CN111979199A - 用于治疗宫腔粘连的宫血干细胞和外泌体 - Google Patents

Abstract

本发明涉及用于治疗宫腔粘连的宫血干细胞和外泌体，具体为一种利用过表达CXCR4慢病毒载体增强宫血干细胞(MenSCs)和外泌体(exosomes)归巢性的方法及其在宫腔粘连中的应用。CXCR4是趋化因子SDF‑1的受体，慢病毒载体含有CXCR4启动子序列、GFP报告基因以及嘌呤霉素抗性。在人MenSCs中过表达SDF‑1受体CXCR4，制备过表达CXCR4的MenSCs来源的外泌体Exo^CXCR4，移植入宫腔粘连大鼠中，观察宫内膜再生修复和抗纤维化的情况，为临床开展治疗宫腔粘连的非细胞疗法提供依据与研究基础，具有广阔的应用前景。

Description

用于治疗宫腔粘连的宫血干细胞和外泌体

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体为一种利用过表达CXCR4慢病毒载体增强宫血干细胞(MenSCs)和外泌体归巢性的方法及其在宫腔粘连中的应用。

背景技术

宫腔粘连(intrauterine adhesion,IUA)是多种原因导致的子宫内膜基底层损伤，引起子宫肌壁的相互粘连，以致宫颈管、子宫腔部分或全部闭塞。重度IUA术后复发率高达62.5％，妊娠成功率仅22.5％～33.3％。首次报道IUA是在1894年，随后在1948年，Asheman再次报道了29例因流产或产后刮宫所致的宫腔粘连病人，将她们描述为“损伤性闭经(traumatical amenorrhea)”，后人为了纪念他，就将此病又称为Asherman综合症。为了减少子宫内粘连的形成，人们已经提出了一些措施。术中技术包括减少外科手术的使用，最大限度地减少对健康子宫内膜和子宫肌层的伤害。其他预防宫腔粘连的策略包括术后结合雌激素、促性腺激素释放激素类似物或者抗生素等来辅助治疗。然而，雌激素的作用是建立在一定厚度的子宫内膜基础上的，对于重度宫腔粘连患者来说不能发挥很好的治疗效果，且术后复发率高，妊娠成功率低。此外，如气囊导管或宫内节育器等物理屏障也会在手术后被用于预防子宫内粘连。尽管提出了许多解决方案，但是仍没有某一种方法被证明是预防粘连形成的最佳措施。

子宫内膜的再生修复和抗纤维化是有效改善IUA病人生理生殖功能的基础。间充质干细胞(MSCs)是一种多能干细胞，具有多向分化能力，因此能够在体外转变成许多不同的组织细胞，迁移至受损组织并与它们受损区域的其他细胞相互作用。MSCs还能分泌多种细胞因子和趋化因子来促进组织修复，并表现出促血管生成、抗凋亡、抗炎作用等。对于临床使用，骨髓是间充质干细胞(BMSCs)的最常见来源。然而BMSCs的获取频率和分化能力随年龄而降低，且获取困难。宫血干细胞(MenSCs)是一种新型的间充质干细胞来源，它从女性月经血中提取获得，取材方便且可以周期性获得，凭借其强大的增殖能力和低免疫原性成为研究学者们的新宠。

研究显示，宫腔移植自体BMSCs或MenSCs治疗宫腔粘连患者，结果显示自体间充质干细胞移植对患者妊娠结局具有积极作用。目前的研究认为干细胞引起的旁分泌等的细胞间交流是组织修复和抗纤维化的主要机制。在小鼠的研究中发现MenSCs可以通过旁分泌作用促进损伤的子宫内膜血管形成和修复，进而提高小鼠生育能力，同时通过分泌G-CSF抑制子宫内膜的纤维化。在骨髓间充质干细胞治疗宫腔粘连的研究中发现间充质干细胞通过促进雌激素受体和孕激素受体的表达修复损伤的子宫内膜。

