CN111961108A - 一种核酸适配体药物偶联物及其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及药物领域，特别是涉及一种核酸适配体药物偶联物及其制备方法和用途。本发明提供一种核酸适配体药物偶联物，包括药物分子基团和核酸适配体片段，所述药物分子基团与核酸适配体片段之间通过磷酸二酯键连接。本发明所提供的核酸适配体药物偶联物不需DNA合成后修饰，而是将药物的亚磷酰胺单体直接作为一个单体参与DNA的合成，并且通过磷酸二酯键的连接方式极大程度地保证了核酸适体的特异性和化疗药物的疗效。

Description

一种核酸适配体药物偶联物及其制备方法和用途
技术领域
本发明涉及药物领域，特别是涉及一种核酸适配体药物偶联物及其制备方法和用途。
背景技术
Combretastatin A4(CA4)，中文名康普瑞汀A4，化学名顺式-1-(3,4,5-三甲氧苯基)-2-(3′-羟基-4′-甲氧苯基)乙烯，结构式如图1(a)，其由环A,桥B，环C三个单元构筑而成，针对CA4抑制微管蛋白聚合和靶向肿瘤血管内皮细胞的功能已有相当多的衍生物和前药在被研究。环A和环C中的4个甲氧基和桥B中的顺式结构对于CA4药效发挥至关重要，而环C中的羟基则不必须。但是如果形成康普瑞汀磷酸盐,如康普瑞汀磷酸二钠CA4P(全球第一个进入，结构如图1(b)，则必须酶解后释放出羟基。CA4本来是由于存在结合微管蛋白的秋水仙素位点而抑制细胞分裂和促进细胞凋亡。但是CA4也对肿瘤血管破坏力强，既可以抑制血管新生又可以破坏既生血管，但其机理未知。CA4的水溶性很差，难以临床给药，于是科学家开发了其水溶性前药CA4P作为血管靶向剂用于临床。尽管CA4P已经有10几项临床开发并且有项目已经走到了临床III期，但是其由于系统性分布也会造成心血管毒性和神经毒性。
针对CA4的靶向递送方面有许多其他的工作和构建技术被报道。在甲醇和水两相中用叶酸修饰的第五代聚酰胺(G5.NHAc-FI-FA)树枝状聚合物来包覆CA4分子，实现对不同叶酸表达量的KB细胞(人上皮癌细胞系)的毒性选择性。Zhang等以大豆卵磷脂SPC构建胶束框架，表面修饰天冬氨酸-甘氨酸-精氨酸环形三肽配体NGR，辅以胆固醇增加插膜能力，聚乙二醇增加水溶性和体内循环时间，封装血管破坏剂药物CA4，靶向治疗神经胶质瘤。在共价修饰方面，在氩气保护下苯液相下合成CA4的硝代噻吩前药形式，如图2，其可以在缺氧的肿瘤微环境中实现靶向响应释放药物CA4。但是当前合成CA4前药用以靶向治疗的策略大多是制成非共价连接的纳米制剂，或者复杂和不安全的有机合成，并且它们的共性是必须经过在容器中的重重液相反应，需要人工监测其合成过程。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种核酸适配体药物偶联物及其制备方法和用途，用于解决现有技术中的问题。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明一方面提供一种核酸适配体药物偶联物，包括药物分子基团和核酸适配体片段，所述药物分子基团与核酸适配体片段之间通过磷酸二酯键连接。
在本发明一些实施方式中，所述药物分子基团选自CA4分子基团、7-羟基黄酮分子基团、或阿比特龙分子基团，所述CA4分子基团的结构式如下所示：
Figure BDA0002120457380000021
所述7-羟基黄酮分子基团的结构式如下所示：
Figure BDA0002120457380000022
所述阿比特龙分子基团的结构式如下所示：
Figure BDA0002120457380000023
在本发明一些实施方式中，还包括连接片段，所述药物分子基团通过磷酸二酯键与连接片段的5’端连接，所述连接片段的3’端与核酸适配体片段的5’端连接。
在本发明一些实施方式中，所述连接片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
