현 예에서, 재조합 항-191P4D12 항체는 추가 설프히드릴 그룹, 예를 들어 추가 시스테인을 운반하도록 엔지니어링된다.
하나의 구현 예에서, 스트레처 유닛은 항체 유닛의 황 원자와의 결합을 형성한다. 황 원자는 항체의 설프히드릴 그룹으로부터 유도될 수 있다. 이 구현 예의 대표적인 스트레처 유닛은 아래의 화학식 IIIa 및 IIIb의 대괄호 안에 묘사되고, 여기서 L-, -W-, -Y-, -D, w 및 y는 위에서 정의된 바와 같고, R17은 -C1-C10 알킬렌-, -C1-C10 알케닐렌-, -C1-C10 알키닐렌-, 카르보시클로-, -O-(C1-C8 알킬렌)-O-(C1-C8 알케닐렌)-, -O-(C1-C8 알키닐렌)-, -아릴렌-, -C1-C10 알킬렌-아릴렌-, -C2-C10 알케닐렌-아릴렌, -C2-C10 알키닐렌-아릴렌, -아릴렌-C1-C10 알킬렌-, -아릴렌-C2-C10 알케닐렌-, -아릴렌-C2-C10 알키닐렌-, -C1-C10 알킬렌-(카르보시클로)-, -C2-C10 알케닐렌-(카르보시클로)-, -C2-C10 알키닐렌-(카르보시클로)-, -(카르보시클로)-C1-C10 알킬렌-, -(카르보시클로)-C2-C10 알케닐렌-, -(카르보시클로)-C2-C10 알키닐렌, -헤테로시클로-, -C1-C10 알킬렌-(헤테로시클로)-, -C2-C10 알케닐렌-(헤테로시클로)-, -C2-C10 알키닐렌-(헤테로시클로)-, -(헤테로시클로)-C1-C10 알킬렌-, -(헤테로시클로)-C2-C10 알케닐렌-, -(헤테로시클로)-C1-C10 알키닐렌-, -(CH2CH2O)r-, 또는 -(CH2CH2O)r-CH2-로부터 선택되며, r은 1-10 범위의 정수이며, 여기서 상기 알킬, 알케닐, 알키닐, 알킬렌, 알케닐렌, 알키니클렌, 아릴, 카르보사이클, 카르보시클로, 헤테로시클로, 및 아릴렌 라디칼은, 단독으로 또는 다른 그룹의 일부로서, 선택적으로 치환된다. 몇몇 구현 예에서, 상기 알킬, 알케닐, 알키닐, 알킬렌, 알케닐렌, 알키니클렌, 아릴, 카르보사이클, 카르보시클로, 헤테로시클로, 및 아릴렌 라디칼은, 단독으로 또는 다른 그룹의 일부로서, 치환되지 않는다.
몇몇 구현 예에서, R17은 -C1-C10 알킬렌-, -카르보시클로-, -O-(C1-C8 알킬렌)-, -아릴렌-, -C1-C10 알킬렌-아릴렌-, -아릴렌-C1-C10 알킬렌-, -C1-C10 알킬렌-(카르보시클로)-, -(카르보시클로)-C1-C10 알킬렌-, -C3-C8 헤테로시클로-, -C1-C10 알킬렌-(헤테로시클로)-, -(헤테로시클로)-C1-C10 알킬렌-, -(CH2CH2O)r-, 및 -(CH2CH2O)r-CH2-;로부터 선택되고, r은 1-10의 범위의 정수이고, 여기서 상기 알킬렌 그룹은 치환되지 않으며, 상기 그룹의 나머지는 선택적으로 치환된다.
모든 예시적인 구현 예로부터, 심지어 명시적으로 표시되지 않은 경우에도, 1 내지 20개의 약물 유닛은 항체 유닛과 링크될 수 있음이 이해되어야 한다(p= 1-20).
Figure pct00017
Figure pct00018
예시적인 스트레처 유닛은 R17이 -(CH2)5-인 화학식 IIIa의 그것이다:
Figure pct00019
또 다른 예시적인 스트레처 유닛은 R17이 -(CH2CH2O)r-CH2-이고 r이 2인 화학식 IIIa의 그것이다:
Figure pct00020
예시적인 스트레처 유닛은 R17이 아릴렌- 또는 아릴렌-C1-C10 알킬렌-인 화학식 IIIa의 그것이다. 몇몇 구현 예에서, 상기 아릴 그룹은 치환되지 않은 페닐 그룹이다.
또 다른 예시적인 스트레처 유닛은 R17이 -(CH2)5-인 화학식 IIIb의 그것이다:
Figure pct00021
특정 구현 예에서, 스트레처 유닛은 항체 유닛의 황 원자와 스트레처 유닛의 황 원자 사이의 이황화 결합을 통해 항체 유닛에 링크된다. 상기 구현 예의 대표적인 스트레처 유닛은 화학식 IV의 대괄호 내에 도시되며, 여기서 R17, L-, -W-, -Y-, -D, w 및 y는 상기 정의된 바와 같다.
Figure pct00022
본 출원 전반에 걸쳐, 아래 화학식의 S 모이어티가 문맥에 달리 명시되지 않는 한. 항체 단위의 황 원자를 지칭함을 유의해야 한다.
Figure pct00023
본원의 황 링크된 ADC의 특정 구조적 설명에서 항체는 "L"로 표시된다. 이는 또한 "Ab-S"로 표시될 수도 있다. "S"의 포함은 단지 황-링크 특징을 나타내며, 특정 황 원자가 다중 링커-약물 모이어티를 보유한다는 것을 의미하지는 않는다. "Ab-S" 설명을 사용하는 구조의 좌측 괄호는 또한 Ab와 S 사이의 황 원자의 좌측에 배치될 수 있으며, 이는 본원 전체에 걸쳐 설명된 본 발명의 ADC에 대한 동등한 설명이 될 것이다.
또 다른 구현 예에서, 스트레처는 항체 유닛의 1차 또는 2차 아미노기와 결합을 형성할 수 있는 반응성 부위를 함유한다. 이러한 반응성 부위의 예는 숙신이미드 에스테르, 4 니트로페닐 에스테르, 펜타 플루오로페닐 에스테르, 테트라 플루오로페닐 에스테르, 무수물, 산 클로라이드, 설포닐 클로라이드, 이소시아네이트 및 이소티오시아네이트와 같은 활성화된 에스테르를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 상기 구현 예의 대표적인 스트레처 유닛은 화학식 Va 및 Vb의 대괄호 내에 도시되며, 여기서 -R17-, L-, -W-, -Y-, -D, w 및 y는 상기 정의된 바와 같다
Figure pct00024
Figure pct00025
몇몇 구현 예에서, 상기 스트레처는 항체 유닛에 존재할 수 있는 변형된 탄수화물의 (-CHO) 그룹과 반응성인 반응 부위를 함유한다. 예를 들어, Kaneko et al., 1991, Bioconjugate Chem. 2:133-41에 기재된 바와 같이, 탄수화물은 과요오드산 나트륨과 같은 시약을 이용하여 마일드하게 산화될 수 있고, 산화된 탄수화물의 생성된 (-CHO) 유닛은 하이드라지드, 옥심, 1차 또는 2차 아민, 하이드라진, 티오세미카르바존, 하이드라진 카르복실레이트, 및 아릴하이드라지드와 같은 기능을 함유하는 스트레처와 축합될 수 있다.
Figure pct00026
Figure pct00027
Figure pct00028
5.3.3.2 아미노산 유닛
아미노산 유닛(-W-)은, 존재하는 경우, 스트레처 유닛을 스페이서 유닛에, 스페이서 유닛이 존재하는 경우, 링크하고, 스페이서 유닛이 존재하지 않는 경우, 스트레처 유닛을 약물 유닛에 링크하며, 스트레처 유닛 및 스페이서 유닛이 존재하지 않는 경우, 항체 유닛을 약물 유닛에 링크한다.
Ww-는, 예를 들어, 모노펩티드, 디펩티드, 트리펩티드, 테트라펩티드, 펜타펩티드, 헥사펩티드, 펩타펩티드, 옥타펩티드, 노나펩티드, 데카펩티드, 언데카펩티드, 또는 도데카펩티드 유닛일 수 있다. 각 -W- 유닛은 독립적으로 대괄호 안의 아래에 표시된 화학식을 갖고, w는 0 내지 12 범위의 정수이다.
Figure pct00029
여기서 R19는 수소, 메틸, 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, 벤질, p-하이드록시벤질, -CH2OH, -CH(OH)CH3, -CH2CH2SCH3, -CH2CONH2, -CH2COOH, -CH2CH2CONH2, -CH2CH2COOH, -(CH2)3NHC(=NH)NH2, -(CH2)3NH2, -(CH2)3NHCOCH3, -(CH2)3NHCHO, -(CH2)4NHC(=NH)NH2, -(CH2)4NH2, -(CH2)4NHCOCH3, -(CH2)4NHCHO, -(CH2)3NHCONH2, -(CH2)4NHCONH2, -CH2CH2CH(OH)CH2NH2, 2-피리딜메틸-, 3-피리딜메틸-, 4-피리딜메틸-, 페닐, 시클로헥실이다.
Figure pct00030
몇몇 구현 예에서, 상기 아미노산 유닛은 암 또는 종양 관련 프로테아제를 포함하는 하나 이상의 효소에 의해 효소적으로 절단되어 약물 유닛(-D)를 해방시킬 수 있고, 이는 하나의 구현 예에서 방출 시 생체 내에서 양성자화되어 약물(D)을 제공한다.
특정 구현 예에서, 아미노산 유닛은 천연 아미노산을 포함한다. 다른 구현 예에서, 아미노산 유닛은 비-천연 아미노산을 포함한다. 예시적인 Ww 유닛은 아래 화학식 VII-IX로 표시된다:
Figure pct00031
여기서 R20 및 R21은 다음과 같다:
Figure pct00032
Figure pct00033
여기서 R20, R21 및 R22은 다음과 같다:
Figure pct00034
Figure pct00035
여기서 R20, R21, R22 및 R23은 다음과 같다:
Figure pct00036
예시적인 아미노산 유닛은 위의 화학식 VII의 유닛을 포함하나, 이에 제한되지 않으며, 여기서 R20은 벤질이고 R21은 -(CH2)4NH2; R20은 이소프로필, R21은 -(CH2)4NH2; 또는 R20은 이소프로필 R21은 -(CH2)3NHCONH2이다.
다른 예시적인 아미노산 유닛은 화학식 VIII의 유닛이고, 여기서 R20은 벤질, R21은 벤질, 및 R22는 -(CH2)4NH2이다.
유용한 -Ww- 유닛은 예를 들어, 종양 관련 프로테아제와 같은 특정 효소에 의한 효소 절단에 대한 선택성에서 디자인되고 최적화될 수 있다. 하나의 구현 예에서, -Ww- 유닛은 절단이 카텝신 B, C, 및 D 또는 플라스민 프로테아제에 의해 촉매되는 것이다.
하나의 구현 예에서, -Ww-는 디펩티드, 트리펩티드, 테트라펩티드, 또는 펜타펩티드이다. R19, R20, R21, R22 또는 R23이 수소가 아닌 경우, R19, R20, R21, R22 또는 R23이 부착된 탄소 원자는 키랄이다.
R19, R20, R21, R22 또는 R23이 부착된 각 탄소 원자는 독립적으로 (S) 또는 (R) 배열이다.
하나의 특정 구현 예에서, 아미노산 유닛은 발린-시트룰린(vc 또는 Val-Cit)이다. 도 다른 특정 구현 예에서, 아미노산 유닛은 페닐알라닌-라이신(즉, fk)이다. 또 다른 특정 구현 예에서, 아미노산 유닛은 N-메틸발린-시트룰린이다. 또 다른 특정 구현 예에서, 아미노산 유닛은 5-아미노발레르산, 호모 페닐알라닌 라이신, 테트라이소퀴놀린카르복실레이트 라이신, 시클로헥실알라닌 라이신, 이소네페코트산 라이신, 베타-알라닌 라이신, 글리신 세린 발린 글루타민, 및 이소네페코트산이다.
5.3.3.3 스페이서 유닛
스페이서 유닛(-Y-)은, 존재하는 경우, 아미노산 유닛이 존재하는 경우, 아미노산 유닛을 약물 유닛에 링크한다. 대안적으로, 스페이서 유닛은 스트레처 유닛을 약물 유닛에, 아미노산 유닛이 없는 경우, 링크한다. 상기 스페이서 유닛은 또한 약물 유닛을 항체 유닛에, 아미노산 유닛 및 스트레처 유닛 모두가 없는 경우, 링크한다.
스페이서 유닛은 다음의 두 가지 일반적인 유형을 갖는다: 비 자기-희생적 또는 자기-희생적. 비 자기-희생적 스페이서 유닛은 스페이서 유닛의 일부 또는 전부가 항체 약물 컨쥬게이트로부터 아미노산 유닛의 절단 후, 특히 효소 절단 후, 약물 유닛에 결합되어 유지되는 것이다. 비 자기-희생적 스페이서 유닛의 예는 (글리신-글리신) 스페이서 유닛 및 글리신 스페이서 유닛을 포함하나, 이에 제한되지 않는다(모두 아래 도식 1에 나타남). 글리신-글리신 스페이서 유닛 또는 글리신 스페이서 유닛을 함유하는 컨쥬게이트가 효소(예컨대, 종양-세포 관련-프로테아제, 암-세포-관련 프로테아제, 또는 림프구-관련-프로테아제)를 통해 효소 절단을 겪는 경우, 글리신-글리신-약물 유닛 또는 글리신-약물 유닛은 L-Aa-Ww-로부터 절단된다. 하나의 구현 예에서, 독립적인 가수분해 반응은 표적 세포 내에서 발생하고, 글리신-약물 유닛 결합을 절단하고, 약물을 해방시킨다.
Figure pct00037
몇몇 구현 예에서, 비 자기-희생적 스페이서 유닛(-Y-)은 -Gly-이다. 몇몇 구현 예에서, 비 자기-희생적 스페이서 유닛(-Y-)은 -Gly-Gly-이다.
하나의 구현 예에서, 스페이서 유닛이 없다(-Yy- 여기서 y=0).
대안적으로, 자기-희생적 스페이서 유닛을 함유하는 항체 약물 컨쥬게이트는 -D를 방출할 수 있다. 본원에서 사용된, 용어 "자기-희생적 스페이서(self-immolative spacer)"는 2개의 이격된 화학적 모이어티를 함께 안정한 트리파르타이트 분자로 공유 링크할 수 있는 이작용성 화학적 모이어티를 지칭한다. 이는 제1 모이어티에 대한 결합이 절단되면, 제2 화학적 모이어티로부터 자발적으로 분리될 것이다.
몇몇 구현 예에서, -Yy-는 페닐렌 부분이 Qm으로 치환된 p-아미노벤질 알코올(PAB) 단위(도식 2 및 3 참조)이고, 여기서 Q는 -C1-C8 알킬, -C1-C8 알케닐, -C1-C8 알키닐, -O-(C1-C8 알킬), -O-(C1-C8 알케닐), -O-(C1-C8 알키닐), -할로겐, -니트로 또는 -시아노이고; m은 0-4 범위의 정수이다. 알킬, 알케닐 및 알키닐 그룹은, 단독으로 또는 다른 그룹의 일부로서, 선택적으로 치환될 수 있다.
몇몇 구현 예에서, -Y-는 PAB 그룹의 아미노 질소 원자를 통해 -Ww-에 연결되고, 카르보네이트, 카바메이트 또는 에테르 그룹을 통해 -D에 직접적으로 연결된 PAB 그룹이다. 특정 이론이나 메커니즘에 구속되지 않고, 도식 2는 Toki et al., 2002, J. Org. Chem. 67 : 1866-1872에 기재된 바와 같은, 카르바메이트 또는 카르보네이트 그룹을 통해 -D에 직접적으로 부착된 PAB 그룹의 약물 방출의 가능한 메커니즘을 나타낸다.
Figure pct00038
도식 2에서, Q는 -C1-C8 알킬, -C1-C8 알케닐, -C1-C8 알키닐, -O-(C1-C8 알킬), -O-(C1-C8 알케닐), -O-(C1-C8 알키닐), -할로겐, -니트로 또는 -시아노이고; m은 0-4 범위의 정수이고; 및 p는 1 내지 약 20 범위이다. 알킬, 알케닐, 및 알키닐 그룹은, 단독으로 또는 다른 그룹의 일부로서, 선택적으로 치환될 수 있다.
특정 이론이나 메커니즘에 구속되지 않고, 도식 3은 에테르 또는 아민 링크를 통해 -D에 직접적으로 부착된 PAB 그룹의 약물 방출의 가능한 메커니즘을 나타내고, 여기서 D는 약물 유닛의 일부인 산소 또는 질소 그룹을 포함한다.
Figure pct00039
도식 3에서, Q는 -C1-C8 알킬, -C1-C8 알케닐, -C1-C8 알키닐, -O-(C1-C8 알킬), -O-(C1-C8 알케닐), -O-(C1-C8 알키닐), -할로겐, -니트로 또는 -시아노이고; m은 0-4 범위의 정수이고; 및 p는 1 내지 약 20 범위이다. 알킬, 알케닐, 및 알키닐 그룹은, 단독으로 또는 다른 그룹의 일부로서, 선택적으로 치환될 수 있다.
자기-희생적 스페이서의 다른 예는 2-아미노이미다졸-5-메탄올 유도체(Hay et al., 1999, Bioorg. Med. Chem. Lett. 9:2237) 및 오르토 또는 파라-아미노벤질아세탈과 같은 PAB 그룹과 전자적으로 유사한 방향족 화합물을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 치환 및 비치환된 4-아미노부티르산 아미드(Rodrigues et al., 1995, Chemistry Biology 2:223), 적절하게 치환된 바이시클로[2.2.1] 및 바이시클로[2.2.2] 링 시스템(Storm et al., 1972, J. Amer. Chem. Soc. 94:5815) 및 2-아미노페닐프로피온산 아미드(Amsberry et al., 1990, J. Org. Chem. 55:5867)와 같은 아미드 결합 가수 분해 시 고리화되는 스페이서가 사용될 수 있다. 글리신의 α-위치에서 치환된 아민-함유 약물의 제거(Kingsbury et al., 1984, J. Med . Chem . 27:1447)는 또한 자기-희생적 스페이서의 예이다.
하나의 구현 예에서, 스페이서 유닛은 도식 4에 도시된 분지화된 비스(히드록시메틸)-스티렌(BHMS) 유닛이고, 이는 여러 약물을 통합하고 방출하는데 사용될 수 있다.
Figure pct00040
도식 4에서, Q는 -C1-C8 알킬, -C1-C8 알케닐, -C1-C8 알키닐, -O-(C1-C8 알킬), -O-(C1-C8 알케닐), -O-(C1-C8 알키닐), -할로겐, -니트로 또는 -시아노이고; m은 0-4 범위의 정수이고; n은 0 또는 1이고; 및 p는 1 내지 약 20 범위이다. 알킬, 알케닐, 및 알키닐 그룹은, 단독으로 또는 다른 그룹의 일부로서, 선택적으로 치환될 수 있다.
몇몇 구현 예에서, -D 유닛은 동일하다. 또 다른 구현 예에서, -D 모이어티는 상이하다.
