CN111961616A - 多形拟杆菌及其用途 - Google Patents

多形拟杆菌及其用途 Download PDF

Info

Publication number
CN111961616A
CN111961616A CN202010814932.5A CN202010814932A CN111961616A CN 111961616 A CN111961616 A CN 111961616A CN 202010814932 A CN202010814932 A CN 202010814932A CN 111961616 A CN111961616 A CN 111961616A
Authority
CN
China
Prior art keywords
bacteroides thetaiotaomicron
mouse
casein
milk
allergy
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202010814932.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111961616B (zh
Inventor
王彦波
傅玲琳
王翀
王方婷
周瑾茹
李欢
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhejiang Gongshang University
Original Assignee
Zhejiang Gongshang University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zhejiang Gongshang University filed Critical Zhejiang Gongshang University
Priority to CN202010814932.5A priority Critical patent/CN111961616B/zh
Publication of CN111961616A publication Critical patent/CN111961616A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN111961616B publication Critical patent/CN111961616B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205—Bacterial isolates
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/135—Bacteria or derivatives thereof, e.g. probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/74—Bacteria
    • A61K35/741—Probiotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/08—Antiallergic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23V—INDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00—Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明提出了多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron)在制备预防、缓解或治疗牛奶中酪蛋白过敏的食品或者药物中的用途，所述多形拟杆菌于2020年4月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2020105。该多形拟杆菌可调控Th1/Th2及Th17/Treg细胞亚群失衡，从而可缓解牛奶中酪蛋白引起的过敏反应，缓解牛奶过敏、支气管哮喘等免疫疾病，针对性强、经济效益高、原料绿色环保无污染且副作用少。

Description

多形拟杆菌及其用途
技术领域
本发明涉及微生物学领域，具体涉及一种多形拟杆菌及其用途。
背景技术
牛奶含有丰富的营养物质，包括30多种蛋白，为酪蛋白和乳清蛋白。目前普遍认为酪蛋白、β-乳球蛋白、α-乳白蛋白是主要过敏原。
对大多数婴幼儿而言，由于生长发育初期需要补充大量的营养，牛奶就成为了营养摄入的第一选择。但是在3岁以下的儿童中牛奶过敏反应达到25％，其中酪蛋白是牛奶中存在的主要过敏原，约占牛奶总蛋白含量的80％。相关技术中，为避免牛奶过敏，部分使用代替牛奶营养的奶代替物配方；部分对酪蛋白和乳清进行水解。但其均无法从根源解决牛奶过敏的问题。
发明内容
本申请是基于发明人对以下事实和问题的发现和认识作出的：
针对小鼠的研究表明，血浆中抗原特异性IgG1和IgG4水平的提高以及粪便中SIgA水平的提高，可抑制过敏原特异性IgE合成并可减轻Th2介导的过敏症状；Treg具有抗炎和维持自身免疫耐受作用；Th17通过分泌细胞因子(IL-17A、IL-23)等发挥致炎效应并具有很强的促炎症作用。在过敏状态下，树突状细胞(DC)活化后分泌IL-35与TGF-β共同促进初始细胞分化为Th17细胞诱导前炎症反应而抑制细胞Treg的活性。另一方面，辅助性T细胞Th1和Th2亚群平衡介导了过敏反应强度。所以当肠上皮细胞受损、肠道发生炎症时，会增加抗原的渗透，肠上皮细胞就会释放TSLP、IL-33和IL-25，从而促进Th2反应，诱发食物过敏；而Th2细胞主要分泌IL-5、IL-13和IL-4等因子，在速发型超敏反应中起重要作用。同时Th1细胞主要分泌IFN-γ、IL-2和TNF-α等介导细胞免疫和迟发性超敏反应。Th1和Th2分泌的细胞因子均可促进本亚型而抑制另一亚型的生长和分化。因此Th1/Th2、Th17/Treg平衡在维持机体自身免疫稳态中发挥重要作用，一旦此平衡被打破，将可能引起异常的免疫应答，如食物过敏、过敏性哮喘、HIV等。研究牛奶的过敏机制可知，牛奶中的酪蛋白能够引起易感人群体内Th1/Th2、Th17/Treg平衡紊乱，从而导致牛奶过敏的发生。而在本申请中，该多形拟杆菌开展功能验证实验后惊喜地发现，多形拟杆菌具有调控Th1/Th2及Th17/Treg细胞亚群失衡的作用，从而可缓解牛奶中酪蛋白引起的过敏反应。
