CN111819199A - Pd1结合剂 - Google Patents

Abstract

本文提供了与细胞程序性死亡(PD1)特异性结合的抗体分子以及相关核酸分子、载体和宿主细胞。本文还提供了此类抗体分子的医学用途。

Description

PD1结合剂

相关申请的交叉引用

本申请要求于2018年8月16日提交的英国专利申请第1813405.6号和于2018年3月8日提交的英国专利申请第1803746.5号的权益，这些英国专利申请中的每个英国专利申请的公开内容特此通过引用整体并入。

以电子方式提交的文本文件的说明

与本申请一起以电子方式提交的文本文件的内容通过引用整体并入本文：序列表的计算机可读格式副本(文件名：ULNL_001_00WO_SeqList_ST25.txt；记录日期：2019年3月7日；文件大小：153,562字节)。

技术领域

本发明涉及与PD1(也被称为细胞程序性死亡1、PDCD1、CD279、PD-1、SLEB2、PD-l、SLE1)特异性结合的抗体分子及其医学用途。

背景技术

PD1是作为免疫球蛋白超家族的成员并且主要在T细胞上表达但还在祖B细胞上观察到的细胞表面受体。PD1与两种已知的配体PD-L1和PD-L2结合。这些配体与T细胞上的PD1的相互作用下调T细胞炎性活性，从而促进免疫自身耐受。因此，PD1被描述为免疫‘检查点’。已经表明，这种检查点活性通过促进对自身抗原具有反应性的淋巴结驻留性T细胞的凋亡(细胞程序性死亡)来使自身免疫风险最小化。重要的是，PD1连接还促进调节性(抗炎性)T细胞的存活。

虽然PD1/PD-L1(2)结合在非疾病状态下对于自身耐受很重要，但其还是肿瘤细胞在免疫监视期间逃避鉴定为‘外来’的关键机制。实际上，已经显示PD-L1在若干种癌症中高度表达。因此，靶向PD1并拮抗其功能的单克隆抗体可以通过增强针对具有高PD-L1表达和/或表现出高突变水平的恶性细胞的免疫应答而在治疗癌症方面具有显著的潜在价值。大量临床前和临床证据表明，阻断PD1/PD-L1结合可以增强T细胞的抗肿瘤活性并抑制血液恶性肿瘤和实体恶性肿瘤两者的生长。由于还可能在如HIV等慢性疾病中诱导PD1/PD-L1活性，因此抗PD1拮抗性抗体在传染病环境中也可以具有治疗价值。因此，拮抗性抗PD1 mAb有可能充当癌症、免疫性疾病和传染病环境中的免疫治疗剂并且可以扩大目前确立的疗法的有效性。

大多数目前经批准的抗体治疗剂均源自经过免疫的啮齿动物。通过将鼠CDR“移植”到人v基因骨架序列中，那些抗体中的许多抗体已经经历了被称为“人源化”的过程(参见Nelson等人,2010,《自然综述：药物发现(Nat Rev Drug Discov)》9:767-774)。此过程通常不准确，并且导致所得抗体的靶结合亲和力降低。为了恢复原始抗体的结合亲和力，通常在所移植v结构域的可变结构域骨架的关键位置处引入鼠残基(也被称为“回复突变”)。

尽管已经显示，与具有完全鼠v结构域的抗体相比，通过CDR移植和回复突变进行人源化的抗体在临床上诱导的免疫应答率较低，但使用这种基本移植方法进行人源化的抗体仍具有显著的临床开发风险，因为在所移植CDR环中仍然具有潜在的物理不稳定性和免疫原性基序。如PD1抑制剂等靶向免疫细胞上的受体并且药理作用是刺激免疫应答的抗体有高风险引起抗药物抗体应答。患者的这些抗药物抗体应答可能会缩短药物在临床使用期间的半衰期并且降低药物在临床使用期间的效力和安全性。由于对蛋白质免疫原性的动物测试通常无法预测人的免疫应答，因此针对治疗用途的抗体工程集中于使经过纯化的蛋白质中的预测的人T细胞表位含量、非人种系氨基酸含量和聚集潜力最小化。

因此，理想的人源化激动性抗PD1抗体在v结构域中具有尽可能多的与充分表征的人种系序列的骨架和CDR两者中存在的残基相同的残基。Townsend等人(2015；《美国国家科学院院刊(PNAS)》112:15354-15359)描述了一种用于产生抗体的方法，其中将源自大鼠、兔和小鼠抗体的CDR移植到优选的人骨架中，然后对所述CDR进行被称为“增强型二元取代(Augmented Binary Substitution)”的人种系化方法。尽管所述方法证明了原始抗体互补位中的基本可塑性，但是即使研究者具有高度准确的抗体-抗原共晶体结构数据，也仍然无法可靠地预测任何给定抗体的CDR环中的哪些单独的残基可以转化成人种系，以及以什么组合进行转化。此外，Townsend等人的研究未解决人种系中在去除开发风险基序可能有益的位置处存在的残基之外加入诱变。这是使所述过程本质上效率低下的技术限制，从而需要对起始抗体序列进行修饰的额外阶段。另外，目前无法准确预测单独的v结构域的蛋白质序列的远端位置中或者甚至配偶体v结构域上的什么修饰可以有助于在维持抗原结合亲和力和特异性的同时去除风险基序。

因此，CDR种系化和开发质量优化是一个复杂的多因素问题，因为应优选地维持或改善分子的多种功能性质，在这种情况下包含：靶结合特异性、PD1/PD-L1信号传导拮抗作用、与来自人测试物种和动物测试物种(例如，食蟹猴(cynomolgus monkey)，也被称为食蟹猕猴(crab-eating macaque)，即，食蟹猴(Macacafascicularis))两者的PD1的亲和力应当尽可能类似，以有助于进行高度准确的临床前安全测试，v结构域生物物理稳定性和/或IgG表达产量对于制造目的应当是最佳的。抗体工程化研究已经表明，关键CDR中甚至单一残基位置的突变都可能对所有这些期望的分子性质具有显著负面影响。

WO2015/035606 A1描述了一种被称为“Mu317”的拮抗性鼠抗PD1 IgG分子，并且还描述了Mu317的人源化形式(命名为hu317)的制备。Mu317的那些人源化形式是使用经典人源化技术产生的，即，通过将Kabat定义的鼠CDR移植到人重链和轻链骨架序列中，其中人骨架残基中的一些人骨架残基可能被回复突变为对应定位的Mu317鼠残基。由于上述原因，WO2015/035606 A1中描述的Mu317的这种人源化形式并不理想。

发明内容

本发明提供了多种抗PD1抗体及其医学用途。

根据本发明的一个方面，提供了一种抗体分子或其抗原结合部分，所述抗体分子与人PD1并且任选地还与食蟹猴PD1特异性结合，其中所述抗体分子或抗原结合部分包括具有以下的重链可变区：

具有遵循以下顺序的氨基酸序列的HCDR1：G-F-T或T的保守取代(例如，S)-F或F的保守取代(例如，L)-S或S的保守取代(例如，T)-S-Y-G或任何氨基酸(例如，W)-M或M的保守取代(例如，V)-S或任何氨基酸(例如，H)(SEQ ID NO:20)；

具有遵循以下顺序的氨基酸序列的HCDR2：V或V的保守取代(例如，L)-A或A的保守取代(例如，G)-V/N-I-W/K-Q/A-D/G-G-S-T/E-N/K/S-Y-N/V-D-S-V-K-G(SEQ ID NO:21)；以及

具有遵循以下顺序的氨基酸序列的HCDR3：A或任何氨基酸(例如，D/E/G/H/I/K/L/H/Q/S/V/W)-Y或Y的保守取代(例如，F/W)-G-N或任何氨基酸(例如，A/E/F/G/H/I/Q/R/S/T/V/W/Y)-Y或Y的保守取代(例如，V/W)-W或任何氨基酸(例如，F/H/M/P/Q/S/V)-Y-I或任何氨基酸(例如，L/M/S/T/V/Y)-D或D的保守取代(例如，E)-V或任何氨基酸(例如，A/E/F/G/H/I/K/L/M/R/S/T/W/Y)(SEQ ID NO:22)。

在本发明的各方面中，所述抗体分子或抗原结合部分的所述HCDR1可以不包含序列GFSLTSYGVH(SEQ ID NO:23；WO2015/035606 A1、US2015/079109A1中公开的Mu317鼠/人源化抗体HCDR1)、VIWAGGSTNYNSALMS(SEQ ID NO:24；WO2015/035606 A1、US2015/079109A1中公开的Mu317鼠/人源化抗体HCDR2)，和/或所述抗体分子或抗原结合部分的所述HCDR3可以不包含序列AYGNYWYIDV(SEQ ID NO:25；WO2015/035606 A1、US2015/079109A1中公开的Mu317鼠/人源化抗体HCDR3)。

所述抗体分子或抗原结合部分可以进一步包括具有以下的轻链可变区：

具有遵循以下顺序的氨基酸序列的LCDR1：K-S-S-Q/E-S-V-S或S的保守取代(如G/T)-N-D-L或L的保守取代(如V)-A(SEQ ID NO:26)；

具有遵循以下顺序的氨基酸序列的LCDR2：Y-A-F或任何氨基酸(例如，S)-H或任何氨基酸(例如，P/T)-R-F-S或S的保守取代(如A/T)(SEQ ID NO:27)；以及

具有遵循以下顺序的氨基酸序列的LCDR3：Q或任何氨基酸(例如，H)-Q-A或任何氨基酸(例如，S)-Y-S-T或任何氨基酸(例如，N/S)-P-Y或任何氨基酸(例如，W)-T(SEQ ID NO:28)。

在本发明的各方面中，所述抗体分子或抗原结合部分的所述LCDR1可以不包含序列KASQSVSNDVA/KSSQEVSNDVA(SEQ ID NO:29/SEQ ID NO:30；WO2015/035606 A1、US2015/079109A1中公开的Mu317鼠/人源化抗体LCDR1)，和/或所述抗体分子或抗原结合部分的所述LCDR2可以不包含序列YAFHRFT(SEQ ID NO:31；WO2015/035606 A1、US2015/079109A1中公开的Mu317鼠/人源化抗体LCDR2)，和/或所述抗体分子或抗原结合部分的所述LCDR3可以不包含序列HQAYSSPYT(SEQ ID NO:32；WO2015/035606 A1、US2015/079109A1中公开的Mu317鼠/人源化抗体LCDR3)。

在一些方面中，本文公开了一种抗PD1抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，所述VH区包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述VL区包括LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中

(a)所述HCDR1包括氨基酸序列G-F-X₁-X₂-X₃-S-Y-X₄-X₅-X₆，其中X₁是T或T的保守取代，X₂是F或F的保守取代，X₃是S或S的保守取代，X₄是G或任何其它氨基酸，X₅是M或M的保守取代，并且X₆是S或任何其它氨基酸(SEQ ID NO:20)；

(b)所述HCDR2包括氨基酸序列X₁-X₂-X₃-I-X₄-X₅-X₆-G-S-X₇-X₈-Y-X₉-D-S-V-K-G，其中X₁是V或V的保守取代，X₂是A或A的保守取代，X₃是V或N，X₄是W或K，X₅是Q或A，X₆是D或G，X₇是T或E，X₈是N、K或S，并且X₉是N或V(SEQ ID NO:21)；

(c)所述HCDR3包括氨基酸序列X₁-X₂-G-X₃-X₄-X₅-Y-X₆-X₇-X₈，其中X₁是A或任何其它氨基酸，X₂是Y或Y的保守取代，X₃是N或任何其它氨基酸，X₄是Y或Y的保守取代，X₅是W或任何其它氨基酸，X₆是I或任何其它氨基酸，X₇是D或D的保守取代，并且X₈是V或任何其它氨基酸(SEQ ID NO:22)；

(d)所述LCDR1包括氨基酸序列K-S-S-X₁-S-V-X₂-N-D-X₃-A，其中X₁是Q或E，X₂是S或S的保守取代，并且X₃是L或L的保守取代(SEQ ID NO:26)；

(e)所述LCDR2包括氨基酸序列Y-A-X₁-X₂-R-F-X₃，其中X₁是F或任何其它氨基酸，X₂是H或任何其它氨基酸，并且X₃是S或S的保守取代(SEQ ID NO:27)；并且

(f)所述LCDR3包括氨基酸序列X₁-Q-X₂-Y-S-X₃-P-X₄-T，其中X₁是Q或任何其它氨基酸，X₂是A或任何其它氨基酸，X₃是T或任何其它氨基酸，并且X₄是Y或任何其它氨基酸(SEQID NO:28)。

在一些方面中，本发明提供了一种抗PD1抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，其中

(a)VH区氨基酸序列包括GFTFSSYGMS(SEQ ID NO:33)的HCDR1、VANIWQDGSTKYVDSVKG(SEQ ID NO:34)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVTNDVA(SEQ ID NO:36)的LCDR1、YAYHRFT(SEQ ID NO:37)的LCDR2和HQAYSSPYT(SEQ ID NO:38)的LCDR3；

(b)VH区氨基酸序列包括GFSLSSYGMS(SEQ ID NO:39)的HCDR1、VAVIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:40)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVTNDVA(SEQ ID NO:36)的LCDR1、YAYHRFT(SEQ ID NO:37)的LCDR2和HQAYSSPYT(SEQ ID NO:38)的LCDR3；

(c)VH区氨基酸序列包括GFTFSSYGMS(SEQ ID NO:33)的HCDR1、VANIWQDGSEKYVDSVKG(SEQ ID NO:41)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVTNDVA(SEQ ID NO:36)的LCDR1、YAYHRFT(SEQ ID NO:37)的LCDR2和HQAYSSPYT(SEQ ID NO:38)的LCDR3；

(d)VH区氨基酸序列包括GFSFSSYGMH(SEQ ID NO:42)的HCDR1、VANIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:43)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和HQAYSTPYT(SEQ ID NO:46)的LCDR3；

(e)VH区氨基酸序列包括GFSFTSYGMS(SEQ ID NO:47)的HCDR1、LANIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:48)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和HQAYSTPYT(SEQ ID NO:46)的LCDR3；

(f)VH区氨基酸序列包括GFTFSSYGVH(SEQ ID NO:49)的HCDR1、VGVIWQDGSENYVDSVKG(SEQ ID NO:50)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDLA(SEQ ID NO:51)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和QQAYSTPYT(SEQ ID NO:52)的LCDR3；

(g)VH区氨基酸序列包括GFSFSSYGMH(SEQ ID NO:42)的HCDR1、VANIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:43)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和HQAYSTPYT(SEQ ID NO:46)的LCDR3；

(h)VH区氨基酸序列包括GFSFSSYGMH(SEQ ID NO:42)的HCDR1、LANIWQDGSENYVDSVKG(SEQ ID NO:53)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和QQAYSTPYT(SEQ ID NO:52)的LCDR3；

(i)VH区氨基酸序列包括GFTLSSYGMH(SEQ ID NO:54)的HCDR1、LAVIWADGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:55)的HCDR2和AYGNYMYIDV(SEQ ID NO:56)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和HQAYSTPYT(SEQ ID NO:46)的LCDR3；

(j)VH区氨基酸序列包括GFTFSSYGMH(SEQ ID NO:57)的HCDR1、VGVIKQDGSENYVDSVKG(SEQ ID NO:58)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和HQAYSTPYT(SEQ ID NO:46)的LCDR3；或者

(k)VH区氨基酸序列包括GFSFTSYGMH(SEQ ID NO:59)的HCDR1、VGVIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:60)的HCDR2和GYGNYWYIDV(SEQ ID NO:61)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDLA(SEQ ID NO:51)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和QQAYSTPYT(SEQ ID NO:52)的LCDR3。

在一些方面中，本文公开了一种抗PD1抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，其中

VH区氨基酸序列包括：

(a)SEQ ID NO:33、SEQ ID NO:39、SEQ ID NO:42、SEQ ID NO:47、SEQ ID NO:49、SEQ ID NO:54、SEQ ID NO:57或SEQ ID NO:59的HCDR1；

(b)SEQ ID NO:34、SEQ ID NO:40、SEQ ID NO:41、SEQ ID NO:43、SEQ ID NO:48、SEQ ID NO:50、SEQ ID NO:53、SEQ ID NO:55、SEQ ID NO:58或SEQ ID NO:60的HCDR2；以及

(c)SEQ ID NO:35、SEQ ID NO:56或SEQ ID NO:61的HCDR3；并且

VL区氨基酸序列包括：

(a')SEQ ID NO:36、SEQ ID NO:44或SEQ ID NO:51的LCDR1；

(b')SEQ ID NO:37或SEQ ID NO:45的LCDR2；以及

(c')SEQ ID NO:38、SEQ ID NO:46或SEQ ID NO:52的LCDR3。

在一些方面中，本发明提供了一种抗PD1抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，其中

(a)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:1，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:2；

(b)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:3，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:4；

(c)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:5，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:6；或者

(d)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:7，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:8。

根据本发明还提供了一种免疫缀合物，所述免疫缀合物包括与治疗剂连接、融合或缀合的如本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分。

在另一方面中，本发明提供了一种核酸分子，所述核酸分子对如本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分进行编码。

进一步提供了一种载体，所述载体包括本发明的核酸分子。

还提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包括如本文所定义的本发明的核酸分子或载体。

在另外一方面中，提供了一种产生抗PD1抗体和/或其抗原结合部分的方法，所述方法包括：将本发明的宿主细胞在引起所述抗体和/或其抗原结合部分的表达和/或产生的条件下培养；以及从所述宿主细胞或培养物中分离所述抗体和/或抗原结合部分。

在本发明的另一方面中，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的本发明的核酸分子或如本文所定义的本发明的载体。

进一步提供了一种用于增强受试者的免疫应答的方法，所述方法包括施用有效量的如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的本发明的免疫缀合物或如本文所定义的本发明的核酸分子或如本文所定义的本发明的载体或如本文所定义的本发明的药物组合物。

在另外一方面中，提供了一种用于治疗或预防受试者的癌症的方法，所述方法包括施用有效量的如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的本发明的免疫缀合物或如本文所定义的本发明的核酸分子或如本文所定义的本发明的载体或如本文所定义的本发明的药物组合物。

本文进一步提供了如本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的免疫缀合物或如本文所定义的核酸分子或如本文所定义的载体或如本文所定义的药物组合物，其用作药剂。本发明还提供了如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的本发明的免疫缀合物或如本文所定义的本发明的核酸分子或如本文所定义的本发明的载体或如本文所定义的本发明的药物组合物，其用于治疗癌症。

在另一方面中，本发明提供了如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分或免疫缀合物或核酸分子或载体以及治疗方法，其用于单独使用、结合第二治疗剂(例如，抗癌剂)依次或同时使用。

在另外一方面中，提供了如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的本发明的免疫缀合物或如本文所定义的本发明的核酸分子或如本文所定义的本发明的载体或如本文所定义的本发明的药物组合物在制造用于治疗癌症的药剂中的用途。

本发明还提供了一种用于治疗或预防受试者的传染病的方法，所述方法包括施用有效量的如本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分或如此处所定义的免疫缀合物或如本文所定义的核酸分子或如本文所定义的载体或如本文所定义的药物组合物。

在所有方面中，所述传染病可以选自由以下组成的组：病毒性疾病、细菌性疾病、真菌性疾病或寄生虫性疾病。在一个实施例中，所述传染病是人类免疫缺陷病毒(HIV)感染。

还提供了如本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的免疫缀合物或如本文所定义的核酸分子或如本文所定义的载体或如本文所定义的药物组合物，其用于治疗传染病。

进一步提供了如本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的免疫缀合物或如本文所定义的核酸分子或如本文所定义的载体或如本文所定义的药物组合物在制造用于治疗传染病的药剂中的用途。

本发明还提供了一种用于治疗或预防受试者的传染病的方法，所述方法包括施用有效量的如本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分或如此处所定义的免疫缀合物或如本文所定义的核酸分子或如本文所定义的载体或如本文所定义的药物组合物。

本发明还提供了一种用于产生与人PD1并且任选地还与食蟹猴PD1特异性结合的抗体分子或其抗原结合部分的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)将来自非人来源的抗PD1 CDR移植到人v结构域骨架中，以产生人源化抗PD1抗体分子或其抗原结合部分；

(2)产生所述人源化抗PD1抗体分子或其抗原结合部分的包括所述CDR中的一种或多种突变的克隆的文库；

(3)针对与人PD1并且任选地还与食蟹猴PD1的结合筛选所述文库；

(4)选择来自筛选步骤(3)的对人PD1并且任选地还对食蟹猴PD1具有结合特异性的克隆；以及

(5)由选自步骤(4)的克隆产生与人PD1并且任选地还与食蟹猴PD1特异性结合的抗体分子或其抗原结合部分。

所述方法可以包括另外一个步骤：基于在步骤(4)中选择的克隆(例如，基于在步骤(4)中选择的克隆的CDR中的特定位置处的另外的探索性诱变)产生另外的克隆，以增强人源化和/或最小化人T细胞表位含量和/或改善步骤(5)中产生的抗体分子或其抗原结合部分中的制造性质。

附图说明

图1A-图1B：针对人和食蟹猴PD1-Fc蛋白的文库源性抗PD1 Fab的直接结合ELISA以及HTRF竞争测定。克隆源自多个噬菌体选择分支，其中在每一轮中，在经过生物素化的人或食蟹猴PD1蛋白上选择噬菌体群体。标准选择编号为RI-RIV。在每一轮选择之后，在ELISA(图1A)中将文库源性克隆筛选为针对人(huPD1)和食蟹猴(cyPD1)两者的周质表达性Fab蛋白。还通过HTRF(图1B)并行测试了Fab样品竞争与人PD1上的mu317的表位结合的能力。每轮的平均值±SD值用灰色条表示。

图2A-图2B：CDR残基对种系突变的耐受性的分析。分别针对V_L(SEQ ID NO:409-411)(图2A)和V_H(SEQ ID NO:412-414)(图2B)结构域示出了由712个独特的scFv克隆构成的ELISA阳性群体的CDR中的鼠氨基酸保留频率的绘图。除了HCDR3中，在其它CDR中仅绘制了用于人/鼠残基诱变的那些残基。X轴上的括号中注释的CDR残基与用于移植的人种系(IGKV4-1和IGHV3-7)中存在的CDR残基相同。在两个绘图中，在75％处的灰色虚线表示对人种系替代鼠残基的耐受性的截止值。

图3A-图3B：与人和食蟹猴PD1-Fc蛋白结合的文库源性IgG1无效克隆的直接滴定ELISA。在直接结合ELISA中针对人(图3A)和食蟹猴(图3B)PD1-Fc蛋白(以nM)滴定Mu317和文库源性IgG。

图4A-图4B：与人和食蟹猴PD1+CHO细胞的流式细胞术结合。检查Mu317、前导文库源性和设计IgG在表达人PD1的人(图4A)和食蟹猴(图4B)CHO细胞上的特异性结合。在所有克隆中均观察到针对人PD1的浓度依赖性结合，其中在同种型对照IgG1中未观察到结合。在任何克隆中均未观察到针对未经转染的CHO细胞的结合信号。

图5：基于细胞的PD1/PD-L1拮抗作用测定。对呈人IgG1无效形式的多个前导克隆在细胞表面处对人PD1功能的拮抗作用的分析表明，所有新型克隆均表现出强浓度依赖性拮抗活性。

图6A-图6C：最大程度人源化的前导克隆MH4、MH8和MH12对mu317和hu317的基于细胞的PD1/PD-L1拮抗作用测定。对呈人IgG1无效形式的多个前导克隆对人PD1功能的拮抗作用的分析。这些分析表明，克隆MH4(图6A)、MH8(图6B)和MH12(图6C)表现出的拮抗效力与mu317和hu317两者表现出的拮抗效力重叠。值表示为平均值±SD诱导倍数。

图7A-图7H：前导抗体v-结构域中的T细胞表位肽含量。检查Hu317和多种前导抗体的v结构域中是否存在种系(GE)、高亲和力外来(HAF)、低亲和力外来(LAF)和TCED+T细胞受体表位。发现Hu317的VH和VL结构域两者都含有多个高风险人T细胞表位和几个种系表位。在所有前导克隆中，高风险表位含量显著降低，并且种系表位含量显著提高。

