CN111968174A - 一种菌落面积的测量方法及其应用 - Google Patents

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宋洪燕
郭光�
乔鹏
王安皆
李化秀
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Abstract

本发明涉及一种菌落面积的测量方法及其应用。本发明使用高像素照相机对待测菌落进行图像获取，然后使用image J图像处理软件对保存的图像进行分析计算，从而得出菌落面积数据，并能根据清晰图像，观察菌落边缘整齐度、菌落形状等指标。比传统利用直尺测量菌落直径计算面积、肉眼观察菌落形态等方式，大大提高了测量数据的精确度和准确度，同时，该测量方法操作简单便捷，便于实验室人员使用。尤其是在微生物培养基基质配方的筛选中，使用这种方法产生的试验数据可信度更高，不受人为因素影响，采用本方法对培养皿的大小几乎无限制要求，且取材方便，操作简单，机动性强，无需投入过多财力，即可满足一般实验室分析使用。

Description

一种菌落面积的测量方法及其应用
技术领域
本发明涉及一种菌落面积的测量方法及其应用，属于微生物检测技术领域。
背景技术
在微生物培养、筛选，或者微生物培养基筛选中，微生物的菌落面积及菌落形态是研究的关键指标。如，秦俊哲等人根据菌丝形态、生长特性等的差异，初步鉴定8种不同来源的桑黄菌株的亲缘关系，将活化好的菌种按无菌操作的要求分别转接至斜面和平板培养基上，28℃恒温培养，每2d观察1次，记录菌丝萌发快慢、生长速度、菌落大小、菌丝颜色、长势等特征(秦俊哲等，8种不同来源桑黄菌菌丝生长特性研究，陕西科技大学学报，2020，28(6):56-58.)。根据微生物的菌落面积或者菌落形态特征的差异，可以对不同的微生物菌种进行初步鉴定。郭炜等人测定了不同碳源及氮源条件下秀珍菇的菌落直径、菌丝长势等，研究了不同碳源及氮源对秀珍菇菌丝生长的影响，通过每天观察菌落生长势，对菌落长势进行评分，菌落直径的测量用划线法，并计算出秀珍菇的菌丝生长速率，为秀珍菇的工厂化生产提供了依据(郭炜等，不同氮碳源对秀珍菇菌丝生长的影响，黑龙江农业科学，2018(8):82-84.)。徐丽丽等通过筛选出的碳源、氮源基础培养基，接种1d后，每天使用游标卡尺测量菌落直径并记录，计算出菌丝覆盖面达培养皿培养基表面50％、达培养皿培养基表面100％的天数，对菌丝形态、菌丝生长速度进行观察，确定出适宜的松乳菇菌种和固体培养基配方(徐丽丽等，松乳菇菌种固体培养基筛选初步研究，江苏林业科技，2020，47(1):29-31.)。龚光禄等人设计5种不同的母种培养基，研究了不同培养基对桑黄菌丝生长的影响，观察菌丝的生长特性，并用十字交叉法测定菌落直径，计算菌丝生长速度，为该菌株的驯化栽培、生理生化研究奠定基础(龚光禄等，药用真菌桑黄(I.sanghuang)母种培养基的筛选，北方园艺，2016(24):139-141.)。在培养基筛选中，菌落面积和菌落形态是一项重要的考察指标，在其他筛选变量保持不变时，根据单位时间内，微生物在特定培养基上生长的菌落面积及其菌落形态，可以初步筛选出适宜微生物生长的培养基基质配方。
现有技术中，菌落面积的测量多采用尺子直接测量，菌落形态特征也是采用肉眼直接观察，得出的结果往往误差较大，对微生物培养、筛选，或者微生物培养基筛选易造成不良后果，加大了工作量，增加了实验误差。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供了一种菌落面积的测量方法及其应用。
本发明的技术方案如下：
一种菌落面积的测量方法，包括如下步骤：
(1)使用照相机对待测菌落进行图像获取，保存；