하나의 관점에서, 스페이서 유닛(-Yy-)은 화학식 X-XII로 나타난다:
Figure pct00041
여기서 Q는 -C1-C8 알킬, -C1-C8 알케닐, -C1-C8 알키닐, -O-(C1-C8 알킬), -O-(C1-C8 알케닐), -O-(C1-C8 알키닐), -할로겐, -니트로 또는 -시아노이고; m은 0-4 범위의 정수이다. 알킬, 알케닐, 및 알키닐 그룹은, 단독으로 또는 다른 그룹의 일부로서, 선택적으로 치환될 수 있다.
Figure pct00042
및
Figure pct00043
항체-약물 컨쥬게이트 화합물을 포함하는 화학식 I 및 II의 구현 예는 다음을 포함할 수 있다:
Figure pct00044
여기서 w 및 y는 각각 0, 1, 또는 2 이고, 및
Figure pct00045
여기서 w 및 y는 각각 0이고,
Figure pct00046
Figure pct00047
및
Figure pct00048
5.3.3.4 약물 로딩
약물 로딩은 p로 표시되고, 분자 내 항체당 평균 약물 유닛 수이다. 약물 로딩은 항체당 1 내지 20개 약물 유닛(D)의 범위일 수 있다. 본원에 제공된 ADCs는 예컨대 1 내지 20개의 범위의 약물 유닛으로 컨쥬게이트된 항체 또는 항원 결합 단편의 집합체를 포함한다. 컨쥬게이션 반응으로부터의 ADC의 제조에서 항체당 평균 약물 유닛의 수는 질량 분광법 및 ELISA 분석과 같은 종래의 수단에 의해 특징지어질 수 있다. p에 대한 ADC의 정량적 분포는 또한 결정될 수 있다. 몇몇 경우에, p가 다른 약물 로딩을 갖는 ADC의 특정 값인 동종 ADC의 분리, 정제, 및 특성화는 전기 영동과 같은 수단으로 달성될 수 있다.
특정 구현 예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 로딩은 1 내지 20 범위이다. 특정 구현 예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 로딩은 1 내지 18 범위이다. 특정 구현 예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 로딩은 1 내지 15 범위이다. 특정 구현 예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 로딩은 1 내지 12 범위이다. 특정 구현 예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 로딩은 1 내지 10 범위이다. 특정 구현 예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 로딩은 1 내지 9 범위이다. 특정 구현 예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 로딩은 1 내지 8 범위이다. 특정 구현 예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 로딩은 1 내지 7 범위이다. 특정 구현 예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 로딩은 1 내지 6 범위이다. 특정 구현 예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 로딩은 1 내지 5 범위이다. 특정 구현 예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 로딩은 1 내지 4 범위이다. 특정 구현 예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 로딩은 1 내지 3 범위이다. 특정 구현 예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 로딩은 2 내지 12 범위이다. 특정 구현 예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 로딩은 2 내지 10 범위이다. 특정 구현 예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 로딩은 2 내지 9 범위이다. 특정 구현 예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 로딩은 2 내지 8 범위이다. 특정 구현 예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 로딩은 2 내지 7 범위이다. 특정 구현 예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 로딩은 2 내지 6 범위이다. 특정 구현 예에서, 본원에 제공된 ADC에 대한 약물 로딩은 2 내지 5 범위이다.
특정 구현 예에서, 본원에 제공되는 ADC에 대한 약물 로딩은 1 내지 약 8; 약 2 내지 약 6; 약 3 내지 약 5; 약 3 내지 약 4; 약 3.1 내지 약 3.9; 약 3.2 내지 약 3.8; 약 3.2 내지 약 3.7; 약 3.2 내지 약 3.6; 약 3.3 내지 약 3.8; 또는 약 3.3에서 약 3.7의 범위이다.
특정 구현 예에서, 약물 유닛의 이론적 최대치 미만이 컨쥬게이션 반응 동안 항체에 컨쥬게이트 된다. 항체는 예를 들어 약물-링커 중간체 또는 링커 시약과 반응하지 않는 라이신 잔기를 포함할 수 있다. 일반적으로 항체는 약물 유닛에 링크될 수 있는 많은 자유 및 반응성 시스테인 티올 그룹을 함유하지 않고; 실제로 항체의 대부분의 시스테인 티올 잔기는 이황화 브릿지로 존재한다. 특정 구현 예에서, 항체는 반응성 시스테인 티올 그룹을 생성하기 위해 부분적 또는 전체 환원 조건 하에서 디티오트레이톨(DTT) 또는 트리카르보닐에틸포스핀(TCEP)과 같은 환원제로 환원될 수 있다. 특정 구현 예에서, 항체는 라이신 또는 시스테인과 같은 반응성 친핵성 그룹을 나타내기 위해 변성 조건에 도입된다. 몇몇 구현 예에서, 링커 유닛 또는 약물 유닛은 항체 유닛 상의 라이신 잔기를 통해 컨쥬게이트 된다. 몇몇 구현 예에서, 링커 유닛 또는 약물 유닛은 항체 유닛 상의 시스테인 잔기를 통해 컨쥬게이트 된다.
몇몇 구현 예에서, 링커 유닛 또는 약물 유닛에 부착하는 아미노산은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄에 있다. 몇몇 구현 예에서, 링커 유닛 또는 약물 유닛에 부착하는 아미노산은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 경쇄에 있다. 몇몇 구현 예에서, 링커 유닛 또는 약물 유닛에 부착하는 아미노산은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 힌지 영역에 있다. 몇몇 구현 예에서, 링커 유닛 또는 약물 유닛에 부착하는 아미노산은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 Fc 영역에 있다. 다른 구현 예에서, 링커 유닛 또는 약물 유닛에 부착하는 아미노산은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 불변 영역에 있다(예컨대 중쇄의 CH1, CH2, 또는 CH3, 또는 경쇄의 CH1). 또 다른 구현 예에서, 링커 유닛 또는 약물 유닛에 부착하는 아미노산은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VH 프레임워크 영역에 있다. 또 다른 구현 예에서, 링커 유닛 또는 약물 유닛에 부착하는 아미노산은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 VL 프레임워크 영역에 있다.
ADC의 로딩(약물/항체 비)은, 예컨대 (i) 항체에 대한 약물-링커 중간체 또는 링커 시약의 과량의 몰을 제한하여, (ii) 컨쥬게이션 반응 시간 또는 온도를 제한하여, (iii) 시스테인 티올 변형을 위한 환원 조건을 부분적으로 또는 제한하여, (iv) 시스테인 잔기의 수 및 위치가 링커-약물 부착의 수 및/도는 위치의 제어를 위해 변형되도록 항체의 아미노산 서열을 재조합 기술로 엔지니어링하여(본원 및 WO 2006/034488(전체가 참조로서 본원에 통합됨)에 개시된 바와 같이 제조된 thioMab 또는 thioFab와 같이)서와 같이 상이한 방식들로 제어될 수 있다.
하나 이상의 친핵성 그룹이 약물-링커 중간체 또는 링커 시약에 이어 약물 유닛 시약과 반응하는 경우, 생성된 생성물은 항체 유닛에 부착된 하나 이상의 약물 유닛의 분포를 갖는 ADC 화합물의 혼합물임이 이해되어야 한다. 항체당 평균 약물 수는 항체에 특이적이고 약물에 특이적인 이중 ELISA 항체 분석에 의해 혼합물로부터 계산될 수 있다. 개별 ADC 분자는 질량 분광법에 의해 혼합물에서 확인되고 HPLC로 분리될 수 있다(예컨대, Hamblett, K.J., et al. "Effect of drug loading on the pharmacology, pharmacokinetics, and toxicity of an anti-CD30 antibody-drug conjugate," Abstract No. 624, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004; Alley, S.C., et al. "Controlling the location of drug attachment in antibody-drug conjugates," Abstract No. 627, American Association for Cancer Research, 2004 Annual Meeting, March 27-31, 2004, Proceedings of the AACR, Volume 45, March 2004 참고). 특정 구현 예에서, 단일 로딩 값을 갖는 동종 ADC는 전기 영동 또는 크로마토그래피에 의해 컨쥬게이션 혼합물로부터 분리될 수 있다.
5.3.3 항체 약물 컨쥬게이트의 제조
본원에 제공되는 항체 약물 컨쥬게이트의 생성은 당업자에게 공지의 임의의 기술에 의해 달성될 수 있다. 간단히 말해, 항체 약물 컨쥬게이트는 항체 유닛으로서 항-191P4D12 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 약물, 및 선택적으로 상기 약물 및 결합제를 연결하는 링커를 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 항체는 상기 기재된 Ha22-2(2,4)6.1로 지정된 항체의 CDR 영역을 포함하는 항-191P4D12 항체이다. 특정 구현 예에서, 항체는 상기 기재된 Ha22-2(2,4)6.1로 지정된 항체의 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-191P4D12 항체이다. 특정 구현 예에서, 항체는 상기 기재된 Ha22-2(2,4)6.1로 지정된 항체의 중쇄 및 경쇄를 포함하는 항-191P4D12 항체이다.
다양한 상이한 반응이 결합제에 대한 약물 및/또는 링커의 공유 부착을 위해 이용 가능하다. 이것은 종종 라이신의 아민 그룹, 글루탐산 및 아스파르트 산의 유리 카르복실산 그룹, 시스테인의 설프히드릴 그룹 및 방향족 아미노산의 다양한 모이어티를 포함하는 예컨대 항체 분자와 같은, 결합제의 아미노산 잔기의 반응에 의해 달성된다. 가장 일반적으로 사용되는 비-특이적 공유 부착 방법 중 하나는 화합물의 카르복시(또는 아미노) 그룹을 항체의 아미노(또는 카르복시) 그룹에 링크하는 카르보디이미드 반응이다. 추가로, 디알데히드 또는 이미도에스테르와 같은 이작용성 제제는 화합물의 아미노 그룹을 항체 분자의 아미노 그룹에 링크하는데 사용되어 왔다. 또한, 결합제에 약물의 부착에도 사용 가능한 것은 Schiff 염기 반응이다. 상기 방법은 글리콜 또는 히드록시기를 포함하는 약물의 페리오데이트 산화를 포함하여, 알데히드를 형성한 다음 결합제와 반응한다. 부착은 결합제의 아미노기와의 Schiff 염기의 형성을 통해 발생한다. 이소티오시아네이트는 약물을 결합제에 공유 부착하기 위한 커플링제로도 또한 사용될 수 있다. 다른 기술은 당업자에게 알려져 있고 본 발명의 범위 내에 있다.
특정 구현 예에서, 링커의 전구체인 중간체는 적절한 조건 하에서 약물과 반응된다. 특정 구현 예에서, 반응성 그룹은 약물 및/또는 중간체에 사용된다. 약물 및 중간체 사이의 반응의 생성물 또는 유도체화된 약물은 적절한 조건 하에서 항-191P4D12 항체와 후속적으로 반응된다.
항체 약물 컨쥬게이트의 특정 유닛 각각은 본원에서 더 자세히 설명된다. 예시적인 링커 유닛, 스트레처 유닛, 아미노산 유닛, 자기-희생적 스페이서 유닛, 및 약물 유닛의 합성 및 구조는 또한 U.S. 특허 출원 공보 제2003-0083263, 2005-0238649, 및 2005-0009751에 기술되고, 이들 각각은 전체가, 모든 목적을 위해 참조로서 본원에 통합된다.
본원에 제공되는 항체 약물 컨쥬게이트를 생성하기 위한 예시적인 방법은 아래에 간략하게 설명된다.
Ha22-2(2,4)6.1 항체는 본원에 기재된 vc(Val-Cit) 링커를 사용하여 아우리스타틴 유도체 MMAE에 컨쥬게이트되어 다음 프로토콜을 사용하여 항체 약물 컨쥬게이트(ADC)(AGS-22M6E로 지정됨)를 생성한다. vc(Val-Cit) 링커와 MMAE(Seattle Genetics, Inc., Seattle, WA)의 컨쥬게이션은 세포 독성 vcMMAE를 생성하기 위해 아래 도식 5에 명시된 일반적인 방법을 사용하여 완료되었다(미국 특허 제7,659,241호 참조).
도식 5 vcMMAE의 합성을 위한 일반적인 방법
Figure pct00049
여기서: AA1= 아미노산 1
AA2 = 아미노산 2
AA5 = 아미노산 5
DIL = 돌라이소류인
DAP = 돌라프로인
링커 = Val-Cit(vc)
다음으로, 항체 약물 컨쥬게이트 AGS-22M6E는 다음의 프로토콜을 이용하여 만들어졌다.
요약하면, pH 5.0, 1% 소르비톨, 3% L-아르기닌의 10mM 아세테이트 내 Ha22-2(2,4)6.1 항체의 15 mg/mL 용액은 20 부피%의 pH 8.4의 0.1 M TrisCl, 25mM EDTA 및 750 mM NaCl과 함께 첨가되어, 용액의 pH를 7.5, 5mM EDTA 및 150mM 염화나트륨으로 조정한다. 항체는 2.3 몰 당량의 TCEP(MAb의 몰에 비례함)를 추가하여 부분적으로 환원된 다음 37 ℃에서 2 시간 동안 교반된다. 부분적으로 환원된 항체 용액은 5℃로 냉각되고, 4.4 몰 당량의 vcMMAE(항체 몰에 비례)는 DMSO의 6%(v/v) 용액으로 첨가된다. 상기 혼합물은 5℃에서 60분 동안 교반된 다음, vcMMAE에 대해 1몰 당량의 N-아세틸시스테인을 첨가한 후 15분 동안 추가로 교반된다. 과잉 급랭된 vcMMAE 및 기타 반응 성분은 10 부피의 20 mM 히스티딘(pH 6.0)으로 항체 약물 컨쥬게이트(ADC)의 한외 여과(ultrafiltration) / 정용 여과(diafiltration)에 의해 제거된다.
생성된 항체 약물 컨쥬게이트 AGS-22M6E는 다음의 화학식을 갖는다:
Figure pct00050
여기서 L은 Ha22-2(2,4)6.1이고 p는 1 내지 20이다.
5.4 약제학적 조성물을 사용하는 방법
하나의 관점에서, 본원에 제공된 것은 대상체에게 본원에 제공된 유효량의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 대상체에서 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법이다. 몇몇 구현 예에서, 대상체는 인간 대상체이다.
몇몇 구현 예에서, 질병 또는 장애는 암이다. 몇몇 구현 예에서, 암은 191P4D12를 발현하는 종양 세포를 갖는다. 몇몇 구현 예에서, 암은 고형 종양이다. 몇몇 구현 예에서, 암은 대장암, 췌장암, 난소암, 폐암, 방광암, 유방암, 식도암, 두부암 또는 경부암이다. 몇몇 구현 예에서, 암은 대장암이다. 몇몇 구현 예에서, 암은 췌장암이다. 몇몇 구현 예에서, 암은 난소암이다. 몇몇 구현 예에서, 암은 폐암이다. 몇몇 구현 예에서, 폐암은 비소 세포 폐암이다. 몇몇 구현 예에서, 암은 방광암이다. 몇몇 구현 예에서, 암은 진행성 방광암이다. 몇몇 구현 예에서, 암은 전이성 방광암이다. 몇몇 구현 예에서, 암은 요로상피암이다. 몇몇 구현 예에서, 암은 진행성 요로상피암이다. 몇몇 구현 예에서, 암은 유방암이다. 몇몇 구현 예에서, 암은 식도암이다. 몇몇 구현 예에서, 암은 두부암이다. 몇몇 구현 예에서, 암은 경부암이다. 몇몇 구현 예에서, 암은 진행성 또는 전이성 암이다.
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물을 사용한 치료는 1 회 이상의 화학요법을 받은 대상체에 대해 지시된다. 대안적으로, 본원에 제공된 약제학적 조성물은 화학 요법 치료를 받지 않은 대상체를 위한 화학 요법 또는 방사선 요법과 조합된다. 추가로, 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물의 사용은 특히 화학 요법제의 독성을 매우 잘 견디지 못하는 대상체에 대해 감소된 용량의 수반되는 화학 요법의 사용을 가능하게 할 수 있다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 개시된 약제학적 조성물은 면역 체크포인트 억제제로 치료하는 동안 또는 치료 후에 질병 진행 또는 재발을 보인 전이성 요로 상피암 환자에게 투여된다.
본원에 제공된 약제학적 조성물을 투여하는 방법은 비경구 투여(예를 들어, 피내, 근육 내, 복강 내, 정맥 내 및 피하), 경막 외 및 점막(예를 들어, 비강 내 및 경구 경로)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 특정 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물은 비강 내, 근육 내, 정맥 내 또는 피하로 투여된다. 본원에 제공된 약제학적 조성물은 임의의 편리한 경로, 예를 들어 주입 또는 볼루스 주사, 상피 또는 점막 내벽(예를 들어, 구강 점막, 비강 내 점막, 직장 및 장 점막 등)을 통한 흡수에 의해 투여될 수 있으며 다른 생물학적 활성제와 함께 투여될 수 있다. 투여는 전체적이거나 국부적일 수 있다. 또한, 폐 투여가 예컨대 흡입기 또는 분무기의 사용, 및 에어로졸화제를 사용한 제형화에 의해 사용될 수 있다. 예를 들어, U.S. 특허 제6,019,968, 5,985,320, 5,985,309, 5,934,272, 5,874,064, 5,855,913, 5,290,540, 및 4,880,078; 및 PCT 공보 WO 92/19244, WO 97/32572, WO 97/44013, WO 98/31346, 및 WO 99/66903을 참조하라, 이들 각각은 전체가 참조로서 본원에 병합된다.
특정 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물을 치료가 필요한 부위에 국부적으로 투여하는 것이 바람직할 수 있다. 이는, 제한되지 않는 예로서 국부 주입, 국소 투여(예컨대 비강 내 스프레이), 주사 또는 임플란트에 의해 달성될 수 있으며, 상기 임플란트는 시알라스틱 막과 같은 막 또는 섬유를 포함하는, 다공성, 비-다공성 또는 젤라틴 물질로 되어 있다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물을 투여할 때, 본원에 제공된 항체 약물 컨쥬게이트가 흡수하지 않는 물질을 사용하도록 주의가 기울여져야 한다.
또 다른 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 소포, 특히 리포좀으로 전달될 수 있다(Langer, 1990, Science 249:1527-1533; Treat et al., in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez-Berestein and Fidler (eds.), Liss, New York, pp. 353- 365 (1989); Lopez-Berestein, ibid., pp. 317-327 참조; 일반적으로 ibid 참조).