为此，在本发明的第一方面，本发明提出了多形拟杆菌(Bacteroidesthetaiotaomicron)在制备预防、缓解或治疗牛奶中酪蛋白过敏的食品或者药物中的用途，所述多形拟杆菌于2020年4月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M2020105，分类命名为：多形拟杆菌WF-1198-1-2Bacteroides thetaiotaomicron，保藏地址为：中国.武汉.武汉大学。根据本发明的多形拟杆菌能够显著降低酪蛋白引起的过敏反应指标特异性抗体IgE、IgG1、IgG4、SIgA和血清中组胺的含量，以及降低小肠中Tslp、Il33基因相对表达量和修复肠黏膜损伤，同时能够增加Th1型细胞因子(IFN-γ、IL-2、TNF-α)、Treg细胞(TGF-β、IL-35)以及降低Th2型细胞因子(IL-5、IL-13、IL-4)和Th17型细胞因子(IL-6、IL-17A)的表达，实现了Th1/Th2、Th17/Treg细胞平衡，缓解了过敏反应。因此，该多形拟杆菌可用于缓解牛奶中酪蛋白引起的过敏反应。具有相比于现有技术更好的和更安全的功能。在减缓牛奶中酪蛋白引起的过敏方面具有特别的优势。可缓解牛奶过敏、支气管哮喘等免疫疾病，针对性强、经济效益高、原料绿色环保无污染及副作用少。
另外，根据本发明的实施例，上述用途还可以进一步包括如下附加技术特征至少之一：
根据本发明的实施例，所述多形拟杆菌具有调节Th1/Th2、Th17/Treg细胞亚群失衡的作用。
根据本发明的实施例，所述多形拟杆菌摄入方式为每天1×108～1×1011cfu/只小鼠。
在本发明的第二方面，本发明提出了一种组合物。根据本发明的实施例，所述组合物包含：前面所述的多形拟杆菌，所述多形拟杆菌于2020年4月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2020105，分类命名为：多形拟杆菌Bacteroidesthetaiotaomicron。根据本发明的多形拟杆菌可用于缓解牛奶中酪蛋白引起的过敏反应。具有相比于现有技术更好的和更安全的功能。在减缓牛奶中酪蛋白引起的过敏方面具有特别的优势。可缓解牛奶过敏、支气管哮喘等免疫疾病，针对性强、经济效益高、原料绿色环保无污染及副作用少。
在本发明的第三方面，本发明提出了一种药物。根据本发明的实施例，所述药物包含：前面所述的多形拟杆菌，所述多形拟杆菌于2020年4月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2020105，分类命名为：多形拟杆菌Bacteroidesthetaiotaomicron。根据本发明的多形拟杆菌可用于缓解牛奶中酪蛋白引起的过敏反应。具有相比于现有技术更好的和更安全的功能。在减缓牛奶中酪蛋白引起的过敏方面具有特别的优势。可缓解牛奶过敏、支气管哮喘等免疫疾病，针对性强、经济效益高、原料绿色环保无污染及副作用少。
根据本发明的实施例，还包括药学上可接受的辅剂，所述辅剂包括稳定剂、湿润剂、乳化剂、粘合剂、等渗剂的至少之一。
根据本发明的实施例，所述药物呈片剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂、溶液剂、悬浮剂、冻干制剂的至少一种。进而，根据本发明实施例的药物方便给药，适于保持多形拟杆菌的最佳活性。
根据本发明的实施例，所述药物的给药剂量不受特别限制，实际应用中，可以根据给药对象的健康状况灵活选择。根据本发明的一些实施例，将所述药物以每天1×108～1×1011cfu/只小鼠的剂量对致敏小鼠进行干预，被干预小鼠的炎症得到明显缓解。
在本发明的第四方面，本发明提出了一种食品。根据本发明的实施例，所述食品包含：前面所述的多形拟杆菌，所述多形拟杆菌于2020年4月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2020105，分类命名为：多形拟杆菌Bacteroidesthetaiotaomicron。根据本发明实施例的食品可缓解牛奶过敏、支气管哮喘等免疫疾病，针对性强、经济效益高、原料绿色环保无污染及副作用少。
需要说明的是，本申请所述的食品应做广义的理解，任何可咀嚼、吞咽或能为机体提供能量的物质均可视为食品。
根据本发明的实施例，所述食品进一步包括：食品学上可接受的添加剂。进而所述食品的口感更佳。
另外，需要说明的是，本发明的多形拟杆菌可以与通常的食品中所使用的食品材料配合食用。例如，谷类及薯类：谷类包括米、面、杂粮，薯类包括马铃薯、红薯等；动物性食物，包括肉、禽、鱼、奶、蛋类等。
本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
附图说明
图1为根据本发明实施例1的多形拟杆菌在光学显微镜下的结构图；
图2为根据本发明实施例2的多形拟杆菌对小鼠体重增长率的影响；
图3为根据本发明实施例2的多形拟杆菌对小鼠过敏症状的影响；
图4为根据本发明实施例2的多形拟杆菌对小鼠血清中IgE的影响；
图5为根据本发明实施例2的多形拟杆菌对小鼠血清中IgG1的影响；
图6为根据本发明实施例2的多形拟杆菌对小鼠血清中IgG4的影响；
图7为根据本发明实施例2的多形拟杆菌对小鼠血清中组胺的影响；
图8为根据本发明实施例2的多形拟杆菌对小鼠粪便中SIgA的影响；
图9为根据本发明实施例3的多形拟杆菌对小鼠体重增长率的影响；
图10为根据本发明实施例3的多形拟杆菌对小鼠过敏症状的影响；
图11为根据本发明实施例3的多形拟杆菌对小鼠血清中IgE的影响；
图12为根据本发明实施例3的多形拟杆菌对小鼠血清中IgG1的影响；
图13为根据本发明实施例3的多形拟杆菌对小鼠血清中IgG4的影响；
图14为根据本发明实施例3的多形拟杆菌对小鼠血清中组胺的影响；
图15为根据本发明实施例3的多形拟杆菌对小鼠粪便中SIgA的影响；
图16为根据本发明实施例4的多形拟杆菌对小鼠血清中细胞因子TNF-α的影响；
图17为根据本发明实施例4的多形拟杆菌对小鼠血清中细胞因子IL-23的影响；
图18为根据本发明实施例4的多形拟杆菌对小鼠血清中细胞因子TGF-β的影响；
图19为根据本发明实施例4的多形拟杆菌对小鼠肠道内Tslp mRNA表达量的影响；
图20为根据本发明实施例4的多形拟杆菌对小鼠肠道内Il33 mRNA表达量的影响；
