CN111991498B - 一种用于治疗hpv的重链抗体复合凝胶及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种用于治疗HPV的重链抗体复合凝胶及其制备方法，所述重链抗体复合凝胶包括以下原料：驼乳提取物、植物提取物、卡波姆、纳米银、氯己定和维生素E；所述植物提取物包括乳香提取物、藏红花提取物、洋甘菊提取物、黄柏提取物、千金藤提取物、蛇床子提取物、芦荟提取物、白鲜皮提取物和益母草提取物。该凝胶用于阻断生殖道高危HPV感染，预防宫颈癌病变发生；具有良好的抑菌效果，治疗阴道炎和宫颈糜烂；能够抑制阴道内有害菌群的生长，维持良好的生殖生态环境。且该妇科凝胶无毒、无刺激性、无致敏性，使用安全便捷。

Description

一种用于治疗HPV的重链抗体复合凝胶及其制备方法
技术领域
本发明涉及医药领域，具体涉及一种用于治疗HPV的重链抗体复合凝胶及其制备方法。
背景技术
阴道炎症属于常见的妇科疾病，发病率高，临床治愈率低，严重影响妇女的正常生活质量，女性各个年龄阶段都容易发生。在某些因素影响下，阴道与菌群之间正常生态平衡被打破，也可形成有利于致病菌的生长环境，导致阴道炎症的发生。
女性阴道生理和结构具有特殊性：其为弱酸性的局部环境，上皮细胞随月经周期雌、孕激素的变化而增生和脱落，各种正常寄生菌群和条件致病菌相互依存、相互制约，形成阴道独特而复杂的微生物菌群，阴道口距肛门口和尿道口较近，阴道壁多粘液皱壁。由于女性特殊的生殖结构，极易受到感染造成炎症。抗生素的大量应用，破坏了阴道正常的菌落环境，导致起到防御功能的正常寄生菌受到抑制，或转化为机会致病菌。生殖道感染呈现各种病原菌同时作用的复杂局面，造成阴道炎反复发作，或常伴发宫颈炎和宫颈糜烂等其它妇科病。据统计，妇女中各种妇科疾病的发病率在65%以上，且妇科炎症还具有反复发作的特点。妇科疾病的药物疗法多以局部治疗为主，由于阴道有丰富的毛细血管和淋巴管，且阴道没有明确的神经末梢，给药时患者的疼痛刺激小，对于特定的疾病和药物是有效的药物释放部位。
人乳头瘤病毒感染（HPV感染）是由人乳头瘤病毒（HPV）引起的感染，人乳头瘤病毒是一种来自Papillomaviridae家族的DNA病毒。大约90％的HPV感染在两年内不引起症状并自发解决。但是，在某些情况下，HPV感染持续存在并导致疣或癌前病变。根据病变部位的不同，这些病变会增加子宫颈，外阴，阴道，阴茎，肛门，嘴或喉咙。几乎所有子宫颈癌均归因于HPV；HPV16和HPV18这两种菌株占病例的70％。上述其他癌症中有60％至90％也与HPV相关。HPV6和HPV11是生殖器疣和喉乳头状瘤病的常见原因。
HPV感染是由人乳头瘤病毒引起的，人乳头瘤病毒是乳头瘤病毒家族的一种DNA病毒。已经描述了170多种类型。40多种可能通过性接触传播，并感染肛门和生殖器。性传播类型持续感染的危险因素包括初次性交年龄早，多性伴侣，吸烟和免疫功能差。这些类型通常通过持续的直接皮肤接触，阴道和肛交传播是最常见的方法。而且，HPV感染可在怀孕期间从母亲传播到婴儿。一个人可能感染多种类型的HPV。HPV仅影响人类。
HPV疫苗可以预防最常见的感染类型。为最有效，应在性活动开始之前进行接种，因此建议在9-13岁之间进行接种。已经感染患者接种HPV疫苗，有时呈现一种安慰效应。