外泌体是细胞外囊泡，通过释放诸如蛋白质、脂质和核糖核酸(RNA)等成分在细胞间通信中发挥重要作用。外泌体是旁分泌中的高度活跃成分，在修复受损组织方面具有巨大的潜力。外泌体的低免疫原性、良好的载体以及强大的再生修复能力使得它在再生医学领域具有很大的发展前景。多种来自干细胞的外泌体通常能够通过mRNA、microRNA和蛋白质的转移起作用。BMSCs来源的外泌体被证明通过TGF-β/Smad通路逆转EMT(上皮-间质转化)的发生，抑制纤维化进程，修复子宫内膜。

CXCR4是一种G蛋白偶联受体类的趋化因子受体，可以激活G蛋白介导的一些下游信号通路，是干细胞归巢、内皮细胞迁移以及造血干细胞、祖细胞移植中的关键因素。另一方面，趋化因子是具有趋化作用的一类小分子量细胞因子，在机体免疫、炎症反应、淋巴归巢等生理过程中发挥重要作用。

发明内容

本发明的发明人研究发现在宫腔粘连的小鼠中病理损伤部位趋化因子SDF-1表达升高，它促进间充质干细胞被招募至损伤的子宫内膜区，通过与受体CXCR4结合，激活下游信号通路，促进子宫内膜的修复。

因此，本发明一方面提供了一种间充质干细胞，其过表达或高表达CXCR4。

本发明在第二方面还提供了一种间充质干细胞的外泌体，其中所述的外泌体过表达或高表达CXCR4。

本发明第三方面提供了一种药物组合物，其包含本发明的间充质干细胞或外泌体。

本发明的第四方面提供了一种治疗或预防宫腔粘连的方法，其包括向受试者施用本发明的间充质干细胞或外泌体。

本发明的第五方面提供了过表达或高表达CXCR4的间充质干细胞或外泌体在制备用于治疗宫腔粘连的药物中的用途。

在本发明中，间充质干细胞中CXCR4的过表达或高表达是通过向所述间充质干细胞中转入人源CXCR4核苷酸序列而导致的。

本发明中过表达或高表达CXCR4的外泌体可以是从本发明的过表达或高表达CXCR4的间充质干细胞中提取而来。

附图说明

图1:pHBLV-CMV-MCS-3FLAG-EF1-ZsGreen-T2A-PURO载体图谱。

图2：CXCR4过表达MenSCs细胞株的构建及鉴定。图A为不同MOI值感染荧光图片；图B为CXCR4的qPCR表达结果；图C为Western blot结果；图D为免疫荧光，Scale bar＝50μm,图中所有数据为双尾t检验，“*”表示P<0.05,“**”表示P<0.01,“***”表示P<0.001。

图3：MenSCs^CXCR4的transwell迁移情况。结晶紫染色表明，MenSCs^CXCR4组细胞向SDF-1浓度高的地方迁移细胞数量更多，Scale bar＝100μm。

图4：外泌体CXCR4表达western blot结果。

图5：大鼠正常子宫组织和模型组织形态和HE观察。A:正常子宫被钢针穿过；模型组子宫不能被钢针穿过；B:正常子宫和模型组子宫HE染色，模型组细胞结构紊乱，大量炎性细胞浸润，Scale bar＝100μm。

图6：PKH26标记的MenSCs和外泌体归巢至受损的子宫内膜。图A：IVIS活体成像系统检测4组MenSCs或外泌体的归巢(每组n＝3)。过表达CXCR4组的MenSCs和外泌体趋化至受损子宫组织的荧光信号更强；图B：免疫荧光结果进一步表明CXCR4过表达组趋化至损伤子宫内膜的数量更多。Scale bar＝50μm。图中所有数据为双尾t检验，“*”表示P<0.05，“**”表示P<0.01，“***”表示P<0.001。