图21为根据本发明实施例4的多形拟杆菌对小鼠肠道内IL-4mRNA表达量的影响；
图22为根据本发明实施例4的多形拟杆菌对小鼠肠道内IL-17AmRNA表达量的影响；
图23为根据本发明实施例4的多形拟杆菌对小鼠十二指肠的影响；
图24为根据本发明实施例4的多形拟杆菌对小鼠空肠的影响；
图25为根据本发明实施例4的多形拟杆菌对小鼠回肠的影响；
图26为根据本发明实施例4的多形拟杆菌对小鼠结肠的影响；
图27为根据本发明实施例4的多形拟杆菌对不同免疫组织中Th细胞亚群细胞分化的影响；
图28为根据本发明实施例4的多形拟杆菌对小鼠不同免疫组织中Th细胞亚群细胞分化的影响；
图29为根据本发明实施例5的多形拟杆菌对小鼠血清中细胞因子TNF-α的影响；
图30为根据本发明实施例5的多形拟杆菌对小鼠血清中细胞因子IL-23的影响；
图31为根据本发明实施例5的多形拟杆菌对小鼠血清中细胞因子TGF-β的影响；
图32为根据本发明实施例5的多形拟杆菌对小鼠肠道内Tslp mRNA表达量的影响；
图33为根据本发明实施例5的多形拟杆菌对小鼠肠道内Il33 mRNA表达量的影响；
图34为根据本发明实施例5的多形拟杆菌对小鼠肠道内IL-4mRNA表达量的影响；
图35为根据本发明实施例5的多形拟杆菌对小鼠肠道内IL-17AmRNA表达量的影响；
图36为根据本发明实施例5的多形拟杆菌对小鼠十二指肠的影响；
图37为根据本发明实施例5的多形拟杆菌对小鼠空肠的影响；
图38为根据本发明实施例5的多形拟杆菌对小鼠回肠的影响；
图39为根据本发明实施例5的多形拟杆菌对小鼠结肠的影响；
图40为根据本发明实施例5的多形拟杆菌对不同免疫组织中Th细胞亚群细胞分化的影响；
图41为根据本发明实施例5的多形拟杆菌对小鼠不同免疫组织中Th细胞亚群细胞分化的影响。
具体实施方式
以下通过特定的具体实例说明本发明的技术方案。应理解，本发明提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤；还应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。而且，除非另有说明，各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容的情况下，当亦视为本发明可实施的范畴。
为了更好的理解上述技术方案，下面更详细地描述本发明的示例性实施例。虽然显示了本发明的示例性实施例，然而应当理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施例所限制。相反，提供这些实施例是为了能够更透彻地理解本发明，并且能够将本发明的范围完整的传达给本领域的技术人员。
下面参考具体实施例，对本发明进行描述，需要说明的是，这些实施例仅仅是描述性的，而不以任何方式限制本发明。
实施例1菌株的分离与鉴定
一、菌株的分离
(1)采集身体健康的健康人群粪便样品(以浙江工商大学部分学生为对象，针对学生的身体健康情况、生活饮食习惯、饮食卫生情况等进行问卷，采集身体健康，1年以上不服用药物的健康学生的粪便样品)，用无菌EP管保存新鲜粪便，4℃冷藏，在4小时之内运送至实验室，完成样品处理和培养。以无菌玻璃棒将粪便样品捣碎，震荡均匀，用无菌生理盐水按十倍稀释法将样品稀释，取10-3-10-8稀释度溶液倒入已经凝固的选择性GAM(Gifuanaerobic medium)肉汤培养基上，涂布均匀，放入厌氧培养箱中，37℃厌氧培养48小时。
(2)将步骤(1)获得的菌种进行初筛，根据菌落形状、革兰氏染色以及显微镜观察得到初步的多形拟杆菌菌种。
(3)将步骤(2)获得菌种进行生理生化验证以及16S rDNA序列分析，得到多形拟杆菌，命名为WF-1198-1-2。
其中，生理生化特性：严格厌氧生长，进行耐氧实验、糖发酵试验、胆汁试验、七叶灵试验以及基质试验。结果见表1。
表1生化鉴定结果
Figure BDA0002632331750000061
注：质控试验对照，结果：“+”表示阴性、“-”表示阴性、“+-”表示多数菌株阴性，少数菌株阳性。
其中，本例16S rDNA扩增的引物序列为：
27F AGAGTTTGATCMTGGCTCAG
1492R GGTTACCTTGTTACGACTT
表2 PCR反应体系为：
Green Taq Mix 25ul
ddH<sub>2</sub>O 19ul
27F 2ul
1492R 2ul
DNA 2ul
PCR反应条件为：95℃预变性3min，然后进入30-35个循环：95℃15sec、60℃15sec、72℃60sec/kb、循环结束后，72℃延伸5min。
测序结果显示，WF-1198-1-2的菌株其16S rDNA测序结果为SEQ ID NO:3所示序列。
CAAAAATGCTCGGCTTACCATGCAGTCGAGGGGCAGCATTTCAGTTTGCTTGCAAACTGGAGATGGCGACCGGCGCACGGGTGAGTAACACGTATCCAACCTGCCGATAACTCGGGGATAGCCTTTCGAAAGAAAGATTAATACCCGATGGTATAATCAGACCGCATGGTCTTGTTATTAAAGAATTTCGGTTATCGATGGGGATGCGTTCCATTAGGCAGTTGGTGAGGTAACGGCTCACCAAACCTTCGATGGATAGGGGTTCTGAGAGGAAGGTCCCCCACATTGGAACTGAGACACGGTCCAAACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGAGGAATATTGGTCAATGGGCGCAGGCCTGAACCAGCCAAGTAGCGTGAAGGATGACTGCCCTATGGGTTGTAAACTTCTTTTATATGGGAATAAAGTTTTCCACGTGTGGAATTTTGTATGTACCATATGAATAAGGATCGGCTAACTCCGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGGAGGATCCGAGCGTTATCCGGATTTATTGGGTTTAAAGGGAGCGTAGGTGGACAGTTAAGTCAGTTGTGAAAGTTTGCGGCTCAACCGTAAAATTGCAGTTGATACTGGCTGTCTTGAGTACAGTAGAGGTGGGCGGAATTCGTGGTGTAGCGGTGAAATGCTTAGATATCACGAAGAACTCCGATTGCGAAGGCAGCTCACTGGACTGCAACTGACACTGATGCTCGAAAGTGTGGGTATCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACACAGTAAACGATGAATACTCGCTGTTTGCGATATACAGTAAGCGGCCAAGCGAAAGCATTAAGTATTCCACCTGGGGAGTACGCCGGCACGGTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGAGAACATGTGGTTTAATTCGATGATACGCGAGGAACCTTACGCCGGGCTTAAATTGCATTTGATA。
