CN111956667A - 多功能干细胞外泌体和间充质干细胞裂解物在制备治疗过敏性鼻炎药物中的应用 - Google Patents

多功能干细胞外泌体和间充质干细胞裂解物在制备治疗过敏性鼻炎药物中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种多功能干细胞外泌体和间充质干细胞裂解物在制备治疗过敏性鼻炎药物中的应用；本发明通过将多功能干细胞外泌体和间充质干细胞裂解物共同用于治疗过敏性鼻炎，在两者共同作用下，能够更好的改善过敏性鼻炎症状，达到治疗过敏性鼻炎的目的，安全性好且没有激素产品的依赖性，效果显著、疗效快。

Description

多功能干细胞外泌体和间充质干细胞裂解物在制备治疗过敏 性鼻炎药物中的应用
技术领域
本发明涉及药物技术领域，具体涉及一种多功能干细胞外泌体和间充质干细胞裂解物在制备治疗过敏性鼻炎药物中的应用。
背景技术
过敏性鼻炎是一种常见的慢性可逆的炎性疾病，主要症状有流鼻涕、鼻塞、鼻痒、喷嚏等；对患者的生活质量有严重的影响。
目前，患有过敏性鼻炎的人是越来越多，但是很多人对于过敏性鼻炎又是满不在乎，然而，当过敏性鼻炎发生时如果不及时治疗便会带来严重的危害：1、嗅觉障碍：鼻粘膜长期受到炎性分泌物的刺激引起鼻粘膜充血水肿，身体免疫力下降，细菌和病毒很容易侵入鼻腔，引发鼻腔的感染，导致嗅觉神经损害，嗅觉下降或失灵；2、过敏性咽喉炎：鼻涕会被鼻纤毛运送到鼻咽处，但由于过于粘稠而无法滑入胃中被处理掉，就粘附在鼻咽处。引发咽喉部粘膜水肿增厚，容易引发咽喉炎；3、分泌性中耳炎：由于肿胀或水肿的鼻粘膜与咽鼓管粘膜相连续，咽鼓管粘膜也可以发生同样病变。炎性分泌物长期刺激通过咽鼓管感染引发内耳病变导致分泌性中耳炎；4、变应性鼻窦炎：窦口粘膜水肿，导致鼻塞引流不通畅，阻塞窦口，此时患者多有头痛，几乎所有过敏性鼻炎患者均有不同程度的变应性鼻窦炎；5、支气管哮喘：由于过敏性支气管病变所致，其致敏物也与过敏性鼻炎一致。在哮喘发作之前先有持续性、久治不愈的咳嗽，这是哮喘的前驱症状。
过敏性鼻炎一般与患者本身的过敏体质是有关系的，据目前来说过敏性鼻炎没有什么特效的药物可以完全治愈，这可能与患者自己过敏的体质有关系，想要治疗的话，主要是要找到过敏原，尽量的脱离过敏，发作的时候可以服用抗生素类的药物，或者是抗过敏的药物；而服用抗过敏类的药物，长期服用该类药物会造成患者自身的免疫系统造成一定的影响；此外，针对过敏性鼻炎的治疗方法除了药物控制外，就是一些物理方法，按摩热敷、清洗鼻腔，改善生活环境等；虽然能够得到一些改善，但是总体效果不是很理想。
发明内容
本发明的目的在于提供一种多功能干细胞外泌体和间充质干细胞裂解物在制备治疗过敏性鼻炎药物中的应用，通过将多功能干细胞外泌体和间充质干细胞裂解物应用于药物中，能够使得上述药物能够有效改善过敏性鼻炎症状，且效果显著。
为了实现本发明的上述目的，特采用以下技术方案：
本发明第一方面提供一种多功能干细胞外泌体和间充质干细胞裂解物在制备治疗过敏性鼻炎药物中的应用。
本发明中多功能干细胞外泌体对过敏性鼻炎有抗变态反应作用，这主要源于多功能干细胞含有丰富的免疫调节蛋白表达，通过免疫调节缓解过敏性鼻炎症状以及分泌细胞因子对抗炎症，修复炎症，此外，多功能干细胞外泌体还能够帮助机体修复鼻粘膜，重建鼻粘膜的正常结构；
间充质干细胞是一种可分化成多种细胞类型的多能祖细胞，这些分化新生的细胞类型可有助于各种结缔组织的维护和再生，包括骨、肌肉、脂肪和软骨等；干细胞可归巢至鼻腔部分化为鼻粘膜上皮细胞，修复受损的鼻粘膜；此外，MSCs除组织修复外，亦可调节T淋巴细胞、B淋巴细胞、自然杀伤(NK)细胞和树突状细胞(DC)等免疫细胞，对过敏性气道炎症具有免疫抑制作用；MSC裂解物能够在机体内分泌出抑炎因子，能够有效抑制淋巴T细胞的过度增殖，上调Treg细胞的数量，通过调整机体内的免疫平衡，来控制过敏性鼻炎；
