CN111944059A - 一种兼具抗菌、免疫调节、抗感染和抗炎活性的多功能杂合肽及其制备方法和应用 - Google Patents
一种兼具抗菌、免疫调节、抗感染和抗炎活性的多功能杂合肽及其制备方法和应用 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及蛋白质工程技术领域，具体涉及一种兼具抗菌、免疫调节、抗感染和抗炎活性的多功能杂合肽及其制备方法和应用。本发明提供的杂合肽包含：肽I以及与肽I融合的肽II，其中，肽I的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，肽II的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。该杂合肽同时具有抗菌、免疫调节、抗感染和抗炎功能，并且具有细胞毒性低、安全性高，制备方便、成本低廉的优势，可作为理想的抗菌剂、免疫调节剂、抗感染剂和抗炎剂，广泛用于人和动物的医药、食品、保健、饲料、营养等领域，具有很好的应用潜力和价值。
Description
技术领域
本发明涉及蛋白质工程技术领域，具体涉及一种兼具抗菌、免疫调节、抗感染、抗炎活性的多功能杂合肽及其制备方法和应用。
背景技术
细菌感染是致病菌或条件致病菌侵入动物机体中生长繁殖，产生毒素和其他代谢产物所引起的感染性疾病，可诱发炎症以及氧化损伤等，重则损坏免疫系统，甚至导致死亡。动物在幼龄、体弱、疾病、应激、病原感染等情况下，经常导致免疫力降低，进而发生继发感染(细菌感染等)，引起炎性反应。对于感染和炎症治疗，传统的防治策略是使用抗生素和化学药物制剂。抗生素和化学药物制剂的持续使用不仅容易产生耐药性和多种副作用，而且容易造成药物残留和食品安全风险。
在实际应用中，为控制细菌感染、炎症或免疫机能损伤，往往需要将抗菌、免疫调节以及抗炎药物进行交替使用或者配伍使用，这明显增加了临床选药的复杂性和经济负担。因此，开发高效、无毒、无残留或低残留量的具有抗菌、抗感染、免疫调节、抗炎等多功能性生物制剂具有重要意义。
新型抗病原微生物、免疫调节及抗炎药物主要包括功能性益生菌制剂、植物提取物以及生物活性肽等。
生物活性肽是指对机体生命活动有益或者具有一定生理作用的肽类化合物，其分子量一般小于6000Da。不同的生物活性肽在氨基酸组成、排列顺序以及空间结构等方面存在差异，从而表现出不同的生理功能，如免疫调节、抗炎、镇静、抗菌、抗病毒、抗氧化、降血压。研究发现，生物活性肽还具有不易产生耐药性和药物残留等优势。因此，生物活性肽在提高免疫力、防治病原体引起的感染、炎症、免疫损伤等方面具有广阔的应用前景和开发潜力。
然而，天然的生物活性肽也存在着一些缺陷，主要表现为：(1)有些天然生物活性肽的生物活性相对较低、功能较单一，如猪的乳铁蛋白肽存在抗菌活性较弱的问题；而天蚕素A虽然具有良好的抗菌功效，但其抗炎能力却相对较弱；(2)一些天然生物活性肽的细胞毒性较高，在抑杀病原微生物的同时也会造成机体的严重损伤(如蜂毒素(melittin)和LL-37)。通过对天然的生物活性肽进行改造以提高其生物活性、扩展其功能，开发高效多功能的生物活性肽具有重要意义。
发明内容
本发明的目的是提供一种具有抗菌、抗感染、抗炎和免疫调节活性的杂合肽，本发明的另一目的是提供该杂合肽的其制备方法和应用。
为实现上述目的，本发明通过对具有免疫调节、抗炎、抗菌、抗感染功能的多肽进行筛选，最终选择免疫抗炎多肽CTP(序列如SEQ ID NO.2所示)和抗菌抗病毒多肽CL(序列如SEQ ID NO.1所示)为母源肽，在对免疫抗炎多肽CTP及抗菌抗病毒多肽CL的序列、结构以及序列结构与功能的关系进行大量研究的基础上，运用蛋白质分子设计技术进行CTP和CL的杂合优化，经不断筛选、验证和优化，最终获得一种新型多功能杂合肽，命名为CLCP。CLCP包含全长的CL和全长的CTP，其中一个多功能杂合肽的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。杂合肽CLCP同时具有两个母源肽的功能，且其抗菌、抗感染、免疫调节和抗炎活性较两个母源肽均有显著提高。