(2)使用image J图像处理软件对保存的图像进行分析计算，得出菌落面积数据，并观察菌落形态。
根据本发明优选的，步骤(1)中待测菌落与直尺共同置于照相机的取相范围内获得图像。
根据本发明优选的，步骤(1)中照相机的参数为：2000万以上像素照相机，50mm，F1.8标准镜头，曝光时间：1/100秒，光圈值f/2，ISO为100，测光模式为点测光。
根据本发明优选的，步骤(1)中图像为单色图像。
上述菌落面积的测量方法在筛选微生物培养基基质配方中的应用。
上述菌落面积的测量方法在微生物筛选中的应用。
本发明的技术特点和有益效果：
本发明使用高像素照相机对待测菌落进行图像获取，然后使用image J图像处理软件对保存的图像进行分析计算，从而得出菌落面积数据，并能根据清晰图像，观察菌落边缘整齐度、菌落形状等指标。比传统利用直尺测量菌落直径计算面积、肉眼观察菌落形态等方式，大大提高了测量数据的精确度和准确度，同时，该测量方法操作简单便捷，便于实验室人员使用。尤其是在微生物培养基基质配方的筛选中，使用这种方法产生的试验数据可信度更高，不受人为因素影响，采用本方法对培养皿的大小几乎无限制要求，且取材方便，操作简单，机动性强，无需投入过多财力，即可满足一般实验室分析使用。
附图说明
图1为实施例1中的待测菌落图像；
图2为实施例1中的待测菌落面积分析图；
图3为实施例1中待测菌落的细节图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明的技术方案作进一步说明，但是本发明的保护范围并不仅限于此。实施例中涉及的药品及耗材，若无特殊说明，均为普通市售产品。
实施例中使用的照相机参数：2000万像素单反照相机，50mm，F1.8标准镜头，手动模式下，曝光时间：1/100秒，光圈值：f/2，ISO：100，测光模式：点测光，照片风格：单色。
实施例1
一种菌落面积的测量方法，包括如下步骤：
(1)取一个生长有微生物的培养皿，将该培养皿与直尺共同置于照相机的取相范围内，使用照相机对待测菌落进行图像获取，保存；获取的图像如图1所示，为单色图像；
(2)使用image J图像处理软件对保存的图像中的菌落进行分析计算，image J软件分析菌落面积如图2所示，得出其菌落面积为585.579mm2，并观察菌落形态(图3)，菌落边缘较整齐规则，近似正圆形，菌丝浓密。
仍以图1中菌落为例，在培养皿中用直尺采用十字交叉法测量，由于以肉眼很难分辨菌丝边缘界线，且该菌落为近似正圆形(非正圆形)，只能采用至少三次量取计算平均值的方法，求得菌落面积为772.54mm2(以菌丝边缘最外缘为界，按正圆形计算)，与本发明的测量方法相比，费时费力，人为误差很大，为接下来的数据分析提供的原始信息不精确，从而使试验结果可信度大大降低。

Claims (6)

1.一种菌落面积的测量方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)使用照相机对待测菌落进行图像获取，保存；
(2)使用image J图像处理软件对保存的图像进行分析计算，得出菌落面积数据，并观察菌落形态。
2.如权利要求1所述的测量方法，其特征在于，步骤(1)中待测菌落与直尺共同置于照相机的取相范围内获得图像。
3.如权利要求1所述的测量方法，其特征在于，步骤(1)中照相机的参数为：2000万以上像素照相机，50mm，F1.8标准镜头，曝光时间：1/100秒，光圈值f/2，ISO为100，测光模式为点测光。
4.如权利要求1所述的测量方法，其特征在于，步骤(1)中图像为单色图像。
5.权利要求1所述的菌落面积的测量方法在筛选微生物培养基基质配方中的应用。
6.权利要求1所述的菌落面积的测量方法在微生物筛选中的应用。
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