在本发明一些实施方式中，核酸适配体片段选自靶向于PTK7的核酸适配体片段。
在本发明一些实施方式中，核酸适配体片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
本发明另一方面提供所述的核酸适配体药物偶联物的制备方法，包括：通过能够与核酸片段形成磷酸二酯键的前体药物分子，DNA固相合成制备所述核酸适配体药物偶联物。
在本发明一些实施方式中，所述前体药物分子包括如下所示的基团：
Figure BDA0002120457380000031
在本发明一些实施方式中，所述前体药物分子选自CA4前体药物分子，优选选自化学结构式如下之一所示的化合物：
Figure BDA0002120457380000032
本发明另一方面提供所述的核酸适配体药物偶联物在制备药物中的用途。
附图说明
图1显示为CA4和CA4P的结构式示意图，其中，(a)Combretastatin A4结构式(b)CA4前药CA4P结构式。
图2显示为CA4的硝基噻吩前药在缺氧诱导下释放CA4示意图。
图3显示为本发明核酸适配体药物偶联物Sgc8c-T6-CA4的合成路线示意图。
图4显示为ApDC对不同细胞的选择性结合能力表征示意图。
图5显示为ApDC对不同细胞的选择性内吞能力表征示意图。
图6显示为ApDC对PTK7阳性的细胞HCT116(a)和阴性的细胞HEK293(b)的毒性示意图。
图7显示为ApDC对HCT116荷瘤小鼠的体内成像示意图，其中，(a)左鼠尾静脉注射LC，右鼠尾静脉注射SC，并在不同时间点拍摄，蓝色画圈的表示肿瘤，(b)4h之后处死裸鼠，解剖得到肿瘤，心，肝，脾，肺，肾的成像图。
图8显示为对荷有HCT116的裸鼠进行治疗示意图，其中，(a)治疗期间肿瘤的体积变化，(b)治疗期间裸鼠的体重变化，(c)在治疗后第14天裸鼠处死后取出肿瘤后的展示图，(d)对离体肿瘤进行体重称重并进行统计。
图9显示为实施例1制备获得的CA4单体氢谱示意图。
图10显示为实施例1制备获得的CA4单体碳谱示意图。
图11显示为实施例1制备获得的CA4单体磷谱示意图。
图12显示为实施例1制备获得的7-羟基黄酮单体氢谱示意图。
图13显示为实施例1制备获得的7-羟基黄酮单体碳谱示意图。
图14显示为实施例1制备获得的7-羟基黄酮单体磷谱示意图。
图15显示为实施例1制备获得的阿比特龙单体氢谱示意图。
图16显示为实施例1制备获得的阿比特龙单体碳谱示意图。
图17显示为实施例1制备获得的阿比特龙单体磷谱示意图。
图18显示为实施例1制备获得的CA4单体所对应的核酸适配体药物偶联物质谱。
图19显示为实施例1制备获得的7-羟基黄酮单体所对应的核酸适配体药物偶联物质谱。
图20显示为实施例1制备获得的阿比特龙单体所对应的核酸适配体药物偶联物质谱。
具体实施方式
本发明发明人经过大量研究后发现，以合适的前体药物分子与核酸适配体进行组合，可以将药物分子基团与核酸适配体片段之间通过磷酸二酯键连接，从而提供一种核酸适配体药物偶联物，所述核酸适配体药物偶联物合成简单，且具有良好的特异性和药效，在此基础上完成了本发明。
本发明第一方面提供一种核酸适配体药物偶联物，包括药物分子基团和核酸适配体片段，所述药物分子基团与核酸适配体片段之间通过磷酸二酯键连接。核酸是由核苷酸聚合而成的多聚核苷酸(polynucleotide)，相邻两个核苷酸之间通常是通过3’,5’-磷酸二酯键连接的，这种连接可理解为核苷酸糖基上的3'位羟基与相邻5'核苷酸的磷酸残基之间。本发明中，所述药物分子基团通常可以包括如下所示结构式的基团：
Figure BDA0002120457380000041
从而可以与核酸适配体片段5’端的-O-基团形成磷酸二酯键，从而可以将药物分子基团与多核苷酸片段的糖环上的羟基通过磷酸二酯键连接，将药物分子基团作为一个单体参与DNA的合成，极大地降低了相关药物的制备成本，制备获得的核酸适配体药物偶联物还具有良好的特异性和药效。