本发明通过将多功能干细胞外泌体和间充质干细胞裂解物共同用于治疗过敏性鼻炎，在两者共同作用下，能够更好的改善过敏性鼻炎症状，达到治疗过敏性鼻炎的目的，并且效果显著、疗效快。
本发明第二方面提供一种用于治疗过敏性鼻炎的药物，所述药物包括治疗有效量的多功能干细胞外泌体和间充质干细胞裂解物。
优选地，所述药物还包括：含有维生素B12和鱼肝油的生理盐水；更优选地，所述生理盐水中维生素B12的浓度为0.1～0.2mg/ml，鱼肝油的质量浓度为0.5％～2％。上述各组分混合后使得所述药物PH为5.5～6.5，此时溶液与鼻腔黏液等渗，不影响纤毛运动和腺体分泌；该药物中维生素B12能够促进人体代谢，起到衡量细胞因子的作用；同时鱼肝油能够润湿和刺激鼻黏膜，使鼻黏膜血管扩张，分泌增加，减轻干燥症状，恢复黏膜功能，能促进黏膜润湿，发挥机械性保护作用；通过维生素B12和鱼肝油的添加使得药物中有效成分吸收起效快、生物利用度高，特别适合于不易或不愿口服及注射的患者使用，尤其适合于儿童；在这些方面具有巨大潜力。
优选地，所述药物中间充质干细胞裂解物的浓度为(15～20)×106cell/ml；多功能干细胞外泌体浓度为0.5～0.8μg/ml。
通过对药物中各组分浓度的限定，增强各组分的协同增效作用，进而提高药物的整体疗效。
优选地，所述药物剂型包括喷剂、注射剂、溶液剂、洗剂、气雾剂和粉雾剂。
本发明第三方面提供一种上述药物的制备方法，所述制备方法包括如下步骤：
(a)制备含有多功能干细胞外泌体的溶液：
取多功能干细胞培养液、离心，收集上清液；
在上清液中添加外泌体沉淀试剂、静置、离心去上清、重悬、纯化，得到多功能干细胞外泌体溶液；
(b)制备间充质干细胞裂解物：
将间充质干细胞悬浮于冻存管中，并通过反复冻融法破碎细胞，得到间充质干细胞裂解物；
(c)将含有多功能干细胞外泌体的溶液、间充质干细胞裂解物和含有维生素B12和鱼肝油的生理盐水进行混匀得到所述药物。
优选地，所述重悬采用的溶液为生理盐水溶液。
优选地，所述含有多功能干细胞外泌体溶液中多功能干细胞外泌体浓度为0.5～0.8μg/μl。
与现有技术相比，本发明的有益效果至少包括：
本发明通过将多功能干细胞外泌体和间充质干细胞裂解物共同用于治疗过敏性鼻炎，在两者共同作用下，能够更好的改善过敏性鼻炎症状，达到治疗过敏性鼻炎的目的，安全性好且没有激素产品的依赖性，效果显著、疗效快。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明技术方案的实施例进行详细的描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本发明的技术方案，因此只作为示例，而不能以此来限制本发明的保护范围。
需要注意的是，除非另有说明，本申请使用的技术术语或者科学术语应当为本发明所属领域技术人员所理解的通常意义。
以下各实施例采用的仪器和原料如下：
外泌体沉淀试剂：来源Cat#EXORG24B-1试剂盒，购买于辽宁润基生物科技有限公司；
纯化柱：型号EXORG20A-2；厂家；辽宁润基生物科技有限公司。
实施例1
本实施例为多功能干细胞外泌体溶液的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
取多功能干细胞培养液40ml，在4℃条件下以4000×g离心20min，去除细胞或细胞碎片，收集上清液；
取10ml上述上清液，并加入1.25ml外泌体沉淀试剂进行混匀，在4℃条件下静置30min，再在4℃下以12000×g离心30min，去除上清，不要破坏外泌体沉淀；
在去除上清的外泌体沉淀中添加生理盐水，用移液器反复吹打或旋涡混合均匀，彻底溶解沉淀，得到浓度为0.6μg/μl重悬液；
将重悬液转移至纯化柱，放入1.5ml收集管中，在40℃下以3000×g离心10min，弃掉纯化柱，得到多功能干细胞外泌体溶液。
实施例2
本实施例为一种间充质干细胞裂解物的制备方法：
将3000×104间充质干细胞悬浮于冻存管中，并在﹣70℃或液氮中冷冻后，迅速于37℃融化，经4个冻融周期，得到间充质干细胞裂解物。