图7：大鼠子宫组织HE染色。图A为HE染色结果图，Scale bar＝100μm；图B为子宫内膜厚度统计图；图C为腺体数统计图。柱状图上方“*”为与Model组比较的结果。图中所有数据为双尾t检验，“*”表示P<0.05，“**”表示P<0.01，“***”表示P<0.001。

图8：大鼠子宫组织Masson染色。图A为Masson染色结果图，Scale bar＝100μm；图B为子宫内膜纤维化面积统计图，柱状图上方“*”为与Model组比较的结果。图中所有数据为双尾t检验，“*”表示P<0.05，“**”表示P<0.01，“***”表示P<0.001。

图9：Vimentin、CK18免疫组织化学染色结果。图A为Vimentin、CK18免疫组织化学染色图，Scale bar＝50μm；图B为Vimentin、CK18蛋白相对表达图。柱状图上方“*”为各组与Model组比较的结果。图中所有数据为双尾t检验，“*”表示P<0.05，“**”表示P<0.01，“***”表示P<0.001。

具体实施方式

本发明提供了一种利用过表达CXCR4慢病毒载体增强宫血干细胞(MenSCs)及其外泌体归巢性的方法，并检测了其在宫腔粘连大鼠中的应用。对于临床应用或研究具有指导意义，拥有广阔的应用前景。

除非另外定义，否则本文所用的所有术语(包括技术术语和科学术语)具有与本领域的普通技术人员通常所了解的含义相同的含义。应当进一步了解的是，术语，例如在常用字典中定义的术语，应当被解释为具有与它们在相关领域的背景下的含义一致的含义，并且除非在本文中明确如此定义，否则不应当以理想化或过于形式化的意义来解释。

本文所使用的术语仅用于描述具体实施方案的目的，而不意图具有限制性。除非上下文另外明确指出。

术语“约”或“大约”意指对于特定值在可接受的误差范围内，如由本领域的普通技术人员所确定的那样，这将部分地取决于如何测量或确定所述值，即测量工具的局限性。例如，根据本领域中的实践，“约”可以意指在1个标准误差之内或大于1个标准偏差。示例性地，“约”可以意指参考值±10％的范围。

“治疗有效量”意指在患者中预防或改善宫腔粘连状况的量。向患者施用的剂量和剂量数(例如单次剂量或多次剂量)将根据多种因素而变化，包括施用途径、患者状况和特征(性别、年龄、体重、健康状况)、症状的程度、治疗频率和所期望的作用等。

在本发明的一个实施方案中，以单次剂量施用分离的间充质干细胞或外泌体。在另一个实施方案中，以多次剂量，例如两次或更多次剂量施用分离的间充质干细胞或外泌体。

在本发明的另一个实施方案中，在第一次施用分离的间充质干细胞或外泌体后的例如至少10天、至少20天、至少30天、至少40天、至少50天、至少60天、至少70天重复施用分离的间充质干细胞或外泌体，或在第一次施用分离的间充质干细胞或外泌体后的至少1个月之间、至少2个月之间、至少3月之间来重复施用分离的间充质干细胞或外泌体。

在本发明的一个实施方案中，以约1×10⁶个、2×10⁶个、5×10⁶个、10×10⁶个、20×10⁶个、30×10⁶个、40×10⁶个、50×10⁶个、60×10⁶个个间充质干细胞或外泌体的剂量施用。

在一些实施方案中，治疗有效量的分离的间充质干细胞或外泌体足以减轻或预防宫腔粘连，即宫腔粘连减轻至少5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％或50％。

“施用”组合物可以通过本领域已知的任何技术来实现，包括但不限于口服施用、注射、输注、肠胃外、静脉内、粘膜、舌下、肌内、真皮内、鼻内、腹膜内、动脉内、皮下吸收或通过任何方法与其它已知技术的组合。