目前尚无针对HPV感染的特殊治疗方法。但是，病毒感染通常会被免疫系统清除到无法检测的水平。机体的免疫系统可在90％的情况下在两年内自然清除HPV。因此很难知道何时会传染。所以，增强免疫能力，是控制HPV流行病学的重要自我手段。
妇科凝胶是一种妇科药品，凝胶剂具有生物黏附、良好的生物相容性，药物可以黏附在阴道粘膜上，从凝胶缓慢地扩散到粘膜，并且凝胶剂以其独特的润湿性、清凉感及使用方便等优点而受到患者的青睐。凝胶剂具有较好的生物黏附性，能较长时间与作用部位紧密接触，可以避开首过效应，提高药物的吸收以及生物利用度；同时，其组织相容性良好，使用方便，患者易接受。
目前妇科凝胶主要有中药和西药凝胶剂，传统中药凝胶剂大多起效慢、药味大，而西药凝胶剂易产生耐药性、易复发。因此，开发疗效高、副作用小的中西结合新型复合妇科凝胶具有十分重要的意义。
发明内容
本发明旨在至少解决现有技术中存在的技术问题之一。为此，本发明提出一种用于治疗HPV的重链抗体复合凝胶，能够清洁阴道环境、平衡菌群、预防感染和抑制HPV。
本发明还提出了上述用于治疗HPV的重链抗体复合凝胶的制备方法。
根据本发明第一方面的用于治疗HPV的重链抗体复合凝胶，包括以下原料：驼乳提取物、植物提取物、卡波姆、纳米银、氯己定和维生素E。
在本发明中，驼乳为驼科动物双峰驼的乳汁，驼乳提取物是由新鲜驼乳干燥后得到的驼乳粉，骆驼乳中除了含有丰富的营养素以外，近20年来，人类对免疫球蛋白超家族（IGSF）的研究，终于发现：骆驼初乳中的重链抗体。重链抗体分子结构更简单，活性更强。所有哺育动物中，只有骆驼家族拥有重链抗体。
骆驼经过百万年的进化和迁徙。面对恶劣的生存环境，骆驼波浪式的剧烈新陈代谢，体内产生大量的代谢废物，骆驼私密却如此洁净，重链抗体扮演重要的免疫角色。
在本发明中，银通过阻断细胞的呼吸通路迅速杀灭微生物，其与细胞壁的肽聚糖作用，形成可逆的复合物，使其不能将氧和能量转运进细胞，阻止病菌的活动导致病菌死亡。研究发现，银的抗菌效率与其表面积关系极大，通过增大表面积可提高抗菌效果。在纳米状态下的杀菌能力可发生质的飞跃，只用极少量的纳米银即可产生强力的杀菌作用。纳米银由于其量子效应、小尺寸效应和具有极大的比表面积是银的杀菌能力产生了质的飞跃，只用极少量的纳米银即可产生强力的杀菌能力。
根据本发明的一些具体实施方式，所述重链抗体复合凝胶包括以重量份计的以下原料：驼乳提取物2~4份、植物提取物15~20份、卡波姆0.5~3份、纳米银0.5~2份、氯己定0.5~2份和维生素E 2~4份。
优选地，包括以重量份计的以下原料：驼乳提取物3份、植物提取物18份、卡波姆1份、纳米银1份、氯己定1份和维生素E 3份。
根据本发明的一些具体实施方式，所述植物提取物包括乳香提取物、藏红花提取物、洋甘菊提取物、黄柏提取物、千金藤提取物、蛇床子提取物、芦荟提取物、白鲜皮提取物和益母草提取物。