其中，光学显微镜下观察革兰氏染色后的多形拟杆菌，结果显示，多形拟杆菌呈杆状、两端钝圆而浓染，形态一致，具体光学显微镜照片参见附图1。
将多形拟杆菌转接到优化的CDC厌氧血琼脂培养基进行培养，以备后续使用。鉴于上述形态特征和16S rDNA序列同源性分析结果，将上述步骤分离筛选得到的菌株鉴定为多形拟杆菌。该多形拟杆菌已于2020年4月30日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会典型培养物保藏中心(简称CCTCC，地址中国.武汉.武汉大学.)，保藏登记号为CCTCC M2020105。
实施例2
多形拟杆菌(WF-1198-1-2)缓解酪蛋白致敏的BALB/c小鼠
酪蛋白(简称Casein)致敏食物过敏小鼠模型的建立：
(1)多形拟杆菌干预食物过敏小鼠模型的建立：15只6周龄SPF级雌性BALB/c小鼠，随机分成三组分别为空白组、致敏组、治疗组。小鼠预养一周，第七天进行口服灌胃酪蛋白(Casein)致敏，其中对照组(PBS)、致敏组Casein(200μg)、治疗组Casein(200μg)+多形拟杆菌菌悬液(1×108cfu/只小鼠每天)，连续两周每周三次。之后灌胃对应致敏剂量6倍的Casein进行激发，每周1次，连续2周，从第7天开始对多形拟杆菌治疗组开始灌服，试验四周。25℃饲养，自由饮水，每周称一次体重，最后一次激发后禁食，第二天断颈处死。
(2)小鼠每周体重变化：在小鼠饲养期间，每周同一天称取小鼠体重，观察小鼠体重变化。并计算每组小鼠每周体重增长率，计算公式：
Figure BDA0002632331750000071
结果如图2所示，酪蛋白致敏后小鼠体重上升趋势减缓，但多形拟杆菌干预后小鼠体重上升趋势增加并逐渐接近PBS组。
(3)小鼠腹泻及过敏症状评分评定小鼠过敏症状：每周观察小鼠过敏及腹泻情况，参照以下评分系统进行打分。
表3小鼠腹泻及过敏症状评分表
Figure BDA0002632331750000081
结果如图3所示，与PBS组相比，酪蛋白致敏组产生明显的过敏症状，但多形拟杆菌干预后小鼠过敏症状减轻。
(4)小鼠血清中特异性IgE、IgG4、IgG1测定：利用双抗体夹心间接ELISA法检测。
96孔板每孔包被100μL的10μg/mL纯化的Casein，4℃孵育过夜；第二天，取出包被好的96孔板，弃去包被液，每孔加入300μL的洗涤液(PBS+0.05％吐温20)孵育1min，弃去液体，滤纸上拍干，再次加入300μL的洗涤液进行洗板，重复洗板3次，避免产生气泡；每孔加入200μL封闭液(含BSA)，37℃孵育1h；之后同样加入300μL的洗涤液洗板3次；每孔加入100μL稀释后的小鼠血清样品(IgE 1∶6，IgG4 1∶200，IgG1 1∶200)，37℃孵育2h；之后同样加入300μL的洗涤液洗板5次；每孔加入100μL HRP标记的二抗(Goat Anti-Mouse IgG1-HRP、Goat Anti-Mouse IgG4-HRP、Goat Anti-Mouse IgE-HRP)，37℃孵育1h；之后同样加入300μL的洗涤液洗板5次；每孔加入100μLTMB，37℃避光孵育20min后加入50μL终止液(2NH2SO4)，在450nm和570nm波长测定各孔的OD值
结果如图4-图6所示，酪蛋白致敏组的IgE、IgG4、IgG1含量都有所上升，但多形拟杆菌干预后IgE、IgG4含量都显著下降，IgG1含量几乎无变化。
(5)小鼠血清中组胺的测定：血清中组胺的测定采用小鼠组胺ELISA试剂盒(购于Thermo Fisher Scientific)，按照其说明书进行测定，在450nm处测定各孔的吸光度OD值。
结果如图7所示，与PBS组相比，酪蛋白致敏组的组胺有所提升，但多形拟杆菌干预后组胺含量有所下降。
(6)小鼠粪便中SIgA的测定：将粪便制成粪便悬液，利用双抗体夹心间接ELISA法检测，在波长450nm和570nm波长测定各孔的OD值。
结果如图8所示，与PBS组相比，酪蛋白致敏组的SIgA有所提升，但多形拟杆菌干预后SIgA含量显著下降。
实施例3
多形拟杆菌(WF-1198-1-2)缓解酪蛋白致敏的BALB/c小鼠
(1)多形拟杆菌干预食物过敏小鼠模型建立：利用常规酪蛋白(Casein)致敏食物过敏小鼠模型，在致敏组基础上给予多形拟杆菌菌悬液(1×1011cfu/只小鼠每天)进行灌胃处理，建立多形拟杆菌干预食物过敏小鼠模型。试验四周，最后一次激发后禁食，第二天断颈处死。
(2)小鼠每周体重变化：在小鼠饲养期间，每周同一天称取小鼠体重，观察小鼠体重变化。并计算每组小鼠每周体重增长率，计算公式：
Figure BDA0002632331750000091
结果如图9所示，酪蛋白致敏后，小鼠体重上升趋势减缓，但多形拟杆菌干预后小鼠体重上升趋势增加并逐渐接近PBS组。
(3)小鼠腹泻及过敏症状评分评定小鼠过敏症状：每周观察小鼠过敏及腹泻情况，参照评分系统进行打分。
结果如图10所示，与PBS组相比，酪蛋白致敏组产生明显的过敏症状，但多形拟杆菌干预后小鼠过敏症状减轻。
(4)小鼠血清中特异性IgE、IgG4、IgG1测定：利用双抗体夹心间接ELISA法检测，在波长450nm和570nm波长测定各孔的OD值。
结果如图11-图13所示，与PBS组相比，酪蛋白致敏组的IgE、IgG4、IgG1都有所提升，但多形拟杆菌干预后IgE和IgG4的含量都有所下降，IgG1含量几乎无变化。
(5)小鼠血清中组胺的测定：血清中组胺的测定采用小鼠组胺ELISA试剂盒，按照其说明书进行测定，在450nm处测定各孔的吸光度OD值。
结果如图14所示，与PBS组相比，CASEIN致敏组的组胺有所提升，但多形拟杆菌干预后组胺含量有所下降。