또 다른 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 제어된 방출 또는 서방형 시스템으로 전달될 수 있다. 하나의 구현 예에서, 펌프가 사용되어 제어된 또는 서방형 방출을 달성할 수 있다(Langer, supra; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:20; Buchwald et al., 1980, Surgery 88:507; Saudek et al., 1989, N. Engl. J. Med. 321:574 참조). 또 다른 구현 예에서, 중합체 물질이 사용되어 예방 또는 치료제(예컨대, 본원에 제공된항체 약물 컨쥬게이트) 또는 본원에 제공되는 약제학적 조성물의 제어된 또는 서방형 방출을 달성할 수 있다(예컨대, Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), CRC Pres., Boca Raton, Florida (1974); Controlled Drug Bioavailability, Drug Product Design and Performance, Smolen and Ball (eds.), Wiley, New York (1984); Ranger and Peppas, 1983, J., Macromol. Sci. Rev. Macromol. Chem. 23:61 참고; 또한, Levy et al., 1985, Science 228:190; During et al., 1989, Ann. Neurol. 25:351; Howard et al., 1989, J. Neurosurg. 7 1:105; U.S. Patent No. 5,679,377; U.S. Patent No. 5,916,597; U.S. Patent No. 5,912,015; U.S. Patent No. 5,989,463; U.S. Patent No. 5,128,326; PCT Publication No. WO 99/15154; PCT Publication No. WO 99/20253 참고). 서방형 제형에 사용되는 중합체의 예는 다음을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다: 폴리(2-히드록시 에틸 메타크릴레이트), 폴리(메틸 메타크릴레이트), 폴리(아크릴산), 폴리(에틸렌-코-비닐아세테이트), 폴리(메타크릴산), 폴리글리콜라이드(PLG), 폴리 무수물, 폴리(N-비닐 피롤리돈), 폴리(비닐알코올), 폴리아크릴아미드, 폴리(에틸렌글리콜), 폴리 락타이드(PLA), 폴리(락타이드-코-글리콜리드)(PLGA) 및 폴리 오르토 에스테르. 하나의 구현 예에서, 서방형 제형에 사용되는 중합체는 불활성이고, 침출가능한 불순물이 없고, 저장 시 안정하고, 멸균되고, 생분해성이다. 또 다른 구현 예에서, 제어된 또는 서방형 방출 시스템은 치료 표적의 근처, 즉, 비강 또는 폐에 배치될 수 있고, 따라서 전체 용량의 일부만을 필요로 한다(예컨대, Goodson, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138 (1984)참조). 제어된 방출 시스템은 Langer에 의한 리뷰에서 논의된다(1990, Science 249:1527-1533). 당업자에게 공지된 모든 기술은 사용되어, 본원에 제공된 항체 약물 컨쥬게이트 또는 약제학적 조성물을 포함하는 서방형 제형을 생성할 수 있다. 예컨대, U.S. 특허 No. 4,526,938, PCT 공보 WO 91/05548, PCT 공보 WO 96/20698, Ning et al., 1996, "Intratumoral Radioimmunotherapy of a Human Colon Cancer Xenograft Using a Sustained-Release Gel," Radiotherapy & Oncology 39:179- 189, Song et al., 1995, "Antibody Mediated Lung Targeting of Long-Circulating Emulsions," PDA Journal of Pharmaceutical Science & Technology 50:372-397, Cleek et al., 1997, "Biodegradable Polymeric Carriers for a bFGF Antibody for Cardiovascular Application," Pro. Int'l. Symp. Control. Rel. Bioact. Mater. 24:853-854, and Lam et al., 1997, "Microencapsulation of Recombinant Humanized Monoclonal Antibody for Local Delivery," Proc. Int'l. Symp. Control Rel. Bioact. Mater. 24:759-760를 참고하라. 이들 각각은 전체가 참고로서 본원에 통합된다.
암의 예방 및/또는 치료에 효과적일 수 있는 본원에 제공된 약제학적 조성물의 양은 표준 임상 기술에 의해 결정될 수 있다. 또한, 시험관 내 분석은 최적의 투여량 범위를 확인하는데 도움이 되도록 선택적으로 사용될 수 있다. 사용될 정확한 투여량은 또한 투여 경로 및 질병 또는 장애의 심각도에 따라 달라지며, 실무자의 판단 및 각 대상체의 상황에 따라 결정되어야 한다. 유효 투여량은 체외 또는 동물 모델 테스트 시스템으로부터 유래된 투여량-반응 곡선으로부터 외삽될 수 있다.
특정 구현 예에서, 본원에 제공된 치료 방법은 상이한 항-191P4D12 항체 또는 상이한 약물 유닛을 포함하는 상이한 ADC의 조합 또는 칵테일뿐만 아니라 단일 ADC의 투여를 고려한다. 몇몇 구현 예에서, 이러한 방법은 예를 들어 이들이 상이한 에피토프를 표적화하고, 상이한 이펙터 메커니즘을 개척하거나, 세포 독성 항체를 면역 이펙터 기능에 의존하는 항체와 직접 결합하는 ADC를 함유하기 때문에 특정 이점을 갖는다. 이러한 방법은 상승적 치료 효과를 나타낼 수 있다. 또한, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 다양한 화학 요법 및 생물학적 제제, 안드로겐-차단제, 면역 조절제(예를 들어, IL-2, GM-CSF), 수술 또는 방사선을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다른 치료 방식과 병용하여 투여될 수 있다.
하나의 구현 예에서, 인간 종양을 포함하는 종양이 화학 요법제 또는 방사선 또는 이들의 조합과 함께 본원에 제공되는 약제학적 조성물로 치료될 때, 시너지가 있다.
본원에 제공된 약제학적 조성물; 및 화학 요법 또는 방사선 또는 이 둘 모두를 이용하여 종양 세포의 성장을 억제하는 방법은 본 약제학적 조성물을 화학 요법 또는 방사선 요법을 시작하기 전, 동안, 또는 후, 또는 이들의 임의의 조합(즉, 화학 요법 및/또는 방사선 요법을 시작하기 전 및 동안, 전 및 후, 동안 및 후, 또는 전, 동안, 및 후)에 투여하는 것을 포함한다. 치료 프로토콜 및 특정 환자의 필요에 따라, 상기 방법은 가장 효과적인 치료를 제공하고 궁극적으로 환자의 수명을 연장시킬 방식으로 수행된다.
화학 요법제의 투여는 비경구 및 장내 경로에 의한 전신을 포함하는 다양한 방식으로 달성될 수 있다. 하나의 구현 예에서, 화학 요법제는 별도로 투여된다. 화학 요법제 또는 화학 요법의 특정 예는 시스플라틴, 다카르바진(DTIC), 닥티노마이신, 메클로레타민(질소 머스타드), 스트렙토조신, 사이클로포스파미드, 카무스틴(BCNU), 로무스틴(CCNU), 독소루비신(adriamycin), 다우노루비신, 프로카르바진, 미토마이신, 시타라빈, 에토포사이드, 메토트렉세이트, 5-플루오로 우라실, 빈블라스틴, 빈크리스틴, 블레오마이신, 파클리탁셀(탁솔), 도세탁셀(탁소 테레), 알데스류킨, 아스파라기나제, 부설판, 카보플라틴, 클라드리빈, 다카르바진, 플록수리딘, 플루다라빈, 히드록시우레아, 이포스파미드, 인터페론 알파, 류프롤리드, 메게스트롤, 멜팔란, 머캅토퓨린, 플리카마이신, 미토탄, 페가스파가제, 펜토스타틴, 피포브로만, 플리카마이신, 스트렙토조신, 타목시펜, 테니포사이드, 테스토락톤, 티오구아닌, 티오테파, 우라실 머스타드, 비노렐빈, 젬시타빈, 클로람부실, 탁솔 및 이들의 조합을 포함한다.
본원에 제공되는 약제학적 조성물과 조합되어 사용되는 방사선의 소스는 치료되는 환자의 외부 또는 내부일 수 있다. 소스가 환자의 외부에 있는 경우, 치료는 외부 빔 방사선 요법(EBRT)으로 알려져 있다. 방사선의 소스가 환자의 내부에 있는 경우, 치료는 근접치료(BT)라고 불린다.
상기 기재된 치료 요법은 추가의 암 치료제 및/또는 요법, 예를 들어 추가 화학 요법, 암 백신, 신호 전달 억제제, 비정상 세포 성장 또는 암 치료에 유용한 제제, 항체(예컨대 WO/2005/092380(Pfizer)에 기술된 항-CTLA-4 항체) 또는 IGF-1R 및 사이토카인에 결합하여 종양 성장을 억제하는 기타 리간드와 추가로 조합될 수 있다.
포유동물이 추가 화학 요법에 도입되는 경우, 위에 기술한 화학 요법제가 사용될 수 있다. 추가로, 성장 인자 억제제, 생물학적 반응 조절제, 항-호르몬 요법, 선택적 에스트로겐 수용체 조절제(SERM), 혈관신생 억제제 및 항-안드로겐이 사용될 수 있다. 예를 들어, 항-호르몬, 예를 들어 Nolvadex(tamoxifen)와 같은 항-에스트로겐 또는 Casodex(4'-시아노-3-(4-플르우로펜실설포닐)-2-히드록시-2-메틸-3-'-(트리플루오로메틸)프로피오나닐리드)와 같은 항-안드로겐이 사용될 수 있다.
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공되는 약제학적 조성물은 예컨대 암을 치료하기 위한 제2 치료제와 함께 사용된다.
몇몇 구현 예에서, 제2 치료제는 면역 체크 포인트 억제제이다. 본원에 사용된 용어 "면역 체크 포인트 억제제" 또는 "체크 포인트 억제제"는 하나 이상의 체크 포인트 단백질을 전체적으로 또는 부분적으로 감소, 억제, 방해 또는 조절하는 분자를 지칭한다. 특정 이론에 제한되지 않고 체크 포인트 단백질은 T 세포 활성화 또는 기능을 조절한다. CTLA-4 및 이의 리간드 CD80 및 CD86; 및 리간드 PD-L1 및 PD-L2를 갖는 PD-1과 같은 수많은 체크 포인트 단백질이 알려져 있다(Pardoll, Nature Reviews Cancer, 2012, 12, 252-264). 이러한 단백질은 T 세포 반응의 공동 자극 또는 억제 상호 작용을 담당하는 것으로 보인다. 면역 체크 포인트 단백질은 자기 내성과 생리적 면역 반응의 기간 및 진폭을 조절하고 유지하는 것으로 보인다. 면역 체크 포인트 억제제는 항체를 포함하거나 항체로부터 유래된다.
한 구현 예에서, 체크 포인트 억제제는 CTLA-4 억제제이다. 한 구현 예에서, CTLA-4 억제제는 항-CTLA-4 항체이다. 항-CTLA-4 항체의 예는 US 특허 제5,811,097; 5,811,097; 5,855,887; 6,051,227; 6,207,157; 6,682,736; 6,984,720; 및 7,605,238을 포함하나 이에 제한되지 않으며, 이들 모두는 그 전체가 본원에 통합된다. 하나의 구현 예에서, 항-CTLA-4 항체는 트레멜리무맙(티실리무맙 또는 CP-675,206으로도 알려짐)이다. 또 다른 구현 예에서, 항-CTLA-4 항체는 이필리무맙(MDX-010 또는 MDX-101로도 알려짐)이다. 이필리무맙은 CTLA-4에 결합하는 완전한 인간 단일 클론 IgG 항체이다. 이필리무맙은 상표명 Yervoy™로 판매된다.
하나의 구현 예에서, 체크 포인트 억제제는 PD-1/PD-L1 억제제이다. PD-1/PD-L1 억제제의 예는 미국 특허 제7,488,802; 7,943,743; 8,008,449; 8,168,757; 8,217,149 및 PCT 특허 출원 공개 번호 WO2003042402, WO2008156712, WO2010089411, WO2010036959, WO2011066342, WO2011159877, WO2011082400 및 WO2011161699에 기재된 것들을 포함하지만 이에 제한되지는 않으며, 이들 모두는 그 전체가 본원에 통합된다.
하나의 구현 예에서, 체크 포인트 억제제는 PD-1 억제제이다. 하나의 구현 예에서, PD-1 억제제는 항-PD-1 항체이다. 하나의 구현 예에서, 항-PD-1 항체는 BGB-A317, 니볼루맙(ONO-4538, BMS-936558 또는 MDX1106으로도 알려짐) 또는 펨브롤리주맙(MK-3475, SCH 900475 또는 람볼리주맙으로도 알려짐)이다. 하나의 구현 예에서, 항-PD-1 항체는 니볼루맙이다. 니볼루맙은 인간 IgG4 항-PD-1 단일 클론 항체이며, 상표명 Opdivo™로 판매된다. 또 다른 구현 예에서, 항-PD-1 항체는 펨브롤리주맙이다. 펨브롤리주맙은 인간화 단일 클론 IgG4 항체이며 상표명 Keytruda™로 판매된다. 또 다른 구현 예에서, 항-PD-1 항체는 인간화 항체인 CT-011이다. 단독 투여된 CT-011은 재발 시 급성 골수성 백혈병(AML) 치료에 반응을 보이지 않았다. 또 다른 구현 예에서, 항-PD-1 항체는 융합 단백질인 AMP-224이다. 또 다른 구현 예에서, PD-1 항체는 BGB-A317이다. BGB-A317은 Fc 감마 수용체 I에 결합하는 능력이 특이적으로 엔지니어링되고 높은 친화성과 우수한 표적 특이성을 가진 PD-1에 대한 고유한 결합 시그니처를 갖는 단일 클론 항체이다.
하나의 구현 예에서, 체크 포인트 억제제는 PD-L1 억제제이다. 하나의 구현 예에서, PD-L1 억제제는 항-PD-L1 항체이다. 하나의 구현 예에서, 항-PD-L1 항체는 MEDI4736(두르발루맙)이다. 또 다른 구현 예에서, 항-PD-L1 항체는 BMS-936559(MDX-1105-01로도 알려짐)이다. 또 다른 구현 예에서, PD-L1 억제제는 아테졸리주맙(MPDL3280A 및 Tecentriq®으로도 알려짐)이다.
하나의 구현 예에서, 체크 포인트 억제제는 PD-L2 억제제이다. 하나의 구현 예에서, PD-L2 억제제는 항-PD-L2 항체이다. 하나의 구현 예에서, 항-PD-L2 항체는 rHIgM12B7A이다.
하나의 구현 예에서, 체크 포인트 억제제는 림프구 활성화 유전자-3(LAG-3) 억제제이다. 하나의 구현 예에서, LAG-3 억제제는 가용성 Ig 융합 단백질인 IMP321이다(Brignone et al., J. Immunol., 2007, 179, 4202-4211). 또 다른 구현 예에서, LAG-3 억제제는 BMS-986016이다.
하나의 구현 예에서, 체크 포인트 억제제는 B7 억제제이다. 하나의 구현 예에서, B7 억제제는 B7-H3 억제제 또는 B7-H4 억제제이다. 하나의 구현 예에서, B7-H3 억제제는 항-B7-H3 항체인 MGA271이다(Loo et al., Clin. Cancer Res., 2012, 3834).
하나의 구현 예에서, 체크 포인트 억제제는 TIM3(T-세포 면역 글로불린 도메인 및 뮤신 도메인 3) 억제제이다(Fourcade et al., J. Exp. Med., 2010, 207, 2175-86; Sakuishi et al., J. Exp. Med., 2010, 207, 2187-94).
하나의 구현 예에서, 체크 포인트 억제제는 OX40(CD134) 작용제이다. 하나의 구현 예에서, 체크 포인트 억제제는 항-OX40 항체이다. 하나의 구현 예에서, 항-OX40 항체는 항-OX-40이다. 또 다른 구현 예에서, 항-OX40 항체는 MEDI6469이다.
하나의 구현 예에서, 체크 포인트 억제제는 GITR 작용제이다. 하나의 구현 예에서, 체크 포인트 억제제는 항-GITR 항체이다. 하나의 구현 예에서, 항-GITR 항체는 TRX518이다.
하나의 구현 예에서, 체크 포인트 억제제는 CD137 작용제이다. 하나의 구현 예에서, 체크 포인트 억제제는 항-CD137 항체이다. 하나의 구현 예에서, 항-CD137 항체는 우렐루맙이다. 또 다른 구현 예에서, 항-CD137 항체는 PF-05082566이다.
하나의 구현 예에서, 체크 포인트 억제제는 CD40 작용제이다. 하나의 구현 예에서, 체크 포인트 억제제는 항-CD40 항체이다. 하나의 구현 예에서, 항-CD40 항체는 CF-870,893이다.
하나의 구현 예에서, 체크 포인트 억제제는 재조합 인간 인터루킨-15(rhIL-15)이다.
하나의 구현 예에서, 체크 포인트 억제제는 IDO 억제제이다. 하나의 구현 예에서, IDO 억제제는 INCB024360이다. 또 다른 구현 예에서, IDO 억제제는 인도시모드이다.
특정 구현 예에서, 본원에 제공된 조합 요법은 본원에 기재된 2개 이상의 체크 포인트 억제제(동일하거나 상이한 클래스의 체크 포인트 억제제 포함)를 포함한다. 더욱이, 본원에 기술된 조합 요법은 본원에 기술되고 당업계에서 이해되는 질병을 치료하기에 적절한 경우 본원에 기술된 바와 같은 하나 이상의 제2 활성제와 조합하여 사용될 수 있다.
몇몇 구현 예에서, 체크 포인트 억제제는 본 약제학적 조성물의 투여 전에 투여된다. 다른 구현 예에서, 체크 포인트 억제제는 본원에 제공된 약제학적 조성물과 동시에(예를 들어, 동일한 투여 기간에) 투여된다. 또 다른 구현 예에서, 체크 포인트 억제제는 본원에 제공된 약제학적 조성물의 투여 후에 투여된다.
몇몇 구현 예에서, 체크 포인트 억제제의 양은 표준 임상 기술에 의해 결정될 수 있다.
체크 포인트 억제제의 투여량은 약 0.1 ㎍/ml 내지 약 450 ㎍/ml의 혈청 역가를 결과하고, 몇몇 구현 예에서, 적어도 0.1 ㎍/ml, 적어도 0.2 ㎍/ml, 적어도 0.4 ㎍/ml, 적어도 0.5 ㎍/ml, 적어도 0.6 ㎍/ml, 적어도 0.8 ㎍/ml, 적어도 1 ㎍/ml, 적어도 1.5 ㎍/ml, 예를 들어, 적어도 2 ㎍/ml, 적어도 5 ㎍/ml, 적어도 10 ㎍/ml, 적어도 15 ㎍/ml, 적어도 20 ㎍/ml, 적어도 25 ㎍/ml, 적어도 30 ㎍/ml, 적어도 35 ㎍/ml, 적어도 40 ㎍/ml, 적어도 50 ㎍/ml, 적어도 75 ㎍/ml, 적어도 100 ㎍/ml, 적어도 125 ㎍/ml, 적어도 150 ㎍/ml, 적어도 200 ㎍/ml, 적어도 250 ㎍/ml, 적어도 300 ㎍/ml, 적어도 350 ㎍/ml, 적어도 400 ㎍/ml 또는 적어도 450 ㎍/ml은 암의 예방 및/또는 치료를 위해 인간에게 투여될 수 있다. 사용되는 체크 포인트 억제제의 정확한 용량은 투여 경로 및 대상체의 암의 심각도에 따라 달라지며, 실무자의 판단 및 각 환자의 상황에 따라 결정되어야 함이 이해되어야 한다.
몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 체크 포인트 억제제(예를 들어, PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제)의 투여량은 일반적으로 대상체의 체중의 0.1 mg/kg 내지 100 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체의 체중의 약 1 mg/kg 내지 약 75 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체의 체중의 1 mg/kg 내지 20 mg/kg, 예를 들어 대상체의 체중의 1 mg/kg 내지 5 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체의 체중의 약 1 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체의 체중의 약 1.5 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체의 체중의 약 2 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체의 체중의 약 2.5 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체의 체중의 약 3 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체의 체중의 약 3.5 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체의 체중의 약 4 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체의 체중의 약 4.5 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체의 체중의 약 5 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체의 체중의 약 5.5 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체의 체중의 약 6 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체의 체중의 약 6.5 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체의 체중의 약 7 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체의 체중의 약 7.5 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체의 체중의 약 8 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체의 체중의 약 8.5 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체의 체중의 약 9.0 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체의 체중의 약 10.0 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체의 체중의 약 15.0 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체의 체중의 약 20.0 mg/kg이다.