在本发明中，植物提取物对于妇科炎症治疗和妇科护理均具有良好的治疗效果。乳香为橄榄科植物乳香树及同属植物皮部渗出的树脂，性温、味辛苦，乳香提取物具有活血止痛，消肿生肌的功效。藏红花为鸢尾科植物番红花花柱的上部及柱头，主要含有藏红花素、藏红花苦素、维生素B2和皂苷等，具有活血化瘀、凉血解毒、解郁安神的作用。洋甘菊为菊科植物，可以帮助睡眠，缓解病人的发炎和疼痛症状，缓解由神经性皮肤瘙痒引起的失眠的功效。黄柏为芸香科植物黄皮树的树皮，具有清热燥湿、泻火除蒸和解毒疗疮等功效。千金藤为防己科千金藤属植物千金藤的根或茎叶，具有清热解毒，祛风止痛，利水消肿之功效。蛇床子为伞形科植物蛇床的干燥成熟果实，外治外阴湿疹、妇人阴痒、滴虫性阴道炎等疾病。芦荟为百合目、百合科的多年生常绿草本植物，含有多种维生素，具有使皮肤收敛、柔软化、保湿和消炎的性能。白鲜皮为芸香科多年生草本植物白鲜和狭叶白鲜的根皮，具有清热燥湿，祛风解毒之功效。益母草具有利尿消肿、收缩子宫作用的作用，是历代医家用来治疗妇科病的要药。本发明中均使用植物提取物，能够降低药味和提高有效成分的含量。上述多种植物提取物协同作用，制备的妇科凝胶对女性阴道内环境有极好的调节护理效果。
进一步地，所述植物提取物以重量份计为：乳香提取物1~3份、藏红花提取物1~3份、洋甘菊提取物1~3份、黄柏提取物1~3份、千金藤提取物1~3份、蛇床子提取物1~3份、芦荟提取物1~3份、白鲜皮提取物1~3份和益母草提取物1~3份。
优选地，所述植物提取物以重量份计为：乳香提取物2份、藏红花提取物2份、洋甘菊提取物2份、黄柏提取物2份、千金藤提取物2份、蛇床子提取物2份、芦荟提取物2份、白鲜皮提取物2份、益母草提取物2份。
根据本发明的一些具体实施方式，所述纳米银溶液浓度为0.5~5mg/L，所述纳米银的粒径为1~20nm。
优选地，所述纳米银溶液浓度为1~3mg/L，所述纳米银的粒径为5~10nm。
根据本发明的一些具体实施方式，所述纳米银由以下步骤制备得到：在pH为1~3和浓度为0.1~0.3mol/L的硝酸银溶液中加入抗坏血酸和聚乙烯吡咯烷酮，反应20~40min即得。
纳米银的合成方法包括物理法和化学法，为了制备更细小的银粒子并防止粒子聚集，目前多在高分子胶体的保护下采用化学还原法制备纳米银，聚乙烯吡咯烷酮（PVP）为高分子胶体，能够防止银粒子团聚，有利于纳米银的形成。
根据本发明第二方面的用于治疗HPV的重链抗体复合凝胶的制备方法，包括以下步骤：
S1、将卡波姆加入水中，在80~95℃温度下搅拌溶解，得到第一混合液；
S2、将第一混合溶液降温至35~40℃后，加入氯己定、维生素E、植物提取物和驼乳提取物，混合均匀得到第二混合液；
S3、向第二混合液中加入纳米银，混合均匀后过滤，得到所述用于治疗HPV的重链抗体复合凝胶。
本发明至少具有以下有益效果：本发明的复合凝胶能够用于阴道清洁护理，其具有良好的抑菌效果，能够抑制阴道内有害菌群的生长，维持良性的阴道内环境，起到阴道内清洁护理的作用；且该妇科凝胶无毒、无刺激性、无致敏性，使用安全便捷。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
具体实施方式
为详细说明本发明的技术内容、所实现目的及效果，以下结合实施方式予以说明。
若无特殊说明，本发明实施例中使用的原料均为市购获得。本发明使用的纳米银的制备方法为：将浓度为0.2mol/L的硝酸银溶液使用稀硝酸调节pH至1~3，在硝酸银溶液中加入1倍当量的抗坏血酸和2%的聚乙烯吡咯烷酮进行还原反应，反应30min后过滤收集银粉，然后将收集的银粉分散于水中制备成浓度为2mg/L的纳米银，该纳米银的粒径范围为5~10nm。本发明使用的植物提取物均为常用的植物水或醇提取物，均为购买得到。驼乳提取物为干燥的驼乳粉。
