CN111936515B - Cd47结合剂 - Google Patents

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Abstract

本文提供了与CD47特异性结合的抗体分子以及相关核酸分子、载体和宿主细胞。本文还提供了此类抗体分子的医学用途。

Description

CD47结合剂
相关申请的交叉引用
本申请要求于2018年8月22日提交的英国专利申请第1813693.7号和于2018年3月27日提交的英国专利申请第1804860.3号的权益，这些英国专利申请的公开内容特此通过引用整体并入。
以电子方式提交的文本文件的说明
与本申请一起以电子方式提交的文本文件的内容通过引用整体并入本文：序列表的计算机可读格式副本(文件名：ULTW_001_02WO_SeqList_ST25.txt；记录日期：2019年3月26日；文件大小：145,923字节)。
技术领域
本发明涉及与CD47(分化簇47，也被称为整合素相关蛋白[IAP])特异性结合的抗体分子及其医学用途。
背景技术
CD47(也被称为整合素相关蛋白[IAP])是属于免疫球蛋白超家族并且与包含以下的若干已知配偶体结合的跨膜蛋白：膜整合素、血小板反应蛋白1(TSP-1)和信号调节蛋白α(SIRPα)。CD47与一系列细胞过程相关，包含细胞凋亡、细胞增殖、细胞粘附和细胞迁移，并且重要的是，其在免疫应答和血管生成应答中起关键作用。CD47-SIRPα信号传导是一种抑制巨噬细胞和其它骨髓细胞的吞噬作用的激活的关键的分子相互作用。这促进肿瘤细胞的存活，并且因此充当髓系特异性免疫检查点。
临床前证据表明，在血液和实体恶性肿瘤两者的众多实验模型中，阻断CD47-SIRPα信号传导可以增强巨噬细胞的吞噬活性并抑制异种移植物的生长。由于巨噬细胞活性还是炎症相关的组织重塑(如组织纤维化和动脉粥样硬化斑块的形成)的生物学中的公认因素，因此CD47-SIRPα信号传导轴在非癌性疾病中也具有相当大的治疗潜力。因此，抗CD47mAb有可能充当癌症和其它环境中的免疫治疗剂，并可以扩大目前确立的疗法的有效性。
大多数目前经批准的抗体治疗剂均源自经过免疫的啮齿动物。通过将鼠CDR“移植”到人v基因骨架序列中，那些抗体中的许多抗体已经经历了被称为“人源化”的过程(参见Nelson等人,2010,《自然综述：药物发现(Nat Rev Drug Discov)》9:767-774)。此过程通常不准确，并且导致所得抗体的靶结合亲和力降低。为了恢复原始抗体的结合亲和力，通常在所移植v结构域的可变结构域骨架的关键位置处引入鼠残基(也被称为“回复突变”)。
尽管已经显示，与具有完全鼠v结构域的抗体相比，通过CDR移植和回复突变进行人源化的抗体在临床上诱导的免疫应答率较低，但使用这种基本移植方法进行人源化的抗体仍具有显著的临床开发风险，因为在所移植CDR环中仍然具有潜在的物理不稳定性和免疫原性基序。如抗CD47等抗体(其可能以其作用机制的一部分的形式参与免疫效应子功能)具有特别高的免疫原性风险，这是因为所述抗体可以促进CD47+靶细胞的吞噬作用，从而导致抗体连同靶细胞的抗原加工。患者的这些抗药物抗体应答可能会缩短药物在临床使用期间的半衰期并且降低药物在临床使用期间的效力和安全性。由于对蛋白质免疫原性的动物测试通常无法预测人的免疫应答，因此针对治疗用途的抗体工程集中于使经过纯化的蛋白质中的预测的人T细胞表位含量、非人种系氨基酸含量和聚集潜力最小化。
因此，理想的人源化激动性抗CD47抗体在v结构域中具有尽可能多的与充分表征的人种系序列的骨架和CDR两者中存在的残基相同的残基。Townsend等人(2015；《美国国家科学院院刊(PNAS)》112:15354-15359)描述了一种用于产生抗体的方法，其中将源自大鼠、兔和小鼠抗体的CDR移植到优选的人骨架中，然后对所述CDR进行被称为“增强型二元取代(Augmented Binary Substitution)”的人种系化方法。尽管所述方法证明了原始抗体互补位中的基本可塑性，但在缺乏高度准确的抗体-抗原共晶体结构数据的情况下，仍然无法可靠地预测任何给定抗体的CDR环中的哪些单独的残基可以转换成人种系，以及以什么组合进行转换。此外，Townsend等人的研究未解决人种系中在去除开发风险基序可能有益的位置处存在的残基之外加入诱变。这是使所述过程本质上效率低下的技术限制，从而使得出现抗体开发困难的风险很高。另外，目前无法准确预测单独的v结构域的蛋白质序列的远端位置中或者甚至配偶体v结构域上的什么修饰可以有助于在维持抗原结合亲和力和特异性的同时去除风险基序。
因此，CDR种系化和开发质量优化是一个复杂的多因素问题，因为应优选地维持分子的多种功能性质，在这种情况下包含：靶结合特异性、对来自人和动物测试物种(例如，食蟹猴(cynomolgus monkey)，也被称为食蟹猕猴(crab-eating macaque)，即，食蟹猕猴(Macaca fascicularis))两者的CD47的亲和力、v结构域生物物理稳定性和/或IgG表达产量。抗体工程化研究已经表明，关键CDR中甚至单一残基位置的突变都可能对所有这些期望的分子性质具有显著影响。
WO 2011143624A2描述了一种被称为“5F9G4”的拮抗性鼠抗CD47 IgG分子，并且还描述了5F9G4(h5F9G4)的人源化形式的制备。5F9G4的那些人源化形式是使用经典人源化技术产生的，即，通过将Kabat定义的鼠CDR移植到人重链和轻链骨架序列中，其中人骨架残基中的一些人骨架残基可能被回复突变为对应定位的5F9G4鼠残基。由于上述原因，WO2011143624A2中描述的5F9G4的这种人源化形式并不理想。
发明内容
本发明提供了多种抗CD47抗体及其医学用途。
根据本发明的一个方面，提供了一种抗体分子或其抗原结合部分，所述抗体分子与人CD47并且任选地还与食蟹猴CD47特异性结合，其中所述抗体包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区。在一些实施例中，所述VH区包括基于IGHV5-51或基于IGHV1-3的骨架。在一些实施例中，所述VL区包括基于IGKV2-28的骨架。
在IGHV5-51背景下，抗CD47抗体分子或抗原结合部分可以包括具有以下的重链可变区：
具有遵循以下顺序的氨基酸序列的HCDR1：G-Y-S-F-T-N或N的保守取代(如S)-Y-N或N的保守取代(如S)-M或M的保守取代(如I)-H或任何氨基酸(如G)(SEQ ID NO:28)；
具有遵循以下顺序的氨基酸序列的HCDR2：M或M的保守取代(例如，I)-G-T或任何氨基酸(如I)-I-Y-P-G-N或任何氨基酸(如D)-D或任何氨基酸(如S)-D-T-S或任何氨基酸(如R)-Y-N或任何氨基酸(如S、H)-Q或任何氨基酸(如P)-K或任何氨基酸(如S)-F-Q/K-G/D(SEQ ID NO:29)；以及
具有遵循以下顺序的氨基酸序列的HCDR3：G或任何氨基酸(如Q)-G-Y或任何氨基酸(如A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W)-R-A或任何氨基酸(如I、T、V、W)-M或任何氨基酸(如A、E、K、L、P、Q、R、S、T、V、W)-D-Y(SEQ ID NO:30)。
在IGHV1-3背景下，抗CD47抗体分子或抗原结合部分可以包括具有以下的重链可变区：
具有遵循以下顺序的氨基酸序列的HCDR1：G-Y-T-F-T-N或任何氨基酸(如D)-Y-N或任何氨基酸(如A)-M-H(SEQ ID NO:31)；
具有遵循以下顺序的氨基酸序列的HCDR2：M-G-T-I-Y-P-G-N-D-D或任何氨基酸(如N)-T-S或任何氨基酸(如K)-Y-N或任何氨基酸(如S)-Q-K-F-Q-G(SEQ ID NO:32)；以及
具有遵循以下顺序的氨基酸序列的HCDR3：G或任何氨基酸(如Q)-G-Y或任何氨基酸(如A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W)-R-A或任何氨基酸(如I、T、V、W)-M或任何氨基酸(如A、E、K、L、P、Q、R、S、T、V、W)-D-Y(SEQ ID NO:30)。
在本发明的各方面中，所述抗体分子或抗原结合部分的所述HCDR1可以不包含序列GYTFTNYNMH(SEQ ID NO:33；WO 2011143624A2、US20130142786A1中公开的5F9G4鼠/人源化抗体HCDR1)，所述抗体分子或抗原结合部分的所述HCDR2可以不包含序列MGTIYPGNDDTSYNQKFKD(SEQ ID NO:34；WO 2011143624A2、US20130142786A1中公开的5F9G4鼠/人源化抗体HCDR2)，和/或所述抗体分子或抗原结合部分的所述HCDR3可以不包含序列GGYRAMDY(SEQ ID NO:35；WO2011143624A2、US20130142786A1中公开的5F9G4鼠/人源化抗体HCDR3)。
所述抗体分子或抗原结合部分可以进一步包括具有以下的轻链可变区：
具有遵循以下顺序的氨基酸序列的LCDR1：R-S-S-Q-S-I或I的保守取代(如L)-V或V的保守取代(如L)-Y或Y的保守取代(如H)-S-N或任何氨基酸(如G、S、K)-G或任何氨基酸(如A、Y)-N或任何氨基酸(如Q、Y)-T或任何氨基酸(如N)-Y-L-G或任何氨基酸(如D)(SEQ IDNO:36)；
具有遵循以下顺序的氨基酸序列的LCDR2：K-V或任何氨基酸(如G)-S-N-R-F或任何氨基酸(如A、S)-S(SEQ ID NO:37)；以及
具有遵循以下顺序的氨基酸序列的LCDR3：F或任何氨基酸(如L、M)-Q-G或任何氨基酸(如A)-S或任何氨基酸(如T、L、M)-H或任何氨基酸(如Q、R)-V或任何氨基酸(如I、T)-P-Y-T或任何氨基酸(如I)(SEQ ID NO:38)。
在本发明的各方面中，所述抗体分子或抗原结合部分的所述LCDR1可以不包含序列RSSQSIVYSNGNTYLG(SEQ ID NO:39；WO 2011143624A2、US20130142786A1中公开的5F9G4鼠/人源化抗体LCDR1)，和/或所述抗体分子或抗原结合部分的所述LCDR2可以不包含序列KVSNRFS(SEQ ID NO:40；WO 2011143624A2、US20130142786A1中公开的5F9G4鼠/人源化抗体LCDR2)，和/或所述抗体分子或抗原结合部分的所述LCDR3可以不包含序列FQGSHVPYT(SEQ ID NO:41)。
在一些方面中，本文公开了一种抗CD47抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，其中
(a)HCDR1包括氨基酸序列G-Y-X1-F-T-X2-Y-X3-X4-X5，其中X1是S或S的保守取代，X2是N或N的保守取代，X3是N或任何其它氨基酸，X4是M或M的保守取代，并且X5是H或任何其它氨基酸(SEQ ID NO:42)；
(b)HCDR2包括氨基酸序列X1-X2-X3-I-Y-P-G-X4-X5-X6-T-X7-Y-X8-X9-X10-F-Q-G，其中X1是M或M的保守取代，X2是G或G的保守取代，X3是T或任何其它氨基酸，X4是N或N的保守取代，X5是D或任何其它氨基酸，X6是D或任何其它氨基酸，X7是S或任何其它氨基酸，X8是N或任何其它氨基酸，X9是Q或任何其它氨基酸，并且X10是K或任何其它氨基酸(SEQ ID NO:43)；
(c)HCDR3包括氨基酸序列X1-G-X2-R-X3-X4-D-Y，其中X1是G或任何其它氨基酸，X2是Y或任何其它氨基酸，X3是A或任何其它氨基酸，并且X4是M或任何其它氨基酸(SEQ ID NO:44)；
(d)LCDR1包括氨基酸序列R-S-S-Q-S-X1-X2-X3-S-X4-X5-X6-X7-Y-L-X8，其中X1是I或I的保守取代，X2是V或V的保守取代，X3是Y或Y的保守取代，X4是N或任何其它氨基酸，X5是G或任何其它氨基酸，X6是N或任何其它氨基酸，X7是T或任何其它氨基酸，并且X8是G或任何其它氨基酸(SEQ ID NO:45)；
(e)LCDR2包括氨基酸序列K-X1-S-N-R-X2-S，其中X1是V或任何其它氨基酸，并且X2是F或任何其它氨基酸(SEQ ID NO:46)；并且
(f)LCDR3包括氨基酸序列X1-Q-X2-X3-X4-X5-P-Y-X6，其中X1是F或任何其它氨基酸，X2是G或任何其它氨基酸，X3是S或任何其它氨基酸，X4是H或任何其它氨基酸，X5是V或任何其它氨基酸，并且X6是T或任何其它氨基酸(SEQ ID NO:47)。
在一些方面中，本发明提供了一种抗CD47抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，其中
(a)VH区氨基酸序列包括GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48)的HCDR1、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQ ID NO:49)的HCDR2和GGFRAMDY(SEQ ID NO:50)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNANTYLG(SEQ ID NO:55)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和FQASHVPYT(SEQ ID NO:53)的LCDR3；
(b)VH区氨基酸序列包括GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48)的HCDR1、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQ ID NO:49)的HCDR2和GGFRAMDY(SEQ ID NO:50)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和FQASHVPYT(SEQ ID NO:53)的LCDR3；
(c)VH区氨基酸序列包括GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48)的HCDR1、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQ ID NO:49)的HCDR2和GGFRAMDY(SEQ ID NO:50)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNAYNYLG(SEQ ID NO:56)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和FQASHVPYT(SEQ ID NO:53)的LCDR3；
(d)VH区氨基酸序列包括GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48)的HCDR1、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQ ID NO:49)的HCDR2和GGFRAMDY(SEQ ID NO:50)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNAYNYLG(SEQ ID NO:56)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和FQASQVPYT(SEQ ID NO:54)的LCDR3；
(e)VH区氨基酸序列包括GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48)的HCDR1、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQ ID NO:49)的HCDR2和GGFRAMDY(SEQ ID NO:50)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNANTYLG(SEQ ID NO:55)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和FQASQVPYT(SEQ ID NO:54)的LCDR3；
(f)VH区氨基酸序列包括GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48)的HCDR1、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQ ID NO:49)的HCDR2和GGFRAMDY(SEQ ID NO:50)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和FQASQVPYT(SEQ ID NO:54)的LCDR3；
(g)VH区氨基酸序列包括GYSFTNYNIH(SEQ ID NO:57)的HCDR1、MGTIYPGNSDTSYNPSFQG(SEQ ID NO:61)的HCDR2和GGVRAMDY(SEQ ID NO:62)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和MQASQVPYT(SEQ ID NO:63)的LCDR3；或者
(h)VH区氨基酸序列包括GYSFTNYNIH(SEQ ID NO:57)的HCDR1、MGTIYPGDSDTRYNPKFQG(SEQ ID NO:58)的HCDR2和GGYRAEDY(SEQ ID NO:59)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和MQGSHVPY(SEQ ID NO:60)的LCDR3。
在一些方面中，本文公开了一种抗CD47抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，其中
VH区氨基酸序列包括：
(a)SEQ ID NO:48或SEQ ID NO:57的HCDR1；
(b)SEQ ID NO:49或SEQ ID NO:61的HCDR2；以及
(c)SEQ ID NO:50或SEQ ID NO:62的HCDR3；并且
VL区氨基酸序列包括：
(a′)SEQ ID NO:51、SEQ ID NO:55或SEQ ID NO:56的LCDR1；
(b′)SEQ ID NO:52的LCDR2；以及
(c′)SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:54或SEQ ID NO:63的LCDR3。
在一些方面中，本文公开了一种抗CD47抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，其中
(a)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:1，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:2；
(b)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:3，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:4；
(c)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:5，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:6；
(d)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:7，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:8；
(e)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:9，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:10；
(f)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:11，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:12；
(g)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:13，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:14；或者
(h)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:15，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:16。
根据本发明还提供了一种免疫缀合物，所述免疫缀合物包括与治疗剂连接的如本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分。
在另一方面中，本发明提供了一种核酸分子，所述核酸分子对如本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分进行编码。
进一步提供了一种载体，所述载体包括本发明的核酸分子。
还提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包括如本文所定义的本发明的核酸分子或载体。
在另外一方面中，提供了一种产生抗CD47抗体和/或其抗原结合部分的方法，所述方法包括：将本发明的宿主细胞在引起所述抗体和/或其抗原结合部分的表达和/或产生的条件下培养；以及从所述宿主细胞或培养物中分离所述抗体和/或抗原结合部分。
在本发明的另一方面中，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的本发明的核酸分子或如本文所定义的本发明的载体。
进一步提供了一种用于增强受试者的免疫应答的方法，所述方法包括施用有效量的如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的本发明的免疫缀合物或如本文所定义的本发明的核酸分子或如本文所定义的本发明的载体或如本文所定义的本发明的药物组合物。
在另外一方面中，提供了一种用于治疗或预防受试者的癌症的方法，所述方法包括施用有效量的如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的本发明的免疫缀合物或如本文所定义的本发明的核酸分子或如本文所定义的本发明的载体或如本文所定义的本发明的药物组合物。
本文进一步提供了如本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的scFv或如本文所定义的免疫缀合物或如本文所定义的核酸分子或如本文所定义的载体或如本文所定义的药物组合物，其用作药剂。本发明还提供了如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的本发明的免疫缀合物或如本文所定义的本发明的核酸分子或如本文所定义的本发明的载体或如本文所定义的本发明的药物组合物，其用于治疗癌症。
在另一方面中，本发明提供了如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分或免疫缀合物或核酸分子或载体或治疗方法，其用于单独使用、结合第二治疗剂(例如，抗癌剂)依次或同时使用。
在另外一方面中，提供了如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的本发明的免疫缀合物或如本文所定义的本发明的核酸分子或如本文所定义的本发明的载体或如本文所定义的本发明的药物组合物在制造用于治疗癌症的药剂中的用途。
本发明还提供了一种用于治疗或预防受试者的自身免疫性疾病或炎性疾病的方法，所述方法包括施用有效量的如本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分或如此处所定义的免疫缀合物或如本文所定义的核酸分子或如本文所定义的载体或如本文所定义的药物组合物。
在所有方面中，所述自身免疫性疾病或炎性疾病可以选自由以下组成的组：关节炎、哮喘、多发性硬化症、牛皮癣、克罗恩氏病(Crohn's disease)、炎性肠病、狼疮、格雷夫氏病(Grave's disease)和桥本氏甲状腺炎(Hashimoto's thyroiditis)和强直性脊柱炎。
还提供了如本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的免疫缀合物或如本文所定义的核酸分子或如本文所定义的载体或如本文所定义的药物组合物，其用于治疗自身免疫性疾病或炎性疾病。
进一步提供了如本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的免疫缀合物或如本文所定义的核酸分子或如本文所定义的载体或如本文所定义的药物组合物在制造用于治疗自身免疫性疾病或炎性疾病的药剂中的用途。
本发明还提供了一种用于治疗或预防受试者的心血管疾病或纤维化疾病的方法，所述方法包括施用有效量的如本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的免疫缀合物或如本文所定义的核酸分子或如本文所定义的载体或如本文所定义的药物组合物。
还提供了如本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的免疫缀合物或如本文所定义的核酸分子或如本文所定义的载体或如本文所定义的药物组合物，其用于治疗心血管疾病或纤维化疾病。
进一步提供了如本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的免疫缀合物或如本文所定义的核酸分子或如本文所定义的载体或如本文所定义的药物组合物在制造用于治疗自身免疫性疾病、炎性疾病或纤维化疾病的药剂中的用途。
在本发明的任何方面中，心血管疾病可以例如是冠心病或动脉粥样硬化。
在本发明的任何方面中，纤维化疾病可以例如是心肌梗塞、心绞痛、骨关节炎、肺纤维化、囊性纤维化、支气管炎或哮喘。
本发明还提供了一种用于产生与人CD47并且任选地还与食蟹猴CD47特异性结合的抗体分子或其抗原结合部分的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)将来自非人来源的抗CD47 CDR移植到人v结构域骨架中，以产生人源化抗CD47抗体分子或其抗原结合部分；
(2)产生所述人源化抗CD47抗体分子或其抗原结合部分的包括所述CDR中的一种或多种突变的克隆的噬菌体文库；
(3)针对与人CD47并且任选地还与食蟹猴CD47的结合筛选所述噬菌体文库；
(4)选择来自筛选步骤(3)的对人CD47并且任选地还对食蟹猴CD47具有结合特异性的克隆；以及
(5)由选自步骤(4)的克隆产生与人CD47并且任选地还与食蟹猴CD47特异性结合的抗体分子或其抗原结合部分。
所述方法可以包括另外一个步骤：基于在步骤(4)中选择的克隆(例如，基于在步骤(4)中选择的克隆的CDR中的特定位置处的另外的探索性诱变)产生另外的克隆，以增强人源化和/或最小化人T细胞表位含量和/或改善步骤(5)中产生的抗体分子或其抗原结合部分中的制造性质。
附图说明
图1A-图1F：文库源性抗CD47 scFv相对于与人和食蟹猴CD47-Fc蛋白结合的h5F9G4 IgG1和hSIRPα-Fc的基于HTRF的竞争筛选。在每一轮中，克隆均源自经过生物素化的人和/或食蟹猴CD47-Fc蛋白上的单独的噬菌体选择分支。在两个分支中进行了多轮选择之后，针对与人和食蟹猴CD47-Fc两者的结合以及h5F9G4 IgG1和hSIRPα-Fc的表位阻断(通过信号降低测量)对文库源性克隆(黑色圆圈)进行筛选。第2轮输出(图1A、图1B)。第3轮输出(图1C、图1D)。第4轮输出(图1E、图1F)。阴性对照(非CD47结合性)和阳性对照h5F9G4scFv分别用灰色交叉圆圈和带有灰色边框的黑色圆圈表示。另外，在每个图上还包含IGHV5-51/IGKV2-28移植物scFv(灰色六角形)。
图2A-图2B：CDR残基对种系突变的耐受性的分析。分别针对VH(SEQ ID NO:64-66)(图1A)和VL(SEQ ID NO:67-69)(图2B)结构域示出了由269个独特的scFv克隆构成的ELISA阳性群体的CDR中的鼠氨基酸保留频率的绘图。除了HCDR3中，在其它CDR中仅绘制了用于人/鼠残基诱变的那些残基。X轴上的括号中注释的CDR残基与用于移植的人种系(IGKV2-28和IGHV5-51)中存在的CDR残基相同。HCDR2中的未处于括号中但值被设置为0的那些残基在移植过程期间突变为人种系。在两个绘图中，在75％处的灰色虚线表示对人种系替代鼠残基的耐受性的截止值。
图3A-图3B：与人和食蟹猴CD47-Fc蛋白结合的文库源性前导IgG的直接滴定ELISA。在直接结合ELISA中针对人(图3A)和食蟹猴(图3B)CD47-Fc蛋白(以μg/ml)滴定呈人IgG1无效形式的嵌合性抗CD47(m5F9G4)和文库源性克隆。m5F9G4和文库源性克隆表现出对CD47的两种直系同源物的结合活性。
图4A-图4B：文库源性前导的基于ELISA的CD47-Fc-SIRPα竞争测定。在存在呈IgG1无效形式的经过滴定的竞争IgG、D-A6 scFv-Fc加上呈IgG1无效形式的同种型IgG1、IGHV5-51移植物、h5F9G4和m5F9G4的情况下检查人(图4A)和食蟹猴(图4B)CD47-Fc蛋白与板结合型人SIRPα的ELISA结合信号。
图5A-图5B：文库源性前导的基于HTRF的溶液相高灵敏度CD47表位竞争测定。在存在包含文库源性前导的经过滴定的竞争IgG，加上同种型IgG1以及未经标记的h5F9G4和m5F9G4的情况下检查h5F9G4 IgG与人或食蟹猴CD47的HTRF结合信号。所有文库源性前导都表现出对h5F9G4与人CD47的结合的浓度依赖性抑制作用，从而表明维持了共享表位，但结合亲和力低(图5A)。两种D-A6蛋白(IgG和scFv-Fc)均表现出完全抑制h5F9G4与人CD47结合的能力(图5B)，其中相同v结构域的scFv-Fc融合形式的效力高于IgG的效力。
图6A-图6H：与人和食蟹猴CD47-Fc蛋白结合的设计前导IgG的直接滴定ELISA。在直接结合ELISA中针对人和食蟹猴CD47-Fc蛋白(以μg/ml)滴定呈人IgG1无效形式的嵌合性抗CD47(m5F9G4)和设计克隆。m5F9G4和文库源性克隆表现出对CD47的两种直系同源物的结合活性：VH1.1-VH1.3家族对人(图6A)和食蟹猴(图6B)；VH1.4-VH1.6家族对人(图6C)和食蟹猴(图6D)；VH1.7、VH1.9和VH1.10家族对人(图6E)和食蟹猴(图6F)以及VH1.8家族对人(图6G)和食蟹猴(图6H)。
图7A-图7B：VH1.8家族设计前导的基于ELISA的CD47-Fc-SIRPα竞争测定。在存在呈IgG1无效形式的经过滴定的竞争IgG加上呈IgG1无效形式的m5F9G4和h5F9G4作为阳性对照物的情况下检查人(图7A)和食蟹猴(图7B)CD47-Fc蛋白与板结合型人SIRPα的ELISA结合信号。
图8：另外的设计前导的基于ELISA的CD47-Fc-SIRPα竞争测定。在存在呈IgG1无效形式的经过滴定的竞争IgG加上同种型IgG1和呈IgG1无效形式的m5F9G4的情况下检查人CD47-Fc与板结合型人SIRPα的ELISA结合信号。
图9A-图9D：设计前导的基于HTRF的溶液相高灵敏度CD47表位竞争测定。在存在包含文库源性前导的经过滴定的竞争IgG加上未经标记的h5F9G4和m5F9G4作为阳性对照物的情况下检查h5F9G4 IgG与人或食蟹猴CD47的HTRF结合信号。所有VH1.8家族设计前导均表现出对h5F9G4与人(图9A)和食蟹猴(图9B)CD47的结合的有效的浓度依赖性抑制作用。其它所选设计前导也表现出对h5F9G4与人(图9C)和食蟹猴(图9D)CD47的结合的浓度依赖性抑制作用，但是效力降低。
图10：设计前导与HL60、人和食蟹猴CD47+CHO-K1细胞的流式细胞术结合。检查抗CD47对照物m5F9G4和h5F9G4、设计前导和同种型对照物(全都是IgG1无效)在野生型(WT，即，未经转染的)CHO-K1细胞、人CD47转染的CHO-K1细胞、食蟹猴CD47转染的CHO-K1细胞和人AML细胞系HL60上的特异性结合。在范围为24-100,000ng/ml的浓度下测试IgG。在所有CD47特异性抗体而非同种型对照物中，观察到针对人细胞系和食蟹猴细胞系加上HL60细胞的浓度依赖性结合。在野生型CHO-K1细胞中，未观察到高于背景的结合信号。
图11A-图11C：开发风险ELISA。此测定表明，与阴性对照IgG1优特克单抗(Ustekinumab)类似物相比，呈IgG1形式的设计前导、h5F9G4和m5F9G4抗体(除了VH1.12/VL8之外)表现出的与带负电生物分子胰岛素(图11A)、双链DNA(dsDNA)(图11B)和单链DNA(ssDNA)(图11C)的结合相等或较低。已经显示，如在博科西单抗(Bococizumab)类似物和布雷奴单抗(Briakinumab)类似物中所观察到的与这些分子的强脱靶结合是治疗性抗体的不良药代动力学的高风险指示。
图12A-图12C：使用iTopeTM对h5F9G4的VH和VL序列进行的概述分析。以一氨基酸增量测试呈9mer肽形式的跨越完整v结构域序列的肽。每行指示9mer肽(核心9mer)的p1锚残基的位置，对所述9mer肽的MHC II类结合进行了评分。每个框指示经比对的9mer与MHC II类之间的结合评分>0.6。杂乱结合肽被定义为结合17个或更多个等位基因。“杂乱高”(HAF)和“杂乱中度”(LAF)列中指示了含有潜在地具有免疫原性的肽的区；深灰色竖直条指示HAFMHC II类结合肽，并且浅灰色竖直条指示LAF MHC II类结合肽。在“TCED”列中，以竖直灰色条示出表示来自T细胞表位数据库的紧密同源的肽的区。示出了在LCDR1(SEQ ID NO:70)(图12A)、HCDR1(SEQ ID NO:71)(图12B)和HCDR3(SEQ ID NO:72)(图12C)中存在的关键HAF和TCED+表位的示例分析。
图13A-图13B：使用iTopeTM对关键前导的VL序列进行的概述分析。跨完整v结构域以一氨基酸增量测试呈9mer肽形式的跨越完整v结构域序列的肽(VL1.1在此处以实例形式示出)。图13A-图13B中表示了数据。示出了在LCDR2(SEQ ID NO:73)(图13A)和LCDR3(SEQID NO:74)(图13B)中存在的关键HAF和TCED+表位的示例分析。
图14A-图14C：使用人巨噬细胞和Jurkat细胞进行的吞噬作用效力测定。使用源自3个不同供体的人单核细胞源性巨噬细胞和Jurkat人癌细胞作为CD47+靶细胞，检查呈IgG4(S228P)形式的克隆h5F9G4、VH1.8/VL1.1、VH1.8/VL1.6和VH1.8/VL1.6-DI在吞噬作用的流式细胞术测定中的相对效力。吞噬作用以来自供体1(图14A)、2(图14B)和3(图14C)的CD11b+群体的CFSE+细胞百分比来测量。
具体实施方式
根据本发明的第一方面，提供了一种抗体分子或其抗原结合部分，所述抗体分子与人CD47并且任选地还与食蟹猴CD47特异性结合，其中所述抗体分子或抗原结合部分包括具有以下的重链可变区：
在IGHV5-51背景下，具有遵循以下顺序的氨基酸序列的HCDR1：G-Y-S-F-T-N或N的保守取代(如S)-Y-N或N的保守取代(如S)-M或M的保守取代(如I)-H或任何氨基酸(如G)(SEQ ID NO:28)；
具有遵循以下顺序的氨基酸序列的HCDR2：M或M的保守取代(例如，I)-G-T或任何氨基酸(如I)-I-Y-P-G-N或任何氨基酸(如D)-D或任何氨基酸(如S)-D-T-S或任何氨基酸(如R)-Y-N或任何氨基酸(如S、H)-Q或任何氨基酸(如P)-K或任何氨基酸(如S)-F-Q-G(SEQID NO:29)；以及
具有遵循以下顺序的氨基酸序列的HCDR3：G或任何氨基酸(如Q)-G-Y或任何氨基酸(如A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W)-R-A或任何氨基酸(如I、T、V、W)-M或任何氨基酸(如A、E、K、L、P、Q、R、S、T、V、W)-D-Y(SEQ ID NO:30)。
在一些方面中，本文所提供的抗CD47抗体或抗原结合部分与包括SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:25或由其组成的CD47蛋白特异性结合。在一些方面中，本文所提供的抗CD47抗体或抗原结合部分与具有与SEQ ID NO:24或SEQ ID NO:25至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同的氨基酸序列的CD47蛋白特异性结合。
在IGHV1-3背景下，具有遵循以下顺序的氨基酸序列的HCDR1：G-Y-T-F-T-N或任何氨基酸(如D)-Y-N或任何氨基酸(如A)-M-H(SEQ ID NO:31)；
具有遵循以下顺序的氨基酸序列的HCDR2：M-G-T-I-Y-P-G-N-D-D或任何氨基酸(如N)-T-S或任何氨基酸(如K)-Y-N或任何氨基酸(如S)-Q-K-F-Q-G(SEQ ID NO:32)；以及
具有遵循以下顺序的氨基酸序列的HCDR3：G或任何氨基酸(如Q)-G-Y或任何氨基酸(如A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V、W)-R-A或任何氨基酸(如I、T、V、W)-M或任何氨基酸(如A、E、K、L、P、Q、R、S、T、V、W)-D-Y(SEQ ID NO:30)。
在本发明的各方面中，所述抗体分子或抗原结合部分的所述HCDR1可以不包含序列GYTFTNYNMH(SEQ ID NO:33；WO 2011143624A2、US20130142786A1中公开的5F9G4鼠/人源化抗体HCDR1)，所述抗体分子或抗原结合部分的所述HCDR2可以不包含序列MGTIYPGNDDTSYNQKFKD(SEQ ID NO:34；WO 2011143624A2、US20130142786A1中公开的5F9G4鼠/人源化抗体HCDR1)，和/或所述抗体分子或抗原结合部分的所述HCDR3可以不包含序列GGYRAMDY(SEQ ID NO:35；WO2011143624A2、US20130142786A1中公开的5F9G4鼠/人源化抗体HCDR3)。
所述抗体分子或抗原结合部分可以进一步包括具有以下的轻链可变区：
具有遵循以下顺序的氨基酸序列的LCDR1：R-S-S-Q-S-I或I的保守取代(如L)-V或V的保守取代(如L)-Y或Y的保守取代(如H)-S-N或任何氨基酸(如G、S、K)-G或任何氨基酸(如A、Y)-N或任何氨基酸(如Q、Y)-T或任何氨基酸(如N)-Y-L-G或任何氨基酸(如D)(SEQ IDNO:36)；
具有遵循以下顺序的氨基酸序列的LCDR2：K-V或任何氨基酸(如G)-S-N-R-F或任何氨基酸(如A、S)-S(SEQ ID NO:37)；以及
具有遵循以下顺序的氨基酸序列的LCDR3：F或任何氨基酸(如L、M)-Q-G或任何氨基酸(如A)-S或任何氨基酸(如T、L、M)-H或任何氨基酸(如Q、R)-V或任何氨基酸(如I、T)-P-Y-T或任何氨基酸(如I)(SEQ ID NO:38)。
在本发明的各方面中，所述抗体分子或抗原结合部分的所述LCDR1可以不包含序列RSSQSIVYSNGNTYLG(SEQ ID NO:39；WO 2011143624A2、US20130142786A1中公开的5F9G4鼠/人源化抗体LCDR1)，和/或所述抗体分子或抗原结合部分的所述LCDR2可以不包含序列KVSNRFS(SEQ ID NO:40；WO 2011143624A2、US20130142786A1中公开的5F9G4鼠/人源化抗体LCDR2)，和/或所述抗体分子或抗原结合部分的所述LCDR3可以不包含序列FQGSHVPYT(SEQ ID NO:41)。
在一些方面中，本文公开了一种抗CD47抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，其中
(a)HCDR1包括氨基酸序列G-Y-X1-F-T-X2-Y-X3-X4-X5，其中X1是S或S的保守取代，X2是N或N的保守取代(例如，S)，X3是N或任何其它氨基酸(例如，S、A)，X4是M或M的保守取代(例如，I)，并且X5是H或任何其它氨基酸(例如，G)(SEQ ID NO:42)；
(b)HCDR2包括氨基酸序列X1-X2-X3-I-Y-P-G-X4-X5-X6-T-X7-Y-X8-X9-X10-F-Q-G，其中X1是M或M的保守取代(例如，I)，X2是G或G的保守取代，X3是T或任何其它氨基酸(例如，I)，X4是N或任何其它氨基酸(例如，D)，X5是D或任何其它氨基酸(例如，S)，X6是D或任何其它氨基酸，X7是S或任何其它氨基酸(例如，R)，X8是N或任何其它氨基酸(例如，S)，X9是Q或任何其它氨基酸(例如，P)，并且X10是K或任何其它氨基酸(例如，S)(SEQ ID NO:75)；
(c)HCDR3包括氨基酸序列X1-G-X2-R-X3-X4-D-Y，其中X1是G或任何其它氨基酸(例如，Q)，X2是Y或任何其它氨基酸(例如，A、C、D、E、F、G、H、I、K、L、M、N、Q、R、S、T、V或W)，X3是A或任何其它氨基酸(例如，I、T、V或W)，并且X4是M或任何其它氨基酸(例如，A、E、K、L、P、Q、R、S、T、V或W)(SEQ ID NO:44)；
(d)LCDR1包括氨基酸序列R-S-S-Q-S-X1-X2-X3-S-X4-X5-X6-X7-Y-L-X8，其中X1是I或I的保守取代(例如，L)，X2是V或V的保守取代(例如，L)，X3是Y或Y的保守取代(例如，H)，X4是N或任何其它氨基酸(例如，G、S或K)，X5是G或任何其它氨基酸(例如，A或Y)，X6是N或任何其它氨基酸(例如，Q或Y)，X7是T或任何其它氨基酸(例如，N)，并且X8是G或任何其它氨基酸(例如，D)(SEQ ID NO:45)；
(e)LCDR2包括氨基酸序列K-X1-S-N-R-X2-S，其中X1是V或任何其它氨基酸(例如，G)，并且X2是F或任何其它氨基酸(例如，A或S)(SEQ ID NO:46)；并且