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물은 밀봉된 용기 내 건조 멸균된 동결 건조 분말 또는 물이 없는 농축물로 공급되고, 예를 들어, 물 또는 식염수로 대상체에게 투여하기에 적절한 농도로 재구성될 수 있다. 특정 구현 예에서, 항체 약물 컨쥬게이트는 적어도 0.1 mg, 적어도 0.5 mg, 적어도 1 mg, 적어도 2 mg, 또는 적어도 3 mg, 예를 들어 적어도 5 mg, 적어도 10 mg, 적어도 15 mg, 적어도 25 mg, 적어도 30 mg, 적어도 35 mg, 적어도 45 mg, 적어도 50 mg, 적어도 60 mg, 적어도 75 mg, 적어도 80 mg, 적어도 85 mg, 적어도 90 mg, 적어도 95 mg, 또는 적어도 100 mg의 유닛 투여량으로 밀봉된 용기 내 건조 멸균 동결 건조 분말로서 공급된다. 동결 건조된 항체 약물 컨쥬게이트는 원래 용기에서 2 내지 8℃로 저장될 수 있으며, 항체 약물 컨쥬게이트는 재구성된 후 12 시간 이내에, 예를 들어 6 시간 이내, 5 시간 이내, 3 시간 이내 또는 1 시간 이내에 투여될 수 있다. 대안적인 구현 예에서, 본원에 제공된 항체 약물 컨쥬게이트를 포함하는 약제학적 조성물은 항체 약물 컨쥬게이트의 양 및 농도를 나타내는 밀봉된 용기에 액체 형태로 공급된다. 특정 구현 예에서, 액체 형태의 항체 약물 컨쥬게이트는 적어도 0.1 mg/ml, 적어도 0.5 mg/ml, 또는 적어도 1 mg/ml, 예를 들어 적어도 5 mg/ml, 적어도 10 mg/ml, 적어도 15 mg/ml, 적어도 25 mg/ml, 적어도 30 mg/ml, 적어도 40 mg/ml, 적어도 50 mg/ml, 적어도 60 mg/ml, 적어도 70 mg/ml, 적어도 80 mg/ml, 적어도 90 mg/ml 또는 적어도 100 mg/ml로 밀봉된 용기에 공급된다.
몇몇 구현 예에서, 암의 예방 및/또는 치료에 효과적인 예방제 또는 치료제(예를 들어, 본원에 제공된 항체 약물 컨쥬게이트), 또는 본원에 제공된 약제학적 조성물의 양은 표준 임상 기술에 의해 결정될 수 있다.
따라서, 약 0.1 ㎍/ml 내지 약 450 ㎍/ml, 몇몇 구현 예에서, 적어도 0.1 ㎍/ml, 적어도 0.2 ㎍/ml, 적어도 0.4 ㎍/ml, 적어도 0.5 ㎍/ml, 적어도 0.6 ㎍/ml, 적어도 0.8 ㎍/ml, 적어도 1 ㎍/ml, 적어도 1.5 ㎍/ml, 예를 들어 적어도 2 ㎍/ml, 적어도 5 ㎍/ml, 적어도 10 ㎍/ml, 적어도 15 ㎍/ml, 적어도 20 ㎍/ml, 적어도 25 ㎍/ml, 적어도 30 ㎍/ml, 적어도 35 ㎍/ml, 적어도 40 ㎍/ml, 적어도 50 ㎍/ml, 적어도 75 ㎍/ml, 적어도 100 ㎍/ml, 적어도 125 ㎍/ml, 적어도 150 ㎍/ml, 적어도 200 ㎍/ml, 적어도 250 ㎍/ml, 적어도 300 ㎍/ml, 적어도 350 ㎍/ml, 적어도 400 ㎍/ml, 적어도 450 ㎍/ml의 혈청 역가를 결과하는 약제학적 조성물 내 항체 약물 컨쥬게이트의 투여량이 암의 예방 및/또는 치료를 위해 인간에게 투여될 수 있다. 제형에 사용되는 정확한 투여량은 또한 투여 경로 및 대상체의 암의 심각도에 따라 달라지며, 실무자의 판단과 각 환자의 상황에 따라 결정되어야 함이 이해되어야 한다.
유효 투여량은 시험관 내 또는 동물 모델 테스트 시스템에서 유래된 투여량-반응 곡선으로부터 외삽될 수 있다.
본원에 제공된 항체 약물 컨쥬게이트를 포함하는 약제학적 조성물의 경우, 환자에게 투여되는 항체 약물 컨쥬게이트의 투여량은 전형적으로 대상체 체중의 0.1 mg/kg 내지 100 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체 체중의 약 1 mg/kg 내지 약 75 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체 체중의 1 mg/kg 내지 20 mg/kg, 예를 들어 대상체 체중의 1 mg/kg 내지 5 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체 체중의 약 1 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체 체중의 약 1.25 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체 체중의 약 1.5 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체 체중의 약 2 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체 체중의 약 2.5 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체 체중의 약 3 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체 체중의 약 3.5 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체 체중의 약 4 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체 체중의 약 4.5 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체 체중의 약 5 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체 체중의 약 5.5 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체 체중의 약 6 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체 체중의 약 6.5 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체 체중의 약 7 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체 체중의 약 7.5 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체 체중의 약 8 mg/kg이다. 몇몇 구현 예에서, 환자에게 투여되는 투여량은 대상체 체중의 약 8.5 mg/kg이다.
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물로 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 베이스라인에서 환자의 실제 체중을 기준으로 투여되며, 투여량은 환자의 체중이 이전주기의 베이스라인에서 ≥ 10% 변하지 않거나, 또는 투여량 조정 기준이 충족되지 않는 한, 변하지 않을 것이다. 몇몇 구현 예에서, 체중이 100kg을 초과하는 환자를 제외하고 실제 체중이 사용될 것이며, 이러한 경우, 투여량은 100kg의 체중을 기준으로 계산될 것이다. 몇몇 구현 예에서, 최대 투여량은 1.00 mg/kg 투여량 수준을 받은 환자의 경우 100mg이고, 1.25 mg/kg 투여량 수준을 받은 환자의 경우 125mg이다.
하나의 구현 예에서, 본 약제학적 조성물 내 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트의 대략 100 mg/kg 이하, 대략 75 mg/kg 이하, 대략 50 mg/kg 이하, 대략 25 mg/kg 이하, 대략 10 mg/kg 이하, 대략 5 mg/kg 이하, 대략 1 mg/kg 이하, 대략 0.5 mg/kg 이하, 또는 대략 0.1 mg/kg 이하가 암을 치료하기 위해 5회, 4회, 3회, 2회, 또는 1회 투여된다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공되는 항체 약물 컨쥬게이트를 포함하는 약제학적 조성물은 약 1-12회 투여되고, 여기서 투여량은 의사에 결정에 따라 필요에 따라, 예컨대 매주, 격주, 매월 ,격월, 3개월마다 투여될 수 있다. 몇몇 구현 예에서, 더 낮은 투여량(예컨대 0.1-15 mg/kg)이 더 자주(예컨대 3-6회) 투여될 수 있다. 다른 구현 예에서, 더 높은 투여량(예컨대 25-100 mg/kg)이 덜 빈번하게(예컨대 1-3 회) 투여될 수 있다.
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물 내 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트의 단일 용량은 일정 기간(예컨대 1년)에 걸쳐 매 2주 주기로(예컨대 약 14일) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 또는 26 회 암의 예방 및/또는 치료를 위해 환자에게 투여되고, 여기서 용량은 약 0.1 mg/kg, 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 1.25 mg/kg, 약 1.5 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 2.5 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 20 mg/kg, 약 25 mg/kg, 약 30 mg/kg, 약 35 mg/kg, 약 40 mg/kg, 약 45 mg/kg, 약 50 mg/kg, 약 55 mg/kg, 약 60 mg/kg, 약 65 mg/kg, 약 70 mg/kg, 약 75 mg/kg, 약 80 mg/kg, 약 85 mg/kg, 약 90 mg/kg, 약 95 mg/kg, 약 100 mg/kg, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다(즉, 각 용량, 월간 용량은 같거나 같지 않을 수 있음).
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물 내 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트의 단일 용량은 일정 기간(예컨대 1년)에 걸쳐 매 3주 주기로(예컨대 약 21일) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 또는 26 회 암의 예방 및/또는 치료를 위해 환자에게 투여되고, 여기서 용량은 약 0.1 mg/kg, 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 1.25 mg/kg, 약 1.5 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 2.5 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 20 mg/kg, 약 25 mg/kg, 약 30 mg/kg, 약 35 mg/kg, 약 40 mg/kg, 약 45 mg/kg, 약 50 mg/kg, 약 55 mg/kg, 약 60 mg/kg, 약 65 mg/kg, 약 70 mg/kg, 약 75 mg/kg, 약 80 mg/kg, 약 85 mg/kg, 약 90 mg/kg, 약 95 mg/kg, 약 100 mg/kg, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다(즉, 각 용량, 월간 용량은 같거나 같지 않을 수 있음).
몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물 내 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트의 단일 용량은 일정 기간(예컨대 1년)에 걸쳐 매 4주 주기로(예컨대 약 28일) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 또는 26 회 암의 예방 및/또는 치료를 위해 환자에게 투여되고, 여기서 용량은 약 0.1 mg/kg, 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 1.25 mg/kg, 약 1.5 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 2.5 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 20 mg/kg, 약 25 mg/kg, 약 30 mg/kg, 약 35 mg/kg, 약 40 mg/kg, 약 45 mg/kg, 약 50 mg/kg, 약 55 mg/kg, 약 60 mg/kg, 약 65 mg/kg, 약 70 mg/kg, 약 75 mg/kg, 약 80 mg/kg, 약 85 mg/kg, 약 90 mg/kg, 약 95 mg/kg, 약 100 mg/kg, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다(즉, 각 용량, 월간 용량은 같거나 같지 않을 수 있음).
또 다른 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물 내 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트의 단일 용량은 일정 기간(예컨대 1년)에 걸쳐 약 월 주기로(예컨대 약 30일) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 또는 12회 암의 예방 및/또는 치료를 위해 환자에게 투여되고, 여기서 용량은 약 0.1 mg/kg, 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 1.25 mg/kg, 약 1.5 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 2.5 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 20 mg/kg, 약 25 mg/kg, 약 30 mg/kg, 약 35 mg/kg, 약 40 mg/kg, 약 45 mg/kg, 약 50 mg/kg, 약 55 mg/kg, 약 60 mg/kg, 약 65 mg/kg, 약 70 mg/kg, 약 75 mg/kg, 약 80 mg/kg, 약 85 mg/kg, 약 90 mg/kg, 약 95 mg/kg, 약 100 mg/kg, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다(즉, 각 용량, 월간 용량은 같거나 같지 않을 수 있음).
또 다른 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물 내 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트의 단일 용량은 일정 기간(예컨대 1년)에 걸쳐 약 격월 주기로(예컨대 약 60일) 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6회 암의 예방 및/또는 치료를 위해 환자에게 투여되고, 여기서 용량은 약 0.1 mg/kg, 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 1.25 mg/kg, 약 1.5 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 2.5 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 20 mg/kg, 약 25 mg/kg, 약 30 mg/kg, 약 35 mg/kg, 약 40 mg/kg, 약 45 mg/kg, 약 50 mg/kg, 약 55 mg/kg, 약 60 mg/kg, 약 65 mg/kg, 약 70 mg/kg, 약 75 mg/kg, 약 80 mg/kg, 약 85 mg/kg, 약 90 mg/kg, 약 95 mg/kg, 약 100 mg/kg, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다(즉, 각 용량, 월간 용량은 같거나 같지 않을 수 있음).
또 다른 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물 내 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트의 단일 용량은 일정 기간(예컨대 1년)에 걸쳐 약 3개월 주기로(예컨대 약 120일) 1, 2, 3, 또는 4회 암의 예방 및/또는 치료를 위해 환자에게 투여되고, 여기서 용량은 약 0.1 mg/kg, 약 0.5 mg/kg, 약 1 mg/kg, 약 1.25 mg/kg, 약 1.5 mg/kg, 약 2 mg/kg, 약 2.5 mg/kg, 약 3 mg/kg, 약 4 mg/kg, 약 5 mg/kg, 약 10 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 20 mg/kg, 약 25 mg/kg, 약 30 mg/kg, 약 35 mg/kg, 약 40 mg/kg, 약 45 mg/kg, 약 50 mg/kg, 약 55 mg/kg, 약 60 mg/kg, 약 65 mg/kg, 약 70 mg/kg, 약 75 mg/kg, 약 80 mg/kg, 약 85 mg/kg, 약 90 mg/kg, 약 95 mg/kg, 약 100 mg/kg, 또는 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다(즉, 각 용량, 월간 용량은 같거나 같지 않을 수 있음).
특정 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물로 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트의 용량을 환자에게 투여하는 경로는 비강 내, 근육 내, 정맥 내 또는 이들의 조합이지만, 본원에 기재된 다른 경로도 허용된다. 각 용량은 동일한 투여 경로에 의해 투여될 수도 있고 아닐 수도 있다. 몇몇 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물로 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 다중 투여 경로를 통해 하나 이상의 추가 치료제의 다른 용량과 동시에 또는 이에 후속하여 투여될 수 있다.
몇몇 보다 구체적인 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물로 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 정맥 내(IV) 주사 또는 주입에 의해 대상체 체중에 대해 약 1 mg/kg, 약 1.25 mg/kg, 또는 약 1.5 mg/kg의 용량으로 투여된다.
몇몇 보다 구체적인 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물로 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 매 3주 사이클당 2회 약 30분에 걸친 정맥 내(IV) 주사 또는 주입에 의해 대상체 체중에 대해 약 1 mg/kg, 1.25 mg/kg, 또는 약 1.5 mg/kg의 용량으로 투여된다. 몇몇 구현 예에서, 약제학적 조성물에 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 매 3주 사이클의 1일 및 8일에 약 30분에 걸쳐 정맥 내(IV) 주사 또는 주입에 의해 투여된다. 몇몇 구현 예에서, 방법은 면역 체크포인트 억제제를 각 3주 사이클에서 1회 이상 정맥 내(IV) 주사 또는 주입에 의해 투여하는 것을 더욱 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 방법은 면역 체크포인트 억제제를 각 3주 사이클의 1일에 정맥 내(IV) 주사 또는 주입에 의해 투여하는 것을 더욱 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 상기 면역 체크 포인트 억제제는 펨브롤리주맙이고, 여기서 펨브롤리주맙은 약 30분에 걸쳐 약 200 mg의 양이 투여된다. 다른 구현 예에서, 면역 체크 포인트 억제제는 아테졸리주맙이고, 여기서 아테졸리주맙은 약 60 또는 30분에 걸쳐 약 1200mg의 양으로 투여된다. 몇몇 구현 예에서, 항체 약물 컨쥬게이트는 면역 체크 포인트 억제제로 치료 동안 또는 치료 후에 질병 진행 또는 재발을 보인 요로 상피암 환자에게 투여된다. 몇몇 구현 예에서, 항체 약물 컨쥬게이트는 면역 체크 포인트 억제제로 치료 동안 또는 치료 후에 질병 진행 또는 재발을 보인 전이성 요로 상피암 환자에게 투여된다.
다른 보다 구체적인 구현 예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물로 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 매 4주 사이클당 3회 약 30분에 걸친 정맥 내(IV) 주사 또는 주입에 의해 대상체 체중에 대해 약 1 mg/kg, 1.25 mg/kg, 또는 약 1.5 mg/kg의 용량으로 투여된다. 몇몇 구현 예에서, 약제학적 조성물에 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 매 4주 사이클의 1일, 8일, 및 15일에 약 30분에 걸쳐 정맥 내(IV) 주사 또는 주입에 의해 투여된다. 몇몇 구현 예에서, 방법은 면역 체크포인트 억제제를 각 4주 사이클에서 1회 이상 정맥 내(IV) 주사 또는 주입에 의해 투여하는 것을 더욱 포함한다. 몇몇 구현 예에서, 상기 면역 체크 포인트 억제제는 펨브롤리주맙이다. 다른 구현 예에서, 면역 체크 포인트 억제제는 아테졸리주맙이다. 몇몇 구현 예에서, 항체 약물 컨쥬게이트는 면역 체크 포인트 억제제로 치료 동안 또는 치료 후에 질병 진행 또는 재발을 보인 요로 상피암 환자에게 투여된다. 몇몇 구현 예에서, 항체 약물 컨쥬게이트는 면역 체크 포인트 억제제로 치료 동안 또는 치료 후에 질병 진행 또는 재발을 보인 전이성 요로 상피암 환자에게 투여된다.
간결함을 위해, 특정 약어가 여기에서 사용된다. 하나의 예는 아미노산 잔기를 나타내는 단일 문자 약어이다. 상기 아미노산 및 이에 해당하는 3글자 및 단일 글자 약어는 아래와 같다:
Figure pct00051
본 발명은 일반적으로 다수의 구현 예를 설명하기 위해 긍정의(affirmative) 언어를 사용하여 여기에 개시된다. 본 발명은 또한 구체적으로 물질 또는 재료, 방법 단계 및 조건, 프로토콜, 절차, 어세이 또는 분석과 같은 특정 주제가 전체 또는 부분적으로 제외되는 구현 예를 포함한다. 본 발명이 포함하지 않는 것의 측면에서 본 발명이 일반적으로 표현하지 않더라도, 본 발명에 명시적으로 포함되지 않은 관점은 그럼에도 불구하고 본원에 개시된다.
본 발명을 수행하기 위해 본 발명자들에게 알려진 최상의 모드를 포함하여 본 발명의 특정 구현 예가 본원에서 설명된다. 전술한 설명을 읽으면, 개시된 구현 예의 변형이 당해 분야에서 일하는 개인에게 명백해질 수 있고, 당업자는 그러한 변형을 적절하게 사용할 수 있을 것으로 예상된다. 따라서, 본 발명은 본원에 구체적으로 설명된 것과 다르게 실시되고, 본 발명은 적용 가능한 법률에 의해 허용되는 바와 같이 여기에 첨부된 청구 범위에 언급된 주제의 모든 수정 및 균등물을 포함하는 것으로 의도된다. 더욱이, 모든 가능한 변형에서 전술한 요소의 임의의 조합은 본 명세서에서 달리 지시되거나 문맥에 의해 달리 명백히 모순되지 않는 한 본 발명에 포함된다.
본 명세서에 인용된 모든 간행물, 특허 출원, 수탁 번호 및 기타 참고 문헌은 마치 각각의 개별 간행물 또는 특허 출원이 구체적으로 그리고 개별적으로 참조로 통합되는 것으로 표시된 것처럼 그 전체가 본원에 참조로 통합된다. 본원에서 논의된 간행물은 본 출원의 출원일 이전의 이들의 개시에 대해서만 제공된다. 본원의 어떠한 것도 본 발명이 선행 발명으로 인해 그러한 간행물보다 선행할 자격이 없음을 인정하는 것으로 해석되어서는 안된다. 또한, 제공되는 발행일은 독립적으로 확인이 필요한 실제 발행일과 상이할 수 있다.
본 발명의 다수의 구현 예가 설명되었다. 그럼에도 불구하고, 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않고 다양한 변형이 이루어질 수 있음이 이해될 것이다. 따라서, 실험 섹션의 설명은 청구항에 설명된 발명의 범위를 예시하기 위한 것이지 제한하지 않는다.
6. 실시 예
다음은 연구에 사용된 다양한 방법 및 재료에 대한 설명이며, 당업자에게 본 발명의 제조 및 사용 방법에 대한 완전한 개시 및 설명을 제공하기 위해 제시된 것이며, 본 발명자들이 자신의 발명으로 간주하는 범위를 제한하려는 의도도 없고, 아래 실험이 수행되었으며 이들이 수행될 수 있는 모든 실험임을 나타내기 위한 것도 아니다. 현재 시제로 쓰여진 예시적인 설명은 반드시 수행된 것이 아니라, 상기 설명이 본 발명의 교시와 관련된 데이터 등을 생성하기 위해 수행될 수 있는 것임을 이해해야 한다. 사용된 숫자(예컨대 양, 온도 등)와 관련하여 정확성을 보장하기 위해 노력했지만 일부 실험 오류 및 편차가 고려되어야 한다.