(6)小鼠粪便中SIgA的测定：将粪便制成粪便悬液，利用双抗体夹心间接ELISA法检测，在波长450nm和570nm波长测定各孔的OD值。
结果如图15所示，与PBS组相比，酪蛋白致敏组的SIgA有所提升，但多形拟杆菌干预后SIgA含量显著下降。
实施例4
多形拟杆菌调控Th1/Th2、Th17/Treg细胞亚群失衡：
(1)多形拟杆菌干预食物过敏小鼠模型建立：利用常规酪蛋白致敏食物过敏小鼠模型，在致敏组基础上给予多形拟杆菌菌悬液(1×108cfu/只小鼠每天)进行灌胃处理，建立多形拟杆菌干预食物过敏小鼠模型。第四周灌胃结束后观察12h，进行眼眶取血处死，血液凝固后离心取上清，分装冻存于-20℃。
(2)脾脏单细胞悬液制备：200目筛置于一次性无菌培养皿上，用高温灭菌过的手术剪小心取出小鼠脾脏置于200目筛中，倒入5mL无菌PBS，用一次性10mL注射器芯轻轻研磨，移液器移取充分研磨后的脾细胞悬液至无菌15mL离心管中，4℃300g离心5min取沉淀，沉淀重悬于5mL红细胞裂解液中，混匀，室温孵育5min，4℃300g离心5min取沉淀，沉淀重悬于5mLPBS溶液中洗涤两次，室温孵育5min，4℃300g离心5min取沉淀，最后一次离心完毕加适量RPMI 1640培养基制成脾脏单细胞悬液至细胞浓度为1×104个/mL。
(3)小鼠血清中细胞因子IL-23、TNF-α、TGF-β分泌量的测定；采用Bio-Plex检测试剂盒的双抗夹心法检测小鼠血清中细胞因子的分泌量：在96孔板中分别加入50μL的磁珠，室温孵育30min后用加入100μL洗液，洗2次；拍干后加入50μL样品(或标准品)，在850rpm的摇床上室温孵育30min；弃去样品后用100μL的洗液，洗3次；拍干后，每孔加入50μLstreptavidin-PE,在850rpm的摇床上室温孵育10min；拍干后加入洗液100μL，洗3次；每孔加入125μLassay buffer重悬，在850rpm的摇床上室温孵育30sec；上机检测。
结果如图16-图18所示，与PBS组相比，酪蛋白致敏组的IL-23、TNF-α、TGF-β含量都有所上升，但多形拟杆菌干预后IL-23、TNF-α、TGF-β含量都显著下降。
(4)小鼠肠道内Tslp、Il33、IL-17A、IL-4mRNA表达量的测定:利用q-PCR测定小鼠大肠和小肠内基因mRNA的表达量:取肠道组织于研钵中用液氮研磨成并用TRizol提取RNA。利用
Figure BDA0002632331750000101
II qRT Super进行反转录得到cDNA。实时荧光定量PCR按照SYBR Green Ikit or SYBR Green FastStart kit进行配制。利用HRPT作为mRNA表达量的内参基因进行q-PCR检测。引物设计如下
表4实时荧光定量PCR上下游引物序列
Figure BDA0002632331750000111
结果如图19-图22所示，与PBS组相比，酪蛋白致敏组的Tslp、Il33、IL-17A、IL-4含量都有所上升，但多形拟杆菌干预后Tslp、Il33、IL-17A、IL-4都显著下降。
(5)利用苏木精—伊红染色法对小鼠肠道不同部位进行切片染色：取肠道组织不同部位(小鼠十二指肠、空肠、回肠、结肠)，每个肠道部位组织取约3-5cm浸泡于1mL 4％多聚甲醛中使其固定。将固定好的组织放入脱水机中，再由低浓度到高浓度乙醇作为脱水剂进行脱水，然后将组织置于二甲苯中，使组织透明；再将透明组织放入包埋机进行包埋；之后将组织放入切片机中，切为厚度为4μm的切片；然后将将切片置于60℃烤箱中烘烤2h；之后用二甲苯I、二甲苯II各浸泡15min；再经无水乙醇I、II各浸泡10min；再经由95％乙醇、80％乙醇、70％乙醇各浸泡2min；再用自来水冲洗1min即可染色；将切片放入苏木素染液中染5min，之后用流水冲洗2min；接着用0.5％盐酸酒精分化5s，并用流水冲洗1min；再用0.5％稀氨水返蓝20s，并用流水冲洗3min；再将切片放入0.5％伊红染液染色2min，并用流水冲洗1min；再将切片放入80％乙醇、95％乙醇各30s；再用无水乙醇I、II各2min；之后用二甲苯I、二甲苯II各5min，使切片透明；在已透明的切片上滴上中性树胶封固；用显微镜观察。
结果如图23-图26所示，与PBS组相比，酪蛋白致敏组的十二指肠、空肠、回肠与结肠损伤严重，但多形拟杆菌干预组的十二指肠、空肠、回肠与结肠肠损伤较于酪蛋白致敏组有所减缓。
(6)流式细胞术检测小鼠脾脏中T细胞分化：取小鼠脾脏制成单细胞悬液并取1mL加到12孔板中，每个孔中加入2μL胞内指标刺激阻断试剂(Leukocyte ActivationCocktail)，混合均匀后，将其放入37℃，5％CO2细胞培养箱中培养5h；收集细胞，4℃，500×g，离心5min，用1mLPBS溶液洗涤两次；250×g离心10min，弃上清，细胞沉淀中加入1mL BDCytofix TM缓冲液重悬细胞，并孵育10-20min；以250×g离心10min，弃上清后，加入1mLPBS溶液洗涤两次，再250×g离心10min；在细胞沉淀中加入1mL1×BD Perm/WashTM缓冲液以重悬细胞，并孵育15min；然后在以250×g离心细胞10min，弃去上清液；用50μL1×BD Perm/WashTM缓冲液重悬细胞，避光孵育30min；染色后用1mL1×BD Perm/WashTM缓冲液洗涤细胞两次，并重悬于200μL PBS溶液中，然后上流式细胞仪进行检测。
结果如图27和图28所示，与PBS组相比，酪蛋白致敏组的IL-4含量有所上升，但多形拟杆菌干预后IL-4含量显著下降。
实施例5
多形拟杆菌调控Th1/Th2、Th17/Treg细胞亚群失衡：
(1)多形拟杆菌干预食物过敏小鼠模型建立：利用常规酪蛋白致敏食物过敏小鼠模型，在致敏组基础上给予多形拟杆菌菌悬液(1×1011cfu/只小鼠每天)进行灌胃处理，建立多形拟杆菌干预食物过敏小鼠模型。第四周灌胃结束后观察12h，进行眼眶取血处死，血液凝固后离心取上清，分装冻存于-20℃。
(2)脾脏单细胞悬液制备：200目筛置于一次性无菌培养皿上，用高温灭菌过的手术剪小心取出小鼠脾脏置于200目筛中，倒入5mL无菌PBS，用一次性10mL注射器芯轻轻研磨，移液器移取充分研磨后的脾细胞悬液至无菌15mL离心管中，4℃300g离心5min取沉淀，沉淀重悬于5mL红细胞裂解液中，混匀，室温孵育5min，4℃300g离心5min取沉淀，沉淀重悬于5mLPBS溶液中洗涤两次，室温孵育5min，4℃300g离心5min取沉淀，最后一次离心完毕加适量RPMI 1640培养基制成脾脏单细胞悬液至细胞浓度为1×104个/mL。