图8A-图8C：MLR基于细胞的PD1/PD-L1拮抗作用测定。在同种异体MLR测定中，抗PD1 IgG对IFN-γ产量的影响。示出了对照分析(图8A)、前导克隆09C06、MH4、MH8、MH12的3点分析(图8B)以及克隆MH4、MH8和Hu317的多点分析(图8C)。在每种情况下，均使用同种型对照物(人IgG4或IgG1)。

图9：经过纯化的IgG的电荷变体曲线。示出了(1)09C06、(2)MH4、(3)MH8、(4)MH12和(5)Hu317。Y轴信号以荧光单位测量。

图10：经过纯化的IgG的DSC热谱图。示出了(1)09C06、(2)MH4、(3)MH8、(4)MH12和(5)Hu317。

图11：Hu317、前导和对照IgG与用PD1或潜在的脱靶结合蛋白转染的HEK293细胞的流式细胞术结合。对用对人PD1、人BTN2A1、人LSAMP、人CD20或仅ZS green标志物进行编码的质粒瞬时转染的HEK293细胞进行结合特异性分析。使用每种抗体以2μg/ml的浓度进行染色，并且在此图中指示了每种抗体的直方图。在此图的每个图中，在观察到靶结合事件(通过整个所需直方图或所需直方图的主要部分朝更高的AF647信号移动指示)的位置处，对所关注的峰进行了命名(PD1、CD20、LSAMP)。在任何IgG中均未观察到针对BTN2A1的结合信号。

具体实施方式

根据本发明的第一方面，提供了一种抗体分子或其抗原结合部分，所述抗体分子与人PD1并且还与食蟹猴PD1特异性结合，其中所述抗体分子或抗原结合部分包括具有以下的重链可变区：

具有遵循以下顺序的氨基酸序列的HCDR1：G-F-T或T的保守取代(例如，S)-F或F的保守取代(例如，L)-S或S的保守取代(例如，T)-S-Y-G或任何氨基酸(例如，W)-M或M的保守取代(例如，V)-S或任何氨基酸(例如，H)(SEQ ID NO:20)；

具有遵循以下顺序的氨基酸序列的HCDR2：V或V的保守取代(例如，L)-A或A的保守取代(例如，G)-V/N-I-W/K-Q/A-D/G-G-S-T/E-N/K/S-Y-N/V-D-S-V-K-G(SEQ ID NO:21)；以及

具有遵循以下顺序的氨基酸序列的HCDR3：A或任何氨基酸(例如，D/E/G/H/I/K/L/H/Q/S/V/W)-Y或Y的保守取代(例如，F/W)-G-N或任何氨基酸(例如，A/E/F/G/H/I/Q/R/S/T/V/W/Y)-Y或Y的保守取代(例如，V/W)-W或任何氨基酸(例如，F/H/M/P/Q/S/V)-Y-I或任何氨基酸(例如，L/M/S/T/V/Y)-D或D的保守取代(例如，E)-V或任何氨基酸(例如，A/E/F/G/H/I/K/L/M/R/S/T/W/Y)(SEQ ID NO:22)。

在一些方面中，本文所提供的抗PD1抗体或抗原结合部分与包括SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:17或由其组成的PD1蛋白特异性结合。在一些方面中，本文所提供的抗PD1抗体或抗原结合部分与具有与SEQ ID NO:16或SEQ ID NO:17至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同的氨基酸序列的PD1蛋白特异性结合。

在本发明的各方面中，所述抗体分子或抗原结合部分的所述HCDR1可以不包含序列GFSLTSYGVH(SEQ ID NO:23；WO2015/035606 A1、US2015/079109A1中公开的Mu317鼠/人源化抗体HCDR1)、VIWAGGSTNYNSALMS(SEQ ID NO:24；WO2015/035606 A1、US2015/079109A1中公开的Mu317鼠/人源化抗体HCDR2)，和/或所述抗体分子或抗原结合部分的所述HCDR3可以不包含序列AYGNYWYIDV(SEQ ID NO:25；WO2015/035606 A1、US2015/079109A1中公开的Mu317鼠/人源化抗体HCDR3)。

根据本发明的抗体分子或其抗原结合部分可以进一步包括具有以下的轻链可变区：

具有遵循以下顺序的氨基酸序列的LCDR1：K-S-S-Q/E-S-V-S或S的保守取代(如G/T)-N-D-L或L的保守取代(如V)-A(SEQ ID NO:26)；

具有遵循以下顺序的氨基酸序列的LCDR2：Y-A-F或任何氨基酸(例如，S/Y)-H或任何氨基酸(例如，P/T)-R-F-S或S的保守取代(如A/T)(SEQ ID NO:27)；以及

具有遵循以下顺序的氨基酸序列的LCDR3：Q或任何氨基酸(例如，H)-Q-A或任何氨基酸(例如，S)-Y-S-T或任何氨基酸(例如，N/S)-P-Y或任何氨基酸(例如，W)-T(SEQ ID NO:28)。

在本发明的各方面中，所述抗体分子或抗原结合部分的所述LCDR1可以不包含序列KASQSVSNDVA/KSSQEVSNDVA(SEQ ID NO:29/SEQ ID NO:30；WO2015/035606 A1、US2015/079109A1中公开的Mu317鼠/人源化抗体LCDR1)，和/或所述抗体分子或抗原结合部分的所述LCDR2可以不包含序列YAFHRFT(SEQ ID NO:31；WO2015/035606 A1、US2015/079109A1中公开的Mu317鼠/人源化抗体LCDR2)，和/或所述抗体分子或抗原结合部分的所述LCDR3可以不包含序列HQAYSSPYT(SEQ ID NO:32；WO2015/035606 A1、US2015/079109A1中公开的Mu317鼠/人源化抗体LCDR3)。

在一些方面中，本文公开了一种抗PD1抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，所述VH区包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述VL区包括LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中

(a)所述HCDR1包括氨基酸序列G-F-X₁-X₂-X₃-S-Y-X₄-X₅-X₆，其中X₁是T或T的保守取代(例如，S)，X₂是F或F的保守取代(例如，L)，X₃是S或S的保守取代(例如，T)，X₄是G或任何其它氨基酸(例如，W)，X₅是M或M的保守取代(例如，V)，并且X₆是S或任何其它氨基酸(例如，H)(SEQ ID NO:20)；

(b)所述HCDR2包括氨基酸序列X₁-X₂-X₃-I-X₄-X₅-X₆-G-S-X₇-X₈-Y-X₉-D-S-V-K-G，其中X₁是V或V的保守取代(例如，L)，X₂是A或A的保守取代(例如，G)，X₃是V或N，X₄是W或K，X₅是Q或A，X₆是D或G，X₇是T或E，X₈是N、K或S，并且X₉是N或V(SEQ ID NO:21)；

(c)所述HCDR3包括氨基酸序列X₁-X₂-G-X₃-X₄-X₅-Y-X₆-X₇-X₈，其中X₁是A或任何其它氨基酸(例如，D、E、G、H、I、K、L、H、Q、S、V或W)，X₂是Y或Y的保守取代(例如，F或W)，X₃是N或任何其它氨基酸(例如，A、E、F、G、H、I、Q、R、S、T、V、W或Y)，X₄是Y或Y的保守取代(例如，V或W)，X₅是W或任何其它氨基酸(例如，F、H、M、P、Q、S或V)，X₆是I或任何其它氨基酸(例如，L、M、S、T、V或Y)，X₇是D或D的保守取代(例如，E)，并且X₈是V或任何其它氨基酸(例如，A、E、F、G、H、I、K、L、M、R、S、T、W或Y)(SEQ ID NO:22)；

(d)所述LCDR1包括氨基酸序列K-S-S-X₁-S-V-X₂-N-D-X₃-A，其中X₁是Q或E，X₂是S或S的保守取代(例如，G或T)，并且X₃是L或L的保守取代(例如，V)(SEQ ID NO:26)；

(e)所述LCDR2包括氨基酸序列Y-A-X₁-X₂-R-F-X₃，其中X₁是F或任何其它氨基酸(例如，S)，X₂是H或任何其它氨基酸(例如，P或T)，并且X₃是S或S的保守取代(例如，A或T)(SEQ ID NO:27)；并且

(f)所述LCDR3包括氨基酸序列X₁-Q-X₂-Y-S-X₃-P-X₄-T，其中X₁是Q或任何其它氨基酸(例如，H)，X₂是A或任何其它氨基酸(例如，S)，X₃是T或任何其它氨基酸(例如，N或S)，并且X₄是Y或任何其它氨基酸(例如，W)(SEQ ID NO:28)。

在一些方面中，本文公开了一种抗PD1抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，所述VH区以从氨基端到羧基端的顺序包括FR1-HCDR1-FR2-HCDR2-FR3-HCDR3-FR4，所述VL区以从氨基端到羧基端的顺序包括FR1-LCDR1-FR2-LCDR2-FR3-LCDR3-FR4，其中HCDR1是SEQ ID NO:20，HCDR2是SEQ ID NO:32，HCDR3是SEQ IDNO:33，LCDR1是SEQ ID NO:26，LCDR2是SEQ ID NO:27并且LCDR3是SEQ ID NO:28，其中重链FR1、FR2、FR3和FR4氨基酸序列是SEQ ID NO:116中的重链FR1、FR2、FR3和FR4氨基酸序列(参见表2)，并且其中轻链FR1、FR2、FR3和FR4氨基酸序列是SEQ ID NO:119中的轻链FR1、FR2、FR3和FR4氨基酸序列(参见表2)。

如本文详述的，本发明的发明人首次成功使用源自WO2015/035606 A1、US2015/079109A1中公开的鼠抗PD1抗体Mu317的CDR序列产生了许多经过优化的抗PD1抗体分子。对如本文所描述的经过优化的抗体分子的细化提高了可变结构域稳定性，提高了表达产量和/或降低了免疫原性潜力，而在PD1拮抗作用测定中未损害对人PD1和食蟹猴PD1两者的结合特异性(以促进准确性最大化的灵长类动物毒理学和pk研究)和药理学效力。

在一些方面中，本发明的优选的经过优化的抗PD1抗体分子在对应的鼠CDR或其它(如骨架)氨基酸位置处不必具有最大数量的人种系取代。如下文实验部分所详述的，发现就抗PD1结合特性和/或其它期望特征而言，“最大程度人源化的”抗体分子不一定是“最大程度优化的”。

本发明涵盖对本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分的氨基酸序列的修饰。例如，本发明包含抗体分子和其对应的抗原结合部分，所述抗原结合部分包括不会显著影响其性质的功能等同的可变区和CDR，并且还包含活性和/或亲和力增强或降低的变体。例如，可以使氨基酸序列突变以获得对PD1具有期望结合亲和力的抗体。设想了包含长度范围为一个残基到含有一百个或更多个残基的多肽的氨基和/或羧基端融合物的插入物，以及由单个或多个氨基酸残基构成的序列内插入物。末端插入物的实例包含具有N端甲硫氨酰基残基的抗体分子或与表位标签融合的抗体分子。抗体分子的其它插入变体包含与酶或多肽的抗体的N端或C端连接的融合物，所述融合物增加抗体在血液循环中的半衰期。

本发明的抗体分子或抗原结合部分可以包含经过糖基化的多肽和未经糖基化的多肽以及具有其它转译后修饰(例如用不同的糖进行的糖基化、乙酰化和磷酸化)的多肽。可以例如通过添加、去除或替代一个或多个氨基酸残基以形成或去除糖基化位点来使本发明的抗体分子或抗原结合部分突变，以改变这种转译后修饰。

可以例如通过氨基酸取代来修饰本发明的抗体分子或抗原结合部分，以去除抗体中的潜在蛋白水解位点。

在抗体分子或其抗原结合部分中，HCDR1可以具有以下氨基酸序列：G-F-T-F-S-S-Y-G-M/V-S/H(SEQ ID NO:62)；HCDR2可以具有以下氨基酸序列：V-A-V/N-I-W/K-Q-D-G-S-E/T-N/K-Y-V/N-D-S-V-K-G(SEQ ID NO:63)；并且HCDR3可以具有以下氨基酸序列：A/D/E/G/H/I/K/L/H/Q/S/V/W-Y/F/W-G-N/A/E/F/G/H/I/Q/R/S/T/V/W/Y-Y/V/W-W/F/H/M/P/Q/S/V-Y-I/L/M/S/T/V/Y-D/E-V/A/E/F/G/H/I/Q/R/S/T/W/Y(SEQ ID NO:64)。

例如，HCDR1可以具有以下氨基酸序列：G-F-T-F-S-S-Y-G-M-S/H(SEQ ID NO:65)；HCDR2可以具有以下氨基酸序列：V-A-V/N-I-W-Q-D-G-S-E/T-N/K-Y-V-D-S-V-K-G(SEQ IDNO:66)；并且HCDR3可以具有以下氨基酸序列：A/G-Y-G-N-Y-W/M-Y-I-D-R/V(SEQ ID NO:67)。

在抗体分子或其抗原结合部分中，LCDR1可以具有以下氨基酸序列：K-S-S-Q/E-S-V-S/G/T-N-D-L/V-A(SEQ ID NO:68)；LCDR2可以具有以下氨基酸序列：Y-A-F/S/Y-H/P/T-R-F-S/T(SEQ ID NO:69)；并且LCDR3可以具有以下氨基酸序列：Q/H-Q-A/S-Y-S-T/N/S-P-Y-T(SEQ ID NO:70)。

例如，LCDR1可以具有以下氨基酸序列：K-S-S-Q-S-V-S/G/T-N-D-L/V-A(SEQ IDNO:71)；LCDR2可以具有以下氨基酸序列：Y-A-S/Y-H-R-F-S/T(SEQ ID NO:72)；并且LCDR3可以具有以下氨基酸序列：Q/H-Q-A-Y-S-T/S-P-Y-T(SEQ ID NO:73)。

在本发明的特定实施例中，抗体分子或抗原结合部分可以包括：

(a)氨基酸序列

GFSFTSYGMS(SEQ ID NO:47；HCDR1)、LANIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:48；HCDR2)、AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35；HCDR3)、KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44；LCDR1)、YASHRFT(SEQ ID NO:45；LCDR2)和HQAYSTPYT(SEQ ID NO:46；LCDR3)[克隆20C07]；或者

(b)氨基酸序列

GFTFSSYGVH(SEQ ID NO:49；HCDR1)、VGVIWQDGSENYVDSVKG(SEQ ID NO:50；HCDR2)、AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35；HCDR3)、KSSQSVSNDLA(SEQ ID NO:51；LCDR1)、YASHRFT(SEQ ID NO:45；LCDR2)和QQAYSTPYT(SEQ ID NO:52；LCDR3)[克隆11C08]；

(c)氨基酸序列

GFSFSSYGMH(SEQ ID NO:42；HCDR1)、VANIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:43；HCDR2)、AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35；HCDR3)、KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44；LCDR1)、YASHRFT(SEQ ID NO:45；LCDR2)和HQAYSTPYT(SEQ ID NO:46；LCDR3)[克隆09C06]；

(d)氨基酸序列

GFSFSSYGMH(SEQ ID NO:42；HCDR1)、LANIWQDGSENYVDSVKG(SEQ ID NO:53；HCDR2)、AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35；HCDR3)、KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44；LCDR1)、YASHRFT(SEQ ID NO:45；LCDR2)和QQAYSTPYT(SEQ ID NO:52；LCDR3)[克隆17A12]；

(e)氨基酸序列

GFTLSSYGMH(SEQ ID NO:54；HCDR1)、LAVIWADGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:55；HCDR2)、AYGNYMYIDV(SEQ ID NO:56；HCDR3)、KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44；LCDR1)、YASHRFT(SEQ ID NO:45；LCDR2)和HQAYSTPYT(SEQ ID NO:46；LCDR3)[克隆17D08]；

(f)氨基酸序列

GFTFSSYGMH(SEQ ID NO:57；HCDR1)、VGVIKQDGSENYVDSVKG(SEQ ID NO:58；HCDR2)、AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35；HCDR3)、KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44；LCDR1)、YASHRFT(SEQ ID NO:45；LCDR2)和HQAYSTPYT(SEQ ID NO:46；LCDR3)[克隆17G08]；

(g)氨基酸序列

GFSFTSYGMH(SEQ ID NO:59；HCDR1)、VGVIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:60；HCDR2)、GYGNYWYIDV(SEQ ID NO:61；HCDR3)、KSSQSVSNDLA(SEQ ID NO:51；LCDR1)、YASHRFT(SEQ ID NO:45；LCDR2)和QQAYSTPYT(SEQ ID NO:52；LCDR3)[克隆15D07]；

(h)氨基酸序列

GFSLSSYGMS(SEQ ID NO:39；HCDR1)、VAVIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:40；HCDR2)、AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35；HCDR3)、KSSQSVGNDVA(SEQ ID NO:74；LCDR1)、YASHRFT(SEQ ID NO:45；LCDR2)和QQAYSSPYT(SEQ ID NO:75；LCDR3)[克隆MH1]；

(i)氨基酸序列

GFSLSSYGMS(SEQ ID NO:39；HCDR1)、VAVIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:40；HCDR2)、AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35；HCDR3)、KSSQSVTNDLA(SEQ ID NO:76；LCDR1)、YASHRFT(SEQ ID NO:45；LCDR2)和QQAYSSPYT(SEQ ID NO:75；LCDR3)[克隆MH2]；

(j)氨基酸序列

GFSLSSYGMS(SEQ ID NO:39；HCDR1)、VAVIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:40；HCDR2)、AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35；HCDR3)、KSSQSVGNDLA(SEQ ID NO:77；LCDR1)、YAYHRFS(SEQ ID NO:78；LCDR2)和QQAYSSPYT(SEQ ID NO:75；LCDR3)[克隆MH3]；

(k)氨基酸序列

GFSLSSYGMS(SEQ ID NO:39；HCDR1)、VAVIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:40；HCDR2)、AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35；HCDR3)、KSSQSVTNDVA(SEQ ID NO:36；LCDR1)、YAYHRFT(SEQ ID NO:37；LCDR2)和HQAYSSPYT(SEQ ID NO:38；LCDR3)[克隆MH4]；

(l)氨基酸序列

GFTFSSYGMS(SEQ ID NO:33；HCDR1)、VANIWQDGSTKYVDSVKG(SEQ ID NO:34；HCDR2)、AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35；HCDR3)、KSSQSVGNDVA(SEQ ID NO:74；LCDR1)、YASHRFT(SEQ ID NO:45；LCDR2)和QQAYSSPYT(SEQ ID NO:75；LCDR3)[克隆MH5]；

(m)氨基酸序列

GFTFSSYGMS(SEQ ID NO:33；HCDR1)、VANIWQDGSTKYVDSVKG(SEQ ID NO:34；HCDR2)、AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35；HCDR3)、KSSQSVTNDLA(SEQ ID NO:76；LCDR1)、YASHRFT(SEQ ID NO:45；LCDR2)和QQAYSSPYT(SEQ ID NO:75；LCDR3)[克隆MH6]；

(n)氨基酸序列

GFTFSSYGMS(SEQ ID NO:33；HCDR1)、VANIWQDGSTKYVDSVKG(SEQ ID NO:34；HCDR2)、AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35；HCDR3)、KSSQSVGNDLA(SEQ ID NO:77；LCDR1)、YAYHRFS(SEQ ID NO:78；LCDR2)和QQAYSSPYT(SEQ ID NO:75；LCDR3)[克隆MH7]；

(o)氨基酸序列

GFTFSSYGMS(SEQ ID NO:33；HCDR1)、VANIWQDGSTKYVDSVKG(SEQ ID NO:34；HCDR2)、AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35；HCDR3)、KSSQSVTNDVA(SEQ ID NO:36；LCDR1)、YAYHRFT(SEQ ID NO:37；LCDR2)和HQAYSSPYT(SEQ ID NO:38；LCDR3)[克隆MH8]；

(p)氨基酸序列

GFTFSSYGMS(SEQ ID NO:33；HCDR1)、VANIWQDGSEKYVDSVKG(SEQ ID NO:41；HCDR2)、AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35；HCDR3)、KSSQSVGNDVA(SEQ ID NO:74；LCDR1)、YASHRFT(SEQ ID NO:45；LCDR2)和QQAYSSPYT(SEQ ID NO:75；LCDR3)[克隆MH9]；

(q)氨基酸序列

GFTFSSYGMS(SEQ ID NO:33；HCDR1)、VANIWQDGSEKYVDSVKG(SEQ ID NO:41；HCDR2)、AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35；HCDR3)、KSSQSVTNDLA(SEQ ID NO:76；LCDR1)、YASHRFT(SEQ ID NO:45；LCDR2)和QQAYSSPYT(SEQ ID NO:75；LCDR3)[克隆MH10]；

(r)氨基酸序列

GFTFSSYGMS(SEQ ID NO:33；HCDR1)、VANIWQDGSEKYVDSVKG(SEQ ID NO:41；HCDR2)、AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35；HCDR3)、KSSQSVGNDLA(SEQ ID NO:77；LCDR1)、YAYHRFS(SEQ ID NO:78；LCDR2)和QQAYSSPYT(SEQ ID NO:75；LCDR3)[克隆MH11]；

(s)氨基酸序列

GFTFSSYGMS(SEQ ID NO:33；HCDR1)、VANIWQDGSEKYVDSVKG(SEQ ID NO:41；HCDR2)、AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35；HCDR3)、KSSQSVTNDVA(SEQ ID NO:36；LCDR1)、YAYHRFT(SEQ ID NO:37；LCDR2)和HQAYSSPYT(SEQ ID NO:38；LCDR3)[克隆MH12]；

(t)氨基酸序列

GFTFSSYGMS(SEQ ID NO:33；HCDR1)、VANIWQDGSTKYVDSVKG(SEQ ID NO:34；HCDR2)、AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35；HCDR3)、KSSQSVTNDLA(SEQ ID NO:76；LCDR1)、YAYHRFT(SEQ ID NO:37；LCDR2)和HQAYSSPYT(SEQ ID NO:38；LCDR3)[克隆MH13]；

(u)氨基酸序列

GFTFSSYGMS(SEQ ID NO:33；HCDR1)、VANIWQDGSTKYVDSVKG(SEQ ID NO:34；HCDR2)、AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35；HCDR3)、KSSQSVTNDLA(SEQ ID NO:76；LCDR1)、YAYHRFS(SEQ ID NO:78；LCDR2)和HQAYSSPYT(SEQ ID NO:38；LCDR3)[克隆MH14]；

(v)氨基酸序列

GFTFSSYGMS(SEQ ID NO:33；HCDR1)、VANIWQDGSTKYVDSVKG(SEQ ID NO:34；HCDR2)、AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35；HCDR3)、KSSQSVTNDLA(SEQ ID NO:76；LCDR1)、YASHRFS(SEQ ID NO:79；LCDR2)和HQAYSSPYT(SEQ ID NO:38；LCDR3)[克隆MH15]；

(w)氨基酸序列

GFTFSSYGMS(SEQ ID NO:33；HCDR1)、VANIWQDGSEKYVDSVKG(SEQ ID NO:41；HCDR2)、AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35；HCDR3)、KSSQSVTNDLA(SEQ ID NO:76；LCDR1)、YAYHRFT(SEQ ID NO:37；LCDR2)和HQAYSSPYT(SEQ ID NO:38；LCDR3)[克隆MH16]；

(x)氨基酸序列

GFTFSSYGMS(SEQ ID NO:33；HCDR1)、VANIWQDGSEKYVDSVKG(SEQ ID NO:41；HCDR2)、AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35；HCDR3)、KSSQSVTNDLA(SEQ ID NO:76；LCDR1)、YAYHRFS(SEQ ID NO:78；LCDR2)和HQAYSSPYT(SEQ ID NO:38；LCDR3)[克隆MH17]；

(y)氨基酸序列

GFTFSSYGMS(SEQ ID NO:33；HCDR1)、VANIWQDGSEKYVDSVKG(SEQ ID NO:41；HCDR2)、AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35；HCDR3)、KSSQSVTNDLA(SEQ ID NO:76；LCDR1)、YASHRFS(SEQ ID NO:79；LCDR2)和HQAYSSPYT(SEQ ID NO:38；LCDR3)[克隆MH18]；