6.1 실시 예 1 - pH 및 버퍼 스크린
AGS-22M6E는 14개의 후보 버퍼(아래 표 1에 상세히 설명된 바와 같이 모두 20mM에서)에서 10 mg/mL로 제형화 되었다. 시트르산으로 pH 5.2 및 5.7로 적정된 20mM 시트르산 나트륨 버퍼 및 HCl로 pH 5.5, 6.0 및 6.5로 적정된 20mM 히스티딘 버퍼를 사용하는 제형이 평가되었다. 또한, 3가지 상이한 음이온이 히스티딘 버퍼 시스템에서 평가되었다 - 염화물, 포스페이트 및 숙시네이트. 액상 제형은 2주 동안, 40℃ 저장 온도 조건, 24 시간 동안 실온(RT) 교반 및 동결 해동 사이클에 도입되었다(1, 3, 및 10 사이클 동안 -70℃에서 동결 및 20℃-25℃ 해동).
Figure pct00052
참고: 5% 수크로오스 (m.wt.342) = 146 mM; 5.5% 트레할로스 이수화물(m.wt. 378) = 146 mM.
제형 제조 및 연구 디자인은 아래에서 더 자세히 설명된다.
제형 연구를 위해 사용되는 단백질 생성물
총 약 2.5 그램인, 각각 약 50ml의 AGS-22M6E(Lot#AGS22M6-VCE-02)를 포함하는 4개의 튜브가 냉동 처리되었다. AGS-22M6E는 5% 수크로스 및 0.02 % 폴리소르베이트-20을 함유하는 20mM 히스티딘 pH 6.0 버퍼 내 12.5 mg/mL였다. 재료는 사용될 때까지 -70℃에서 저장되었다.
제형 버퍼의 제조
구연산(0.1M), 구연산 나트륨(0.1M) 및 L-히스티딘(0.2M), 숙신산(0.25M), 트레할로스 이수화물(40%), 수크로스(40%), 염산(2M) 및 인산 (2M)을 포함하는 저장 용액은 하기 표 2에 따라 제조되었다:
Figure pct00053
시약은 위의 표를 따라 무게를 쟀다. 적절한 부피의 Milli-Q 물이 시약을 용해시키기 위해 첨가되었다. 용액은 0.22 ㎛ 필터를 통해 여과되었다.
투석용 제형 버퍼의 제조
1.0 L의 각 제형은 아래 표 3에 따라 투석 및 플라시보 바이얼링을 위해 제조되었다.
Figure pct00054
pH는 표적 pH ±0.1로 적절한 산으로 조정되었다. 버퍼는 사용되기 까지 4℃에서 저장되었다.
제형 제조
각 50ml AGS-22M6E(Lot#AGS22M6-VCE-02)를 함유하는 4개의 튜브는 실온 수조에서 해동시킨 다음 250ml 병에서 합쳐졌다. 11ml가 각 제형에 대해 할당되었고, 투석 카세트에 첨가되었다. 카세트는~40배 과량의 제형 버퍼를 함유하는 비커에 배치되었고, 2-8℃에서 밤새 교반되었다. 버퍼가 버려지고, 새로운 버퍼가 첨가되었고, 2-8℃에서 밤새 교반되었다. 재료가 카세트에서 제거되고, 50 ml 튜브로 옮겨졌고, 농도는 결정되었고, 부피는 상응하는 제형 버퍼로 조정되어, 최종 농도는 10 mg/ml이었다. 플라시보는 생성물을 제형화하기 위해 사용되는 상응하는 버퍼였다.
제형 바이얼링 및 스토퍼링
멸균 여과 및 충전이 Baker SG600 층류 기류 후드에서 수행되었다. 제형 및 플라시보는 무균 기술을 이용하여 멸균-여과되었다(Millipore Millex-GV 0.22㎛ PVDF syringe filters, #SLGV033RS). 멸균 스토퍼링된 바이얼(Hollister-Stier 2-ml sterile stoppered vials, #7505ZA)은 후드에서 디크림핑(decrimped) 되었고, 스토퍼는 무균 기술을 이용하여 제거되었다. 바이얼은 1.0 ml%의 제형화된 생성물 또는 플라시보로 충전되었고, 이후 재스토퍼링되었다.
재료 요건 및 샘플 맵
재료 요건 및 샘플 맵은 다음과 같다:
Figure pct00055
농도 시점 및 분석
시점 및 분석은 아래 표 5와 같다.
Figure pct00056
액상 제형 40℃ 안정성 연구 디자인
제형 및 플라시보 바이얼은 40℃로 설정된 인큐베이터에 똑바로 배치되었다. 각 시점에서, 각 제형에 대한 하나의 활성 및 하나의 플라시보 바이얼은 샘플 맵에 따라 저장 조건에서 제거된다. 샘플은 -70℃에서 동결되었고 연구가 끝날 때 배치 분석되었다. 분석 전에 샘플을 RT에서 해동되었다. 각 샘플의 3 분취(aliquots)의 세트(각 샘플에 대해 70 ㎕ 분취)는 0.22 ㎛ 필터를 통해 여과한 후 -70℃에서 동결되었다. 분석 테스트 후, 남은 물질은 재테스트가 필요한 경우를 대비하여 2-8℃에서 밤새 저장되었다. 모든 분석이 완료된 후, 나머지 물질은 -70℃에서 저장되었다. 2개의 동결된 분취가 cIEF 및 효능 분석을 위해 사용되었다.
동결-해동(-70℃) 안정성 연구 디자인
각 제형(1.0 mL 충전)에 대한 하나의 바이얼이 동결을 허용하는, 적어도 4시간 동안 -70℃ 냉동고에 똑바로 배치되었다. 해동을 위해, 각 바이얼은 저장고로부터 제거되었고, 얼음이 더 이상 관찰되지 않을 때까지 실온에서 해동되었고, 이후 상기 바이얼은 부드럽게 휘저어졌다. 이는 하나의 완전한 동결-해동 사이클을 구성했다. 1, 3 및 10회의 동결-해동 사이클이 각각의 테스트된 제형 샘플 바이얼에 대해 완료되었다. 최종 동결-해동 사이클 후, 모든 샘플은 분석 테스트로 평가되었다. 각 샘플의 3개의 분취의 세트(각 샘플에 대해 70㎕ 분취)는 즉시 -70℃에서 냉동되었다. 분석 테스트 후, 남은 물질은 재테스트가 필요한 경우를 대비하여 2-8℃에서 밤새 저장되었다. 모든 분석이 완료된 후, 나머지 물질은 -70℃에서 저장되었다. 2개의 동결된 분취가 cIEF 및 효능 분석을 위해 사용되었다.
교반 연구 디자인
각 제형에 대한 하나의 바이얼이 표준 냉동 박스에 똑바로 세워졌다. 상기 박스는 이후 24시간 동안 실온에서 500 rpm으로 IKA-VIBRAMAX-VXR 오비탈 쉐이커 세트에 부착되었다. 상기 샘플은 이후 제거되었고, 분석 때까지 -70℃에서 저장되었다.
제형 표준
1.2 mL의 AGS-22M6E(Lot#AGS22M6-VCE-02) 출발 물질(5% 수크로스 및 0.02% 폴리소르베이트-20를 함유하는 20mM 히스티딘 pH 6.0 버퍼의 12.5 mg/mL)이 취해졌고, 200㎕/바이얼로 분취되었고, 이후 본 연구를 위한 제형 표준으로서 -70℃에서 저장되었다.
시각적 외관, A280(단백질 농도 및 약물 로딩), A330(탁도), SE-HPLC, 비-환원 및 환원된 SDS-PAGE, RP-HPLC-NPI. iCIEF 및 효능이 AGS-22M6E의 안정성을 평가하기 위해 사용되었다.
시각적 외관: 모든 샘플은 연구 과정을 걸쳐 어떤 색상, 흐림 및 미립자를 나타내지 않았다. 심지어 흔들어도 입자가 보이지 않았다.
A280(단백질 농도) 분석: A280 분석의 결과는 하기 표 6에 나타난다.
Figure pct00057
Figure pct00058
Figure pct00059
Figure pct00060
나타난 바와 같이, 단백질 농도의 어떠한 변화도 관찰되지 않았다.
A330(탁도) 분석: A330 분석의 결과는 하기 표 7에 나타난다.
Figure pct00061
Figure pct00062
나타난 바와 같이, 제형 F1 및 F6은 시간이 지남에 따라 탁도에서 가장 현저한 증가를 나타냈다. T=0에서, 보다 높은 탁도가, 다른 제형에서는 관찰되지 않은, 제형 F6에 대해 확인되었다.
SDS-PAGE 분석: SDS-PAGE 분석의 결과는 도 1a, 1b, 1c 및 1d에 나타난다. 마이너 저 분자량(LMW) 밴드(~35kD)가 14일 후 F1 및 F6의 환원된 SDS-PAGE에 의해 관찰되었다. 비-환원된 SDS-PAGE 분석에서, F1, F2, F6, 및 F7은 또한 T=0에서 이전에 존재하지 않았던 마이너 고 분자량(HMW) 밴드(~200kD)를 보여주었다.
RP-HPLC 분석: 표 8 및 도 1e는 RP-HPLC 분석의 결과를 나타낸다. 자유 SGD1010(약물 MMAE의 미량 절단)이 어떤 제형에 대해서도 t=0에서 RP-HPLC에 의해 검출되지 않았으나, 40℃에서 14일 후, SGD1010(0.17-1.59 μM)이 확인되었고, 구연산염 제형보다 히스티딘에 대해 보다 높은 pH에서 약간 더 빨랐고, 히스티딘/숙신산이 히스티딘/인산 및 히스티딘/HCl보다 약간 더 좋은 성능을 나타냈다.
Figure pct00063
SE-HPLC 분석: 아래 표 9 및 도 1f, 1g 및 1h에 나타낸 바와 같이, HMW 응집체의 증가 수준은 pH 5.2-5.7의 모든 제형에 대해 SE-HPLC에 의해 분명했으며, 시트레이트 제형은 상응하는 pH에서 히스티딘보다 더 많은 응집체를 나타낸다. 유사한 pH에서 시트레이트는 히스티딘 보다 더 많은 응집체를 나타냈다. pH 6.0의 히스티딘 제형은 pH 5.5 및 pH 6.5의 그것보다 더 나은 안정성을 나타냈다. 트레할로스 및 수크로스 사이에는 차이가 관찰되지 않았다.
Figure pct00064
Figure pct00065
Figure pct00066
A330, SDS-PAGE, 및 SE-HPLC에 의해 입증된 바와 같이(데이터는 여기에 표시되지는 않음), 실온에서 24 시간 쉐이킹 후 또는 1, 3, 10회의 동결-해동 사이클 후에도, 어떤 제형 사이에서도 현저한 변화가 관찰되지 않았다. 이는 제형 연구 샘플이 다른 시점에서 추출되고, -70℃에서 저장될 수 있다는 확신을 제공했다.
본 연구로부터 얻어진 결과에 기초하여, 제형 F4, F9, 및 F14는 테스트된 14개의 제형 중에서 최적으로 선택되었고, 그러므로 후속 연구에서 추가로 평가될 3개의 제형으로 선택되었다.
6.2 실시 예 2 - 벌크 약물 물질(BDS) 냉동-해동 및 쉐이크 스터디
제형 F4, F9 및 F14는 위의 섹션 6.1에 기재된 바와 같이 제조되었다. 제형 F4, F9, 및 F14 각각은 -20℃ 및 -70℃ 모두에서 냉동시키고, 이후 20℃-25℃ 사이에서 해동하는 1, 3, 및 10 사이클에 도입되었다. 상기 샘플들은 육안 검사, 농도(A280) 측정, 탁도(A330) 측정, SE-HPLC, SDS-PAGE(R&NR)에 의해 분석되었다. 10 사이클의 동결-해동 연구에 대해, 샘플들은 RP-HPLC NPI에 의해 또한 분석되었다.
재료 요건 및 샘플 맵은 아래 표 10에 나타난다:
Figure pct00067
아래 표 11은 어세이 및 시점을 열거한다.
Figure pct00068
24시간 동안 RT에서의 교반 연구는 각 제형에 대해 또한 수행되었고, 모든 테스트 샘플은 시각, 농도(A280), 탁도(A330), SE-HPLC, 및 HIAC에 대해 분석되었다. 위 연구로부터 선택된 샘플은 iCIEF 및 효능 연구에도 또한 사용되었다.
제형 바이얼링 및 스토퍼링, 교반 연구 디자인, 동결-해동 연구 디자인, 및 제형 표준은 아래 기술된 바와 같다.
제형 바이얼링 및 스토퍼링
멸균 여과 및 충전이 Baker SG600 층류 기류 후드에서 수행되었다. 제형 및 플라시보는 무균 기술(Millipore Millex-GV 0.22 μm PVDF 주사기 필터, #SLGV033RS)을 사용하여 멸균-여과되었다. 여과된 AGS-22M6E 및 여과된 제형 버퍼(플라시보)는 멸균 팁을 갖는 5 mL 전자 피펫을 이용하여 멸균 스크류-캡 폴리카보네이트 병(Nalgene 5-ml, #3500-05)에 이송되었다.
교반 연구 디자인
제형당 하나의 바이알이 표준 냉동 박스에 똑바로 세워졌다. 이후 상기 박스는 실온에서 24시간 동안 500rpm으로 설정된 IKA-VIBRAMAX-VXR 오비탈 셰이커에 부착되었다. 이후 상기 샘플은 제거되었고, 분석할 때까지 70℃에서 저장되었다. 각 샘플의 3 분취(aliquots)의 세트(각 샘플에 대해 70 ㎕ 분취)는 0.22 ㎛ 필터를 통해 여과한 후 -70℃에서 동결되었다. 분석 테스트 후, 남은 물질은 재테스트가 필요한 경우를 대비하여 2-8℃에서 밤새 저장되었다. 모든 분석이 완료된 후, 나머지 물질은 -70℃에서 저장되었다. 2개의 동결된 분취가 cIEF 및 효능 분석을 위해 사용되었다.
동결-해동(-70℃ 및 -20℃) 안정성 연구 디자인
제형당 1개의 바이얼(5mL 폴리카보네이트 병 내 1mL 충전)은 냉동을 허용하는 적어도 4시간 동안 -70℃ 및 -20℃ 냉동고에 똑바로 배치되었다. 해동을 위해, 각 바이얼은 저장고로부터 제거되었고, 얼음이 더 이상 관찰되지 않을 때까지 실온에서 해동되었고, 이후 상기 바이얼은 부드럽게 휘저어졌다. 이는 하나의 완전한 동결-해동 사이클을 구성했다. 10회의 동결-해동 사이클이 각각의 테스트된 제형 샘플 바이얼에 대해 완료되었다. 최종 동결-해동 사이클 후, 모든 샘플은 분석 테스트로 평가되었다. 상기 샘플들은 다음의 방법에 의해 분석되었다: 시각적 외관, A280/A248, 탁도(A330), SE-HPLC, RP-HPLC-NPI, 및 SDS-PAGE(R&NR). 각 샘플의 3개의 분취의 세트(각 샘플에 대해 70㎕ 분취)는 0.22 ㎛ 필터를 통해 여과한 후 -70℃에서 냉동되었다. 분석 테스트 후, 남은 물질은 재테스트가 필요한 경우를 대비하여 2-8℃에서 밤새 저장되었다. 모든 분석이 완료된 후, 나머지 물질은 -70℃에서 저장되었다. 2개의 동결된 분취가 cIEF 및 효능 분석을 위해 사용되었다.
제형 표준
5.0% 수크로스, 0.02% Tween 20, pH 6.0의 12.8 mg/mL의 15 mL의 AGS-22M6E 출발 물질이 취해졌고, 500 ㎕/바이얼로 분취되었고, 이후 본 연구의 제형 표준으로서 -70℃에서 저장되었다.
결과
시각적 외관: 본 연구에서 모든 샘플에 대한 시각적 외관이 분석되었고, 쉐이킹하여도, 어떤 입자도 보이지 않았다.
A280 및 A330 분석: 본 연구에서 상이한 조건에 적용된 제형에 대한 A280 및 A330 데이터는 아래 표 12에 요약된다. 나타난 바와 같이, 쉐이킹 또는 동결-해동의 어떤 조건에서도 단백질 농도 변화는 없었다. 또한, 동결-해동 또는 쉐이킹에 따른 탁도의 증가도 없었다.
Figure pct00069
SDS-PAGE 분석: SDS-PAGE 분석 결과는 도 2a 및 2b에 도시된다. 도시된 바와 같이, 쉐이크 연구 샘플 및 동결-해동 샘플에 대한 SDS-PAGE에 의한 어떠한 변화도 없다. 환원된 및 비-환원된 겔 모두 제형 표준과 유사하다.
RP-HPLC 분석: 10-사이클 동결-해동 샘플에 대해, RP-HPLC 분석이 수행되었다. RP-HPLC에 의해 분석된 바와 같이 어떤 제형에서도 SGD1010 피크의 증거는 보이지 않았다(데이터는 여기에 나타나지 않음).
SE-HPLC 분석: SE-HPLC 분석 결과는 아래 표 13에 요약된다. 나타난 바와 같이, 3개 제형(F4, F9 및 F14) 또는 플라시보 어느 것에 대해서도 T0 및 쉐이크 샘플 또는 동결-해동 샘플 사이에서 관찰된 차이가 없었다.
Figure pct00070
각 연구 조건에서 각 BDS 제형에 대해 얻어진 SEC 프로파일은 분석되었다(데이터는 여기에 나타내지 않음). T=0에서의 BDS와 비교하여, 임의의 조건에서 임의의 제형에 대해 확인되는 차이가 없었다.
아래의 표 14는 테스트된 3개 제형 각각에 대한 BDS 샘플에 대한 HIAC 데이터를 요약한다. 24시간 동안 RT에서 쉐이킹 전후의 샘플에 대한 결과의 비교는 모든 제형에 대해 100개 미만의 입자가 10㎛ 내지 25㎛ 사이의 범위에 있고, 2개 미만의 입자가 25㎛ 범위에 있음을 나타낸다.
Figure pct00071
도 2c에서 차트화된 바와 같이, 제형 F9 및 F14는 교반 후 약간 증가된 누적 카운트를 나타냈고, F4는 교반 전 및 후에 유사성을 나타냈다(10 및 25㎛에 대한 모든 카운트는 USP 리미트 미만임).
전반적으로, 결과는 테스트된 3개의 BDS 제형 모두 동결-해동 사이클 및 교반 처리 하에서 훌륭한 안정성을 나타내고 어떤 분석 방법에 의해서도 T=0에 비해 어떤 샘플에서도 변화가 보이지 않았음을 입증했다.
6.3 실시 예 3 - 동시 BDS 및 약물 생성물(DP 제형 연구
본 연구는 위 섹션 6.2에 기술된 연구와 함께 수행되었다. 본 연구에 사용된 제형 조성물 및 재료는 섹션 6.2에 기술된 것들과 동일하다.
재료 요건 및 샘플 맵은 아래 표에 나타난다.
Figure pct00072
시점 및 어세이는 아래 표에 기술된 바와 같다.