(f)LCDR3包括氨基酸序列X1-Q-X2-X3-X4-X5-P-Y-X6，其中X1是F或任何其它氨基酸(例如，L或M)，X2是G或任何其它氨基酸(例如，A)，X3是S或任何其它氨基酸(例如，T、L或M)，X4是H或任何其它氨基酸(例如，Q或R)，X5是V或任何其它氨基酸(例如，I或T)，并且X6是T或任何其它氨基酸(例如，I)(SEQ ID NO:47)。
在一些方面中，本文公开了一种抗CD47抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，所述VH区以从氨基端到羧基端的顺序包括FR1-HCDR1-FR2-HCDR2-FR3-HCDR3-FR4，所述VL区以从氨基端到羧基端的顺序包括FR1-LCDR1-FR2-LCDR2-FR3-LCDR3-FR4，其中HCDR1是SEQ ID NO:42，HCDR2是SEQ ID NO:75，HCDR3是SEQ ID NO:44，LCDR1是SEQ ID NO:45，LCDR2是SEQ ID NO:46并且LCDR3是SEQ ID NO:47，其中重链FR1、FR2、FR3和FR4氨基酸序列是SEQ ID NO:141中的重链FR1、FR2、FR3和FR4氨基酸序列(参见表2)，并且其中轻链FR1、FR2、FR3和FR4氨基酸序列是SEQ ID NO:144中的轻链FR1、FR2、FR3和FR4氨基酸序列(参见表2)。
如本文详述的，本发明的发明人首次成功使用源自WO 2011143624A2、US20130142786A1中公开的鼠抗CD47抗体5F9G4的CDR序列产生了许多经过优化的抗CD47抗体分子。在本发明的实施例中，已经选择对人CD47和食蟹猴CD47两者都具有结合特异性的这些抗体分子(以促进在合适的动物测试物种中的体内研究)。对如本文所描述的经过优化的抗体分子的进一步细化提高了可变结构域稳定性、提高了表达产量和/或降低了免疫原性。
本发明的优选的经过优化的抗CD47抗体分子在对应的鼠CDR或其它(如骨架)氨基酸位置处不必具有最大数量的人种系取代。如下文实验部分所详述的，发现就抗CD47结合特性和/或其它期望特征而言，“最大程度人源化的”抗体分子不一定是“最大程度优化的”。
本发明涵盖对本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分的氨基酸序列的修饰。例如，本发明包含抗体分子和其对应的抗原结合部分，所述抗原结合部分包括不会显著影响其性质的功能等同的可变区和CDR，并且还包含活性和/或亲和力增强或降低的变体。例如，可以使氨基酸序列突变以获得对CD47具有期望结合亲和力的抗体。设想了包含长度范围为一个残基到含有一百个或更多个残基的多肽的氨基和/或羧基端融合物的插入物，以及由单个或多个氨基酸残基构成的序列内插入物。末端插入物的实例包含具有N端甲硫氨酰基残基的抗体分子或与表位标签融合的抗体分子。抗体分子的其它插入变体包含与酶或多肽的抗体的N端或C端连接的融合物，所述融合物增加抗体在血液循环中的半衰期。
本发明的抗体分子或抗原结合部分可以包含经过糖基化的多肽和未经糖基化的多肽以及具有其它转译后修饰(例如用不同的糖进行的糖基化、乙酰化和磷酸化)的多肽。可以例如通过添加、去除或替代一个或多个氨基酸残基以形成或去除糖基化位点来使本发明的抗体分子或抗原结合部分突变，以改变这种转译后修饰。
可以例如通过氨基酸取代来修饰本发明的抗体分子或抗原结合部分，以去除抗体中的潜在蛋白水解位点。
在抗体分子或其抗原结合部分中，HCDR1可以具有以下氨基酸序列：G-Y-T/S-F-T-N/S/D-Y-N/S/A-M/I-H/G(SEQ ID NO:76)；HCDR2可以具有以下氨基酸序列：M/I/V-G/A/S-T/I-I-Y-P-G-N/D-D/S-D/N-T-S/K/R-Y-N/S/H-Q/P/H-K/S-F-K/Q-D/G(SEQ ID NO:77)；并且HCDR3可以具有以下氨基酸序列：G/Q-G-Y/A/C/D/E/F/G/H/I/K/L/M/N/Q/R/S/T/V/W-R-A/I/T/V/W-M/A/E/K/L/P/Q/R/S/T/V/W-D-Y(SEQ ID NO:78)。
例如，HCDR1可以具有以下氨基酸序列：G-Y-T/S-F-T-N/D-Y-N/A-M/I-H(SEQ IDNO:79)；HCDR2可以具有以下氨基酸序列：M-G-T-I-Y-P-G-N/D-D/S-D/N-T-S/K/R-Y-N/S-Q/P/H-K/S-F-Q-G(SEQ ID NO:80)；并且HCDR3可以具有以下氨基酸序列：G-G-Y/E/F/I/K//N/V-R-A-M/E/Q-D-Y(SEQ ID NO:81)。
在抗体分子或其抗原结合部分中，LCDR1可以具有以下氨基酸序列：R-S-S-Q-S-L-V/L-Y/H-S-N/G/S/K-G/A/Y-N/Y-T/N-Y-L-G/D(SEQ ID NO:82)；LCDR2可以具有以下氨基酸序列：K-G-S-N-R-F/A-S(SEQ ID NO:83)；并且LCDR3可以具有以下氨基酸序列：F/M-Q-G/A-S-H/Q-V-P-Y-T/I(SEQ ID NO:84)。
例如，LCDR1可以具有以下氨基酸序列：R-S-S-Q-S-L-L-H-S-N/K-G/A/Y-N/Q/Y-T/N-Y-L-G(SEQ ID NO:85)；LCDR2可以具有以下氨基酸序列：K-V/G-S-N-R-F/A/S-S(SEQ IDNO:86)；并且LCDR3可以具有以下氨基酸序列：F/L/M-Q-G/A-S/T/L/M-H/Q/R-V/I/T-P-Y-T/I(SEQ ID NO:87)。
在本发明的特定实施例中，抗体分子或抗原结合部分可以包括：
(a)氨基酸序列GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48；HCDR1)、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQID NO:49；HCDR2)、GGFRAMDY(SEQ ID NO:50；HCDR3)、RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、FQASHVPYT(SEQ ID NO:53；LCDR3)[克隆VH1.8/VL1.1]；或者
(b)氨基酸序列GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48；HCDR1)、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQID NO:49；HCDR2)、GGFRAMDY(SEQ ID NO:50；HCDR3)、RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、FQASQVPYT(SEQ ID NO:54；LCDR3)[克隆VH1.8/VL1.2]；或者
(c)氨基酸序列GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48；HCDR1)、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQID NO:49；HCDR2)、GGFRAMDY(SEQ ID NO:50；HCDR3)、RSSQSLLHSNANTYLG(SEQ ID NO:55；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、FQASQVPYT(SEQ ID NO:54；LCDR3)[克隆VH1.8/VL1.3]；或者
(d)氨基酸序列GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48；HCDR1)、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQID NO:49；HCDR2)、GGFRAMDY(SEQ ID NO:50；HCDR3)、RSSQSLLHSNAYNYLG(SEQ ID NO:56；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、FQASQVPYT(SEQ ID NO:54；LCDR3)[克隆VH1.8/VL1.4]；或者
(e)氨基酸序列GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48；HCDR1)、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQID NO:49；HCDR2)、GGFRAMDY(SEQ ID NO:50；HCDR3)、RSSQSLLHSNAYNYLG(SEQ ID NO:56；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、FQASHVPYT(SEQ ID NO:53；LCDR3)[克隆VH1.8/VL1.5]；或者
(f)氨基酸序列GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48；HCDR1)、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQID NO:49；HCDR2)、GGFRAMDY(SEQ ID NO:50；HCDR3)、RSSQSLLHSNANTYLG(SEQ ID NO:55；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、FQASHVPYT(SEQ ID NO:53；LCDR3)[克隆VH1.8/VL1.6]；或者
(g)氨基酸序列GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48；HCDR1)、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQID NO:49；HCDR2)、GGYRAEDY(SEQ ID NO:59；HCDR3)、RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、FQASHVPYT(SEQ ID NO:53；LCDR3)[克隆VH1.1/VL1.1]；或者
(h)氨基酸序列GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48；HCDR1)、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQID NO:49；HCDR2)、GGYRAEDY(SEQ ID NO:59；HCDR3)、RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、FQASQVPYT(SEQ ID NO:54；LCDR3)[克隆VH1.1/VL1.2]；或者
(i)氨基酸序列GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48；HCDR1)、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQID NO:49；HCDR2)、GGYRAEDY(SEQ ID NO:59；HCDR3)、RSSQSLLHSNANTYLG(SEQ ID NO:55；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、FQASQVPYT(SEQ ID NO:54；LCDR3)[克隆VH1.1/VL1.3]；或者
(j)氨基酸序列GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48；HCDR1)、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQID NO:49；HCDR2)、GGYRAEDY(SEQ ID NO:59；HCDR3)、RSSQSLLHSNANTYLG(SEQ ID NO:55；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、FQASHVPYT(SEQ ID NO:53；LCDR3)[克隆VH1.1/VL1.6]；或者
(k)氨基酸序列GYTFTDYNMH(SEQ ID NO:88；HCDR1)、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQID NO:49；HCDR2)、GGFRAMDY(SEQ ID NO:50；HCDR3)、RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、FQASHVPYT(SEQ ID NO:53；LCDR3)[克隆VH1.5/VL1.1]；或者
(l)氨基酸序列GYTFTNYNIH(SEQ ID NO:89；HCDR1)、MGTIYPGNDDTSYSQKFQG(SEQID NO:90；HCDR2)、GGFRAMDY(SEQ ID NO:50；HCDR3)、RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、FQASHVPYT(SEQ ID NO:53；LCDR3)[克隆VH1.7/VL1.1]；或者
(m)氨基酸序列GYTFTNYNIH(SEQ ID NO:89；HCDR1)、MGTIYPGNDDTSYSQKFQG(SEQID NO:90；HCDR2)、GGFRAMDY(SEQ ID NO:50；HCDR3)、RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、FQASQVPYT(SEQ ID NO:54；LCDR3)[克隆VH1.7/VL1.2]；或者
(n)氨基酸序列GYTFTNYNIH(SEQ ID NO:89；HCDR1)、MGTIYPGNDDTSYSQKFQG(SEQID NO:90；HCDR2)、GGFRAMDY(SEQ ID NO:50；HCDR3)、RSSQSLLHSNANTYLG(SEQ ID NO:55；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、FQASQVPYT(SEQ ID NO:54；LCDR3)[克隆VH1.7/VL1.3]；或者
(o)氨基酸序列GYTFTNYNIH(SEQ ID NO:89；HCDR1)、MGTIYPGNDDTSYSQKFQG(SEQID NO:90；HCDR2)、GGFRAMDY(SEQ ID NO:50；HCDR3)、RSSQSLLHSNAYNYLG(SEQ ID NO:56；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、FQASHVPYT(SEQ ID NO:53；LCDR3)[克隆VH1.7/VL1.5]；或者
(p)氨基酸序列GYTFTNYNIH(SEQ ID NO:89；HCDR1)、MGTIYPGNDDTSYSQKFQG(SEQID NO:90；HCDR2)、GGFRAMDY(SEQ ID NO:50；HCDR3)、RSSQSLLHSNANTYLG(SEQ ID NO:55；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、FQASHVPYT(SEQ ID NO:53；LCDR3)[克隆VH1.7/VL1.6]；或者
(q)氨基酸序列GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48；HCDR1)、MGTIYPGNDDTSYSQKFQG(SEQID NO:90；HCDR2)、GGYRAEDY(SEQ ID NO:59；HCDR3)、RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、FQASHVPYT(SEQ ID NO:53；LCDR3)[克隆VH1.6/VL1.1]；或者
(r)氨基酸序列GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48；HCDR1)、MGTIYPGNDDTSYSQKFQG(SEQID NO:90；HCDR2)、GGYRAEDY(SEQ ID NO:59；HCDR3)、RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、FQASQVPYT(SEQ ID NO:54；LCDR3)[克隆VH1.6/VL1.2]；或者
(s)氨基酸序列GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48；HCDR1)、MGTIYPGNDDTSYSQKFQG(SEQID NO:90；HCDR2)、GGYRAEDY(SEQ ID NO:59；HCDR3)、RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、FQASHVPYT(SEQ ID NO:53；LCDR3)[克隆VH1.9/VL1.1]；或者
(t)氨基酸序列GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48；HCDR1)、MGTIYPGNDDTKYSQKFQG(SEQID NO:91；HCDR2)、GGYRAEDY(SEQ ID NO:59；HCDR3)、RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、FQASQVPYT(SEQ ID NO:54；LCDR3)[克隆VH1.9/VL1.2]；或者
(u)氨基酸序列GYSFTNYNIH(SEQ ID NO:57；HCDR1)、MGTIYPGNSDTSYNPSFQG(SEQID NO:61；HCDR2)、GGVRAMDY(SEQ ID NO:62；HCDR3)、RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、MQASQVPYT(SEQ ID NO:63；LCDR3)[克隆D6]；或者
(v)氨基酸序列GYSFTNYNIH(SEQ ID NO:57；HCDR1)、MGTIYPGNSDTSYNPKFQG(SEQID NO:92；HCDR2)、GGKRAMDY(SEQ ID NO:93；HCDR3)、RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、MQASQVPYT(SEQ ID NO:63；LCDR3)[克隆F-E5]；或者
(w)氨基酸序列GYSFTNYNIH(SEQ ID NO:57；HCDR1)、MGTIYPGDSDTSYNPKFQG(SEQID NO:94；HCDR2)、GGYRAQDY(SEQ ID NO:95；HCDR3)、RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、MQASHVPYT(SEQ ID NO:96；LCDR3)[克隆E-C5]；或者
(x)氨基酸序列GYSFTNYNIH(SEQ ID NO:57；HCDR1)、MGTIYPGDSDTSYNPKFQG(SEQID NO:94；HCDR2)、GGYRAEDY(SEQ ID NO:59；HCDR3)、RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、MQGSHVPYT(SEQ ID NO:97；LCDR3)[克隆E-D6]；或者
(y)氨基酸序列GYSFTNYNIH(SEQ ID NO:57；HCDR1)、MGTIYPGDSDTRYNQKFQG(SEQID NO:98；HCDR2)、GGIRAMDY(SEQ ID NO:99；HCDR3)、RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、FQGSHVPYI(SEQ ID NO:100；LCDR3)[克隆B-A6]；或者
(z)氨基酸序列GYSFTNYNIH(SEQ ID NO:57；HCDR1)、MGTIYPGNSDTRYNPKFQG(SEQID NO:101；HCDR2)、GGFRAMDY(SEQ ID NO:50；HCDR3)、RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、MQGSHVPYT(SEQ ID NO:97；LCDR3)[克隆D-C12]；或者
(zi)氨基酸序列GYSFTNYNIH(SEQ ID NO:57；HCDR1)、MGTIYPGDSDTRYNPKFQG(SEQID NO:58；HCDR2)、GGYRAEDY(SEQ ID NO:59；HCDR3)、RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51；LCDR1)、KGSNRFS(SEQ ID NO:52；LCDR2)、MQGSHVPYT(SEQ ID NO:97；LCDR3)[克隆E-A1]。
在一些方面中，本文公开了一种抗CD47抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，其中
(a)VH区氨基酸序列包括GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48)的HCDR1、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQ ID NO:49)的HCDR2和GGFRAMDY(SEQ ID NO:50)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNANTYLG(SEQ ID NO:55)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和FQASHVPYT(SEQ ID NO:53)的LCDR3；
(b)VH区氨基酸序列包括GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48)的HCDR1、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQ ID NO:49)的HCDR2和GGFRAMDY(SEQ ID NO:50)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和FQASHVPYT(SEQ ID NO:53)的LCDR3；
(c)VH区氨基酸序列包括GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48)的HCDR1、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQ ID NO:49)的HCDR2和GGFRAMDY(SEQ ID NO:50)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNAYNYLG(SEQ ID NO:56)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和FQASHVPYT(SEQ ID NO:53)的LCDR3；
(d)VH区氨基酸序列包括GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48)的HCDR1、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQ ID NO:49)的HCDR2和GGFRAMDY(SEQ ID NO:50)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNAYNYLG(SEQ ID NO:56)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和FQASQVPYT(SEQ ID NO:54)的LCDR3；
(e)VH区氨基酸序列包括GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48)的HCDR1、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQ ID NO:49)的HCDR2和GGFRAMDY(SEQ ID NO:50)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNANTYLG(SEQ ID NO:55)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和FQASQVPYT(SEQ ID NO:54)的LCDR3；
(f)VH区氨基酸序列包括GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48)的HCDR1、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQ ID NO:49)的HCDR2和GGFRAMDY(SEQ ID NO:50)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和FQASQVPYT(SEQ ID NO:54)的LCDR3；
(g)VH区氨基酸序列包括GYSFTNYNIH(SEQ ID NO:57)的HCDR1、MGTIYPGNSDTSYNPSFQG(SEQ ID NO:61)的HCDR2和GGVRAMDY(SEQ ID NO:62)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和MQASQVPYT(SEQ ID NO:63)的LCDR3；或者
(h)VH区氨基酸序列包括GYSFTNYNIH(SEQ ID NO:57)的HCDR1、MGTIYPGDSDTRYNPKFQG(SEQ ID NO:58)的HCDR2和GGYRAEDY(SEQ ID NO:59)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和MQGSHVPY(SEQ ID NO:60)的LCDR3。
在一些方面中，本文公开了一种抗CD47抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，其中所述VH区包括表7中的VH区氨基酸序列中的任一个VH区氨基酸序列，并且所述VL区包括表7中的VL区氨基酸序列中的任一个VL区氨基酸序列。
在一些方面中，本文公开了一种抗CD47抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，其中
(a)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:1，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:2；
(b)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:3，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:4；
(c)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:5，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:6；
(d)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:7，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:8；
(e)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:9，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:10；
(f)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:11，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:12；
(g)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:13，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:14；或者
(h)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:15，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:16。
在一些方面中，本文公开了一种抗CD47抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，其中
(a)VH区氨基酸序列与SEQ ID NO:1至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同，并且VL区氨基酸序列与SEQ ID NO:2至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同；
(b)VH区氨基酸序列与SEQ ID NO:3至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同，并且VL区氨基酸序列与SEQ ID NO:4至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同；
(c)VH区氨基酸序列与SEQ ID NO:5至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同，并且VL区氨基酸序列与SEQ ID NO:6至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同；
(d)VH区氨基酸序列与SEQ ID NO:7至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同，并且VL区氨基酸序列与SEQ ID NO:8至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同；
(e)VH区氨基酸序列与SEQ ID NO:9至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同，并且VL区氨基酸序列与SEQ ID NO:10至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同；
(f)VH区氨基酸序列与SEQ ID NO:11至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同，并且VL区氨基酸序列与SEQ ID NO:12至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同；
(g)VH区氨基酸序列与SEQ ID NO:13至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同，并且VL区氨基酸序列与SEQ ID NO:14至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同；或者
(h)VH区氨基酸序列与SEQ ID NO:15至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同，并且VL区氨基酸序列与SEQ ID NO:16至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同。
在一些方面中，抗CD47抗体的CDR氨基酸序列与所列举序列中的CDR氨基酸序列100％相同，而FR氨基酸序列与所列举序列中的FR氨基酸序列小于100％相同。
在一些方面中，可以分离如本文所定义的抗体或抗原结合部分。
如本文所定义的抗体分子或抗原结合部分可以与包括本文所公开的CDR组的抗体或其抗原结合部分交叉竞争与CD47结合。在一些实施例中，本发明提供了一种分离的抗CD47抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或抗原结合部分与包括本文所公开的CDR组的抗体或抗原结合部分交叉竞争与CD47结合；并且(a)包括完全种系人骨架氨基酸序列；和/或(b)在LCDR1中不包括“NG”高风险脱酰胺化位点；(c)在LCDR1中不包括“NT”脱酰胺化位点；和/或(d)在HCDR1和/或HCDR2中包括具有高MHC II类结合亲和力的人种系肽序列；和/或(e)在LCDR1中不包括人T细胞表位序列；和/或(f)在HCDR1中或在VH结构域的HCDR1/骨架2区中不包括人T细胞表位序列。在一些实施例中，在HCDR2中具有高MHC II类结合亲和力的人种系肽序列是FQGQVTISA(SEQ ID NO:102)或FQGRVTITA(SEQ ID NO:103)。
术语“交叉竞争(cross-compete或cross-competition)”和“交叉阻断(cross-block、cross-blocked或cross-blocking)”在本文中可互换地用于意指抗体或其部分直接或通过变构调节间接干扰本发明的抗CD47抗体与靶CD47(例如，人CD47)结合的能力。可以使用竞争结合测定来确定抗体或其部分能够干扰另一种抗体与靶标结合的程度，并且因此确定是否可以将其说成是根据本发明进行交叉阻断或交叉竞争。结合竞争测定的一个实例是均相时间分辨荧光(HTRF)。一种特别合适的定量交叉竞争测定使用基于FACS或AlphaScreen的方法来测量经过标记的(例如，经过His标记的、经过生物素化的或经过放射性标记的)抗体或其部分和另一种抗体或其部分在其与靶标结合方面之间的竞争。通常，交叉竞争性抗体或其部分是例如这样的抗体或其部分：在交叉竞争测定中将与靶标结合，使得在测定期间并且在存在第二抗体或其部分的情况下，根据本发明的免疫球蛋白单个可变结构域或多肽的所记录替代高达以给定量存在的潜在交叉阻断性抗体或其片段进行的最大理论替代(例如，需要被交叉阻断的冷(例如，未经标记的)抗体或其片段进行的替代)的100％(例如，在基于FACS的竞争测定中)。优选地，交叉竞争性抗体或其部分的所记录替代介于10％与100％之间或介于50％与100％之间。
如本文所定义的抗体分子或抗原结合部分可以包括去除转译后修饰(PTM)位点(例如，糖基化位点(N连接的或O连接的)、脱氨位点、磷酸化位点或异构化/片段化位点)的一种或多种取代、缺失和/或插入。
已知超过350种PTM。PTM的关键形式包含(K和R残基的)磷酸化、糖基化(N连接的和O连接的)、sumo化(sumoylation)、棕榈酰化、乙酰化、硫酸盐化、豆蔻酰化、异戊烯化和甲基化。用于鉴定负责特定PTM的推定的氨基酸位点的统计方法在本领域中是众所周知的(参见Zhou等人,2016,《自然-实验室指南(Nature Protocols)》1:1318-1321)。设想了例如通过取代、缺失和/或插入来去除此类位点，然后任选地(实验上和/或理论上)测试(a)结合活性和/或(b)PTM的丧失。
例如，已经鉴定了5F9G4鼠LCDR1(如本文所定义，即，氨基酸序列RSSQSIVYSNGNTYLG(SEQ ID NO:39))在残基10和11(NG)处具有推定的“高风险”脱酰胺化基序。设想了例如通过取代残基10(如取代为G、S或K)来去除本发明的LCDR1中的等效位置处的此位点(如例如在表3中的多个克隆中)。还设想了例如通过取代残基11(如取代为A或Y)来去除本发明的LCDR1中的等效位置处的此位点(如例如在表3和4中存在的含有VL1.4 v结构域序列的克隆和多个其它克隆中)。
在另外一个实例中，已经鉴定了5F9G4鼠LCDR1(如本文所定义，即，氨基酸序列RSSQSIVYSNGNTYLG(SEQ ID NO:39))在残基12和13(NT)处具有推定的“高风险”脱酰胺化基序。设想了例如通过取代残基12(如取代为Q、Y)来去除本发明的LCDR1中的等效位置处的此风险位点(如例如在表3和4中存在的含有VL1.4 v结构域序列的克隆和多个其它克隆中)。
抗体分子或其抗原结合部分可以是人的、人源化的或嵌合的。
抗体分子或其抗原结合部分可以包括已经插入有CDR的一个或多个人可变结构域骨架支架。例如，VH区、VL区或VH区和VL区两者可以包括一个或多个人骨架区氨基酸序列。
抗体分子或其抗原结合部分可以包括已经插入有对应的HCDR序列的IGHV5-51人种系支架。抗体分子或其抗原结合部分可以包括VH区，所述VH区包括已经插入有一组对应的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列的IGHV5-51人种系支架氨基酸序列。
抗体分子或其抗原结合部分可以包括已经插入有对应的HCDR序列的IGHV1-3人种系支架。抗体分子或其抗原结合部分可以包括VH区，所述VH区包括已经插入有一组对应的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列的IGHV1-3人种系支架氨基酸序列。
抗体分子或其抗原结合部分可以包括已经插入有对应的LCDR序列的IGKV2-28人种系支架。抗体分子或其抗原结合部分可以包括VL区，所述VL区包括已经插入有一组对应的LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列的IGKV2-28人种系支架氨基酸序列。
抗体分子或其抗原结合部分可以包括已经插入有对应的HCDR序列的IGHV5-51人种系支架和已经插入有对应的LCDR序列的IGKV2-28人种系支架。抗体分子或其抗原结合部分可以包括VH区和VL区，所述VH区包括已经插入有一组对应的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列的IGHV5-51人种系支架氨基酸序列，所述VL区包括已经插入有一组对应的LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列的IGKV2-28人种系支架氨基酸序列。HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列可以是表4中的克隆中的任一个克隆的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列。在一些实施例中，所有六个CDR序列均来自表4中的同一克隆。在一些实施例中，HCDR1、HCDR2和HCDR3序列来自表4中的第一克隆，并且LCDR1、LCDR2和LCDR3序列来自表4中的第二克隆。
抗体分子或其抗原结合部分可以包括已经插入有对应的HCDR序列的IGHV1-3人种系支架和已经插入有对应的LCDR序列的IGKV2-28人种系支架。抗体分子或其抗原结合部分可以包括VH区和VL区，所述VH区包括已经插入有一组对应的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列的IGHV1-3人种系支架氨基酸序列，所述VL区包括已经插入有一组对应的LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列的IGKV2-28人种系支架氨基酸序列。HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列可以是表4中的克隆中的任一个克隆的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列。在一些实施例中，所有六个CDR序列均来自表4中的同一克隆。在一些实施例中，HCDR1、HCDR2和HCDR3序列来自表4中的第一克隆，并且LCDR1、LCDR2和LCDR3序列来自表4中的第二克隆。
在一些方面中，抗体分子或其抗原结合部分可以包括免疫球蛋白恒定区。在一些实施例中，所述免疫球蛋白恒定区是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1或IgA2。在另外的实施例中，所述免疫球蛋白恒定区是IgG1、IgG2、IgG3、IgG1无效、IgG4(S228P)、IgA1或IgA2。所述抗体分子或其抗原结合部分可以包括免疫惰性的恒定区。在一些方面中，抗CD47抗体或其抗原结合部分可以包括免疫球蛋白恒定区，所述免疫球蛋白恒定区包括野生型人IgG1恒定区、包括氨基酸取代L234A、L235A和G237A的人IgG1恒定区或包括氨基酸取代L234A、L235A、G237A和P331S的人IgG1恒定区。在一些方面中，抗CD47抗体或其抗原结合部分可以包括免疫球蛋白恒定区，所述免疫球蛋白恒定区包括野生型人IgG2恒定区或野生型人IgG4恒定区。在一些方面中，抗CD47抗体可以包括免疫球蛋白恒定区，所述免疫球蛋白恒定区包括表8中的氨基酸序列中的任一个氨基酸序列。表8中的Fc区序列开始于CH1结构域。在一些方面中，抗CD47抗体可以包括免疫球蛋白恒定区，所述免疫球蛋白恒定区包括人IgG4、人IgG4(S228P)、人IgG2、人IgG1、人IgG1-3M或人IgG1-4M的Fc区的氨基酸序列。例如，与野生型人IgG4 Fc区相比，人IgG4(S228P)Fc区包括以下取代：S228P。例如，与野生型人IgG1 Fc区相比，人IgG1-3M Fc区包括以下取代：L234A、L235A和G237A，而与野生型人IgG1 Fc区相比，人IgG1-4M Fc区包括以下取代：L234A、L235A、G237A和P331S。在一些方面中，免疫球蛋白分子的恒定区中的氨基酸残基的位置是根据EU命名法进行编号的(Ward等人,1995《免疫疗法(Therap.Immunol.)》,2:77-94)。在一些方面中，免疫球蛋白恒定区可以包括RDELT(SEQ IDNO:26)基序或REEM(SEQ ID NO:27)基序(在表8中加下划线)。在小于RDELT(SEQ ID NO:26)同种异型的人群体中存在REEM(SEQ ID NO:27)同种异型。在一些方面中，抗CD47抗体可以包括免疫球蛋白恒定区，所述免疫球蛋白恒定区包括SEQ ID NO:17-23中的任一个。在一些方面中，抗CD47抗体可以包括表4中的克隆中的任一个克隆的六个CDR氨基酸序列和表8中的Fc区氨基酸序列中的任一个Fc区氨基酸序列。在一些方面中，抗CD47抗体可以包括免疫球蛋白重链恒定区和免疫球蛋白轻链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包括表8中的Fc区氨基酸序列中的任一个Fc区氨基酸序列，所述免疫球蛋白轻链恒定区是κ轻链恒定区或λ轻链恒定区。