在本发明的一个实施方案中，可以系统性施用分离的间充质干细胞或外泌体。在本发明的另一个实施方案中，通过输注或直接注射来施用分离的间充质干细胞或外泌体。在本发明的一个实施方案中，肌内、静脉内、动脉内、腹膜内、皮下、真皮内、口服、宫内施用分离的间充质干细胞或外泌体。

如本文所用的术语“患者”包括但不限于人类和非人类脊椎动物，例如野生动物、家养动物和农场动物。在一些实施方案中，所述术语指的是人类，如18-50岁的妇女。在一些实施方案中，所述人类患者是女性。

术语“自体”意指源自于同一生物体。如本文所用的短语“有需要”意指患者已经被鉴定为需要宫腔粘连的治疗或预防。在一些实施方案中，所述鉴定可以通过任何诊断手段进行。

如本文所用的术语“间充质干细胞”，其优选来自经血，当然也指来自骨髓、血液、真皮和骨膜中发现的多潜能胚细胞，例如脂肪组织、骨组织、软骨组织、弹性组织和纤维结缔组织。

如本文使用的术语“外泌体”，其是指来源于干细胞的具有治疗特性的细胞外囊泡，包括但不限于来源于间充质干细胞的外泌体，或来源于经血干细胞的外泌体。

如本文所用的术语“治疗”是治疗性处理，其中目的在于逆转、缓解、改善、抑制、减慢或停止宫腔粘连的进展或严重程度。也就是说，“治疗”包括症状的改善。有益的或所期望的临床结果包括但不限于一种或多种症状的缓解和疾病程度的减轻。

用于本发明的组合物可以使用任何合适的方法来配制。使用标准的药学上可接受的载体和/或赋形剂配制细胞可以使用药学领域中的常规方法进行。制剂的确切性质将取决于几个因素，包括待施用的细胞和所期望的施用途径。

可以与生理学上可接受的载体或稀释剂一起制备组合物。通常，这样的组合物被制备成细胞的液体悬浮液。可以将细胞与药学上可接受的并且与活性成分相容的赋形剂混合。合适的赋形剂包括例如水、盐水、右旋糖、甘油等和其组合。

此外，通常本发明的药物组合物还可以含有少量的辅助物质，例如润湿剂或乳化剂、pH值缓冲剂和/或提高有效性的佐剂。

在本发明的一个实施方案中，所述间充质干细胞是被遗传操纵和/或物理方法处理的。在本发明的另一个实施方案中，所述间充质干细胞是冷冻保存的。例如，可以将间充质干细胞悬浮在冷冻保护剂中，然后等分到冷冻保存容器中以放置在气相氮冷冻机中。

在本发明中，适于注射或输注的制剂、药物或组合物可包括水性和非水性无菌注射液和水性和非水性无菌混悬剂，所述无菌注射液可任选地包含抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和能使制剂与目的接收者的血液等压的溶质，所述无菌混悬剂可包括悬浮剂和增稠剂。所述制剂可存在于单位剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿，并且可以保存在冻结干燥的(冻干)条件，在立即使用前仅需要加入无菌液体载体，例如注射用水。而且，在本发明中注射剂或输注剂的有效量的测定在本领域技术人员的能力内，特别是根据本文提供的公开内容的启示下。

对于本发明，其注射剂或输注剂可以以任意有效剂量施用给药受试者。优选地，本发明的注射剂或输注剂可以以多次剂量给药，例如从约2至约6次剂量，更优选约3-5次剂量，最优选约4次剂量。在特别优选的实施方案，在给药过程中，以每三周或两周或一周给药约一次的频率将本发明的药物给药至受试者，例如注射或输注，例如静脉注射或器官内注射。在特别优选的实施方案，给药为通过静脉注射施用。

本发明的注射剂或输注剂的剂量单位是基于常规进行给药受试者。例如，剂量单位可以基于给药频率为每日一次、每周一次、每月一次等确定。剂量单位也可基于以两次/周、三次/周等确定。