实施例3
一、用于治疗过敏性鼻炎的药物
上述用于治疗过敏性鼻炎的药物包括多功能干细胞外泌体、间充质干细胞裂解物和含有维生素B12和鱼肝油的生理盐水；
其中，生理盐水中维生素B12的浓度为0.15mg/ml，鱼肝油的质量浓度为1％；药物中间充质干细胞裂解物的浓度为18×106cell/ml；多功能干细胞外泌体浓度为0.6ug/ml。
二、制备方法
上述用于治疗过敏性鼻炎的药物的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
按照实施例1和实施例2中的制备方法分别制备得到多功能干细胞外泌体溶液和间充质干细胞裂解物；
再将多功能干细胞外泌体溶液、间充质干细胞裂解物和含有维生素B12和鱼肝油的生理盐水按照相应比例进行混匀，得到上述用于治疗过敏性鼻炎的药物。
实施例4
一、用于治疗过敏性鼻炎的药物
上述用于治疗过敏性鼻炎的药物包括多功能干细胞外泌体、间充质干细胞裂解物和含有维生素B12和鱼肝油的生理盐水；
其中，生理盐水中维生素B12的浓度为0.1mg/ml，鱼肝油的质量浓度为2％；药物中间充质干细胞裂解物的浓度为20×106cell/ml；多功能干细胞外泌体浓度为0.5μg/ml。
二、制备方法
上述用于治疗过敏性鼻炎的药物的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
按照实施例1和实施例2中的制备方法分别制备得到多功能干细胞外泌体溶液和间充质干细胞裂解物；
再将多功能干细胞外泌体溶液、间充质干细胞裂解物和含有维生素B12和鱼肝油的生理盐水按照相应比例进行混匀，得到上述用于治疗过敏性鼻炎的药物。
实施例5
一、用于治疗过敏性鼻炎的药物
上述用于治疗过敏性鼻炎的药物包括多功能干细胞外泌体、间充质干细胞裂解物和含有维生素B12和鱼肝油的生理盐水；
其中，生理盐水中维生素B12的浓度为0.2mg/ml，鱼肝油的质量浓度为0.5％；药物中间充质干细胞裂解物的浓度为15×106cell/ml；多功能干细胞外泌体浓度为0.8μg/ml。
二、制备方法
上述用于治疗过敏性鼻炎的药物的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
按照实施例1和实施例2中的制备方法分别制备得到多功能干细胞外泌体溶液和间充质干细胞裂解物；
再将多功能干细胞外泌体溶液、间充质干细胞裂解物和含有维生素B12和鱼肝油的生理盐水按照相应比例进行混匀，得到上述用于治疗过敏性鼻炎的药物。
对照例1
本对照例为一种用于治疗过敏性鼻炎的药物，该药物包括多功能干细胞外泌体和含有维生素B12和鱼肝油的生理盐水；
其中，生理盐水中维生素B12的浓度为0.15mg/ml，鱼肝油的质量浓度为1％；药物中多功能干细胞外泌体浓度为0.8ug/ml。
上述用于治疗过敏性鼻炎的药物的制备方法，该制备方法包括如下步骤：
按照实施例1中的制备方法分别制备得到多功能干细胞外泌体溶液；
再将多功能干细胞外泌体溶液和含有维生素B12和鱼肝油的生理盐水按照相应比例进行混匀，得到上述用于治疗过敏性鼻炎的药物。
对照例2
本对照例为一种用于治疗过敏性鼻炎的药物，该药物包括多功能干细胞外泌体和含有维生素B12和鱼肝油的生理盐水；
其中，生理盐水中维生素B12的浓度为0.15mg/ml，鱼肝油的质量浓度为1％；药物中间充质干细胞裂解物的浓度为30×106cell/ml；多功能干细胞外泌体浓度为0.4ug/ml。
上述用于治疗过敏性鼻炎的药物的制备方法，该制备方法余实施例3中的制备方法相同。
对照例3
本对照例为一种用于治疗过敏性鼻炎的药物，该药物与实施例3中的药物基本相同，区别仅在于将实施例3药物中的含有维生素B12和鱼肝油的生理盐水替换为生理盐水。
上述用于治疗过敏性鼻炎的药物的制备方法与实施例3中的制备方法相同。
实验例