本发明所提供的核酸适配体药物偶联物中，所述药物分子基团可以选自CA4(combretastatin A4)分子基团、7-羟基黄酮分子基团、或阿比特龙分子基团，在本发明一优选实施例中，所述CA4分子基团的结构式如下所示：
Figure BDA0002120457380000051
在本发明一优选实施例中，所述7-羟基黄酮分子基团的结构式如下所示：
Figure BDA0002120457380000052
在本发明一优选实施例中，所述阿比特龙分子基团的结构式如下所示：
Figure BDA0002120457380000053
本发明所提供的核酸适配体药物偶联物中，还可以包括连接片段，所述连接片段主要用于防止aptamer的靶向性受到影响。所述连接片段通常可以为合适的核酸片段，所述药物分子基团可以通过磷酸二酯键与连接片段的5’端连接，所述连接片段的3’端可以与核酸适配体片段的5’端连接以形成多核苷酸片段，从而构建所述核酸适配体药物偶联物。所述连接片段的选择对于本领域技术人员应该是已知的，例如，可以参照Angew.Chem.Int.Ed.2016,55,8889–8893。在本发明一优选实施例中，所述连接片段的核苷酸序列可以选自如下之一：TTTTTT(SEQ ID NO.1)。
本发明所提供的核酸适配体药物偶联物中，所述核酸适配体片段通常为合适的核酸片段，例如，所述核酸适配体片段可以是靶向于PTK7(络氨酸蛋白激酶7)的核酸片段。核酸适配体片段的选择很大程度上决定了所述核酸适配体药物偶联物的靶向性，在本发明一优选实施例中，所述核酸适配体片段的核苷酸序列可以选自如下之一：ATC TAA CTG CTGCGC CGC CGG GAA AAT ACT GTA CGG TTA GA(SEQ ID NO.2)。
本发明第二方面提供本发明第一方面所提供的核酸适配体药物偶联物的制备方法，包括：通过能够与核酸片段形成磷酸二酯键的前体药物分子，DNA固相合成制备所述核酸适配体药物偶联物。所述DNA固相合成的方法对于本领域技术人员来说应该是已知的(例如，可参照J.Am.Chem.Soc.2014,136,2731-2734)，现有技术中已经有大量的仪器可以高效地实现DNA固相合成，具体来说，所述DNA固相合成的原理通常是将DNA的3'端固定于基质上，然后沿3'向5'方向依次添加核苷酸直至合成所需的DNA片段，例如，可以将能够与核酸片段形成磷酸二酯键的前体药物分子作为一个单体，合成过程中可以先沿3'向5'方向依次制备核酸适配体片段、连接片段和药物分子基团，其过程中，连接片段的5’端可以与能够与核酸片段形成磷酸二酯键的前体药物分子反应，形成磷酸二酯键。
本发明所提供的核酸适配体药物偶联物的制备方法中，能够与核酸片段形成磷酸二酯键的前体药物分子通常包括能够与核酸片段形成磷酸二酯键的基团，例如，可以是亚磷酸胺基团等，在本发明一优选实施例中，所述前体药物分子可以包括如下所示的基团：
Figure BDA0002120457380000061
在本发明一更优选的实施例中，所述前体药物分子选自CA4前体药物分子、7-羟基黄酮(7-hydroxylflavone)前体药物分子、或阿比特龙(abiraterone)前体药物分子，具体为结构式如下之一所示的化合物：
Figure BDA0002120457380000062
所述CA4前体药物分子、7-羟基黄酮(7-hydroxylflavone)前体药物分子、或阿比特龙(abiraterone)前体药物分子的制备方法包括：将式I化合物(CA4，CAS NO.117048-59-6)、式V化合物(7-羟基黄酮，7-hydroxylflavone，CAS NO.13057-72-2)、或式VI化合物(阿比特龙，abiraterone，CAS NO.154229-19-3)与2-氰乙基N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺反应，制备获得式II化合物(CA4的亚磷酰胺单体)，反应方程式如下：