Figure pct00073
참고: 연구의 액체 암에 대한 샘플은 동결 건조된 암의 샘플이 제조될 때까지 -70℃에서 동결되었다. 동결된 액체 샘플은 이후 동결건조된 샘플이 조건에 배치된 것과 동시에 조건에 배치되었다고, 이에 본 연구의 액체 및 동결건조된 암은 모두 t=0을 동일하게 만들었다.
특정 동결 건조 사이클 파라미터는 아래 표에 서술된다. 동결 건조가 완료된 후, 바이얼은 50mT의 진공하에서 스토퍼링되었다.
Figure pct00074
액체 제형 2-8℃ 및 -70℃ 안정성 연구 디자인
제형 및 플라시보 바이얼은 -70℃로 설정된 냉동고 및 2-8℃로 설정된 인큐베이터에 똑바로 배치되었다. 각 시점에서, 각 제형에 대한 하나의 활성 및 하나의 플라시보 바이얼은 분석 테스트를 위한 샘플 맵에 따른 저장 조건으로부터 제거되었다. 분석 테스트 후, 재-테스트가 필요한 경우를 대비하여, 나머지 재료는 2-8℃에서 저장되었다. 분취는 -70℃에서 저장되었고, cIEF 및 활성 테스트에 사용되었다.
동결건조된 제형 2-8℃, 25℃, 및 40℃ 안정성 연구 디자인
제형 및 플라시보 바이얼은 2-8℃로 설정된 인큐베이터, 25℃/60% RH로 설정된 인큐베이터, 및 40℃/75% RH로 설정된 인큐베이터에 똑바로 배치되었다. 각 시점에서, 각 제형에 대한 하나의 활성 및 하나의 플라시보 바이얼은 분석 테스트를 위해 샘플 맵을 따라 저장 조건으로부터 제거되었다. 분석 테스트 후, 남은 재료는 재-테스트가 필요할 경우를 대비하여 2-8℃에서 저장되었다. 분취는 -70℃에서 저장되었고, cIEF 및 활성 테스트를 위해 사용되었다.
본 연구에서 사용된 제형 표준은 위의 섹션 6.2의 그것과 동일하다.
동결 건조 사이클 분석: 일반적인 동결 건조 사이클은 동결, 1차 건조 및 2차 건조 단계를 포함한다. 동결 및 건조 공정 동안, 얼음의 승화는 예컨대 플라시보 샘플 바이얼에 배치된 열전대 프로브의 판독값, 커패시턴스 압력계 및 피라니 게이지 압력 판독값의 분기 및 이후 일치, 및 챔버 헤드 스페이스의 상대 습도 변화를 추적하는 "이슬점" 측정과 같은, 몇가지 개별 지표를 참조할 수 있다
평균 생성물 열전대 온도, 커패시턴스 압력계/피라니 게이지 판독값 차이, 및 이슬점 프로파일을 비교함으로써 각각이 서로 잘 연관되어 있음을 입증할 수 있다.
BDS 제형의 안정성: 2-8℃, 및 -70℃ 저장 조건 및 2-8℃, 25℃, 및 40℃ 저장 조건에서 BDS 제형의 안정성은 T=0, 2, 4, 8, 및 12주 시점에서 평가되었다. 액체 및 재구성된 동결건조된 샘플들은 각 시점에서 농도(A280), 탁도(A330), SE-HPLC, SDS-PAGE(R 및 NR) 및 RP-HPLC NPI에 의해 분석되었다. 동결 건조된 의약품(DP)의 경우, 삼투압은 동결 건조 전과 재구성 후 t = 0에서만 측정되었고; 케이크 외관 및 재구성 시간은 각 시점에서 측정되었고; 및 Karl Fischer(잔류 수분)는 T = 0 및 T = 12주에서만 측정되었다.
시각적 외관 및 재구성 시간: 세 가지 제형 모두에 대한 케이크 형성은 비슷했다. 세 가지 제형 모두에 대한 활성 및 플라시보 모두는 반짝이는 표면을 가진 흰색의 약간 갈라진 케이크를 형성했다. 모든 구조는 그대로 유지되었다. 활성 및 플라시보 사이에는 차이가 없었다. 이 제형 사이에는 차이가 없었다. 2, 4, 8 및 12주 동안 서로 다른 조건에서 저장된 모든 제형에 대해, 케이크의 시각적 외관은 아래 표에 나타낸 바와 같이 T = 0과 유사했다.
Figure pct00075
수분 분석: 동결 건조가 완료된 후, 각 제형에서 하나의 활성 및 하나의 플라시보 바이얼은 잔류 수분 테스트를 위해 할당되었다. 아래 표 및 도 3a에 나타난 바와 같이, F4 및 F14에 대한 활성 및 플라시보의 잔류 수분은 0.24 내지 0.70% 범위로 매우 가깝다. F9는 F4 및 F14보다 모든 시점에서 더 높은 잔류 수분을 가졌다.
Figure pct00076
샘플들이 12주 동안 상이한 조건에서 인큐베이션된 후, 각 제형에 대한 잔류 수분은 활성 및 플라시보 모두에 대해 다시 테스트되었다. 2-8℃에서 12주 동안 저장된된 세 가지 제형 모두의 잔류 수분은 t=0과 유사했다. F4 및 F14는 25℃ 및 40℃에서 12주 동안 저장된 후 t = 0에 비해 증가된 수분을 가졌다.
테스트된 모든 시점에 대해, 4.7 mL의 WFI로 재구성 후, 재구성된 제형 및 플라시보 모두는 무색 투명했다. 눈에 보이는 입자는 관찰되지 않았다. 모든 시점에서 모든 조건에서 저장된 BDS 샘플도 투명하고 무색이었다. 눈에 보이는 입자는 관찰되지 않았다.
A280 및 삼투압 분석: 충전 및 동결 건조 전에, 제형의 단백질 농도는 이중으로 확인되었고, 10 mg/mL의 목표 농도의 ± 1 mg/mL 이내로 확인되었다. 4.7 mL의 WFI로 재구성 후, 제형의 단백질 농도는 동결 건조 전 BDS의 ± 1 mg/mL 이내였다(아래 표 20 참조, BDS, t = 0). 제형화된 샘플 및 버퍼의 삼투압도 충전 전 및 재구성 후에 이중으로 테스트 되었다. 동결 건조 전과 재구성 후의 삼투압은 187 내지 194 mOsm/kg이었다.
상이한 조건에서 저장된 BDS 및 DP 샘플의 단백질 농도 결과는 하기 표 20 및 도 3b에 나타나 있다. 대부분의 조건에서 단백질 농도에는 변화가 없었다. 그러나 2-8 ℃에서 저장된 BDS 샘플은 예상치 못한 단백질 농도 증가를 보여주었다. 두 가지 가능한 이유가 있었다: 1) 바이얼에 존재하는 응축이 반전 후 완전히 혼입되지 않을 수 있다. 병의 측면에서 모든 응축을 캡처하기 위해 노력했지만 일부 응축은 병의 캡에 갇혀있을 수 있다; 2) 병에 결함있는 실이 있는 경우, 샘플의 일부 증발이 발생할 수 있지만, 이 문제는 4mL 약물 물질이 병에 채워지고 2-8 ℃에서 12주 동안 저정한 이전 연구에서는 발견되지 않았다.
Figure pct00077
Figure pct00078
A330 분석 : BDS 및 DP 재구성된 활성 및 플라시보 바이얼 모두의 A330 측정은 아래 표 22 및 도 3c에 나타난다. 활성 바이얼의 A330 값은 플라시보보다 약간 높았으며, 이는 AGS-22M6E 단백질이 제형 탁도에 기여한다는 것을 나타낸다. 모든 조건의 저장에서 활성 및 플라시보 샘플 모두에 대한 탁도의 현저한 증가는 없었다.
Figure pct00079
SDS-PAGE 분석: 도 3d 및 3e는 2-8 ℃ 및 -70 ℃ 저장 조건에서 BDS T=0 (사전 동결 건조) 및 T=12 주 샘플에 대한 SDS-PAGE 분석을 나타낸다. 도 3f, 3g, 3h는 2-8℃, 25℃ 및 40℃ 저장 조건에서 T=0 및 T=12 주 샘플에서 DP에 대한 SDS-PAGE 분석을 나타냈다. 모든 조건에서 12 주 저장 후 모든 제형에 대해 명백한 변화가 보이지 않았다.
RP-HPLC 분석: 이 연구의 모든 BDS 및 DP 샘플은 RP-HPLC NPI 방법으로도 테스트 되었다. 어떤 조건에서도 어떠한 제형에서도 SGD1010 피크가 관찰되지 않았다(데이터는 여기에 표시되지 않음). 각 시점에서 실행된 모든 대조군의 경우, 제형 표준에서 SGD1010의 스파이크 회수율은 약 100%였다. T=4주, 8주 및 12주 시점에서, 10mM SGD1010 스톡의 새로운 희석액이 새로 준비된 희석제와 함께 사용되었지만 SGD1010 피크는 스플릿되었고, 제형 표준에 스파이크된 SGD1010은 스플릿되지 않았다(데이터는 여기에 표시되지 않음). 이것은 시퀀스 전체에서 일관되었다(데이터는 여기에 표시되지 않음). 계산된 회수율은 스플릿된 피크의 결합된 영역을 사용했다.
SE-HPLC 분석: 아래 표 23은 본 연구의 각 시점에서 실행된 제형 표준에 대한 SE-HPLC 데이터를 요약한다. 상기 데이터는 동일한 샘플에 대한 상이한 실행에서 메인 피크 및 포스트 피크 백분율의 변동 수준을 나타낸다.
Figure pct00080
아래의 표 24는 12주 동안 2-8 ℃ 및 -70 ℃ 조건에서 저장된 BDS 샘플에 대한 HMW 피크, 메인 피크 및 LMW 피크의 백분율을 요약한 SE-HPLC 데이터를 서술한다(데이터는 여기에 표시되지 않음). 다른 시점에서 메인 피크 및 포스트 피크의 백분율 변화는 제형 표준에서 볼 수 있는 변화와 매우 유사했다(데이터는 여기에 표시되지 않음). 따라서 큰 변화가 없었으며 3가지 제형 모두 액체 형태로 2-8 ℃ 및 -70 ℃에서 12 주 후에 안정한 것으로 결론지을 수 있다. 제형 간에 큰 차이는 관찰되지 않았다.
Figure pct00081
아래의 표 25는 12주 동안 2-8 ℃, 25 ℃/60% RH 및 40℃/75% RH 조건에서 저장된 동결 건조된 AGS-22M6E에 대한 HMW 피크, 메인 피크 및 LMW 피크의 백분율을 요약한 SE-HPLC 데이터를 서술한다. 도 3I는 상이한 조건에서 저장된 AGS-22M6E BDS 및 DP에 대한 SE-HPLC 데이터를 그래프로 나타낸다. 상이한 시점에서 메인 피크 및 포스트 피크의 백분율 변화는 제형 표준에서 볼 수 있는 변화와 매우 유사하여, 제형 샘플에서 큰 변화가 발생하지 않았음을 나타낸다. 상이한 조건에서 저장된 상이한 DP 제형에 대한 SE-HPLC 오버레이도 분석되었다(데이터는 여기에 표시되지 않음). 동결 건조 전후에는 차이가 관찰되지 않았다. 3가지 제형은 모두 동결 건조된 형태로 2-8 ℃, 25 ℃ 및 40 ℃에서 12 주 후에 안정적이었다. 모든 제형은 유사하게 작동했고, 동결 건조 후 고품질의 제품을 제공했고, 또한, T = 0 및 쉐이킹 및 동결-해동 연구 후 모두에서 각각의 경우에 상응하는 BDS에 대해 보이는 허용 가능한 안정성 프로파일을 제공했다.
Figure pct00082
Figure pct00083
Figure pct00084
6.4 실시 예 4 - 동결 건조 사이클 개발
상기 섹션에서 설명된 제형 F4는 이 추가 동결 건조 사이클 개발 연구를 위해 선택되었다. 동결 건조 사이클 파라미터는 아래 표에 나와 있다. 동결 건조가 완료된 후, 바이얼은 50mT의 진공하에서 스토퍼링되었다. 바이얼의 트레이는 동결 건조기에서 제거되었고, 바이얼은 알루미늄 씰과 개별적으로 크림핑되었다.
Figure pct00085
동결 건조된 제형 연구 디자인
각 충전 부피 구성에 대해, 5개의 제품 바이얼은 5개 플라시보 바이얼에 더하여 충전되었다. 활성 제품 및 플라시보 각각으로부터의 2개의 바이얼은 T=0에서각 충전 부피에 대해 테스트되었다(1개의 바이얼이 잔류 수분에 대해 테스트되었고, 1개의 바이얼은 재구성되어 연구 요약에 설명된 어세이를 사용하여 테스트되었다). 또한, 활성 및 플라시보 각각으로부터의 2개의 바이얼은 동결-건조 공정 동안의 온도 모니터링을 위해 조사되었다.
본 연구에 사용되는 제형 표준은 5.0% 수크로스, 0.02% Tween 20, pH 6.0의 12.8 mg/mL의 AGS-22M6E 출발 물질이었다.
결과
동결 건조 사이클 분석: 총 보존 사이클 시간은 2.6일이었으며, 이는 5mL 충전 부피에 대해 설정된 4.7 일 사이클 시간보다 상당히 짧았다(위의 섹션 6.3 참조). 그러나 현재 연구의 2.6 일 사이클 시간은 두 충전 부피에 대해서 최적화된 사이클 시간을 나타내지 않는다. 사이클과 관련된 개별 판독 값을 주의 깊게 평가하면 두 충전 부피에 대해 최적화된 사이클 시간의 추정이 이루어질 수 있다. 이슬점 모니터는 두 충전 부피에서 발생하는 수분에 반응하므로 3.0 mL 또는 1.5 mL 충전 부피에 대해 더 최적의 건조 시간을 추정하기 위한 이 연구에서는 사용되지 않았다. 유사하게, 피라니 게이지는 일반적으로 1차 건조 시간의 끝점을 나타내는 훌륭한 지표이지만, 이 경우에도 선반 상의 모든 바이얼로부터의 얼음의 승화에 반응하므로 가이드만을 제공한다. 대신 이 연구의 목적을 위해 제품 온도 모니터링은 각 개별 충전 부피에 대한 건조 시간을 추정하는 가장 신뢰할 수 있는 도구를 제공한다. 이 연구에서 열전대 프로브는 활성 및 플라시보 바이얼에 모두 배치되었으며 활성 및 플라시보에 대한 제품 온도 프로파일 간의 밀접한 일치가 두 충전 부피에 대해 관찰되었다.
제품 온도가 건조 시간의 정확한 측정을 제공한다는 확신으로, 두 충전 부피에 대한 데이터의 비교(데이터는 표시되지 않음)는 1.5 mL 충전 부피가 대략 1.3 일 내에 건조된다는 것을 입증하며, 이는 대략 1.8 일 내에 건조되는 3.0 mL 충전 부피보다 상당히 빠르다.
케이크 외관: 모든 케이크는 반짝이는 표면을 가진 매우 약간 수축된 완벽한 케이크였다. 이들은 모두 온전한 구조를 유지했다. 대부분의 바이얼에는 케이크에 균열이 없었습니다. 바이을을 뒤집었을 때, 케이크는 바이얼에 부착된 채로 남아 있지 않았고, 바이얼에서 그대로 떨어졌다. 일부 바이얼에서, 케이크가 바이얼에 부착된 메니스커스 원의 에지 주변에서 미세한 균열이 관찰되었다. 충전 부피 모두에서 활성 및 플라시보의 케이크 형성 사이에는 차이가 없었다. 케이크 외관은 섹션 6.3의 연구의 5mL 충전 부피 동결 건조 제품에 대해 기록된 케이크 외관과도 유사했다.
A280 분석: 충전 및 동결 건조 전에, 제형의 단백질 농도는 이중으로 확인되었고, 10 mg/mL의 목표 농도에 근접한 것으로 밝혀졌다. 각각 WFI 2.8 mL 및 1.4 mL로 재구성 후에, 3.0 mL 및 1.5 mL 충전 제형에 대한 단백질 농도는 또한 동결 건조 전의 그것과 근접했다(아래 표 참조).
Figure pct00086
잔류 수분, 재구성 시간, A330, 삼투압 및 시각적 외관: 동결 건조가 완료된 후, 활성 및 플라시보 바이얼의 각 충전 부피 중 하나의 바이알은 잔류 수분 테스트를 위해 할당되었다. 아래 표 28에 나타난 바와 같이, 활성의 잔류 수분은 3.0 mL 충전의 경우 0.18%에서 1.5 mL 충전의 경우 0.29% 범위였다. 잔류 수분은 두 충전 부피 모두 0.34%로 플라시보의 경우 약간 더 높게 결정되었다. 재구성 시간은 테스트된 모든 바이얼에 대해 1분 미만이었으며, 1.5 mL 충전 부피 샘플(평균 20초)에 비해 3.0 mL 충전 부피(평균 36초)에 대해 약간 더 높은 시간이 기록되었다. 활성 및 플라시보 바이얼 사이의 재구성 시간에서 관찰된 뚜렷한 차이는 없었다. 유사하게, 활성 및 플라시보 모두, 재구성된 모든 샘플의 시각적 외관은 미립자 없이 투명하고 무색으로 보고되었다.
Figure pct00087
활성 및 플라시보 바이얼의 탁도(A330) 측정은 또한 위의 표에 나와 있다. 나타난 바와 같이, 동결 건조 전 및 후 샘플 모두에 대해, 활성 바이얼에 대한 A330 값은 플라시보보다 약간 높았고, AGS-22M6E가 제형 탁도에 기여하는 것으로 나타났던 섹션 6.3에서 논의된 이전 결과를 확인하였다.
제형화된 샘플 및 버퍼의 삼투압은 충전 전 및 재구성 후에 이중으로 테스트 되었다. 위의 표 28은 동결 건조 전 또는 재구성 후의 삼투압에 눈에 띄는 차이가 없음을 나타내는 상기 데이터를 요약한다. 이들은 섹션 6.3의 5.0 mL 충전 구성 샘플에 대해 결정된 삼투압과 유사했다.
도 4는 제형 표준과 비교하여, 환원된 및 비-환원된 둘 다의 각 충전 부피에 대한 SDS-PAGE 분석을 나타낸다. 상기 결과는 충전 부피를 변경하는 것이 SDS-PAGE 프로파일에 어떠한 영향도 미치지 않았음을 입증한다.
아래 표 29는 각 충전 부피에서 동결 건조된 샘플에 대한 HMW 피크, 메인 피크 및 LMW 피크의 백분율을 포함하는 SEC-HPLC 데이터를 요약한다. 평가된 충전 부피에 관계없이, 동결 건조된 샘플은 유사하게 작동했으며, 동결 건조 전 및 후에 측정된 메인 피크 면적에는 차이가 없었다. 충전 부피에 대한 변화는 관찰되지 않았으며 그 프로파일은 섹션 6.3에 설명된 연구에서 동결 건조된 5 mL 충전 부피와 유사했다.
Figure pct00088
전술한 바로부터, 특정 구현 예가 예시의 목적으로 여기에 설명되었지만, 다양한 수정이 본원에 제공된 사상 및 범위를 벗어나지 않고 이루어질 수 있음이 이해될 것이다. 위에 언급된 모든 참고 문헌은 그들의 전체가 참조로서 여기에 통합된다.
7. 서열 목록
본 명세서는 서열 목록의 컴퓨터 판독 가능한 형식(CRF) 사본과 함께 제출된다. "14369-244-228_SEQ_LISTING.txt"라는 제목의 CRF는 2019년 10월 11일에 생성되었고 39,693 바이트 크기를 가지며, 여기에 전체가 참조로서 병합된다.