实施例1
一种用于治疗HPV的重链抗体复合凝胶，具体包括如下表1所示的原料成分及含量：
表1. 复合凝胶成分含量表
Figure 495475DEST_PATH_IMAGE001
上述重链抗体复合凝胶，的制备方法，具体包括以下步骤：
1）边搅拌边向水中加入混合均匀的卡波姆，加完后搅拌升温至80~95℃并继续搅拌，直至卡波姆完全溶解，得到第一混合液；
2）将第一混合溶液降温至35~40℃后，加入氯己定、维生素E、植物提取物（乳香提取物、藏红花提取物、洋甘菊提取物、黄柏提取物、千金藤提取物、蛇床子提取物、芦荟提取物、白鲜皮提取物和益母草提取物）和驼乳提取物，混合均匀得到第二混合液；
3）向第二混合液中加入纳米银，混合均匀后用200目滤布过滤，得到所述重链抗体复合凝胶。
实施例2
一种用于治疗HPV的重链抗体复合凝胶，具体包括如下表2所示的原料成分及含量：
表2. 妇科凝胶成分含量表
Figure 317938DEST_PATH_IMAGE002
制备方法与实施例1相同。
实施例3
一种用于治疗HPV的重链抗体复合凝胶，具体包括如下表3所示的原料成分及含量：
表3. 妇科凝胶成分含量表
Figure 896555DEST_PATH_IMAGE003
制备方法与实施例1相同。
对比例1
一种用于治疗HPV的重链抗体复合凝胶，与实施例1相比，不添加驼乳提取物，其他成分及制备方法均与实施例1相同。
对比例2
一种用于治疗HPV的重链抗体复合凝胶，与实施例1相比，不添加纳米银，其他成分及制备方法均与实施例1相同。
对比例3
一种用于治疗HPV的重链抗体复合凝胶，与实施例1相比，不添加中药提取物，其他成分及制备方法均与实施例1相同。
测试例1：抗HPV活性
对上述实施例和对比例制备得到的重链抗体复合凝胶进行抗HPV活性实验测试，抗HPV率结果如下表4所示：
表4. 重链抗体复合凝胶抗HPV率（%）
Figure 95456DEST_PATH_IMAGE004
从上述测试例的结果可以看出，重链抗体复合凝胶抗HPV率，实施组1~3和对比组1~3均呈现显著性差异。说明驼乳提取物中重链抗体对于HPV具有明显抑制效果。配合纳米银和中药提取物，效果更加持久稳定。
测试例2：抑菌活性
对上述实施例和对比例制备得到的重链抗体复合凝胶进行抑菌活性实验测试，抑菌率结果如下表5所示：
表5. 重链抗体复合凝胶抑菌率（%）
Figure 764334DEST_PATH_IMAGE005
从上述测试例的结果可以看出，本发明实施例1~3制备得到的妇科凝胶均有很好的抑菌效果，其中，实施例1组分下的抑菌效果最好。对比例1~2较实施例1~3的抑菌效果大大降低，说明驼乳提取物和纳米银对于抑菌效果均有较大的影响，两者相互协同作用提高了凝胶的抑菌效果，使具有更好的清洁护理作用。
测试例3：凝胶的刺激性实验
测试方法：普通级新西兰兔8只，体重2.2~2.5kg，雌雄各半，分为2组，空白组仅为凝胶基质。将兔背部去毛，均匀涂抹凝胶试样，分笼喂养，24h后用蒸馏水洗去凝胶，观察敷药部位有无红斑、水肿等症状。皮肤刺激性反应评分标准如表6所示，强度评价标准为表7所示，凝胶试样的测试结果如表8所示。
表6 皮肤刺激反应评分标准
Figure 820015DEST_PATH_IMAGE006