具体地，本发明提供以下技术方案：
本发明提供一种杂合肽，其包含：肽I以及与肽I融合的肽II，其中，肽I的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，肽II的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
本发明所述的杂合肽的结构优选为：肽II的N端与肽I的C端直接或经连接肽融合。
以上所述的连接肽可为本领域常用的连接肽序列，例如：包含一个或几个甘氨酸和丝氨酸的肽。
具体地，本发明所述的杂合肽的氨基酸序列为如下任一种：
(1)如SEQ ID NO.3所示；
(2)与如SEQ ID NO.3所示的序列具有至少90％的同源性、由如SEQ ID NO.1所示序列的全部或部分与如SEQ ID NO.2所示序列的全部或部分融合得到的具有相同功能肽的氨基酸序列；
以上所述同源性优选为至少91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％。
(3)将如SEQ ID NO.3所示序列经一个或多个氨基酸的替换、缺失或插入、由如SEQID NO.1所示序列的全部或部分与如SEQ ID NO.2所示序列的全部或部分融合得到的具有相同功能肽的氨基酸序列。
以上所述的在如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列的基础上进行改造获得的具有相同功能的杂合肽的衍生多肽包括但不限于如下多肽：
(1)在如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列的C端或N端添加蛋白标签序列得到的多肽，例如：在如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列的C端或N端添加含有蛋白标签序列(如His标签、GST标签或C-Myc标签)得到的多肽。
本领域技术人员应该理解，为实现易于纯化、多肽标记等目的，在多肽的两端添加标签序列是本领域的常规技术手段，并不会对多肽本身固有的功能和活性造成影响，因此，上述在如SEQ ID NO.3所示的杂合肽的两端添加标签序列得到的CLCP衍生物也在本发明的保护范围内。
(2)对如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列进行一个或多个氨基酸的保守性氨基酸替换得到的多肽，例如：本发明发现将第4位的Leu替换为Ile不会对多肽的功能造成实质影响。
本发明还提供编码所述杂合肽的核酸以及包含编码所述杂合肽的核酸的生物材料，所述生物材料包括重组DNA、表达盒、转座子、载体或宿主细胞。
在已知所述杂合肽的氨基酸序列的情况下，本领域技术人员可基于多肽表达的需要，基于密码子的简并性原则和不同物种对于密码子的使用偏好性，设计具有不同核苷酸序列的所述杂合肽的编码基因。
本发明进一步提供所述杂合肽的制备方法，包括：将编码所述杂合肽的核酸导入宿主细胞中，表达所述杂合肽；或者，包括：采用化学合成方法制备所述杂合肽。
本发明所述的宿主细胞可为微生物细胞、动物细胞或植物细胞，其中微生物细胞包括但不限于大肠杆菌、酵母。
以上所述的将编码所述杂合肽的核酸导入宿主细胞的方法可采用本领域常规的基因转化方法，例如：将编码所述杂合肽的核酸克隆至表达载体后，将携带编码所述杂合肽的核酸的表达载体转化至宿主细胞。
本发明通过体内和体外试验证明，杂合肽CLCP对多株细菌具有显著的抗菌作用，并具有良好的抗感染作用，且CLCP能够有效抑制炎症反应，缓解炎症状态对机体生长的抑制作用，降低细胞因子表达量。此外，CLCP还能够提高机体正常以及免疫缺陷状态下的免疫活性，提高细胞因子的表达量，促进机体生长，缓解免疫缺陷对组织器官造成的伤害。CLCP具有双向免疫调节功能，既可增强正常以及免疫缺陷状态下的免疫活性，也能抑制炎症状态等免疫亢进状态下的免疫活性。