Figure BDA0002120457380000071
本发明所提供的制备方法中，式I化合物、式V化合物、或式VI化合物，与2-氰乙基N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺的反应通常可以在溶剂存在的条件下进行，所述溶剂通常为反应体系的良溶剂，且通常不含有羟基，例如，可以是卤代烷烃类溶剂、酮类溶剂、醚类溶剂、腈类溶剂等，更具体可以是例如二氯甲烷、乙腈、丙酮、四氢呋喃等。
本发明所提供的制备方法中，2-氰乙基N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺的用量相对于式I化合物、式V化合物、或式VI化合物通常是过量的，从而可以保证反应底物的充分转化，例如，式I化合物、式V化合物、或式VI化合物与2-氰乙基N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺的摩尔比可以为1：1.5～10、1：1.5～2、1：2～4、1：4～6、1：6～8、或1：8～10。
本发明所提供的制备方法中，式I化合物、式V化合物、或式VI化合物，与2-氰乙基N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺的反应通常在碱存在的条件下进行，所述碱通常可以是有机碱，具体可以是例如N,N-二异丙基乙基胺等。所述碱的用量相对于式I化合物、式V化合物、或式VI化合物通常是过量的，从而可以保证反应底物的充分转化，例如，式I化合物、式V化合物、或式VI化合物与碱的摩尔比可以为1：2～10、1：2～4、1：4～6、1：6～8、或1：8～10。
本发明所提供的制备方法中，式I化合物、式V化合物、或式VI化合物，与2-氰乙基N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺的反应通常可以在室温或低温条件下进行，例如，该反应通常可以在冰浴的条件下进行，以控制反应速度。本领域技术人员可根据反应进程调整反应时间，例如，可以通过TLC、色谱法等方法判断反应进程，再例如，该反应的反应时间通常≥2小时。
本发明所提供的制备方法中，本领域技术人员可以选择合适的方法对式I化合物、式V化合物、或式VI化合物和2-氰乙基N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺的反应产物进行后处理，例如，可以包括：水洗、有机相脱溶。反应完成后，可以通过水洗洗去反应体系中的水溶性杂质，有机相脱除溶剂以后，即可获得粗产物。在本发明一优选的实施例中，还可以对产物进行进一步纯化，例如，可以使用柱层析的方法，对粗产物进行纯化。
本发明第三方面提供本发明第一方面所提供的核酸适配体药物偶联物在制备药物中的用途。本发明所提供的核酸适配体药物偶联物对于肿瘤细胞(例如，结直肠癌细胞)具有良好的特异性和靶向性，核酸适配体药物在肿瘤部位更加富集，且肿瘤细胞对于核酸适配体药物偶联物具有明显的选择性摄取，另外，核酸适配体药物对正常细胞的杀伤力远低于肿瘤细胞，所以，所述核酸适配体药物可以作为一种肿瘤的治疗药物，更具体可以作为一种治疗结直肠癌的治疗药物。
总体来说，当前合成CA4前药用以靶向治疗的策略大多是制成非共价连接的纳米制剂，或者复杂和不安全的有机合成，并且它们的共性是必须经过在容器中的重重液相反应，需要人工监测其合成过程，而本发明发明人经过大量研究后发现，以合适的前体药物分子与核酸适配体进行组合，可以将药物分子基团与核酸适配体片段之间通过磷酸二酯键连接，从而提供一种核酸适配体药物偶联物。所述核酸适配体药物偶联物不需DNA合成后修饰，而是将药物的亚磷酰胺单体直接作为一个单体参与DNA的合成，并且通过磷酸二酯键的连接方式极大程度地保证了核酸适体的特异性和化疗药物的疗效，实现化疗药物靶向治疗的目的。