在一些方面中，本文公开了一种抗CD47抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区、轻链可变(VL)区以及重链恒定区，其中
(a)VH区氨基酸序列包括GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48)的HCDR1、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQ ID NO:49)的HCDR2和GGFRAMDY(SEQ ID NO:50)的HCDR3；VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNANTYLG(SEQ ID NO:55)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和FQASHVPYT(SEQ ID NO:53)的LCDR3；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:17-23中的任一个；
(b)VH区氨基酸序列包括GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48)的HCDR1、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQ ID NO:49)的HCDR2和GGFRAMDY(SEQ ID NO:50)的HCDR3；VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和FQASHVPYT(SEQ ID NO:53)的LCDR3；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:17-23中的任一个；
(c)VH区氨基酸序列包括GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48)的HCDR1、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQ ID NO:49)的HCDR2和GGFRAMDY(SEQ ID NO:50)的HCDR3；VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNAYNYLG(SEQ ID NO:56)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和FQASHVPYT(SEQ ID NO:53)的LCDR3；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:17-23中的任一个；
(d)VH区氨基酸序列包括GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48)的HCDR1、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQ ID NO:49)的HCDR2和GGFRAMDY(SEQ ID NO:50)的HCDR3；VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNAYNYLG(SEQ ID NO:56)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和FQASQVPYT(SEQ ID NO:54)的LCDR3；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:17-23中的任一个；
(e)VH区氨基酸序列包括GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48)的HCDR1、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQ ID NO:49)的HCDR2和GGFRAMDY(SEQ ID NO:50)的HCDR3；VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNANTYLG(SEQ ID NO:55)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和FQASQVPYT(SEQ ID NO:54)的LCDR3；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:17-23中的任一个；
(f)VH区氨基酸序列包括GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48)的HCDR1、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQ ID NO:49)的HCDR2和GGFRAMDY(SEQ ID NO:50)的HCDR3；VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和FQASQVPYT(SEQ ID NO:54)的LCDR3；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:17-23中的任一个；
(g)VH区氨基酸序列包括GYSFTNYNIH(SEQ ID NO:57)的HCDR1、MGTIYPGNSDTSYNPSFQG(SEQ ID NO:61)的HCDR2和GGVRAMDY(SEQ ID NO:62)的HCDR3；VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和MQASQVPYT(SEQ ID NO:63)的LCDR3；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:17-23中的任一个；或者
(h)VH区氨基酸序列包括GYSFTNYNIH(SEQ ID NO:57)的HCDR1、MGTIYPGDSDTRYNPKFQG(SEQ ID NO:58)的HCDR2和GGYRAEDY(SEQ ID NO:59)的HCDR3；VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和MQGSHVPY(SEQ ID NO:60)的LCDR3；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:17-23中的任一个。
在一些方面中，本文公开了一种抗CD47抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区、轻链可变(VL)区以及重链恒定区，其中
a)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:1或由其组成；VL区氨基酸序列包括SEQ IDNO:2或由其组成；并且所述重链恒定区包括野生型人IgG4恒定区、包括氨基酸取代S228P的人IgG4恒定区、野生型人IgG2恒定区；野生型人IgG1恒定区或包括氨基酸取代L234A、L235A和G237A的人IgG1恒定区；
(b)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:3或由其组成；VL区氨基酸序列包括SEQ IDNO:4或由其组成；并且所述重链恒定区包括野生型人IgG4恒定区、包括氨基酸取代S228P的人IgG4恒定区、野生型人IgG2恒定区；野生型人IgG1恒定区或包括氨基酸取代L234A、L235A和G237A的人IgG1恒定区；
(c)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:5或由其组成；VL区氨基酸序列包括SEQ IDNO:6或由其组成；并且所述重链恒定区包括野生型人IgG4恒定区、包括氨基酸取代S228P的人IgG4恒定区、野生型人IgG2恒定区；野生型人IgG1恒定区或包括氨基酸取代L234A、L235A和G237A的人IgG1恒定区；
(d)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:7或由其组成；VL区氨基酸序列包括SEQ IDNO:8或由其组成；并且所述重链恒定区包括野生型人IgG4恒定区、包括氨基酸取代S228P的人IgG4恒定区、野生型人IgG2恒定区；野生型人IgG1恒定区或包括氨基酸取代L234A、L235A和G237A的人IgG1恒定区；
(e)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:9或由其组成；VL区氨基酸序列包括SEQ IDNO:10或由其组成；并且所述重链恒定区包括野生型人IgG4恒定区、包括氨基酸取代S228P的人IgG4恒定区、野生型人IgG2恒定区；野生型人IgG1恒定区或包括氨基酸取代L234A、L235A和G237A的人IgG1恒定区；
(f)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:11或由其组成；VL区氨基酸序列包括SEQ IDNO:12或由其组成；并且所述重链恒定区包括野生型人IgG4恒定区、包括氨基酸取代S228P的人IgG4恒定区、野生型人IgG2恒定区；野生型人IgG1恒定区或包括氨基酸取代L234A、L235A和G237A的人IgG1恒定区；
(g)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:13或由其组成；VL区氨基酸序列包括SEQ IDNO:14或由其组成；并且所述重链恒定区包括野生型人IgG4恒定区、包括氨基酸取代S228P的人IgG4恒定区、野生型人IgG2恒定区；野生型人IgG1恒定区或包括氨基酸取代L234A、L235A和G237A的人IgG1恒定区；或者
(h)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:15或由其组成；VL区氨基酸序列包括SEQ IDNO:16或由其组成；并且所述重链恒定区包括野生型人IgG4恒定区、包括氨基酸取代S228P的人IgG4恒定区、野生型人IgG2恒定区；野生型人IgG1恒定区或包括氨基酸取代L234A、L235A和G237A的人IgG1恒定区。
在一些方面中，本文公开了一种抗CD47抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区、轻链可变(VL)区以及重链恒定区，其中
a)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:1或由其组成；VL区氨基酸序列包括SEQ IDNO:2或由其组成；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:17-23中的任一个；
(b)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:3或由其组成；VL区氨基酸序列包括SEQ IDNO:4或由其组成；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:17-23中的任一个；
(c)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:5或由其组成；VL区氨基酸序列包括SEQ IDNO:6或由其组成；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:17-23中的任一个；
(d)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:7或由其组成；VL区氨基酸序列包括SEQ IDNO:8或由其组成；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:17-23中的任一个；
(e)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:9或由其组成；VL区氨基酸序列包括SEQ IDNO:10或由其组成；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:17-23中的任一个；
(f)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:11或由其组成；VL区氨基酸序列包括SEQ IDNO:12或由其组成；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:17-23中的任一个；
(g)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:13或由其组成；VL区氨基酸序列包括SEQ IDNO:14或由其组成；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:17-23中的任一个；或者
(h)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:15或由其组成；VL区氨基酸序列包括SEQ IDNO:16或由其组成；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:17-23中的任一个。
在一些方面中，抗CD47抗体可以是免疫效应子无效的。在一些方面中，抗CD47抗体或其抗原结合部分不诱导免疫效应子功能，并且任选地抑制免疫效应子功能。在一些方面中，抗CD47抗体可以缺乏与人FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIIa和FcγRIIIb受体的可测量结合，但是维持与人FcγRIIb受体的结合，并且任选地维持与人FcRn受体的结合。FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIIa和FcγRIIIb是活化性受体的实例。FcγRIIb是抑制性受体的实例。FcRn是再循环性受体的实例。在一些方面中，可以通过分析来测量抗CD47抗体或其抗原结合部分对人Fc受体的结合亲和力。在一些方面中，可以使用均相时间分辨荧光(HTRF)来研究抗CD47抗体与人Fc受体的结合。在HTRF的一个实例中，对作为全套Fcγ受体的人IgG1(野生型)进行标记，然后在滴定竞争中使用具有经过工程化的Fc片段的抗体。在一些方面中，可以将CD47阳性细胞与人白细胞和抗CD47抗体混合，并且可以测量CDC、ADCC和/或ADCP引起的细胞杀伤。在一些方面中，包括人IgG1-3M的Fc区的氨基酸序列(参见表8)的抗CD47抗体是效应子无效的。在一些方面中，包括人IgG1-3M的Fc区的氨基酸序列(参见表8)的抗CD47抗体不是效应子无效的。
抗体分子或其抗原结合部分可以是Fab片段、F(ab)2片段、Fv片段、scFv(单链Fv)片段、四聚体抗体、四价抗体、多特异性抗体(例如，双特异性抗体)、结构域特异性抗体、单结构域抗体、单克隆抗体或融合蛋白。在一个实施例中，抗体可以是与第一抗原和第二抗原特异性结合的双特异性抗体，其中所述第一抗原是CD47并且所述第二抗原不是CD47。在例如Holliger和Hudson(2005,《自然生物技术(Nature Biotechnol.)》23(9):1126-1136)中描述了抗体分子和其构建和使用方法。
在一些方面中，本发明提供了重链可变(VH)区序列和轻链可变(VL)区序列，与呈IgG形式相比，所述序列在呈单链Fv(scFv)形式时更有效地中和CD47-SIRPα相互作用。在一些实施例中，此类分子的VH区位于IGHV5-51骨架中。在一些实施例中，本发明涵盖包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区的单链Fv(scFv)，其中(a)HCDR1包括G-Y-T-F-T-X1-Y-X2-X3-X4，其中X1是N或N的保守取代，X2是N或任何其它氨基酸，X3是M或M的保守取代，并且X4是H或任何其它氨基酸(SEQ ID NO:104)；(b)HCDR2包括M-G-X1-I-Y-P-G-X2-X3-X4-T-X5-Y-X6-X7-X8-F-Q-G，其中X1是T或任何其它氨基酸，X2是N或N的保守取代，X3是D或任何其它氨基酸，X4是D或任何其它氨基酸，X5是S或任何其它氨基酸，X6是N或任何其它氨基酸，X7是Q或任何其它氨基酸，并且X8是K或任何其它氨基酸(SEQ ID NO:105)；(c)HCDR3包括X1-G-X2-R-X3-X4-D-Y，其中X1是G或任何其它氨基酸，X2是Y或任何其它氨基酸，X3是A或任何其它氨基酸，并且X4是M或任何其它氨基酸(SEQ ID NO:44)；(d)LCDR1包括R-S-S-Q-S-X1-X2-X3-S-X4-X5-X6-X7-Y-L-X8，其中X1是I或I的保守取代，X2是V或V的保守取代，X3是Y或Y的保守取代，X4是N或任何其它氨基酸，X5是G或任何其它氨基酸，X6是N或任何其它氨基酸，X7是T或任何其它氨基酸，并且X8是G或任何其它氨基酸(SEQ ID NO:45)；(e)LCDR2包括K-X1-S-N-R-X2-S，其中X1是V或任何其它氨基酸并且X2是F或任何其它氨基酸(SEQ ID NO:46)；并且(f)LCDR3包括X1-Q-X2-X3-X4-X5-P-Y-X6，其中X1是F或任何其它氨基酸，X2是G或任何其它氨基酸，X3是S或任何其它氨基酸，X4是H或任何其它氨基酸，X5是V或任何其它氨基酸，并且X6是T或任何其它氨基酸(SEQ ID NO:47)；并且其中所述VH区包括已经插入有HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列的IGHV5-51人种系支架氨基酸序列。在一个实施例中，本发明的scFv可以包括(a)VH氨基酸序列和(b)VH氨基酸序列，所述VH氨基酸序列包括GYSFTNYNIH(SEQ ID NO:57)的HCDR1、MGTIYPGDSDTSYNPKFQG(SEQ ID NO:94)的HCDR2和GGYRAEDY(SEQ ID NO:59)的HCDR3；并且所述VH氨基酸序列包括RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和MQGSHVPYT(SEQ ID NO:97)的LCDR3。在一些方面中，scFv以从氨基端到羧基端的顺序包括VH-VL或VL-VH。在一些方面中，scFv在VH序列与VL序列之间包括接头。在一些实施例中，scFv进一步包括免疫球蛋白恒定区或免疫球蛋白恒定区的一部分。在一些实施例中，本发明提供了包括一个或多个本文所公开的scFv的多特异性(例如，双特异性)CD47结合分子。在一些情况下，所述免疫球蛋白恒定区包括SEQ ID NO:17-23中的任一个。
在本发明的另一方面中，提供了一种免疫缀合物，所述免疫缀合物包括与治疗剂连接的如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分。
合适的治疗剂的实例包含细胞毒素、放射性同位素、化学治疗剂、免疫调节剂、抗血管生成剂、抗增殖剂、促凋亡剂、细胞生长抑制酶和细胞溶解酶(例如，RNAse)。另外的治疗剂包含治疗性核酸，如对免疫调节剂、抗血管生成剂、抗增殖剂或促凋亡剂进行编码的基因。这些药物描述语不是互相排斥的，并且因此可以使用一个或多个上述术语来描述治疗剂。
在免疫缀合物中使用的合适的治疗剂的实例包含紫杉烷(taxane)、美登素(maytansine)、CC-1065和倍癌霉素(duocarmycin)、卡利奇霉素(calicheamicin)和其它烯二炔(enediyne)以及澳瑞他汀(auristatin)。其它实例包含抗叶酸类药物(anti-folate)、长春花生物碱(vinca alkaloid)和蒽环类药物(anthracycline)。免疫缀合物中还可以使用植物毒素、其它生物活性蛋白、酶(即，ADEPT)、放射性同位素、光敏剂。另外，可以使用如脂质体或聚合物等二级载剂作为细胞毒性药剂来制备缀合物。合适的细胞毒素包含抑制或阻止细胞功能和/或引起细胞破坏的药剂。代表性细胞毒素包含抗生素、微管蛋白聚合抑制剂、与DNA结合并破坏DNA的烷基化剂以及破坏蛋白质合成或必需细胞蛋白(如蛋白激酶、磷酸酶、拓扑异构酶、酶和周期素)的功能的药剂。
代表性细胞毒素包含但不限于阿霉素(doxorubicin)、道诺霉素(daunorubicin)、伊达比星(idarubicin)、阿柔比星(aclarubicin)、佐柔比星(zorubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、表柔比星(epirubicin)、卡柔比星(carubicin)、诺加霉素(nogalamycin)、美诺立尔(menogaril)、吡柔比星(pitarubicin)、戊柔比星(valrubicin)、阿糖孢苷(cytarabine)、吉西他滨(gemcitabine)、三氟尿苷(trifluridine)、安西他滨(ancitabine)、依诺他滨(enocitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、去氧氟尿苷(doxifluhdine)、喷司他丁(pentostatin)、溴尿苷(broxuhdine)、卡培他滨(capecitabine)、克拉屈滨(cladhbine)、地西他滨(decitabine)、氟尿苷(floxuhdine)、氟达拉滨(fludarabine)、谷氏菌素(gougerotin)、嘌呤霉素(puromycin)、喃氟啶(tegafur)、噻唑呋林(tiazofuhn)、阿霉素(adhamycin)、顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、达卡巴嗪(dacarbazine)、长春花碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、米托蒽醌、博来霉素(bleomycin)、氮芥(mechlorethamine)、泼尼松(prednisone)、丙卡巴嗪(procarbazine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、氟尿嘧啶(flurouracils)、依托泊苷(etoposide)、紫杉醇(taxol)、紫杉醇类似物、铂(如顺铂和卡铂)、丝裂霉素(mitomycin)、噻替哌(thiotepa)、紫杉烷、长春新碱、道诺霉素、表柔比星、放线菌素(actinomycin)、安曲霉素(authramycin)、重氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素、他莫西芬(tamoxifen)、伊达比星、多拉司他汀(dolastatin)/澳瑞他汀、哈米特林(hemiasterlin)、埃斯培拉霉素(esperamicin)和美登醇(maytansinoid)。
合适的免疫调节剂包含阻断激素对肿瘤的作用的抗激素类药物和抑制细胞因子产生、下调自身抗原表达或使MHC抗原隐蔽的免疫抑制剂。
还提供了一种核酸分子，所述核酸分子对如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分进行编码。核酸分子可以对本文所描述的抗CD47抗体或其抗原结合部分的(a)VH区氨基酸序列；(b)VL区氨基酸序列；或(c)VH氨基酸序列和VL区氨基酸序列两者进行编码。在一些方面中，可以分离如本文所定义的核酸分子。
进一步提供了一种载体，所述载体包括如本文所定义的本发明的核酸分子。所述载体可以是表达载体。
还提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包括如本文所定义的本发明的核酸分子或载体。所述宿主细胞可以是重组宿主细胞。
在另外一方面中，提供了一种产生抗CD47抗体和/或其抗原结合部分的方法，所述方法包括：将本发明的宿主细胞在引起所述抗体和/或其抗原结合部分的表达和/或产生的条件下培养；以及从所述宿主细胞或培养物中分离所述抗体和/或抗原结合部分。
在本发明的另一方面中，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的本发明的核酸分子或如本文所定义的本发明的载体。
进一步提供了一种用于增强受试者的免疫应答的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的本发明的免疫缀合物或如本文所定义的本发明的核酸分子或如本文所定义的本发明的载体或如本文所定义的本发明的药物组合物。
在另外一方面中，提供了一种用于治疗或预防受试者的癌症的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的本发明的免疫缀合物或如本文所定义的本发明的核酸分子或如本文所定义的本发明的载体或如本文所定义的本发明的药物组合物。
例如，所述癌症可以是胃肠道间质癌(GIST)、胰腺癌、黑色素瘤、乳腺癌、肺癌、支气管癌、结肠直肠癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、膀胱癌、脑或中枢神经系统癌、周围神经系统癌、食道癌、宫颈癌、子宫或子宫内膜癌、口腔癌或咽癌、肝癌、肾癌、睾丸癌、胆道癌、小肠或阑尾癌、唾液腺癌、甲状腺癌、肾上腺癌、骨肉瘤、软骨肉瘤或血液组织癌。
本发明还提供了如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的本发明的免疫缀合物或如本文所定义的本发明的核酸分子或如本文所定义的本发明的载体或如本文所定义的本发明的药物组合物，其用于治疗癌症。
在另一方面中，本发明提供了如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分或免疫缀合物或核酸分子或载体以及治疗方法，其用于单独使用、结合第二治疗剂(例如，抗癌剂)依次或同时使用。
在另外一方面中，提供了如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的本发明的免疫缀合物或如本文所定义的本发明的核酸分子或如本文所定义的本发明的载体或如本文所定义的本发明的药物组合物在制造用于治疗癌症的药剂中的用途。
本发明还提供了一种用于治疗或预防受试者的自身免疫性疾病或炎性疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分或如此处所定义的免疫缀合物或如本文所定义的核酸分子或如本文所定义的载体或如本文所定义的药物组合物。
例如，所述自身免疫性疾病或炎性疾病可以是关节炎、哮喘、多发性硬化症、牛皮癣、克罗恩氏病、炎性肠病、狼疮、格雷夫氏病和桥本氏甲状腺炎或强直性脊柱炎。
还提供了如本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的免疫缀合物或如本文所定义的核酸分子或如本文所定义的载体或如本文所定义的药物组合物，其用于治疗自身免疫性疾病或炎性疾病。
进一步提供了如本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的免疫缀合物或如本文所定义的核酸分子或如本文所定义的载体或如本文所定义的药物组合物在制造用于治疗自身免疫性疾病或炎性疾病的药剂中的用途。
本发明还提供了一种用于治疗或预防受试者的心血管疾病或纤维化疾病的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的如本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分或如此处所定义的免疫缀合物或如本文所定义的核酸分子或如本文所定义的载体或如本文所定义的药物组合物。
还提供了如本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的免疫缀合物或如本文所定义的核酸分子或如本文所定义的载体或如本文所定义的药物组合物，其用于治疗心血管疾病或纤维化疾病。
进一步提供了如本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的免疫缀合物或如本文所定义的核酸分子或如本文所定义的载体或如本文所定义的药物组合物在制造用于治疗心血管疾病或纤维化疾病的药剂中的用途。
在本发明的任何方面中，心血管疾病可以例如是冠心病或动脉粥样硬化。
例如，在本发明的任何方面中，纤维化疾病可以是心肌梗塞、心绞痛、骨关节炎、肺纤维化、哮喘、囊性纤维化或支气管炎。
在一个实施例中，本发明提供了一种包括本文所公开的氨基酸序列的抗CD47抗体或其抗原结合部分，其用于进行治疗。
本发明的药物组合物可以包括药学上可接受的赋形剂、载剂或稀释剂。药学上可接受的赋形剂可以是进入药物组合物中的化合物或化合物组合，所述化合物或化合物组合不会引起二级反应，并且允许例如促进抗CD47抗体分子的施用、增加其寿命和/或其在体内的功效或增加其在溶液中的溶解度。这些药学上可接受的媒剂是众所周知的，并且将由本领域的技术人员根据抗CD47抗体分子的施用模式进行调整。
在一些实施例中，抗CD47抗体分子可以以冻干形式提供，以在施用前复原。例如，冻干的抗体分子可以在施用于个体之前在无菌水中复原并与盐水混合。
抗CD47抗体分子通常将以药物组合物的形式施用，所述药物组合物除了抗体分子之外还可以包括至少一种组分。因此，药物组合物除了抗CD47抗体分子之外还可以包括药学上可接受的赋形剂、载剂、缓冲剂、稳定剂或本领域的技术人员众所周知的其它材料。此类材料应是无毒的，并且不应干扰抗CD47抗体分子的功效。载剂或其它材料的确切性质将取决于施用途径，施用可以通过推注、输注、注射或任何其它合适的途径进行，如下文所讨论的。
对于例如通过注射进行的肠胃外施用，例如，皮下或静脉内施用，包括抗CD47抗体分子的药物组合物可以采用不含热原且具有合适的pH、等渗性和稳定性的肠胃外可接受的水溶液的形式。本领域的相关技术人员完全能够使用例如等渗媒剂(如氯化钠注射液、林格氏注射液(Ringe's Injection)、乳酸化林格氏注射液)制备合适的溶液。可以根据需要使用防腐剂、稳定剂、缓冲剂、抗氧化剂和/或其它添加剂，包含缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，如抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(如氯化十八烷基二甲基苄基铵；氯化六甲铵；苯扎氯銨；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苯甲醇；对羟苯甲酸烷基酯，如对羟苯甲酸甲酯或丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3'-戊醇；以及间甲酚)；低分子量多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包含葡萄糖、甘露糖或葡聚糖；螯合剂，如EDTA；糖，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐反离子，如钠；金属络合物(例如，Zn蛋白质络合物)；和/或非离子型表面活性剂，如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。
根据要治疗的病状，包括抗CD47抗体分子的药物组合物可以单独使用或结合其它治疗同时或依次施用。
如本文所描述的抗CD47抗体分子可以在人或动物体的治疗方法中使用，包含预防性(prophylactic或preventative)治疗(例如，在个体的病状发作之前进行以降低个体发生病状的风险、延缓其发作或在发作后减轻其严重程度的治疗)。治疗方法可以包括向有需要的个体施用抗CD47抗体分子。
施用通常地以“治疗有效量”进行，所述治疗有效量足以显示对患者的益处。这种益处可以是至少改善至少一种症状。实际施用量以及施用率和施用时程将取决于所治疗疾病的性质和严重程度、所治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床病状、病症的原因、组合物的递送部位、施用方法、施用时间安排以及执业医师已知的其它因素。治疗处方(例如，关于剂量等的决定)由全科医生和其它医师负责，并且可以取决于症状的严重程度和/或所治疗疾病的进展。抗体分子的适当剂量在本领域中是众所周知的(Ledermann J.A.等人,1991,《国际癌症杂志(Int.J.Cancer)》47:659-664；Bagshawe K.D.等人,1991,《抗体、免疫缀合物和放射性药物(Antibody,Immunoconjugates and Radiopharmaceuticals)》4:915-922)。可以使用在本文中或在《医师案头参考(Physician's Desk Reference)》(2003)中指示的针对所施用药剂的类型的具体剂量。抗体分子的治疗有效量或合适剂量可以通过在动物模型中比较其体外活性和体内活性来确定。用于将小鼠和其它试验动物中的有效剂量外推至人的方法是已知的。确切剂量将取决于许多因素，包含抗体是用于预防还是用于治疗、要治疗区域的大小和位置、抗体的确切性质(例如，完整抗体、片段)以及与抗体连接的任何可检测标记物或其它分子的性质。
对于全身性应用，典型的抗体剂量范围为100μg到1g，并且对于局部应用，典型的抗体剂量范围为1μg到1mg。可以在开始时施用较高的负荷剂量，然后施用一个或多个较低的剂量。通常，抗体将是完整抗体，例如，IgG1或IgG4同种型。这是用于成年患者的单次治疗的剂量，所述剂量可以针对儿童和婴儿按比例调整，并且还可以针对其它抗体形式与分子量成比例地调整。根据医生的判断，可以以每天一次、每周两次、每周一次或每月一次的间隔重复治疗。个体的治疗时间表可以取决于抗体组合物的药代动力学和药效学性质、施用途径和所治疗病状的性质。
治疗可以是周期性的，并且施用之间的时段可以是约两周或更长时间，例如，约三周或更长时间、约四周或更长时间、约每月或更长时间一次、约五周或更长时间或约六周或更长时间。例如，可以每两周到四周或每四周到八周进行治疗。可以在外科手术之前和/或之后给予治疗，和/或可以在外科手术治疗或有创手术的解剖部位处直接施用或施加治疗。上文描述了合适的调配物和施用途径。
在一些实施例中，本文所描述的抗CD47抗体分子可以以皮下注射剂的形式施用。例如对于长期或短期预防/治疗，可以使用自动注射器施用皮下注射剂。
在一些优选实施例中，抗CD47抗体分子的治疗效果可以在血清中持续抗体半衰期的数倍，这取决于剂量。例如，抗CD47抗体分子的单个剂量的治疗效果可以在个体中持续1个月或更长时间、2个月或更长时间、3个月或更长时间、4个月或更长时间、5个月或更长时间或6个月或更长时间。
本发明还提供了一种用于产生与人CD47并且任选地还与食蟹猴CD47特异性结合的抗体分子或其抗原结合部分的方法，所述方法包括以下步骤：
(1)将来自非人来源的抗CD47 CDR移植到人v结构域骨架中，以产生人源化抗CD47抗体分子或其抗原结合部分；
(2)产生所述人源化抗CD47抗体分子或其抗原结合部分的包括所述CDR中的一种或多种突变的克隆的噬菌体文库；
(3)针对与人CD47并且任选地还与食蟹猴CD47的结合选择所述噬菌体文库；
(4)筛选来自选择步骤(3)的对人CD47并且任选地还对食蟹猴CD47具有结合特异性的克隆；以及
(5)由选自步骤(4)的克隆产生与人CD47并且任选地还与食蟹猴CD47特异性结合的抗体分子或其抗原结合部分。
所述方法可以包括另外一个步骤：基于在步骤(4)中选择的克隆(例如，基于在步骤(4)中选择的克隆的CDR中的特定位置处的另外的探索性诱变)产生另外的克隆，以增强人源化和/或最小化人T细胞表位含量和/或改善步骤(5)中产生的抗体分子或其抗原结合部分中的制造性质。
适用于上述方法的细化如下文实例1所述。
如本文所使用的，术语“CD47”是指保留CD47的至少部分生物活性的IAP(整合素相关蛋白)及其变体。如本文所使用的，CD47包含天然序列CD47的所有哺乳动物物种，包含人、大鼠、小鼠和鸡。术语“CD47”用于包含人CD47的变体、亚型和物种同源物。本发明的抗体可以与来自除了人之外的物种的CD47，特别是来自食蟹猴(cynomolgus monkey或Macacafascicularis)的CD47交叉反应。表9中提供了人和食蟹猴CD47氨基酸序列的实例。在某些实施例中，抗体可以对人CD47具有完全特异性，并且可以不表现出非人交叉反应性。
如本文所使用的，在本发明的抗体或“抗CD47拮抗剂抗体”(可互换地称为“抗CD47抗体”)的上下文中使用的“拮抗剂”是指能够结合CD47并抑制CD47生物活性和/或由CD47信号传导介导的一个或多个下游途径的抗体。抗CD47拮抗剂抗体涵盖可以(包含显著地)阻断、拮抗、抑制或降低CD47生物活性(包含由CD47信号传导(如受体结合和/或诱发对CD47的细胞应答)介导的下游途径)的抗体。出于本发明的目的，将明确理解的是，术语“抗CD47拮抗剂抗体”涵盖CD47本身和CD47生物活性(包含但不限于其增强对髓系谱系的细胞的吞噬作用的激活的能力)或活性或生物活性的后果在任何有意义的程度上都基本上无效、减少或中和的所有术语、标题、功能状态和特性。
如果抗体相比于其与其它受体结合以更大的亲和力、亲合力、更容易地和/或以更长的持续时间结合，则所述抗体与CD47“特异性结合”、“特异性相互作用”、“优先结合”、“结合”或“相互作用”。
“抗体分子”是能够通过位于免疫球蛋白分子的可变区中的至少一个抗原识别位点来与靶标(如碳水化合物、多核苷酸、脂质、多肽等)特异性结合的免疫球蛋白分子。如本文所使用的，术语“抗体分子”不仅涵盖完整的多克隆抗体或单克隆抗体，而且还涵盖任何抗原结合片段(例如，“抗原结合部分”)或其单链、包括抗体的融合蛋白以及包括抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其它经修饰构型，包含例如但不限于scFv、单结构域抗体(例如，鲨鱼抗体和骆驼抗体)、大抗体、微型抗体、胞内抗体、双功能抗体、三功能抗体、四功能抗体、v-NAR和双-scFv。
“抗体分子”涵盖任何类的抗体，如IgG、IgA或IgM(或其亚类)，并且抗体不需要属于任何特定类。根据重链的恒定区的抗体氨基酸序列，可以将免疫球蛋白归为不同类。存在五大类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些类中的几类可以进一步分为亚类(同种型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。对应于不同类免疫球蛋白的重链恒定区分别被称为α、δ、ε、γ和μ。不同类免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是众所周知的。
如本文所使用的，术语抗体分子的“抗原结合部分”是指完整抗体的保留与CD47特异性结合的能力的一个或多个抗体片段。抗体分子的抗原结合功能可以由完整抗体的片段执行。涵盖在抗体分子的术语“抗原结合部分”内的结合片段的实例包含Fab；Fab'；F(ab')2；由VH结构域和CH1结构域组成的Fd片段；由抗体的单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；单结构域抗体(dAb)片段和分离的互补决定区(CDR)。
术语“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链的C端区。“Fc区”可以是天然序列Fc区或变体Fc区。尽管免疫球蛋白重链的Fc区的边界可以变化，但通常将人IgG重链Fc区定义为从位置Cys226处的氨基酸残基或从Pro230延伸到其羧基端。Fc区中的残基的编号为如Kabat中的EU索引的编号。免疫球蛋白的Fc区通常包括两个恒定结构域CH2和CH3。如本领域中已知的，Fc区可以以二聚体形式或单体形式存在。
抗体的“可变区”是指抗体轻链的可变区或抗体重链的可变区中的任一者或两者。如本领域中已知的，重链和轻链的可变区各自由通过三个互补决定区(CDR)(也被称为高变区)连接的四个骨架区(FR)组成，并有助于形成抗体的抗原结合位点。当选择位于CDR侧翼的FR时，例如，当人源化或优化抗体时，来自含有同一规范类的CDR序列的抗体的FR是优选的。
本申请中使用的CDR定义组合了在本领域中已经创建的许多不同的、经常是冲突的方案中使用的结构域，所述方案基于免疫球蛋白库分析和在分离方面和抗体与抗原的共晶体方面对抗体进行的结构分析的组合(参见Swindells等人的评论,2016,abYsis：整合的抗体序列和结构管理、分析和预测(abYsis:Integrated Antibody Sequence andStructure-Management,Analysis,and Prediction)《分子生物学期刊(J Mol Biol)》[PMID:27561707；电子公开2016年8月22日])。本文所使用的CDR定义(“统一”定义)结合了所有此类现有洞悉的经验教训，并包含对潜在介导靶结合互补性的完整残基景观(landscape)进行采样所需的所有适当环位置。
表1示出了如本文所定义的5F9G4鼠抗CD47抗体CDR的氨基酸序列(“统一”方案)与用于定义相同CDR的众所周知的替代性系统的比较。
如本文所使用的术语“保守取代”是指将一个氨基酸用不会显著有害地改变功能活性的另一氨基酸替代。“保守取代”的优选实例是将一个氨基酸用在以下BLOSUM 62取代矩阵中的值≥0的另一氨基酸替代(参见Henikoff和Henikoff,1992,《美国国家科学院院刊》89:10915-10919)：
术语“单克隆抗体”(Mab)是指源自单个拷贝或克隆(包含例如任何真核、原核或噬菌体克隆)的抗体或其抗原结合部分，而不是用于产生单克隆抗体的方法。优选地，本发明的单克隆抗体存在于同质或基本上同质的群体中。
“人源化”抗体分子是指作为含有源自非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(如Fv、Fab、Fab'、F(ab')2或抗体的其它抗原结合亚序列)的非人(例如，鼠)抗体分子或其抗原结合部分的某种形式。人源化抗体可以是来自接受者的CDR的残基被来自如小鼠、大鼠或兔等具有期望特异性、亲和力和能力的非人物种(供体抗体)的CDR的残基替代的人免疫球蛋白(接受者抗体)。
“人抗体”或“完全人抗体”是指源自携带人抗体基因的转基因小鼠或人细胞的抗体分子或其抗原结合部分。