基于上述功能，本发明提供所述杂合肽、其编码核酸、含有其编码核酸的生物材料或其制备方法的应用。
具体地，本发明提供所述杂合肽、其编码核酸、含有其编码核酸的生物材料或其制备方法在制备抗菌制剂或抗感染制剂中的应用。
优选地，所述抗菌制剂为针对革兰氏阴性菌或革兰氏阳性菌的抗菌制剂。
以上所述的革兰氏阴性菌包括但不限于大肠杆菌、沙门氏菌。
以上所述的革兰氏阳性菌包括但不限于金黄色葡萄球菌。
本发明还提供所述杂合肽、其编码核酸、含有其编码核酸的生物材料或其制备方法在制备抗炎制剂中的应用。
以上所述的抗炎制剂可用于包括肠出血性大肠杆菌(EnterohemorrhagicE.coli,EHEC)、脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)诱导的炎症反应在内的多种炎症或细菌感染引起的败血症、脓毒血症的预防和治疗。
本发明还提供所述杂合肽、其编码核酸、含有其编码核酸的生物材料或其制备方法在制备免疫调节制剂中的应用。
作为一种实施方式，所述免疫调节制剂为免疫增强剂。
上述免疫增强剂可用于包括免疫抑制剂(如环磷酰胺)造成的机体免疫抑制反应在内的多种类型的免疫抑制的预防和治疗。
本发明所述制剂为药物、保健品以及食品或饲料添加剂。
本发明提供一种产品，所述产品包含所述杂合肽或采用制备方法制备得到的杂合肽，所述产品为选自药物、保健品以及食品或饲料添加剂中的任意一种。
以上所述的产品中，可仅以所述杂合肽为有效成分或将所述杂合肽与其它活性成分复配组成有效成分。
以上所述的产品还可包含药学、保健品、食品或饲料添加剂领域可接收的载体或辅料。
本发明的有益效果在于：本发明首次以免疫抗炎多肽CTP和抗菌抗病毒多肽CL为母源肽开发杂合肽，得到多功能杂合肽CLCP。CLCP同时具有两个母源肽的功能，即具有抗菌、抗感染、免疫调节和抗炎功能；并且，与母源肽CTP和CL的相应活性相比，其免疫调节活性、抗炎活性、抗菌和抗感染活性更强。同时CLCP具有细胞毒性低、安全性高，制备方便、成本低廉的优势，可作为理想的抗菌剂、抗感染剂、免疫调节剂、抗炎剂，广泛用于人和动物的医药、食品、保健、饲料、营养等领域，具有巨大的应用价值。
附图说明
图1为本发明实施例1中候选杂合肽的免疫调节和抗炎活性检测结果，其中，A为免疫调节活性，B为抗炎活性；Control代表空白对照组，LPS代表EHEC感染的小鼠未给予治疗的模型组；*,P≤0.05；**,P≤0.01；***,P≤0.001。
图2为本发明实施例3中杂合肽CLCP对环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠的体重及免疫器官的保护作用；其中，A为CLCP对免疫抑制小鼠体重的影响；B为CTP对免疫抑制小鼠脾脏的影响；C为CLCP对免疫抑制小鼠胸腺的影响；Control代表空白组，CTX代表模型组，CLCP+CTX，CTP+CTX，CL+CTX代表试验组；NS,P>0.05，*,P≤0.05；***,P≤0.001。
图3为本发明实施例3中CLCP对小鼠巨噬细胞吞噬活性的影响；Control代表空白组，CTX代表模型组，CLCP+CTX，CTP+CTX，CL+CTX代表试验组；NS，P>0.05；*,P≤0.05；***,P≤0.001。
图4为本发明实施例3中CLCP对小鼠细胞因子释放量的影响；A为CLCP对小鼠细胞因子TNF-α释放量的影响；B为CLCP对小鼠细胞因子IL-6释放量的影响；C为CLCP对小鼠细胞因子IL-1β释放量的影响；Control代表空白组，CTX代表模型组，CLCP+CTX，CTP+CTX，CL+CTX代表试验组；NS，P>0.05；*,P≤0.05；***,P≤0.001。
图5为本发明实施例3中CLCP对小鼠免疫球蛋白含量的影响；A为CLCP对小鼠IgA含量的影响；B为CLCP对小鼠IgG含量的影响；C为CLCP对小鼠IgM含量的影响。Control代表空白组，CTX代表模型组，CLCP+CTX，CTP+CTX，CL+CTX代表试验组；NS，P>0.05；*,P≤0.05；****,P≤0.0001。