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
须知，下列实施例中未具体注明的工艺设备或装置均采用本领域内的常规设备或装置。
此外应理解，本发明中提到的一个或多个方法步骤并不排斥在所述组合步骤前后还可以存在其他方法步骤或在这些明确提到的步骤之间还可以插入其他方法步骤，除非另有说明；还应理解，本发明中提到的一个或多个设备/装置之间的组合连接关系并不排斥在所述组合设备/装置前后还可以存在其他设备/装置或在这些明确提到的两个设备/装置之间还可以插入其他设备/装置，除非另有说明。而且，除非另有说明，各方法步骤的编号仅为鉴别各方法步骤的便利工具，而非为限制各方法步骤的排列次序或限定本发明可实施的范围，其相对关系的改变或调整，在无实质变更技术内容的情况下，当亦视为本发明可实施的范畴。
实施例1
核酸适配体药物偶联物的制备：
如图3所示，由CA4(式I，CAS NO.117048-59-6)通过液相一步合成制备获得CA4的亚磷酰胺单体(式II)作为前体药物。首先将康普瑞丁(1.0g,3.16mmol)和N,N-二异丙基乙基胺(1.22g,9.48mmol)用二氯甲烷(50mL)溶解，随后在冰浴条件下逐滴加入2-氰乙基N,N-二异丙基氯代亚磷酰胺(1.5g,6.32mmol)。反应2小时后，停止反应，分别用碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤两次，有机相合并后用无水硫酸钠干燥。通过旋转蒸发仪浓缩有机相，随后用柱层析分离，乙酸乙酯：石油醚＝1：3洗脱，得到目标产物(1.47g，白色固体，产率：90.1％)，CA4单体氢谱图如图9所示，CA4单体碳谱图如图10所示，CA4单体磷谱图如图11所示。参照上述CA4单体，可以制备得到7-羟基黄酮单体(氢谱见图12，碳谱见图13，磷谱见图14)和阿比特龙单体(氢谱见图15，碳谱见图16，磷谱见图17)，区别仅在于将式II化合物替换为式III化合物和式IV化合物，投料当量均相同。
将制备获得的CA4的亚磷酰胺单体作为一个人造的药物碱基，与四个天然的A,T,C,G碱基一起通过DNA合成仪自动化合成目标分子，其序列为
Figure BDA0002120457380000091
Figure BDA0002120457380000092
(
Figure BDA0002120457380000093
代表CA4的药物分子基团，3’端下划线部分的41个碱基为Sgc8c序列)，称之为Sgc8c-T6-CA4，鉴定数据如图18所示。参照上述合成方法，分别将7-羟基黄酮单体和阿比特龙单体作为一个人造的药物碱基，与四个天然的A,T,C,G碱基一起通过DNA合成仪自动化合成目标分子，多核苷酸片段序列同样为SEQ ID NO.3，7-羟基黄酮ApDC(见图19)和阿比特龙ApDC(见图20)亦可获得。
实施例2
ApDC(核酸适体-药物偶联物)的靶向选择性：
为了证明Sgc8c-T6-CA4(SC)靶向PTK7(蛋白酪氨酸激酶7)高表达的细胞，先合成非靶向序列Library，和偶联药物分子Library-T6-CA4(LC)，方法与SC的合成方法相同(所有材料都标记3’FITC，由北京擎科科技有限公司合成)。然后选择高表达PTK7的结直肠癌细胞HCT116和不表达PTK7的胚肾细胞HEK293，在4℃下孵育不同的材料，具体方法为：用0.25％EDTA消化成单细胞悬液，每个样品30W细胞，含有200uL体积结合液(D-PBS 4.5g/L葡萄糖,5mM MgCl2,0.1mg/mL tRNA,和1mg/mL BSA)，以200nM FITC标记的DNA材料孵育HCT116(1640培基)或HEK293(DMEM培基)1h，洗涤3次然后用BD FACSVerseTM流式细胞仪测定，得到如图4的结果。