表7. 皮肤刺激强度评价标准
Figure 574344DEST_PATH_IMAGE007
表8. 刺激性实验测试结果
Figure 311356DEST_PATH_IMAGE008
从上表8的结果可以看出，本发明实施例1~3的制备的凝胶无毒、无刺激、无致敏性，对比例1和对比例3均具有轻度刺激性，说明驼乳提取物和植物提取物的加入能够起到保护粘膜，降低药物毒性和刺激性的作用，使凝胶使用更加安全、效果更好。
综上所述，本发明制备得到的用于阴道清洁护理的妇科凝胶具有良好的抑菌效果，能够抑制阴道内有害菌群的生长，抗HPV，维持良性的阴道内环境，起到阴道内清洁护理的作用；且该妇科凝胶无毒、无刺激性、无致敏性，使用安全便捷。
以上所述仅为本发明的实施例，并非因此限制本发明的专利范围，凡是利用本发明说明书及内容所作的等同变换，或直接或间接运用在相关的技术领域，均同理包括在本发明的专利保护范围内。

Claims (7)

1.一种用于治疗HPV的重链抗体复合凝胶，其特征在于，由以下重量份计的原料制备而成：驼乳提取物2~4份、植物提取物15~20份、卡波姆0.5~3份、纳米银0.5~2份、氯己定0.5~2份和维生素E 2~4份；
所述驼乳提取物是由新鲜驼乳干燥后得到的驼乳粉；
以重量份计，所述植物提取物由乳香提取物1~3份、藏红花提取物1~3份、洋甘菊提取物1~3份、黄柏提取物1~3份、千金藤提取物1~3份、蛇床子提取物1~3份、芦荟提取物1~3份、白鲜皮提取物1~3份和益母草提取物1~3份组成。
2.根据权利要求1所述的一种用于治疗HPV的重链抗体复合凝胶，其特征在于，由以重量份计的以下原料制备而成：驼乳提取物3份、植物提取物18份、卡波姆1份、纳米银1份、氯己定1份和维生素E 3份。
3.根据权利要求1所述的一种用于治疗HPV的重链抗体复合凝胶，其特征在于，所述植物提取物以重量份计为：乳香提取物2份、藏红花提取物2份、洋甘菊提取物2份、黄柏提取物2份、千金藤提取物2份、蛇床子提取物2份、芦荟提取物2份、白鲜皮提取物2份、益母草提取物2份。
4.根据权利要求1至2任一项所述的一种用于治疗HPV的重链抗体复合凝胶，其特征在于，所述纳米银溶液浓度为0.5~5mg/L，所述纳米银的粒径为1~20nm。
5.根据权利要求4所述的一种用于治疗HPV的重链抗体复合凝胶，其特征在于，所述纳米银溶液浓度为1~3mg/L，所述纳米银的粒径为5~10nm。
6.根据权利要求4所述的一种用于治疗HPV的重链抗体复合凝胶，其特征在于，所述纳米银由以下步骤制备得到：在pH为1~3和浓度为0.1~0.3mol/L的硝酸银溶液中加入抗坏血酸和聚乙烯吡咯烷酮，反应20~40min即得。
7.一种如权利要求1至6任一项所述的用于治疗HPV的重链抗体复合凝胶制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、将卡波姆加入水中，在80~95℃温度下搅拌溶解，得到第一混合液；
S2、将第一混合溶液降温至35~40℃后，加入氯己定、维生素E、植物提取物和驼乳提取物，混合均匀得到第二混合液；
S3、向第二混合液中加入纳米银，混合均匀后过滤，得到所述重链抗体复合凝胶。
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