SEQUENCE LISTING <110> AGENSYS, INC. SEATTLE GENETICS, INC. <120> PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS COMPRISING ANTI-191P4D12 ANTIBODY DRUG CONJUGATES AND METHODS OF USE THEREOF <130> 14369-244-228 <140> <141> <150> US 62/774,819 <151> 2018-12-03 <160> 23 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 3464 <212> DNA <213> Homo sapiens <220> <221> CDS <222> (264)...(1796) <220> <221> misc_feature <222> (1)...(3464) <223> 191P4D12 <400> 1 ggccgtcgtt gttggccaca gcgtgggaag cagctctggg ggagctcgga gctcccgatc 60 acggcttctt gggggtagct acggctgggt gtgtagaacg gggccggggc tggggctggg 120 tcccctagtg gagacccaag tgcgagaggc aagaactctg cagcttcctg ccttctgggt 180 cagttcctta ttcaagtctg cagccggctc ccagggagat ctcggtggaa cttcagaaac 240 gctgggcagt ctgcctttca acc atg ccc ctg tcc ctg gga gcc gag atg tgg 293 Met Pro Leu Ser Leu Gly Ala Glu Met Trp 1 5 10 ggg cct gag gcc tgg ctg ctg ctg ctg cta ctg ctg gca tca ttt aca 341 Gly Pro Glu Ala Trp Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ser Phe Thr 15 20 25 ggc cgg tgc ccc gcg ggt gag ctg gag acc tca gac gtg gta act gtg 389 Gly Arg Cys Pro Ala Gly Glu Leu Glu Thr Ser Asp Val Val Thr Val 30 35 40 gtg ctg ggc cag gac gca aaa ctg ccc tgc ttc tac cga ggg gac tcc 437 Val Leu Gly Gln Asp Ala Lys Leu Pro Cys Phe Tyr Arg Gly Asp Ser 45 50 55 ggc gag caa gtg ggg caa gtg gca tgg gct cgg gtg gac gcg ggc gaa 485 Gly Glu Gln Val Gly Gln Val Ala Trp Ala Arg Val Asp Ala Gly Glu 60 65 70 ggc gcc cag gaa cta gcg cta ctg cac tcc aaa tac ggg ctt cat gtg 533 Gly Ala Gln Glu Leu Ala Leu Leu His Ser Lys Tyr Gly Leu His Val 75 80 85 90 agc ccg gct tac gag ggc cgc gtg gag cag ccg ccg ccc cca cgc aac 581 Ser Pro Ala Tyr Glu Gly Arg Val Glu Gln Pro Pro Pro Pro Arg Asn 95 100 105 ccc ctg gac ggc tca gtg ctc ctg cgc aac gca gtg cag gcg gat gag 629 Pro Leu Asp Gly Ser Val Leu Leu Arg Asn Ala Val Gln Ala Asp Glu 110 115 120 ggc gag tac gag tgc cgg gtc agc acc ttc ccc gcc ggc agc ttc cag 677 Gly Glu Tyr Glu Cys Arg Val Ser Thr Phe Pro Ala Gly Ser Phe Gln 125 130 135 gcg cgg ctg cgg ctc cga gtg ctg gtg cct ccc ctg ccc tca ctg aat 725 Ala Arg Leu Arg Leu Arg Val Leu Val Pro Pro Leu Pro Ser Leu Asn 140 145 150 cct ggt cca gca cta gaa gag ggc cag ggc ctg acc ctg gca gcc tcc 773 Pro Gly Pro Ala Leu Glu Glu Gly Gln Gly Leu Thr Leu Ala Ala Ser 155 160 165 170 tgc aca gct gag ggc agc cca gcc ccc agc gtg acc tgg gac acg gag 821 Cys Thr Ala Glu Gly Ser Pro Ala Pro Ser Val Thr Trp Asp Thr Glu 175 180 185 gtc aaa ggc aca acg tcc agc cgt tcc ttc aag cac tcc cgc tct gct 869 Val Lys Gly Thr Thr Ser Ser Arg Ser Phe Lys His Ser Arg Ser Ala 190 195 200 gcc gtc acc tca gag ttc cac ttg gtg cct agc cgc agc atg aat ggg 917 Ala Val Thr Ser Glu Phe His Leu Val Pro Ser Arg Ser Met Asn Gly 205 210 215 cag cca ctg act tgt gtg gtg tcc cat cct ggc ctg ctc cag gac caa 965 Gln Pro Leu Thr Cys Val Val Ser His Pro Gly Leu Leu Gln Asp Gln 220 225 230 agg atc acc cac atc ctc cac gtg tcc ttc ctt gct gag gcc tct gtg 1013 Arg Ile Thr His Ile Leu His Val Ser Phe Leu Ala Glu Ala Ser Val 235 240 245 250 agg ggc ctt gaa gac caa aat ctg tgg cac att ggc aga gaa gga gct 1061 Arg Gly Leu Glu Asp Gln Asn Leu Trp His Ile Gly Arg Glu Gly Ala 255 260 265 atg ctc aag tgc ctg agt gaa ggg cag ccc cct ccc tca tac aac tgg 1109 Met Leu Lys Cys Leu Ser Glu Gly Gln Pro Pro Pro Ser Tyr Asn Trp 270 275 280 aca cgg ctg gat ggg cct ctg ccc agt ggg gta cga gtg gat ggg gac 1157 Thr Arg Leu Asp Gly Pro Leu Pro Ser Gly Val Arg Val Asp Gly Asp 285 290 295 act ttg ggc ttt ccc cca ctg acc act gag cac agc ggc atc tac gtc 1205 Thr Leu Gly Phe Pro Pro Leu Thr Thr Glu His Ser Gly Ile Tyr Val 300 305 310 tgc cat gtc agc aat gag ttc tcc tca agg gat tct cag gtc act gtg 1253 Cys His Val Ser Asn Glu Phe Ser Ser Arg Asp Ser Gln Val Thr Val 315 320 325 330 gat gtt ctt gac ccc cag gaa gac tct ggg aag cag gtg gac cta gtg 1301 Asp Val Leu Asp Pro Gln Glu Asp Ser Gly Lys Gln Val Asp Leu Val 335 340 345 tca gcc tcg gtg gtg gtg gtg ggt gtg atc gcc gca ctc ttg ttc tgc 1349 Ser Ala Ser Val Val Val Val Gly Val Ile Ala Ala Leu Leu Phe Cys 350 355 360 ctt ctg gtg gtg gtg gtg gtg ctc atg tcc cga tac cat cgg cgc aag 1397 Leu Leu Val Val Val Val Val Leu Met Ser Arg Tyr His Arg Arg Lys 365 370 375 gcc cag cag atg acc cag aaa tat gag gag gag ctg acc ctg acc agg 1445 Ala Gln Gln Met Thr Gln Lys Tyr Glu Glu Glu Leu Thr Leu Thr Arg 380 385 390 gag aac tcc atc cgg agg ctg cat tcc cat cac acg gac ccc agg agc 1493 Glu Asn Ser Ile Arg Arg Leu His Ser His His Thr Asp Pro Arg Ser 395 400 405 410 cag ccg gag gag agt gta ggg ctg aga gcc gag ggc cac cct gat agt 1541 Gln Pro Glu Glu Ser Val Gly Leu Arg Ala Glu Gly His Pro Asp Ser 415 420 425 ctc aag gac aac agt agc tgc tct gtg atg agt gaa gag ccc gag ggc 1589 Leu Lys Asp Asn Ser Ser Cys Ser Val Met Ser Glu Glu Pro Glu Gly 430 435 440 cgc agt tac tcc acg ctg acc acg gtg agg gag ata gaa aca cag act 1637 Arg Ser Tyr Ser Thr Leu Thr Thr Val Arg Glu Ile Glu Thr Gln Thr 445 450 455 gaa ctg ctg tct cca ggc tct ggg cgg gcc gag gag gag gaa gat cag 1685 Glu Leu Leu Ser Pro Gly Ser Gly Arg Ala Glu Glu Glu Glu Asp Gln 460 465 470 gat gaa ggc atc aaa cag gcc atg aac cat ttt gtt cag gag aat ggg 1733 Asp Glu Gly Ile Lys Gln Ala Met Asn His Phe Val Gln Glu Asn Gly 475 480 485 490 acc cta cgg gcc aag ccc acg ggc aat ggc atc tac atc aat ggg cgg 1781 Thr Leu Arg Ala Lys Pro Thr Gly Asn Gly Ile Tyr Ile Asn Gly Arg 495 500 505 gga cac ctg gtc tga cccaggcctg cctcccttcc ctaggcctgg ctccttctgt 1836 Gly His Leu Val 510 tgacatggga gattttagct catcttgggg gcctccttaa acacccccat ttcttgcgga 1896 agatgctccc catcccactg actgcttgac ctttacctcc aacccttctg ttcatcggga 1956 gggctccacc aattgagtct ctcccaccat gcatgcaggt cactgtgtgt gtgcatgtgt 2016 gcctgtgtga gtgttgactg actgtgtgtg tgtggagggg tgactgtccg tggaggggtg 2076 actgtgtccg tggtgtgtat tatgctgtca tatcagagtc aagtgaactg tggtgtatgt 2136 gccacgggat ttgagtggtt gcgtgggcaa cactgtcagg gtttggcgtg tgtgtcatgt 2196 ggctgtgtgt gacctctgcc tgaaaaagca ggtattttct cagaccccag agcagtatta 2256 atgatgcaga ggttggagga gagaggtgga gactgtggct cagacccagg tgtgcgggca 2316 tagctggagc tggaatctgc ctccggtgtg agggaacctg tctcctacca cttcggagcc 2376 atgggggcaa gtgtgaagca gccagtccct gggtcagcca gaggcttgaa ctgttacaga 2436 agccctctgc cctctggtgg cctctgggcc tgctgcatgt acatattttc tgtaaatata 2496 catgcgccgg gagcttcttg caggaatact gctccgaatc acttttaatt tttttctttt 2556 ttttttcttg ccctttccat tagttgtatt ttttatttat ttttattttt attttttttt 2616 agagatggag tctcactatg ttgctcaggc tggccttgaa ctcctgggct caagcaatcc 2676 tcctgcctca gcctccctag tagctgggac tttaagtgta caccactgtg cctgctttga 2736 atcctttacg aagagaaaaa aaaaattaaa gaaagccttt agatttatcc aatgtttact 2796 actgggattg cttaaagtga ggcccctcca acaccagggg gttaattcct gtgattgtga 2856 aaggggctac ttccaaggca tcttcatgca ggcagcccct tgggagggca cctgagagct 2916 ggtagagtct gaaattaggg atgtgagcct cgtggttact gagtaaggta aaattgcatc 2976 caccattgtt tgtgatacct tagggaattg cttggacctg gtgacaaggg ctcctgttca 3036 atagtggtgt tggggagaga gagagcagtg attatagacc gagagagtag gagttgaggt 3096 gaggtgaagg aggtgctggg ggtgagaatg tcgcctttcc ccctgggttt tggatcacta 3156 attcaaggct cttctggatg tttctctggg ttggggctgg agttcaatga ggtttatttt 3216 tagctggccc acccagatac actcagccag aatacctaga tttagtaccc aaactcttct 3276 tagtctgaaa tctgctggat ttctggccta agggagaggc tcccatcctt cgttccccag 3336 ccagcctagg acttcgaatg tggagcctga agatctaaga tcctaacatg tacattttat 3396 gtaaatatgt gcatatttgt acataaaatg atattctgtt tttaaataaa cagacaaaac 3456 ttgaaaaa 3464 <210> 2 <211> 510 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)...(510) <223> 191P4D12 <400> 2 Met Pro Leu Ser Leu Gly Ala Glu Met Trp Gly Pro Glu Ala Trp Leu 1 5 10 15 Leu Leu Leu Leu Leu Leu Ala Ser Phe Thr Gly Arg Cys Pro Ala Gly 20 25 30 Glu Leu Glu Thr Ser Asp Val Val Thr Val Val Leu Gly Gln Asp Ala 35 40 45 Lys Leu Pro Cys Phe Tyr Arg Gly Asp Ser Gly Glu Gln Val Gly Gln 50 55 60 Val Ala Trp Ala Arg Val Asp Ala Gly Glu Gly Ala Gln Glu Leu Ala 65 70 75 80 Leu Leu His Ser Lys Tyr Gly Leu His Val Ser Pro Ala Tyr Glu Gly 85 90 95 Arg Val Glu Gln Pro Pro Pro Pro Arg Asn Pro Leu Asp Gly Ser Val 100 105 110 Leu Leu Arg Asn Ala Val Gln Ala Asp Glu Gly 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gac gag gac acg gct gtg tat tac tgt gcg aga gca tac 388 Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Tyr 105 110 115 tac tac ggt atg gac gtc tgg ggc caa ggg acc acg gtc acc gtc tcc 436 Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser 120 125 130 135 tca gcc tcc acc aag ggc cca tcg gtc ttc ccc ctg gca ccc tcc tcc 484 Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser 140 145 150 aag agc acc tct ggg ggc aca gcg gcc ctg ggc tgc ctg gtc aag gac 532 Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp 155 160 165 tac ttc ccc gaa ccg gtg acg gtg tcg tgg aac tca ggc gcc ctg acc 580 Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr 170 175 180 agc ggc gtg cac acc ttc ccg gct gtc cta cag tcc tca gga ctc tac 628 Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr 185 190 195 tcc ctc agc agc gtg gtg acc gtg ccc tcc agc agc ttg ggc acc cag 676 Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln 200 205 210 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Ser Arg Trp Gln Gln Gly 425 430 435 aac gtc ttc tca tgc tcc gtg atg cat gag gct ctg cac aac cac tac 1396 Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr 440 445 450 455 acg cag aag agc ctc tcc ctg tcc ccg ggt aaa tga 1432 Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 460 465 <210> 4 <211> 466 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)...(466) <223> Ha22-2(2,4)6.1 heavy chain <400> 4 Met Glu Leu Gly Leu Cys Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Glu Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Ser Ser Tyr Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 85 90 95 Ser Leu Ser Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly 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Leu Trp Phe Pro Gly Ser Arg Cys Asp Ile Gln 10 15 20 25 atg acc cag tct cca tct tcc gtg tct gca tct gtt gga gac aga gtc 147 Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val 30 35 40 acc atc act tgt cgg gcg agt cag ggt att agc ggc tgg tta gcc tgg 195 Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Gly Trp Leu Ala Trp 45 50 55 tat cag cag aaa cca ggg aaa gcc cct aag ttc ctg atc tat gct gca 243 Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile Tyr Ala Ala 60 65 70 tcc act ttg caa agt ggg gtc cca tca agg ttc agc ggc agt gga tct 291 Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser 75 80 85 ggg aca gat ttc act ctc acc atc agc agc ctg cag cct gaa gat ttt 339 Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe 90 95 100 105 gca act tac tat tgt caa cag gct aac agt ttc cct ccc act ttc ggc 387 Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro Thr Phe Gly 110 115 120 gga ggg acc aag gtg gag atc aaa cga act gtg gct gca cca tct gtc 435 Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val 125 130 135 ttc atc ttc ccg cca tct gat gag cag ttg aaa tct gga act gcc tct 483 Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser 140 145 150 gtt gtg tgc ctg ctg aat aac ttc tat ccc aga gag gcc aaa gta cag 531 Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln 155 160 165 tgg aag gtg gat aac gcc ctc caa tcg ggt aac tcc cag gag agt gtc 579 Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val 170 175 180 185 aca gag cag gac agc aag gac agc acc tac agc ctc agc agc acc ctg 627 Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu 190 195 200 acg ctg agc aaa gca gac tac gag aaa cac aaa gtc tac gcc tgc gaa 675 Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu 205 210 215 gtc acc cat cag ggc ctg agc tcg ccc gtc aca aag agc ttc aac agg 723 Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg 220 225 230 gga gag tgt tag 735 Gly Glu Cys 235 <210> 6 <211> 236 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)...(236) <223> Ha22-2(2,4)6.1 light chain <400> 6 Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Phe Pro Gly Ser Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 20 25 30 Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser 35 40 45 Gln Gly Ile Ser Gly Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 50 55 60 Ala Pro Lys Phe Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val 65 70 75 80 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 85 90 95 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 100 105 110 Ala Asn Ser Phe Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 115 120 125 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 130 135 140 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 145 150 155 160 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 165 170 175 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 180 185 190 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 195 200 205 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 210 215 220 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 7 <211> 466 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)...(466) <223> Ha22-2(2,4)6.1 heavy chain <400> 7 Met Glu Leu Gly Leu Cys Trp Val Phe Leu Val Ala Ile Leu Glu Gly 1 5 10 15 Val Gln Cys Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln 20 25 30 Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe 35 40 45 Ser Ser Tyr Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 50 55 60 Glu Trp Val Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala 65 70 75 80 Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn 85 90 95 Ser Leu Ser Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val 100 105 110 Tyr Tyr Cys Ala Arg Ala Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln 115 120 125 Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val 130 135 140 Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala 145 150 155 160 Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser 165 170 175 Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val 180 185 190 Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro 195 200 205 Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys 210 215 220 Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp 225 230 235 240 Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly 245 250 255 Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile 260 265 270 Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 275 280 285 Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His 290 295 300 Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg 305 310 315 320 Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys 325 330 335 Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu 340 345 350 Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr 355 360 365 Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu 370 375 380 Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp 385 390 395 400 Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val 405 410 415 Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp 420 425 430 Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His 435 440 445 Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro 450 455 460 Gly Lys 465 <210> 8 <211> 236 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <221> misc_feature <222> (1)...(236) <223> Ha22-2(2,4)6.1 light chain <400> 8 Met Asp Met Arg Val Pro Ala Gln Leu Leu Gly Leu Leu Leu Leu Trp 1 5 10 15 Phe Pro Gly Ser Arg Cys Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser 20 25 30 Val Ser Ala Ser Val Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser 35 40 45 Gln Gly Ile Ser Gly Trp Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys 50 55 60 Ala Pro Lys Phe Leu Ile Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val 65 70 75 80 Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr 85 90 95 Ile Ser Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln 100 105 110 Ala Asn Ser Phe Pro Pro Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile 115 120 125 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp 130 135 140 Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn 145 150 155 160 Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 165 170 175 Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp 180 185 190 Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr 195 200 205 Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser 210 215 220 Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 225 230 235 <210> 9 <211> 5 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CDR1 of heavy chain <400> 9 Ser Tyr Asn Met Asn 1 5 <210> 10 <211> 17 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CDR2 of heavy chain <400> 10 Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 11 <211> 8 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CDR3 of heavy chain <400> 11 Ala Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 <210> 12 <211> 11 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CDR1 of light chain <400> 12 Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Gly Trp Leu Ala 1 5 10 <210> 13 <211> 7 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CDR2 of light chain <400> 13 Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser 1 5 <210> 14 <211> 9 <212> PRT <213> Homo sapiens <220> <223> CDR3 of light chain <400> 14 Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro Thr 1 5 <210> 15 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> linker <400> 15 Gly Phe Leu Gly 1 <210> 16 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH CDR1 according to IMGT <400> 16 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Asn 1 5 <210> 17 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH CDR2 according to IMGT <400> 17 Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile 1 5 <210> 18 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VH CDR3 according to IMGT <400> 18 Ala Arg Ala Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val 1 5 10 <210> 19 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL CDR1 according to IMGT <400> 19 Gln Gly Ile Ser Gly Trp 1 5 <210> 20 <211> 3 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL CDR2 according to IMGT <400> 20 Ala Ala Ser 1 <210> 21 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VL CDR3 according to IMGT <400> 21 Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro Thr 1 5 <210> 22 <211> 117 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> heavy chain variable region (VH), the 20th amino acid (glutamic acid) to the 136th amino acid (serine) of SEQ ID NO:7 <400> 22 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 Asn Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Tyr Ile Ser Ser Ser Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Ser 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Asp Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ala Tyr Tyr Tyr Gly Met Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr 100 105 110 Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 23 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain variable region (VL), the 23rd amino acid (aspartic acid) to the 130th amino acid (arginine) of SEQ ID NO:8 <400> 23 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Gly Trp 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Phe Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Thr Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn Ser Phe Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg 100 105

Claims (114)

  1. 약제학적 조성물로서,
    (a) 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)의 하나 이상의 유닛에 컨쥬게이트된 191P4D12에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 항체 약물 컨쥬게이트, 여기서 상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:7에 제시된 중쇄 가변 영역의 상보성 결정 영역(CDRs)의 아미노산 서열을 포함하는 CDRs를 포함하는 중쇄 가변 영역 및 SEQ ID NO:8에 제시된 경쇄 가변 영역의 CDRs의 아미노산 서열을 포함하는 CDRs를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하며; 및
    (b) L-히스티딘, 폴리소르베이트-20(TWEEN-20), 및 트레할로스 이수화물 및 수크로스 중 적어도 하나를 포함하는 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, 약제학적 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:9의 아미노산 서열을 포함하는 CDR H1, SEQ ID NO:10의 아미노산 서열을 포함하는 CDR H2, SEQ ID NO:11의 아미노산 서열을 포함하는 CDR H3, SEQ ID NO:12의 아미노산 서열을 포함하는 CDR L1, SEQ ID NO:13의 아미노산 서열을 포함하는 CDR L2, 및 SEQ ID NO:14의 아미노산 서열을 포함하는 CDR L3을 포함하는, 약제학적 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 SEQ ID NO:7의 20번째 아미노산(글루탐산)에서 136번째 아미노산(세린)까지의 범위의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 SEQ ID NO:8 의 23 번째 아미노산 (아스파르트 산)에서 130 번째 아미노산 (아르기닌)까지의 범위의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는, 약제학적 조성물.