任选地，在施用被发明的外泌体之前，将其在无菌条件下于-2℃至-4℃下静置一段时间后恢复至培养温度。示例性地，在-2℃至-4℃下静置0.5-1.0小时，然后在0.5-1.0小时内逐渐升温至培养温度，例如37℃。

本发明的药物中可包含涉及该药学产品的说明书，且该说明书可以含有如下内容：适应症(例如肺纤维化)、施用剂量(例如上述所示例性说明的)以及可能产生的副作用等等。

在本发明中，术语“患者”与“受试者”和“个体”等可互换使用，并且除非另有说明，否则是指哺乳动物，诸如人类和非人类灵长类，以及兔、大鼠、小鼠、狗、猫、山羊、猪、牛和其他哺乳动物物种，尤其是雌性物种。该术语不一定表示受试者已被诊断患有特定疾病(例如宫腔粘连)，但通常是指处于医疗监护下的个体。

下面结合附图和具体实施例对本发明的内容做进一步的说明。应当理解，以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，而不能以此来限制本发明的保护范围。

实施例1 CXCR4过表达MenSCs和外泌体的构建及鉴定

CXCR4慢病毒是由三个质粒构成的，分别是pHBLVTM、pspax2和pMD2.G。首先构建人CXCR4过表达慢病毒载体，具体操作为：合成人CXCR4核苷酸序列并克隆到pHBLVTM(汉恒生物，见图1)慢病毒过表达载体。将人CXCR4过表达质粒连同病毒包装质粒pspax2(汉恒生物)和pMD2.G(汉恒生物)转染到HEK 293T细胞中并连续培养细胞48h。收取细胞培养上清液并于4℃超速离心获取病毒颗粒。

人-CXCR4序列：

ATGGAGGGGATCAGTATATACACTTCAGATAACTACACCGAGGAAATGGGCTCAGGGGACTATGACTCCATGAAGGAACCCTGTTTCCGTGAAGAAAATGCTAATTTCAATAAAATCTTCCTGCCCACCATCTACTCCATCATCTTCTTAACTGGCATTGTGGGCAATGGATTGGTCATCCTGGTCATGGGTTACCAGAAGAAACTGAGAAGCATGACGGACAAGTACAGGCTGCACCTGTCAGTGGCCGACCTCCTCTTTGTCATCACGCTTCCCTTCTGGGCAGTTGATGCCGTGGCAAACTGGTACTTTGGGAACTTCCTATGCAAGGCAGTCCATGTCATCTACACAGTCAACCTCTACAGCAGTGTCCTCATCCTGGCCTTCATCAGTCTGGACCGCTACCTGGCCATCGTCCACGCCACCAACAGTCAGAGGCCAAGGAAGCTGTTGGCTGAAAAGGTGGTCTATGTTGGCGTCTGGATCCCTGCCCTCCTGCTGACTATTCCCGACTTCATCTTTGCCAACGTCAGTGAGGCAGATGACAGATATATCTGTGACCGCTTCTACCCCAATGACTTGTGGGTGGTTGTGTTCCAGTTTCAGCACATCATGGTTGGCCTTATCCTGCCTGGTATTGTCATCCTGTCCTGCTATTGCATTATCATCTCCAAGCTGTCACACTCCAAGGGCCACCAGAAGCGCAAGGCCCTCAAGACCACAGTCATCCTCATCCTGGCTTTCTTCGCCTGTTGGCTGCCTTACTACATTGGGATCAGCATCGACTCCTTCATCCTCCTGGAAATCATCAAGCAAGGGTGTGAGTTTGAGAACACTGTGCACAAGTGGATTTCCATCACCGAGGCCCTAGCTTTCTTCCACTGTTGTCTGAACCCCATCCTCTATGCTTTCCTTGGAGCCAAATTTAAAACCTCTGCCCAGCACGCACTCACCTCTGTGAGCAGAGGGTCCAGCCTCAAGATCCTCTCCAAAGGAAAGCGAGGTGGACATTCATCTGTTTCCACTGAGTCTGAGTCTTCAAGTTTTCACTCCAGCTAA