如图4(a)所示，在预先4℃孵育100nM无标记的Sgc8c或者Library 0.5h的情况下(Sgc8c和Library分别指未偶联药物分子的含有41个碱基的多核苷酸片段)，再在上述体系中加入FITC标记的SC，浓度为200nM，再按上述条件孵育1h，得到SC与Sgc8c存在结合位点的竞争关系，说明SC确实结合了PTK7。在图4(b)中，对于不表达PTK7的HEK293细胞，SC与LC都是没有结合能力的。
实施例3
ApDC的选择性细胞摄取能力：
在4℃孵育体系下的选择性结合能力是由于Sgc8c对靶蛋白PTK7的一对一识别作用，而在37℃生理温度下展开的模拟体内细胞摄取实验则对ApDC靶向治疗更具说服力。以Cy5标记的SC和LC孵育不同的细胞系2h(HCT116细胞和HEK293细胞)，具体条件如下：在37度5％培养箱中，以200nM cy5标记的DNA材料孵育前一天接种有500uL 30％密度的HCT116(1640培基)或HEK293(DMEM培基)2h，洗涤3次然后用Olympus FV1000共聚焦显微镜在同一条件下拍摄成像，结果如图5所示，HCT116细胞对SC有明显的摄取能力，而对LC则相对很弱。此外，对于不表达PTK7的阴性细胞HEK293来说，SC和LC的内在化细胞能力均很弱。可以证明的是，PTK7阳性细胞对ApDC有选择性摄取能力。
实施例4
ApDC体外的选择性毒性：
在以上的实验我们证明ApDC在4℃下对细胞的选择性结合和37℃下的选择性内吞，其所体现的增益效果就是选择性的细胞毒性实验。
以SC和其他对照材料(LC、CA4、康普瑞汀磷酸二钠CA4P)孵育HCT116和HEK293，用CCK-8法测定细胞存活率，具体方法如下：每孔3000细胞，100uL对应培基接种96孔板，待贴壁后，加入25、5、1、0.2、0.04nM药物浓度，每个浓度设置3个重复，体积仍是100ul/孔，然后37度5％培养箱孵育4h，DPBS洗涤三次，然后继续培养72h,之后加入10ul/孔的cck-8，孵育1h，测定450nm吸光度，结果如图6所示。如图6所示的结果可以发现，SC对癌细胞HCT116杀伤力高于正常细胞HEK293，而LC对两者的毒性则相对较弱。并且SC与CA4、CA4P在HCT116细胞中体现了相当的毒性，而对于HEK293，其裸药CA4和前药CA4P并没有体现靶向性，依然杀伤性非常高，SC则表现得很低，这就是ApDC在体外细胞毒性上体现的靶向性。
实施例5
ApDC在体内的选择性分布：
对于这种自动化固相合成的靶向性良好的核酸适配体-药物偶联物ApDC来说，体内的考察尤为重要。以Cy5标记SC和LC尾静脉注射到荷有HCT116结直肠癌细胞的裸鼠中，注射使用的溶液为DPBS溶解为100ul 50uM的DNA，裸鼠为6-8周龄的雌性裸鼠(取4-6周龄的裸鼠若干，每只注射100uL 600W HCT116细胞于右腋皮下，约两周后，肿瘤长到300-600mm3后开始实验)，不同时间点拍摄，并在4h之后处死裸鼠，取离体器官成像得到如图7的结果：从1h之后看来，SC明显比LC在体内的循环时间更长，在肿瘤处的富集更加明显，说明SC能够做到在体内实现靶向性；解剖以后，肿瘤处SC有富集，而LC没有，且LC在肺部有集结，说明SC对正常器官的影响更小。
实施例6
ApDC对结直肠癌的抑制效果：
以HCT116细胞对裸鼠建造皮下瘤模型(取4-6周龄的裸鼠若干，每只注射100uL600WHCT116细胞于右腋皮下，约一周后，肿瘤长到100-200mm3后开始实验)，随机分组，以2mg/kgCA4等剂量的各种材料尾静脉注射治疗裸鼠，具体为将CA4溶解于20％PEG-400，2％DMSO的DPBS溶液中，其余溶解在DPBS中，裸鼠6周雌性，并以PBS作为空白对照，每两天一针，并监测一次裸鼠体重和肿瘤体积，治疗7次之后处死裸鼠，获得肿瘤，称重统计差异，结果如图8所示：(a)(c)(d)显示SC比裸药CA4和水溶性前药CA4P抑瘤效果更好，而ApDC的对照LC则无明显治疗效果。(b)显示CA4和CA4P均导致裸鼠体重下降10％，明显的影响裸鼠正常生理生活，这是因为CA4和CA4P在此仍表现对正常细胞，组织和器官有杀伤作用，而SC则无明显的副作用。