  4. 청구항 1에 있어서,
    상기 항체는 SEQ ID NO:7 의 20 번째 아미노산 (글루탐산)에서 466 번째 아미노산 (라이신)까지의 범위의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 및 SEQ ID NO:8의 23 번째 아미노산 (아스파르트 산)에서 236 번째 아미노산 (시스테인)까지의 범위의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는, 약제학적 조성물.
  5. 청구항 1 내지 4 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항원 결합 단편은 Fab, F(ab')2, Fv 또는 scFv 단편인, 약제학적 조성물.
  6. 청구항 1 내지 5 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체는 완전 인간 항체인, 약제학적 조성물.
  7. 청구항 1 내지 6 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 재조합적으로 생성되는, 약제학적 조성물.
  8. 청구항 1 내지 7 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 항체 약물 컨쥬게이트는 다음의 구조를 가지며:
    Figure pct00089

    여기서 L-은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 1 내지 10인, 약제학적 조성물.
  9. 청구항 8에 있어서,
    p는 2 내지 8인, 약제학적 조성물.
  10. 청구항 1에 있어서,
    상기 항체 또는 항원 결합 단편은 링커를 통해 모노메틸 아우리스타틴 E(MMAE)의 각 유닛에 링크되는, 약제학적 조성물.
  11. 청구항 10에 있어서,
    상기 링커는 효소-절단가능한 링커이고, 상기 링커는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 황 원자와 결합을 형성하는, 약제학적 조성물.
  12. 청구항 10에 있어서,
    상기 링커는 -Aa-Ww-Yy-의 식을 가지며; 여기서 -A-는 스트레처 유닛이고, a는 0 또는 1이고; -W-는 아미노산 유닛이고, w는 0 내지 12의 정수이며; -Y-는 스페이서 유닛이고, y는 0, 1, 또는 2인, 약제학적 조성물.
  13. 청구항 12에 있어서,
    상기 스트레처 유닛은 아래 식 (1)의 구조를 가지며; 상기 아미노산 유닛은 발린 시트룰린이고; 및 상기 스페이서 유닛은 아래 식(2)의 구조를 포함하는 PAB 그룹인, 약제학적 조성물.
    Figure pct00090
    식 (1)
    Figure pct00091
    식 (2)
  14. 청구항 12에 있어서,
    상기 스트레처 유닛은 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 황 원자와 결합을 형성하고; 상기 스페이서 유닛은 카바메이트기를 통해 MMAE에 링크되는, 약제학적 조성물.
  15. 청구항 1에 있어서,
    상기 항체 약물 컨쥬게이트는 항체 또는 이의 항원 결합 단편당 1 내지 10 유닛의 MMAE를 포함하는, 약제학적 조성물.
  16. 청구항 15에 있어서,
    상기 항체 약물 컨쥬게이트는 항체 또는 이의 항원 결합 단편당 2 내지 8 유닛의 MMAE를 포함하는, 약제학적 조성물.
  17. 청구항 1 내지 16 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 1 내지 20 mg/mL 농도의 항체 약물 컨쥬게이트를 포함하는, 약제학적 조성물.
  18. 청구항 17에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 5 내지 15 mg/mL 농도의 항체 약물 컨쥬게이트를 포함하는, 약제학적 조성물.
  19. 청구항 17에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 8 내지 12 mg/mL 농도의 항체 약물 컨쥬게이트를 포함하는, 약제학적 조성물.
  20. 청구항 17에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 약 10 mg/mL 농도의 항체 약물 컨쥬게이트를 포함하는, 약제학적 조성물.
  21. 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 L-히스티딘은 5 내지 50 mM 범위에서 존재하는, 약제학적 조성물.
  22. 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 L-히스티딘은 10 내지 40 mM의 범위로 존재하는, 약제학적 조성물.
  23. 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 L-히스티딘은 15 내지 35 mM의 범위로 존재하는, 약제학적 조성물.
  24. 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 L-히스티딘은 15 내지 30 mM의 범위로 존재하는, 약제학적 조성물.
  25. 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 L-히스티딘은 15 내지 25 mM의 범위로 존재하는, 약제학적 조성물.
  26. 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 L-히스티딘은 약 20 mM로 존재하는, 약제학적 조성물.
  27. 청구항 1 내지 26 중 어느 한 항에 있어서,
    TWEEN-20의 농도는 0.001 내지 0.1%(v/v)의 범위인, 약제학적 조성물.
  28. 청구항 1 내지 26 중 어느 한 항에 있어서,
    TWEEN-20의 농도는 0.025 내지 0.075%(v/v)의 범위인, 약제학적 조성물.
  29. 청구항 1 내지 26 중 어느 한 항에 있어서,
    TWEEN-20의 농도는 0.005 내지 0.05%(v/v)의 범위인, 약제학적 조성물.
  30. 청구항 1 내지 26 중 어느 한 항에 있어서,
    TWEEN-20의 농도는 0.01 내지 0.03%(v/v)의 범위인, 약제학적 조성물.
  31. 청구항 1 내지 26 중 어느 한 항에 있어서,
    TWEEN-20의 농도는 약 0.02%(v/v)인, 약제학적 조성물.
  32. 청구항 1 내지 31 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 트레할로스 이수화물을 포함하는, 약제학적 조성물.
  33. 청구항 32에 있어서,
    상기 트레할로스 이수화물은 1 내지 20%(w/v)의 범위로 존재하는, 약제학적 조성물.
  34. 청구항 32에 있어서,
    상기 트레할로스 이수화물은 2 내지 15%(w/v)의 범위로 존재하는, 약제학적 조성물.
  35. 청구항 32에 있어서,
    상기 트레할로스 이수화물은 3 내지 10%(w/v)의 범위로 존재하는, 약제학적 조성물.
  36. 청구항 32에 있어서,
    상기 트레할로스 이수화물은 4 내지 6%(w/v)의 범위로 존재하는, 약제학적 조성물.
  37. 청구항 32에 있어서,
    상기 트레할로스 이수화물은 약 5.5%(w/v)로 존재하는, 약제학적 조성물.
  38. 청구항 32에 있어서,
    상기 트레할로스 이수화물은 50 mM 내지 300 mM의 범위로 존재하는, 약제학적 조성물.
  39. 청구항 32에 있어서,
    상기 트레할로스 이수화물은 75 mM 내지 250 mM 범위로 존재하는, 약제학적 조성물.
  40. 청구항 32에 있어서,
    상기 트레할로스 이수화물은 100 mM 내지 200 mM의 범위로 존재하는, 약제학적 조성물.
  41. 청구항 32에 있어서,
    상기 트레할로스 이수화물은 130 mM 내지 150 mM 범위로 존재하는, 약제학적 조성물.
  42. 청구항 32에 있어서,
    상기 트레할로스 이수화물은 약 146 mM로 존재하는, 약제학적 조성물.
  43. 청구항 1 내지 31 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 수크로스를 포함하는, 약제학적 조성물.
  44. 청구항 43에 있어서,
    상기 수크로스는 1 내지 20 %(w/v)의 범위로 존재하는, 약제학적 조성물.
  45. 청구항 43에 있어서,
    상기 수크로스는 2 내지 15%(w/v)의 범위로 존재하는, 약제학적 조성물.
  46. 청구항 43에 있어서,
    상기 수크로스는 3 내지 10%(w/v)의 범위로 존재하는, 약제학적 조성물.
  47. 청구항 43에 있어서,
    상기 수크로스는 4 내지 6%(w/v)의 범위로 존재하는, 약제학적 조성물.
  48. 청구항 43에 있어서,
    상기 수크로스는 약 5.5%(w/v)로 존재하는, 약제학적 조성물.
  49. 청구항 43에 있어서,
    상기 수크로스는 50 mM 내지 300 mM 범위로 존재하는, 약제학적 조성물.
  50. 청구항 43에 있어서,
    상기 수크로스는 75 mM 내지 250 mM의 범위로 존재하는, 약제학적 조성물.
  51. 청구항 43에 있어서,
    상기 수크로스는 100 mM 내지 200 mM의 범위로 존재하는, 약제학적 조성물.
  52. 청구항 43에 있어서,
    상기 수크로스는 130 mM 내지 150 mM의 범위로 존재하는, 약제학적 조성물.
  53. 청구항 43에 있어서,
    상기 수크로스는 약 146 mM으로 존재하는, 약제학적 조성물.
  54. 청구항 1 내지 53 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 5.5 내지 6.5의 범위의 pH를 갖는, 약제학적 조성물.
  55. 청구항 1 내지 53 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 5.7 내지 6.3의 범위의 pH를 갖는, 약제학적 조성물.
  56. 청구항 1 내지 53 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 약 6.0의 pH를 갖는, 약제학적 조성물.
  57. 청구항 54 내지 56 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 pH는 실온에서 취해지는, 약제학적 조성물.
  58. 청구항 54 내지 56 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 pH는 15℃ 내지 27℃에서 취해지는, 약제학적 조성물.
  59. 청구항 54 내지 56 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 pH는 4℃에서 취해지는, 약제학적 조성물.
  60. 청구항 54 내지 56 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 pH는 25℃에서 취해지는, 약제학적 조성물.
  61. 청구항 1 내지 60 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 염산(HCl)을 포함하는, 약제학적 조성물.
  62. 청구항 1 내지 60 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 pH는 HCl에 의해 조정되는, 약제학적 조성물.
  63. 청구항 1 내지 60 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 숙신산을 포함하는, 약제학적 조성물.
  64. 청구항 1 내지 60 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 pH는 숙신산에 의해 조정되는, 약제학적 조성물.
  65. 청구항 1 내지 16 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 약 20 mM L-히스티딘, 약 0.02% (w/v) TWEEN-20, 및 약 5.5% (w/v) 트레할로스 이수화물 또는 약 5% (w/v) 수크로스 중 적어도 하나를 포함하는, 약제학적 조성물.
  66. 청구항 65에 있어서,
    상기 약제학적 조성 물은 HCl 또는 숙신산을 더욱 포함하는, 약제학적 조성물.
  67. 청구항 65 또는 66 중 어느 한 항에 있어서,
    pH는 실온에서 6.0인, 약제학적 조성물.
  68. 청구항 65 또는 66 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 pH는 25℃에서 6.0인, 약제학적 조성물.
  69. 약제학적 조성물로서,
    (a) 다음의 구조를 포함하는 항체 약물 컨쥬게이트:
    Figure pct00092

    여기서 L-은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 1 내지 10이고; 및
    (b) 약 20 mM L-히스티딘, 약 0.02% (w/v) TWEEN-20, 약 5.5% (w/v) 트레할로스 이수화물, 및 HCl을 포함하는 약제학적으로 허용가능한 부형제를 포함하고,
    여기서 상기 pH는 25℃에서 약 6.0인, 약제학적 조성물.
  70. 청구항 69에 있어서,
    상기 항체 약물 컨쥬게이트는 약 10 mg/mL의 농도인, 약제학적 조성물.
  71. 약제학적 조성물로서,
    (a) 다음의 구조를 포함하는 항체 약물 컨쥬게이트:
    Figure pct00093

    여기서 L-은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 1 내지 10이고; 및
    (b) 약 20 mM L-히스티딘, 약 0.02% (w/v) TWEEN-20, 약 5.5% (w/v) 트레할로스 이수화물, 및 숙신산을 포함하는 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하고,
    여기서 상기 pH는 25℃에서 약 6.0인, 약제학적 조성물.
  72. 청구항 71에 있어서,
    상기 항체 약물 컨쥬게이트는 약 10 mg/mL의 농도인, 약제학적 조성물.
  73. 약제학적 조성물로서,
    (a) 다음의 구조를 포함하는 항체 약물 컨쥬게이트:
    Figure pct00094

    여기서 L-은 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 나타내고, p는 1 내지 10이고; 및
    (b) 약 20 mM L-히스티딘, 약 0.02% (w/v) TWEEN-20, 약 5.0% (w/v) 수크로스, 및 HCl을 포함하는 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하고,
    여기서 상기 pH는 25℃에서 약 6.0인, 약제학적 조성물.
  74. 청구항 73에 있어서,
    상기 항체 약물 컨쥬게이트는 약 10 mg/mL의 농도인, 약제학적 조성물.
  75. 청구항 1 내지 74 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 액체 형태인, 약제학적 조성물.
  76. 청구항 1 내지 74 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 동결 건조되는, 약제학적 조성물.
  77. 청구항 1 내지 74 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 냉동-건조하여 제조된 동결 건조된 조성물.
  78. 청구항 1 내지 74 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물은 -80℃, 4℃, 25℃, 또는 37℃로 저장되는, 약제학적 조성물
  79. 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법으로서,
    유효량의 청구항 1 내지 78 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  80. 청구항 79에 있어서,
    상기 대상체는 인간 대상체인, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  81. 청구항 80에 있어서,
    상기 암은 대장암, 췌장암, 난소암, 폐암, 방광암, 요로상피암, 유방암, 식도암, 두부암, 또는 경부암인, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  82. 청구항 81에 있어서,
    상기 암은 대장암인, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  83. 청구항 81에 있어서,
    상기 암은 췌장암인, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  84. 청구항 81에 있어서,
    상기 암은 난소암인, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  85. 청구항 81에 있어서,
    상기 암은 폐암이고, 여기서 상기 폐암은 선택적으로 비-소 세포 폐암인, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  86. 청구항 81에 있어서,
    상기 암은 방광암 또는 요로상피암인, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  87. 청구항 86에 있어서,
    상기 방광암은 진행성 방광암 또는 진행성 요로상피암인, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  88. 청구항 86에 있어서,
    상기 방광암은 전이성 방광암 또는 전이성 요로상피암인, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  89. 청구항 81에 있어서,
    상기 암은 유방암인, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  90. 청구항 81에 있어서,
    상기 암은 식도암인, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  91. 청구항 81에 있어서,
    상기 암은 두부암인, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  92. 청구항 81에 있어서,
    상기 암은 경부암인, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  93. 청구항 80에 있어서,
    상기 암은 191P4D12를 발현하는 종양 세포를 갖는, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  94. 청구항 79 내지 93 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 방법은 제2 치료제를 대상체에 투여하는 단계를 더욱 포함하는, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  95. 청구항 94에 있어서,
    상기 제2 치료제는 면역 체크포인트 억제제인, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  96. 청구항 95에 있어서,
    상기 면역 체크포인트 억제제는 PD-1 억제제 또는 PD-L1 억제제인, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  97. 청구항 96에 있어서,
    상기 면역 체크포인트 억제제는 PD-1 억제제인, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  98. 청구항 97에 있어서,
    상기 PD-1 억제제는 니볼루맙(nivolumab)인, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  99. 청구항 96에 있어서,
    상기 면역 체크포인트 억제제는 PD-L1 억제제인, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  100. 청구항 99에 있어서,
    상기 PD-L1 억제제는 아테졸리주맙, 아벨루맙, 및 더발루맙으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  101. 청구항 79 내지 100 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물에 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 대상체의 체중의 1 내지 10 mg/kg의 용량으로 투여되는, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  102. 청구항 101에 있어서,
    상기 약제학적 조성물에 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 대상체의 체중의 1 내지 5 mg/kg의 용량으로 투여되는, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  103. 청구항 101에 있어서,
    상기 약제학적 조성물에 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 대상체의 체중의 1 내지 2.5 mg/kg의 용량으로 투여되는, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  104. 청구항 101에 있어서,
    상기 약제학적 조성물에 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 대상체의 체중의 1 내지 1.25 mg/kg의 용량으로 투여되는, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  105. 청구항 101에 있어서,
    상기 약제학적 조성물에 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 대상체의 체중의 약 1 mg/kg의 용량으로 투여되는, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  106. 청구항 101에 있어서,
    상기 약제학적 조성물에 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 대상체의 체중의 약 1.25 mg/kg의 용량으로 투여되는, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  107. 청구항 101 내지 106 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 약제학적 조성물에 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 정맥 내(intravenous, IV) 주사 또는 주입에 의해 투여되는, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  108. 청구항 107에 있어서,
    상기 약제학적 조성물에 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 매 3주 사이클에서 2회 약 30분에 걸쳐 정맥 내(IV) 주사 또는 주입에 의해 투여되는, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  109. 청구항 108에 있어서,
    상기 약제학적 조성물에 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는
    매 3주 사이클의 1일차 및 8일차에 약 30분에 걸쳐 정맥 내(IV) 주사 또는 주입에 의해 투여되는, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  110. 청구항 109에 있어서,
    상기 방법은 면역 체크포인트 억제제를 매 3주 사이클의 1일차에 정맥 내(IV) 주사 또는 주입에 의해 투여하는 단계를 더욱 포함하는, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  111. 청구항 110에 있어서,
    상기 면역 체크포인트 억제제는 약 30분 또는 60분에 걸쳐 약 100mg 내지 약 1500의 양으로 투여되는, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  112. 청구항 107에 있어서,
    상기 약제학적 조성물의 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 매 4주 사이클에서 3회 약 30분에 걸쳐 정맥 내(IV) 주사 또는 주입에 의해 투여되는, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  113. 청구항 112에 있어서,
    상기 약제학적 조성물의 제형화된 항체 약물 컨쥬게이트는 매 4주 사이클의 1일, 8일, 및 15일차에 약 30분에 걸쳐 정맥 내(IV) 주사 또는 주입에 의해 투여되는, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
  114. 청구항 113에 있어서,
    상기 방법은 면역 체크포인트 억제제를 정맥 내(IV) 주사 또는 주입에 의해 투여하는 단계를 더욱 포함하는, 대상체의 질병 또는 장애를 예방 또는 치료하는 방법.
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