图6为本发明实施例4中杂合肽CLCP对EHEC诱导的肠炎小鼠的体重及肠道的保护作用；其中，A为CLCP对免疫抑制小鼠体重的影响；B为CLCP对小鼠结肠组织损伤评分的影响；NS,P>0.05；*,P≤0.05；****,P≤0.0001。
图7为本发明实施例4中杂合肽CLCP对小鼠炎症反应的抑制作用；其中，A为CLCP对小鼠细胞因子TNF-α释放量的影响；B为CLCP对小鼠细胞因子IFN-γ释放量的影响；C为CLCP对小鼠细胞因子IL-6释放量的影响；Control代表空白组，EHEC代表模型组，CLCP+EHEC，CTP+EHEC，CL+EHEC代表试验组；NS,P>0.05；*，P≤0.05；***,P≤0.001；****,P≤0.0001。
图8为本发明实施例5中杂合肽CLCP对大肠杆菌在肠道中定植情况的影响；*,P≤0.05；***,P≤0.001；****,P≤0.0001。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
以下实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
以下实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
实施例1多功能杂合肽CLCP的制备
通过对具有免疫调节、抗炎、抗菌、抗感染功能的多肽进行筛选，确定以免疫抗炎多肽CTP(序列如SEQ ID NO.2所示)和抗菌抗病毒多肽CL(序列如SEQ ID NO.1所示)作为母源肽。对CTP和CL的序列、结构以及序列结构与功能的关系进行研究，利用蛋白质分子设计技术进行多肽CTP和CL的杂合，得到多条候选杂合肽。其中，CLCP具有最优的免疫调节、抗炎、抗菌和抗感染活性，CLCP的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。本实施例以杂合肽筛选过程中的杂合肽CLCP(序列如SEQ ID NO.3所示)、CPCL(序列如SEQ ID NO.4所示)以及CLaCP(序列如SEQ ID NO.5所示)为例，说明多功能杂合肽CLCP的筛选过程。其中，各杂合肽的抗菌活性检测结果如表1所示，对由环磷酰胺CTX导致的免疫抑制小鼠的免疫调节活性的检测结果如图1的A所示，对EHEC感染的小鼠炎症的抗炎作用检测结果如图1的B所示。结果表明，与其他杂合肽相比，CLCP具有明显更优的抗菌、免疫调节和抗炎活性。
表1多功能杂合肽的最小抑菌浓度(MIC)
实施例2多功能杂合肽CLCP的抗菌作用
采用微量稀释法检测多功能杂合肽CLCP对E.coil CVCC 245，E.coil K88，EHECO157：H7及Salmonella CVCC 2212的最小抑菌浓度(MIC)。结果如表2所示，结果表明，多功能杂合肽CLCP对测试的4种革兰氏阴性菌均具有良好的抗菌活性，且其抗菌活性显著高于其母源肽CTP。
表2多功能杂合肽的最小抑菌浓度(MIC)
实施例3多功能杂合肽CLCP对免疫抑制小鼠的免疫调节作用
本实施例采用C57BL/6系雄性小鼠(体重20～22g，购买自北京维通利华实验动物技术有限公司)进行动物实验，整个实验过程都参照欧洲实验动物伦理委员会的指导原则(86/609/EEC)，并且获得中国农业大学实验动物伦理委员会的许可。动物饲养环境为清洁级，环境温度22±2℃，湿度50％～55％，8:00～20:00光照。小鼠每笼6～8只饲养，可自由摄食饮水。
1、杂合肽CLCP对免疫抑制小鼠的体重及免疫器官重量的影响
取60只健康雄性小鼠随机分为5组，每组12只。分为空白组(Control)：生理盐水；模型组(CTX)：注射环磷酰胺CTX(100mg/kg)；试验组(多肽+CTX)：注射10mg/kg的CTP、CL或CLCP和环磷酰胺CTX(100mg/kg)。