(3)小鼠血清中细胞因子IL-23、TNF-α、TGF-β分泌量的测定；采用Bio-Plex检测试剂盒的双抗夹心法检测小鼠血清中细胞因子的分泌量：在96孔板中分别加入50μL的磁珠，室温孵育30min后用加入100μL洗液，洗2次；拍干后加入50μL样品(或标准品)，在850rpm的摇床上室温孵育30min；弃去样品后用100μL的洗液，洗3次；拍干后，每孔加入50μLstreptavidin-PE，在850rpm的摇床上室温孵育10min；拍干后加入洗液100μL，洗3次；每孔加入125μLassay buffer重悬，在850rpm的摇床上室温孵育30sec；上机检测。
结果如图29-图31所示，与PBS组相比，酪蛋白致敏组的IL-23、TNF-α、TGF-β含量都有所上升，但多形拟杆菌干预后IL-23、TNF-α、TGF-β含量都显著下降。
(4)小鼠肠道内Tslp、Il33、IL-17A、IL-4mRNA表达量的测定:利用q-PCR测定小鼠大肠和小肠内基因mRNA的表达量:取肠道组织于研钵中用液氮研磨成并用TRizol提取RNA。利用
Figure BDA0002632331750000121
II qRT Super进行反转录得到cDNA。实时荧光定量PCR按照SYBR Green Ikit or SYBR Green FastStart kit进行配制。利用HRPT作为mRNA表达量的内参基因进行q-PCR检测。
结果如图32-图35所示，与PBS组相比，酪蛋白致敏组的Tslp、Il33、IL-17A、IL-4含量都有所上升，但多形拟杆菌干预后Tslp、Il33、IL-17A、IL-4都显著下降。
(5)利用苏木精—伊红染色法对小鼠肠道不同部位进行切片染色：取肠道组织不同部位(小鼠十二指肠、空肠、回肠、结肠)，每个肠道部位组织取约3-5cm浸泡于1mL 4％多聚甲醛中使其固定。将固定好的组织放入脱水机中，再由低浓度到高浓度乙醇作为脱水剂进行脱水，然后将组织置于二甲苯中，使组织透明；再将透明组织放入包埋机进行包埋；之后将组织放入切片机中，切为厚度为4μm的切片；然后将将切片置于60℃烤箱中烘烤2h；之后用二甲苯I、二甲苯II各浸泡15min；再经无水乙醇I、II各浸泡10min；再经由95％乙醇、80％乙醇、70％乙醇各浸泡2min；再用自来水冲洗1min即可染色；将切片放入苏木素染液中染5min，之后用流水冲洗2min；接着用0.5％盐酸酒精分化5s，并用流水冲洗1min；再用0.5％稀氨水返蓝20s，并用流水冲洗3min；再将切片放入0.5％伊红染液染色2min，并用流水冲洗1min；再将切片放入80％乙醇、95％乙醇各30s；再用无水乙醇I、II各2min；之后用二甲苯I、二甲苯II各5min，使切片透明；在已透明的切片上滴上中性树胶封固；用显微镜观察。
结果如图36-图39所示，与PBS组相比，酪蛋白致敏组的十二指肠、空肠、回肠与结肠损伤严重，但多形拟杆菌干预组的十二指肠、空肠、回肠与结肠肠损伤较于酪蛋白致敏组有所减缓。
(6)流式细胞术检测小鼠脾脏中T细胞分化：取小鼠脾脏制成单细胞悬液并取1mL加到12孔板中，每个孔中加入2μL胞内指标刺激阻断试剂(Leukocyte ActivationCocktail)，混合均匀后，将其放入37℃，5％CO2细胞培养箱中培养5h；收集细胞，4℃，500×g，离心5min，用1mLPBS溶液洗涤两次；250×g离心10min，弃上清，细胞沉淀中加入1mL BDCytofix TM缓冲液重悬细胞，并孵育10-20min；以250×g离心10min，弃上清后，加入1mLPBS溶液洗涤两次，再250×g离心10min；在细胞沉淀中加入1mL1×BD Perm/WashTM缓冲液以重悬细胞，并孵育15min；然后在以250×g离心细胞10min，弃去上清液；用50μL1×BD Perm/WashTM缓冲液重悬细胞，避光孵育30min；染色后用1mL1×BD Perm/WashTM缓冲液洗涤细胞两次，并重悬于200μL PBS溶液中，然后上流式细胞仪进行检测。
结果如图40和图41所示，与PBS组相比，酪蛋白致敏组的IL-4含量有所上升，但多形拟杆菌干预后IL-4含量显著下降。
综上，本发明的多形拟杆菌能够显著降低酪蛋白引起的过敏反应指标特异性抗体IgE、IgG1、IgG4、SIgA和血清中组胺的含量及降低小肠中Tslp、Il33基因相对表达量以及能够修复肠黏膜损伤，同时多形拟杆菌能够增加Th1型细胞因子(IL-2、TNF-α)、Treg细胞(TGF-β、IL-35)以及降低Th2型细胞因子(IL-5、IL-13、IL-4)和Th17型细胞因子(IL-23、IL-17A)的表达，实现了Th1/Th2、Th17/Treg细胞平衡，缓解了过敏反应。因此，多形拟杆菌可用于缓解牛奶中酪蛋白引起的过敏反应。
在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不应理解为必须针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例进行接合和组合。
尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。
序列表
<110> 浙江工商大学
<120> 多形拟杆菌及其用途
<130> 2019
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
agagtttgat cmtggctcag 20
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ggttaccttg ttacgactt 19
<210> 3
<211> 968
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
caaaaatgct cggcttacca tgcagtcgag gggcagcatt tcagtttgct tgcaaactgg 60
agatggcgac cggcgcacgg gtgagtaaca cgtatccaac ctgccgataa ctcggggata 120