术语“嵌合抗体”旨在指代可变区序列源自一个物种并且恒定区序列源自另一个物种的抗体分子或其抗原结合部分，如可变区序列源自小鼠抗体并且恒定区序列源自人抗体的抗体分子。
“抗体-药物缀合物”和“免疫缀合物”是指与细胞毒素剂、细胞抑制剂和/或治疗剂缀合的抗体分子或其抗原结合部分，包含与CD47结合的抗体衍生物。
本发明的抗体分子或其抗原结合部分可以使用本领域众所周知的技术来产生，例如，重组技术、噬菌体展示技术、合成技术或此类技术的组合或本领域中熟知的其它技术。
术语“分离的分子”(其中分子是例如多肽、多核苷酸或抗体)是这样的分子，所述分子由于其衍生起源或来源而：(1)与在所述分子的天然状态下伴随所述分子的天然缔合的组分不缔合，(2)基本上不含来自同一物种的其它分子，(3)由来自不同物种的细胞表达或(4)在自然界中不存在。因此，化学合成的或在不同于天然来源细胞的细胞系统中表达的分子将与其天然缔合的组分“分离”。还可以通过使用本领域中众所周知的纯化技术进行的分离使分子基本不含天然缔合的组分。分子纯度或同质性可以通过本领域中众所周知的多种手段来测定。例如，可以使用聚丙烯酰胺凝胶电泳并且使用本领域中众所周知的技术将凝胶染色以使多肽可视化，从而测定多肽样品的纯度。为了某些目的，可以通过使用HPLC或本领域众所周知的其它纯化手段来提供更高分辨率。
术语“表位”是指分子的能够由抗体分子或其抗原结合部分识别并在抗体分子的抗原结合区中的一个或多个抗原结合区处结合的部分。表位可以由一级、二级或三级蛋白质结构的限定区组成，并且包含由抗体的抗原结合区或其抗原结合部分识别的靶标的二级结构单元或结构域的组合。表位可以同样由如氨基酸或糖侧链等分子的限定的化学活性表面分组组成，并且具有特异性三维结构特征以及特异性电荷特性。如本文所使用的术语“抗原表位”定义为多肽的抗体分子可以特异性结合(如通过本领域中众所周知的任何方法所测定的，例如通过常规免疫测定、抗体竞争性结合测定或通过x射线晶体学或相关的结构测定方法(例如，NMR)测定的)的一部分。
术语“结合亲和力”或“KD”是指特定抗原-抗体相互作用的解离速率。KD是解离速率(也被称为“脱离速率(off-rate)(koff)”)与缔合速率或“结合速率(on-rate)(kon)”之比。因此，KD等于koff/kon，并表示为摩尔浓度(M)。因此，KD越小，结合亲和力越强。因此，与1nM的KD相比，1μM的KD指示弱结合亲和力。可以使用本领域中既定的方法来确定抗体的KD值。一种用于确定抗体的KD的方法是使用表面等离子体共振(SPR)，通常使用生物传感器系统，如系统来确定。
术语“效力”是生物活性的量度，并且可以被指定为IC50或有效抑制在如本文所描述的CD47活性测定中测量的50％活性的抗体或抗体药物缀合物相对于抗原CD47的浓度。
如本文所使用的短语“有效量”或“治疗有效量”是指实现期望治疗结果所需的量(按剂量，针对时间段以及针对施用方式)。有效量至少是对受试者赋予治疗益处所需的活性剂的最小量，但小于毒性量。
本文中关于本发明的抗体分子的生物活性所使用的术语“抑制”或“中和”意指抗体基本上拮抗、禁止、阻止、抑制、减慢、破坏、消除、停止、减少或逆转例如被抑制的疾病的进展或严重程度的能力，包含但不限于抗体分子相对于CD47的生物活性或结合相互作用。
“宿主细胞”包含可以是或已经是用于掺入多核苷酸插入的一个或多个载体的接受者的单个细胞或细胞培养物。宿主细胞包含单个宿主细胞的后代，并且由于天然的、偶然的或故意的突变，后代(在形态学上或基因组DNA互补物上)可能不一定与原始亲本细胞完全相同。宿主细胞包含用本发明的一种或多种多核苷酸体内转染的细胞。
如本文所使用的，“载体”意指能够在宿主细胞中递送并且优选地表达一个或多个所关注的基因或序列的构建体。载体的实例包含但不限于病毒载体、裸DNA或RNA表达载体、质粒、粘粒或噬菌体载体、与阳离子缩合剂缔合的DNA或RNA表达载体、包封在脂质体中的DNA或RNA表达载体以及某些真核细胞，如生产细胞。
除非另有指示，否则本文所使用的术语“治疗”意指逆转此类术语所适用的病症或病状或此类病症或病状的一种或多种症状、使其缓解、抑制其进展、延迟其进展、延迟其发作或使其得到预防。除非另有指示，否则本文所使用的术语“治疗”是指如上文所定义的治疗动作。术语“治疗”还包含受试者的辅助和新辅助治疗。为避免疑义，本文中对“治疗”的提及包含对治愈性、缓解性和预防性治疗的提及。为避免疑义，本文中对“治疗”的多次提及还包含对治愈性、缓解性和预防性治疗的多次提及。
应理解的是，当在本文中无论何处用语言“包括”来描述实施例时，还提供了根据“由……组成”和/或“主要由……组成”描述的在其它方面类似实施例。
在根据马库什(Markush)组或其它替代方案分组来描述本发明的方面或实施例的情况下，本发明不仅涵盖整体列出的整个组，而且还涵盖所述组的单独的每个成员和主组的所有可能子组，也涵盖缺少组成员中的一或多个组成员的主组。本发明还设想明确地排除所要求保护的发明中的组成员中的任何组成员中的一或多个组成员。
除非另外定义，否则本文中使用的所有技术术语和科学术语的含义与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。在发生冲突的情况下，应以本说明书(包含定义)为准。贯穿本说明书和权利要求书，词语“包括(comprise)”或如“包括(comprises)”或“包括(comprising)”等变体应当被理解为暗示包含所陈述整数或整数组，但不排除任何其它整数或整数组。除非上下文另外要求，否则单数术语应包含复数含义，并且复数术语应包含单数含义。术语“例如(e.g.或for example)”之后的任何一或多个实例并不意味着穷举或限制。
除非另有指示，否则本发明的实践将采用在本领域技术范围内的常规分子生物学(包含重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学技术。
现在将参考附图描述本发明的特定非限制性实施例。
实例1：产生经过优化的抗CD47治疗性抗体
介绍
在此实例中，成功产生了一组经过优化的拮抗性抗CD47抗体。这些抗CD47抗体良好表达、生物物理上稳定、高度可溶并且与优选的人种系具有最高的氨基酸序列同一性。
材料和方法
IgG克隆、瞬时表达、纯化
通过限制-连接克隆将抗体v-结构域编码性DNA序列克隆到位于单独的质粒载体中的单独的IgG重链和轻链表达盒中。将抗体以两种人IgG1形式表达：IgG4(S228P)和IgG1无效，后者是具有下部铰链突变L234A/L235A/G237A的IgG1，所述两种形式使Fcγ受体驱动的效应子功能最小化。在根据制造商的方案用无内毒素的IgG表达质粒制剂瞬时转染后，将IgG在HEK-293expi或CHO细胞中表达。将IgG使用以下单步骤方案纯化：将条件培养基(纯净)装载到在pH为7.4的PBS中预平衡的1ml ProA琼脂糖柱上。将柱用5个柱体积的pH为7.4的PBS洗涤，然后将蛋白质用pH为2.7的100mM甘氨酸洗脱，并使用截留值为30kDa的透析膜在pH为7.4的PBS中进行透析。
IgG滴定结合ELISA
为了涂覆Greiner Bio-One高结合ELISA板，在4℃下，将靶蛋白在碳酸盐缓冲液中稀释至1μg/ml，并以每孔100μl添加，过夜。将经涂覆的板用pH为7.4的PBS洗涤3次，在室温下用含1％BSA的PBS(380微升/孔)封闭，持续1小时，然后用PBS-吐温20(PBST)洗涤3次。然后，添加CD47抗体(100微升/孔；在PBST中稀释的)，然后将其在室温下温育1小时。然后，将板用PBST洗涤3次，并在室温下添加山羊抗人κ链HRP(100微升/孔)，持续1小时。然后，将板用PBST洗涤3次，用PBS洗涤两次，然后每孔添加100μl TMB。通过添加100μl 2M H2SO4/孔终止反应，并在读板器上在450nm下读取OD。
通过ELISA测试抗CD47抗体的多反应性。在4℃下，将经过纯化的重组靶抗原和非靶抗原在碳酸盐缓冲液中以每孔100ng在96孔Nunc maxisorp板中涂覆过夜。然后，将板用PBS洗涤3次，用含1％BSA的PBS封闭，然后用PBS-吐温20洗涤3次。然后，应用一级抗体的稀释系列，将板用PBS-吐温20洗涤3次，然后应用山羊抗人κ链-HRP 1:4,000二级抗体。然后，将孔用PBS-吐温20洗涤3次，并用PBS洗涤2次，每孔添加100μl TMB过氧化物酶底物，通过添加100μl 2M H2SO4来终止反应，并在450nm下读取吸光度。如前所述通过ELISA在带负电的生物分子表面上进行IgG结合分析(参见Mouquet等人,2010,《自然(Nature)》467:591-595)。
CD47文库产生和选择
通过大规模寡核苷酸合成和PCR组装CD47 scFv库。然后，将经过扩增的scFv库通过限制-连接克隆到噬菌粒载体中，转化到大肠杆菌TG-1细胞中，并且基本上如先前详细描述的那样拯救噬菌体库(Finlay等人,2011,《分子生物学方法(Methods Mol Biol.)》681:383-401)。
通过用CD47-Fc蛋白(人或食蟹猴)涂覆链霉亲和素磁性微珠，将珠粒用PBS洗涤三次并重新悬浮于pH为7.4的PBS加上5％脱脂乳蛋白(MPBS)中来进行噬菌体选择。在第1轮选择中，将这些珠粒以200nM靶蛋白涂覆，之后在随后的几轮中以100nM、50nM和10nM进行涂覆。
HTRF结合竞争测定
建立竞争HTRF测定，以检查经移植克隆和文库源性克隆对与人和/或食蟹猴CD47-Fc结合的h5F9G4 IgG的表位竞争。根据制造商的说明，使用标记试剂盒(CisBio)用铽标记经过纯化的h5F9G4 IgG1。最终反应混合物含有如上所述制备的总反应体积为20μl的处于1×测定缓冲液[50mM磷酸钠，pH 7.5；400mM氟化钾；和0.1％BSA(w/v)]中的经过生物素化的人和食蟹猴CD47-Fc、SA-XL665(CisBio)、铽标记的亲本h5F9G4以及所关注的竞争scFv或IgG。将试剂按顺序添加到384孔小容积黑色板(Nunc)中。使反应在室温下进行1小时，随后在读板器上对板进行读取，其中在340nm下激发，并且在615nm(测量来自h5F9G4-铽的输入供体荧光)和665nm(测量来自SAXL665的输出受体荧光)下有两个发射读数。将读数以665nm/615nm比率表示。
CD47-SIRPα结合竞争测定
建立竞争ELISA测定，以检查经过优化的前导阻断CD47与SIRPα结合相互作用的能力。为了涂覆Greiner Bio-One高结合ELISA板，在4℃下，以100μl每孔添加含10μg/ml人SIRPα-Fc的碳酸盐涂覆缓冲液，过夜。将经涂覆的板用pH为7.4的PBS洗涤3次，在室温下用含1％BSA的PBS(380微升/孔)封闭，持续1小时，然后用PBS-吐温20(PBST)洗涤3次。然后，在添加或不添加竞争性scFv或IgG的情况下，在室温下以100μl每孔添加含0.2μg/ml经过生物素化的人、小鼠或食蟹猴CD47-Fc的PBS，持续60分钟。然后，将板用PBST洗涤3次，并在室温下添加链霉亲和素HRP(100微升/孔)，持续1小时。然后，将板用PBST洗涤3次，用PBS洗涤两次，然后每孔添加100μl TMB。通过添加100μl 2M H2SO4/孔终止反应，并在读板器上在450nm下读取OD。
抗体v结构域T细胞表位含量：计算机分析
使用基于鉴定T细胞表位在治疗性抗体和蛋白质中的位置的计算机技术(Abzena有限公司(Abzena,Ltd.))来评估抗体v结构域中的潜在免疫原性。使用iTopeTM来分析与人MHC II类具有杂乱高亲和力结合的肽的关键前导的VL和VH区序列。杂乱高亲和力MHC II类结合性肽被认为与T细胞表位的存在相关，所述T细胞表位是药物蛋白质的临床免疫原性的高风险指示。iTopeTM软件预测肽的氨基酸侧链与34个人MHC II类等位基因的开放端结合凹槽内的特定结合袋(具体地袋位置；p1、p4、p6、p7和p9)之间的有利相互作用。这些等位基因表示世界上最常见的HLA-DR等位基因，而在任何特定种族群体中最普遍存在的等位基因不占任何权重。所述等位基因中有二十个等位基因含有“开放式”p1构型，并且14个含有“封闭式”构型，其中位置83处的甘氨酸被缬氨酸替代。关键结合残基的位置是通过在计算机中产生跨越测试蛋白质序列重叠八个氨基酸的9mer肽来实现的。此过程以高准确度成功地区分与MHC II类分子结合或不与其结合的肽。
此外，使用TCEDTM(T Cell Epitope DatabaseTM)来搜索与先前通过其它蛋白质序列的体外人T细胞表位作图分析鉴定的T细胞表位的匹配来分析所述序列。TCEDTM用于在由源自不相关的蛋白质和抗体序列肽构成的大型(>10,000个肽)数据库中搜索任何测试序列。
使用人巨噬细胞进行的吞噬作用效力测定
通过密度梯度离心从全血中分离外周血单核细胞(PBMC)。随后，使用CD14微珠粒通过磁性细胞分离来分离CD14阳性PBMC。并行地，使用绿色CFSE(羧基二乙酸荧光素琥珀酰亚胺酯)细胞示踪染料来标记Jurkat细胞。将总共6.25×105个经过标记的Jurkat细胞在含有5％CO2的潮湿气氛中在37摄氏度下在96孔板中在存在UH2抗体的情况下预温育1小时。在温育之后，将2.5×105个CD14阳性细胞添加到每个孔中，并在相同培养条件下温育另外一个小时。
将细胞通过剧烈移液收获，用存活力染料染色，用冰冷的4％多聚甲醛固定10分钟。在固定之后，将细胞用Fc受体结合抑制剂单克隆抗体阻断10分钟，并且然后在室温下与Alexa Fluor 647(AF647)缀合性抗人CD11b抗体一起温育30分钟，并且在4％多聚甲醛中固定另外5分钟。
将细胞在BD Fortessa流式细胞仪上分析，所述BD Fortessa流式细胞仪记录侧向散射特性和前向散射特性以及CFSE和AF647荧光强度数据。捕获数据，直到记录到至少1×104个AF647阳性事件。采集后使用FlowJo软件(版本10.4.2)分析数据。简而言之，通过散射特性(SSC-面积乘以FSC-面积)圈选出细胞碎片。还通过SSC-高度乘以SSC-面积并且然后通过FSC-面积乘以FSC-高度圈选单细胞。从剩余的单细胞群体中，使用基于经过媒剂处理的测试组中的CD11b阳性细胞群体放置的象限门来圈选CFSE和CD11b双阳性细胞。计算并绘制来自CD11b阳性群体的CFSE阳性细胞的百分比。
结果和讨论
CDR移植到优选的人种系v基因上
初始地，使用CDR移植将拮抗性鼠抗CD47 IgG 5F9G4(5F9G4；参见WO2011143624A2和表2)的CDR引入到人种系免疫球蛋白v结构域骨架序列支架中。为了使工程努力偏向于具有最佳的药物样性质的最终领先的治疗性IgG化合物，选择将亲本抗体的CDR移植到“优选的”种系支架IGHV5-51和IGKV2-28上，已知所述种系支架在噬菌体展示中很好地展示并以scFv形式表达、具有良好溶解性、高物理稳定性并在经过表达的人抗体库中高频率使用。IGHV5-51也是VH移植的优选种系骨架，因为其显示出与m5F9G4 HCDR2的高度序列和结构基序同源性(图2)。
在表2中概述了这些支架和所移植CDR的定义。在表2中还示出了嵌合性抗CD47抗体m5F9G4和人源化h5F9G4的重链和轻链序列。尽管此CDR移植过程是众所周知的，但是预测给定的一组人v结构域序列是否将充当非人CDR移植的合适受体骨架仍然是个问题。使用不合适的骨架可能导致靶结合功能丧失、蛋白质稳定性问题或者甚至最终IgG的表达受损。因此，后来将IGKV2-28/IGHV5-51移植物作为CDR诱变和选择经过改进的克隆的模板。
文库产生和筛选
将经过CDR移植的IGKV2-28/IGHV5-51 v结构域序列组合成VL-VH scFv形式，并通过大规模寡核苷酸合成和组装产生诱变文库盒。将最终的scFv文库连接到噬菌体展示载体中，并通过电穿孔转化到大肠杆菌中，以产生6.0×108个独立的克隆。通过对96个克隆进行测序来验证文库构建质量。此测序数据表明，已经以约50％的频率对每个变化位置处的鼠或人种系残基进行编码的位置进行了有效采样。使用辅助噬菌体M13拯救文库，并在多个独立的分支中选择经过生物素化的人和食蟹猴CD47-Fc蛋白。
选择后筛选(如图1A-F所示)和DNA测序显示，存在269个独特的人和鼠CD47结合性scFv克隆，所述克隆保留了与h5F9G4 IgG1的表位结合竞争，阻断了hCD47与hSIRPα的结合，并在CDR内含有显著增加的人含量，而骨架序列保持完全种系。在这269个克隆中，在所有CDR中均观察到种系化突变(表3)。基于人CD47-Fc和h5F9G4两者的CDR种系化水平相对于HTRF信号对前导克隆进行排名(图1)。然后，将来自此排名的前11个克隆的v结构域亚克隆到IgG表达载体中，以进行如下的进一步测试(表4)。然而，出乎意料的是，在所有对CD47-SIRPα和CD47-h5F9G4两者的中和作用的分析中，所有文库源性克隆和IGKV2-28/IGHV5-51移植物scFv均未实现与IGKV2-28/IGHV1-3移植的h5F9G4 scFv相同的效力(图1A-F)。
虽然在直接源自文库选择的前导克隆的所有CDR中都观察到了种系化突变，但仍然可能的是，序列分析可能将进一步的克隆设计成具有最大程度人源化并保留最大CD47结合亲和力和拮抗效力。因此，将具有针对人和鼠蛋白质的结合信号的269个序列独特的命中用于分析此功能表征群体的CDR中鼠氨基酸的保留频率。将位置氨基酸保留频率表示为在VH结构域和VL结构域中存在的百分比(图2A、2B)。在一系列组合设计中，将RF<75％的鼠残基视为可能不是靶结合互补位所必需的并且可能对种系化开放的位置。重要的是，如在上文概述的scFv筛选数据中观察到的，认为IGHV5-51移植的VH结构域的效力可能低于IGHV1-3骨架上的结构域的效力。为了检查情况是否如此，将图2A和B中概述的互补位采样信息用于在IGKV2-28和IGHV1-3骨架中构建设计克隆，以与源自初始文库(VH结构域中的IGHV5-51骨架)的高度人源化克隆进行比较。
将主要含有RF>75％的那些鼠残基的十种VH设计以多种组合命名为VH1.1-VH1.10。还创建六种VL设计(VL1.1-VL1.6)，所述设计组合了在高功能性scFv序列群体中观察到的最大程度人源化的CDR，加上在LCDR1中的进一步人源化和脱酰胺化基序破坏性突变(表4)。这些LCDR1人源化和稳定化突变对位置11、12和13(残基GNT)进行采样，已经观察到所述位置是可变位置(图2A，表3)，但尚未明确表明可以耐受这些潜在最佳的序列(例如，在表4中概述的设计链VL1.4中存在的“ANT”(尤其是“AYN”)基序和其它序列)，同时保留靶结合特异性和阻断CD47-SIRPα相互作用的能力。
通过基因合成产生VH克隆和VL克隆(以及上文概述的11种文库源性克隆、阳性对照物IGHV5-51移植物、h5F9G4和m5F9G4以及阴性对照物非CD47反应性v结构域)，然后将其克隆到表达载体中以便以IgG1无效形式产生。为了最大化发现功能优化序列的机会，对设计VH和VL克隆进行矩阵处理，以组合VH和VL序列的所有可能的组合。为了检查上文观察到的基于IGHV5-51的scFv的效力的降低是否是由于scFv形式化而不是骨架选择引起的，将前导克隆D6的scFv以IgG1和scFv-Fc两者的融合形式克隆。所有IgG和D6 scFv-Fc融合蛋白均容易表达且易于从HEK-293细胞的瞬时转染纯化。
文库源性前导IgG特异性和效力特性
然后，以直接滴定ELISA形式测试上文所描述的经过纯化的IgG与人和食蟹猴CD47-Fc的结合。此分析表明，虽然所有文库源性克隆均保留了对人CD47的结合亲和力，但所有克隆均未完全重现m5F9G4 IgG1的结合(图3A)。这种结合减少在食蟹猴CD47上更为显著，其中克隆F-G3显示出特别弱的反应性(图3B)。
由于直接ELISA结合信号受亲合力影响，并且不能证明维持了特异性表位，因此随后在与CD47结合的5F9G4的CD47-SIRPα结合阻断测定(图4)和溶液相HTRF竞争测定中检查所有IgG(图5)。在CD47-SIRPα结合阻断测定中，与h5F9G4、m5F9G4和IGHV5-51移植的IgG相比，无论是与人(图4A)还是与食蟹猴CD47(图4B)结合，所有文库源性IgG均表现出显著降低的效力。重要的是，IGHV5-51移植的IgG表现出完全阻断人和食蟹猴CD47两者与SIRPα的结合的能力，但与h5F9G4相比，其效力明显降低。这表明，与h5F9G4相比，将5F9G4 CDR放置于IGHV5-51骨架上的移植过程已经特异性降低了分子的效力，因为CDR序列跨两个骨架均得到维持。在进一步的出乎意料的发现中，D6 scFv-Fc融合蛋白维持了IGHV5-51移植物IgG对两种直系同源物的起始CD47阻断效力，而D-A6 IgG则未维持所述效力并且不能完全阻断任一种直系同源物(图4A、4B)。
为了确保观察到的一些IGHV5-51骨架克隆引起的CD47阻断效力的丧失不是由“表位移位”现象驱动的，进行了HTRF测定。此测定检查了这些克隆与h5F9G4竞争与CD47结合的能力。这些分析表明，几乎所有克隆(除了F-G3之外)都可以与h5F9G4交叉竞争，其中大多数克隆在最高浓度下表现出对结合的完全抑制(图5A)。然而，与h5F9G4自身竞争相比，抑制作用的效力再次降低。此发现表明维持了共享表位，但是IGHV5-51骨架克隆中的结合亲和力有所降低。重要的是，再次表明D6 scFv-Fc的功能优于D6 IgG的功能，其中D6 scFv-Fc表现出的效力与IGHV5-51移植IgG的效力相当，而D-A6 IgG的效力却明显降低(图5B)。
关于D6 scFv-Fc融合效力相对于D6 IgG的发现强有力地表明，已经出乎意料地对在scFv形式下优先起作用，随后在重新配置为IgG1时受损的克隆选择了重新移植CDR的过程加上与scFv展示和筛选。此观察使这种克隆在双特异性抗体的产生中特别有吸引力，因为scFv片段可以成功地用作多特异性抗体的模块化构建块。然而，总的来说，这些发现还说明了Townsend等人的原始方法未能产生h5F9G4的改进版本。
设计IgG特异性和效力特性
然后，以直接滴定ELISA形式测试上文所描述的经过纯化的设计IgG与人和食蟹猴CD47-Fc的结合。此分析表明，虽然许多克隆保留了对人和食蟹猴CD47的结合亲和力，但结合效力的范围却是高度混杂的，其中一些克隆的结合信号显著降低，但IgG的子集完全重现了m5F9G4 IgG1的结合(图6A-H)。含有VH1.8 VH结构域与VL1.1-1.6结构域的组合的克隆家族显示出m59G4的完全结合效力的最具一致性的重现，并且分别在图6G和H中示出。
由于直接ELISA结合信号受亲合力影响，并且不能证明维持了特异性表位，因此随后在CD47-SIRPα结合阻断测定中检查所有IgG(图7、图8)。在CD47-SIRPα结合阻断测定中，无论是与人(图7A)还是与食蟹猴CD47(图7B)结合，与h5F9G4和m5F9G4相比，所有VH1.8家族IgG均表现出高效力，除了VH1.8/VL1.4之外的所有克隆具有功能等同性。在ELISA中表现良好的若干个其它设计克隆也表现出阻断hCD47-SIRPα结合的能力(图8)，但是其效力低于VH1.8家族克隆的效力。
为了确保观察到的高功能性设计克隆对CD47阻断效力的维持与表位特异性的维持相关，进行5F9G4与CD47结合的溶液相HTRF竞争测定(图9)。此测定检查了关键设计克隆与h5F9G4竞争与CD47结合的能力。这些分析表明，所有VH1.8家族克隆都可以与h5F9G4交叉竞争，其中多个克隆表现出对人(图9A)和食蟹猴(图9B)CD47的等同的效力(表5)。然而，与h5F9G4自身竞争相比，VH1.8/VL1.4的抑制作用的效力再次降低。此发现表明维持了共享表位，但是含VL1.4结构域的克隆的结合亲和力有所降低。进一步的HTRF分析表明，所有显示出hCD47阻断作用的非VH1.8家族克隆(图8)也可以与h5F9G4交叉竞争，但所有克隆均显示出针对人(图9D)和食蟹猴(图9C)CD47的效力降低(表5)。为了在VH1.8背景下对CDR残基进行进一步采样，产生了两个另外的设计(VH1.11和VH1.12)，以及VL1.5序列的另外3个设计后代(VL1.7、VL1.8和VL1.9)。将这些设计在基质中共表达以产生6种另外的IgG，然后在CD47-SIRPα阻断测定中进行检查。此分析表明，除了VH1.12/VL1.8(其在10μg/ml下维持最小的阻断作用(<50％))之外，所有克隆均丧失了拮抗CD47的全部效力。这些发现表明，在LCDR2的位置6处的突变F>A或在LCDR3的位置1处的突变F>M两者都导致了CD47拮抗作用的完全烧蚀。
在细胞膜处的前导IgG结合特异性的流式细胞术分析
通过流式细胞术分析通过ELISA显示出保留与CD47的结合的抗体在细胞表面处的浓度依赖性结合。用人或食蟹猴CD47全长cDNA稳定地转染CHO-K1细胞。然后，在100-0.024μg/ml的浓度范围内以IgG1无效形式测试所有抗CD47 IgG和同种型对照IgG1与人、食蟹猴或野生型对照(“wt”，即未经转染的)CHO-K1(图10)的结合。除了同种型对照物之外，所有IgG均显示出与人和食蟹猴CD47+细胞以及还与人AML细胞系HL60的浓度依赖性结合，其中在每种情况下，最大MFI均比观察到的与未经转染的CHO-K1结合的背景信号高50倍以上。抗CD47抗体在未经转染的CHO-K1细胞上未表现出与同种型对照IgG1相当的可测量背景结合(图10)。
“可开发性”ELISA测定中的前导IgG分析
本领域中已知的是，旨在用于治疗用途的IgG与若干种指示性生物底物的结合是由于生物利用度差和体内半衰期短而导致的患者不良表现的高风险的指示。三种此类生物底物是胰岛素、dsDNA和ssDNA(Avery等人,《单克隆抗体(Mabs)》；10:2；244-255；2018)。因此，将这三种底物用于涂覆ELISA板并检查经过优化的前导抗体的IgG1无效版本的结合。将这些基于人IgG的抗体的结合信号与已经发现具有多反应性和不良表现的“阳性对照”人IgG抗体进行比较，所述多反应性和不良表现使其在临床试验中的进展停止(博科西单抗和布雷奴单抗人IgG1类似物)。对于阴性对照人IgG1抗体，使用IgG1优特克单抗类似物，因为其和布雷奴单抗与同一治疗靶标反应，但pK更长，并已成功经批准用作治疗产品。在图11A、B和C所示的ELISA分析中，阳性对照抗体对所有3种底物均表现出预期的强反应性，而阴性对照优特克单抗则显示出低反应性。重要的是，所测试的所有IgG1前导克隆均显示出≤阴性对照物对所有3种底物的结合。这一发现强调了在经过优化的克隆VH1.8/VL1.1、VH1.8/VL1.2、VH1.8/VL1.3、VH1.8/VL1.4、VH1.8/VL1.5、VH1.8/VL1.6、VH1.7/VL1.4、VH1.6/VL1.9和VH1.12/VL1.8中维持了高度特异性的靶标驱动的结合。
抗体v结构域T细胞表位分析
将基于鉴定T细胞表位在治疗性抗体和蛋白质中的位置的计算机技术(Abzena有限公司)用于评估h5F9G4和前导抗体v结构域两者的免疫原性。用重叠的9mer肽(其中每个肽与最后一个肽重叠8个残基)分析v-结构域序列，针对34种MHC II类同种异型中的每一种对所述肽进行测试。基于潜在的“拟合”以及与MHC II类分子的相互作用对每个9mer进行评分。通过软件计算的肽得分介于0与1之间。突出显示产生高平均结合得分(在iTopeTM评分功能中，>0.55)的肽，并且如果>50％的MHC II类结合性肽(即，34个等位基因中的17个)具有高结合亲和力(得分>0.6)，则此类肽被定义为是被视为有高风险含有CD4+T细胞表位的“高亲和力”MHC II类结合性肽。低亲和力MHC II类结合性肽与大量(>50％)等位基因结合，其中结合得分>0.55(但并不是多数>0.6)。使用TCEDTM对序列进行进一步分析。将序列用于通过BLAST搜索来查询TCEDTM，以便鉴定来自在Abzena有限公司进行的先前体外T细胞表位作图研究中刺激T细胞应答的无关蛋白质/抗体的肽(T细胞表位)之间的任何高序列同源性。
将肽分为以下四类：高亲和力外来(“HAF”-高免疫原性风险)、低亲和力外来(“LAF”-低免疫原性风险)、TCED+(先前在TCEDTM数据库中鉴定的表位)和种系表位(“GE”-具有高MHC II类结合亲和力的人种系肽序列)。由于T细胞耐受性，种系表位9mer肽不太可能具有免疫原性潜力(即，这些肽在宿主中被识别为“自身”)，这已经通过使用广泛的种系肽进行的研究得以验证。重要的是，这种种系v结构域表位(进一步由人抗体恒定区中的类似序列辅助)还竞争在抗原呈递细胞的膜处进行MHC II类占据，从而降低外来肽呈递足以达到T细胞刺激所需的“活化阈值”的风险。因此，高GE含量是抗体治疗剂的临床开发中的一种有益特性。另一方面，TCED+肽在临床上具有很高的免疫原性风险，这是因为所述TCED+肽具有经过实验证明的可以在MHC分子上呈递并活化人t细胞的肽表位的特性。
与h5F9G4相比，关键前导v结构域表现出肽表位含量的显著有益变化。因此，已经成功地为维持抗CD47效力的抗体选择了此处进行的v结构域工程化过程，同时去除了为TCED+且在h5F9G4的重链和轻链v结构域两者中存在的多个HAF和LAF表位。重要的是，通过在前导克隆的CDR中存在的种系化突变特异性地消除了这些外来表位。例如，在大多数前导克隆中通过在位置1和2处的突变I>L和V>L消除了存在于h5F9G4的LCDR-1中(并且因此在h5F9G4的通过CDR移植人源化的任何形式中)的TCED+肽“IVYSNGNTY”(SEQ ID NO:106)(图12A)，如表4中的所有前导克隆中所发现的。这一发现说明，仅LCDR1中的种系化和非种系化突变不仅足以去除天冬酰胺脱酰胺化风险基序，而且足以去除已证明的人T细胞表位。
类似地，来自h5F9G4序列的HCDR1/骨架2区对HAF和TCED+肽“YNMHWVRQA”(SEQ IDNO:107)进行编码(图12B)。在表4中存在的多个前导序列(如含有序列“YAMHWVRQA”(SEQ IDNO:108)的抗体(例如，VH1.1、VH1.6、VH1.8、VH1.9、VH1.11、VH1.12)或含有序列“YNIHWVRQA”(SEQ ID NO:109)的抗体(例如，VH1.7))中烧蚀了此表位。重要的是，在位置2处的突变N>A和在位置3处的突变M>I不仅烧蚀了TCED+表位，而且将此表位转化为GE肽。另外，表4中所描述的所有前导的HCDR2的最后一个残基的种系化(如表2中所定义的在最终c端HCDR2位置处的突变D>G)也恢复了在IGHV5-51(“FQGQVTISA”SEQ ID NO:102)和IGHV1-3(“FQGRVTITA”SEQ ID NO:103)两者的种系中存在的GE肽。
在h5F9G4 VH结构域的HCDR3/骨架4序列中，鉴定了另外一个TCED+肽“YRAMDYWGQ”(SEQ ID NO:110)(图12C)。在表4中存在的多个前导序列(如含有序列“YRAEDYWGQ”(SEQ IDNO:111)的抗体(例如，VH1.1、VH1.2、VH1.3、VH1.6、VH1.9))中烧蚀了此表位。
至关重要的是，在若干关键前导中包含根据图2A和2B中的数据预测在CD47结合性克隆中不耐受的非种系突变和种系突变，作为探索性的新型取代。例如，在h5F9G4的LCDR-1中，不应耐受在轻链序列VL1.3、VL1.4、VL1.5和VL1.6(表4)中存在的开发风险基序去除性突变(图2B)。类似地，在图2A的数据中强有力地预测不耐受基于VH1.8序列和其它序列的克隆的在HCDR1中的单个去免疫性非保守N>A突变(表4)。这些发现说明，有益的突变是有前后关系的、v基因骨架依赖性的，并且在这种情况下，不能先验地或通过Townsend等人的方法完全预测。
最后，在VL序列VL1.1-1.9中发现了两个剩余的HAF肽。在图13A所示的分析中鉴定了跨越骨架2/LCDR2区的第一HAF肽“LIYKGSNRF”(SEQ ID NO:112)。在图13A所示的分析中鉴定了跨越骨架3/LCDR3区的第二HAF肽“VGVYYCFQA”(SEQ ID NO:113)。通过将在位置1处的残基突变为丙氨酸(分别地，L>A和V>A)，可以完全烧蚀两种HAF肽。为了对这些取代进行采样，构建了新克隆“VH1.8/VL1.6-DI”，其在VL结构域中含有两个丙氨酸取代。
关键前导的效力和亲和力分析
克隆h5F9G4、VH1.8/VL1.1、VH1.8/VL1.6和VH1.8/VL1.6-DI易于以人IgG4(S228P)形式表达和纯化。对于所有克隆，还将Fab结构域表达为可溶性单体并进行纯化以用于结合亲和力分析。然后，使用稳态亲和力分析，通过Biacore检查这些Fab对人和食蟹猴CD47的亲和力。稳态用作结合亲和力分析，因为所有Fab的结合和脱离速率对于可靠的1:1建模而言都太快。如表6所示，所有4个克隆均表现出准确的良好拟合的数据，这由非常低的Chi2值证明。发现所有克隆均具有在h5F9G4的2倍内的低nM范围的结合亲和力。
作为对所保留效力的最终分析，使用源自3个不同供体的人单核细胞源性巨噬细胞和Jurkat人癌细胞作为CD47+靶细胞，检查呈IgG4(S228P)形式的克隆h5F9G4、VH1.8/VL1.1、VH1.8/VL1.6和VH1.8/VL1.6-DI在吞噬作用的流式细胞术测定中的相对效力。对于针对来自供体1(图14A)、供体2(图14B)和供体3(图14C)的细胞分析的所有克隆，所有克隆均完全保留了h5F9G4的效力或其效力相对于后者有所提高，这通过完全重叠的应答曲线证明。
尽管已经参考优选实施例或示例性实施例描述了本发明，但是本领域的技术人员将认识到，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以对本发明进行各种修改和变化，并且本文中清楚地设想到了此类修改。既不旨在对本文所公开的和在所附权利要求中阐述的具体实施例进行限制，也不应推断出任何限制。
既不旨在对本文所公开的和在所附权利要求中阐述的具体实施例进行限制，也不应推断出任何限制。本文所引用的所有文档或文档部分，包含但不限于专利、专利申请、文章、书籍和论文，特此明确地出于任何目的通过引用整体并入。如果所并入文档或文档部分中的一个或多个定义的术语与本申请中所述术语的定义相矛盾，则以本申请中出现的定义为准。然而，对本文所引用的任何参考文献、文章、出版物、专利、专利出版物和专利申请的提及不并且不应当被视为对其构成有效的现有技术或形成世界上任何国家的公知常识的一部分的承认或任何形式暗示。
表1.此处所定义的鼠抗CD47 CDR的氨基酸序列(“统一”方案)与替代性定义的比较。
表2.5F9G4鼠抗CD47 v结构域(m5F9G4)和人种系CDR移植物(h5F9G4)的氨基酸序列。
1用于基于IMGT系统进行移植的人种系定义。2CDR残基以粗体加下划线表示。如上所述，本稿件中使用的“统一”CDR定义是相比于经典Kabat定义的扩展定义。上文的每个序列按以下顺序示出骨架区(FR)和CDR：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。3移植物在骨架区中是完全种系的，用作CDR突变文库构建的模板。
表3.在IGKV2-28/IGHV5-51背景下来自269个独特的抗CD47 v结构域的独特CDR的氨基酸序列。
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表4.独特的文库源性和设计人/食蟹猴交叉反应性抗CD47 IgG的CDR的氨基酸序列。
/>
/>
/>
表5.设计前导IgG的HTRF表位竞争IC50值。
表6.单体Fab与人和食蟹猴CD47的稳态KD结合亲和力。
表7.抗体可变区氨基酸序列的实例。
VH1.8/VL1.6
重链可变(VH)区
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYAMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTKYNQKFQGRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGFRAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:1)
轻链可变(VL)区
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNANTYLGWYLQKPGQSPQLLIYKGSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQASHVPYTFGQGTKLEIK(SEQID NO:2)
VH1.8/VL1.6-DI
重链可变(VH)区
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYAMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTKYNQKFQGRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGFRAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:3)
轻链可变(VL)区
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNANTYLGWYLQKPGQSPQLAIYKGSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDAGVYYCFQASHVPYTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:4)
VH1.8/VL1.1
重链可变(VH)区
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYAMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTKYNQKFQGRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGFRAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:5)
轻链可变(VL)区
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGNTYLGWYLQKPGQSPQLLIYKGSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQASHVPYTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:6)
VH1.8/VL1.5
重链可变(VH)区
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYAMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTKYNQKFQGRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGFRAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:7)
轻链可变(VL)区
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNAYNYLGWYLQKPGQSPQLLIYKGSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQASHVPYTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:8)
VH1.8/VL1.4
重链可变(VH)区
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYAMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTKYNQKFQGRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGFRAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:9)
轻链可变(VL)区
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNAYNYLGWYLQKPGQSPQLLIYKGSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQASQVPYTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:10)
VH1.8/VL1.3
重链可变(VH)区
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYAMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTKYNQKFQGRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGFRAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:11)
轻链可变(VL)区
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNANTYLGWYLQKPGQSPQLLIYKGSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQASQVPYTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:12)
VH1.8/VL1.2
重链可变(VH)区
QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYTFTNYAMHWVRQAPGQRLEWMGTIYPGNDDTKYNQKFQGRVTITADTSASTAYMELSSLRSEDTAVYYCARGGFRAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:13)
轻链可变(VL)区
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGNTYLGWYLQKPGQSPQLLIYKGSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCFQASQVPYTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:14)
D6
重链可变(VH)区