在一些方面中，本发明提供了一种抗PD1抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，其中

(a)VH区氨基酸序列包括GFTFSSYGMS(SEQ ID NO:33)的HCDR1、VANIWQDGSTKYVDSVKG(SEQ ID NO:34)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVTNDVA(SEQ ID NO:36)的LCDR1、YAYHRFT(SEQ ID NO:37)的LCDR2和HQAYSSPYT(SEQ ID NO:38)的LCDR3；

(b)VH区氨基酸序列包括GFSLSSYGMS(SEQ ID NO:39)的HCDR1、VAVIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:40)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVTNDVA(SEQ ID NO:36)的LCDR1、YAYHRFT(SEQ ID NO:37)的LCDR2和HQAYSSPYT(SEQ ID NO:38)的LCDR3；

(c)VH区氨基酸序列包括GFTFSSYGMS(SEQ ID NO:33)的HCDR1、VANIWQDGSEKYVDSVKG(SEQ ID NO:41)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVTNDVA(SEQ ID NO:36)的LCDR1、YAYHRFT(SEQ ID NO:37)的LCDR2和HQAYSSPYT(SEQ ID NO:38)的LCDR3；

(d)VH区氨基酸序列包括GFSFSSYGMH(SEQ ID NO:42)的HCDR1、VANIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:43)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和HQAYSTPYT(SEQ ID NO:46)的LCDR3；

(e)VH区氨基酸序列包括GFSFTSYGMS(SEQ ID NO:47)的HCDR1、LANIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:48)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和HQAYSTPYT(SEQ ID NO:46)的LCDR3；

(f)VH区氨基酸序列包括GFTFSSYGVH(SEQ ID NO:49)的HCDR1、VGVIWQDGSENYVDSVKG(SEQ ID NO:50)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDLA(SEQ ID NO:51)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和QQAYSTPYT(SEQ ID NO:52)的LCDR3；

(g)VH区氨基酸序列包括GFSFSSYGMH(SEQ ID NO:42)的HCDR1、VANIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:43)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和HQAYSTPYT(SEQ ID NO:46)的LCDR3；

(h)VH区氨基酸序列包括GFSFSSYGMH(SEQ ID NO:42)的HCDR1、LANIWQDGSENYVDSVKG(SEQ ID NO:53)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和QQAYSTPYT(SEQ ID NO:52)的LCDR3；

(i)VH区氨基酸序列包括GFTLSSYGMH(SEQ ID NO:54)的HCDR1、LAVIWADGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:55)的HCDR2和AYGNYMYIDV(SEQ ID NO:56)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和HQAYSTPYT(SEQ ID NO:46)的LCDR3；

(j)VH区氨基酸序列包括GFTFSSYGMH(SEQ ID NO:57)的HCDR1、VGVIKQDGSENYVDSVKG(SEQ ID NO:58)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和HQAYSTPYT(SEQ ID NO:46)的LCDR3；或者

(k)VH区氨基酸序列包括GFSFTSYGMH(SEQ ID NO:59)的HCDR1、VGVIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:60)的HCDR2和GYGNYWYIDV(SEQ ID NO:61)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDLA(SEQ ID NO:51)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和QQAYSTPYT(SEQ ID NO:52)的LCDR3。

在一些方面中，本文公开了一种抗PD1抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，其中所述VH区包括表9中的VH区氨基酸序列中的任一个VH区氨基酸序列，并且所述VL区包括表9中的VL区氨基酸序列中的任一个VL区氨基酸序列。

在一些方面中，本发明提供了一种抗PD1抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，其中

(a)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:1，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:2；

(b)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:3，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:4；

(c)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:5，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:6；或者

(d)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:7，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:8。

在一些方面中，本文公开了一种抗PD1抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，其中

(a)VH区氨基酸序列与SEQ ID NO:1至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同，并且VL区氨基酸序列与SEQ ID NO:2至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同；

(b)VH区氨基酸序列与SEQ ID NO:3至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同，并且VL区氨基酸序列与SEQ ID NO:4至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同；

(c)VH区氨基酸序列与SEQ ID NO:5至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同，并且VL区氨基酸序列与SEQ ID NO:6至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同；或者

(d)VH区氨基酸序列与SEQ ID NO:7至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同，并且VL区氨基酸序列与SEQ ID NO:8至少约90％、至少约91％、至少约92％、至少约93％、至少约94％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％或至少约99％相同。在一些方面中，抗PD1抗体的CDR氨基酸序列与所列举序列中的CDR氨基酸序列100％相同，而FR氨基酸序列与所列举序列中的FR氨基酸序列小于100％相同。

在一些方面中，可以分离如本文所定义的抗体或抗原结合部分。

如本文所定义的抗体分子或抗原结合部分可以与包括本文所公开的CDR组的抗体或其抗原结合部分交叉竞争与PD1结合。在一些实施例中，本发明提供了一种抗PD1抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或抗原结合部分与包括本文所公开的CDR组的抗体或抗原结合部分交叉竞争与PD1结合；并且(a)包括完全种系人骨架氨基酸序列；和/或(b)与人PD1和食蟹猴PD1特异性结合；和/或(c)在LCDR2中不包括氧化位点；和/或(d)在VH结构域的HCDR2/骨架3区中包括具有高MHC II类结合亲和力的人种系肽序列(例如，VKGRFTISR(SEQID NO:81))；和/或(e)在VH结构域的HCDR1/骨架2区中不包括人T细胞表位序列；和/或(f)在VH结构域的HCDR3/骨架4区中不包括人T细胞表位序列；和/或(g)当呈IgG1效应子无效的抗体形式时，与抗体Hu317表现出的电荷种类异质性相比，表现出的电荷种类异质性降低。在一些实施例中，可以通过Biacore分析确定抗体或抗原结合部分的KD值。在一些实施例中，抗体或抗原结合部分的EC50值可以通过PD-1表达性细胞(例如，CHO细胞)的流式细胞术染色来确定。

术语“交叉竞争(cross-compete或cross-competition)”和“交叉阻断(cross-block、cross-blocked或cross-blocking)”在本文中可互换地用于意指抗体或其部分直接或通过变构调节间接干扰本发明的抗PD1抗体与靶PD1(例如，人PD1)结合的能力。可以使用竞争结合测定来确定抗体或其部分能够干扰另一种抗体与靶标结合的程度，并且因此确定是否可以将其说成是根据本发明进行交叉阻断或交叉竞争。结合竞争测定的一个实例是均相时间分辨荧光(HTRF)。一种特别合适的定量交叉竞争测定使用基于FACS或AlphaScreen的方法来测量经过标记的(例如，经过His标记的、经过生物素化的或经过放射性标记的)抗体或其部分和另一种抗体或其部分在其与靶标结合方面之间的竞争。通常，交叉竞争性抗体或其部分是例如这样的抗体或其部分：在交叉竞争测定中将与靶标结合，使得在测定期间并且在存在第二抗体或其部分的情况下，根据本发明的免疫球蛋白单个可变结构域或多肽的所记录替代高达以给定量存在的潜在交叉阻断性抗体或其片段进行的最大理论替代(例如，需要被交叉阻断的冷(例如，未经标记的)抗体或其片段进行的替代)的100％(例如，在基于FACS的竞争测定中)。优选地，交叉竞争性抗体或其部分的所记录替代介于10％与100％之间或介于50％与100％之间。

如本文所定义的抗体分子或抗原结合部分可以包括去除转译后修饰(PTM)位点(例如，糖基化位点(N连接的或O连接的)、脱氨位点、磷酸化位点或异构化/片段化位点)的一种或多种取代、缺失和/或插入。

已知超过350种PTM。PTM的关键形式包含(K和R残基的)磷酸化、糖基化(N连接的和O连接的)、sumo化(sumoylation)、棕榈酰化、乙酰化、硫酸盐化、豆蔻酰化、异戊烯化和甲基化。用于鉴定负责特定PTM的推定的氨基酸位点的统计方法在本领域中是众所周知的(参见Zhou等人,2016,《自然-实验室指南(Nature Protocols)》1:1318-1321)。设想了例如通过取代、缺失和/或插入来去除此类位点，然后任选地(实验上和/或理论上)测试(a)结合活性和/或(b)PTM的丧失。

例如，已经鉴定了Mu317鼠LCDR2(如本文所定义，即，氨基酸序列YAFHRFT(SEQ IDNO:31))在残基3(F)处具有推定的氧化位点。设想了例如通过保守或非保守取代(如取代为S或Y)来去除本发明的LCDR2中的等同位置处的此位点(如例如在表3和4的克隆09C06和其它克隆中)。

抗体分子或其抗原结合部分可以是人的、人源化的或嵌合的。

抗体分子或其抗原结合部分可以包括已经插入有CDR的一个或多个人可变结构域骨架支架。例如，VH区、VL区或VH区和VL区两者可以包括一个或多个人骨架区氨基酸序列。

抗体分子或其抗原结合部分可以包括已经插入有对应的HCDR序列的IGHV3-7人种系支架。抗体分子或其抗原结合部分可以包括VH区，所述VH区包括已经插入有一组对应的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列的IGHV3-7人种系支架氨基酸序列。

抗体分子或其抗原结合部分可以包括已经插入有对应的LCDR序列的IGKV4-1人种系支架。抗体分子或其抗原结合部分可以包括VL区，所述VL区包括已经插入有一组对应的LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列的IGKV4-1人种系支架氨基酸序列。

抗体分子或其抗原结合部分可以包括已经插入有对应的HCDR序列的IGHV3-7人种系支架和已经插入有对应的LCDR序列的IGKV4-1人种系支架。抗体分子或其抗原结合部分可以包括VH区和VL区，所述VH区包括已经插入有一组对应的HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列的IGHV3-7人种系支架氨基酸序列，所述VL区包括已经插入有一组对应的LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列的IGKV4-1人种系支架氨基酸序列。HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列可以是表4中的克隆中的任一个克隆的HCDR1、HCDR2、HCDR3、LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列(其中所有六个CDR序列均来自同一克隆)。

在一些方面中，抗体分子或其抗原结合部分可以包括免疫球蛋白恒定区。在一些实施例中，所述免疫球蛋白恒定区是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1或IgA2。在另外的实施例中，所述免疫球蛋白恒定区是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1或IgA2。所述抗体分子或其抗原结合部分可以包括免疫惰性的恒定区。在一些方面中，抗PD1抗体或其抗原结合部分可以包括免疫球蛋白恒定区，所述免疫球蛋白恒定区包括野生型人IgG1恒定区、包括氨基酸取代L234A、L235A和G237A的人IgG1恒定区或包括氨基酸取代L234A、L235A、G237A和P331S的人IgG1恒定区。在一些方面中，抗PD1抗体或其抗原结合部分可以包括免疫球蛋白恒定区，所述免疫球蛋白恒定区包括野生型人IgG2恒定区或野生型人IgG4恒定区。在一些方面中，抗PD1抗体可以包括免疫球蛋白恒定区，所述免疫球蛋白恒定区包括表10中的氨基酸序列中的任一个氨基酸序列。表10中的Fc区序列开始于CH1结构域。在一些方面中，抗PD1抗体可以包括免疫球蛋白恒定区，所述免疫球蛋白恒定区包括人IgG4、人IgG4(S228P)、人IgG2、人IgG1、人IgG1-3M或人IgG1-4M的Fc区的氨基酸序列。例如，与野生型人IgG4 Fc区相比，人IgG4(S228P)Fc区包括以下取代：S228P。例如，与野生型人IgG1 Fc区相比，人IgG1-3M Fc区包括以下取代：L234A、L235A和G237A，而与野生型人IgG1 Fc区相比，人IgG1-4M Fc区包括以下取代：L234A、L235A、G237A和P331S。在一些方面中，免疫球蛋白分子的恒定区中的氨基酸残基的位置是根据EU命名法进行编号的(Ward等人,1995《免疫疗法(Therap.Immunol.)》,2:77-94)。在一些方面中，免疫球蛋白恒定区可以包括RDELT(SEQ IDNO:18)基序或REEM(SEQ ID NO:19)基序(在表18中加下划线)。在小于RDELT(SEQ ID NO:18)同种异型的人群体中存在REEM(SEQ ID NO:19)同种异型。在一些方面中，抗PD1抗体可以包括免疫球蛋白恒定区，所述免疫球蛋白恒定区包括SEQ ID NO:9-15中的任一个。在一些方面中，抗PD1抗体可以包括表4中的克隆中的任一个克隆的六个CDR氨基酸序列和表10中的Fc区氨基酸序列中的任一个Fc区氨基酸序列。在一些方面中，抗PD1抗体可以包括免疫球蛋白重链恒定区和免疫球蛋白轻链恒定区，所述免疫球蛋白重链恒定区包括表10中的Fc区氨基酸序列中的任一个Fc区氨基酸序列，所述免疫球蛋白轻链恒定区是κ轻链恒定区或λ轻链恒定区。

在一些方面中，本文公开了一种抗PD1抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区、轻链可变(VL)区以及重链恒定区，其中

(a)VH区氨基酸序列包括GFTFSSYGMS(SEQ ID NO:33)的HCDR1、VANIWQDGSTKYVDSVKG(SEQ ID NO:34)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；VL区氨基酸序列包括KSSQSVTNDVA(SEQ ID NO:36)的LCDR1、YAYHRFT(SEQ ID NO:37)的LCDR2和HQAYSSPYT(SEQ ID NO:38)的LCDR3；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:9-15中的任一个；

(b)VH区氨基酸序列包括GFSLSSYGMS(SEQ ID NO:39)的HCDR1、VAVIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:40)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；VL区氨基酸序列包括KSSQSVTNDVA(SEQ ID NO:36)的LCDR1、YAYHRFT(SEQ ID NO:37)的LCDR2和HQAYSSPYT(SEQ ID NO:38)的LCDR3；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:9-15中的任一个；

(c)VH区氨基酸序列包括GFTFSSYGMS(SEQ ID NO:33)的HCDR1、VANIWQDGSEKYVDSVKG(SEQ ID NO:41)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；VL区氨基酸序列包括KSSQSVTNDVA(SEQ ID NO:36)的LCDR1、YAYHRFT(SEQ ID NO:37)的LCDR2和HQAYSSPYT(SEQ ID NO:38)的LCDR3；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:9-15中的任一个；

(d)VH区氨基酸序列包括GFSFSSYGMH(SEQ ID NO:42)的HCDR1、VANIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:43)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和HQAYSTPYT(SEQ ID NO:46)的LCDR3；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:9-15中的任一个；

(e)VH区氨基酸序列包括GFSFTSYGMS(SEQ ID NO:47)的HCDR1、LANIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:48)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和HQAYSTPYT(SEQ ID NO:46)的LCDR3；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:9-15中的任一个；

(f)VH区氨基酸序列包括GFTFSSYGVH(SEQ ID NO:49)的HCDR1、VGVIWQDGSENYVDSVKG(SEQ ID NO:50)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDLA(SEQ ID NO:51)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和QQAYSTPYT(SEQ ID NO:52)的LCDR3；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:9-15中的任一个；

(g)VH区氨基酸序列包括GFSFSSYGMH(SEQ ID NO:42)的HCDR1、VANIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:43)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和HQAYSTPYT(SEQ ID NO:46)的LCDR3；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:9-15中的任一个；

(h)VH区氨基酸序列包括GFSFSSYGMH(SEQ ID NO:42)的HCDR1、LANIWQDGSENYVDSVKG(SEQ ID NO:53)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和QQAYSTPYT(SEQ ID NO:52)的LCDR3；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:9-15中的任一个；

(i)VH区氨基酸序列包括GFTLSSYGMH(SEQ ID NO:54)的HCDR1、LAVIWADGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:55)的HCDR2和AYGNYMYIDV(SEQ ID NO:56)的HCDR3；VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和HQAYSTPYT(SEQ ID NO:46)的LCDR3；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:9-15中的任一个；

(j)VH区氨基酸序列包括GFTFSSYGMH(SEQ ID NO:57)的HCDR1、VGVIKQDGSENYVDSVKG(SEQ ID NO:58)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和HQAYSTPYT(SEQ ID NO:46)的LCDR3；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:9-15中的任一个；或者

(k)VH区氨基酸序列包括GFSFTSYGMH(SEQ ID NO:59)的HCDR1、VGVIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:60)的HCDR2和GYGNYWYIDV(SEQ ID NO:61)的HCDR3；VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDLA(SEQ ID NO:51)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和QQAYSTPYT(SEQ ID NO:52)的LCDR3；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:9-15中的任一个。

在一些方面中，本文公开了一种抗PD1抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区、轻链可变(VL)区以及重链恒定区，其中

(a)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:1或由其组成；VL区氨基酸序列包括SEQ IDNO:2或由其组成；并且所述重链恒定区包括野生型人IgG4恒定区、包括氨基酸取代S228P的人IgG4恒定区、野生型人IgG2恒定区；野生型人IgG1恒定区或包括氨基酸取代L234A、L235A和G237A的人IgG1恒定区；

(b)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:3或由其组成；VL区氨基酸序列包括SEQ IDNO:4或由其组成；并且所述重链恒定区包括野生型人IgG4恒定区、包括氨基酸取代S228P的人IgG4恒定区、野生型人IgG2恒定区；野生型人IgG1恒定区或包括氨基酸取代L234A、L235A和G237A的人IgG1恒定区；

(c)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:5或由其组成；VL区氨基酸序列包括SEQ IDNO:6或由其组成；并且所述重链恒定区包括野生型人IgG4恒定区、包括氨基酸取代S228P的人IgG4恒定区、野生型人IgG2恒定区；野生型人IgG1恒定区或包括氨基酸取代L234A、L235A和G237A的人IgG1恒定区；或者

(d)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:7或由其组成；VL区氨基酸序列包括SEQ IDNO:8或由其组成；并且所述重链恒定区包括野生型人IgG4恒定区、包括氨基酸取代S228P的人IgG4恒定区、野生型人IgG2恒定区；野生型人IgG1恒定区或包括氨基酸取代L234A、L235A和G237A的人IgG1恒定区。

在一些方面中，本文公开了一种抗PD1抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区、轻链可变(VL)区以及重链恒定区，其中

(a)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:1或由其组成；VL区氨基酸序列包括SEQ IDNO:2或由其组成；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:9-15中的任一个；

(b)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:3或由其组成；VL区氨基酸序列包括SEQ IDNO:4或由其组成；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:9-15中的任一个；

(c)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:5或由其组成；VL区氨基酸序列包括SEQ IDNO:6或由其组成；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:9-15中的任一个；或者

(d)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:7或由其组成；VL区氨基酸序列包括SEQ IDNO:8或由其组成；并且所述重链恒定区包括SEQ ID NO:9-15中的任一个。

在一些方面中，抗PD1抗体可以是免疫效应子无效的。在一些方面中，抗PD1抗体或其抗原结合部分不诱导免疫效应子功能，并且任选地抑制免疫效应子功能。在一些方面中，抗PD1抗体可以缺乏与人FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIIa和FcγRIIIb受体的可测量结合，但是维持与人FcγRIIb受体的结合，并且任选地维持与人FcRn受体的结合。FcγRI、FcγRIIa、FcγRIIIa和FcγRIIIb是活化性受体的实例。FcγRIIb是抑制性受体的实例。FcRn是再循环性受体的实例。在一些方面中，可以通过

分析来测量抗PD1抗体或其抗原结合部分对人Fc受体的结合亲和力。在一些方面中，可以使用均相时间分辨荧光(HTRF)来研究抗PD1抗体与人Fc受体的结合。在HTRF的一个实例中，对作为全套Fcγ受体的人IgG1(野生型)进行标记，然后在滴定竞争中使用具有经过工程化的Fc片段的抗体。在一些方面中，可以将PD1阳性细胞与人白细胞和抗PD1抗体混合，并且可以测量CDC、ADCC和/或ADCP引起的细胞杀伤。在一些方面中，包括人IgG1-3M的Fc区的氨基酸序列(参见表10)的抗PD1抗体是效应子无效的。在一些方面中，包括人IgG1-3M的Fc区的氨基酸序列(参见表10)的抗PD1抗体不是效应子无效的。

抗体分子或其抗原结合部分可以是Fab片段、F(ab)₂片段、Fv片段、四聚体抗体、四价抗体、多特异性抗体(例如，二价抗体)、结构域特异性抗体、单结构域抗体、单克隆抗体或融合蛋白。在一个实施例中，抗体可以是与第一抗原和第二抗原特异性结合的双特异性抗体，其中所述第一抗原是PD1并且所述第二抗原不是PD1。在例如Holliger和Hudson(2005,《自然生物技术(Nature Biotechnol.)》23(9):1126-1136)中描述了抗体分子和其构建和使用方法。

在本发明的另一方面中，提供了一种免疫缀合物，所述免疫缀合物包括与治疗剂连接的如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分。

合适的治疗剂的实例包含细胞毒素、放射性同位素、化学治疗剂、免疫调节剂、抗血管生成剂、抗增殖剂、促凋亡剂、细胞生长抑制酶和细胞溶解酶(例如，RNAse)。另外的治疗剂包含治疗性核酸，如对免疫调节剂、抗血管生成剂、抗增殖剂或促凋亡剂进行编码的基因。这些药物描述语不是互相排斥的，并且因此可以使用一个或多个上述术语来描述治疗剂。

在免疫缀合物中使用的合适的治疗剂的实例包含紫杉烷(taxane)、美登素(maytansine)、CC-1065和倍癌霉素(duocarmycin)、卡利奇霉素(calicheamicin)和其它烯二炔(enediyne)以及澳瑞他汀(auristatin)。其它实例包含抗叶酸类药物(anti-folate)、长春花生物碱(vinca alkaloid)和蒽环类药物(anthracycline)。免疫缀合物中还可以使用植物毒素、其它生物活性蛋白、酶(即，ADEPT)、放射性同位素、光敏剂。另外，可以使用如脂质体或聚合物等二级载剂作为细胞毒性药剂来制备缀合物。合适的细胞毒素包含抑制或阻止细胞功能和/或引起细胞破坏的药剂。代表性细胞毒素包含抗生素、微管蛋白聚合抑制剂、与DNA结合并破坏DNA的烷基化剂以及破坏蛋白质合成或必需细胞蛋白(如蛋白激酶、磷酸酶、拓扑异构酶、酶和周期素)的功能的药剂。

代表性细胞毒素包含但不限于阿霉素(doxorubicin)、道诺霉素(daunorubicin)、伊达比星(idarubicin)、阿柔比星(aclarubicin)、佐柔比星(zorubicin)、米托蒽醌(mitoxantrone)、表柔比星(epirubicin)、卡柔比星(carubicin)、诺加霉素(nogalamycin)、美诺立尔(menogaril)、吡柔比星(pitarubicin)、戊柔比星(valrubicin)、阿糖孢苷(cytarabine)、吉西他滨(gemcitabine)、三氟尿苷(trifluridine)、安西他滨(ancitabine)、依诺他滨(enocitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、去氧氟尿苷(doxifluhdine)、喷司他丁(pentostatin)、溴尿苷(broxuhdine)、卡培他滨(capecitabine)、克拉屈滨(cladhbine)、地西他滨(decitabine)、氟尿苷(floxuhdine)、氟达拉滨(fludarabine)、谷氏菌素(gougerotin)、嘌呤霉素(puromycin)、喃氟啶(tegafur)、噻唑呋林(tiazofuhn)、阿霉素(adhamycin)、顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、环磷酰胺(cyclophosphamide)、达卡巴嗪(dacarbazine)、长春花碱(vinblastine)、长春新碱(vincristine)、米托蒽醌、博来霉素(bleomycin)、氮芥(mechlorethamine)、泼尼松(prednisone)、丙卡巴嗪(procarbazine)、甲氨蝶呤(methotrexate)、氟尿嘧啶(flurouracils)、依托泊苷(etoposide)、紫杉醇(taxol)、紫杉醇类似物、铂(如顺铂和卡铂)、丝裂霉素(mitomycin)、噻替哌(thiotepa)、紫杉烷、长春新碱、道诺霉素、表柔比星、放线菌素(actinomycin)、安曲霉素(authramycin)、重氮丝氨酸(azaserine)、博来霉素、他莫西芬(tamoxifen)、伊达比星、多拉司他汀(dolastatin)/澳瑞他汀、哈米特林(hemiasterlin)、埃斯培拉霉素(esperamicin)和美登醇(maytansinoid)。