将人CXCR4过表达慢病毒以不同MOI值感染MenSCs，72h后观察GFP的表达(图2A)。发现MOI为100时，感染效率是最合适的。以最适MOI对MenSCs进行重新感染，荧光显微镜下观察确定感染效率，然后在培养基中添加嘌呤霉素筛选阳性细胞，扩增后保种冻存，以此来获得过表达CXCR4的MenSCs。为了检测CXCR4基因是否真正过表达，提取MenSCs的RNA和蛋白质，通过qPCR和western blot进行验证。如图2B和图2C所示，相比对照组，CXCR4在RNA水平是显著高表达的，蛋白水平同样观察到CXCR4过表达组与GFP对照组具有极显著性差异，免疫荧光的结果也验证了这一点(见图2D)。另外，利用超滤+试剂盒沉淀的方法提取外泌体，western blot也检测了外泌体表面CXCR4的表达，发现过表达组CXCR4也是高表达的(图4)。

然后，在体外transwell实验中分析对照组和CXCR4过表达组在SDF-1因子刺激下的迁移能力，确定感染后过表达CXCR4的MenSCs的迁移能力是否增强。Transwell下室加入100ng/ml SDF-1，上室铺相同细胞数量的MenSCs和MenSCs^CXCR4。结果见图3，其表明在相同时间内，CXCR4过表达组比对照组向下迁移的细胞数量明显增多。这些结果证实，过表达CXCR4的MenSCs迁移能力确实增强了。

实施例2 SD大鼠宫腔粘连模型的构建及MenSCs、外泌体的归巢性研究

选取8-10周龄(200-250g)的雌性SD大鼠，适应性饲养一周后，采用机械损伤/子宫缺血再灌注/宫腔注射脂多糖的多重损伤法构建模型。大鼠具有双侧子宫，因此一侧用于对照，一侧用于构建模型。模型构建一周后，麻醉大鼠，首先观察子宫的形态变化，可见大鼠的正常子宫表面呈淡红色，组织均一性较高；造模侧子宫表面凹凸不平呈环状狭窄。用钢针穿刺进一步验证，发现钢针可以轻松穿过正常子宫(图5A左)，然而造模侧不能穿过(图5A右)，发生了宫腔粘连甚至闭塞。HE染色显示，正常大鼠子宫组织排列紧致有序，未见明显炎性细胞(图5B左)。模型组大鼠子宫组织HE染色可见细胞结构紊乱，腺体数量减少，成纤维细胞数量增加，大量炎性细胞浸润(图5B右)，表明模型构建成功。

造模损伤7天后，尾静脉注射PKH26提前染色标记的MenSCs、MenSCs^CXCR4、Exo、Exo^CXCR4，每周注射一次，共两次。14天后，处死大鼠，收集子宫组织，利用IVIS活体成像系统检测4组MenSCs和外泌体的归巢(每组n＝3)。如图6A所示，4组都有荧光信号，证明MenSCs或外泌体能够趋化至子宫损伤部位，并且CXCR4过表达的MenSCs和外泌体组的信号更强，表明损伤子宫内膜确实会吸引CXCR4高表达的间充质干细胞或外泌体更多地向病理部位迁移。进一步对4组子宫组织进行石蜡切片，DAPI染细胞核，荧光显微镜下观察PKH26红色荧光的分布，确认MenSCs和外泌体在大鼠体内的归巢，实验结果见图6B，其进一步表明CXCR4过表达的MenSCs和外泌体都能够更多地趋化至损伤子宫内膜，说明过表达CXCR4后，干细胞和外泌体的趋化性确实得到了增强。