EVQLVQSGAEVKKPGESLKISCKGSGYSFTNYNIHWVRQMPGKGLEWMGTIYPGNSDTSYNPSFQGQVTISADKSISTAYLQWSSLKASDTAMYYCARGGVRAMDYWGQGTLVTVSS(SEQ ID NO:15)
轻链可变(VL)区
DIVMTQSPLSLPVTPGEPASISCRSSQSLLHSNGNTYLGWYLQKPGQSPQLLIYKGSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQASQVPYTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:16)
表8.抗体Fc区氨基酸序列的实例。
人IgG4野生型
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQED PEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ ID NO:17)
人IgG4(S228P)
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQED PEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGK(SEQ ID NO:18)
人IgG1野生型
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:19)
人IgG1-3M
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:20)
人IgG2野生型
ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDISVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:21)
人IgG1野生型“REEM”同种异型
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:22)
人IgG1-3M“REEM”同种异型
ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:23)
表9.CD47蛋白氨基酸序列的实例。
人CD47序列
MWPLVAALLLGSACCGSAQLLFNKTKSVEFTFCNDTVVIPCFVTNMEAQNTTEVYVKWKFKGRDIYTFDGALNKSTVPTDFSSAKIEVSQLLKGDASLKMDKSDAVSHTGNYTCEVTELTREGETIIELKYRVVSWFSPNENILIVIFPIFAILLFWGQFGIKTLKYRSGGMDEKTIALLVAGLVITVIVIVGAILFVPGEYSLKNATGLGLIVTSTGILILLHYYVFSTAIGLTSFVIAILVIQVIAYILAVVGLSLCIAACIPMHGPLLISGLSILALAQLLGLVYMKFVASNQKTIQPPRKAVEEPLNAFKESKGMMNDE(SEQ ID NO:24)
食蟹猴CD47序列
MWPLVAALLLGSACCGSAQLLFNKTKSVEFTFCNDTVVIPCFVTNMEAQNTTEVYVKWKFKGRDIYTFDGALNKSTAPANFSSAKIEVSQLLKGDASLKMDKSDAVSHTGNYTCEVTELTREGETIIELKYRVVSWFSPNENILIVIFPIFAILLFWGQFGIKTLKYRSGGMDEKTIALLVAGLMITVIVIVGAILFVPGEYSLKNATGLGLIVTSTGILILLHYYVFSTAIGLTSFVIAILVIQVIAYILAVVGLSLCIAACIPMHGPLLISGLSILALAQLLGLVYMKFVASNQKTIQPPRKAVEEPLNAFKESKGMMNDE(SEQ ID NO:25)
序列表
<110> ULTRAHUMAN TWO有限公司（ULTRAHUMAN TWO LIMITED）
<120> CD47结合剂
<130> ULTW-001/02WO 332945-2003
<150> GB 1813693.7
<151> 2018-08-22
<150> GB 1804860.3
<151> 2018-03-27
<160> 333
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VH1.8/VL1.6重链可变（VH）区
<400> 1
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Phe Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 2
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VH1.8/VL1.6轻链可变（VL）区
<400> 2
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Ala Asn Thr Tyr Leu Gly Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Gly Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 3
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VH1.8/VL1.6-DI重链可变（VH）区
<400> 3
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Phe Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 4
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VH1.8/VL1.6-DI轻链可变（VL）区
<400> 4
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Ala Asn Thr Tyr Leu Gly Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Ala Ile Tyr Lys Gly Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Ala Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 5
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VH1.8/VL1.1重链可变（VH）区
<400> 5
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Phe Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 6
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VH1.8/VL1.1轻链可变（VL）区
<400> 6
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Gly Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 7
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VH1.8/VL1.5重链可变（VH）区
<400> 7
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Phe Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 8
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VH1.8/VL1.5轻链可变（VL）区
<400> 8
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Ala Tyr Asn Tyr Leu Gly Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Gly Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 9
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VH1.8/VL1.4重链可变（VH）区
<400> 9
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Phe Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 10
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VH1.8/VL1.4轻链可变（VL）区
<400> 10
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Ala Tyr Asn Tyr Leu Gly Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Gly Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Ser Gln Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 11
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VH1.8/VL1.3重链可变（VH）区
<400> 11
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Phe Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 12
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VH1.8/VL1.3轻链可变（VL）区
<400> 12
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Ala Asn Thr Tyr Leu Gly Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Gly Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Ser Gln Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 13
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VH1.8/VL1.2重链可变（VH）区
<400> 13
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Phe Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 14
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VH1.8/VL1.2轻链可变（VL）区
<400> 14
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Gly Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
85 90 95
Ser Gln Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 15
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> D6重链可变（VH）区
<400> 15
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Asn Ile His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Val Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 16
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> D6轻链可变（VL）区
<400> 16
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Gly Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Met Gln Ala
85 90 95
Ser Gln Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 17
<211> 327
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 17
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 18
<211> 327
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 18
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 19
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 19
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 20
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 20
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu
225 230 235 240
Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 21
<211> 326
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 21
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp
115 120 125
Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp
130 135 140
Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly
145 150 155 160
Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn
165 170 175
Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp
180 185 190
Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro
195 200 205
Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu
210 215 220
Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn
225 230 235 240
Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile
245 250 255
Ser Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr
260 265 270
Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys
275 280 285
Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys
290 295 300
Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu
305 310 315 320
Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 22
<211> 330
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 22
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr
245 250 255
Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn
260 265 270
Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe
275 280 285
Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn
290 295 300
Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr
305 310 315 320
Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325 330
<210> 23
<211> 329
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 23
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys
1 5 10 15
Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr
65 70 75 80
Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys
100 105 110
Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro
115 120 125
Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys
130 135 140
Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp
145 150 155 160
Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu
165 170 175
Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu
180 185 190
His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn
195 200 205
Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly
210 215 220
Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu
225 230 235 240
Met Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro
245 250 255
Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn
260 265 270
Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu
275 280 285
Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val
290 295 300
Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln
305 310 315 320
Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
325
<210> 24
<211> 323
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 24
Met Trp Pro Leu Val Ala Ala Leu Leu Leu Gly Ser Ala Cys Cys Gly
1 5 10 15
Ser Ala Gln Leu Leu Phe Asn Lys Thr Lys Ser Val Glu Phe Thr Phe
20 25 30
Cys Asn Asp Thr Val Val Ile Pro Cys Phe Val Thr Asn Met Glu Ala
35 40 45
Gln Asn Thr Thr Glu Val Tyr Val Lys Trp Lys Phe Lys Gly Arg Asp
50 55 60
Ile Tyr Thr Phe Asp Gly Ala Leu Asn Lys Ser Thr Val Pro Thr Asp
65 70 75 80
Phe Ser Ser Ala Lys Ile Glu Val Ser Gln Leu Leu Lys Gly Asp Ala
85 90 95
Ser Leu Lys Met Asp Lys Ser Asp Ala Val Ser His Thr Gly Asn Tyr
100 105 110
Thr Cys Glu Val Thr Glu Leu Thr Arg Glu Gly Glu Thr Ile Ile Glu
115 120 125
Leu Lys Tyr Arg Val Val Ser Trp Phe Ser Pro Asn Glu Asn Ile Leu
130 135 140
Ile Val Ile Phe Pro Ile Phe Ala Ile Leu Leu Phe Trp Gly Gln Phe
145 150 155 160
Gly Ile Lys Thr Leu Lys Tyr Arg Ser Gly Gly Met Asp Glu Lys Thr
165 170 175
Ile Ala Leu Leu Val Ala Gly Leu Val Ile Thr Val Ile Val Ile Val
180 185 190
Gly Ala Ile Leu Phe Val Pro Gly Glu Tyr Ser Leu Lys Asn Ala Thr
195 200 205
Gly Leu Gly Leu Ile Val Thr Ser Thr Gly Ile Leu Ile Leu Leu His
210 215 220
Tyr Tyr Val Phe Ser Thr Ala Ile Gly Leu Thr Ser Phe Val Ile Ala
225 230 235 240
Ile Leu Val Ile Gln Val Ile Ala Tyr Ile Leu Ala Val Val Gly Leu
245 250 255
Ser Leu Cys Ile Ala Ala Cys Ile Pro Met His Gly Pro Leu Leu Ile
260 265 270
Ser Gly Leu Ser Ile Leu Ala Leu Ala Gln Leu Leu Gly Leu Val Tyr
275 280 285
Met Lys Phe Val Ala Ser Asn Gln Lys Thr Ile Gln Pro Pro Arg Lys
290 295 300
Ala Val Glu Glu Pro Leu Asn Ala Phe Lys Glu Ser Lys Gly Met Met
305 310 315 320
Asn Asp Glu
<210> 25
<211> 323
<212> PRT
<213> 食蟹猴（Macaca fascicularis）
<400> 25
Met Trp Pro Leu Val Ala Ala Leu Leu Leu Gly Ser Ala Cys Cys Gly
1 5 10 15
Ser Ala Gln Leu Leu Phe Asn Lys Thr Lys Ser Val Glu Phe Thr Phe
20 25 30
Cys Asn Asp Thr Val Val Ile Pro Cys Phe Val Thr Asn Met Glu Ala
35 40 45
Gln Asn Thr Thr Glu Val Tyr Val Lys Trp Lys Phe Lys Gly Arg Asp
50 55 60
Ile Tyr Thr Phe Asp Gly Ala Leu Asn Lys Ser Thr Ala Pro Ala Asn
65 70 75 80
Phe Ser Ser Ala Lys Ile Glu Val Ser Gln Leu Leu Lys Gly Asp Ala
85 90 95
Ser Leu Lys Met Asp Lys Ser Asp Ala Val Ser His Thr Gly Asn Tyr
100 105 110
Thr Cys Glu Val Thr Glu Leu Thr Arg Glu Gly Glu Thr Ile Ile Glu
115 120 125
Leu Lys Tyr Arg Val Val Ser Trp Phe Ser Pro Asn Glu Asn Ile Leu
130 135 140
Ile Val Ile Phe Pro Ile Phe Ala Ile Leu Leu Phe Trp Gly Gln Phe
145 150 155 160
Gly Ile Lys Thr Leu Lys Tyr Arg Ser Gly Gly Met Asp Glu Lys Thr
165 170 175
Ile Ala Leu Leu Val Ala Gly Leu Met Ile Thr Val Ile Val Ile Val
180 185 190
Gly Ala Ile Leu Phe Val Pro Gly Glu Tyr Ser Leu Lys Asn Ala Thr
195 200 205
Gly Leu Gly Leu Ile Val Thr Ser Thr Gly Ile Leu Ile Leu Leu His
210 215 220
Tyr Tyr Val Phe Ser Thr Ala Ile Gly Leu Thr Ser Phe Val Ile Ala
225 230 235 240
Ile Leu Val Ile Gln Val Ile Ala Tyr Ile Leu Ala Val Val Gly Leu
245 250 255
Ser Leu Cys Ile Ala Ala Cys Ile Pro Met His Gly Pro Leu Leu Ile
260 265 270
Ser Gly Leu Ser Ile Leu Ala Leu Ala Gln Leu Leu Gly Leu Val Tyr
275 280 285
Met Lys Phe Val Ala Ser Asn Gln Lys Thr Ile Gln Pro Pro Arg Lys
290 295 300
Ala Val Glu Glu Pro Leu Asn Ala Phe Lys Glu Ser Lys Gly Met Met
305 310 315 320
Asn Asp Glu
<210> 26
<211> 5
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 26
Arg Asp Glu Leu Thr
1 5
<210> 27
<211> 4
<212> PRT
<213> 智人（Homo sapiens）
<400> 27
Arg Glu Glu Met
1
<210> 28
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR1
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa可以是Asn或Asn的保守取代
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa可以是Asn或Asn的保守取代
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa可以是Met或Met的保守取代
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa可以是His或任何氨基酸
<400> 28
Gly Tyr Ser Phe Thr Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210> 29
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa可以是Met或Met的保守取代
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa可以是Thr或任何氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa可以是Asn或任何氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa可以是Asp或任何氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> Xaa可以是Ser或任何氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (14)..(14)
<223> Xaa可以是Asn或任何氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (15)..(15)
<223> Xaa可以是Gln或任何氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (16)..(16)
<223> Xaa可以是Lys或任何氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (18)..(18)
<223> Xaa可以是Gln或Lys
<220>
<221> misc_feature
<222> (19)..(19)
<223> Xaa可以是Gly或Asp
<400> 29
Xaa Gly Xaa Ile Tyr Pro Gly Xaa Xaa Asp Thr Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
Phe Xaa Xaa
<210> 30
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa可以是Gly或任何氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa可以是Tyr或任何氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa可以是Ala或任何氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa可以是Met或任何氨基酸
<400> 30
Xaa Gly Xaa Arg Xaa Xaa Asp Tyr
1 5
<210> 31
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR1
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa可以是Asn或任何氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa可以是Asn或任何氨基酸
<400> 31
Gly Tyr Thr Phe Thr Xaa Tyr Xaa Met His
1 5 10
<210> 32
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa可以是Asp或任何氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> Xaa可以是Ser或任何氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (14)..(14)
<223> Xaa可以是Asn或任何氨基酸
<400> 32
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Xaa Thr Xaa Tyr Xaa Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 33
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5F9G4鼠/人源化抗体HCDR1
<400> 33
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Asn Met His
1 5 10
<210> 34
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5F9G4鼠/人源化抗体HCDR2
<400> 34
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys
1 5 10 15
Phe Lys Asp
<210> 35
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5F9G4鼠/人源化抗体HCDR3
<400> 35
Gly Gly Tyr Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 36
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa可以是Ile或Ile的保守取代
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> Xaa可以是Val或Val的保守取代
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa可以是Tyr或Tyr的保守取代
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa可以是Asn或任何氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (11)..(11)
<223> Xaa可以是Gly或任何氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> Xaa可以是Asn或任何氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (13)..(13)
<223> Xaa可以是Thr或任何氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (16)..(16)
<223> Xaa可以是Gly或任何氨基酸
<400> 36
Arg Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Leu Xaa
1 5 10 15
<210> 37
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR2
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(2)
<223> Xaa可以是Val或任何氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa可以是Phe或任何氨基酸
<400> 37
Lys Xaa Ser Asn Arg Xaa Ser
1 5
<210> 38
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa可以是Phe或任何氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa可以是Gly或任何氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> Xaa可以是Ser或任何氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa可以是His或任何氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa可以是Val或任何氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa可以是Thr或任何氨基酸
<400> 38
Xaa Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Tyr Xaa
1 5
<210> 39
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5F9G4鼠/人源化抗体LCDR1
<400> 39
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 40
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5F9G4鼠/人源化抗体LCDR2
<400> 40
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 41
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 5F9G4鼠/人源化抗体LCDR3
<400> 41
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 42
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR1
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa可以是Ser或Ser的保守取代
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa可以是Asn或Asn的保守取代
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa可以是Asn或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa可以是Met或Met的保守取代
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa可以是His或任何其它氨基酸
<400> 42
Gly Tyr Xaa Phe Thr Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210> 43
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa可以是Met或Met的保守取代
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(2)
<223> Xaa可以是Gly或Gly的保守取代
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa可以是Thr或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa可以是Asn或Asn的保守取代
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa可以是Asp或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa可以是Asp或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> Xaa可以是Ser或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (14)..(14)
<223> Xaa可以是Asn或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (15)..(15)
<223> Xaa可以是Gln或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (16)..(16)
<223> Xaa可以是Lys或任何其它氨基酸
<400> 43
Xaa Xaa Xaa Ile Tyr Pro Gly Xaa Xaa Xaa Thr Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 44
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa可以是Gly或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa可以是Tyr或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa可以是Ala或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa可以是Met或任何其它氨基酸
<400> 44
Xaa Gly Xaa Arg Xaa Xaa Asp Tyr
1 5
<210> 45
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa可以是Ile或Ile的保守取代