合适的免疫调节剂包含阻断激素对肿瘤的作用的抗激素类药物和抑制细胞因子产生、下调自身抗原表达或使MHC抗原隐蔽的免疫抑制剂。

还提供了一种核酸分子，所述核酸分子对如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分进行编码。核酸分子可以对本文所描述的抗PD1抗体或其抗原结合部分的(a)VH区氨基酸序列；(b)VL区氨基酸序列；或(c)VH氨基酸序列和VL区氨基酸序列两者进行编码。在一些方面中，可以分离如本文所定义的核酸分子。

进一步提供了一种载体，所述载体包括如本文所定义的本发明的核酸分子。所述载体可以是表达载体。

还提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞包括如本文所定义的本发明的核酸分子或载体。所述宿主细胞可以是重组宿主细胞。

在另外一方面中，提供了一种产生抗PD1抗体和/或其抗原结合部分的方法，所述方法包括：将本发明的宿主细胞在引起所述抗体和/或其抗原结合部分的表达和/或产生的条件下培养；以及从所述宿主细胞或培养物中分离所述抗体和/或抗原结合部分。

在本发明的另一方面中，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的本发明的核酸分子或如本文所定义的本发明的载体。

进一步提供了一种用于增强受试者的免疫应答的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的本发明的免疫缀合物或如本文所定义的本发明的核酸分子或如本文所定义的本发明的载体或如本文所定义的本发明的药物组合物。

在另外一方面中，提供了一种用于治疗或预防受试者的癌症的方法，所述方法包括向受试者施用有效量的如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的本发明的免疫缀合物或如本文所定义的本发明的核酸分子或如本文所定义的本发明的载体或如本文所定义的本发明的药物组合物。

例如，所述癌症可以是胰腺癌、黑色素瘤、乳腺癌、肺癌、支气管癌、结肠直肠癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、膀胱癌、脑或中枢神经系统癌、周围神经系统癌、食道癌、宫颈癌、子宫或子宫内膜癌、口腔癌或咽癌、肝癌、肾癌、睾丸癌、胆道癌、小肠或阑尾癌、唾液腺癌、甲状腺癌、肾上腺癌、骨肉瘤、软骨肉瘤或血液组织癌。

本发明还提供了如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的本发明的免疫缀合物或如本文所定义的本发明的核酸分子或如本文所定义的本发明的载体或如本文所定义的本发明的药物组合物，其用于治疗癌症。

在另一方面中，本发明提供了如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分或免疫缀合物或核酸分子或载体以及治疗方法，其用于单独使用、结合第二治疗剂(例如，抗癌剂)依次或同时使用。

在另外一方面中，提供了如本文所定义的本发明的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的本发明的免疫缀合物或如本文所定义的本发明的核酸分子或如本文所定义的本发明的载体或如本文所定义的本发明的药物组合物在制造用于治疗癌症的药剂中的用途。

本发明还提供了一种用于治疗或预防受试者的传染病或免疫性疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的如本文所定义的抗体分子或其抗原结合部分或如本文所定义的免疫缀合物或如本文所定义的核酸分子或如本文所定义的载体或如本文所定义的药物组合物。

在一个实施例中，本发明提供了一种包括本文所公开的氨基酸序列的抗PD1抗体或其抗原结合部分，其用于进行治疗。

本发明的药物组合物可以包括药学上可接受的赋形剂、载剂或稀释剂。药学上可接受的赋形剂可以是进入药物组合物中的化合物或化合物组合，所述化合物或化合物组合不会引起二级反应，并且允许例如促进抗PD1抗体分子的施用、增加其寿命和/或其在体内的功效或增加其在溶液中的溶解度。这些药学上可接受的媒剂是众所周知的，并且将由本领域的技术人员根据抗PD1抗体分子的施用模式进行调整。

在一些实施例中，抗PD1抗体分子可以以冻干形式提供，以在施用前复原。例如，冻干的抗体分子可以在施用于个体之前在无菌水中复原并与盐水混合。

抗PD1抗体分子通常将以药物组合物的形式施用，所述药物组合物除了抗体分子之外还可以包括至少一种组分。因此，药物组合物除了抗PD1抗体分子之外还可以包括药学上可接受的赋形剂、载剂、缓冲剂、稳定剂或本领域的技术人员众所周知的其它材料。此类材料应是无毒的，并且不应干扰抗PD1抗体分子的功效。载剂或其它材料的确切性质将取决于施用途径，施用可以通过推注、输注、注射或任何其它合适的途径进行，如下文所讨论的。

对于例如通过注射进行的肠胃外施用，例如，皮下或静脉内施用，包括抗PD1抗体分子的药物组合物可以采用不含热原且具有合适的pH、等渗性和稳定性的肠胃外可接受的水溶液的形式。本领域的相关技术人员完全能够使用例如等渗媒剂(如氯化钠注射液、林格氏注射液(Ringe's Injection)、乳酸化林格氏注射液)制备合适的溶液。可以根据需要使用防腐剂、稳定剂、缓冲剂、抗氧化剂和/或其它添加剂，包含缓冲剂，如磷酸盐、柠檬酸盐和其它有机酸；抗氧化剂，如抗坏血酸和蛋氨酸；防腐剂(如氯化十八烷基二甲基苄基铵；氯化六甲铵；苯扎氯銨；苄索氯铵；苯酚、丁醇或苯甲醇；对羟苯甲酸烷基酯，如对羟苯甲酸甲酯或丙酯；邻苯二酚；间苯二酚；环己醇；3'-戊醇；以及间甲酚)；低分子量多肽；蛋白质，如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白；亲水性聚合物，如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、组氨酸、精氨酸或赖氨酸；单糖、二糖和其它碳水化合物，包含葡萄糖、甘露糖或葡聚糖；螯合剂，如EDTA；糖，如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成盐反离子，如钠；金属络合物(例如，Zn蛋白质络合物)；和/或非离子型表面活性剂，如TWEEN^TM、PLURONICS^TM或聚乙二醇(PEG)。

根据要治疗的病状，包括抗PD1抗体分子的药物组合物可以单独使用或结合其它治疗同时或依次施用。

如本文所描述的抗PD1抗体分子可以在人或动物体的治疗方法中使用，包含预防性(prophylactic或preventative)治疗(例如，在个体的病状发作之前进行以降低个体发生病状的风险、延缓其发作或在发作后减轻其严重程度的治疗)。治疗方法可以包括向有需要的个体施用抗PD1抗体分子。

施用通常地以“治疗有效量”进行，所述治疗有效量足以显示对患者的益处。这种益处可以是至少改善至少一种症状。实际施用量以及施用率和施用时程将取决于所治疗疾病的性质和严重程度、所治疗的特定哺乳动物、个体患者的临床病状、病症的原因、组合物的递送部位、施用方法、施用时间安排以及执业医师已知的其它因素。治疗处方(例如，关于剂量等的决定)由全科医生和其它医师负责，并且可以取决于症状的严重程度和/或所治疗疾病的进展。抗体分子的适当剂量在本领域中是众所周知的(Ledermann J.A.等人,1991,《国际癌症杂志(Int.J.Cancer)》47:659-664；Bagshawe K.D.等人,1991,《抗体、免疫缀合物和放射性药物(Antibody,Immunoconjugates and Radiopharmaceuticals)》4:915-922)。可以使用在本文中或在《医师案头参考(Physician's Desk Reference)》(2003)中指示的针对所施用药剂的类型的具体剂量。抗体分子的治疗有效量或合适剂量可以通过在动物模型中比较其体外活性和体内活性来确定。用于将小鼠和其它试验动物中的有效剂量外推至人的方法是已知的。确切剂量将取决于许多因素，包含抗体是用于预防还是用于治疗、要治疗区域的大小和位置、抗体的确切性质(例如，完整抗体、片段)以及与抗体连接的任何可检测标记物或其它分子的性质。

对于全身性应用，典型的抗体剂量范围为100μg到1g，并且对于局部应用，典型的抗体剂量范围为1μg到1mg。可以在开始时施用较高的负荷剂量，然后施用一个或多个较低的剂量。通常，抗体将是完整抗体，例如，IgG1或IgG4同种型。这是用于成年患者的单次治疗的剂量，所述剂量可以针对儿童和婴儿按比例调整，并且还可以针对其它抗体形式与分子量成比例地调整。根据医生的判断，可以以每天一次、每周两次、每周一次或每月一次的间隔重复治疗。个体的治疗时间表可以取决于抗体组合物的药代动力学和药效学性质、施用途径和所治疗病状的性质。

治疗可以是周期性的，并且施用之间的时段可以是约两周或更长时间，例如，约三周或更长时间、约四周或更长时间、约每月或更长时间一次、约五周或更长时间或约六周或更长时间。例如，可以每两周到四周或每四周到八周进行治疗。可以在外科手术之前和/或之后给予治疗，和/或可以在外科手术治疗或有创手术的解剖部位处直接施用或施加治疗。上文描述了合适的调配物和施用途径。

在一些实施例中，本文所描述的抗PD1抗体分子可以以皮下注射剂的形式施用。例如对于长期预防/治疗，可以使用自动注射器施用皮下注射剂。

在一些实施例中，抗PD1抗体分子的治疗效果可以持续若干个半衰期，这取决于剂量。例如，抗PD1抗体分子的单个剂量的治疗效果可以在个体中持续1个月或更长时间、2个月或更长时间、3个月或更长时间、4个月或更长时间、5个月或更长时间或6个月或更长时间。

本发明还提供了一种用于产生与人PD1并且任选地还与食蟹猴PD1特异性结合的抗体分子或其抗原结合部分的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)将来自非人来源的抗PD1 CDR移植到人v结构域骨架中，以产生人源化抗PD1抗体分子或其抗原结合部分；

(2)产生所述人源化抗PD1抗体分子或其抗原结合部分的包括所述CDR中的一种或多种突变的克隆的文库；

(3)针对与人PD1并且任选地还与食蟹猴PD1的结合筛选所述文库；

(4)选择来自筛选步骤(3)的对人PD1并且任选地还对食蟹猴PD1具有结合特异性的克隆；以及

(5)由选自步骤(4)的克隆产生与人PD1并且任选地还与食蟹猴PD1特异性结合的抗体分子或其抗原结合部分。

所述方法可以包括另外一个步骤：基于在步骤(4)中选择的克隆(例如，基于在步骤(4)中选择的克隆的CDR中的特定位置处的另外的探索性诱变)产生另外的克隆，以增强人源化和/或最小化人T细胞表位含量和/或改善步骤(5)中产生的抗体分子或其抗原结合部分中的制造性质。

适用于上述方法的细化如下文实例1所述。

如本文所使用的，术语“PD1”是指保留PD1的至少部分生物活性的细胞程序性死亡蛋白1及其变体。如本文所使用的，PD1包含天然序列PD1的所有物种，包含人、大鼠、小鼠和鸡。术语“PD1”用于包含人PD1的变体、亚型和物种同源物。本发明的抗体可以与来自除了人之外的物种的PD1，特别是来自食蟹猴(cynomolgus monkey或Macacafascicularis)的PD1交叉反应。表11中提供了人和食蟹猴PD1氨基酸序列的实例。在某些实施例中，抗体可以对人PD1具有完全特异性，并且可以不表现出非人交叉反应性。

如本文所使用的，在本发明的抗体或“抗PD1拮抗剂抗体”(可互换地称为“抗PD1抗体”)的上下文中使用的“拮抗剂”是指能够结合PD1并抑制PD1生物活性和/或由PD1信号传导介导的一个或多个下游途径的抗体。抗PD1拮抗剂抗体涵盖可以(包含显著地)阻断、拮抗、抑制或降低PD1生物活性(包含由PD1信号传导(如受体结合和/或诱发对PD1的细胞应答)介导的下游途径)的抗体。出于本发明的目的，将明确理解的是，术语“抗PD1拮抗剂抗体”涵盖PD1本身和PD1生物活性(包含但不限于其抑制活化T细胞的抗肿瘤细胞活性的能力)或活性或生物活性的后果在任何有意义的程度上都基本上无效、减少或中和的所有术语、标题、功能状态和特性。

如果PD1相比于其与其它受体结合以更大的亲和力、亲合力、更容易地和/或以更长的持续时间结合，则所述抗体与PD1“特异性结合”、“特异性相互作用”、“优先结合”、“结合”或“相互作用”。

“抗体分子”是能够通过位于免疫球蛋白分子的可变区中的至少一个抗原识别位点来与靶标(如碳水化合物、多核苷酸、脂质、多肽等)特异性结合的免疫球蛋白分子。如本文所使用的，术语“抗体分子”不仅涵盖完整的多克隆抗体或单克隆抗体，而且还涵盖任何抗原结合片段(例如，“抗原结合部分”)或其单链、包括抗体的融合蛋白以及包括抗原识别位点的免疫球蛋白分子的任何其它经修饰构型，包含例如但不限于scFv、单结构域抗体(例如，鲨鱼抗体和骆驼抗体)、大抗体、微型抗体、胞内抗体、双功能抗体、三功能抗体、四功能抗体、v-NAR和双-scFv。

“抗体分子”涵盖任何类的抗体，如IgG、IgA或IgM(或其亚类)，并且抗体不需要属于任何特定类。根据重链的恒定区的抗体氨基酸序列，可以将免疫球蛋白归为不同类。存在五大类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且这些类中的几类可以进一步分为亚类(同种型)，例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。对应于不同类免疫球蛋白的重链恒定区分别被称为α、δ、ε、γ和μ。不同类免疫球蛋白的亚基结构和三维构型是众所周知的。

如本文所使用的，术语抗体分子的“抗原结合部分”是指完整抗体的保留与PD1特异性结合的能力的一个或多个抗体片段。抗体分子的抗原结合功能可以由完整抗体的片段执行。涵盖在抗体分子的术语“抗原结合部分”内的结合片段的实例包含Fab；Fab'；F(ab')2；由VH结构域和CH1结构域组成的Fd片段；由抗体的单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；单结构域抗体(dAb)片段和分离的互补决定区(CDR)。

术语“Fc区”用于定义免疫球蛋白重链的C端区。“Fc区”可以是天然序列Fc区或变体Fc区。尽管免疫球蛋白重链的Fc区的边界可以变化，但通常将人IgG重链Fc区定义为从位置Cys226处的氨基酸残基或从Pro230延伸到其羧基端。Fc区中的残基的编号为如Kabat中的EU索引的编号。免疫球蛋白的Fc区通常包括两个恒定结构域CH2和CH3。如本领域中已知的，Fc区可以以二聚体形式或单体形式存在。

抗体的“可变区”是指抗体轻链的可变区或抗体重链的可变区中的任一者或两者。如本领域中已知的，重链和轻链的可变区各自由通过三个互补决定区(CDR)(也被称为高变区)连接的四个骨架区(FR)组成，有助于形成抗体的抗原结合位点。当选择位于CDR侧翼的FR时，例如，当人源化或优化抗体时，来自含有同一规范类的CDR序列的抗体的FR是优选的。

本申请中使用的CDR定义组合了在本领域中已经创建的许多不同的、经常是冲突的方案中使用的结构域，所述方案基于免疫球蛋白库分析和在分离方面和抗体与抗原的共晶体方面对抗体进行的结构分析的组合(参见Swindells等人的评论,2016,abYsis：整合的抗体序列和结构管理、分析和预测(abYsis:Integrated Antibody Sequence andStructure-Management,Analysis,and Prediction)《分子生物学期刊(J Mol Biol)》[PMID:27561707；电子公开2016年8月22日])。本文所使用的CDR定义(“统一”定义)结合了所有此类现有洞悉的经验教训，并包含对潜在介导靶结合互补性的完整残基景观(landscape)进行采样所需的所有适当环位置。

表1示出了如本文所定义的Mu317鼠抗PD1抗体CDR的氨基酸序列(“统一”方案)与用于定义相同CDR的众所周知的替代性系统的比较。

如本文所使用的术语“保守取代”是指将一个氨基酸用不会显著有害地改变功能活性的另一氨基酸替代。“保守取代”的优选实例是将一个氨基酸用在以下BLOSUM 62取代矩阵中的值≥0的另一氨基酸替代(参见Henikoff和Henikoff,1992,《美国国家科学院院刊》89:10915-10919)：

术语“单克隆抗体”(Mab)是指源自单个拷贝或克隆(包含例如任何真核、原核或噬菌体克隆)的抗体或其抗原结合部分，而不是用于产生单克隆抗体的方法。优选地，本发明的单克隆抗体存在于同质或基本上同质的群体中。

“人源化”抗体分子是指作为含有源自非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白链或其片段(如Fv、Fab、Fab'、F(ab')₂或抗体的其它抗原结合亚序列)的非人(例如，鼠)抗体分子或其抗原结合部分的某种形式。人源化抗体可以是来自接受者的CDR的残基被来自如小鼠、大鼠或兔等具有期望特异性、亲和力和能力的非人物种(供体抗体)的CDR的残基替代的人免疫球蛋白(接受者抗体)。

“人抗体或完全人抗体”是指源自携带人抗体基因的转基因小鼠或人细胞的抗体分子或其抗原结合部分。

术语“嵌合抗体”旨在指代可变区序列源自一个物种并且恒定区序列源自另一个物种的抗体分子或其抗原结合部分，如可变区序列源自小鼠抗体并且恒定区序列源自人抗体的抗体分子。

“抗体-药物缀合物”和“免疫缀合物”是指与PD1结合和/或与细胞毒素剂、细胞抑制剂和/或治疗剂缀合的抗体分子或其抗原结合部分，包含抗体衍生物。

本发明的抗体分子或其抗原结合部分可以使用本领域众所周知的技术来产生，例如，重组技术、噬菌体展示技术、合成技术或此类技术的组合或本领域中熟知的其它技术。

术语“分离的分子”(其中分子是例如多肽、多核苷酸或抗体)是这样的分子，所述分子由于其衍生起源或来源而：(1)与在所述分子的天然状态下伴随所述分子的天然缔合的组分不缔合，(2)基本上不含来自同一物种的其它分子，(3)由来自不同物种的细胞表达或(4)在自然界中不存在。因此，化学合成的或在不同于天然来源细胞的细胞系统中表达的分子将与其天然缔合的组分“分离”。还可以通过使用本领域中众所周知的纯化技术进行的分离使分子基本不含天然缔合的组分。分子纯度或同质性可以通过本领域中众所周知的多种手段来测定。例如，可以使用聚丙烯酰胺凝胶电泳并且使用本领域中众所周知的技术将凝胶染色以使多肽可视化，从而测定多肽样品的纯度。为了某些目的，可以通过使用HPLC或本领域众所周知的其它纯化手段来提供更高分辨率。

术语“表位”是指分子的能够由抗体分子或其抗原结合部分识别并在抗体分子的抗原结合区中的一个或多个抗原结合区处结合的部分。表位可以由一级、二级或三级蛋白质结构的限定区组成，并且包含由抗体的抗原结合区或其抗原结合部分识别的靶标的二级结构单元或结构域的组合。表位可以同样由如氨基酸或糖侧链等分子的限定的化学活性表面分组组成，并且具有特异性三维结构特征以及特异性电荷特性。如本文所使用的术语“抗原表位”定义为多肽的抗体分子可以特异性结合(如通过本领域中众所周知的任何方法所测定的，例如通过常规免疫测定、抗体竞争性结合测定或通过x射线晶体学或相关的结构测定方法(例如，NMR)测定的)的一部分。

术语“结合亲和力”或“KD”是指特定抗原-抗体相互作用的解离速率。KD是解离速率(也被称为“脱离速率(off-rate)(k_off)”)与缔合速率或“结合速率(on-rate)(k_on)”之比。因此，K_D等于k_off/k_on，并表示为摩尔浓度(M)。因此，K_D越小，结合亲和力越强。因此，与1nM的KD相比，1μM的KD指示弱结合亲和力。可以使用本领域中既定的方法来确定抗体的KD值。一种用于确定抗体的KD的方法是使用表面等离子体共振(SPR)，通常使用生物传感器系统，如

系统来确定。

术语“效力”是生物活性的量度，并且可以被指定为IC₅₀或有效抑制在如本文所描述的PD1活性测定中测量的50％活性的抗体或抗体药物缀合物相对于抗原PD1的浓度。

如本文所使用的短语“有效量”或“治疗有效量”是指实现期望治疗结果所需的量(按剂量，针对时间段以及针对施用方式)。有效量至少是对受试者赋予治疗益处所需的活性剂的最小量，但小于毒性量。

本文中关于本发明的抗体分子的生物活性所使用的术语“抑制”或“中和”意指抗体基本上拮抗、禁止、阻止、抑制、减慢、破坏、消除、停止、减少或逆转例如被抑制的疾病的进展或严重程度的能力，包含但不限于抗体分子相对于PD1的生物活性或结合相互作用。

“宿主细胞”包含可以是或已经是用于掺入多核苷酸插入的一个或多个载体的接受者的单个细胞或细胞培养物。宿主细胞包含单个宿主细胞的后代，并且由于天然的、偶然的或故意的突变，后代(在形态学上或基因组DNA互补物上)可能不一定与原始亲本细胞完全相同。宿主细胞包含用本发明的一种或多种多核苷酸体内转染的细胞。

如本文所使用的，“载体”意指能够在宿主细胞中递送并且优选地表达一个或多个所关注的基因或序列的构建体。载体的实例包含但不限于病毒载体、裸DNA或RNA表达载体、质粒、粘粒或噬菌体载体、与阳离子缩合剂缔合的DNA或RNA表达载体、包封在脂质体中的DNA或RNA表达载体以及某些真核细胞，如生产细胞。

除非另有指示，否则本文所使用的术语“治疗”意指逆转此类术语所适用的病症或病状或此类病症或病状的一种或多种症状、使其缓解、抑制其进展、延迟其进展、延迟其发作或使其得到预防。除非另有指示，否则本文所使用的术语“治疗”是指如上文所定义的治疗动作。术语“治疗”还包含受试者的辅助和新辅助治疗。为避免疑义，本文中对“治疗”的提及包含对治愈性、缓解性和预防性治疗的提及。为避免疑义，本文中对“治疗”的多次提及还包含对治愈性、缓解性和预防性治疗的多次提及。

应理解的是，当在本文中无论何处用语言“包括”来描述实施例时，还提供了根据“由……组成”和/或“主要由……组成”描述的在其它方面类似实施例。

在根据马库什(Markush)组或其它替代方案分组来描述本发明的方面或实施例的情况下，本发明不仅涵盖整体列出的整个组，而且还涵盖所述组的单独的每个成员和主组的所有可能子组，也涵盖缺少组成员中的一或多个组成员的主组。本发明还设想明确地排除所要求保护的发明中的组成员中的任何组成员中的一或多个组成员。

除非另外定义，否则本文中使用的所有技术术语和科学术语的含义与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同。在发生冲突的情况下，应以本说明书(包含定义)为准。贯穿本说明书和权利要求书，词语“包括(comprise)”或如“包括(comprises)”或“包括(comprising)”等变体应当被理解为暗示包含所陈述整数或整数组，但不排除任何其它整数或整数组。除非上下文另外要求，否则单数术语应包含复数含义，并且复数术语应包含单数含义。术语“例如(e.g.或for example)”之后的任何一或多个实例并不意味着穷举或限制。

除非另有指示，否则本发明的实践将采用在本领域技术范围内的常规分子生物学(包含重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学技术。

现在将参考附图描述本发明的特定非限制性实施例。

实例1：产生经过优化的抗PD1治疗性抗体

介绍

在此实例中，成功产生一组经过优化的激动性抗PD1抗体。这些抗PD1抗体良好表达、生物物理上稳定、高度可溶并且与优选的人种系具有最高的同一性。

材料和方法

PD1文库产生和选择

通过大规模寡核苷酸合成和PCR来组装PD1 Fab文库。然后，将经过扩增的Fab库通过限制-连接克隆到噬菌粒载体中，转化到大肠杆菌TG-1细胞中，并且基本上如先前详细描述的那样拯救噬菌体库(Finlay等人,2011,《分子生物学方法(Methods Mol Biol.)》681:383-401)。