gcctttcgaa agaaagatta atacccgatg gtataatcag accgcatggt cttgttatta 180
aagaatttcg gttatcgatg gggatgcgtt ccattaggca gttggtgagg taacggctca 240
ccaaaccttc gatggatagg ggttctgaga ggaaggtccc ccacattgga actgagacac 300
ggtccaaact cctacgggag gcagcagtga ggaatattgg tcaatgggcg caggcctgaa 360
ccagccaagt agcgtgaagg atgactgccc tatgggttgt aaacttcttt tatatgggaa 420
taaagttttc cacgtgtgga attttgtatg taccatatga ataaggatcg gctaactccg 480
tgccagcagc cgcggtaata cggaggatcc gagcgttatc cggatttatt gggtttaaag 540
ggagcgtagg tggacagtta agtcagttgt gaaagtttgc ggctcaaccg taaaattgca 600
gttgatactg gctgtcttga gtacagtaga ggtgggcgga attcgtggtg tagcggtgaa 660
atgcttagat atcacgaaga actccgattg cgaaggcagc tcactggact gcaactgaca 720
ctgatgctcg aaagtgtggg tatcaaacag gattagatac cctggtagtc cacacagtaa 780
acgatgaata ctcgctgttt gcgatataca gtaagcggcc aagcgaaagc attaagtatt 840
ccacctgggg agtacgccgg cacggtgaaa ctcaaaggaa ttgacggggg cccgcacaag 900
cggagaacat gtggtttaat tcgatgatac gcgaggaacc ttacgccggg cttaaattgc 960
atttgata 968

Claims (9)

1.多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron)在制备预防、缓解或治疗牛奶中酪蛋白过敏的食品或者药物中的用途，所述多形拟杆菌于2020年4月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M 2020105。
2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述多形拟杆菌具有调节Th1/Th2、Th17/Treg细胞亚群失衡的作用。
3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述多形拟杆菌摄入方式为每天1×108～1×1011cfu/只小鼠。
4.一种组合物，其特征在于，包含多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron)，所述多形拟杆菌于2020年4月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M2020105。
5.一种药物，其特征在于，包含多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron)，所述多形拟杆菌于2020年4月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M2020105。
6.如权利要求5所述的一种药物，其特征在于，还包括药学上可接受的辅剂，所述辅剂包括稳定剂、湿润剂、乳化剂、粘合剂、等渗剂的至少之一。
7.如权利要求6所述的一种药物，其特征在于，所述药物呈片剂、颗粒剂、散剂、胶囊剂、溶液剂、悬浮剂、冻干制剂的至少一种。
8.一种食品，其特征在于，包含多形拟杆菌(Bacteroides thetaiotaomicron)，所述多形拟杆菌于2020年4月30日保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC M2020105。
9.如权利要求8所述的一种食品，其特征在于，还包括食品学上可接受的添加剂。
CN202010814932.5A 2020-08-13 2020-08-13 多形拟杆菌及其用途 Active CN111961616B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010814932.5A CN111961616B (zh) 2020-08-13 2020-08-13 多形拟杆菌及其用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010814932.5A CN111961616B (zh) 2020-08-13 2020-08-13 多形拟杆菌及其用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111961616A true CN111961616A (zh) 2020-11-20
CN111961616B CN111961616B (zh) 2022-04-26

Family

ID=73364509

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010814932.5A Active CN111961616B (zh) 2020-08-13 2020-08-13 多形拟杆菌及其用途

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN111961616B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113881610A (zh) * 2021-12-06 2022-01-04 北京量化健康科技有限公司 多形拟杆菌bp8e及其应用