综上所述，本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。
序列表
<110> 湖南大学
<120> 一种核酸适配体药物偶联物及其制备方法和用途
<160> 3
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 6
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
tttttt 6
<210> 2
<211> 41
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
atctaactgc tgcgccgccg ggaaaatact gtacggttag a 41
<210> 3
<211> 47
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
ttttttatct aactgctgcg ccgccgggaa aatactgtac ggttaga 47

Claims (10)

1.一种核酸适配体药物偶联物，包括药物分子基团和核酸适配体片段，所述药物分子基团与核酸适配体片段之间通过磷酸二酯键连接。
2.如权利要求1所述的核酸适配体药物偶联物，其特征在于，所述药物分子基团选自CA4分子基团、7-羟基黄酮分子基团、或阿比特龙分子基团，所述CA4分子基团的结构式如下所示：
Figure FDA0002120457370000011
所述7-羟基黄酮分子基团的结构式如下所示：
Figure FDA0002120457370000012
所述阿比特龙分子基团的结构式如下所示：
Figure FDA0002120457370000013
3.如权利要求1所述的核酸适配体药物偶联物，其特征在于，还包括连接片段，所述药物分子基团通过磷酸二酯键与连接片段的5’端连接，所述连接片段的3’端与核酸适配体片段的5’端连接。
4.如权利要求3所述的核酸适配体药物偶联物，其特征在于，所述连接片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
5.如权利要求1所述的核酸适配体药物偶联物，其特征在于，核酸适配体片段选自靶向于PTK7的核酸适配体片段。
6.如权利要求5所述的核酸适配体药物偶联物，其特征在于，核酸适配体片段的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
7.如权利要求1～6任一权利要求所述的核酸适配体药物偶联物的制备方法，包括：通过能够与核酸片段形成磷酸二酯键的前体药物分子，DNA固相合成制备所述核酸适配体药物偶联物。
8.如权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述前体药物分子包括如下所示的基团：
Figure FDA0002120457370000021
9.如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，所述前体药物分子选自CA4前体药物分子，优选选自化学结构式如下之一所示的化合物：
Figure FDA0002120457370000022
10.如权利要求1～6任一权利要求所述的核酸适配体药物偶联物在制备药物中的用途。
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