通过以下来进行噬菌体选择：用经过生物素化的PD1靶蛋白(人或食蟹猴)涂覆链霉亲和素磁性微珠，将珠粒用PBS洗涤三次并重悬于pH为7.4的PBS加上5％脱脂乳蛋白中。在第1轮选择中，将这些珠粒以100nM靶蛋白涂覆，之后在随后的三轮中降低抗原浓度。在每一轮中，在重新感染到TG1细胞中之前，使用胰蛋白酶洗脱噬菌体。

周质提取物产生(小规模)

在单独的大肠杆菌克隆中产生可溶性Fab。用异丙基1-硫-β-D-吡喃半乳糖苷诱导对数生长期的大肠杆菌TG1细胞。通过冷冻/解冻循环产生含有可溶性Fab的周质提取物：将细菌细胞团粒在-20℃下冷冻过夜，然后在室温下解冻，并重悬于pH为7.4的PBS中。在室温下振荡并离心后收集含有可溶性Fab的上清液。

IgG表达和纯化

将对前导组抗PD1抗体的重链和轻链可变结构域连同Mu317和hu317进行编码的哺乳动物密码子优化的合成基因克隆到分别包括效应子功能无效的人IgG1(“IgG1无效”；在下部铰链中含有消除正常的免疫球蛋白FcγR相互作用的L234A、L235A、G237A突变的人IgG1)和人Cκ结构域的哺乳动物表达载体中。将含重链和轻链载体共转染到哺乳动物表达系统中，然后对IgG进行基于蛋白质A的纯化，在变性和非变性SDS-PAGE上进行定量和QC。

Fab和IgG的直接结合ELISA

初始地，通过结合ELISA评估前导组与重组蛋白的结合和交叉反应性。将人PD1人Fc标记的重组蛋白和食蟹猴PD1人Fc标记的重组蛋白以1μg/ml涂覆到MaxiSorp^TM平底96孔板的表面上。将Fab样品在室温下以100微升/孔以1:5稀释应用于1％脱脂牛奶/1x PBS中，持续1小时。以两倍连续稀释从500nM到0.98nM滴定IgG，并允许其与经过涂覆的抗原结合。使用小鼠抗c-myc抗体，然后使用与辣根过氧化物酶缀合的驴抗小鼠IgG来检测Fab。使用与辣根过氧化物酶缀合的小鼠抗人IgG来检测IgG。用3,3',5,5'-四甲基联苯胺底物溶液(TMB)使结合信号可视化，并在450nm下测量吸光度。

IgG1无效抗体的Alphascreen表位竞争测定

在384孔白色微量滴定板(葛莱娜公司(Greiner))中以25μl的最终体积进行AlphaScreen测定(珀金埃尔默公司(Perkin Elmer))。反应缓冲液含有pH为7.3的1x PBS(Oxoid公司，目录号BR0014G)和0.05％(v/v)

20(西格玛公司(Sigma)，目录号P9416)。以三倍连续稀释以500nM的最终浓度开始滴定经过纯化的IgG样品，并在室温下与最终浓度为0.6nM的经过生物素化的人PD1-His/AviTag一起温育20分钟。以0.3nM添加亲本IgG并且以20μg/ml(最终浓度)添加抗人IgG1受体珠，并将混合物在室温下温育1小时。随后以20μg/ml(最终浓度)添加链霉亲和素供体珠，并在室温下温育30分钟。在EnVision多标签读板器(珀金埃尔默公司)中测量光的发射，并使用EnVision管理器软件进行分析。将值报告为每秒计数(CPS)，并针对串扰进行校正。

IgG的流式细胞术

在FAC中测试经过纯化的IgG与表达人(金斯瑞公司(Genscript)，目录号M00529)和食蟹猴(金斯瑞公司，目录号M00572)PD1的CHO-K1稳定细胞系以及CHO-K1野生型细胞的结合。以三倍连续稀释从500nM到0.98nM滴定IgG样品。用与FITC缀合的小鼠抗人IgG检测IgG的结合。通过在流式细胞仪(AttuneTMNxT声波聚焦细胞仪，英杰公司(Invitrogen)/赛默飞世尔科技公司(ThermoFisher Scientific))的BL-1通道检测器中检查每样品10000个细胞的平均荧光强度(MFI)来分析结果。在GraphPad Prism软件(加利福尼亚州拉贺亚市的GraphPad软件公司(GraphPad Software,La Jolla,CA))中使用MFI值和4个参数来计算EC50值。

基于细胞的PD1/PD-L1激动作用测定

将基于细胞的PD1/PD-L1阻断生物测定(普洛麦格公司(Promega))用于测量抗体在阻断PD1/PD-L1相互作用方面的效力。在测定前一天，将PD-L1 aAPC/CHO-K1细胞解冻并转移到细胞回收培养基(90％Ham's F12/10％FBS)中。将细胞悬浮液以100μl每孔分配到两个96孔白色平底测定板的内部60个孔中的每个孔中。将细胞回收培养基添加到外部孔中的每个外部孔中，并将测定板在37℃/5％CO2下温育过夜。在测定当天，将样品IgG在测定缓冲液(99％RPMI 1640/1％FBS)中从300nM到0.04nM稀释4倍，并以40μl每稀释添加到含有PD-L1 aAPC/CHO-K1细胞的测定板中。阳性抑制对照物包含人PD1抗体AF1086(R&D系统公司(R&D systems))、呈IgG1无效形式的mu317和呈IgG1无效形式的派姆单抗mab类似物。包含无关IgG作为阴性抑制对照物。然后，将PD1效应细胞在测定缓冲液(99％RPMI 1640/1％FBS)中解冻，并将细胞悬浮液添加到含有PD-L1 aAPC/CHO-K1细胞和IgG滴定样品的测定板的孔中。将测定板在37℃/5％CO2温育箱中温育六小时，允许平衡到环境温度，持续5-10分钟，然后添加80μl Bio-Glo^TM试剂(普洛麦格公司)。将测定板在环境温度下温育另外5-30分钟，并且随后在10分钟、20分钟和30分钟时测量发光信号。

同种异体混合白细球反应(MLR)测定

从血沉棕黄层制备来自健康供体的人PBMC。通过使用磁激活细胞分选(magnetic-activated cell sorting，MACs，干细胞公司(Stemcell))分离CD14+细胞来制备未成熟的单核细胞源性树突状细胞(Mo-DC)，并将其与分化培养基(美天旎公司(Miltenyi))一起培养7天。在这为期7天的时段结束时，Mo-DC被归类为“未成熟”并准备好在未成熟的MLR中使用。使用T细胞分离试剂盒(干细胞公司)，在所需当天由与用于Mo-DC的供体不同的供体制备应答T细胞(使用冷冻保存的PBMC)。在每种实验条件下(未成熟和MoDC)，进行6次单独的MLR，以提供生物学变异，所有条件均是一式三份制备的。将细胞共培养：每孔1×10⁴个Mo-DC和1×10⁵个CD4+T细胞+/-测试IgG抗体，持续4天。每项测定中均包含单细胞类型(T细胞/Mo-DC)对照物。在培养期结束时收集上清液，并通过ELISA评估其IFN-γ。

电荷变体分析

根据制造商的方案，在LabChip GXII Touch HT(英国比肯斯菲尔德的珀金埃尔默公司(PerkinElmer,Beaconsfield,UK))上通过蛋白质电荷变体测定确定测试物品的电荷变体曲线。

DSC分析

使用运行版本1.22软件的MicroCal PEAQ-DSC(英国马尔文的马尔文仪器公司(Malvern Instruments,Malvern,UK))对测试物品的Tm进行分析。将样品以200℃/小时的速率在20到110℃的范围内加热。基于蛋白质浓度对热数据进行归一化。根据加热扫描数据确定蛋白质的Tm。

强制氧化分析

对于强制氧化分析，将PBS中的测试物品在室温下用0.5％H2O2处理2小时并且然后在Dionex Ultimate 3000RS HPLC系统(英国赫默尔亨普斯特德的赛默飞世尔科技公司(ThermoFisher Scientific,Hemel Hempstead,UK))上进行SEC、HIC和RP分析(完整抗体和亚基)之前在80℃下储存，如下文详述的。为了还原完整抗体，添加DTT到最终浓度为0.33M，并将样品在室温下温育1小时，并立即通过RP进行分析。

完整抗体和亚基的RP分析——使用连接到Dionex Ultimate 3000RS HPLC系统(英国赫默尔亨普斯特德的赛默飞世尔科技公司)的PLRP-S 1000，5μm，2.1mm×50mm柱(英国斯托克波特的安捷伦科技公司(Agilent Technologies,Stockport,UK))进行色谱分离。方法由以下组成：在24分钟内，从75％缓冲液A(0.075％TFA、含7.5％乙腈的H2O)到50％缓冲液B(0.075％TFA、含7.5％H2O的乙腈)(对于mAb 1-4)或90％缓冲液B(对于mAb 5)的线性梯度。在整个分析中，流速为0.5毫升/分钟，并且温度维持在70℃。通过在280nm下的UV吸收进行检测。

SEC分析——使用连接到Dionex Ultimate 3000RS HPLC系统(英国赫默尔亨普斯特德的赛默飞世尔科技公司)的Acquity UPLC Protein BEH SEC柱，

1.7μm，4.6mm×150mm(英国埃尔斯特里的沃特世公司(Waters,Elstree,UK))和Acquity UPLC ProteinBEH SEC保护柱30×4.6mm，1.7μm，

(英国埃尔斯特里的沃特世公司)进行色谱分离。方法由15分钟内的等度洗脱组成，并且流动相为pH为6.8的0.2M磷酸钾、0.2M氯化钾。流速为0.25毫升/分钟。通过在280nm下的UV吸收进行检测。

HIC分析——使用连接到Dionex Ultimate 3000RS HPLC系统(英国赫默尔亨普斯特德的赛默飞世尔科技公司)的TSKgel Butyl-NPR 4.6mm×35mm HIC柱(英国雷丁的TOSOH生物科技公司(TOSOH Bioscience Ltd.,Reading,UK))进行色谱分离。方法由以下组成：9分钟内从60％缓冲液A(pH为7.0的100mM磷酸钠，2M硫酸铵)到90％缓冲液B(pH为7.0的100mM磷酸钠)的线性梯度。流速为1.2毫升/分钟。通过在280nm下的UV吸收进行检测。

抗体v结构域特异性测试：人受体阵列分析

在Retrogenix有限公司(Retrogenix Ltd.)进行人细胞膜受体蛋白质组学阵列。一级筛选：分别针对与表达5528种人质膜和拴系的分泌蛋白的固定HEK293细胞/载玻片的结合筛选2μg/ml的每种抗体。所有转染效率均超过最小阈值。使用AF647荧光二级抗人IgG1抗体来检测抗体结合。通过在ImageQuant上分析荧光(AF647和ZsGreen1)来鉴定一级命中(重复的点)。确认/特异性筛选：将对仅ZsGreen1或ZsGreen1和CD20、PD1、BTN2A1或LSAMP进行编码的表达载体转染到人HEK293细胞中。将每种活转染子与2μg/ml的每种测试抗体、阳性对照抗体利妥昔单抗(Rituximab)或无一级抗体一起温育。将细胞洗涤，并与如在细胞微阵列筛选中使用的抗体的相同的AF647抗人IgG Fc检测抗体一起温育。将细胞再次洗涤，并使用Accuri流式细胞仪(BD)通过流式细胞术进行分析。使用7AAD活/死染料排除死细胞，并选择ZsGreen1阳性细胞(即，经转染的细胞)进行分析。

结果和讨论

CDR移植到优选的人种系v基因上

初始地，使用CDR移植将激动性鼠抗PD1 IgG Mu317的CDR(WO2015/035606 A1和表2)引入到人种系免疫球蛋白v结构域骨架序列支架中。为了使工程努力偏向于具有最佳的药物样性质的最终领先的治疗性IgG化合物，选择将亲本抗体的CDR移植到“优选的”种系支架IGHV3-7和IGKV4-1上，已知所述种系支架具有良好的溶解性和药物开发特性并在经过表达的人抗体库中高频率使用。

在表2中概述了那些支架和所移植CDR的定义。在表2中还示出了hu317抗PD1抗体的重链和轻链序列。尽管此CDR移植过程是众所周知的，但是预测给定的一组人v结构域序列是否将充当非人CDR移植的合适受体骨架仍然是个问题。使用不合适的骨架可能导致靶结合功能丧失、蛋白质稳定性问题或者甚至最终IgG的表达受损。因此，后来将IGHV3-7/IGKV4-1移植物作为CDR诱变和选择经过改进的克隆的模板。

文库产生和筛选

将经过CDR移植的IGHV3-7/IGKV4-1 v结构域序列组合成Fab噬菌体展示形式，并通过寡核苷酸合成和组装产生诱变文库盒。初始地构建两个单独的Fab文库，所述文库与同源的成对的经过移植的v结构域组合在重链或轻链v结构域序列中采样突变多样性。将VH和VL文库两者分别连接到噬菌体展示载体中，并通过电穿孔转化到大肠杆菌中，以分别产生3.15×10⁹和2.27×10⁹个独立的克隆。通过对每文库96个克隆进行测序来验证文库构建质量。此测序数据表明，已经以约50％的频率对编码每个变化位置处的鼠或人种系残基的位置进行了有效采样并且具有非二元氨基酸含量的采样位置对具有预期的氨基酸的所讨论位置进行了采样。使用辅助噬菌体M13拯救文库，并选择经过生物素化的人和食蟹猴PD1-Fc蛋白。在首轮选择之后，将由经过突变的VH和VL结构域构成的两个池重组为次级文库，并进行另外三轮标准选择以及两轮“严选-补救法(hammer-hug)”。

选择后筛选(图1A、1B)和DNA测序表明，存在712个Fab克隆，所述Fab克隆在ELISA中表现出与人和食蟹猴PD1的强结合并且在Alphascreen测定中对Mu317 IgG1与人和食蟹猴PD1结合的抑制作用>50％。在这712个克隆中，在所有CDR中均观察到种系化突变(表3)。基于CDR种系化水平相对于与人和食蟹猴PD1-Fc两者的结合的ELISA信号对前导克隆进行排名。然后，将来自此排名的前7个克隆的v结构域亚克隆到IgG表达载体中，以进行如下的进一步测试(表4)。

虽然在直接源自文库选择的前导克隆的所有CDR中都观察到了种系化突变，但仍然可能的是，序列分析可能将进一步的克隆设计成具有最大程度人源化。因此，将具有针对人和食蟹猴蛋白质的结合信号的712个命中用于分析此功能表征群体的CDR中鼠氨基酸的保留频率。将位置氨基酸保留频率表示为在V_L结构域和V_H结构域中存在的百分比(分别地，图2A、2B)。在一系列组合设计中，将RF<75％的鼠残基视为可能不是靶结合互补位所必需的并且可能对种系化开放的位置(表4)。在V_H结构域(不包括CDR-H3)中，CDR-H1和H2中的15个鼠残基中只有5个表现出高于75％的保留频率(图2B)。在V_L结构域中，源自Mu317序列的12个鼠CDR残基中只有6个以>75％的频率保留(图2A)。此分析强有力地表明，可以使LCDR1和LCDR3序列与IGKV4-1接近种系同一性。

对含有RF>75％的那些鼠残基的组合的设计赋予前缀“MH”(MH＝最大程度人源化)。总共产生12个初始设计V_H和V_L设计结构域组合：MH1-MH12(表4)。通过基因合成产生MH克隆并且将其(连同上文概述的7个文库源性克隆以及阳性对照物Mu317和hu317)克隆到人表达载体中以便以IgG1无效形式产生。所有IgG均容易表达且易于从哺乳动物细胞的瞬时转染纯化。

前导IgG特异性和效力特性

然后，以直接滴定ELISA形式测试上文所描述的经过纯化的IgG与人和食蟹猴PD1-Fc的结合。此分析表明，所有文库源性克隆和设计克隆的精选子集(MH4、MH8、MH12)的人和食蟹猴PD1结合曲线与Mu317的结合曲线类似或相对于Mu317的结合曲线有所提高(图3A、3B)。大部分设计克隆(MH1、MH2、MH3、MH5、MH6、MH7、MH9、MH19、MH11)表现出对PD1的一个或两个直系同源物的结合减少，从而表明当组合使用时，在这些克隆中存在的突变对于结合来说是破坏性的。此发现突出显示了即使拥有图2A和2B中概述的突变图，也无法精确地预测哪些突变组合将产生最佳的结果。

建立Alphascreen测定，以测试设计IgG的PD1结合亲和力以及其与mu317 IgG在与经过生物素化的单体人PD1结合方面的表位竞争。在此测定中，虽然所有3个克隆均表现出与Mu317的完全表位竞争，但克隆MH8表现出的IC50值最接近mu317表现出的IC50值(mu317：0.37nM；MH8：0.39nM；MH12：0.624nM；MH4：0.630nM)。

在细胞膜处的前导IgG结合特异性的流式细胞术分析

通过流式细胞术分析PD1抗体在细胞表面处的浓度依赖性结合。对用人或食蟹猴PD1稳定转染的CHO细胞进行初始分析。这些分析表明，前导文库源性和设计克隆表现出与膜呈递的人或食蟹猴PD1(图4A、4B)的浓度依赖性结合，其中效力与hu317的效力类似或相对于后者有所提高。在未经转染的CHO细胞上，未观察到任何克隆的结合信号，即使在最高浓度下也是如此。

PD1-PDL1阻断测定中的前导IgG分析

在基于细胞的PD1/PD-L1阻断报告基因测定中，所有所测试的克隆均表现出对PD1的浓度依赖性拮抗作用。前导克隆MH4、MH8、MH12、09C06、17A12和20C07表现出的诱导倍数曲线和最大信号值与mu317表现出的诱导倍数曲线和最大信号值高度类似(图5)。然后，在此测定中再次检查最大程度人源化的克隆MH4、MH8和MH12(分别地，图6A、6B、6C)，这些克隆与mu317和hu317 IgG1两者一起运行。这些分析表明，这三个克隆完全维持了mu317和hu317两者的效力，具有重叠的浓度依赖性诱导倍数曲线。

抗体v结构域T细胞表位分析

将基于鉴定T细胞表位在治疗性抗体和蛋白质中的位置的计算机技术(Abzena有限公司)用于评估Hu317和前导抗体v结构域两者的免疫原性。用重叠的9mer肽(其中每个肽与最后一个肽重叠8个残基)分析v-结构域序列，针对34种MHC II类同种异型中的每一种对所述肽进行测试。基于潜在的“拟合”以及与MHC II类分子的相互作用对每个9mer进行评分。通过软件计算的肽得分介于0与1之间。突出显示产生高平均结合得分(在iTope^TM评分功能中，>0.55)的肽，并且如果>50％的MHC II类结合性肽(即，34个等位基因中的17个)具有高结合亲和力(得分>0.6)，则此类肽被定义为是被视为有高风险含有CD4+T细胞表位的“高亲和力”MHC II类结合性肽。低亲和力MHC II类结合性肽与大量(>50％)等位基因结合，其中结合得分>0.55(但并不是多数>0.6)。使用TCED^TM对序列进行进一步分析。将序列用于通过BLAST搜索来查询TCED^TM，以便鉴定来自在Abzena有限公司进行的先前体外T细胞表位作图研究中刺激T细胞应答的无关蛋白质/抗体的肽(T细胞表位)之间的任何高序列同源性。

将肽分为以下四类：高亲和力外来(“HAF”-高免疫原性风险)、低亲和力外来(“LAF”-低免疫原性风险)、TCED+(先前在TCED^TM数据库中鉴定的表位)和种系表位(“GE”-具有高MHC II类结合亲和力的人种系肽序列)。由于T细胞耐受性，种系表位9mer肽不太可能具有免疫原性潜力，这已经通过使用广泛的种系肽进行的研究得以验证。重要的是，这种种系v结构域表位(进一步由人抗体恒定区中存在的类似序列辅助)还竞争在抗原呈递细胞的膜处进行MHC II类占据，从而降低外来肽呈递足以达到T细胞刺激所需的“活化阈值”的风险。因此，高GE含量是抗体治疗剂的临床开发中的一种有益特性。

如图7和表5所示，与Hu317相比，关键前导v结构域表现出肽表位含量的显著有益变化。由于已经在使Hu317的CDR(表2)中包含的大量鼠残基人源化的同时成功地对维持抗PD1效力的抗体选择了此处进行的v结构域工程化过程，所以在文库源性和设计前导(表5)中不存在Hu317的v结构域中存在的多个HAF表位和LAF表位(图7A)。出乎意料地，发现GE表位含量显著增加(在所有前导中从5增加到≥14)，特别是在前导克隆的VH区中(图7B-H)，并且TCED+表位在所有前导中都减少(表5)。通过调整Hu317的CDR以适应IGHV3-7种系来特异性地介导VH结构域中的免疫原性风险的显著提高，现在已经(首次)显示，所述IGHV3-7种系在其骨架中含有的GE表位比存在于IGHV4-4 VH移植的Hu317骨架中的GE表位多。例如，使HCDR2序列的最后7个残基种系化以与IGHV3-7(所有前导克隆中的YVDSVKG(SEQ ID NO:80)，表4)匹配允许跨越c端HCDR2和n端骨架3区(VKGRFTISR(SEQ ID NO:81))的GE得以复原。另外，HCDR1序列从“GFSLTSYGVH”(SEQ ID NO:82)突变为序列“GFTFSSYGMH”(SEQ IDNO:57)(存在于克隆09C06、17A12、17D08、17G08和15D07中)不仅烧蚀了跨越Hu317的HCDR1和骨架2区的LAF序列“LTSYGVHWI”(SEQ ID NO:83)，而且使此CDR与人v基因IGHV3-33和IGHV3-30-5具有完全种系同一性。HCDR1序列“GFTFSSYGMS”(SEQ ID NO:33)(存在于克隆20C07和所有设计克隆MH1-MH18中，表4)还烧蚀了LAF序列“LTSYGVHWI”(SEQ ID NO:83)。两个人源化CDR1序列均对在Hu317或文库源性克隆11C08中不存在的GE肽序列“YGM(H/S)WVRQA”(SEQ ID NO:84)进行编码，这是由于在其HCDR1中在位置9处(例如，GFSLTSYGVH(SEQID NO:82))存在残基缬氨酸。

重要的是，还通过在前导克隆的其它CDR中存在的种系化突变消除了多个外来表位。例如，在大多数前导克隆中通过位置6处的突变V>R消除了跨越Hu317的HCDR3和骨架4的TCED+和LAF肽“YWYIDVWGQ”(SEQ ID NO:85)(表4)。类似地，在克隆MH1-MH18和09C06中，通过残基“IGV”突变为“VAN”来同时烧蚀在Hu317中存在的HAF肽“LEWIGVIYA”(SEQ ID NO:86)和LAF肽“IGVIYADGS”(SEQ ID NO:87)两者(表4、表5)。在克隆11C08的VH结构域中存在与来自Hu317的“LEWIGVIYA”(SEQ ID NO:86)HAF重叠的HAF肽“LEWVGVIWQ”(SEQ ID NO:88)，而LAF肽“IGVIYADGS”(SEQ ID NO:87)被烧蚀。在克隆17A12中，来自Hu317的“LEWIGVIYA”(SEQID NO:86)HAF通过突变为LAF肽“LEWLANIWQ”而被部分烧蚀。

在Hu317和所有前导的VL区中，GE相对于外来表位的总平衡未增加(图7，表5)，但是引入了上文概述的通过使LCDR2的位置3处的F(YAFHRFT(SEQ ID NO:31))突变来烧蚀LCDR2中的氧化风险的突变。总体而言，上文概述的免疫原性发现表明，通过对VH结构域中的多个CDR位置进行广泛但无法预测的种系化(具体地进入IGHV3-7骨架))，前导抗体实现了对若干重要的高风险人t细胞表位肽序列的去除并且获得了可能降低免疫原性的若干GE，从而大大提高了GE与外来表位的比率。

MLR测定中的前导IgG效力

这项研究的目的是通过测量培养上清液中的IFN-γ来表征人同种异体MLR中靶向PD-1的前导抗体的效力。在对照条件下(图8A)，细胞因子水平表明，与同种型对照人IgG4相比，纳武单抗(Nivolumab)类似物使IFN-γ水平显著增加。同种型与仅细胞相比无差异，并且在单细胞条件下几乎未显示出可测量的细胞因子。

由于所有对照物均表现出预期的信号，因此在所述测定中检查了克隆09C06、MH4、MH8和MH12的活性。以三种浓度(0.1μg/mL、1μg/mL和10μg/mL)使用所述四种测试抗体，并将其与适当的同种型对照物人IgG1进行比较。所有四种测试抗体均使细胞培养上清液内的IFN-γ产量以剂量依赖性方式显著增加(图8B)。数据显示，当与hIgG1相比时，所提供的所有四种测试抗体均可以在同种异体MLR中提高IFN-γ产量。最后，在此测定中在宽浓度范围内对克隆Hu317、MH4和MH8进行了测试(图8C)。此分析表明，在相关的人离体效力测定中，MH4和MH8克隆两者均保留了与Hu317的浓度依赖性活性完全重叠的浓度依赖性活性。

电荷变体分析

电荷异质性分析广泛用于表征单克隆抗体，因为其提供有关产物质量和均匀性的重要信息。如糖基化、赖氨酸截短、氧化或脱酰胺化等酶促转译后修饰可能引起异质性。IgG的异质性是一种制造风险，并且可能使生物处理方案的复杂性增加。

蛋白质电荷变体测定允许相对于主要产物峰鉴定碱性和酸性蛋白质变体。微流控芯片技术在荧光标记之后解析蛋白质电荷变体。图9中描绘了09C06、MH4、MH8、MH12和hu317IgG的电荷变体曲线。所有mAb 09C06、MH4、MH8和MH12均显示出高度均匀的曲线，其中主要亚型占总蛋白质的77.4％到82.8％(表6)。然而，相比而言，Hu317显示出复杂得多的曲线，具有4个不同的峰，碱性亚型百分比较高(23.1％)，并且主要亚型表示少于总数的69％。并未通过去除前导IgG的CDR中的潜在转译后修饰位点来立即解释克隆09C06、MH4、MH8和MH12在电荷同质性方面相比于Hu317的这些显著改善，因为维持了CDR中的任何潜在的o-连接糖基化、脱酰胺化或异构化位点，并且未引入n-连接糖基化位点(表2和4)。由于这种改善的均匀性还可能由热稳定性提高或抗氧化性提高引起，因此研究了这些特性。

使用DSC进行热稳定性评估

蛋白质的DSC曲线通过其热稳定性提供有关其总体结构稳定性的信息，但还可以表示用于评估结构修饰的结构“指纹”。

完整抗体的热谱图可以呈现两个或三个峰，其中最大的峰含有来自Fab片段的贡献。通常，第一转变涵盖CH2结构域的解折叠，而最后一个转变将包含CH3结构域的解折叠。与CH2和CH3结构域的解折叠相比，Fab解折叠可能在不同的温度下发生，但Fab片段解折叠还可能“掩埋(bury)”CH2或CH3结构域的解折叠，从而导致峰重叠。由于同一亚类的抗体的恒定结构域几乎相同，因此CH2和CH3结构域应具有相当的Tm，而Fab的Tm将会因抗体而异。

所测试的所有五个IgG(09C06、MH4、MH8、MH12和Hu317)与DSC分析完全相容并且产生了良好的分辨率数据(图10)，从而呈现相当的样品同质性和协同性。在图10A(09C06IgG)中，第一转变表示CH2结构域解折叠，第二转变表示Fab片段的解折叠，并且第三转变表示CH3结构域解折叠。对于克隆MH4、MH8和MH12，主要的Fab转变较低，与CH2结构域重叠(图10B-D)。对于克隆Hu317，Fab结构域转变实际上更高并且与CH3重叠(图10E)。总体而言，Fab解折叠Tm值表明，与Hu317的v结构域的总体稳定性相比，前导克隆09C06、MH4、MH8和MH12的v结构域的总体稳定性实际上有所降低，但仍然相对稳定(表7)。

强制氧化分析

暴露氨基酸残基(如色氨酸和甲硫氨酸)的氧化是mAb的常见降解途径，改变其结构完整性，对其生物学活性和异质性具有潜在影响。在这项研究中，在室温下用0.5％H2O2对IgG 09C06、MH4、MH8、MH12和Hu317进行强制氧化，持续2小时。由于氧化可以通过增加氧化形式的极性或通过构象变化来改变抗体的总体疏水性，因此通过尺寸排阻(SEC)、反相(RP)和疏水相互作用(HIC)色谱法来分析强制氧化诱导的潜在变化。

SEC分析——在五种IgG中的任一种IgG中均未观察到强制氧化诱导的SEC曲线的显著变化，其中较高分子量的亚型保持低于总蛋白质的0.6％(表8)。

RP分析——在H2O2处理后，未观察到(未还原和已还原)完整mAb的保留时间的显著变化，这意味着暴露氨基酸的氧化程度最小(表8)。

HIC分析——在所有5个测试物品中，H2O2处理仅诱导了HIC上的保留的轻微(0.4-0.6分钟)减少，这意味着暴露氨基酸的氧化有限(表8)。

总之，这些数据证实，与Hu317相比，前导IgG 09C06、MH4、MH8和MH12未表现出稳定性的提高或氧化降解潜力的降低，并且稳定性变化或转译后CDR修饰基序的变化不是所观察到的电荷同质性的提高的原因。

抗体结合特异性分析

为了检查Hu317和克隆MH4、MH8和MH12的蛋白质组学选择性，将基于使用表达5528种独特的人质膜受体和拴系的分泌蛋白的细胞的高密度阵列的体外技术(Retrogenix有限公司)用于筛选经过纯化的IgG形式中的脱靶结合特异性。此受体阵列结合筛选确定，Hu317仅表现出对膜表达性PD1的强结合，而未表现出对任何其它蛋白质的可测量结合(表12)。相比而言，克隆MH4、MH8和MH12还表现出非常有限的信号，其中PD1的信号最强，但是还具有2种潜在的新结合特异性：BNT2A1(登录号NM_007049)和LSAMP(BC033803)。MH12是唯一显示出与BNT2A1有任何结合信号的克隆。为了通过正交的高灵敏度测定检查这些发现，使用对CD20、PD1、BTN2A1、LSAMP和仅ZS green(阴性对照物)进行编码的质粒进行人细胞系HEK293的瞬时转染。然后，使用Hu317、MH4、MH8、MH12和利妥昔单抗IgG对经过转染的细胞进行染色。在以2μg/ml对PD1转染的细胞的染色时，除了利妥昔单抗和仅二级对照物之外，所有所测试的抗体均显示出PD1转染的细胞的预期强特异性染色，但未显示出对ZS green转染的细胞的预期强特异性染色(图11)。除了PD1转染的细胞之外，Hu317 IgG未显示出与任何细胞的结合，从而证实了芯片分析的发现，其中此IgG具有完全PD1选择性。利妥昔单抗阳性对照物表现出对CD20转染的细胞的强特异性染色，并且阴性对照物(仅二级标记的抗体)未表现出与任何细胞的结合(图11)。相比而言，在直方图分析(图11)和仅ZSgreen转染的细胞上的平均值荧光测量结果的中值变化倍数两者中，仅克隆MH8和MH12在PD1和LSAMP两者上均表现出清晰的结合信号，而未表现出BTN2A1的结合(表13)。克隆MH8和MH12对人受体蛋白质组中的单个新蛋白质的这种出乎意料的新获取的反应性可能具有潜在的治疗益处，因为LSAMP是已经显示其表达在如急性髓细胞白血病等特定肿瘤类型中上调的细胞表面受体(Coccaro,N.等人,《癌症遗传学(Cancer Genetics)》2015,208(10):517-522)并且可能因此连同PD1在共靶向方面具有价值。

尽管已经参考优选实施例或示例性实施例描述了本发明，但是本领域的技术人员将认识到，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以对本发明进行各种修改和变化，并且本文中清楚地设想到了此类修改。既不旨在对本文所公开的和在所附权利要求中阐述的具体实施例进行限制，也不应推断出任何限制。

本文所引用的所有文档或文档部分，包含但不限于专利、专利申请、文章、书籍和论文，特此明确地出于任何目的通过引用整体并入。如果所并入文档或文档部分中的一个或多个定义的术语与本申请中所述术语的定义相矛盾，则以本申请中出现的定义为准。然而，对本文所引用的任何参考文献、文章、出版物、专利、专利出版物和专利申请的提及不并且不应当被视为对其构成有效的现有技术或形成世界上任何国家的公知常识的一部分的承认或任何形式暗示。

表1.此处所定义的鼠抗PD1 CDR氨基酸序列(“统一”方案)与替代性定义的比较。

表2.MU317鼠抗PD1 v结构域(mVH/mVL)和人种系CDR移植物(VH1/VL1)的氨基酸序列。

¹用于基于IMGT系统进行移植的人种系定义。²CDR残基以粗体加下划线表示。如上所述，本稿件中使用的“统一”CDR定义是相比于经典Kabat定义的扩展定义。上文的每个序列按以下顺序示出骨架区(FR)和CDR：FR1-CDR1-FR2-CDR2-FR3-CDR3-FR4。³用于文库构建的移植物。

表3.来自显示与人和食蟹猴PD1蛋白结合的Fab克隆的独特CDR。

表4.独特的文库源性和设计PD1拮抗性IgG的CDR序列。

表5.Hu317和示例前导克隆的预测t细胞表位含量评分。

表6.Hu317和示例前导克隆的电荷亚型分布。

表7.Hu317和示例前导克隆的热转变中点。

表8.如通过尺寸排阻(SEC)、反相(RP)和疏水相互作用(HIC)色谱法测量的，在用0.5％H2O2进行强制氧化之前和之后，IgG显示出高完整性

表9.抗体可变区氨基酸序列的实例。

抗体MH8重链可变(VH)区

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMSWVRQAPGKGLEWVANIWQDGSTKYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAYGNYWYIDRWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO:1)

抗体MH8轻链可变(VL)区

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVTNDVAWYQQKPGQPPKLLINYAYHRFTGVPDRFSGSGYGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQAYSTPYTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:2)

抗体MH4重链可变(VH)区

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSLSSYGMSWVRQAPGKGLEWVAVIWQDGSTNYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAYGNYWYIDRWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO:3)

抗体MH4轻链可变(VL)区

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVTNDVAWYQQKPGQPPKLLINYAYHRFTGVPDRFSGSGYGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQAYSTPYTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:4)

抗体MH12重链可变(VH)区

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSSYGMSWVRQAPGKGLEWVANIWQDGSEKYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAYGNYWYIDRWGQ GTTVTVSS(SEQ ID NO:5)

抗体MH12轻链可变(VL)区

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVTNDVAWYQQKPGQPPKLLINYAYHRFTGVPDRFSGSGYGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQAYSTPYTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:6)

抗体09C06重链可变(VH)区

EVQLVESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFSFSSYGMHWVRQAPGKGLEWVANIWQDGSTNYVDSVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRAEDTAVYYCARAYGNYWYIDRWGQGTTVTVSS(SEQ ID NO:7)

抗体09C06轻链可变(VL)区

DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVSNDVAWYQQKPGQPPKLLINYASHRFTGVPDRFSGSGYGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCHQAYSTPYTFGQGTKLEIK(SEQ ID NO:8)

表10.抗体Fc区氨基酸序列的实例。

人IgG4野生型

ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPSCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQED PEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKS LSLSLGK(SEQ ID NO:9)

人IgG4(S228P)

ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTKTYTCNVDHKPSNTKVDKRVESKYGPPCPPCPAPEFLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQED PEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKS LSLSLGK(SEQ ID NO:10)

人IgG1野生型

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:11)

人IgG1-3M

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSRDELTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:12)

人IgG2野生型

ASTKGPSVFPLAPCSRSTSESTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSNFGTQTYTCNVDHKPSNTKVDKTVERKCCVECPPCPAPPVAGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTFRVVSVLTVVHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPAPIEKTISKTKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDISVEWESNGQPENNYKTTPPMLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:13)

人IgG1野生型“REEM”同种异型

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPELLGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:14)

人IgG1-3M“REEM”同种异型

ASTKGPSVFPLAPSSKSTSGGTAALGCLVKDYFPEPVTVSWNSGALTSGVHTFPAVLQSSGLYSLSSVVTVPSSSLGTQTYICNVNHKPSNTKVDKKVEPKSCDKTHTCPPCPAPEAAGAPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSHEDPEVKFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQYNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKALPAPIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSREEMKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSKLTVDKSRWQQGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSPGK(SEQ ID NO:15)

表11.靶蛋白氨基酸序列的实例。

人PD1序列

MQIPQAPWPVVWAVLQLGWRPGWFLDSPDRPWNPPTFSPALLVVTEGDNATFTCSFSNTSESFVLNWYRMSPSNQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTQLPNGRDFHMSVVRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQFQTLVVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVICSRAARGTIGARRTGQPLKEDPSAVPVFSVDYGELDFQWREKTPEPPVPCVPEQTEYATIVFPSGMGTSSPARRGSADGPRSAQPLRPEDGHCSWPL(SEQ IDNO:16)

食蟹猴PD1序列

MQIPQAPWPVVWAVLQLGWRPGWFLESPDRPWNAPTFSPALLLVTEGDNATFTCSFSNASESFVLNWYRMSPSNQTDKLAAFPEDRSQPGQDCRFRVTRLPNGRDFHMSVVRARRNDSGTYLCGAISLAPKAQIKESLRAELRVTERRAEVPTAHPSPSPRPAGQFQALVVGVVGGLLGSLVLLVWVLAVICSRAAQGTIEARRTGQPLKEDPSAVPVFSVDYGELDFQWREKTPEPPAPCVPEQTEYATIVFPSGLGTSSPARRGSADGPRSPRPLRPEDGHCSWPL(SEQ IDNO:17)

人LSAMP序列

MVRRVQPDRKQLPLVLLRLLCLLPTGLPVRSVDFNRGTDNITVRQGDTAILRCVVEDKNSKVAWLNRSGIIFAGHDKWSLDPRVELEKRHSLEYSLRIQKVDVYDEGSYTCSVQTQHEPKTSQVYLIVQVPPKISNISSDVTVNEGSNVTLVCMANGRPEPVITWRHLTPTGREFEGEEEYLEILGITREQSGKYECKAANEVSSADVKQVKVTVNYPPTITESKSNEATTGRQASLKCEASAVPAPDFEWYRDDTRINSANGLEIKSTEGQSSLTVTNVTEEHYGNYTCVAANKLGVTNASLVLFRPGSVRGINGSISLAVPLWLLAASLLCLLSKC(SEQ ID NO:415)

人BTN2A1序列

MESAAALHFSRPASLLLLLLSLCALVSAQFIVVGPTDPILATVGENTTLRCHLSPEKNAEDMEVRWFRSQFSPAVFVYKGGRERTEEQMEEYRGRTTFVSKDISRGSVALVIHNITAQENGTYRCYFQEGRSYDEAILHLVVAGLGSKPLISMRGHEDGGIRLECISRGWYPKPLTVWRDPYGGVAPALKEVSMPDADGLFMVTTAVIIRDKSVRNMSCSINNTLLGQKKESVIFIPESFMPSVSPCAVALPIIVVILMIPIAVCIYWINKLQKEKKILSGEKEFERETREIALKELEKERVQKEEELQVKEKLQEELRWRRTFLHAVDVVLDPDTAHPDLFLSEDRRSVRRCPFRHLGESVPDNPERFDSQPCVLGRESFASGKHYWEVEVENVIEWTVGVCRDSVERKGEVLLIPQNGFWTLEMHKGQYRAVSSPDRILPLKESLCRVGVFLDYEAGDVSFYNMRDRSHIYTCPRSAFSVPVRPFFRLGCEDSPIFICPALTGANGVTVPEEGLTLHRVGTHQSL(SEQ ID NO:416)

表12.通过蛋白质组阵列的IgG筛选鉴定的靶蛋白

表13.非靶蛋白转染的细胞对模拟(仅ZSgreen)细胞上的IgG结合的荧光变化倍数

序列表

<110> ULTRAHUMAN NINE有限公司（ULTRAHUMAN NINE LIMITED）

<120> PD1结合剂

<130> ULNL-001/00WO 332952-2003

<150> GB 1813405.6

<151> 2018-08-16

<150> GB 1803746.5

<151> 2018-03-08

<160> 416

<170> PatentIn版本3.5

<210> 1

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗体MH8重链可变（VH）区

<400> 1

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Val Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Arg Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 2

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗体MH8轻链可变（VL）区

<400> 2

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Thr Asn Asp

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Asn Tyr Ala Tyr His Arg Phe Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ala Tyr Ser Thr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 3

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗体MH4重链可变（VH）区

<400> 3

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Arg Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 4

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗体MH4轻链可变（VL）区

<400> 4

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Thr Asn Asp

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Asn Tyr Ala Tyr His Arg Phe Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ala Tyr Ser Thr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 5

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗体MH12重链可变（VH）区

<400> 5

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Val Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Arg Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 6

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗体MH12轻链可变（VL）区

<400> 6

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Thr Asn Asp

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Asn Tyr Ala Tyr His Arg Phe Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ala Tyr Ser Thr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 7

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗体09C06重链可变（VH）区

<400> 7

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr

20 25 30

Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Arg Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 8

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗体09C06轻链可变（VL）区

<400> 8

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Asn Tyr Ala Ser His Arg Phe Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ala Tyr Ser Thr Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 9

<211> 327

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 9

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Ser Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

325

<210> 10

<211> 327

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 10

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys

115 120 125

Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val

130 135 140

Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp

145 150 155 160

Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe

165 170 175

Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp

180 185 190

Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu

195 200 205

Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg

210 215 220

Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys

225 230 235 240

Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp

245 250 255

Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys

260 265 270

Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser

275 280 285

Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser

290 295 300

Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser

305 310 315 320

Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys

325

<210> 11

<211> 330

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 11

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

225 230 235 240

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 12

<211> 330

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 12

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu

225 230 235 240

Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 13

<211> 326

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 13

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg

1 5 10 15

Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Asn Phe Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro

100 105 110

Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp

115 120 125

Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp

130 135 140

Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly

145 150 155 160

Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn

165 170 175

Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Val His Gln Asp Trp

180 185 190

Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro

195 200 205

Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Thr Lys Gly Gln Pro Arg Glu

210 215 220

Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn

225 230 235 240

Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile

245 250 255

Ser Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr

260 265 270

Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys

275 280 285

Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys

290 295 300

Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu

305 310 315 320

Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325

<210> 14

<211> 330

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 14

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr

245 250 255

Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn

260 265 270

Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe

275 280 285

Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn

290 295 300

Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr

305 310 315 320

Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325 330

<210> 15

<211> 329

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 15

Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys

1 5 10 15

Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr

20 25 30

Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser

35 40 45

Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser

50 55 60

Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr

65 70 75 80

Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys

85 90 95

Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys

100 105 110

Pro Ala Pro Glu Ala Ala Gly Ala Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro

115 120 125

Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys

130 135 140

Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp

145 150 155 160

Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu

165 170 175

Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu

180 185 190

His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn

195 200 205

Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly

210 215 220

Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg Glu Glu

225 230 235 240

Met Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro

245 250 255

Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn

260 265 270

Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu

275 280 285

Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val

290 295 300

Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln

305 310 315 320

Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys

325

<210> 16

<211> 288

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 16

Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln

1 5 10 15

Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp

20 25 30

Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp

35 40 45

Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val

50 55 60

Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala

65 70 75 80

Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg

85 90 95

Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg

100 105 110

Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu

115 120 125

Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val

130 135 140

Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro

145 150 155 160

Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly

165 170 175

Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys

180 185 190

Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro

195 200 205

Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly

210 215 220

Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro

225 230 235 240

Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly

245 250 255

Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg

260 265 270

Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu

275 280 285

<210> 17

<211> 288

<212> PRT

<213> 食蟹猴（Macaca fascicularis）

<400> 17

Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln

1 5 10 15

Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Glu Ser Pro Asp Arg Pro Trp

20 25 30

Asn Ala Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Leu Val Thr Glu Gly Asp

35 40 45

Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Ala Ser Glu Ser Phe Val

50 55 60

Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala

65 70 75 80

Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg

85 90 95

Val Thr Arg Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg

100 105 110

Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu

115 120 125

Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val

130 135 140

Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro

145 150 155 160

Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Ala Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly

165 170 175

Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys

180 185 190

Ser Arg Ala Ala Gln Gly Thr Ile Glu Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro

195 200 205

Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly

210 215 220

Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Ala Pro

225 230 235 240

Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly

245 250 255

Leu Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg

260 265 270

Ser Pro Arg Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu

275 280 285

<210> 18

<211> 5

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 18

Arg Asp Glu Leu Thr

1 5

<210> 19

<211> 4

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 19

Arg Glu Glu Met

1

<210> 20

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> Xaa是Thr或Thr的保守取代

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> Xaa是Phe或Phe的保守取代

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(5)

<223> Xaa是Ser或Ser的保守取代

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> Xaa是Gly或任何其它氨基酸

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

<223> Xaa是Met或Met的保守取代

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> Xaa是Ser或任何其它氨基酸

<400> 20

Gly Phe Xaa Xaa Xaa Ser Tyr Xaa Xaa Xaa

1 5 10

<210> 21

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> Xaa是Val或Val的保守取代

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> Xaa是Ala或Ala的保守取代

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> Xaa是Val或Asn

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(5)

<223> Xaa是Trp或Lys

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> Xaa是Gln或Ala

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> Xaa是Asp或Gly

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> Xaa是Thr或Glu

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(11)

<223> Xaa是Asn、Lys或Ser

<220>

<221> misc_feature

<222> (13)..(13)

<223> Xaa是Asn或Val

<400> 21

Xaa Xaa Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Gly Ser Xaa Xaa Tyr Xaa Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 22

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> Xaa是Ala或任何其它氨基酸

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> Xaa是Tyr或Tyr的保守取代

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> Xaa是Asn或任何其它氨基酸

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(5)

<223> Xaa是Tyr或Tyr的保守取代

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> Xaa是Trp或任何其它氨基酸

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> Xaa是Ile或任何其它氨基酸

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

<223> Xaa是Asp或Asp的保守取代

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> Xaa是Val或任何其它氨基酸

<400> 22

Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa

1 5 10

<210> 23

<211> 10

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 23

Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr Gly Val His

1 5 10

<210> 24

<211> 16

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 24

Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met Ser

1 5 10 15

<210> 25

<211> 10

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 25

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 26

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR1

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> Xaa是Gln或Glu

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> Xaa是Ser或Ser的保守取代

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> Xaa是Leu或Leu的保守取代

<400> 26

Lys Ser Ser Xaa Ser Val Xaa Asn Asp Xaa Ala

1 5 10

<210> 27

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR2

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> Xaa是Phe或任何其它氨基酸

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> Xaa是His或任何其它氨基酸

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> Xaa是Ser或Ser的保守取代

<400> 27

Tyr Ala Xaa Xaa Arg Phe Xaa

1 5

<210> 28

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR3

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> Xaa是Gln或任何其它氨基酸

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> Xaa是Ala或任何其它氨基酸

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> Xaa是Thr或任何其它氨基酸

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> Xaa是Tyr或任何其它氨基酸

<400> 28

Xaa Gln Xaa Tyr Ser Xaa Pro Xaa Thr

1 5

<210> 29

<211> 11

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 29

Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp Val Ala

1 5 10

<210> 30

<211> 11

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 30

Lys Ser Ser Gln Glu Val Ser Asn Asp Val Ala

1 5 10

<210> 31

<211> 7

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 31

Tyr Ala Phe His Arg Phe Thr

1 5

<210> 32

<211> 9

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 32

His Gln Ala Tyr Ser Ser Pro Tyr Thr

1 5

<210> 33

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 33

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met Ser

1 5 10

<210> 34

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 34

Val Ala Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 35

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 35

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Arg

1 5 10

<210> 36

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR1

<400> 36

Lys Ser Ser Gln Ser Val Thr Asn Asp Val Ala

1 5 10

<210> 37

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR2

<400> 37

Tyr Ala Tyr His Arg Phe Thr

1 5

<210> 38

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR3

<400> 38

His Gln Ala Tyr Ser Ser Pro Tyr Thr

1 5

<210> 39

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 39

Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Gly Met Ser

1 5 10

<210> 40

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 40

Val Ala Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 41

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 41

Val Ala Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 42

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 42

Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr Gly Met His

1 5 10

<210> 43

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 43

Val Ala Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 44

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR1

<400> 44

Lys Ser Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp Val Ala

1 5 10

<210> 45

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR2

<400> 45

Tyr Ala Ser His Arg Phe Thr

1 5

<210> 46

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR3

<400> 46

His Gln Ala Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 47

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 47

Gly Phe Ser Phe Thr Ser Tyr Gly Met Ser

1 5 10

<210> 48

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 48

Leu Ala Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 49

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 49

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Val His

1 5 10

<210> 50

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 50

Val Gly Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 51

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR1

<400> 51

Lys Ser Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp Leu Ala

1 5 10

<210> 52

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR3

<400> 52

Gln Gln Ala Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 53

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 53

Leu Ala Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 54

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 54

Gly Phe Thr Leu Ser Ser Tyr Gly Met His

1 5 10

<210> 55

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 55

Leu Ala Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 56

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 56

Ala Tyr Gly Asn Tyr Met Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 57

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 57

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met His

1 5 10

<210> 58

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 58

Val Gly Val Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 59

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 59

Gly Phe Ser Phe Thr Ser Tyr Gly Met His

1 5 10

<210> 60

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 60

Val Gly Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 61

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 61

Gly Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 62

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

<223> Xaa是Met或Val

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> Xaa是Ser或His

<400> 62

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Xaa Xaa

1 5 10

<210> 63

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> Xaa是Val或Asn

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(5)

<223> Xaa是Trp或Lys

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> Xaa是Glu或Thr

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(11)

<223> Xaa是Asn或Lys

<220>

<221> misc_feature

<222> (13)..(13)

<223> Xaa是Val或Asn

<400> 63

Val Ala Xaa Ile Xaa Gln Asp Gly Ser Xaa Xaa Tyr Xaa Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 64

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> Xaa是Ala、Asp、Glu、Gly、His、Ile、Lys、Leu、Gln、Ser、Val或Trp

<220>

<221> misc_feature

<222> (2)..(2)

<223> Xaa是Tyr、Phe或Trp

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> Xaa是Asn、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Gln、Arg、Ser、Thr、Val、Trp或Tyr

<220>

<221> misc_feature

<222> (5)..(5)

<223> Xaa是Tyr、Val或Trp

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> Xaa是Trp、Phe、His、Met、Pro、Gln、Ser或Val

<220>

<221> misc_feature

<222> (8)..(8)

<223> Xaa是Ile、Leu、Met、Ser、Thr、Val或Tyr

<220>

<221> misc_feature

<222> (9)..(9)

<223> Xaa是Asp或Glu

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> Xaa是Val、Ala、Glu、Phe、Gly、His、Ile、Gln、Arg、Ser、Thr、Trp或Tyr

<400> 64

Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Tyr Xaa Xaa Xaa

1 5 10

<210> 65

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> Xaa是Ser或His

<400> 65

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Met Xaa

1 5 10

<210> 66

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> Xaa是Val或Asn

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> Xaa是Glu或Thr

<220>

<221> misc_feature

<222> (11)..(11)

<223> Xaa是Asn或Lys

<400> 66

Val Ala Xaa Ile Trp Gln Asp Gly Ser Xaa Xaa Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 67

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> Xaa是Ala或Gly

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> Xaa是Trp或Met

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> Xaa是Arg或Val

<400> 67

Xaa Tyr Gly Asn Tyr Xaa Tyr Ile Asp Xaa

1 5 10

<210> 68

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR1

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> Xaa是Gln或Glu

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> Xaa是Ser、Gly或Thr

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> Xaa是Leu或Val

<400> 68

Lys Ser Ser Xaa Ser Val Xaa Asn Asp Xaa Ala

1 5 10

<210> 69

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR2

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> Xaa是Phe、Ser或Tyr

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> Xaa是His、Pro或Thr

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> Xaa是Ser或Thr

<400> 69

Tyr Ala Xaa Xaa Arg Phe Xaa

1 5

<210> 70

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR3

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> Xaa是Gln或His

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> Xaa是Ala或Ser

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> Xaa是Thr、Asn或Ser

<400> 70

Xaa Gln Xaa Tyr Ser Xaa Pro Tyr Thr

1 5

<210> 71

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR1

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> Xaa是Ser、Gly或Thr

<220>

<221> misc_feature

<222> (10)..(10)

<223> Xaa是Leu或Val

<400> 71

Lys Ser Ser Gln Ser Val Xaa Asn Asp Xaa Ala

1 5 10

<210> 72

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR2

<220>

<221> misc_feature

<222> (3)..(3)

<223> Xaa是Ser或Tyr

<220>

<221> misc_feature

<222> (7)..(7)

<223> Xaa是Ser或Thr

<400> 72

Tyr Ala Xaa His Arg Phe Xaa

1 5

<210> 73

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR3

<220>

<221> misc_feature

<222> (1)..(1)

<223> Xaa是Gln或His

<220>

<221> misc_feature

<222> (6)..(6)

<223> Xaa是Thr或Ser

<400> 73

Xaa Gln Ala Tyr Ser Xaa Pro Tyr Thr

1 5

<210> 74

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR1

<400> 74

Lys Ser Ser Gln Ser Val Gly Asn Asp Val Ala

1 5 10

<210> 75

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR3

<400> 75

Gln Gln Ala Tyr Ser Ser Pro Tyr Thr

1 5

<210> 76

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR1

<400> 76

Lys Ser Ser Gln Ser Val Thr Asn Asp Leu Ala

1 5 10

<210> 77

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR1

<400> 77

Lys Ser Ser Gln Ser Val Gly Asn Asp Leu Ala

1 5 10

<210> 78

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR2

<400> 78

Tyr Ala Tyr His Arg Phe Ser

1 5

<210> 79

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR2

<400> 79

Tyr Ala Ser His Arg Phe Ser

1 5

<210> 80

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分部分HCDR2

<400> 80

Tyr Val Asp Ser Val Lys Gly

1 5

<210> 81

<211> 9

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 81

Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg

1 5

<210> 82

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 82

Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr Gly Val His

1 5 10

<210> 83

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> LAF序列

<400> 83

Leu Thr Ser Tyr Gly Val His Trp Ile

1 5

<210> 84

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> GE肽

<220>

<221> misc_feature

<222> (4)..(4)

<223> Xaa是His或Ser

<400> 84

Tyr Gly Met Xaa Trp Val Arg Gln Ala

1 5

<210> 85

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> TCED+和LAF肽

<400> 85

Tyr Trp Tyr Ile Asp Val Trp Gly Gln

1 5

<210> 86

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> HAF肽

<400> 86

Leu Glu Trp Ile Gly Val Ile Tyr Ala

1 5

<210> 87

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> LAF肽

<400> 87

Ile Gly Val Ile Tyr Ala Asp Gly Ser

1 5

<210> 88

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> HAF肽

<400> 88

Leu Glu Trp Val Gly Val Ile Trp Gln

1 5

<210> 89

<211> 10

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 89

Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr Gly Val His

1 5 10

<210> 90

<211> 5

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 90

Ser Tyr Gly Val His

1 5

<210> 91

<211> 7

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 91

Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr

1 5

<210> 92

<211> 8

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 92

Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr Gly

1 5

<210> 93

<211> 6

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 93

Thr Ser Tyr Gly Val His

1 5

<210> 94

<211> 18

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 94

Leu Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu

1 5 10 15

Met Ser

<210> 95

<211> 16

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 95

Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met Ser

1 5 10 15

<210> 96

<211> 6

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 96

Trp Ala Gly Gly Ser Thr

1 5

<210> 97

<211> 8

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 97

Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn

1 5

<210> 98

<211> 15

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 98

Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met Ser

1 5 10 15

<210> 99

<211> 10

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 99

Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr

1 5 10

<210> 100

<211> 12

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 100

Leu Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr

1 5 10

<210> 101

<211> 10

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 101

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 102

<211> 12

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 102

Ala Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 103

<211> 9

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 103

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp

1 5

<210> 104

<211> 11

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 104

Ala Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp

1 5 10

<210> 105

<211> 11

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 105

Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp Val Ala

1 5 10

<210> 106

<211> 6

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 106

Gln Ser Val Ser Asn Asp

1 5

<210> 107

<211> 8

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 107

Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp

1 5

<210> 108

<211> 7

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 108

Ser Asn Asp Val Ala Trp Tyr

1 5

<210> 109

<211> 7

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 109

Tyr Ala Phe His Arg Phe Thr

1 5

<210> 110

<211> 10

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 110

Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Phe His Arg Phe

1 5 10

<210> 111

<211> 9

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 111

His Gln Ala Tyr Ser Ser Pro Tyr Thr

1 5

<210> 112

<211> 6

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 112

Ala Tyr Ser Ser Pro Tyr

1 5

<210> 113

<211> 8

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 113

His Gln Ala Tyr Ser Ser Pro Tyr

1 5

<210> 114

<211> 118

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 114

Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Ala Pro Ser Lys

1 5 10 15

Asn Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr

20 25 30

Gly Val His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Ser Ala Leu Met

50 55 60

Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Arg Ser Gln Val Phe Leu

65 70 75 80

Arg Met Asn Ser Leu Gln Thr Asp Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val Trp Gly Ala Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 115

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> Hu317 VH IGHV4-4

<400> 115

Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Glu

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr

20 25 30

Gly Val His Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Val Ile Tyr Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys

50 55 60

Ser Arg Val Thr Ile Ser Lys Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Ser Leu

65 70 75 80

Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 116

<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> VH移植物IGHV3-7

<400> 116

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly

1 5 10 15

Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr

20 25 30

Gly Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr

100 105 110

Thr Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 117

<211> 107

<212> PRT

<213> 小家鼠（Mus musculus）

<400> 117

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Lys Phe Leu Leu Val Ser Ala Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Asn Tyr Ala Phe His Arg Phe Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Ile Phe Thr Ile Ser Thr Val Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Val Tyr Phe Cys His Gln Ala Tyr Ser Ser Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys

100 105

<210> 118

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> Hu317 VL IGKV4-1

<400> 118

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Ser Asn Asp

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Asn Tyr Ala Phe His Arg Phe Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ala Tyr Ser Ser Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 119

<211> 107

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> VL移植物IGKV4-1

<400> 119

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Glu Arg Ala Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro Lys Leu Leu Ile

35 40 45

Asn Tyr Ala Phe His Arg Phe Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Tyr Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys His Gln Ala Tyr Ser Ser Pro Tyr

85 90 95

Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105

<210> 120

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 120

Gly Phe Asn Phe Ser Ser Tyr Gly Met His

1 5 10

<210> 121

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 121

Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr Gly Met Ser

1 5 10

<210> 122

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 122

Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr Gly Val His

1 5 10

<210> 123

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 123

Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr Gly Val Ser

1 5 10

<210> 124

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 124

Gly Phe Ser Phe Ser Ser Tyr Trp Met His

1 5 10

<210> 125

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 125

Gly Phe Ser Phe Thr Ser Tyr Gly Val His

1 5 10

<210> 126

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 126

Gly Phe Ser Phe Thr Ser Tyr Gly Val Ser

1 5 10

<210> 127

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 127

Gly Phe Ser Phe Thr Ser Tyr Trp Met His

1 5 10

<210> 128

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 128

Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Gly Ile Ser

1 5 10

<210> 129

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 129

Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Gly Met His

1 5 10

<210> 130

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 130

Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Gly Val His

1 5 10

<210> 131

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 131

Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Gly Val Ser

1 5 10

<210> 132

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 132

Gly Phe Ser Leu Ser Ser Tyr Trp Met His

1 5 10

<210> 133

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 133

Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr Trp Met His

1 5 10

<210> 134

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 134

Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr Gly Val Ser

1 5 10

<210> 135

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 135

Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr Gly Met His

1 5 10

<210> 136

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 136

Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr Gly Met Ser

1 5 10

<210> 137

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 137

Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr Gly Val His

1 5 10

<210> 138

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 138

Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr Gly Val Ser

1 5 10

<210> 139

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 139

Gly Phe Thr Leu Ser Ser Tyr Gly Met Ser

1 5 10

<210> 140

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 140

Gly Phe Thr Leu Ser Ser Tyr Gly Val His

1 5 10

<210> 141

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 141

Gly Phe Thr Leu Ser Ser Tyr Gly Val Ser

1 5 10

<210> 142

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 142

Gly Phe Thr Leu Ser Ser Tyr Trp Met His

1 5 10

<210> 143

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 143

Gly Phe Thr Leu Thr Ser Tyr Gly Met His

1 5 10

<210> 144

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 144

Gly Phe Thr Leu Thr Ser Tyr Gly Met Ser

1 5 10

<210> 145

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 145

Gly Phe Thr Leu Thr Ser Tyr Gly Val His

1 5 10

<210> 146

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR1

<400> 146

Gly Phe Thr Leu Thr Ser Tyr Gly Val Ser

1 5 10

<210> 147

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 147

Leu Ala Asn Ile Lys Ala Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 148

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 148

Leu Ala Asn Ile Lys Ala Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 149

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 149

Leu Ala Asn Ile Lys Ala Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 150

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 150

Leu Ala Asn Ile Lys Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 151

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 151

Leu Ala Asn Ile Lys Ala Gly Gly Ser Glu Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 152

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 152

Leu Ala Asn Ile Lys Ala Gly Gly Ser Glu Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 153

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 153

Leu Ala Asn Ile Lys Ala Gly Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 154

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 154

Leu Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 155

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 155

Leu Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 156

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 156

Leu Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 157

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 157

Leu Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 158

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 158

Leu Ala Asn Ile Trp Ala Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 159

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 159

Leu Ala Asn Ile Trp Ala Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 160

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 160

Leu Ala Asn Ile Trp Ala Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 161

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 161

Leu Ala Asn Ile Trp Ala Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 162

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 162

Leu Ala Asn Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 163

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 163

Leu Ala Asn Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 164

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 164

Leu Ala Asn Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 165

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 165

Leu Ala Asn Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 166

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 166

Leu Ala Asn Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 167

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 167

Leu Ala Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 168

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 168

Leu Ala Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 169

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 169

Leu Ala Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 170

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 170

Leu Ala Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 171

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 171

Leu Ala Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 172

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 172

Leu Ala Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 173

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 173

Leu Ala Asn Ile Trp Gln Gly Gly Ser Glu Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 174

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 174

Leu Ala Val Ile Lys Ala Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 175

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 175

Leu Ala Val Ile Lys Ala Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 176

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 176

Leu Ala Val Ile Lys Ala Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 177

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 177

Leu Ala Val Ile Lys Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 178

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 178

Leu Ala Val Ile Lys Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 179

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 179

Leu Ala Val Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 180

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 180

Leu Ala Val Ile Lys Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 181

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 181

Leu Ala Val Ile Lys Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 182

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 182

Leu Ala Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 183

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 183

Leu Ala Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 184

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 184

Leu Ala Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 185

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 185

Leu Ala Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 186

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 186

Leu Ala Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 187

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 187

Leu Ala Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 188

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 188

Leu Ala Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Glu Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 189

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 189

Leu Ala Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 190

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 190

Leu Ala Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 191

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 191

Leu Ala Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 192

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 192

Leu Ala Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 193

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 193

Leu Ala Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 194

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 194

Leu Ala Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 195

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 195

Leu Ala Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 196

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 196

Leu Ala Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 197

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 197

Leu Ala Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 198

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 198

Leu Ala Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 199

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 199

Leu Ala Val Ile Trp Gln Gly Gly Ser Glu Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 200

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 200

Leu Ala Val Ile Trp Gln Gly Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 201

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 201

Leu Gly Asn Ile Lys Ala Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 202

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 202

Leu Gly Asn Ile Lys Ala Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 203

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 203

Leu Gly Asn Ile Lys Ala Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 204

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 204

Leu Gly Asn Ile Lys Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 205

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 205

Leu Gly Asn Ile Lys Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 206

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 206

Leu Gly Asn Ile Lys Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 207

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 207

Leu Gly Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 208

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 208

Leu Gly Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 209

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 209

Leu Gly Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 210

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 210

Leu Gly Asn Ile Lys Gln Gly Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 211

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 211

Leu Gly Asn Ile Lys Gln Gly Gly Ser Thr Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 212

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 212

Leu Gly Asn Ile Lys Gln Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 213

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 213

Leu Gly Asn Ile Trp Ala Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 214

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 214

Leu Gly Asn Ile Trp Ala Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 215

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 215

Leu Gly Asn Ile Trp Ala Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 216

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 216

Leu Gly Asn Ile Trp Ala Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 217

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 217

Leu Gly Asn Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 218

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 218

Leu Gly Asn Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 219

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 219

Leu Gly Asn Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 220

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 220

Leu Gly Asn Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 221

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 221

Leu Gly Asn Ile Trp Ala Gly Gly Ser Glu Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 222

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 222

Leu Gly Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 223

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 223

Leu Gly Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 224

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 224

Leu Gly Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 225

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 225

Leu Gly Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 226

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 226

Leu Gly Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 227

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 227

Leu Gly Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 228

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 228

Leu Gly Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 229

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 229

Leu Gly Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 230

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 230

Leu Gly Asn Ile Trp Gln Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 231

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 231

Leu Gly Val Ile Lys Ala Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 232

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 232

Leu Gly Val Ile Lys Ala Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 233

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 233

Val Ala Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 234

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 234

Leu Gly Val Ile Lys Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 235

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 235

Leu Gly Val Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 236

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 236

Leu Gly Val Ile Lys Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 237

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 237

Leu Gly Val Ile Lys Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 238

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 238

Leu Gly Val Ile Lys Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 239

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 239

Leu Gly Val Ile Lys Gln Gly Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 240

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 240

Leu Gly Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 241

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 241

Leu Gly Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 242

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 242

Leu Gly Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 243

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 243

Leu Gly Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 244

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 244

Leu Gly Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 245

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 245

Leu Gly Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 246

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 246

Leu Gly Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Ser Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 247

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 247

Leu Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 248

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 248

Leu Gly Val Ile Trp Pro Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 249

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 249

Leu Gly Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 250

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 250

Leu Gly Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 251

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 251

Leu Gly Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 252

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 252

Leu Gly Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 253

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 253

Leu Gly Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 254

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 254

Leu Gly Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 255

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 255

Leu Gly Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 256

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 256

Leu Gly Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 257

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 257

Leu Gly Val Ile Trp Gln Gly Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 258

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 258

Leu Gly Val Ile Trp Gln Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 259

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 259

Val Ala Asn Ile Lys Ala Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 260

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 260

Val Ala Asn Ile Lys Ala Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 261

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 261

Val Ala Asn Ile Lys Ala Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 262

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 262

Val Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 263

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 263

Val Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 264

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 264

Val Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 265

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 265

Val Ala Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 266

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 266

Val Ala Asn Ile Trp Ala Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 267

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 267

Val Ala Asn Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 268

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 268

Val Ala Asn Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 269

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 269

Val Ala Asn Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 270

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 270

Val Ala Asn Ile Trp Ala Gly Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 271

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 271

Val Ala Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 272

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 272

Val Ala Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 273

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 273

Val Ala Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 274

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 274

Val Ala Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 275

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 275

Val Ala Asn Ile Trp Gln Gly Gly Ser Glu Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 276

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 276

Val Ala Asn Ile Trp Gln Gly Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 277

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 277

Val Ala Val Ile Lys Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 278

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 278

Val Ala Val Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 279

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 279

Val Ala Val Ile Lys Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 280

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 280

Val Ala Val Ile Lys Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 281

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 281

Val Ala Val Ile Lys Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 282

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 282

Val Ala Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 283

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 283

Val Ala Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 284

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 284

Val Ala Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 285

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 285

Val Ala Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 286

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 286

Val Ala Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 287

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 287

Val Ala Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 288

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 288

Val Ala Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 289

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 289

Val Ala Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 290

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 290

Val Ala Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 291

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 291

Val Ala Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 292

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 292

Val Ala Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 293

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 293

Val Ala Val Ile Trp Gln Gly Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 294

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 294

Val Gly Asn Ile Lys Ala Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 295

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 295

Val Gly Asn Ile Lys Ala Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 296

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 296

Val Gly Asn Ile Lys Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 297

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 297

Val Gly Asn Ile Lys Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 298

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 298

Val Gly Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 299

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 299

Val Gly Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 300

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 300

Val Gly Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 301

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 301

Val Gly Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 302

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 302

Val Gly Asn Ile Lys Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 303

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 303

Val Gly Asn Ile Lys Gln Gly Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 304

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 304

Val Gly Asn Ile Trp Ala Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 305

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 305

Val Gly Asn Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 306

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 306

Val Gly Asn Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 307

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 307

Val Gly Asn Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 308

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 308

Val Gly Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 309

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 309

Val Gly Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 310

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 310

Val Gly Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 311

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 311

Val Gly Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 312

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 312

Val Gly Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 313

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 313

Val Gly Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 314

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 314

Val Gly Asn Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 315

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 315

Val Gly Asn Ile Trp Gln Gly Gly Ser Glu Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 316

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 316

Val Gly Val Ile Lys Ala Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 317

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 317

Val Gly Val Ile Lys Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 318

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 318

Val Gly Val Ile Lys Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 319

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 319

Val Gly Val Ile Lys Gln Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 320

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 320

Val Gly Val Ile Lys Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 321

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 321

Val Gly Val Ile Lys Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 322

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 322

Val Gly Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 323

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 323

Val Gly Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 324

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 324

Val Gly Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 325

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 325

Val Gly Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 326

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 326

Val Gly Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 327

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 327

Val Gly Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 328

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 328

Val Gly Val Ile Trp Ala Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 329

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 329

Val Gly Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 330

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 330

Val Gly Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 331

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 331

Val Gly Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Glu Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 332

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 332

Val Gly Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 333

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 333

Val Gly Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 334

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 334

Val Gly Val Ile Trp Gln Asp Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 335

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 335

Val Gly Val Ile Trp Gln Gly Gly Ser Glu Lys Tyr Val Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 336

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR2

<400> 336

Val Gly Val Ile Trp Gln Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 337

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 337

Ala Phe Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 338

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 338

Ala Trp Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 339

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 339

Ala Tyr Gly Ala Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 340

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 340

Ala Tyr Gly Glu Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 341

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 341

Ala Tyr Gly Phe Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 342

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 342

Ala Tyr Gly Gly Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 343

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 343

Ala Tyr Gly His Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 344

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 344

Ala Tyr Gly Ile Tyr Trp Tyr Ile Asp Asn

1 5 10

<210> 345

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 345

Ala Tyr Gly Asn Trp Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 346

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 346

Ala Tyr Gly Asn Tyr Phe Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 347

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 347

Ala Tyr Gly Asn Tyr Phe Tyr Ile Asp Trp

1 5 10

<210> 348

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 348

Ala Tyr Gly Asn Tyr His Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 349

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 349

Ala Tyr Gly Asn Tyr Pro Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 350

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 350

Ala Tyr Gly Asn Tyr Gln Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 351

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 351

Ala Tyr Gly Asn Tyr Ser Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 352

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 352

Ala Tyr Gly Asn Tyr Val Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 353

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 353

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ala Asp Val

1 5 10

<210> 354

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 354

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Gly Asp Val

1 5 10

<210> 355

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 355

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Ala

1 5 10

<210> 356

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 356

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Glu

1 5 10

<210> 357

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 357

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Phe

1 5 10

<210> 358

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 358

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Gly

1 5 10

<210> 359

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 359

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp His

1 5 10

<210> 360

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 360

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Ile

1 5 10

<210> 361

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 361

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Lys

1 5 10

<210> 362

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 362

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Leu

1 5 10

<210> 363

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 363

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Met

1 5 10

<210> 364

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 364

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Ser

1 5 10

<210> 365

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 365

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Thr

1 5 10

<210> 366

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 366

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Trp

1 5 10

<210> 367

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 367

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Tyr

1 5 10

<210> 368

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 368

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Glu Val

1 5 10

<210> 369

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 369

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Leu Asp Val

1 5 10

<210> 370

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 370

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Met Asp Val

1 5 10

<210> 371

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 371

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ser Asp Val

1 5 10

<210> 372

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 372

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Thr Asp Val

1 5 10

<210> 373

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 373

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Val Asp Val

1 5 10

<210> 374

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 374

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Tyr Asp Val

1 5 10

<210> 375

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 375

Ala Tyr Gly Gln Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 376

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 376

Ala Tyr Gly Arg Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 377

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 377

Ala Tyr Gly Ser Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 378

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 378

Ala Tyr Gly Thr Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 379

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 379

Ala Tyr Gly Val Tyr Trp Tyr Ile Asp Arg

1 5 10

<210> 380

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 380

Ala Tyr Gly Val Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 381

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 381

Ala Tyr Gly Trp Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 382

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 382

Ala Tyr Gly Tyr Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 383

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 383

Asp Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 384

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 384

Glu Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Arg

1 5 10

<210> 385

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 385

Glu Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 386

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 386

His Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 387

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 387

Ile Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Arg

1 5 10

<210> 388

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 388

Ile Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 389

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 389

Leu Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 390

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 390

Met Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 391

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 391

Gln Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Arg

1 5 10

<210> 392

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 392

Gln Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 393

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 393

Ser Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 394

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 394

Val Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 395

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 395

Trp Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 396

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分HCDR3

<400> 396

Ala Tyr Gly Asn Val Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 397

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR1

<400> 397

Lys Ser Ser Glu Ser Val Gly Asn Asp Leu Ala

1 5 10

<210> 398

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR1

<400> 398

Lys Ser Ser Glu Ser Val Gly Asn Asp Val Ala

1 5 10

<210> 399

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR1

<400> 399

Lys Ser Ser Glu Ser Val Ser Asn Asp Leu Ala

1 5 10

<210> 400

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR2

<400> 400

Tyr Ala Phe His Arg Glu Ser

1 5

<210> 401

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR2

<400> 401

Tyr Ala Phe His Arg Glu Thr

1 5

<210> 402

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR2

<400> 402

Tyr Ala Phe His Arg Phe Ala

1 5

<210> 403

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR2

<400> 403

Tyr Ala Phe His Arg Phe Ser

1 5

<210> 404

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR2

<400> 404

Tyr Ala Phe Pro Arg Phe Thr

1 5

<210> 405

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR2

<400> 405

Tyr Ala Phe Thr Arg Phe Ser

1 5

<210> 406

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR2

<400> 406

Tyr Ala Phe Thr Arg Phe Thr

1 5

<210> 407

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR3

<400> 407

His Gln Ala Tyr Ser Asn Pro Tyr Thr

1 5

<210> 408

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分LCDR3

<400> 408

Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Tyr Thr

1 5

<210> 409

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分共有LCDR1

<400> 409

Lys Ser Ser Gln Ser Val Ser Asn Asp Val Ala

1 5 10

<210> 410

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分共有LCDR2

<400> 410

Tyr Ala Phe His Arg Phe Thr

1 5

<210> 411

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分共有LCDR3

<400> 411

His Gln Ala Tyr Ser Ser Pro Tyr Thr

1 5

<210> 412

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分共有HCDR1

<400> 412

Gly Phe Ser Leu Thr Ser Tyr Gly Val His

1 5 10

<210> 413

<211> 18

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分共有HCDR2

<400> 413

Leu Gly Val Ile Trp Ala Gly Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Asp Ser Val

1 5 10 15

Lys Gly

<210> 414

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列（Artificial Sequence）

<220>

<223> 抗PD1抗体分子或抗原结合部分共有HCDR3

<400> 414

Ala Tyr Gly Asn Tyr Trp Tyr Ile Asp Val

1 5 10

<210> 415

<211> 338

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 415

Met Val Arg Arg Val Gln Pro Asp Arg Lys Gln Leu Pro Leu Val Leu

1 5 10 15

Leu Arg Leu Leu Cys Leu Leu Pro Thr Gly Leu Pro Val Arg Ser Val

20 25 30

Asp Phe Asn Arg Gly Thr Asp Asn Ile Thr Val Arg Gln Gly Asp Thr

35 40 45

Ala Ile Leu Arg Cys Val Val Glu Asp Lys Asn Ser Lys Val Ala Trp

50 55 60

Leu Asn Arg Ser Gly Ile Ile Phe Ala Gly His Asp Lys Trp Ser Leu

65 70 75 80

Asp Pro Arg Val Glu Leu Glu Lys Arg His Ser Leu Glu Tyr Ser Leu

85 90 95

Arg Ile Gln Lys Val Asp Val Tyr Asp Glu Gly Ser Tyr Thr Cys Ser

100 105 110

Val Gln Thr Gln His Glu Pro Lys Thr Ser Gln Val Tyr Leu Ile Val

115 120 125

Gln Val Pro Pro Lys Ile Ser Asn Ile Ser Ser Asp Val Thr Val Asn

130 135 140

Glu Gly Ser Asn Val Thr Leu Val Cys Met Ala Asn Gly Arg Pro Glu

145 150 155 160

Pro Val Ile Thr Trp Arg His Leu Thr Pro Thr Gly Arg Glu Phe Glu

165 170 175

Gly Glu Glu Glu Tyr Leu Glu Ile Leu Gly Ile Thr Arg Glu Gln Ser

180 185 190

Gly Lys Tyr Glu Cys Lys Ala Ala Asn Glu Val Ser Ser Ala Asp Val

195 200 205

Lys Gln Val Lys Val Thr Val Asn Tyr Pro Pro Thr Ile Thr Glu Ser

210 215 220

Lys Ser Asn Glu Ala Thr Thr Gly Arg Gln Ala Ser Leu Lys Cys Glu

225 230 235 240

Ala Ser Ala Val Pro Ala Pro Asp Phe Glu Trp Tyr Arg Asp Asp Thr

245 250 255

Arg Ile Asn Ser Ala Asn Gly Leu Glu Ile Lys Ser Thr Glu Gly Gln

260 265 270

Ser Ser Leu Thr Val Thr Asn Val Thr Glu Glu His Tyr Gly Asn Tyr

275 280 285

Thr Cys Val Ala Ala Asn Lys Leu Gly Val Thr Asn Ala Ser Leu Val

290 295 300

Leu Phe Arg Pro Gly Ser Val Arg Gly Ile Asn Gly Ser Ile Ser Leu

305 310 315 320

Ala Val Pro Leu Trp Leu Leu Ala Ala Ser Leu Leu Cys Leu Leu Ser

325 330 335

Lys Cys

<210> 416

<211> 527

<212> PRT

<213> 智人（Homo sapiens）

<400> 416

Met Glu Ser Ala Ala Ala Leu His Phe Ser Arg Pro Ala Ser Leu Leu

1 5 10 15

Leu Leu Leu Leu Ser Leu Cys Ala Leu Val Ser Ala Gln Phe Ile Val

20 25 30

Val Gly Pro Thr Asp Pro Ile Leu Ala Thr Val Gly Glu Asn Thr Thr

35 40 45

Leu Arg Cys His Leu Ser Pro Glu Lys Asn Ala Glu Asp Met Glu Val

50 55 60

Arg Trp Phe Arg Ser Gln Phe Ser Pro Ala Val Phe Val Tyr Lys Gly

65 70 75 80

Gly Arg Glu Arg Thr Glu Glu Gln Met Glu Glu Tyr Arg Gly Arg Thr

85 90 95

Thr Phe Val Ser Lys Asp Ile Ser Arg Gly Ser Val Ala Leu Val Ile

100 105 110

His Asn Ile Thr Ala Gln Glu Asn Gly Thr Tyr Arg Cys Tyr Phe Gln

115 120 125

Glu Gly Arg Ser Tyr Asp Glu Ala Ile Leu His Leu Val Val Ala Gly

130 135 140

Leu Gly Ser Lys Pro Leu Ile Ser Met Arg Gly His Glu Asp Gly Gly

145 150 155 160

Ile Arg Leu Glu Cys Ile Ser Arg Gly Trp Tyr Pro Lys Pro Leu Thr

165 170 175

Val Trp Arg Asp Pro Tyr Gly Gly Val Ala Pro Ala Leu Lys Glu Val

180 185 190

Ser Met Pro Asp Ala Asp Gly Leu Phe Met Val Thr Thr Ala Val Ile

195 200 205

Ile Arg Asp Lys Ser Val Arg Asn Met Ser Cys Ser Ile Asn Asn Thr

210 215 220

Leu Leu Gly Gln Lys Lys Glu Ser Val Ile Phe Ile Pro Glu Ser Phe

225 230 235 240

Met Pro Ser Val Ser Pro Cys Ala Val Ala Leu Pro Ile Ile Val Val

245 250 255

Ile Leu Met Ile Pro Ile Ala Val Cys Ile Tyr Trp Ile Asn Lys Leu

260 265 270

Gln Lys Glu Lys Lys Ile Leu Ser Gly Glu Lys Glu Phe Glu Arg Glu

275 280 285

Thr Arg Glu Ile Ala Leu Lys Glu Leu Glu Lys Glu Arg Val Gln Lys

290 295 300

Glu Glu Glu Leu Gln Val Lys Glu Lys Leu Gln Glu Glu Leu Arg Trp

305 310 315 320

Arg Arg Thr Phe Leu His Ala Val Asp Val Val Leu Asp Pro Asp Thr

325 330 335

Ala His Pro Asp Leu Phe Leu Ser Glu Asp Arg Arg Ser Val Arg Arg

340 345 350

Cys Pro Phe Arg His Leu Gly Glu Ser Val Pro Asp Asn Pro Glu Arg

355 360 365

Phe Asp Ser Gln Pro Cys Val Leu Gly Arg Glu Ser Phe Ala Ser Gly

370 375 380

Lys His Tyr Trp Glu Val Glu Val Glu Asn Val Ile Glu Trp Thr Val

385 390 395 400

Gly Val Cys Arg Asp Ser Val Glu Arg Lys Gly Glu Val Leu Leu Ile

405 410 415

Pro Gln Asn Gly Phe Trp Thr Leu Glu Met His Lys Gly Gln Tyr Arg

420 425 430

Ala Val Ser Ser Pro Asp Arg Ile Leu Pro Leu Lys Glu Ser Leu Cys

435 440 445

Arg Val Gly Val Phe Leu Asp Tyr Glu Ala Gly Asp Val Ser Phe Tyr

450 455 460

Asn Met Arg Asp Arg Ser His Ile Tyr Thr Cys Pro Arg Ser Ala Phe

465 470 475 480

Ser Val Pro Val Arg Pro Phe Phe Arg Leu Gly Cys Glu Asp Ser Pro

485 490 495

Ile Phe Ile Cys Pro Ala Leu Thr Gly Ala Asn Gly Val Thr Val Pro

500 505 510

Glu Glu Gly Leu Thr Leu His Arg Val Gly Thr His Gln Ser Leu

515 520 525

Claims (37)

1.一种抗PD1抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，其中

(a)VH区氨基酸序列包括GFTFSSYGMS(SEQ ID NO:33)的HCDR1、VANIWQDGSTKYVDSVKG(SEQ ID NO:34)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVTNDVA(SEQ ID NO:36)的LCDR1、YAYHRFT(SEQ ID NO:37)的LCDR2和HQAYSSPYT(SEQID NO:38)的LCDR3；

(b)VH区氨基酸序列包括GFSLSSYGMS(SEQ ID NO:39)的HCDR1、VAVIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:40)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVTNDVA(SEQ ID NO:36)的LCDR1、YAYHRFT(SEQ ID NO:37)的LCDR2和HQAYSSPYT(SEQID NO:38)的LCDR3；

(c)VH区氨基酸序列包括GFTFSSYGMS(SEQ ID NO:33)的HCDR1、VANIWQDGSEKYVDSVKG(SEQ ID NO:41)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVTNDVA(SEQ ID NO:36)的LCDR1、YAYHRFT(SEQ ID NO:37)的LCDR2和HQAYSSPYT(SEQID NO:38)的LCDR3；

(d)VH区氨基酸序列包括GFSFSSYGMH(SEQ ID NO:42)的HCDR1、VANIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:43)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和HQAYSTPYT(SEQID NO:46)的LCDR3；

(e)VH区氨基酸序列包括GFSFTSYGMS(SEQ ID NO:47)的HCDR1、LANIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:48)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和HQAYSTPYT(SEQID NO:46)的LCDR3；

(f)VH区氨基酸序列包括GFTFSSYGVH(SEQ ID NO:49)的HCDR1、VGVIWQDGSENYVDSVKG(SEQ ID NO:50)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDLA(SEQ ID NO:51)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和QQAYSTPYT(SEQID NO:52)的LCDR3；

(g)VH区氨基酸序列包括GFSFSSYGMH(SEQ ID NO:42)的HCDR1、VANIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:43)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和HQAYSTPYT(SEQID NO:46)的LCDR3；

(h)VH区氨基酸序列包括GFSFSSYGMH(SEQ ID NO:42)的HCDR1、LANIWQDGSENYVDSVKG(SEQ ID NO:53)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和QQAYSTPYT(SEQID NO:52)的LCDR3；

(i)VH区氨基酸序列包括GFTLSSYGMH(SEQ ID NO:54)的HCDR1、LAVIWADGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:55)的HCDR2和AYGNYMYIDV(SEQ ID NO:56)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和HQAYSTPYT(SEQID NO:46)的LCDR3；

(j)VH区氨基酸序列包括GFTFSSYGMH(SEQ ID NO:57)的HCDR1、VGVIKQDGSENYVDSVKG(SEQ ID NO:58)的HCDR2和AYGNYWYIDR(SEQ ID NO:35)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDVA(SEQ ID NO:44)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和HQAYSTPYT(SEQID NO:46)的LCDR3；或者

(k)VH区氨基酸序列包括GFSFTSYGMH(SEQ ID NO:59)的HCDR1、VGVIWQDGSTNYVDSVKG(SEQ ID NO:60)的HCDR2和GYGNYWYIDV(SEQ ID NO:61)的HCDR3；并且VL区氨基酸序列包括KSSQSVSNDLA(SEQ ID NO:51)的LCDR1、YASHRFT(SEQ ID NO:45)的LCDR2和QQAYSTPYT(SEQID NO:52)的LCDR3。

2.根据权利要求1所述的抗体或抗原结合部分，其中

(a)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:1，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:2；

(b)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:3，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:4；

(c)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:5，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:6；或者

(d)VH区氨基酸序列包括SEQ ID NO:7，并且VL区氨基酸序列包括SEQ ID NO:8。

3.一种抗PD1抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体包括重链可变(VH)区和轻链可变(VL)区，所述VH区包括HCDR1、HCDR2和HCDR3，所述VL区包括LCDR1、LCDR2和LCDR3，其中

(a)所述HCDR1包括氨基酸序列G-F-X₁-X₂-X₃-S-Y-X₄-X₅-X₆，其中X₁是T或T的保守取代，X₂是F或F的保守取代，X₃是S或S的保守取代，X₄是G或任何其它氨基酸，X₅是M或M的保守取代，并且X₆是S或任何其它氨基酸(SEQ ID NO:20)；

(b)所述HCDR2包括氨基酸序列X₁-X₂-X₃-I-X₄-X₅-X₆-G-S-X₇-X₈-Y-X₉-D-S-V-K-G，其中X₁是V或V的保守取代，X₂是A或A的保守取代，X₃是V或N，X₄是W或K，X₅是Q或A，X₆是D或G，X₇是T或E，X₈是N、K或S，并且X₉是N或V(SEQ ID NO:21)；

(c)所述HCDR3包括氨基酸序列X₁-X₂-G-X₃-X₄-X₅-Y-X₆-X₇-X₈，其中X₁是A或任何其它氨基酸，X₂是Y或Y的保守取代，X₃是N或任何其它氨基酸，X₄是Y或Y的保守取代，X₅是W或任何其它氨基酸，X₆是I或任何其它氨基酸，X₇是D或D的保守取代，并且X₈是V或任何其它氨基酸(SEQ ID NO:22)；

(d)所述LCDR1包括氨基酸序列K-S-S-X₁-S-V-X₂-N-D-X₃-A，其中X₁是Q或E，X₂是S或S的保守取代，并且X₃是L或L的保守取代(SEQ ID NO:26)；

(e)所述LCDR2包括氨基酸序列Y-A-X₁-X₂-R-F-X₃，其中X₁是F或任何其它氨基酸，X₂是H或任何其它氨基酸，并且X₃是S或S的保守取代(SEQ ID NO:27)；并且

(f)所述LCDR3包括氨基酸序列X₁-Q-X₂-Y-S-X₃-P-X₄-T，其中X₁是Q或任何其它氨基酸，X₂是A或任何其它氨基酸，X₃是T或任何其它氨基酸，并且X₄是Y或任何其它氨基酸(SEQ IDNO:28)。

4.一种抗PD1抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或抗原结合部分与根据权利要求1到3中任一项所述的抗体或抗原结合部分交叉竞争与PD1结合；并且

(a)包括完全种系人骨架氨基酸序列；和/或

(b)与人PD1和食蟹猴PD1特异性结合；和/或

(c)在LCDR2中不包括氧化位点；和/或

(d)在VH结构域的HCDR2/骨架3区中包括具有高MHC II类结合亲和力的人种系肽序列；和/或

(e)在VH结构域的HCDR1/骨架2区中不包括人T细胞表位序列；和/或

(f)在VH结构域的HCDR3/骨架4区中不包括人T细胞表位序列；和/或

(g)当呈IgG1效应子无效的抗体形式时，与抗体Hu317表现出的电荷种类异质性相比，表现出的电荷种类异质性降低。

5.根据权利要求1到4中任一项所述的抗体或抗原结合部分，其中所述抗体是人的、人源化的或嵌合的。

6.根据权利要求1到5中任一项所述的抗体或抗原结合部分，其中所述VH区、所述VL区或所述VH区和所述VL区两者包括一个或多个人骨架区氨基酸序列。

7.根据权利要求1到6中任一项所述的抗体或抗原结合部分，其中所述VH区、所述VL区或所述VH区和所述VL区两者包括已经插入有所述CDR的人可变区骨架支架氨基酸序列。

8.根据权利要求1或3所述的抗体或抗原结合部分，其中所述VH区包括已经插入有HCDR1、HCDR2和HCDR3氨基酸序列的IGHV3-7人种系支架氨基酸序列。

9.根据权利要求1、3和8中任一项所述的抗体或抗原结合部分，其中所述VL区包括已经插入有LCDR1、LCDR2和LCDR3氨基酸序列的IGKV4-1人种系支架氨基酸序列。

10.根据权利要求1到9中任一项所述的抗体或抗原结合部分，其中所述抗体包括免疫球蛋白恒定区。

11.根据权利要求10所述的抗体或抗原结合部分，其中所述免疫球蛋白恒定区是IgG、IgE、IgM、IgD、IgA或IgY。

12.根据权利要求11所述的抗体或抗原结合部分，其中所述免疫球蛋白恒定区是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1或IgA2。

13.根据权利要求10所述的抗体或抗原结合部分，其中所述免疫球蛋白恒定区是免疫惰性的。

14.根据权利要求10所述的抗体或抗原结合部分，其中所述免疫球蛋白恒定区是野生型人IgG4恒定区、包括氨基酸取代S228P的人IgG4恒定区、野生型人IgG1恒定区、包括氨基酸取代L234A、L235A和G237A的人IgG1恒定区或野生型人IgG2恒定区。

15.根据权利要求13所述的抗体或抗原结合部分，其中所述免疫球蛋白恒定区包括SEQID NO:9-15中的任一个。

16.根据权利要求1到15中任一项所述的抗原结合部分，其中所述抗体或抗原结合部分是Fab、Fab'、F(ab')₂、Fd、Fv、scFv、单结构域抗体(dAb)、大抗体、微型抗体、胞内抗体、双功能抗体、三功能抗体、四功能抗体、v-NAR或双-scFv。

17.根据权利要求1到16中任一项所述的抗体或抗原结合部分，其中所述抗体是单克隆的。

18.根据权利要求1到17中任一项所述的抗体或抗原结合部分，其中所述抗体是四聚体抗体、四价抗体或多特异性抗体。

19.根据权利要求1到18中任一项所述的抗体或抗原结合部分，其中所述抗体是与第一抗原和第二抗原特异性结合的双特异性抗体，其中所述第一抗原是PD1并且所述第二抗原不是PD1。

20.根据权利要求1到19中任一项所述的抗体或抗原结合部分，其中所述抗体或抗原结合部分与(a)人PD1或(b)人PD1和食蟹猴PD1特异性结合。

21.一种免疫缀合物，其包括与治疗剂连接的根据权利要求1到20中任一项所述的抗体或抗原结合部分。

22.根据权利要求21所述的免疫缀合物，其中所述治疗剂是细胞毒素、放射性同位素、化学治疗剂、免疫调节剂、抗血管生成剂、抗增殖剂、促凋亡剂、细胞生长抑制酶、细胞溶解酶、治疗性核酸、抗血管生成剂、抗增殖剂或促凋亡剂。

23.一种药物组合物，其包括根据权利要求1到20中任一项所述的抗体或抗原结合部分或根据权利要求21或22所述的免疫缀合物以及药学上可接受的载剂、稀释剂或赋形剂。

24.一种核酸分子，其对根据权利要求1到20中任一项所述的抗体或抗原结合部分的以下进行编码：

(a)VH区氨基酸序列；

(b)VL区氨基酸序列；或者

(c)VH氨基酸序列和VL区氨基酸序列两者。

25.一种表达载体，其包括根据权利要求24所述的核酸分子。

26.一种重组宿主细胞，其包括根据权利要求24所述的核酸分子或根据权利要求25所述的表达载体。

27.一种产生抗PD1抗体或其抗原结合部分的方法，所述方法包括：

将包括根据权利要求25所述的表达载体的重组宿主细胞在使所述核酸分子得到表达的条件下培养，由此产生所述抗体或抗原结合部分；以及

从所述宿主细胞或培养物中分离所述抗体或抗原结合部分。

28.一种用于增强受试者的免疫应答的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1到20中任一项所述的抗体或抗原结合部分、根据权利要求21或22所述的免疫缀合物或根据权利要求23所述的药物组合物。

29.一种治疗或预防受试者的癌症、传染病或免疫性疾病的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据权利要求1到20中任一项所述的抗体或抗原结合部分、根据权利要求21或22所述的免疫缀合物或根据权利要求23所述的药物组合物。

30.根据权利要求29所述的方法，其中所述癌症是胰腺癌、黑色素瘤、乳腺癌、肺癌、支气管癌、结肠直肠癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、膀胱癌、脑或中枢神经系统癌、周围神经系统癌、食道癌、宫颈癌、子宫或子宫内膜癌、口腔癌或咽癌、肝癌、肾癌、睾丸癌、胆道癌、小肠或阑尾癌、唾液腺癌、甲状腺癌、肾上腺癌、骨肉瘤、软骨肉瘤或血液组织癌。

31.根据权利要求29所述的方法，其中所述传染病是病毒性的、细菌性的、真菌性的或寄生虫性的。

32.根据权利要求29所述的方法，所述传染病是人类免疫缺陷病毒(HIV)感染。

33.根据权利要求1到20中任一项所述的抗体或抗原结合部分、根据权利要求21或22所述的免疫缀合物或根据权利要求23所述的药物组合物，其用于治疗癌症、传染病或免疫性疾病。

34.根据权利要求33所述的供使用的抗体或抗原结合部分、免疫缀合物或药物组合物，其中所述癌症是胰腺癌、黑色素瘤、乳腺癌、肺癌、支气管癌、结肠直肠癌、前列腺癌、胃癌、卵巢癌、膀胱癌、脑或中枢神经系统癌、周围神经系统癌、食道癌、宫颈癌、子宫或子宫内膜癌、口腔癌或咽癌、肝癌、肾癌、睾丸癌、胆道癌、小肠或阑尾癌、唾液腺癌、甲状腺癌、肾上腺癌、骨肉瘤、软骨肉瘤或血液组织癌。

35.根据权利要求33所述的供使用的抗体或抗原结合部分、免疫缀合物或药物组合物，其中所述传染病是病毒性的、细菌性的、真菌性的或寄生虫性的。

36.根据权利要求33所述的供使用的抗体或抗原结合部分、免疫缀合物或药物组合物，其中所述传染病是人类免疫缺陷病毒(HIV)感染。

37.根据权利要求1到20中任一项所述的抗体或抗原结合部分、根据权利要求21或22所述的免疫缀合物或根据权利要求23所述的药物组合物，其用作药剂。

Images