实施例3过表达CXCR4的MenSCs和外泌体对大鼠子宫组织的修复作用

MenSCs或外泌体移植14天后，子宫内膜厚度发生了明显变化，功能层增厚，细胞排列逐渐恢复正常，腺体也增多了(图7A)。通过柱状图进一步定量研究发现，正常子宫内膜厚度为350μm左右，模型组子宫内膜发生粘连，且上段发生水肿膨胀，内膜厚度仅剩不到100μm。MenSCs或外泌体处理后内膜厚度有了明显增加，且CXCR4组与对照组相比具有明显差异(图7B)。腺体数量表现出同样趋势的结果(图7C)；对各组大鼠子宫组织进行Masson染色后发现正常子宫组织为丝缕、单束状浅蓝色胶原纤维；模型组子宫胶原沉积，大面积变为蓝色，排列杂乱无规律；而MenSCs和外泌体处理后都表现出不同程度的缓解(图8A)。胶原纤维蓝染比例降低，阳性增生面积缩小，内膜基质细胞排列趋向恢复正常，并可见红染肌纤维和腺体数量增多。Exo^CXCR4组纤维化面积降低程度比Exo组效果好，MenSCs^CXCR4组与MenSCs组相比表现出相同的趋势(图8B)。说明过表达CXCR4的MenSCs和外泌体对于降低子宫内膜纤维化面积作用效果更好。

另外，在移植前，将实施例1中通过超滤+试剂盒沉淀的方法提取外泌体在无菌条件下-2℃至-4℃下静置半小时后恢复至37℃。结果发现，经过该处理的Exo^CXCR4组纤维化面积降低程度比Exo^CXCR4组和MenSCs^CXCR4组均显著更好，且红染肌纤维和腺体数量显著增多(图略)。

实施例4过表达CXCR4的MenSCs和外泌体修复内膜组织的机制研究

过表达CXCR4的外泌体能够修复损伤的子宫内膜，使内膜增厚，腺体增生，并缓解纤维化程度的发展。但是通过怎样的方式发挥这些调控作用的还未可知。因此又对这些子宫组织进行了免疫组织化学检测，主要检测了Vimentin、CK18的表达。结果如图9A所示，MenSCs、MenSCs^CXCR4、Exo、Exo^CXCR4移植后，Vimentin和CK18表达水平都有不同程度的提高。Vimentin主要在基质细胞和腺上皮细胞胞浆表达，内膜和上皮细胞皮层不表达。CK18主要定位于子宫内膜腔上皮和腺上皮，基质部位不表达或表达较少。研究进一步显示，MenSCs^CXCR4组与MenSCs组相比，Exo^CXCR4组与Exo组相比，Vimentin和CK18的表达量都显著增多，结果具有显著性差异，并且具有统计学意义(见图9B)。表明，过表达CXCR4的MenSCs来源的外泌体增加了粘连子宫组织Vimentin和CK18的表达，促进子宫内膜间质细胞的增生以及再上皮化，进而促进损伤子宫内膜的修复。

虽然用上述实施方式描述了本发明，应当理解的是，在不背离本发明的精神的前提下，本发明可进行进一步的修饰和变动，且这些修饰和变动均属于本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.间充质干细胞，其过表达或高表达CXCR4。

2.根据权利要求1所述的间充质干细胞，其为经血干细胞。

3.根据权利要求1所述的间充质干细胞，其中所述的过表达或高表达是通过转入外源的CXCR4基因导致的。

4.来源于间充质干细胞的外泌体，其中所述的外泌体过表达或高表达CXCR4，且所述间充质干细胞是如权利要求1-3中任一项所述的间充质干细胞。

5.药物组合物，其包含权利要求1-3中任一项所述的间充质干细胞。

6.根据权利要求5所述的药物组合物，其为注射剂或输注剂。

7.药物组合物，其包含权利要求4所述的外泌体。

8.根据权利要求7所述的药物组合物，其为注射剂或输注剂。

9.权利要求1-3中任一项所述的间充质干细胞在制备用于治疗宫腔粘连的药物中的用途。

10.权利要求4所述的外泌体在制备用于治疗宫腔粘连的药物中的用途。

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