对试验组小鼠进行腹腔注射给药多肽CTP，CL或CLCP(给药剂量为10mg/kg)，连续14天，每天一次，空白组和模型组给予相应体积的生理盐水。自给药的第8天开始，对模型组和试验组小鼠进行腹腔注射环磷酰胺100mg/kg，空白组给予等量生理盐水，隔天注射，共注射4次，制备免疫功能低下的动物模型。末次给药后，将小鼠颈椎脱臼处死，记录小鼠体重，取脾脏及胸腺并分别称其湿重，计算小鼠脾脏指数与胸腺指数(脾脏指数＝小鼠脾重/体重。胸腺指数＝小鼠胸腺重量/体重)。试验结果如图2的A、B、C所示，相较于空白对照组，CTX组小鼠体重、胸腺及脾脏指数显著降低，而多肽治疗后的小鼠较仅使用CTX处理的小鼠，其体重、胸腺及脾脏指数显著升高，且CLCP治疗组小鼠的体重、胸腺，脾脏指数均显著高于其母源肽CTP及CL组小鼠。以上结果表明，杂合肽CLCP可促进免疫功能低下小鼠的生长，并对免疫功能低下小鼠的免疫器官具有保护作用，且其缓解效果显著优于其母源肽CTP及CL。
2、多功能杂合肽CLCP对免疫抑制小鼠的巨噬细胞吞噬活性的影响
取60只健康雄性小鼠随机分为5组，每组12只。分为空白组：生理盐水；模型组：注射环磷酰胺CTX(100mg/kg)；试验组：注射CTP、CL或CLCP(10mg/kg)和环磷酰胺CTX(100mg/kg)。
空白组、模型组和试验组的给药方式同上述步骤1中所述，在末次给药24h后，将小鼠采血处死后，分别在75％的乙醇中浸泡5-10s，注射4mL添加肝素的RPMI1640于腹腔内，离心洗出液，弃上清，分离得到腹腔巨噬细胞。向沉淀中加入0.5mL含10％胎牛血清的RPMI1640重悬，将细胞浓度调整5×106个/mL，接种于96孔板中，在37℃、5％CO2环境下培养3h后，弃上清，加入中性红生理盐水溶液，10min后裂解细胞，在540nm波长下检测其吸光度。实验结果如图3所示，结果表明，与空白组相比，模型组的中性红细胞吞噬率显著降低，环磷酰胺可抑制小鼠巨噬细胞的吞噬活性，而加入CLCP可恢复免疫功能低下小鼠的巨噬细胞的吞噬活性，进而加强免疫功能低下的小鼠的机体固有性免疫，且其增强作用显著高于其母源肽。
(3)杂合肽CLCP对免疫抑制小鼠的细胞因子及免疫球蛋白含量的影响
取60只健康雄性小鼠随机分为5组，每组12只。分为空白组：生理盐水；模型组：注射环磷酰胺CTX(100mg/kg)；试验组：注射CTP、CL或CLCP(10mg/kg)和环磷酰胺CTX(100mg/kg)。
空白组、模型组和试验组的给药方式同上述步骤1中所述，在末次给药24h后，眼球取血，分离血清，采用ELISA法检测小鼠血清中细胞因子(TNF-α、IL-6及IL-1β)及免疫球蛋白(IgA、IgG及IgM)的含量。实验结果如图4及图5所示，结果表明，与空白组相比，模型组小鼠的细胞因子(TNF-α、IL-6及IL-1β)及免疫球蛋白(IgA、IgG及IgM)的含量显著降低；而给药杂合肽CLCP可显著提高免疫抑制小鼠血清中的细胞因子(TNF-α、IL-6及IL-1β)及免疫球蛋白(IgA、IgG及IgM)的含量，进而提高免疫功能低下小鼠的免疫活性，且其作用显著高于其母源肽CTP及CL。
实施例4多功能杂合肽CLCP对EHEC感染的小鼠炎症的抗炎作用
本实施例采用C57BL/6系雄性小鼠(3～4周龄清洁级雌性，购买自北京维通利华实验动物技术有限公司)进行动物实验，整个试验过程都参照欧洲实验动物伦理委员会的指导原则(86/609/EEC)，并且获得中国农业大学实验动物伦理委员会的许可。动物饲养环境为清洁级，环境温度22±2℃，湿度50％～55％，8:00～20:00光照。小鼠每笼6～8只饲养，可自用摄食饮水。
1、杂合肽CLCP对炎症状态小鼠的体重及肠道的影响
将预饲一周后的60只小鼠随机分为5组(n＝12)，分别为对照组、EHEC组、EHEC+CL组、EHEC+CTP组、EHEC+CLCP组。
在试验开始的第一天，对小鼠禁食4h，然后分别给各组小鼠灌服100μL的无菌生理盐水、或100μL EHEC O157:H7菌液；第2至4天，分别给各组小鼠腹腔注射100μL的无菌生理盐水、CL(10mg/kg)、CTP(10mg/kg)或CLCP(10mg/kg)，每天注射一次，连续3天。最后一次注射生理盐水或多肽，16小时后，将小鼠颈椎脱臼致死。在此期间，每天观察并记录小鼠的行为及精神状态、称重。试验期间将室温设为24℃，允许小鼠自由采食、饮水，此外在小鼠饲养和称重时将染菌小鼠和未染菌小鼠隔离操作。实验结果如图6所示，模型组小鼠的体重较空白组显著降低，且其结肠组织损伤评分显著降低，说明EHEC诱导的炎症反应会导致小鼠体重下降，肠道损伤；而试验组小鼠的体重和肠道损伤均显著恢复，且CLCP处理的小鼠的体重显著高于其母源肽CTP及CL组，损伤程度显著低于其母源肽治疗组。结果表明，杂合肽CLCP可保护EHEC诱导的炎症反应对小鼠体重及肠道造成的损伤。
2、杂合肽CLCP对炎症状态小鼠的细胞因子表达量的影响
将预饲一周后的60只小鼠随机分为5组(n＝12)，分别为对照组、EHEC组、EHEC+CL组、EHEC+CTP组、EHEC+CLCP组。
给药方式同上述1中所述，采用ELISA法检测小鼠血清中细胞因子(TNF-α、IFN-γ及IL-6)的含量。实验结果如图7所示，结果表明，与空白组相比，模型组小鼠的细胞因子(TNF-α、IFN-γ及IL-6)含量显著升高；而试验组给药杂合肽CLCP可显著抑制LPS诱导的细胞因子(TNF-α、IFN-γ及IL-6)的表达量，进而抑制炎症反应，且其抑制效果显著优于其母源肽。
实施例5杂合肽CLCP对细菌粘附入侵的影响
将预饲一周后的60只小鼠随机分为5组(n＝12)，分别为对照组、EHEC组、EHEC+CL组、EHEC+CTP组、EHEC+CLCP组。
给药方式同上述实施例4的1中所述，将无菌分离的小鼠结肠组织称重并记录，按照相应比例加入无菌PBS及磁珠，研磨结肠组织。将结肠组织匀浆液按照一定比例稀释，然后将其涂布于大肠杆菌选择培养基的平板中，将平板置于恒温培养箱过夜培养后，对菌落数进行统计计数。实验结果如图8所示，结果表明，与空白组相比，模型组小鼠的结肠组织中大肠杆菌定植量显著升高；而试验组给药杂合肽CLCP可显著降低结肠组织中大肠杆菌定植量，进而抑制大肠杆菌诱导的炎症反应，且其抑制效果显著优于其母源肽。
本发明也进行了杂合肽CLCP的衍生物如末端酰胺化的CLCP以及将第4位氨基酸替换为ILE的CLCP衍生肽的功能实验，结果表明，杂合肽CLCP的上述衍生物也同样具有与杂合肽CLCP相似的抗菌、抗感染、免疫调节和抗炎功能。
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。
序列表
<110> 中国农业大学
<120> 一种兼具抗菌、免疫调节、抗感染和抗炎活性的多功能杂合肽及其制备方法和应用
<130> KHP201114307.9
<160> 5
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 22
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
Lys Trp Lys Leu Phe Lys Lys Ile Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile
1 5 10 15
Lys Asp Phe Leu Arg Asn
20
<210> 2
<211> 18
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
Arg Trp Gly Arg Phe Leu Arg Lys Ile Arg Arg Phe Arg Arg Lys Asp
1 5 10 15
Val Thr
<210> 3
<211> 40
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
Lys Trp Lys Leu Phe Lys Lys Ile Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Ile
1 5 10 15
Lys Asp Phe Leu Arg Asn Arg Trp Gly Arg Phe Leu Arg Lys Ile Arg
20 25 30
Arg Phe Arg Arg Lys Asp Val Thr
35 40
<210> 4
<211> 40
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
Arg Trp Gly Arg Phe Leu Arg Lys Ile Arg Arg Phe Arg Arg Lys Asp
1 5 10 15
Val Thr Lys Trp Lys Leu Phe Lys Lys Ile Phe Lys Arg Ile Val Gln
20 25 30
Arg Ile Lys Asp Phe Leu Arg Asn
35 40
<210> 5
<211> 33
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
Lys Trp Lys Leu Phe Lys Lys Ile Phe Lys Arg Ile Val Gln Arg Arg
1 5 10 15
Trp Gly Arg Phe Leu Arg Lys Ile Arg Arg Phe Arg Arg Lys Asp Val
20 25 30
Thr
Claims (10)
1.一种兼具抗菌、免疫调节、抗感染和抗炎活性的多功能杂合肽，其特征在于，包含：肽I以及与所述肽I融合的肽II，其中，肽I的氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，肽II的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。
2.根据权利要求1所述的杂合肽，其特征在于，所述肽II的N端与所述肽I的C端直接或经连接肽融合。
3.根据权利要求1或2所示的杂合肽，其特征在于，所述杂合肽的氨基酸序列为如下任一种：
(1)如SEQ ID NO.3所示；
(2)与如SEQ ID NO.3所示的序列具有至少90％的同源性、由如SEQ ID NO.1所示序列的全部或部分与如SEQ ID NO.2所示序列的全部或部分融合得到的具有相同功能肽的氨基酸序列；
(3)将如SEQ ID NO.3所示序列经一个或多个氨基酸的替换、缺失或插入、由如SEQ IDNO.1所示序列的全部或部分与如SEQ ID NO.2所示序列的全部或部分融合得到的具有相同功能肽的氨基酸序列。
4.一种核酸，其特征在于，所述核酸编码权利要求1～3任一项所述杂合肽。
5.一种生物材料，其特征在于，其包含权利要求4所述的核酸，所述生物材料包括重组DNA、表达盒、转座子、载体或宿主细胞。
6.权利要求1～3任一项所述杂合肽的制备方法，其特征在于，包括：将权利要求4所述的核酸导入宿主细胞中，表达所述杂合肽；
或者，包括：采用化学合成的方法制备所述杂合肽。
7.权利要求1～3任一项所述的杂合肽或权利要求4所述的核酸或权利要求5所述的生物材料或权利要求6所述的制备方法在制备抗菌制剂或抗感染制剂中的应用。
8.利要求1～3任一项所述的杂合肽或权利要求4所述的核酸或权利要求5所述的生物材料或权利要求6所述的制备方法在制备抗炎制剂中的应用。
9.利要求1～3任一项所述的杂合肽或权利要求4所述的核酸或权利要求5所述的生物材料或权利要求6所述的制备方法在制备免疫调节制剂中的应用。
10.一种产品，其特征在于，所述产品包含权利要求1～3任一项所述杂合肽或包含采用权利要求6所述的方法制备得到的杂合肽；
所述产品为选自药物、保健品以及食品或饲料添加剂中的任意一种。
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| GR01 | Patent grant | ||
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