选取过敏性鼻炎患者志愿者390例，患者年龄在16～57岁，每位患者均具有鼻痒、喷嚏、鼻涕、鼻塞症状；随机分为四组，其中第一组102人，第二组和第三组分别为99人，第四组90人；第一组患者采用本发明实施例3中制备的药物进行治疗，第二组～第四组分别采用对照例1～3中制备得到的药物进行治疗；
将实施例3和对照例1～3中药物置于喷瓶中，给药方法为：擤出鼻涕，再用生理性海水清洁鼻腔；轻轻地晃动瓶子使药液充分混匀，拔掉瓶盖；用右手拇指托在瓶底，食指和中指分别放在喷头的两侧，夹住喷头；保持自然头位(不必抬头)，用右手将鼻喷剂的喷头放进左侧鼻孔，喷头方向朝向自己左侧的眼睛，即朝向左侧鼻腔的外侧，保持瓶子基本竖直，不要过度倾斜，由于鼻腔的内侧是鼻中隔，所以不要将喷头朝向鼻腔的内侧，以避免喷在鼻中隔上；轻轻地用鼻吸气，同时用右手指揿压小瓶，喷出1喷药液；将鼻喷剂换至左手，用左手将鼻喷剂的喷头放进右侧鼻孔，喷头方向朝向自己右侧的眼睛，即朝向右侧鼻腔的外侧；轻轻地用鼻吸气，同时用左手指揿压小瓶，喷出1喷药液；用纸巾擦干喷头，盖上瓶盖；每天喷5次，给药60天；并对每位患者进行随访；
根据随访结果判断治疗效果，判定标准如下：
治愈：症状全部消失；
有效：症状得到缓解，且无加重症状；
无效：症状无变化，或存在加重症状；
判定结果如表1所示：
表1
组别 治愈(人) 有效(人) 无效(人)
第一组(实施例3) 59 40 3
第二组(对照例1) 42 32 25
第三组(对照例2) 45 42 12
第四组(对照例3) 50 32 8
由表1可知：
本发明要求保护的药物对过敏性鼻炎具有显著疗效，其治愈率可达57.8％，有效率可达97.1％；由第一组和第二组相较可知，多功能干细胞外泌体和间充质干细胞裂解物两者具有协同增效的效果，能够显著增加药物的整体疗效；通过第一组和第三组以及第四组进行对比可知，通过选择含有维生素B12和鱼肝油的生理盐水，以及各原料配比，能够更好的促进机体对有效成分的吸收，显著提高了药物对过敏性鼻炎的治疗效果。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围，其均应涵盖在本发明的权利要求和说明书的范围当中。

Claims (9)

1.多功能干细胞外泌体和间充质干细胞裂解物在制备治疗过敏性鼻炎药物中的应用。
2.一种用于治疗过敏性鼻炎的药物，其特征在于，包括治疗有效量的多功能干细胞外泌体和间充质干细胞裂解物。
3.根据权利要求2所述的药物，其特征在于，还包括：含有维生素B12和鱼肝油的的生理盐水。
4.根据权利要求3所述的药物，其特征在于，所述生理盐水中维生素B12的浓度为0.1～0.2mg/ml，鱼肝油的质量浓度为0.5％～2％。
5.根据权利要求3或4所述的药物，其特征在于，所述药物中间充质干细胞裂解物的浓度为(15～20)×106cell/ml；多功能干细胞外泌体浓度为0.5～0.8μg/ml。
6.根据权利要求2～4任一所述的药物，其特征在于，所述药物剂型包括喷剂、注射剂、溶液剂、洗剂、气雾剂和粉雾剂。
7.权利要求2～6任一所述的药物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
(a)制备含有多功能干细胞外泌体的溶液：
取多功能干细胞培养液、离心，收集上清液；
在上清液中添加外泌体沉淀试剂、静置、离心去上清、重悬、纯化，得到多功能干细胞外泌体溶液；
(b)制备间充质干细胞裂解物：
将MSC细胞悬浮于冻存管中，并通过反复冻融法破碎细胞，得到间充质干细胞裂解物；
(c)将含有多功能干细胞外泌体的溶液、间充质干细胞裂解物和含有维生素B12和鱼肝油的生理盐水进行混匀得到所述药物。
8.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述重悬采用的溶液为生理盐水溶液。
9.根据权利要求7所述的制备方法，其特征在于，所述含有多功能干细胞外泌体溶液中多功能干细胞外泌体浓度为0.5～0.8μg/μl。
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