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011153226A2 (en) * 2010-06-01 2011-12-08 Moore Research Enterprises Llc Cellular constituents from bacteroides, compositions thereof, and therapeutic methods employing bacteroides or cellular constituents thereof
CN104546935A (zh) * 2014-09-30 2015-04-29 深圳华大基因科技有限公司 多形拟杆菌在治疗或预防类风湿性关节炎或其相关疾病中的应用
TWI621708B (zh) * 2016-06-15 2018-04-21 ４Ｄ製藥研究有限公司 免疫調節
CN108138122A (zh) * 2014-12-23 2018-06-08 4D制药研究有限公司 免疫调控

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011153226A2 (en) * 2010-06-01 2011-12-08 Moore Research Enterprises Llc Cellular constituents from bacteroides, compositions thereof, and therapeutic methods employing bacteroides or cellular constituents thereof
CN104546935A (zh) * 2014-09-30 2015-04-29 深圳华大基因科技有限公司 多形拟杆菌在治疗或预防类风湿性关节炎或其相关疾病中的应用
CN108138122A (zh) * 2014-12-23 2018-06-08 4D制药研究有限公司 免疫调控
TWI621708B (zh) * 2016-06-15 2018-04-21 ４Ｄ製藥研究有限公司 免疫調節

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
LORA V. HOOPER等: "Molecular Analysis of Commensal Host-Microbial Relationships in the Intestine", 《SCIENCE》 *
M.A. ZOCCO等: "Bacteroides thetaiotaomicron in the gut: Molecular aspects of their interaction", 《DIGESTIVE AND LIVER DISEASE》 *
ROBERTO BERNI CANANI等: "Gut microbiota composition and butyrate production in children affected by non-IgE-mediated cow’s milk allergy", 《SCIENTIFIC REPORTS》 *
李其泽等: "食物蛋白过敏与肠道微生态的国内外研究进展", 《贵州医药》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113881610A (zh) * 2021-12-06 2022-01-04 北京量化健康科技有限公司 多形拟杆菌bp8e及其应用
CN113881610B (zh) * 2021-12-06 2022-02-25 北京量化健康科技有限公司 多形拟杆菌bp8e及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN111961616B (zh) 2022-04-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101316611B (zh) 诱导对抗原的粘膜耐受
CN104039171B (zh) 包含特定瑞士乳杆菌菌株并且降低食物过敏和/或呼吸道变态反应症状的组合物
CN113604384B (zh) 一种鼠李糖乳杆菌及其应用
JP7492584B2 (ja) ビフィドバクテリウム・ラクティスｂｌ－９９の腸管炎症の抑制における新規な用途
CN111254090B (zh) 一株具有减肥功能的罗伊氏乳杆菌及其应用
CN110835614B (zh) 乳双歧杆菌gkk2、含其的组合物及其改善过敏性气喘的用途
CN114686402B (zh) 乳酸乳球菌乳酸亚种hfy14及其应用
CN104862241A (zh) 具有免疫调节及抗过敏功效的乳酸菌及包含该乳酸菌的医药组合物
CN115428949B (zh) 具有减肥功能的益生菌中药组合物及其制备方法
CN112481175B (zh) 一株能预防和缓解溃疡性结肠炎的鼠李糖乳杆菌及其应用
WO2023168808A1 (zh) 一株具有调节肠道免疫失调症状的副干酪乳酪杆菌及其应用
CN113197250A (zh) 一种含嗜热链球菌mn002的产品的用途及乳制品
CN103436461B (zh) 新颖乳酸菌株及其调节免疫反应的用途
CN113881597B (zh) 一株能够提高吲哚丙烯酸以调节特异性IgE的罗伊氏乳杆菌
CN111961616B (zh) 多形拟杆菌及其用途
CN112056562B (zh) 多形拟杆菌及其用途
CN113913330B (zh) 一株调节OVA特异性IgE的植物乳杆菌及其应用
CN114686405B (zh) 一株具有减少脂肪和缓解高血糖，调节肠道免疫力的两歧双歧杆菌及其应用
CN114854619B (zh) 一种植物乳杆菌hfy09及其分离方法和应用
TWI776433B (zh) 戴白氏乳桿菌乳酸亞種ldl557分離株及其用途
CN113005066B (zh) 抗过敏、增加免疫力、降血糖、降脂减肥的复合双歧杆菌制剂及其制备方法
CN106038610B (zh) 凝结芽孢杆菌在制备用于预防和/或治疗过敏反应的药物中的应用
CN111560335A (zh) 一株用于缓解哮喘的乳双歧杆菌及其应用
CN114317310B (zh) 一种抗过敏的婴儿双歧杆菌制剂及其制备方法
CN114990004B (zh) 一种分泌型免疫球蛋白a包裹态罗伊氏乳杆菌及防治妊娠糖尿病的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant