CN104862241A - 具有免疫调节及抗过敏功效的乳酸菌及包含该乳酸菌的医药组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及具有免疫调节及抗过敏功效的乳酸菌及包含该乳酸菌的医药组合物。本发明提供一种单离乳酸菌,植物乳杆菌植物亚种(Lactobacillus plantarum subsp.plantarum)K37菌株,以保藏号DSM 27445寄存于DSMZ德国微生物及细胞培养收集中心(DSMZ-DEUTSCHE SAMMLUNG VON MIKROORGANISMEN UND ZELLKULTUREN)。本发明进一步提供一种包含该单离乳酸菌(植物乳杆菌植物亚种K37)的医药组合物。此外,本发明提供一种单离乳酸菌(植物乳杆菌植物亚种K37)的用途,用于制备预防或治疗个体疾病的医药组合物。

Description

具有免疫调节及抗过敏功效的乳酸菌及包含该乳酸菌的医药组合物
技术领域
本发明关于一种乳酸菌,尤其关于一种个体中具有免疫调节及抗过敏效果的新颖乳酸菌菌株。
背景技术
过敏性疾病,如过敏性鼻炎、异位性皮炎、过敏性哮喘和食物过敏,已在许多国家变得越来越普遍。这些疾病不仅影响个人的生活品质,而且成为社会医疗负担。过敏与T细胞与B细胞两者有关的2型T辅助细胞(Th2细胞)反应。Th2反应的特征在于产生某些细胞激素,包括白介素(IL)IL-4、IL-5、IL-13,及产生总免疫球蛋白(Ig)E、抗原特异性IgE和IgG1。由Th2细胞产生的Th2细胞激素会增强IgE的产生和嗜酸性粒细胞聚集。Th2细胞激素中,已知IL-5对于嗜酸性粒细胞的分化、成熟和招募很重要,而IL-4和IL-13对于治疗哮喘和其他Th2细胞相关的疾病极具潜力。再者,IL-13直接增强粘液过度分泌及气道高反应性(airway hyperresponsiveness,AHR)。细胞激素的产生被认为是T细胞反应,而免疫球蛋白的产生被认为是B细胞反应。Th1细胞可通过分泌干扰素(IFN)-γ、IgG2a、IL-2和IL-3而抑制Th2反应。因此,通过抑制Th2细胞反应同时增强Th1反应来调节免疫反应,预期将有助于治疗过敏和其它Th2反应为主的疾病,如哮喘是由多种气道阻塞、气道嗜酸性粒细胞发炎和支气管高反应性所引起的慢性复杂呼吸系统疾病。
许多研究已经提出,乳酸菌(lactic acid bacteria,简称LAB),无论是活菌或热致死菌,都可通过调节Th1/Th2反应朝向Th1为主状态,而缓解过敏症状。举例而言,将副干酪乳杆菌(Lactobacillusparacasei)KW3110活菌口服给予过敏小鼠,结果显示具有抗过敏效果,包括诱导Th1细胞激素IL-12及抑制Th2细胞激素IL-4。热致死干酪乳杆菌代田株(Lactobacillus casei strain Shirota,简称LcS)刺激IL-12的分泌,其转移了细胞激素的产生模式,由Th2细胞转向Th1细胞占优势,进而抑制IgE的产生、IgG1的反应和人类全身过敏反应。热致死短乳杆菌(Lactobacillus brevis)SBC8803,由于改善Th1/Th2的平衡趋向Th1为主,而抑制IgE的产生和组织胺分泌。将热致死嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)L-55口服给予经卵白蛋白(简称OVA)致敏的BALB/c小鼠,结果显示可抑制由OVA诱导的鼻部症状,如打喷嚏及揉鼻。因此,无论活菌或经热致死LAB皆可于鼠类或人类中,展现改善过敏性反应的能力。
发明内容
在本发明中,植物乳杆菌植物亚种K37(以下简称K37),从台湾传统发酵芥菜产品的福菜中单离出,选中该菌株之原因为,其可诱导人类周边血液单核细胞(human peripheral blood mononuclear cells,简称hPBMCs)产生大量的IFN-γ,而于体外试验具有强的免疫调节功效。将不同含量的K37,如105、107、和109CFU(菌落形成单位)口服给予经OVA致敏和诱发的BALB/c小鼠,通过测定血清中免疫球蛋白和细胞激素的量来探讨K37对于全身性过敏的效果。使用非侵入性的全身体积描记评估对乙酰甲胆碱(methacholine)的气道高反应性。另外,组织学分析也进行评估。
本发明提供一种用于免疫调节的单离乳酸菌,植物乳杆菌植物亚种(Lactobacillus plantarum subsp.plantarum)K37,且以保藏号DSM 27445寄存于DSMZ德国微生物及细胞培养收集中心(DSMZ-DEUTSCHE SAMMLUNG VON MIKROORGANISMEN UND ZELLKULTURENGmbH)。
本发明进一步提供用于预防或治疗个体疾病的医药组合物,包括用于免疫调节的植物乳杆菌植物亚种K37及赋型剂。
于本发明的一具体实施例中,该乳酸菌为经热致死细菌,该乳酸菌经口服给予个体。
于本发明的一具体实施例中,该医药组合物用于预防或治疗个体疾病。于本发明的一具体实施例中,个体中的细胞数减少,且该细胞选自巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞及淋巴细胞所组成的组。
于本发明的一具体实施例中,该疾病有关于过敏性疾病。于本发明的一具体实施例中,该过敏性疾病选自过敏性鼻炎、异位性皮炎、过敏性哮喘、食物过敏及呼吸道高度反应性所组成组中的一种。
于本发明的一具体实施例中,该过敏性疾病有关于选自IgG1、IgG2a、IgE、IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-12、IL-13与趋化因子(eotaxin)所组成组的蛋白质表达。于本发明的一具体实施例中,IL-2、IL-12及IFN-γ的表达增加。于本发明的一具体实施例中,IL-4、IL-5、IL-13、TNF-α、趋化因子及IgE的表达下降。
本发明进一步提供一种本发明乳酸菌的用途,用于制备预防或治疗个体疾病的医药组合物。
附图说明
图1A到图1C显示植物乳杆菌植物亚种的PCR指纹图谱的电泳图,其中,使用序列编号3/序列编号4(图1A)、序列编号5(图1B)及序列编号6(图1C)的引物。泳道M为DNA梯状条带(250-10000碱基对);泳道1为植物乳杆菌植物亚种K37;泳道2为植物乳杆菌植物亚种ATCC14917T;泳道3为植物乳杆菌安氏亚种ATCC 17638T
图2显示经卵白蛋白(OVA)致敏的BALB/c小鼠模型的实验时间表。以活的或热致死的植物乳杆菌植物亚种K37喂食六周龄雌性BALB/c小鼠4周,且于第1天及第14天腹腔注射溶于100μl Al(OH)3的50μg OVA三次。于第28天、第29天及第30天,通过经鼻内给药方式,以OVA(溶于1%PBS中,每只小鼠每天100μl)或PBS诱发小鼠。每周收集血清以进行免疫球蛋白测定。于第34天,牺牲小鼠并摘取脾脏以进行脾细胞的制备;
图3A到图3D显示口服给予K37对于OVA致敏小鼠血清中产生免疫球蛋白的影响。从第1天到第34天分别以105(K37-L)、107(K37-M)及109(K37-H)CFU的热致死K37以及109CFU的K37活菌(K37-A)喂食BALB/c小鼠,并于第1天及第7天腹腔注射溶于100μl Al(OH)3的OVA 50μg。健康对照组(CON)及过敏对照组(OVA)于实验期间皆给予PBS,而健康对照组则未经OVA致敏。血清中总IgE(图3A)、OVA特异性IgE(图3B)、OVA特异性的IgG1(图3C)及OVA特异性IgG2a(图3D)通过ELISA测定。各值代表平均值±标准差(N=8)。当P<0.05(*)及P<0.01(**)时,被认定K37组及OVA组间具统计上显著差异;
图4以呼吸阻力值(Penh)显示K37对于OVA致敏小鼠在最后一次OVA诱发的24小时后,对于气雾化乙酰甲胆碱的气道反应。过敏对照组小鼠(OVA组)以200μl PBS喂食且以OVA致敏及诱发。健康对照组(CON)以200μl PBS喂食且以PBS致敏及诱发。K37组小鼠分别喂食105(K37-L)、107(K37-M)及109(K37-H)CFU的热致死K37以及109CFU K37活菌(K37-A)。当P<0.05(*)及P<0.01(**)时,被认定K37组及OVA组间具统计上显著差异;
图5A及图5B显示于OVA诱发后,K37对OVA致敏小鼠的肺组织发炎细胞浸润的影响。图5A显示健康对照组(CON)、过敏实验组(OVA)、K37-L(105CFU,热致死),K37-M组(107CFU,热致死),K37-H组(109CFU,热致死)及K37-A组(109CFU,活的)小鼠的肺冲洗液中细胞总数。图5B显示肺冲洗液中,巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞及淋巴细胞的比例,每组六只小鼠,以平均值±标准差表示。当P<0.05(*)及P<0.01(**)时,被认定K37组及OVA组间具统计上显著差异;
图6显示经OVA诱发后,K37对OVA致敏小鼠的肺组织发炎细胞浸润及气道重塑的效果。取健康对照组(CON)、过敏对照组(OVA)、K37-H组(109CFU,热致死)及K37-A组(109CFU,活菌)小鼠的代表性苏木精及伊红(hematoxylin and eosin,H&E)肺组织切片染色(放大倍率40倍);
图7A到图7F显示口服给予K37对OVA致敏小鼠的肺冲洗液(BALF)中细胞激素产生的影响。通过ELISA测定肺冲洗液中IL-2(图7A)、IL-4(图7B)、IL-12(图7C)、IL-5(图7D)、IFN-γ(图7E)及IL-13(图7F)的浓度。各值代表平均值±标准差(n=8)。当P<0.05(*)及P<0.01(**)时,被认定K37组及OVA组间具统计上显著差异;
图8A到图8F显示口服给予K37对OVA致敏小鼠的脾脏产生细胞激素的影响。通过ELISA测定肺冲洗液中IL-2(图8A)、IL-4(图8B)、IL-12(图8C)、IL-5(图8D)、IFN-γ(图8E)及IL-13(图8F)的浓度。各值代表平均值±标准差(n=8)。当P<0.05(*)及P<0.01(**)时,被认定K37组及OVA组间具统计上显著差异;以及
图9显示口服给予Lactobacillus plantarum subsp.plantarumK37对肺冲洗液中促发炎细胞激素,如TNF-α、IL-6及趋化因子的影响。当P<0.01(**)时,被认定K37组及OVA组间具统计上显著差异。
具体实施方式
以下通过特定的具体实施例说明本发明,该领域技术人员可轻易地了解本发明的优点及功效。本发明亦可通过其它不同的实施方式加以施行或应用,本说明书中的各项细节亦可基于不同观点与应用,在不悖离本发明所揭示的精神下赋予不同的修饰与变更。
业已透过许多实施例来说明本发明。以下所引述的实施例不应被视为限制本发明的范围。
实施例
实施例1植物乳杆菌植物亚种K37的单离与基因分型鉴定。
从台湾的传统发酵芥菜产品的福菜单离出植物乳杆菌植物亚种(Lactobacillus plantarum subsp.plantarum)K37(以下简称K37)。联合使用16S rDNA及pheS序列,以鉴定K37的种类。通过直接定序PCR放大产物约500个核苷酸分析K37的16S rDNA(SEQ ID NO:1)及pheS(SEQ ID NO:2)。因此,进行基因组DNA抽取、PCR扩增、PCR产物的纯化及纯化的PCR产物定序。
将所得的序列放入美国国家生物技术信息中心(National Centerfor Biotechnology Information,NCBI)(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)在网络上提供的序列比对软体,进行人工序列比对,并分别与属于乳杆菌的生物体的代表性16S rDNA或pheS序列进行比对。为了进行比对,亦通过NCBI在网络上所提供的资料库获得16S rDNA及pheS序列。
根据此分析结果,下表1列出该等生物体,其16S rDNA序列(表1A)及pheS(表1B)序列相较于K37序列显示最高的相似性数值。
表1.16S rDNA(A)及pheS(B)序列间的比较
(A)
(B)
K37的16S rDNA及pheS序列分析的综合结果显示,与植物乳杆菌植物亚种的相似度最高。因此,K37代表为植物乳杆菌植物亚种的菌株。
植物乳杆菌植物亚种K37已在2013年6月27日根据布达佩斯条约寄存于德国微生物及细胞培养中心(DSMZ-DEUTSCHE SAMMLUNG VONMIKROORGANISMEN UND ZELLKULTUREN GmbH)(Inhoffenstr.7B,D-38124Braunschweig,Germany),且被国际寄存单位(InternationalDepositary Authority)赋予了保藏号DSM 27445。此种生物材料已进行并通过存活性试验。
实施例2使用PCR-指纹鉴定细菌菌株
比较K37的PCR-指纹图谱及其他两种植物乳杆菌菌株。以表2所列示的条件进行PCR。自该等菌株中抽取DNA以作为模板,而所得的扩增产物进行电泳并比较,如图1A到图1C所示,其中使用SEQ ID NO:3/NO:4(图1A)、NO:5(图1B)及NO:6(图1C)所示的引物。
表2.PCR反应溶液的组成(25μl)
组成 体积
ddH2O 17.9μl
10X PCR缓冲液 2.5μl
dNTP混合物(2.5mM) 2.0μl
MgCl2(25mM) 1.0μl
引物 0.4μl
rTaq 0.2μl
DNA模板(10μM) 1.0μl
PCR反应条件:
94℃,2分钟;5循环(94℃,30秒;36℃,1分钟;72℃,1.5分钟);30循环(94℃,20秒;36℃,30秒;72℃,1.5分钟);72℃,3分钟。
如图1A到图1C所示,泳道M代表DNA梯状条带(250-10000碱基对);泳道1代表植物乳杆菌植物亚种K37;泳道2代表植物乳杆菌植物亚种ATCC 14917T;泳道3代表植物乳杆菌安氏亚种ATCC 17638T。其结果显示,K37的扩增产物形式与其它两种植物乳杆菌菌株有所不同。
实施例3分析轮廓指数(Analytical Profile Index,API)分型
本发明使用API50CHL试剂盒(bioMerieux,France)评估K37的糖利用率,其结果显示于表3。发酵试验指出K37带有与植物乳杆菌植物亚种相似的生物化学特性。
表3:发酵试验结果a
a.+,阳性;-,阴性
实施例4K37于体内的抗过敏作用评估
1.材料及方法:
(1)化学品及试剂
de Man,Rogosa,and Sharpe(MRS)培养液自Difco(Sparks,MD)购入。乙酰甲胆碱与OVA自Sigma-Aldrich(St.Louise,MO)购入。RPMI-1640培养基、胎牛血清(FBS)、L-谷胺酸盐、抗生素(盘尼西林、链霉素及双性霉素)自Gibco(BRL,NY)购入。所有其他化学品自Merck(Darmstadt,Germany)购入。
(2)K37的制备
植物乳杆菌植物亚种K37(以下简称K37)单离自台湾的传统发酵芥菜产品的福菜,并保存于菌种保存管中。将K37接种于MRS(de Man,Rogosa and Sharpe;pH 5.4;Difco,USA)培养液中,在30℃下培养21小时,利用离心(1500g,10分钟)收集,并以无菌PBS洗涤两次。然后将K37再悬浮于PBS中,至最终浓度为1010CFU/ml,并储存在-20℃直至使用。至于经热致死K37的制备,系将1010CFU/ml的K37在100℃进行热致死20分钟,并储存在-20℃直至使用。
(3)动物实验及饲养
四周龄雌性BALB/c品系小鼠购自台湾国家实验动物中心,并饲养在国立阳明大学的动物房,将动物房维持在12:12小时光照-黑暗的周期、温度为25±2℃、以及湿度55±15%。以标准实验室饮食(LabDiet高温高压灭菌啮齿动物饮食(LabDiet Autoclavable Rodent Diet5010),PMI国际营养,Brentwood,USA)喂食小鼠,适应两周后,进行OVA致敏及细菌喂养。所有的动物实验程序皆由国立阳明大学动物管理委员会进行审查并批准。
为了评估K37的抗过敏作用,将6周龄小鼠以OVA致敏及诱发,以建立经OVA引起的呼吸道过敏BALB/c小鼠模型。图2总结于OVA致敏的BALB/c小鼠模型中,用于OVA免疫接种的实验步骤、K37的给予及样本收集。5组(每组n=8)小鼠被分配进行不同处理34天。健康对照组(CON)及过敏控制组(OVA)使用不锈钢喂食管经口给予PBS。K37组每日分别给予105(K37-L)、107(K37-M)及109(K37-H)CFU的热致死K37以及109CFU K37活菌(K37-A)。所有组别中,除正常对照组外,皆于第1天及第14天以含有50μg的OVA的100μl的Al(OH)3进行腹腔注射。而健康对照组小鼠只接受Al(OH)3。于第28天、第29天及第30天,通过鼻内给药且以OVA(1%于PBS中,100μl/小鼠,每天)或PBS诱发小鼠。在第32天,测定小鼠的AHR。在评估的终点,牺牲所有小鼠,并进行肺冲洗液的研究。无菌摘取脾脏进一步培养。摘除肺以进行组织学分析。
在研究期间,每天测定小鼠体重。各组间的食物摄入、喂食效率或体重变化并无显著差异。在指定的日期(图2),使用眼窝静脉采血收集血液,并通过离心分离(2,000rpm离心10分钟)以制备血清。于免疫球蛋白分析之前,将血清保存在-20℃。
(4)气道过度反应的测量(AHR)
通过全身体积描记(whole body plethysmography)进行AHR的测量。测定含有动物及基准腔室(盒压力信号)的体积描记系统主腔室间的压力差。以气雾生理盐水(用于基线测量)或乙酰甲胆碱(6.25、12.5、25及50mg/mL)诱发小鼠三分钟,且雾化后三分钟纪录并平均读数。纪录每分钟增强的呼吸间歇(enhanced pause)(Penh)比率,并于第三个记录值后,将平均Penh值除以生理盐水的Penh,并表示为Penh的相对增加百分比。
(5)分析肺冲洗液的细胞组成
于小鼠牺牲后,立即以1ml的汉克斯平衡盐溶液(Hanks'balancedsalt solution,HBSS)经气管灌洗肺部3次。肺冲洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)在冰上冷却并离心(1200rpm,4℃,10min),收集上清液用于测定细胞激素,细胞沉淀则再次悬浮于1ml HBSS中。肺冲洗液的细胞总数量以标准血球计数器(standardhaemocytometer)计数。通过标准的形态学准则区分以刘氏染色溶液(Liu’s stain solution)(Chi I Pao,台北,台湾)染色的细胞离心制备中至少200个细胞,进行巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞、淋巴细胞的细胞计数。
(6)脾脏细胞的制备
简言之,将脾脏细胞以含有10%FBS、1%L-谷胺酸盐、100IU/ml盘尼西林、0.1mg/ml链霉素及0.25μg/ml双性霉素的RPMI 1640培养基调整至1×106细胞/毫升。将细胞培养在37℃,5%CO 2下的湿润的培养箱中48小时。培养后,收集上清液并储存于-20℃以进一步分析细胞激素。
(7)通过酶联免疫吸附法(enzyme-linked immunosorbent assay,以下简称ELISA)测定免疫球蛋白与细胞激素
使用商业ELISA试剂盒测定总IgE及OVA特异性IgE、IgG1及IgG2a的含量(总IgE试剂盒购自Bethyl Laboratory Inc.,Montgomery,TX,OVA特异性Ig试剂盒购自Alpha Diagnostic International Inc.,SanAntonio,TX)。依据制造商的使用手册以ELISA程序测定IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-12、IL-13、TNF-α及IFN-γ的浓度(IL-2、IL-4、IL-10、TNF-α及IFN-γ试剂盒购自eBioscience,Boston,MA;IL-5、IL-6、IL-13及趋化因子的试剂盒购自R&D Systems,Minneapolis,MN)。
(8)鼠类肺组织的组织鉴定
灌洗后,立即摘除肺并以10%体积/体积(v/v)的缓冲福尔马林(在PBS中,pH 7.4)固定24小时,然后将其包埋在石蜡中。再以苏木精(hematoxylin)及伊红(eosin)(Sigma,St.Louis,MO)染色,使用光学显微镜(Leica DM750)进行组织评定。
(9)统计分析
将数据表示为平均值±标准差(SD)。使用单向(one-way)ANOVA及Tukey’s事后检验,测试平均值间的差异以用于统计学上的差异。当P<0.05(*)或<0.01(**)代表对照组及其他组之间具有统计学显著差异。
2.结果
(1)K37的口服给予对OVA致敏小鼠的免疫球蛋白表达的影响
首先研究血清免疫球蛋白的含量,以了解LAB对OVA致敏小鼠的影响。某些具有Th1优势反应的乳酸菌菌株已被提出能有效地调节OVA诱导的免疫球蛋白的产生。在本研究中,分别以105(K37-L)、107(K37-M)及109(K37-H)CFU的热致死K37以及109CFU K37活菌(K37-A)口服给予小鼠34天,且于第1天及第14天(图2)腹腔注射OVA/Al(OH)3。如图3A所示,于第7天,OVA致敏小鼠的血清总IgE升高,并持续增加至第34天。于第34天,相较于OVA致敏组(OVA),接受高剂量的热致死K37组(109CFU,K37-H)及K37活菌组(109CFU,K37-A)显示血清总IgE(图3A)及OVA特异性IgE(图3B)显著下降(P<0.01)。在K37-M、K37-H及K37-A组中,血清OVA特异性IgG1及Th2型免疫球蛋白的含量,显著低于OVA致敏组(OVA)含量约3倍(图3C;P<0.01)。K37组增加血清OVA-特异性IgG2a及Th1型免疫球蛋白。相较于OVA致敏组(OVA)的含量,K37-H及K37-A组中,OVA特异性IgG2a的含量显示显著的不同(P<0.05;图3D)。
(2)气道高反应
为了评估K37对AHR的效果,于最后一次诱发的1天后,采用非侵入性的全身体积描记进行评估。如图4所示,相较于以PBS致敏及PBS诱发的小鼠(CON组),以OVA腹腔致敏及经鼻诱发的BALB/c小鼠显示吸入乙酰甲胆碱后Penh值增加(OVA及K37组)。OVA组中,相较于CON组,对于吸入乙酰甲胆碱的AHR显著增加。然而,相较于OVA组,口服给予K37缓解AHR的发展。K37-H及K37-A组的Penh值近似于CON组,而显著低于OVA组的AHR(乙酰甲胆碱25mg/mL,P<0.05;50mg/ml,P<0.01)。K37-M组的Penh值显示于50mg/ml的乙酰甲胆碱下显著低于OVA组。
(3)肺冲洗液的细胞区分
计数巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞及淋巴细胞的细胞数以获得肺冲洗液的细胞区分,用以评估K37对肺部发炎的影响。检查炎性细胞涌入肺部的情形。如图5A所示,OVA组的肺冲洗液细胞总数显著增加。K37-M、K37-H及K37-A组的细胞总数显著低于OVA组(P<0.05)。进一步分析BALF的细胞组成(图5B)。在OVA组中,相较于CON组,嗜酸性粒细胞及嗜中性粒细胞的百分比显著增加,而巨噬细胞的百分比则下降。至于K37-H及K37-A组,巨噬细胞的细胞数升高,而相较于OVA组,嗜酸性粒细胞浸润得以缓解。
(4)鼠类肺组织的组织检查
进一步以组织学检查评估K37对OVA致敏及OVA诱发小鼠肺部发炎的影响。如第6图所示,根据H&E染色,在OVA组中观察到发炎变化,例如细胞浸润及上皮细胞厚度的增加。相较于OVA组,基于较少的细胞浸润及较薄的上皮细胞层,以口服给予K37的小鼠其支气管周围及血管周围区域发炎显著减少(图6)。
(5)口服给予K37对OVA致敏小鼠的肺冲洗液中细胞激素的含量及脾脏细胞的影响
采用细胞激素的产生来评估K37对T细胞反应的影响。使用ELISA方法测定肺冲洗液(图7A至图7F)与脾脏细胞培养物中(图8A至图8F),Th1细胞激素,如IL-2、IL-12及IFN-γ及Th 2细胞激素,如IL-4、IL-5与IL-13的浓度。如图7A、图7C及图7E所示,相较于OVA组,于肺冲洗液中的Th1细胞激素,如IL-2、IL-12及IFN-γ,在K37组中为剂量依赖性升高。在K37-H及K37-A组中,IL-2及IL-12的含量明显高于OVA组(图7A及图7C,P<0.05)。IFN-γ的含量在K37-M(P<0.05)、K37-H(P<0.01)、K37-A组(P<0.01)显著增加。亦测定肺冲洗液中包括IL-4、IL-5及IL-13的Th2细胞激素的含量。相较于OVA组(K37-M,P<0.05)、K37-H及K37-A(P<0.01),K37组的肺冲洗液中IL-4的含量(图7B)显著下降。在K37-M、K37-H及K37-A组,IL-5的含量显著低于OVA组(图7D;K37-M,P<0.05、K37-H及K37-A,P<0.01)。然而,只有在K37-H及K37-A组,IL-13的含量显著下降(图7F)。
至于在脾脏细胞的细胞激素,相较于OVA组,K37组中IL-2(第8图A)的含量上升,然而,只有在K37-H及K37-A组的增加具显著差异(P<0.05)。在所有的OVA致敏组(OVA及K37组),IL-12的含量较非致敏组(CON组)(图8C)低。在K37-M、K37-H及K37-A组,IFN-γ的含量高于OVA组,显示显著差异(分别为P<0.05及P<0.01)。在K37组中(K37-H及K37-A,P<0.05),观察到IL-4含量下降。IL-5及IL-13的含量于K37组中,为剂量依赖性上升(针对K37-M,P<0.05及针对K37-H及K37-A,P<0.01)。然而,在所有组中的IL-4的含量(图8B)具有可比较性。整体而言,细胞激素测定结果显示以K37处理可诱导BALF及脾脏细胞培养中,Th-1细胞激素IL-2及IFN-γ的产生。于K37组中,观察到Th2细胞激素IL-4、IL-5及IL-13分泌下降。亦测定BALF中促发炎因子的细胞激素,如TNF-α、IL-6及趋化因子,以评估K37对肺部发炎状态的影响。如图9所示,TNF-α的含量于CON及OVA组中系可比较的,但于K37组中,呈剂量依赖性下降。相较于CON组,OVA组中IL-6及趋化因子的含量显著升高。然而,K37-H及K37–A组中,IL-6及趋化因子的含量类似于CON组。脾脏细胞培养中TNF-α及IL-6的含量显示与BALF相同的趋势(数据未显示)。整体而言,经K37处理降低OVA致敏小鼠的BALF中的TNF-α、IL-6及趋化因子的产生。
本发明探讨口服给予K37对OVA诱导的过敏哮喘BALB/c小鼠模型的效果。目前的结果显示K37抑制过敏性参数,包括AHR、气道发炎、总IgE及OVA特异性IgE。BALF及脾脏细胞培养中的细胞激素产生分布显示K37使免疫反应倾向Th-1免疫反应,提升Th-1细胞激素的含量,且降低Th-2细胞激素的含量。BALF中发炎介质如TNF-α、IL-6及趋化因子的含量通过K37的口服给予而呈剂量依赖性下降。BALF中嗜酸性粒细胞及嗜中性粒细胞细胞数目下降意指K37可改善发炎情形。而肺部切片的组织学观察也显示较少的细胞浸润。
K37单离自台湾的传统发酵芥菜产品福菜,先前通过hPBMCs体外试验评估细胞激素的产生效果。因此,可以推测具体外Th1趋化(Th1-polarizing)潜力的乳酸菌可能会展现出体内抗过敏的效果。
卵白蛋白(OVA)是过敏的动物模型中最常使用的过敏原。IgE及OVA特异性IgE及IgG1的含量越低,过敏性反应越温和。在本发明中,采用腹腔内OVA致敏及鼻内OVA诱发的BALB/c小鼠模型(图2)来探讨K37的抗过敏效果。如图3所示,OVA组中血清IgE、OVA特异性IgE及IgG1的含量增加,代表过敏性动物模型的建立及表现Th-2反应的B细胞型。于评估终点,K37组的总IgE、OVA特异性IgE及OVA特异性IgG1的含量显著低于OVA组(K37-M,P<0.05;及K37–A,P<0.01)(图3)。此外,于K37组中(图3D),观察到OVA特异性IgG2a显著增加。血清免疫球蛋白的分析结果显示K37的全身抗过敏效果。再者,K37对OVA诱导的免疫球蛋白分泌的调节效果显示为剂量依赖性倾向。
本结果显示K37表现出全身性及呼吸道抗过敏效果,且K37-H(109CFU,热致死)及K37-A(109CFU,活菌)显示具有最佳的活性,此建议K37的抗过敏效果是剂量依赖性的。
气道高反应性被定义为对于某些胆碱性药物的敏感性增加,例如:乙酰甲胆碱,其导致平滑肌收缩,并通过缩小气道而增加气道阻力。哮喘是一种气道高度反应性疾病,其特征在于发炎细胞的聚集,粘液产生的增加,某些Th2细胞激素的释放,如IL-4、IL-5、IL-13及IgE的含量升高。在本发明中,已探讨K37处理的气道重塑的改变。K37显著减轻了OVA诱导的吸入乙酰甲胆碱的AHR(图4)。根据以H&E染色的肺部组织病理学研究,相较于OVA组,K37组中发炎细胞浸润被抑制。
细胞激素的表现,例如与T细胞反应相关的IL-4、IL-5、IL-13,以及与B细胞反应相关的免疫球蛋白G1(IgG1)的产生,被认为与Th2型免疫有关。Th2细胞激素于哮喘中具重要作用。于Th 2细胞激素中,IL-4使天然T辅助细胞趋化成Th2细胞表型并诱导B细胞以切换同型抗体至IgE。由Th2细胞产生的IL-5负责嗜酸性粒细胞的生长、分化、移动、补充、活化及生存。IL-13在哮喘的发病机理中具重要的角色。IL-4、IL-5、IL-13的过度产生与哮喘的发展息息相关。本结果显示从OVA组的BALF及脾脏细胞培养中,T-细胞反应的Th2细胞激素增加,如IL-4、IL-5及IL-13(分别如图6及图7所示)。此证据显示乳酸菌的Th1/Th2的调节效果有用于过敏性动物模型。在本发明中,通过K37的口服给予降低AHR,且证明其抗过敏效果可归因于Th2细胞激素及趋化因子的降低,而该趋化因子已知于AHR的发展中起重要作用。推测对IL-13的抑制效果有助于K37的抗过敏活性(图7F及图8F)。除了抑制Th2细胞激素外,K37也促进Th1细胞激素的生成。K37提升hPBMCs中IFN-γ产生(数据未显示)。K37也可增加BALF及脾脏细胞培养中IL-2、IL-12及IFN-γ的含量(分别如图7及图8)。综合来看,本发明的结果显示K37对于调节OVA致敏小鼠的T细胞反应趋向Th1反应系具有前景的影响。
本发明观察到通过OVA致敏及诱发的肺组织及BALF的发炎反应(图5及图6)。许多种类的发炎性细胞参与气道发炎过程,如肥大细胞、嗜酸性粒细胞及T淋巴细胞。在这些细胞中,嗜酸性粒细胞在过敏性疾病的发病机制中,扮演关键角色。嗜酸性粒细胞通过CC趋化激素受体3(CC chemokine receptor 3,CCR3)被吸引至化学引诱物处,如气道中释放的趋化因子。临床及实验研究已经建立了嗜酸性粒细胞作为过敏性疾病的指标。K37降低了OVA特异性IgE以及总IgE的含量。再者,在K37组中,OVA特异性的IgG1下降(图3)。
趋化因子因其诱导肺部中嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞及Th2淋巴细胞的补充,而被认为于过敏方面具重要角色。支气管周围及血管周围发炎性浸润通常包含嗜酸性粒细胞及肥大细胞。如图5B所示,相较于OVA组,嗜酸性粒细胞的数目在K37-H及K37-A组中显著减少。此外,在OVA组的肺部切片的支气管周围中,观察到嗜酸性粒细胞的浸润。然而,在K37组中,具有较少的细胞浸润(图6)。此外,趋化因子的含量在K37-M、K37-H及K37-A组中与CON组相似。在K37-H组及K37-A组中,也观察到TNF-α及IL-6的下降(图9)。综观来看,这些结果表示,肺部的发炎纾解归因于K37的抗过敏效果。
总的,本发明显示K37可以改善OVA致敏BALB/c小鼠的类哮喘反应。通过使用全身体积描记的增强呼吸间歇(Penh)方法评估AHR,发现K37的给予能显著降低OVA致敏BALB/c小鼠的AHR。K37于大多数所测试的参数上引发显著免疫调节效果。因此,于保护及预防治疗过敏性疾病上,K37是极具潜力的候选者。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效,任何该领域技术人员均可在不违背本发明的精神及范畴下,对上述实施例进行修饰与改变。因此,在未脱离本发明所揭示的精神与技术原理下所完成的一切等效修饰或改变,仍应由权利要求书所涵盖。

Claims (19)

1.一种用于免疫调节的单离乳酸菌,为植物乳杆菌植物亚种(Lactobacillus plantarum subsp.plantarum)K37,且以保藏号DSM27445寄存于DSMZ德国微生物及细胞培养收集中心。
2.一种用于预防或治疗个体疾病的医药组合物,包括:
如权利要求1所述的乳酸菌;以及
赋形剂。
3.如权利要求2所述的医药组合物,其特征在于,该乳酸菌为经热致死细菌。
4.如权利要求2所述的医药组合物,以口服方式给予个体。
5.如权利要求2所述的医药组合物,其特征在于,该预防或治疗个体疾病指降低存在于该个体中选自巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞及淋巴细胞所组成组的至少一种的含量。
6.如权利要求2所述的医药组合物,其特征在于,该疾病是过敏性疾病。
7.如权利要求6所述的医药组合物,其特征在于,该过敏性疾病选自过敏性鼻炎、异位性皮炎、过敏性哮喘、食物过敏及呼吸道高反应性所组成群中的一种。
8.如权利要求6所述的医药组合物,其特征在于,该过敏性疾病有关于选自IgG1、IgG2a、IgE、IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-12、IL-13及趋化因子所组成组的蛋白质表达。
9.如权利要求8所述的医药组合物,增加该IL-2、IL-12及IFN-γ的表达。
10.如权利要求8所述的医药组合物,降低该IL-4、IL-5、IL-13、TNF-α、趋化因子及IgE的表达。
11.一种权利要求1所述乳酸菌的用途,用于制备预防或治疗个体疾病的医药组合物。
12.如权利要求11所述的用途,其特征在于,所述乳酸菌以口服方式给予个体。
13.如权利要求11所述的用途,其特征在于,该乳酸菌为经热致死细菌。
14.如权利要求11所述的用途,其特征在于,该预防或治疗个体疾病指降低存在于该个体中选自巨噬细胞、嗜酸性粒细胞、嗜中性粒细胞及淋巴细胞所组成组的至少一种的含量。
15.如权利要求11所述的用途,其特征在于,该疾病有关于过敏性疾病。
16.如权利要求15所述的用途,其特征在于,该过敏性疾病选自过敏性鼻炎、异位性皮炎、过敏性哮喘、食物过敏及呼吸道高反应性所组成组中的一种。
17.如权利要求15所述的用途,其特征在于,该过敏性疾病有关于选自IgG1、IgG2a、IgE、IFN-γ、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-12、IL-13及趋化因子所组成组的蛋白质表达。
18.如权利要求17所述的用途,增加该IL-2、IL-12及IFN-γ的表达。
19.如权利要求17所述的用途,降低该IL-4、IL-5、IL-13、TNF-α、趋化因子及IgE的表达。
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Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI634207B (zh) * 2017-10-20 2018-09-01 葡萄王生技股份有限公司 一種胚芽乳酸桿菌、組合物、培養方法及降尿酸、改善過敏及/或降血糖的用途
CN111647526A (zh) * 2020-05-18 2020-09-11 深圳市华大农业应用研究院 植物乳杆菌sd-h9、其益生菌菌剂及其应用
CN115804797A (zh) * 2021-09-16 2023-03-17 创百股份有限公司 热致死的乳酸菌菌株作为制备治疗和/或预防微粒物质-诱发的肺损伤的医药品的用途

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
PL3223837T3 (pl) 2014-11-25 2020-06-01 Dsm Ip Assets B.V. Lactobacillus do zastosowania jako probiotyk
AU2017209868B2 (en) 2016-01-19 2023-08-03 Probi Ab Probiotics for use as anti-inflammatory agents in the oral cavity
EP3196318A1 (en) 2016-01-19 2017-07-26 Symrise AG Probiotics for altering the composition of oral biofilms
GB201600975D0 (en) 2016-01-19 2016-03-02 Probi Ab Novel strain of probiotic bacteria and compositions and uses thereof
EP3351259A1 (en) 2017-01-18 2018-07-25 Symrise AG Probiotics for aggregation with disease-associated species in the oral cavity
SG10201913050RA (en) * 2017-01-31 2020-03-30 Univ Industry Cooperation Group Kyung Hee Univ Novel lactic acid bacteria and use thereof
JP6942030B2 (ja) * 2017-11-02 2021-09-29 株式会社ヤクルト本社 抗アレルギー剤感受性判定マーカー
WO2020001747A1 (en) 2018-06-26 2020-01-02 Symrise Ag Lactobacillus plantarum for skin care
EP4042880A4 (en) * 2019-10-08 2023-10-25 Korea Food Research Institute COMPOSITION USING A STRAIN OF LACTOBACILLUS PLANTARUM OR OTHER AND INTENDED FOR THE RELIEF OF RESPIRATORY DISEASES
CN114032193B (zh) * 2020-08-24 2022-06-07 汤臣倍健股份有限公司 一种副干酪乳杆菌207-27及其应用
CN115141780B (zh) * 2022-07-19 2023-06-02 重庆市畜牧科学院 一种复合微生物菌剂及其应用
CN119307402A (zh) * 2024-09-20 2025-01-14 上海华朴生命健康科技有限公司 一种具有抗过敏和提高免疫力功效的菌株及其应用

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1767839A (zh) * 2003-03-13 2006-05-03 麒麟麦酒株式会社 抗过敏的组合物
CN102028224A (zh) * 2007-06-21 2011-04-27 东宇生物科技股份有限公司 抗过敏的乳酸菌
CN102309001A (zh) * 2010-07-01 2012-01-11 丰华生物科技股份有限公司 用于治疗过敏的乳酸菌菌株的食品组合物以及医药组合物
CN102597214A (zh) * 2009-07-22 2012-07-18 Cj第一制糖株式会社 新型植物乳杆菌及含该植物乳杆菌的组合物
CN102604854A (zh) * 2010-12-08 2012-07-25 台湾东洋药品工业股份有限公司 新颖乳酸菌株及其调节免疫反应的用途
CN102657260A (zh) * 2007-06-21 2012-09-12 东宇生物科技股份有限公司 抗过敏的乳酸菌
CN102835667A (zh) * 2011-06-20 2012-12-26 丰华生物科技股份有限公司 用于治疗过敏的热致死菌株的食品组合物以及医药组合物

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1767839A (zh) * 2003-03-13 2006-05-03 麒麟麦酒株式会社 抗过敏的组合物
CN102028224A (zh) * 2007-06-21 2011-04-27 东宇生物科技股份有限公司 抗过敏的乳酸菌
CN102657260A (zh) * 2007-06-21 2012-09-12 东宇生物科技股份有限公司 抗过敏的乳酸菌
CN102597214A (zh) * 2009-07-22 2012-07-18 Cj第一制糖株式会社 新型植物乳杆菌及含该植物乳杆菌的组合物
CN102309001A (zh) * 2010-07-01 2012-01-11 丰华生物科技股份有限公司 用于治疗过敏的乳酸菌菌株的食品组合物以及医药组合物
CN102604854A (zh) * 2010-12-08 2012-07-25 台湾东洋药品工业股份有限公司 新颖乳酸菌株及其调节免疫反应的用途
CN102835667A (zh) * 2011-06-20 2012-12-26 丰华生物科技股份有限公司 用于治疗过敏的热致死菌株的食品组合物以及医药组合物

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SHIOU-HUEI CHAO等: "Diversity of lactic acid bacteria in suan-tsai and fu-tsai, traditional fermented mustard products of Taiwan", 《INTERNATIONAL JOURNAL OF FOOD MICROBIOLOGY》 *
YEN-WENN LIU等: "Oral Administration of Heat-Inactivated Lactobacillus plantarum K37 Modulated Airway Hyperresponsiveness in Ovalbumin-Sensitized BALB/c Mice", 《PLOS ONE》 *
吴江等: "益生菌辅助防治过敏性疾病的研究进展", 《微生物学通报》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI634207B (zh) * 2017-10-20 2018-09-01 葡萄王生技股份有限公司 一種胚芽乳酸桿菌、組合物、培養方法及降尿酸、改善過敏及/或降血糖的用途
CN111647526A (zh) * 2020-05-18 2020-09-11 深圳市华大农业应用研究院 植物乳杆菌sd-h9、其益生菌菌剂及其应用
CN111647526B (zh) * 2020-05-18 2022-08-05 深圳华大基因农业控股有限公司 植物乳杆菌sd-h9、其益生菌菌剂及其应用
CN115804797A (zh) * 2021-09-16 2023-03-17 创百股份有限公司 热致死的乳酸菌菌株作为制备治疗和/或预防微粒物质-诱发的肺损伤的医药品的用途

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Publication number Publication date
CN104862241B (zh) 2018-03-27
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US9587284B2 (en) 2017-03-07

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