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> Xaa可以是Val或Val的保守取代
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa可以是Tyr或Tyr的保守取代
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa可以是Asn或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (11)..(11)
<223> Xaa可以是Gly或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> Xaa可以是Asn或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (13)..(13)
<223> Xaa可以是Thr或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (16)..(16)
<223> Xaa可以是Gly或任何其它氨基酸
<400> 45
Arg Ser Ser Gln Ser Xaa Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Leu Xaa
1 5 10 15
<210> 46
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR2
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(2)
<223> Xaa可以是Val或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa可以是Phe或任何其它氨基酸
<400> 46
Lys Xaa Ser Asn Arg Xaa Ser
1 5
<210> 47
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa可以是Phe或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa可以是Gly或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> Xaa可以是Ser或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa可以是His或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa可以是Val或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa可以是Thr或任何其它氨基酸
<400> 47
Xaa Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Tyr Xaa
1 5
<210> 48
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR1
<400> 48
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Ala Met His
1 5 10
<210> 49
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 49
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Asn Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 50
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 50
Gly Gly Phe Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 51
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<400> 51
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 52
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR2
<400> 52
Lys Gly Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 53
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 53
Phe Gln Ala Ser His Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 54
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 54
Phe Gln Ala Ser Gln Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 55
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<400> 55
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Ala Asn Thr Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 56
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<400> 56
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Ala Tyr Asn Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 57
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR1
<400> 57
Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr Asn Ile His
1 5 10
<210> 58
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 58
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Asn Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 59
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 59
Gly Gly Tyr Arg Ala Glu Asp Tyr
1 5
<210> 60
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 60
Met Gln Gly Ser His Val Pro Tyr
1 5
<210> 61
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 61
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Pro Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 62
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 62
Gly Gly Val Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 63
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 63
Met Gln Ala Ser Gln Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 64
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分VH CDR
<400> 64
Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr Asn Met His
1 5 10
<210> 65
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分VH CDR
<400> 65
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 66
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分VH CDR
<400> 66
Gly Gly Tyr Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 67
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分VL CDR
<400> 67
Arg Ser Ser Gly Ser Ile Val Tyr Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 68
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分VL CDR
<400> 68
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 69
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分VL CDR
<400> 69
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 70
<211> 40
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<400> 70
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly Trp
35 40
<210> 71
<211> 40
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR1
<400> 71
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala
35 40
<210> 72
<211> 37
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 72
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
1 5 10 15
Ala Arg Gly Gly Tyr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
20 25 30
Val Thr Val Ser Ser
35
<210> 73
<211> 77
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR2
<400> 73
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Gly Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
65 70 75
<210> 74
<211> 35
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 74
Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys
1 5 10 15
Phe Gln Ala Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu
20 25 30
Glu Ile Lys
35
<210> 75
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa可以是Met或Met的保守取代
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(2)
<223> Xaa可以是Gly或Gly的保守取代
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa可以是Thr或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa可以是Asn或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa可以是Asp或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa可以是Asp或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> Xaa可以是Ser或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (14)..(14)
<223> Xaa可以是Asn或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (15)..(15)
<223> Xaa可以是Gln或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (16)..(16)
<223> Xaa可以是Lys或任何其它氨基酸
<400> 75
Xaa Xaa Xaa Ile Tyr Pro Gly Xaa Xaa Xaa Thr Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 76
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR1
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa可以是Thr或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa可以是Asn、Ser或Asp
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa可以是Asn、Ser或Ala
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa可以是Met或Ile
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa可以是His或Gly
<400> 76
Gly Tyr Xaa Phe Thr Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210> 77
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa可以是Met、Ile或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(2)
<223> Xaa可以是Gly、Ala或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa可以是Thr或Ile
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa可以是Asn或Asp
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa可以是Asp或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa可以是Asp或Asn
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> Xaa可以是Ser、Lys或Arg
<220>
<221> misc_feature
<222> (14)..(14)
<223> Xaa可以是Asn、Ser或His
<220>
<221> misc_feature
<222> (15)..(15)
<223> Xaa可以是Gln、Pro或His
<220>
<221> misc_feature
<222> (16)..(16)
<223> Xaa可以是Lys或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (18)..(18)
<223> Xaa可以是Lys或Gln
<220>
<221> misc_feature
<222> (19)..(19)
<223> Xaa可以是Asp或Gly
<400> 77
Xaa Xaa Xaa Ile Tyr Pro Gly Xaa Xaa Xaa Thr Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
Phe Xaa Xaa
<210> 78
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa可以是Gly或Gln
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa可以是Tyr、Ala、Cys、Asp、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Lys、
Leu、Met、Asn、Gln、Arg、Ser、Thr、Val或Trp
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa可以是Ala、Ile、Thr、Val或Trp
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa可以是Met、Ala、Glu、Lys、Leu、Pro、Gln、Arg、Ser、Thr、
Val或Trp
<400> 78
Xaa Gly Xaa Arg Xaa Xaa Asp Tyr
1 5
<210> 79
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR1
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa可以是Thr或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa可以是Asn或Asp
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa可以是Asn或Ala
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa可以是Met或Ile
<400> 79
Gly Tyr Xaa Phe Thr Xaa Tyr Xaa Xaa His
1 5 10
<210> 80
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa可以是Asn或Asp
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa可以是Asp或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa可以是Asp或Asn
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> Xaa可以是Ser、Lys或Arg
<220>
<221> misc_feature
<222> (14)..(14)
<223> Xaa可以是Asn或Ser
<220>
<221> misc_feature
<222> (15)..(15)
<223> Xaa可以是Gln、Pro或His
<220>
<221> misc_feature
<222> (16)..(16)
<223> Xaa可以是Lys或Ser
<400> 80
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Xaa Xaa Xaa Thr Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 81
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa可以是Tyr、Glu、Phe、Ile、Lys、Asn或Val
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa可以是Met、Glu或Gln
<400> 81
Gly Gly Xaa Arg Ala Xaa Asp Tyr
1 5
<210> 82
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<220>
<221> misc_feature
<222> (7)..(7)
<223> Xaa可以是Val或Leu
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa可以是Tyr或His
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa可以是Asn、Gly、Ser或Lys
<220>
<221> misc_feature
<222> (11)..(11)
<223> Xaa可以是Gly、Ala或Tyr
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> Xaa可以是Asn或Tyr
<220>
<221> misc_feature
<222> (13)..(13)
<223> Xaa可以是Thr或Asn
<220>
<221> misc_feature
<222> (16)..(16)
<223> Xaa可以是Gly或Asp
<400> 82
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Xaa Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Leu Xaa
1 5 10 15
<210> 83
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR2
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa可以是Phe或Ala
<400> 83
Lys Gly Ser Asn Arg Xaa Ser
1 5
<210> 84
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa可以是Phe或Met
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa可以是Gly或Ala
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa可以是His或Gln
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa可以是Thr或Ile
<400> 84
Xaa Gln Xaa Ser Xaa Val Pro Tyr Xaa
1 5
<210> 85
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa可以是Asn或Lys
<220>
<221> misc_feature
<222> (11)..(11)
<223> Xaa可以是Gly、Ala或Tyr
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> Xaa可以是Asn、Gln或Tyr
<220>
<221> misc_feature
<222> (13)..(13)
<223> Xaa可以是Thr或Asn
<400> 85
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Xaa Xaa Xaa Xaa Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 86
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR2
<220>
<221> misc_feature
<222> (2)..(2)
<223> Xaa可以是Val或Gly
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa可以是Phe、Ala或Ser
<400> 86
Lys Xaa Ser Asn Arg Xaa Ser
1 5
<210> 87
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(1)
<223> Xaa可以是Phe、Leu或Met
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa可以是Gly或Ala
<220>
<221> misc_feature
<222> (4)..(4)
<223> Xaa可以是Ser、Thr、Leu或Met
<220>
<221> misc_feature
<222> (5)..(5)
<223> Xaa可以是His、Gln或Arg
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa可以是Val、Ile或Thr
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa可以是Thr或Ile
<400> 87
Xaa Gln Xaa Xaa Xaa Xaa Pro Tyr Xaa
1 5
<210> 88
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR1
<400> 88
Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Tyr Asn Met His
1 5 10
<210> 89
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR1
<400> 89
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Asn Ile His
1 5 10
<210> 90
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 90
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Ser Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 91
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 91
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Ser Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 92
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 92
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 93
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 93
Gly Gly Lys Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 94
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 94
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 95
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 95
Gly Gly Tyr Arg Ala Gln Asp Tyr
1 5
<210> 96
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 96
Met Gln Ala Ser His Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 97
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 97
Met Gln Gly Ser His Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 98
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 98
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Asn Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 99
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 99
Gly Gly Ile Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 100
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 100
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Tyr Ile
1 5
<210> 101
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 101
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Arg Tyr Asn Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 102
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在HCDR2中具有高MHC II类结合亲和力的人种系肽序列
<400> 102
Phe Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala
1 5
<210> 103
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 在HCDR2中具有高MHC II类结合亲和力的人种系肽序列
<400> 103
Phe Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala
1 5
<210> 104
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR1
<220>
<221> misc_feature
<222> (6)..(6)
<223> Xaa可以是Asn或Asn的保守取代
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa可以是Asn或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa可以是Met或Met的保守取代
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa可以是His或任何其它氨基酸
<400> 104
Gly Tyr Thr Phe Thr Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa
1 5 10
<210> 105
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<220>
<221> misc_feature
<222> (3)..(3)
<223> Xaa可以是Thr或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (8)..(8)
<223> Xaa可以是Asn或Asn的保守取代
<220>
<221> misc_feature
<222> (9)..(9)
<223> Xaa可以是Asp或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (10)..(10)
<223> Xaa可以是Asp或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (12)..(12)
<223> Xaa可以是Ser或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (14)..(14)
<223> Xaa可以是Asn或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (15)..(15)
<223> Xaa可以是Gln或任何其它氨基酸
<220>
<221> misc_feature
<222> (16)..(16)
<223> Xaa可以是Lys或任何其它氨基酸
<400> 105
Met Gly Xaa Ile Tyr Pro Gly Xaa Xaa Xaa Thr Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 106
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> TCED+肽
<400> 106
Ile Val Tyr Ser Asn Gly Asn Thr Tyr
1 5
<210> 107
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> HAF和TCED+肽
<400> 107
Tyr Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala
1 5
<210> 108
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> TCED+肽
<400> 108
Tyr Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala
1 5
<210> 109
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> TCED+肽
<400> 109
Tyr Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala
1 5
<210> 110
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> TCED+肽
<400> 110
Tyr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln
1 5
<210> 111
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> TCED+肽
<400> 111
Tyr Arg Ala Glu Asp Tyr Trp Gly Gln
1 5
<210> 112
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> HAF肽
<400> 112
Leu Ile Tyr Lys Gly Ser Asn Arg Phe
1 5
<210> 113
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> HAF肽
<400> 113
Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Ala
1 5
<210> 114
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 114
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Asn Met His
1 5 10
<210> 115
<211> 5
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 115
Asn Tyr Asn Met His
1 5
<210> 116
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 116
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
1 5
<210> 117
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 117
Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Asn
1 5
<210> 118
<211> 6
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 118
Thr Asn Tyr Asn Met His
1 5
<210> 119
<211> 19
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 119
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys
1 5 10 15
Phe Lys Asp
<210> 120
<211> 17
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 120
Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys
1 5 10 15
Asp
<210> 121
<211> 6
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 121
Tyr Pro Gly Asn Asp Asp
1 5
<210> 122
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 122
Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr
1 5
<210> 123
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 123
Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Asp
1 5 10 15
<210> 124
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 124
Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser
1 5 10
<210> 125
<211> 12
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 125
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser
1 5 10
<210> 126
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 126
Gly Gly Tyr Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 127
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 127
Ala Arg Gly Gly Tyr Arg Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 128
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 128
Gly Gly Tyr Arg Ala Met Asp
1 5
<210> 129
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 129
Ala Arg Gly Gly Tyr Arg Ala Met Asp
1 5
<210> 130
<211> 16
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 130
Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 131
<211> 11
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 131
Gln Ser Ile Val Tyr Ser Asn Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 132
<211> 13
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 132
Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser Asn Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 133
<211> 12
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 133
Val Tyr Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly Trp Tyr
1 5 10
<210> 134
<211> 7
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 134
Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser
1 5
<210> 135
<211> 10
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 135
Ala Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe
1 5 10
<210> 136
<211> 9
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 136
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 137
<211> 6
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 137
Gly Ser His Val Pro Tyr
1 5
<210> 138
<211> 8
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 138
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Tyr
1 5
<210> 139
<211> 117
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 139
Gln Val Gln Leu Gln Gln Pro Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Met Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Lys Gln Thr Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Lys Ala Thr Leu Thr Ala Asp Lys Ser Ser Ser Ala Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 140
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> h5F9G4-VH IGHV1-3
<400> 140
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Asp Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 141
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> VH移植物IGHV5-51
<400> 141
Glu Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Glu
1 5 10 15
Ser Leu Lys Ile Ser Cys Lys Gly Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Arg Gln Met Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Gln Val Thr Ile Ser Ala Asp Lys Ser Ile Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Trp Ser Ser Leu Lys Ala Ser Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Gly Tyr Arg Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 142
<211> 112
<212> PRT
<213> 小家鼠（Mus musculus）
<400> 142
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr His Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 143
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> h5F9G4-VL IGKV2-28
<400> 143
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 144
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> IGKV2-28
<400> 144
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val Tyr Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 145
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<400> 145
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 146
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<400> 146
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 147
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<400> 147
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Gly Tyr Asn Thr Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 148
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<400> 148
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 149
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<400> 149
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Tyr Asn Thr Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 150
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<400> 150
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Gln Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 151
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<400> 151
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 152
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<400> 152
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 153
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<400> 153
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Gly Gly Asn Thr Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 154
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<400> 154
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Gly Tyr Asn Thr Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 155
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<400> 155
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Asp
1 5 10 15
<210> 156
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<400> 156
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 157
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<400> 157
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Gly Gln Thr Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 158
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<400> 158
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Asn Tyr Asn Thr Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 159
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<400> 159
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser Ser Gly Asn Thr Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 160
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<400> 160
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Gln Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 161
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<400> 161
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 162
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<400> 162
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val Tyr Ser Asn Tyr Asn Thr Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 163
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR2
<400> 163
Lys Val Ser Asn Arg Ala Ser
1 5
<210> 164
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR2
<400> 164
Lys Val Ser Asn Arg Ser Ser
1 5
<210> 165
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 165
Phe Gln Ala Leu His Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 166
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 166
Phe Gln Ala Met Gln Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 167
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 167
Phe Gln Ala Ser His Ile Pro Tyr Thr
1 5
<210> 168
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 168
Phe Gln Ala Ser His Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 169
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 169
Phe Gln Ala Ser Gln Ile Pro Tyr Thr
1 5
<210> 170
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 170
Phe Gln Ala Ser Gln Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 171
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 171
Phe Gln Ala Ser Arg Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 172
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 172
Phe Gln Ala Thr Gln Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 173
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 173
Phe Gln Gly Leu Gln Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 174
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 174
Phe Gln Gly Ser His Ile Pro Tyr Thr
1 5
<210> 175
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 175
Phe Gln Gly Ser His Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 176
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 176
Phe Gln Gly Ser Gln Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 177
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 177
Phe Gln Gly Ser Gln Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 178
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 178
Leu Gln Gly Ser His Ile Pro Tyr Thr
1 5
<210> 179
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 179
Leu Gln Gly Ser His Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 180
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 180
Leu Gln Gly Ser His Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 181
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 181
Leu Gln Gly Ser Gln Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 182
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 182
Leu Gln Gly Ser Gln Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 183
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 183
Met Gln Ala Leu Gln Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 184
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 184
Met Gln Ala Ser His Ile Pro Tyr Thr
1 5
<210> 185
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 185
Met Gln Ala Ser His Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 186
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 186
Met Gln Ala Ser Gln Ile Pro Tyr Thr
1 5
<210> 187
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 187
Met Gln Ala Ser Gln Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 188
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 188
Met Gln Gly Leu His Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 189
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 189
Met Gln Gly Leu Gln Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 190
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 190
Met Gln Gly Ser His Ile Pro Tyr Thr
1 5
<210> 191
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 191
Met Gln Gly Ser His Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 192
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 192
Met Gln Gly Ser Gln Ile Pro Tyr Thr
1 5
<210> 193
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 193
Met Gln Gly Ser Gln Thr Pro Tyr Thr
1 5
<210> 194
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR3
<400> 194
Met Gln Gly Ser Gln Val Pro Tyr Thr
1 5
<210> 195
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR1
<400> 195
Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr Asn Ile Gly
1 5 10
<210> 196
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR1
<400> 196
Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr Asn Met His
1 5 10
<210> 197
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR1
<400> 197
Gly Tyr Ser Phe Thr Asn Tyr Ser Ile His
1 5 10
<210> 198
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR1
<400> 198
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Asn Ile His
1 5 10
<210> 199
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR1
<400> 199
Gly Tyr Ser Phe Thr Ser Tyr Asn Met His
1 5 10
<210> 200
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 200
Ile Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Arg Tyr Asn Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 201
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 201
Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Arg Tyr Asn Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 202
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 202
Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Arg Tyr Asn Pro Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 203
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 203
Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 204
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 204
Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 205
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 205
Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Asn Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 206
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 206
Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Asn Pro Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 207
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 207
Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Asn Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 208
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 208
Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 209
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 209
Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Arg Tyr Asn Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 210
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 210
Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Arg Tyr Asn Pro Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 211
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 211
Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Arg Tyr Asn Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 212
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 212
Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Arg Tyr Asn Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 213
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 213
Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Arg Tyr Asn Pro Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 214
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 214
Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Arg Tyr Asn Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 215
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 215
Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Arg Tyr Asn Gln Arg
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 216
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 216
Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Arg Tyr Asn Gln Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 217
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 217
Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 218
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 218
Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 219
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 219
Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 220
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 220
Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Pro Arg
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 221
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 221
Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Pro Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 222
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 222
Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 223
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 223
Met Gly Ile Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Ser Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 224
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 224
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Arg Tyr Asn Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 225
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 225
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Arg Tyr Asn Pro Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 226
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 226
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Arg Tyr Asn Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 227
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 227
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Arg Tyr Asn Gln Asn
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 228
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 228
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Arg Tyr Asn Gln Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 229
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 229
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 230
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 230
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 231
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 231
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Arg Tyr Ser Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 232
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 232
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Ser Tyr Ser Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 233
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 233
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Pro Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 234
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 234
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Asn Asp Thr Ser Tyr Asn Pro Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 235
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 235
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Lys Tyr Asn Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 236
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 236
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Asn Pro Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 237
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 237
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 238
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 238
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Arg
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 239
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 239
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 240
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 240
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 241
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 241
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Gln Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 242
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 242
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Ser Tyr Asn His Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 243
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 243
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Pro Lys
1 5 10 15
Phe His Gly
<210> 244
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 244
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Pro Arg
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 245
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 245
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Pro Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 246
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 246
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 247
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 247
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 248
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 248
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Ser Tyr Ser Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 249
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 249
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Ser Tyr Ser Pro Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 250
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 250
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Ser Asp Thr Ser Tyr Ser Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 251
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 251
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Lys Tyr Ser Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 252
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 252
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Arg Tyr Asn Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 253
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 253
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Arg Tyr Asn Pro Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 254
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 254
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Arg Tyr Asn Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 255
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 255
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Arg Tyr Asn Gln Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 256
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 256
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 257
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 257
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 258
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 258
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Arg Tyr Ser Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 259
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 259
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 260
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 260
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Pro Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 261
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 261
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asp Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 262
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 262
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 263
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 263
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Ser Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 264
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 264
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Ser Pro Arg
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 265
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 265
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Ser Pro Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 266
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 266
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Ser Gln Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 267
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 267
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Gly Thr Arg Tyr Asn Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 268
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 268
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn His Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 269
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 269
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 270
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 270
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asn Asp Thr Ser Tyr Asn Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 271
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 271
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Arg Tyr Asn His Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 272
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 272
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Arg Tyr Asn Pro Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 273
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 273
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Arg Tyr Asn Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 274
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 274
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Arg Tyr Asn Gln Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 275
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 275
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 276
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 276
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Pro Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 277
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 277
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Arg Tyr Ser Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 278
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 278
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Pro Arg
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 279
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 279
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 280
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 280
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 281
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 281
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Ser Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 282
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 282
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Ser Pro Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 283
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 283
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Ser Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 284
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 284
Met Gly Thr Ile Tyr Ser Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Ser Pro Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 285
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 285
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Arg Tyr Ser Gln Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 286
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 286
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Asn His Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 287
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 287
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Pro Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 288
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 288
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asp Thr Ser Tyr Asn Pro Ser
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 289
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 289
Gly Gly Ala Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 290
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 290
Gly Gly Cys Arg Ala Leu Asp Tyr
1 5
<210> 291
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 291
Gly Gly Cys Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 292
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 292
Gly Gly Cys Arg Ala Met Gly Tyr
1 5
<210> 293
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 293
Gly Gly Asp Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 294
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 294
Gly Gly Glu Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 295
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 295
Gly Gly Phe Arg Ala Glu Asp Tyr
1 5
<210> 296
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 296
Gly Gly Phe Arg Ala Gln Asp Tyr
1 5
<210> 297
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 297
Gly Gly Gly Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 298
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 298
Gly Gly His Arg Ala Glu Asp Tyr
1 5
<210> 299
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 299
Gly Gly His Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 300
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 300
Gly Gly Leu Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 301
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 301
Gly Gly Leu Arg Thr Met Asp Tyr
1 5
<210> 302
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 302
Gly Gly Met Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 303
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 303
Gly Gly Asn Arg Ala Lys Asp Tyr
1 5
<210> 304
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 304
Gly Gly Asn Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 305
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 305
Gly Gly Gln Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 306
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 306
Gly Gly Arg Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 307
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 307
Gly Gly Ser Arg Ala Lys Asp Tyr
1 5
<210> 308
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 308
Gly Gly Ser Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 309
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 309
Gly Gly Thr Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 310
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 310
Gly Gly Val Arg Ala Thr Asp Tyr
1 5
<210> 311
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 311
Gly Gly Trp Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 312
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 312
Gly Gly Tyr His Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 313
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 313
Gly Gly Tyr Lys Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 314
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 314
Gly Gly Tyr Arg Ala Ala Asp Tyr
1 5
<210> 315
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 315
Gly Gly Tyr Arg Ala Leu Asp Tyr
1 5
<210> 316
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 316
Gly Gly Tyr Arg Ala Pro Asp Tyr
1 5
<210> 317
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 317
Gly Gly Tyr Arg Ala Arg Asp Tyr
1 5
<210> 318
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 318
Gly Gly Tyr Arg Ala Ser Asp Tyr
1 5
<210> 319
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 319
Gly Gly Tyr Arg Ala Thr Asp Tyr
1 5
<210> 320
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 320
Gly Gly Tyr Arg Ala Val Asp Tyr
1 5
<210> 321
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 321
Gly Gly Tyr Arg Ile Met Asp Tyr
1 5
<210> 322
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 322
Gly Gly Tyr Arg Thr Glu Asp Tyr
1 5
<210> 323
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 323
Gly Gly Tyr Arg Thr Met Asp Tyr
1 5
<210> 324
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 324
Gly Gly Tyr Arg Thr Thr Asp Tyr
1 5
<210> 325
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 325
Gly Gly Tyr Arg Val Met Asp Tyr
1 5
<210> 326
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 326
Gly Gly Tyr Arg Trp Met Asp Tyr
1 5
<210> 327
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 327
Gln Gly Tyr Arg Ala Met Asp Tyr
1 5
<210> 328
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<400> 328
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Lys Gly Asn Thr Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 329
<211> 16
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR1
<400> 329
Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu His Ser Asn Tyr Asn Thr Tyr Leu Gly
1 5 10 15
<210> 330
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分LCDR2
<400> 330
Lys Gly Ser Asn Arg Ala Ser
1 5
<210> 331
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 331
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Thr Ser Tyr Asn His Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 332
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR2
<400> 332
Met Gly Thr Ile Tyr Pro Gly Asn Asp Asn Thr Lys Tyr Asn Gln Lys
1 5 10 15
Phe Gln Gly
<210> 333
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工序列（Artificial Sequence）
<220>
<223> 抗CD47抗体分子或抗原结合部分HCDR3
<400> 333
Gly Gly Asn Arg Ala Glu Asp Tyr
1 5

Claims (21)

1.一种抗CD47抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，其中
(a)VH区氨基酸序列包括GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48)的HCDR1、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQ ID NO:49)的HCDR2和GGFRAMDY(SEQ ID NO:50)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNANTYLG(SEQ ID NO:55)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和FQASHVPYT(SEQ ID NO:53)的LCDR3；或
(b)VH区氨基酸序列包括GYTFTNYAMH(SEQ ID NO:48)的HCDR1、MGTIYPGNDDTKYNQKFQG(SEQ ID NO:49)的HCDR2和GGFRAMDY(SEQ ID NO:50)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括RSSQSLLHSNGNTYLG(SEQ ID NO:51)的LCDR1、KGSNRFS(SEQ ID NO:52)的LCDR2和FQASHVPYT(SEQ ID NO:53)的LCDR3。
2.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合部分，其中
(a)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:1，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:2；
(b)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:3，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:4；或
(c)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:5，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:6。
3.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合部分，其中所述抗体是人的、人源化的或嵌合的。
4.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合部分，其中所述VH区、所述VL区或所述VH区和所述VL区两者包括一个或多个人骨架区氨基酸序列。
5.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合部分，其中所述VH区、所述VL区或所述VH区和所述VL区两者包括已经插入有所述CDR的人可变区骨架支架氨基酸序列。
6.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合部分，其中所述VH区包括已经插入有HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列的IGHV5-51或IGHV1-3人种系支架氨基酸序列。
7.根据权利要求1任一项所述的抗体或抗原结合部分，其中所述VL区包括已经插入有LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列的IGKV2-28人种系支架氨基酸序列。
8.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合部分，其中所述抗体包括免疫球蛋白恒定区。
9.根据权利要求8所述的抗体或抗原结合部分，其中所述免疫球蛋白恒定区是IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY。
10.根据权利要求9所述的抗体或抗原结合部分，其中所述免疫球蛋白恒定区是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1或IgA2。
11.根据权利要求8所述的抗体或抗原结合部分，其中所述免疫球蛋白恒定区是免疫惰性的。
12.根据权利要求8所述的抗体或抗原结合部分，其中所述免疫球蛋白恒定区是野生型人IgG4恒定区、包括氨基酸取代S228P的人IgG4恒定区、野生型人IgG1恒定区、包括氨基酸取代L234A、L235A和G237A的人IgG1恒定区或野生型人IgG2恒定区，其中所述编号是根据Kabat中的EU索引。
13.根据权利要求8所述的抗体或抗原结合部分，其中所述免疫球蛋白恒定区包括SEQID NO:17-23中的任一个。
14.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合部分，其中所述抗体或抗原结合部分是Fab、Fab'、F(ab')2、Fd、Fv或胞内抗体。
15.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合部分，其中所述抗体或抗原结合部分是scFv。
16.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合部分，其中所述抗体或抗原结合部分是单克隆的。
17.一种药物组合物，其包括根据权利要求1到16中任一项所述的抗体或抗原结合部分以及药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂。
18.一种核酸分子，其编码根据权利要求1到16中任一项所述的抗体或抗原结合部分的VH区氨基酸序列和VL区氨基酸序列。
19.一种表达载体，其包括根据权利要求18所述的核酸分子。
20.一种重组宿主细胞，其包括根据权利要求18所述的核酸分子或根据权利要求19所述的表达载体。
21.一种产生抗CD47抗体或其抗原结合部分的方法，所述方法包括：
将包括根据权利要求19所述的表达载体的重组宿主细胞在使所述核酸分子得到表达的条件下培养，由此产生所述抗体或抗原结合部分；以及
从所述宿主细胞或培养物中分离所述抗体或抗原结合部分。
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Families Citing this family (25)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7256580B2 (ja) 2017-08-18 2023-04-12 ウルトラヒューマン フォー リミティド 結合剤
EP3999107A1 (en) 2019-07-16 2022-05-25 Gilead Sciences, Inc. Hiv vaccines and methods of making and using
EP4349413A2 (en) 2019-10-18 2024-04-10 Forty Seven, Inc. Combination therapies for treating myelodysplastic syndromes and acute myeloid leukemia
CA3153636A1 (en) 2019-10-31 2021-05-06 Forty Seven, Inc. Anti-cd47 and anti-cd20 based treatment of blood cancer
IL294032A (en) 2019-12-24 2022-08-01 Carna Biosciences Inc Compounds that regulate diacylglycerol kinase
AU2021219668A1 (en) 2020-02-14 2022-08-25 Gilead Sciences, Inc. Antibodies and fusion proteins that bind to CCR8 and uses thereof
WO2022140659A2 (en) * 2020-12-23 2022-06-30 D-10 Therapeutics, Inc. Anti-cd47 antibodies and uses thereof
CA3212351A1 (en) 2021-03-12 2022-09-15 Mendus B.V. Methods of vaccination and use of cd47 blockade
TW202302145A (zh) 2021-04-14 2023-01-16 美商基利科學股份有限公司 ＣＤ４７／ＳＩＲＰα結合及ＮＥＤＤ８活化酶Ｅ１調節次單元之共抑制以用於治療癌症
KR20240025616A (ko) 2021-06-23 2024-02-27 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 다이아실글리세롤 키나제 조절 화합물
WO2022271650A1 (en) 2021-06-23 2022-12-29 Gilead Sciences, Inc. Diacylglyercol kinase modulating compounds
CN117355531A (zh) 2021-06-23 2024-01-05 吉利德科学公司 二酰基甘油激酶调节化合物
KR20240023628A (ko) 2021-06-23 2024-02-22 길리애드 사이언시즈, 인코포레이티드 디아실글리세롤 키나제 조절 화합물
TW202330504A (zh) 2021-10-28 2023-08-01 美商基利科學股份有限公司 嗒𠯤—３（２ｈ）—酮衍生物
CA3235986A1 (en) 2021-10-29 2023-05-04 Gilead Science, Inc. Cd73 compounds
US20230242508A1 (en) 2021-12-22 2023-08-03 Gilead Sciences, Inc. Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof
US20240124412A1 (en) 2021-12-22 2024-04-18 Gilead Sciences, Inc. Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof
TW202340168A (zh) 2022-01-28 2023-10-16 美商基利科學股份有限公司 Ｐａｒｐ７抑制劑
EP4245756A1 (en) 2022-03-17 2023-09-20 Gilead Sciences, Inc. Ikaros zinc finger family degraders and uses thereof
WO2023183817A1 (en) 2022-03-24 2023-09-28 Gilead Sciences, Inc. Combination therapy for treating trop-2 expressing cancers
TW202345901A (zh) 2022-04-05 2023-12-01 美商基利科學股份有限公司 用於治療結腸直腸癌之組合療法
TW202400138A (zh) 2022-04-21 2024-01-01 美商基利科學股份有限公司 Ｋｒａｓ ｇ１２ｄ調節化合物
US20240116928A1 (en) 2022-07-01 2024-04-11 Gilead Sciences, Inc. Cd73 compounds
WO2024015741A1 (en) 2022-07-12 2024-01-18 Gilead Sciences, Inc. Hiv immunogenic polypeptides and vaccines and uses thereof
WO2024064668A1 (en) 2022-09-21 2024-03-28 Gilead Sciences, Inc. FOCAL IONIZING RADIATION AND CD47/SIRPα DISRUPTION ANTICANCER COMBINATION THERAPY

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011143624A2 (en) * 2010-05-14 2011-11-17 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Humanized and chimeric monoclonal antibodies to cd47
WO2016081423A1 (en) * 2014-11-18 2016-05-26 Janssen Pharmaceutica Nv Cd47 antibodies, methods, and uses
WO2016109415A1 (en) * 2014-12-30 2016-07-07 Celgene Corporation Anti-cd47 antibodies and uses thereof
WO2017049251A2 (en) * 2015-09-18 2017-03-23 Tioma Therapeutics, Inc. Therapeutic cd47 antibodies
WO2017121771A1 (en) * 2016-01-11 2017-07-20 Blink Biomedical Sas Humanized, mouse or chimeric anti-cd47 monoclonal antibodies

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20140140989A1 (en) * 2012-02-06 2014-05-22 Inhibrx Llc Non-Platelet Depleting and Non-Red Blood Cell Depleting CD47 Antibodies and Methods of Use Thereof

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011143624A2 (en) * 2010-05-14 2011-11-17 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Humanized and chimeric monoclonal antibodies to cd47
WO2016081423A1 (en) * 2014-11-18 2016-05-26 Janssen Pharmaceutica Nv Cd47 antibodies, methods, and uses
WO2016109415A1 (en) * 2014-12-30 2016-07-07 Celgene Corporation Anti-cd47 antibodies and uses thereof
CN107530421A (zh) * 2014-12-30 2018-01-02 细胞基因公司 抗cd47抗体及其用途
WO2017049251A2 (en) * 2015-09-18 2017-03-23 Tioma Therapeutics, Inc. Therapeutic cd47 antibodies
WO2017121771A1 (en) * 2016-01-11 2017-07-20 Blink Biomedical Sas Humanized, mouse or chimeric anti-cd47 monoclonal antibodies

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Augmented binary substitution: single-pass CDR germ-lining and stablization of therapeutic antibodies;S TOWNSEND ET AL;《PNAS》;第112卷(第50期);全文 *
抗CD47单克隆抗体（B6H12）对人树突状细胞成熟及其功能的影响;俞静;《中国实验血液学杂志》;全文 *

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